DE69615537T2

DE69615537T2 - Helicobacter pylori antigen

Info

Publication number: DE69615537T2
Application number: DE69615537T
Authority: DE
Inventors: Llewellyn Clancy; Allan Cripps; John Smith
Original assignee: Provalis UK Ltd
Current assignee: Provalis UK Ltd
Priority date: 1995-02-15
Filing date: 1996-02-15
Publication date: 2002-04-18
Anticipated expiration: 2016-02-16
Also published as: MX9706267A; IL117151A; FI973335L; AU4672896A; NO973753L; NZ301334A; DK0809653T3; EP0809653A1; CN1175955A; KR19980701698A; JPH11503999A; FI973335A0; CA2212952A1; NO973753D0; GB9502899D0; EP0809653B1; AU714222B2; ATE206138T1; DE69615537D1; IL117151A0

Description

Die vorliegende Erfindung betrifft ein neuartiges Antigen von Helicobacter pylori oder antigene Fragmente davon, die Verwendung des Antigens oder der Fragmente davon beim Nachweisen von Helicobacter pylori und Sets, welche diese enthalten, sowie Impfstoffe, welche das Antigen oder die Fragmente davon umfassen, und ein Verfahren zum Isolieren des Antigens.
Darminfektionen bei Säugetieren und insbesondere beim Menschen stimulieren eine Immunreaktion in Schleimabsonderungen, beispielsweise in Speichel, durch Aktivierung des allgemeinen Schleimhautimmunsystems. Diese Reaktion entspricht oftmals zunächst einer Antikörperreaktion in Serum, wenngleich sie im allgemeinen durch die Gegenwart von IgA- Antikörpern gekennzeichnet ist. Allerdings nimmt die Immunreaktion in Sekreten, einschließlich Speichel, nach dem Entfernen des Antigens (z. B. Bakterien oder Viren) aus dem Körper rapide ab. Demnach spiegelt die Anwesenheit von Antikörpern in Schleimabsonderungen die aktuelle, d. h. die gegenwärtige Infektion wider. Im Falle einer mikrobiellen Infektion spiegeln beispielsweise Antikörper in Schleimabsonderungen, welche in der Folge als sekretiöse Antikörper bezeichnet werden, den aktuellen Kolonialisationstatus der Mikrobe, beispielsweise im Darm, wider und sind somit ein zweckdienliches Überwachungsinstrument für gegenwärtige Infektionen. Serumantikörper liegen andererseits noch während eines gewissen Zeitraums, nachdem die Mikrobe aus dem Körper entfernt wird, vor. Ein positiver Serumantikörpertest spiegelt somit sowohl früheren als auch gegenwärtigen Kontakt mit Antigenen wider, was für den Kliniker weniger zweckdienlich ist. Ein positiver Test auf sekretiöse Antikörper zeigt hingegen aktuelle oder gegenwärtige Infektionen mit der Mikrobe an.
Die Diagnose auf H. pylori-Infektion kann anhand von Mikroskopie, durch mikrobiologische Kultur oder Ureasefeststellung in Magenschleimhautbiopsien, im Harnstoffatemtest oder durch die Gegenwart spezifischer Antikörper in Serum-ELISAs erfolgen. Es könnte prognostiziert werden, daß eine H. pylori-Infektion, welche eine Infektion der Magenschleimhaut ist, eine IgA-Antikörperreaktion in den Magensäften hervorrufen würde. Allerdings wurde festgestellt, daß H. pylori-speziflsche Antikörper in Schleimabsonderungen der IgG-Klasse und nicht, wie zu erwarten gewesen wäre, der IgA-Klasse angehören. Es werden, falls überhaupt, nur geringe Mengen an IgA-Antikörpern festgestellt. Demnach verfolgt AU- A-9067676 die Aufgabe des Feststellens von IgG in Schleimabsonderungen, welche auf das H. pylori-Antigen spezifisch sind, und schafft damit ein Mittel zum Überwachen aktueller, d. h. gegenwärtiger Infektionen mit jenem Mikroorganismus bei Säugern. Die entsprechende wissenschaftliche Publikation ist Witt et al., Frontiers in Mucosal Immunology 1 693-696 (1991).
Der Gegenwart von IgG-Antikörpern im Speichel Helicobacter pylori-positiver Patienten wurde in den Tagungsberichten der Annual Meetings of the American Gastroenterological Association einige Beachtung geschenkt. Nach der Offenbarung der Gegenwart derartiger Antikörper durch Czinn et al. in den Tagungsberichten des Jahres 1989 (Gastroenterology 96 (5), Teil 2 (Mai 1989)), folgerten Larsen et al. in den Tagungsberichten vom Mai 1991, daß Speichel-IgG-Pegel einen praktischen, nichtinvasiven Marker für therapeutisches Ansprechen während des Verlaufes einer Antibiotikatherapie darstellen (Gastroenterology, 100(5), Seite A107 (Mai 1991)). In den Tagungsberichten vom April 1992 bestätigten Landes et al. frühere Beobachtungen und bemerkten, daß die Messung von Speichel-IgG auf Helicobacter pylori ein einfacher, nichtinvasiver Test zum Feststellen H. pylori-positiver Patienten ist, insbesondere bei weit verstreuten oder pädiatrischen Populationen, bei denen andere Tests nicht zweckmäßig sind (Gastroenterology, 102(4), Seite A107 (April 1992)).
WO-A-9322682 offenbart einen zweckmäßigen und zuverlässigen in-vitro-Test auf H. pylori. Dieser Test bedient sich eines Antigenpräparats in einer Reaktion mit IgG-Antikörpern in einer Schleimabsonderung von einem gerade getestet werdenden Säugetier.
Demnach besteht eine Notwendigkeit, neuartige Antigene von H. pylori zu identifizieren, zu isolieren und somit zur Verfügung zu stellen, welche in diagnostischen Tests verwendet werden können. Diese Antigene sollten spezifisch, zuverlässig reinigbar und, wenn diese in derartigen Tests verwendet werden, durch gute Spezifität und das Nichtvorhandensein falscher positiver Resultate gekennzeichnet sein. Darüber hinaus können sie auch die Grundlage eines Impfstoffes bilden, welcher entweder für die Behandlung von oder die Prophylaxe gegen H. pylori-Infektionen zweckdienlich ist.
Verschiedene Proteine, welche aus H. pylori gewonnen wurden, wurden isoliert und charakterisiert, und zu Beispielen für derartige Proteine gehören jene, welche bei Evans et al., Infection and Immunity, 60(5), 2125-2127, (1992), EP-A-0329570, und bei Kostrzynska et al., J. Bacteriol., 173(3), 937-946 (1991), offenbart werden. Die vorliegende Erfindung betrifft ein aus H. pylori gewonnenes neuartiges antigenes Protein, welches in diagnostischen Tests verwendet werden oder die Grundlage eines Impfstoffes bilden kann.
Somit sieht die vorliegende Erfindung in einem ersten Aspekt ein Protein vor, welches ein H. pylori-Antigen ist und ein Molekulargewicht im Bereich von 55-65 kDa aufweist, wie unter Denaturier- und Reduzierbedingungen festgestellt wurde.
Geeignetermaßen weist das antigene Protein an seinem Aminoende die folgende Aminosäuresequenz:
oder eine dazu im wesentlichen homologe Sequenz auf.
Auf Ebene der Aminosäuren kann eine Proteinsequenz als zu einer anderen Proteinsequenz im wesentlichen homolog betrachtet werden, wenn eine erhebliche Anzahl der diese zusammensetzenden Aminosäuren Homologie aufweist. Zumindest 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 95% oder sogar 99% der Aminosäuren, wobei gilt, in ansteigender Reihenfolge der Bevorzugung, können homolog sein.
Es wurde auch erkannt, daß Teile des ganzen Proteins selbst antigen sind. Somit sieht die vorliegende Erfindung in einem zweiten Aspekt ein antigenes Fragment des Proteins der Erfindung vor.
In einer bevorzugten Ausführungsform dieses Aspekts der Erfindung ist das antigene Fragment ein Peptid mit der Sequenz:
Für Fachleute wird klar zu erkennen sein, daß ein gewisses Variieren der Sequenz dieses Fragments möglich ist, wobei dessen antigene Eigenschaften immer noch erhalten bleiben. Derartige Varianten bilden auch einen Teil der Erfindung.
Das erfindungsgemäße antigene Protein oder erfindungsgemäße Fragmente davon können gesondert, als gereinigtes oder isoliertes Präparat oder als Teil einer Mischung mit anderen antigenen Proteinen von H pylori vorgesehen werden.
In einem dritten Aspekt sieht die Erfindung daher eine Antigenzusammensetzung vor, welche ein Protein der Erfindung und/oder ein oder mehrere antigene Fragmente davon umfaßt. Eine derartige Zusammensetzung kann zur Feststellung und/oder Diagnose von H. pylori verwendet werden. Bei einer Ausführungsform umfaßt die Zusammensetzung ein oder mehrere zusätzliche H. pylori-Antigene.
In einem vierten Aspekt sieht die vorliegende Erfindung ein Verfahren zum Feststellen und/oder Diagnostizieren von H. pylori vor, welches umfaßt:
(a) Inkontaktbringen eines erfindungsgemäßen antigenen Proteins oder eines erfindungsgemäßen antigenen Fragments davon oder einer erfindungsgemäßen Antigenzusammensetzung mit einer zu prüfenden Probe; und
(b) Feststellen des Vorliegens von Antikörpern auf H. pylori.
Insbesondere können das erfindungsgemäße Protein, das erfindungsgemäße antigene Fragment davon oder die erfindungsgemäße Antigenzusammensetzung verwendet werden, um IgG-Antikörper festzustellen. Geeigneterweise ist die zu prüfende Probe eine biologische Probe, d. h. eine Blut- oder Speichelprobe. Ein Beispiel für ein geeignetes Verfahren zum Feststellen von H. pylori, welches sich einer Probe einer Schleimabsonderung bedient, ist das in WO-A-9322682 beschriebene.
In einem fünften Aspekt sieht die Erfindung die Verwendung eines antigenen Proteins, eines antigenen Fragmentes davon oder einer Antigenzusammensetzung der vorliegenden Erfindung beim Feststellen und/oder Diagnostizieren von H. pylori vor. Vorzugsweise erfolgt das Feststellen und/oder Diagnostizieren in vitro.
In einem sechsten Aspekt sieht die vorliegende Erfindung ein Verfahren zum Isolieren eines antigenen Proteins der Erfindung vor, wobei das Verfahren folgende Schritte umfaßt:
(a) Anlegen von H. pylori-Kulturen, Züchten der Kulturen in geeigneten Bedingungen und Ernten derselben, gefolgt von Waschen, um ein gewaschenes Zellpellet zu erhalten;
(b) Resuspendieren der gewaschenen Zellen in einem geeigneten Puffer, gefolgt vom Zerschlagen der Zellen;
(c) Zentrifugieren, um Zelltrümmer zu entfernen, und Gewinnen des Überstandes, welcher lösliche Zellproteine enthält;
(d) Unterziehen der erhaltenen Lösung einer Ionenaustauschchromatographie mit einer Gradientenelution und Analysieren der auf diese Weise erhaltenen Fraktionen auf die Gegenwart von Urease;
(e) Vereinigen der ureasehaltigen Fraktionen und Unterziehen der vereinigten Fraktionen einer Gel-Permeationschromatographie;
Auswählen der geeigneten Spitze; und
(g) Bestätigen der Gegenwart des spezifischen Proteins, welches ein Molekulargewicht im Bereich von 55-65 kDa im Isolat aufweist, und Isolieren des Proteins.
Das erfindungsgemäße antigene Protein, das erfindungsgemäße antigene Fragment davon oder die erfindungsgemäße Antigenzusammensetzung können als Teil eines Sets zur Verwendung bei der in vitro-Feststellung und/oder -Diagnose von H. pylori vorgesehen werden. Demnach sieht die vorliegende Erfindung in einem siebten Aspekt ein Set zur Verwendung bei der Feststellung und/oder Diagnose von H. pylori vor, umfassend ein erfindungsgemäßes antigenes Protein, ein erfindungsgemäßes antigenes Fragment davon oder eine erfindungsgemäße Antigenzusammensetzung.
Darüber hinaus können das erfindungsgemäße antigene Protein oder das erfindungsgemäße antigene Fragment davon verwendet werden, um eine Immunreaktion gegen H. pylori hervorzurufen. Demnach sieht die vorliegende Erfindung in einem weiteren Aspekt eine Zusammensetzung vor, welche in der Lage ist, eine Immunreaktion in einem Subjekt hervorzurufen, und das erfindungsgemäße Protein oder eine oder mehrere erfindungsgemäße Fragmente davon umfaßt. Geeigneterweise ist die Zusammensetzung eine Impfstoffzusammensetzung und umfaßt wahlweise das eine oder andere geeignete Adjuvans. Eine derartige Impfstoffzusammensetzung kann entweder eine prophylaktische oder eine therapeutische Impfstoffzusammensetzung sein.
Die Impfstoffzusammensetzungen der Erfindung können ein oder mehrere Adjuvantien umfassen. Zu Beispielen für im Stand der Technik bestens bekannte Adjuvantien gehören anorganische Gels, beispielsweise Aluminiumhydroxid, oder Wasser-in-Öl-Emulsionen, beispielsweise unvollständiges Freundsches Adjuvans. Andere zweckdienliche Adjuvantien sind Fachleuten bestens bekannt.
In noch weiteren Aspekten sieht die vorliegende Erfindung vor:
(a) die Verwendung des erfindungsgemäßen Proteins oder eines oder mehrerer erfindungsgemäßer antigener Fragmente davon bei der Herstellung einer immunogenen Zusammensetzung, vorzugsweise eines Impfstoffes;
(b) die Verwendung einer derartigen immunogenen Zusammensetzung beim Herbeiführen einer Immunreaktion in einem Subjekt; und
(c) ein Verfahren zur Behandlung von oder Prophylaxe gegen H. pylori-Infektionen in einem Subjekt, welches die Schritte des Verabreichens einer wirksamen Menge des erfindungsgemäßen Proteins, zumindest eines erfindungsgemäßen antigenen Fragments oder einer erfindungsgemäßen Antigenzusammensetzung, vorzugsweise in Form eines Impfstoffes, an das Subjekt umfaßt.
Bevorzugte Merkmale jedes Aspekts der Erfindung gelten sinngemäß JUr jeden anderen Aspekt.
Die Erfindung wird nunmehr mit Bezugnahme auf das folgende Beispiel beschrieben, welches nicht dahingehend ausgelegt werden sollte, daß es die Erfindung auf irgendeine Weise einschränkt.

BEISPIEL 1

(a) Kulturen von H. pylori wurden in geeigneten Bedingungen angelegt und die Zellen in phosphatgepufferter Kochsalzlösung (PBS) geerntet. Darauf folgte wiederholtes Zentrifugieren, um Zelltrümmer und andere Verunreinigungen, beispielsweise Agar zu entfernen, und frische PBS wurde drei Mal zugegeben, um ein gewaschenes Zellpellet zu erhalten;
(b) Die gewaschenen Zellen wurden in 0,1 M TRIS-HCl-Puffer, pH 7,2, resuspendiert, um im Ionenaustauschchromatographieschritt verwendet zu werden. Die Zellsuspension wurde daraufhin Beschallung (6 um 30 Sekunden lang, 60 Sekunden aus, wurde mit einer 10 ml-Probe, welche Zellen von 100 Agarplatten enthielt, 25 Mal wiederholt) von geeigneter Stärke und Dauer unterzogen, um das Zerschlagen der Zellen zu gewährleisten;
(c) Die Suspension wurde daraufhin zentrifugiert, um Zelltrümmer zu entfernen, und der Überstand, welcher lösliche Zellproteine enthielt, wurde gewonnen;
(d) Die Lösung aus Schritt (c) wurde daraufhin einer Fraktionierung durch Ionenaustauschchromatographie unter Zuhilfenahme eines starken Anionenaustauschharzes, beispielsweise MonoQ® oder Q-Sepharose® (Pharmacia), mittels einer Gradientenelution, welche auf dem Erhöhen der Natriumchloridkonzentration des Elutionspuffers von 0 auf 1,0 M auf vorgegebene Weise basierte, unterzogen. Die Fraktionen wurden daraufhin auf die Gegenwart von Urease analysiert;
(e) Die ureasehaltigen Fraktionen wurden daraufhin vereinigt und einer Gel-Permeationschromatographie mittels eines Harzes mit einem Cut-Off-Bereich von 5·10³-5· 10&sup6; Da für globuläres Protein unterzogen;
(f) Die geeignete Spitze wurde gewählt durch:
(i) Durchführen einer Ureaseanalyse aller Fraktionen und Feststellen der Proteinspitze, welche die Ureaseaktivität enthielt; und
(ii) Analysieren aller als ureasepositiv erkannten Fraktionen und der proteinhaltigen Spitzen direkt neben der Ureasespitze, jedoch von geringem Molekulargewicht, durch Auftüpfeln eines Mikrogramms Protein aus diesen Fraktionen auf Nitrocellulose oder ein gleichwertiges Material, Trocknen und anschließendes Feststellen ihrer Fähigkeit mit H. pylori-spezifischen Antikörpern in Serum- oder Speichelproben aus H. pylori-positiven Individuen zu reagieren;
(g) Die Gegenwart des spezifischen Proteins im Isolat wurde bestätigt, indem dieses einer Polyacrylamidgelelektrophorese (PAGE) und Western Blotting unterzogen wurde und der Blot unter Zuhilfenahme von IgG aus einem Pool analysiert wurde, welcher aus menschlichem Serum, das aus H. pylori-positiven Individuen gewonnen wurde, hergestellt wurde. Die PAGE wurde unter Denaturierungsbedingungen durchgeführt, und das Protein, für welches ein Molekulargewicht im Bereich von 55-65 kDa festgestellt wurde, wurde isoliert.

BEISPIEL 2

Kaninchen wurden mit dem Peptid MVTLINNE geimpft. Blutproben wurden wie unten beschrieben analysiert, um diese auf Antikörperreaktion zu prüfen.

Analyseverfahren

Den Blutproben wurden 25ml 1%iger Thiomersallösung je ml Blut (d. h. eine Konzentration von 25 ul/ml) zugegeben, woraufhin die Proben vor dem Prüfen bei -40ºC aufbewahrt wurden.
Die Analysen wurden mittels Platten durchgeführt, wobei jede Vertiefung mit 100 ul von 5 ug/ml H. pylori-Antigen (Antigenpräparat wie in WO-A-93/22682 beschrieben) überzogen wird, gefolgt von 30 ul 1%iger Byco-A-Lösung als Nachbeschichtung.
Die Blutproben wurden unter Zuhilfenahme von CDL-Waschpuffer verdünnt, um einen Bereich von Verdünnungen zu ergeben.

CDL-Waschpuffer: Mengen für 1 dm³

Tris 12,11 g
5 M HCl 15 ml
Destilliertes Wasser 400 ml
NaCl 87,66 g
Thiomersal 0,1 g
Tween 80 50 g
i) Tris zu destilliertem Wasser zugeben;
ii) SM HCl zugeben, bis ein pH von 7,80 bei 20ºC erreicht wird;
(iii) Thiomersal zugeben;
(iv) NaCl zugeben;
(v) Tween 80 zugeben;
(vi) mit destilliertem Wasser bis auf Endvolumen ergänzen.
Ein Schweine-Anti-Kaninchen-Meerrettichperoxidasekonjugat mit ABTS (2,2-Azino-di-[3-Ethyl-benzthiazolin-sulfonat]), verdünnt 1/25 mit Peroxidasecitratpuffer als Substrat, wurde verwendet, um gebundene Antikörper festzustellen, wobei eine grüne Färbung ein positives Ergebnis anzeigte.

Peroxidasecitratpuffer: Mengen für 1 dm³

Destilliertes Wasser 700 ml
Zitronensäure 23,0 g
NaOH 100 ml
30% H&sub2;O&sub2; 0,5 ml
pH mit 1 M NaOH auf 4,0 einstellen.
Das Analyseprotokoll verhielt sich wie folgt:
1) Jeder Vertiefung 100 ul verdünnte Probe hinzufügen;
2) 30 Minuten langes Inkubieren (mit Schütteln);
3) x5 mit CDL-Waschpuffer waschen und Platte trocknen;
4) Jeder Vertiefung 100 ul von Schweine-Anti-Kaninchen-Meerrettichperoxidase hinzufügen;
S) 30 Minuten langes Inkubieren (mit Schütteln);
6) x5 waschen und Platte trocknen;
7) Jeder Vertiefung 100 ul ABTS hinzufügen;
8) 30 Minuten lang inkubieren; und
9) Platte @ 414 nm lesen.

Resultate

Die Spitzenantikörperreaktion trat rund sechs Monate nach der Impfung auf. Tabelle 1 unten zeigt die Resultate in Abhängigkeit von der Zeit für Blutproben aus zwei Kaninchen, welche mit dem Peptid geimpft wurden. Die Daten gelten für im Verhältnis 1/100 verdünnte Proben. TABELLE 1 EXTINKTION
Diese Resultate werden in Fig. 1 dargestellt.
Es ist deutlich zu sehen, daß das Peptid eine Anti-H. pylori-Antikörperreaktion hervorruft.

Claims

1. Protein, bei dem es sich um ein H. pylori-Antigen handelt und welches ein Molekulargewicht im Bereich von 55-65 kDa aufweist, wie unter Denaturier- und Reduzierbedingungen bestimmt wurde, und welches an seinem Aminoende die Sequenz:

Met-Val-Thr-Leu-Ile-Asn-Asn-Glu-Asp-Asp

oder eine dazu im wesentlichen homologe Sequenz aufweist.

2. Antigenes Fragment eines Proteins nach Anspruch 1.

3. Antigenes Fragment nach Anspruch 2, welches die Sequenz:

oder eine dazu im wesentlichen homologe Sequenz aufweist.

4. Antigenzusammensetzung, umfassend ein in Anspruch 1 definiertes Protein oder zumindest ein antigenes in Anspruch 2 oder Anspruch 3 definiertes Fragment.

5. Antigenzusammensetzung nach Anspruch 4, welche weiters ein oder mehrere andere H. pylori-Antigene umfaßt.

6. Protein nach Anspruch 1, antigenes Fragment nach Anspruch 2 oder Anspruch 3 oder Antigenzusammensetzung nach Anspruch 4 oder Anspruch 5 zur Verwendung bei der Feststellung und/oder Diagnose von H. pylori.

7. Verfahren zum Feststellen und/oder Diagnostizieren von H. pylori, welches umfaßt:

(a) Inkontaktbringen eines in Anspruch 1 definierten Proteins, zumindest eines antigenen in Anspruch 2 oder Anspruch 3 definierten Fragments oder einer in Anspruch 4 oder Anspruch 5 definierten Antigenzusammensetzung, mit einer zu prüfenden Probe; und

(b) Feststellen des Vorliegens von Antikörpern auf H. pylori.

8. Verfahren nach Anspruch 7, wobei es sich bei der Probe um eine Speichelprobe handelt.

9. Verwendung eines in Anspruch 1 definierten Proteins, zumindest eines antigenen in Anspruch 2 oder Anspruch 3 definierten Fragments oder einer in Anspruch 4 oder Anspruch 5 definierten Antigenzusammensetzung beim Feststellen und/oder Diagnostizieren von H. pylori.

10. Verfahren nach Anspruch 7 oder Anspruch 8 oder Verwendung nach Anspruch 9, wobei das Feststellen und/oder Diagnostizieren in vitro erfolgt.

11. Verfahren zum Isolieren eines Proteins nach Anspruch 1, welches umfaßt:

(a) Anlegen von Kulturen von H. pylori, Züchten der Kulturen in geeigneten Bedingungen und Ernten derselben, gefolgt von Waschen, um ein gewaschenes Zellpellet zu erhalten;

(b) Resuspendieren der gewaschenen Zellen in einem geeigneten Puffer, gefolgt vom Zerschlagen der Zellen;

(c) Zentrifugieren, um Zelltrümmer zu entfernen, Gewinnen des Überstandes, welcher lösliche Zellproteine enthält;

(d) Unterziehen der erhaltenen Lösung einer Ionenaustauschchromatographie mit einer Gradientenelution und Analysieren der auf diese Weise erhaltenen Fraktionen auf die Gegenwart von Urease;

(e) Vereinigen der ureasehaltigen Fraktionen und Unterziehen der vereinigten Fraktionen einer Gel-Permeationschromatographie;

(f) Auswählen der geeigneten Spitze; und

(g) Bestätigen der Gegenwart des spezifischen Proteins, welches ein Molekulargewicht im Bereich von 55-65 kDa im Isolat aufweist, und Isolieren des Proteins.

12. Set zur Verwendung bei der Feststellung und/oder Diagnose von H. pylori, umfassend ein in Anspruch 1 definiertes Protein, zumindest ein antigenes in Anspruch 2 oder Anspruch 3 definiertes Fragment oder eine in Anspruch 4 oder Anspruch 5 definierte Antigenzusammensetzung.

13. Zusammensetzung, welche in der Lage ist, eine Immunantwort in einem Subjekt hervorzurufen, und welche ein in Anspruch 1 definiertes Protein, zumindest ein antigenes in Anspruch 2 oder Anspruch 3 definiertes Fragment oder eine in Anspruch 4 oder Anspruch 5 definierte Antigenzusammensetzung umfaßt.

14. Zusammensetzung nach Anspruch 13, welche eine Impfstoffzusammensetzung ist, die wahlweise weiters einen oder mehrere Hilfsstoffe umfaßt.

15. Verwendung eines in Anspruch 1 definierten Proteins, zumindest eines antigenen in Anspruch 2 oder Anspruch 3 definierten Fragments oder einer in Anspruch 4 oder Anspruch 5 definierten Antigenzusammensetzung bei der Herstellung einer immunogenen Zusammensetzung, vorzugsweise eines Impfstoffes.