DK142681B - Analogifremgangsmåde til fremstilling af 3-oxo-androst-4-en-17-spirosultiner. - Google Patents

Description

(11) FREMLÆGGELSESSKRIFT 11+2681 DANMARK <«) C 07 J 33/00 «(21) Ansøgning nr. 1ΐ2ζ/Υ7 i22) Indleveret den 15· mar. 1 gyy (24) Løbedag 15. mar. 1977 (44) Ansøgningen fremlagt og fremlæggelsesskriftet offentliggjort den 1 5 . deC , 1 9 Qq DIREKTORATET FOR ____ ^ .

PATENT- OG VAREMÆRKEVÆSENET <30> Pnorrtet begæret ha d*n

16. mar. 1976, 7607^76, PR

W) ROUSSEL-UCLAF S.A., 35, Boulevard des Invalides, P-75OO7 Paris, ER.

(72) Opfinder: Genevieve Rousseau, 66, rue du Pre Saint-Gervals, P-75019 Paris, FR: Vesperto Torelli, 5t rue de la Convention, F-947OO Maisons-Alfort, FR.

(74) Fuldmægtig under sagens behandling:

Patentagentflrmaet Magnus Jensens Bftf._ (54) Analogifremgangsmåde til fremstilling af 3**oxo-androst-4-en-17-spirosultiner.

Opfindelsen angår en analogifremgangsmåde til fremstilling af hidtil ukendte 3-oxo-androst-4-en-17H3pirosultiner med den i kravets indledning angivne almene.formel I.

Disse forbindelser eksisterer i form af to diastereoiso-mere med hensyn til svovlatomet, som eventuelt er indbyrdes sepa-rerbare og betegner isomer A og isomer B ifølge konvention, idet isomer A er den isomer, hvis smeltepunkt er højest.

Forbindelserne med formlen I har interessante farmakologiske egenskaber. De er navnlig antagonister over for aldosteron og forøger den vandige natriumdiurese under bibeholdelse af organisk kaliua.

Desuden har de den fordel til forskel fra andre medikamenter med antialdosteronvirkning kun at have en forholdsvis ubetyde- 2 142681 lig eller alet ingen affinitet til androgene receptorer, hvilket gør det muligt for diaae produkter at regne med et fravær af se-kundærvirkninger, hvor disae receptorer er impliceret, dvs. sekun-dæreffekter af androgen eller antiandrogen type.

Forbindelserne med formlen I kan være nyttige i bekæmpelsen af navnlig arteriel hypertension og hjerteinsufficiens.

Således finder forbindelserne af formlen I anvendelse aom medikamenter.

Forbindelserne med formlen I kan anvendes til fremstilling af farmaceutiske produkter, der som aktiv bestanddel indeholder i det mindste en af de nævnte forbindelser.

Den eller de aktive bestanddele kan anvendes sammen med i disse farmaceutiske produkter gængs benyttede tilsætningsstoffer såsom talkum, gummi arabicum, lactose, stivelse, magnesium-stearat, kakaosmør, vandige eller ikke-vandige bærestoffer, fedtstoffer af animalsk eller vegetabilsk oprindelse, paraffinderivater, glycoler, forskellige fugte-, dispergerings- eller emulgeringsmidler samt konserveringsmidler.

Disse produkter benyttes ad oral, rektal, transkutan eller intravenøs vej. De kan foreligge i form af tabletter, oversukrede tabletter, oblater, kapsler, granulater, emulsioner, sirup, stikpiller og injicerbare vandige opløsninger og suspensioner.

Den nyttige dosis varierer i afhængighed af den lidelse, som skal behandles, og indgiftsmåden. Den kan variere fra f.eks.

100 mg til 1 g aktiv bestanddel pr. dag hos voksne ad oral vej.

Fremgangsmåden ifølge opfindelsen er ejendommelig ved det i kravets kendetegnende del anførte.

I en foretrukken udførelsesform for fremgangsmåden gælder: - alc1 betegner methyl, ethyl, n-propyl eller n-butyl.

- Dehydrogeneringsmidlet er chloranil, men man kan ligeledes benytte andre p-benzoquinonderivater såsom 2,3-dichlor-5,6-dicyan-benzoguinon.

- Dialkylcuprolithiumderivatet er dimethylcuprolithiumderivatet.

- Midlet til cyklisering til sultin er IT-chlorsuccinimid.

- Alkylmagnesiumhalogenidet kan være et chlorid, et iodid eller et bromid. Man kan f.eks. nævne n-propylmagnesiumbromid. Cuprosaltet kan f.eks. være cuprochlorid, cuprobromid eller cuproiodid.

3 142681

Mr man benytter et alkylmagnesiumhalogenid, udfører man fortrinsvis forudgående blokering af 17-hydroxygruppen i produktet med formlen 17. Blokeringen udføres på sædvanlig måde, f.eks. ved hjælp af dihydropyran.

Til adskillelse af de diastereoisomere benytter man de klassiske chromatografi- eller krystallisationsmetoder.

Forbindelserne med formlen II, der benyttes som udgangs -produkter,er normalt kendte!

De kan fremstilles efter den fremgangsmåde, som er beskrevet i belgisk patentskrift 810.644, og som består i, at man i nærværelse af et basisk middel omsætter et produkt med formlen 2 3 hvor T betegner et hydrogenatom eller en methylgruppe, og T betegner en alkylgruppe med 1-2 carbonatomer, med et trimethylsulfo-niumhalogenid med formlen (OH^S+X" hvor X betegner et brom- eller iodatom, til opnåelse af et produkt med formlen 2 3 hvor T og Or har samme betydning som ovenfor. I den eksperimentelle del nedenfor er der anført et eksempel på fremstilling af forbindelser med formlen II.

Nedenstående eksempler illustrerer fremgangsmåden ifølge opfindelsen.

4 142681

Præparation 5 -e th orys piro-17β-oxirany1-5.5-androstad ien.

Man suspenderer 45»2 g natriumhydrid i 1500 ml dimethyl-sulfoxid. Man opvarmer til 60°C i 2 timer og man lader henstå i kontakt ved stuetemperatur natten over. Man tilsætter derpå den sorte opløsning 1200 ml tetrahydrofuran, afkøler til -5°C og tilsætter 584 g trimethylsulfoniumiodid i suspension i 1550 ml dime-thylsulfoxid. Man indfører i ovenstående blanding, afkølet til -5°C, 150 g 5-ethoxy-5,5-androstadien-17-on (fremstillet ud fra 4-andro-sten-3,17-<3ion ifølge A. Serini og H. Koster, Ber., 1938, 1766) opløst i 1200 ml tetrahydrofuran. Man lader genantage stuetemperatur og omrører i 17 timer. Man hælder derpå reaktionsblandingen i 15 ml iskoldt vand og omrører i 1 time. Man frasuger den dannede udfældning, vasker den med vand Og tørrer den. Man renser produktet ved omkrystallisation af acetone, hvilket giver 139,7 g 3-eth-oxyspiro-17P-oxiranyl-5,5-androstadien i form af farveløse krystaller, smp. 105°C, a2^ = -161° (c = 1$, ethanol med 1?5 pyridin).

Analyse; C22H32°2 beregnet; 80,44 W° 9,82 fundet: 80,5 10,0

Eksempel 1.

(17R)-7a-methyl-21-oxydospiro-(androst-4-en-17.5 *-/!'.2 V-oxathio-lan)-5-on (isomer B).

Trin A: 3-ethoxy-7g-methyl-(17R)-spiroandrosta-3.5-dien-17.21-oxi-ran.

Man indfører under nitrogenstrøm 4 g kalium-tert.-butylat i 50 ml dimethylsulfoxid. Man omrører i 15 minutter ved 60°C. Man bringer den således opnåede opløsning på -5°C og tilsætter 20 ml tetrahydrofuran og 6,4 g trimethylsulfoniumiodid. Man omrører i 10 minutter ved -5°C og tilsætter en opløsning indeholdende 5,5 g 5-ethoxy-7a-methylandrosta-5,5-dien-17-on (fremstillet efter fremgangsmåden ifølge USA patentskrift 5*385.282) i 55 ml tetrahydrofuran. Man lader genantage stuetemperatur, og efter 50 minutters forløb hælder man reaktionsblandingen i en blanding af vand og is. Man holder reaktionsblandingen under omrøring i 10 minutter, suger fra, vasker med vand og tørrer. Der fås således 5,7 g 3-ethoxy--7a-methyl-(17R)-spiroandrosta-5,5-dien-17,2'-oxiran med smp. 146°C. Stoffet benyttes umiddelbart i det næste trin.

c 142681 o

Trin B: (17R)-7a-fflethyl-17-hydroxy-21-tert,-butylsulfinyl-(17a)- -pregna-4-en-3-on (isomer A).

Til en opløsning af 4,9 g tert.-butyImethylsulfoxid i 70 ml tetrahydrofuran afkølet til 5°C sætter man i løbet af 15 minutter 20,5 ml 2 M opløsning af n-butyllithium i hexan. Efter 10 minutters forløb tilsætter man 5,6 g af det i trin A fremstillede produkt opløst i 20 ml tetrahydrofuran. Man lader genantage stuetemperatur. Der fås en klar opløsning, som man omrører natten over. Reaktionsblandingen hældes derpå i en blanding af vand og is. Man ekstraherer med methylenchlorid, vasker med vand, tørrer over natriumsulfat og inddamper til tørhed. Der fås således 7,3 g af et produkt, som man opløser i en opløsning indeholdende 70 ml acetone og 10 ml 2 N saltsyre. Efter 15 minutters forløb fortynder man med vand og frasuger udfældningen. Der fås en blanding af iso- : mere (6,3 g), eom man ohromatograferer på silioagel (elueringsmid-del chloroform Og acetone 80:20). Man samler i rækkefølge 2,5 g (17R)-7a-methyl-17-hydroxy-21-tert.-butylsulfinyl-(17a)-pregn-4--en-3-on (isomer A) med smp. 270°C efter omkrystallisation af en blanding af methylenchlorid og methylethylketon, α ^ = -15,5° +1,5° (c = 0,7596, chloroform), og derefter 2,5 g (17R)-7a-methyl--17-hydroxy-21-tert.-butylsulfinyl-(17a)-pregn-4-en-3-on (isomer B) med smp, 248°C efter omkrystallisation af en blanding af methylethylketon og isopropylether, oc2^ = +108,5° +2° ( c = 0,85$» chloroform) .

Trin C: (17R)-7aHnethyl-2-oxydospiro-(androst-4-en-17.5'-/I*.2'/- -oxathiolan)-5-on (isomer B).

Man indfører 2,3 g (17R)-7a-methyl-17-hydroxy-21-tert.--butylsulfinyl-17a-pregn-4-en-3-on (isomer A), a2° = -15,5° +1,5° (c = 0,7596, chloroform) i en blanding af 30 ml tetrahydrofuran og 15 ml vand. Til den således opnåede suspension sætter man 680 mg N-chlorBuccinimid. Der fås en opløsning, som holdes 30 minutter ved stuetemperatur. Man fortynder med vand og afdamper tetrahydro-furanet. Der fås krystaller, som man suger fra, vasker og tørrer. Der fås således 1,8 g af et produkt, som man opløser i 10 ml ethyl-acetat under tilbagesvaling. Man filtrerer og inddamper til 4 ml og tilsætter 4 ml isopropylether. Der fås krystaller, som man suger fra, vasker og tørrer. Der fås således 1,33 g (17R)-7a-®ethyl--2-oxydospiroandrost-4-eti-17,5,-/l,,2,_/-oxathiolan)-3-on (isomer B) med smp. 180°C, a2£ = +14° ±2° (c = 0,5#, chloroform).

6 142681

Eksempel 2.

(17R)-7a-methyl-2,-oxydospiro-(androst-4-en-17,5’-,^T,*2£7-oxa-thiolan)-3-on (isomer B) og (17R)-78-methyl-2t-oxydospiro-CanArost)--4-en-17.5 *-/Ϊ*.2l7-oxathiolan)-3-on (isomer B).

Trin A: 17-hydroxy-7a-methyl-21-tert,-butylsulfinyl-( 17a) -pregn--4-en-3-on (isomer A) og 17-hydroxy-73-methyl-21~tert.--butylsulfiny1-17a-pregn-4-en-3-on (isomer A).

Man indfører under nitrogenstrøm 2,2 g cuproiodid i 40 ml vandfri ether. Man tilsætter derpå ved 0°C 15 ml 1,5 N opløsning af methyllithium i ether. Man tilsætter derpå ved -10°C en opløsning indeholdende 420 mg 17-hydroxy-21-tert.-butylsulfinyl-(17a)--pregna-4,6-dien-3-on (isomer A), fremstillet som angivet nedenfor, i 25 ml vandfri tetrahydrofuran. Man holder den opnåede opløsning ved 10°C i 30 minutter og hælder i 30 ml 2 E saltsyre. Man filtrerer den opnåede opløsning. Til filtratet sætter man 20 ml 5 E saltsyre og omrører i 1 time. Man mætter den vandige fase med ammoniumsulfat, ekstraherer med ethylacetat, tørrer over natriumsulfat og inddamper til tørhed. Der fås 600 mg af et produkt, som man ehromatograferer på silicagel (elueringsmiddel chloroform og acetone 70:30) til opnåelse af 240 mg af en blanding af 17-hydroxy--7a-methyl-2l-tert.-butylmethylsulfiny1-17a-pregn-4-en-3-on (isomer A) og 17-hydroxy-7P-methyl-21-tert.-butylmethylsulfinyl-17a--pregn-4-en-3-on (isomer A).

Trin B: (17R)-7a-methyl-21-oxydospiro-(androst-4-en-17,5 *-/11,2'/-oxathiolan)-3-on (isomer B) og (Γ7Β)-7β-methyl-2♦-oxydo-spiro-(androst-4-en-17.5*-/I*.2*7-oxathiolan)-3-on (isomer E).

Man indfører 190 mg af den i trin A opnåede blanding i en opløsning indeholdende 2,5 ml vand og 3*5 ml tetrahydrofuran. Til den således opnåede suspension sætter man 60 mg E-chlorsuccinimid.

Man holder den således opnåede opløsning under omrøring i 30 minutter, afdamper tetrahydrofuranet, ekstraherer med ethylacetat, tørrer over natriumsulfat og inddamper til tørhed. Der fås således 162 mg af en blanding af (rflO-^a-methyl^’-oxydospiro-iandrost--4-en-17»5,-/l,,2^/-oxathiolan)-3-on (isomer B) og (l7R)-7p-me-thyl-2 ,-oxydospiro-(androst-4-en-17»5 '-/i* ,2-oxat hio lan) -3 -on (isomer B), som man skiller ved chromatografi. Der fås således 7a- OC\ Λ -methyIderivatet, α ^ = +14° (c = 0,5$, chloroform).

7 142681

Udgangsproduktet i trin A fremstilles som følger:

Trin A1: 3-ethoxy-17-hyd roxy-21-tert« -butylsulfinyl-( 17oc )pregna--3.5-dien (isomer A og isomer B).

Til en blanding af 34,8 g tert.-butylmethylsulfoxid og 500 ml tetrahydrofuran afkølet til 5°C under nitrogenstrøm indfører man i løbet af 45 minutter 145 ml 2 M opløsning af n-butylli-thium i cyclohexan. Man tilsætter derpå 38 g 3-ethoxyspiro-176--oxiranylandrosta-3,5-dien. Efter 15 minutters reaktionstid ved stuetemperatur fortynder man med vand og ekstraherer med ethylace-tat. Man tørrer den organiske fase og eliminerer opløsningsmidlet ved destillation under vakuum. Der fås således 52,3 g tør ekstrakt, som chromatograferes under højtryk på en søjle af 1,6 kg kiselgel H. Eluering med en blanding af benzen og acetone (8:2) giver således 18,05 g 3-ethoxy-17-hydroxy-21-tert.-butylsulfinyl-(17a)~pregna--3,5-dien (isomer A) med smp, 200-205°C.

Analyse: CgyH^O^S = 448,714 beregnet: C# 72,27 H# 9,88 S# 7,14 fundet: 72,2 9,9 7,1

Fortsættelsen af elueringen med en blanding af benzen og acetone (5:5) giver 20,35 g isomer B, som har dobbelt smeltepunkt, først ved 140°C og derefter ved 180°C.

Analyse: fundet: C# 71,9 H# 9,7 S# 7,0

Trin B1: 17-hyd roxy-21-tert,-butylsulfinyl-(17a)-pregna-4«6-dien--3-on (isomer A).

Man indfører 8,2 g af det i trin A fremstillede produkt med smp. 200-205°C i 320 ml af en opløsning af acetone med 10# vand. Man tilsætter derpå 5,3 g chloranil til den således opnåede opløsning. Man omrører den således opnåede suspension i 4 timer 30 minutter ved stuetemperatur. Man hælder den opnåede opløsning i vand, ekstraherer med ethylaeetat, vasker, tørrer den organiske fase og destillerer til tørhed. Der fås 3,1 g af en rest. Man forener moderludene og vaskevæskeme, tilsætter natriumchlorid og ekstraherer med chloroform. Der fås således atter 4,3 g rest.

Man chromatograferer 7,4 g af den således opnåede rest på silicagel (elueringsmiddel benzen og acetone 6:4). Man isolerer således 6,7 g 17-hydroxy-21-tert.-butylsulfinyl-(l7<x)-pregna-4,6-dien-3-on (isomer A). Prøven smelter ved 260°C efter omkrystallisation af isopropa-nol.

8 142681

Eksempel 3..

(l7R)-7g-n-PZOPyl~2t-OTydosplro-(androst-4~en~17«5t~/lt«2,/-oxa-thiolan)-3-on (isomer Β).

Trin A: 17-tetrahydropyranyloxy-21-tert,-butylsulfinyl-(17g)--pregna-4,6-dien-3-on (isomer A),

Man blander 5 g 17-hydroxy-21-tert.-butylsulfinyl-(l7g)--pregna-4,6-dien-3-on (isomer A) fremstillet Som angivet umiddelbart ovenfor» 150 ml tetrahydrofuran, 50 ml 3,4-dihydro-2H=>pyran og tilsætter derpå 0,25 g p-toluensulfonsyre-monohydrat og omrører i 16 timer ved stuetemperatur, vasker med en mættet natriumbicar-bonatopløsning, tørrer den organiske fase og inddamper til tørhed. Man renser det opnåede produkt ved chromatografi på silicagel under eluering med en blanding af chloroform og ethylacetat i forholdet 4:1 og får 5,13 g af det forventede produkt i amorf form.

Trin B: 17-hydroxy-7g-n-propyl-21-tert, -butylsulfinyl-( 17a)-pregn--4-en-3-on (isomer A) og 17-hydroxy-173-n-propy1-21-tert.--butylsulfinyl-(17g)-pregn-4-en-3-on (isomer A).

Man blander 33,5 ml 0,92 fil opløsning af n-propyl-magnesium-bromid i ethylether med 33,5 ml ethylether og 33,5 ml tetrahydrofuran, afkøler til -30°C, tilsætter 0,25 g cuprochlorid, omrører i 30 minutter og tilsætter derefter i løbet af 30 minutter en opløsning af 5,13 g af det i forrige trin opnåede produkt i 30 ml tetrahydrofuran, tilsætter derpå 30 ml af en 6 IT saltsyre og om-rører reaktionsblandingen i 30 minutter ved stuetemperatur, fraskiller den organiske fase og tørrer den og inddamper den til tørhed. Man renser det opnåede produkt ved chromatografi på silicagel under eluering med en blanding af chloroform og acetone i forholdet 4:1 og fraskiller dels 1,01 g 17-hydroxy-7<x-n-propyl-21-tert.--butylsulfinyl-(17a)-pregn-4-en-3-on (isomer A), smp. 240°C, dels 2,47 g 17-hydroxy-7p-n-propyl-21-tert.-butylsulfinyl-(l7g)-pregn--4-en-3‘-on (isomer A), smp. 232°C.

Trin C: (17R)-7g~n-propyl-2,-oxydospiro-(androst-4-en-17,5>-/lt,2/--oxathiolan)-5-on (isomer B).

Ud fra 17-hydroxy-7g-n-propy1-21-tert.-butylsulfinyl-(17g)--pregn-4-en-3-on (isomer A) får man, idet man arbejder som angivet ovenfor i trin C i eksempel 2, det forventede produkt. Smp. 190°C, a2° = +2,5° +0,5° ( c = 0,1$, chloroforiS).

9 142681

Eksempel 4» (17B) -7a-n-propyl-2»-oxyd ospiro-( and ros t-4-en-17,5' -/Τ', 2_[7-oxa-thiolan)-3-on (isomer B).

Ud fra 3-ethoxy-7a-n-propylandrosta-3,5-dien-17-on får man, idet man arbejder som angivet i eksempel 1, den forventede forbindelse, som er identisk med den i eksempel 3 opnåede forbindelse.

3-ethoxy-7a-n-propylandrosta-3,5~dien-17-on fremstilles på følgende måde:

Man oxiderer 17P-hydroxy-7a-n-propylandrost-4-en-3-on (beskrevet i Steroids 2J_t side 759 (l976))ved hjælp af Heilbron's reagens (chromsyre 270 g, svovlsyre 36 BT, vand ad 1 liter).

Man får 7a-n-propylandrost-4-en-3,17-dian (smp. 192°C), som man behandler med en blanding af ethylorthoformiat, absolut ethanol og p-toluensulfonsyre.

Farmakologisk undersøgelse.

1) Undersøgelse af antlaldosteronvirkning på dyr.

Man foretager adrenalektoni på hanrotter af stammen Sprague Dawley med en vægt på 180 g. Fra dette øjeblik modtager rotterne fysiologisk serum som drikkevand. Efter 31 timers forløb bringes dyrene til at faste. De modtager da som drikkevand 5#'s glucosevand. Efter 47 timers forløb indgives ad oral vej i form af suspension eller opløsning i 0,25# carboxymethylcellulose; (17R) -α-methyl-2'-oxydospiro-(and rost-4-en-17,5'-/1',2/7-oxathiO-lan)-3-on (isomer B, eksempel 1). Efter 48 timers forløb, altså 1 time efter indgiften af forbindelsen, modtager dyrene dels en overdosis af saltvand ad intraperitoneal vej i en mængde på 5 ml pr. 100 g legemsvægt af 0,9#'s fysiologisk serum, dels 1 μβ/fcg aldosteronmonoacetat i 2,5#»s alkoholisk opløsning ad subkutan vej). Dyrene anbringes i diuresebure uden hverken næring eller drikke i 4 timer. På dette tidspunkt foretager man tvungen vandladning ved tryk på blæren. Man bringer det således opnåede urinrumfang på 50 ml. Man bestemmer indholdet af natrium og kalium på autoanalysator.

De opnåede resultater, udtrykt i procent inhibering af aktiviteten af 1 μgAδ aldosteronmonoacetat indsprøjtet ad subkutan vej på forholdet natriumkoncentration kaliumkoncentration 10 142SB1 på adrenalektomiseret rotte, er som følger:

Dosis forbindel- Procent se indgivet ad inhibering oral vej ___________ forbindelse ifølge eksempel 1 5 mg Ag 22 # 2) Affinitet til androgene receptorer.

Affiniteten til de androgene receptorer af (l7R)-7a--methyl-2 '-oxydospiro-(androst-4-en-17t5 '-/J·',2J[J7-oxathiolan)--3-on (isomer B, eksempel l) undersøges efter metoden med hormonale receptorer beskrevet af J. P. Raynaud m.fl. i J. Ster. Biochem. 1975, 6, 615-622.

Benyttet teknik:

Prostata fjernet fra hanrotter kastreret 24 timer i forvejen homogeniseres i en stødpude af tromethamin 10 millimol, saccharose 0,25 M, HC1 pH 7,4.

Homogenatet centrifugeres ved 105.000 g i 1 time. Den overliggende væske eller "cytosol” indstilles derefter til at have en fortynding på 1/5 (vægt/rumfang).

Man inkuberer ved 0°C i 2 timer cytosolet med en fast koncentration af 17β-hydroxy-17a-methylestra-4,9,ll-trien-3-on, som er tritiumbehandlet, i det følgende betegnet som tritiumbe-handlet forbindelse R, eventuelt i nærværelse af en voksende koncentration af samme produkt i kold tilstand, i det følgende betegnet kold* forbindelse R, eller testosteron eller forbindelser, som skal undersøges.

Man bestemmer efter 2 timers forløb radioaktiviteten af den tritiumbehandlede forbindelser bundet til receptoren ved kul--d extran-ad sorptions teknikken (1,25# - 0,625#).

Man tegner derefter: - de kurver, som repræsenterer procenterne af bundet tritiumbehandlet forbindelse R i afhængighed af logaritmen til koncentrationen, af kold forbindelse R, af testosteron eller af tilsatte forbindelser, som skal undersøges, - og den rette linie *50 parallelt med abcisseaksen og med ordinaten B _ B/T Max. + B/ι Min.

7jr 2 B/I Max. er procenten af bunden tritiumbehandlet forbindelse R, når der ikke er tilsat nogen forbindelse.

B/I Min. er procenten af bunden tritiumbehandlet forbin u 142681 delse R, når den maksimale mængde kold forbindelse R er tilsat.

Skæringspunkterne mellem denne rette linie I^0 og kurverne gør det muligt at bestemme værdierne CT og CX: CT: koncentration af koldt testosteron, som med 50$ inhi-berer fikseringen af den tritiumbehandlede forbindelse R.

CX: koncentration af den undersøgte forbindelse, som med 50$ inhiberer fikseringen af den tritiumbehandlede forbindelse R, Den relative affinitet af hver undersøgt forbindelse, AHI, er givet ved formlens ARI = 100 x

Opnåede resultater:

_Produkt_ ARI

Testosteron 100 forbindelse ifølge eksempel 1 3,6

Forbindelserne ifølge eksempel 1 har ringe eller ingen affinitet til de androgene receptorer.

Undersøgelse af antialdosteronvirkningen ad oral vej af forbindelsen ifølge eksempel 3. isomer B sammenlignet med virkningen af forbindelsen ifølge eksempel 12, 7 og 15 i patentansøgning 4151/75. 1 det følgende betegnet forbindelse A. B og 0,

Man adrenalektomiserer hanrotter af stammen Sprague Dawley på 180 g. Fra dette øjeblik at regne modtager rotterne fysiologisk saltvand som drikkevand. Efter 31 timers forløb bringes dyrene til at faste. De modtager da som drikkevand 5 o/oo’s glucosevand. Efter 47 timers forløb indgives forbindelserne ad oral vej i form af suspension eller opløsning i 0,25$fs carboxymethylcellulose. Efter 48 timers forløb, altså 1 time efter indgiften af forbindelserne, modtager dyrene dels en overdosis af saltvand ad intraperito-neal vej i en mængde på 5 ml pr. 100 g legemsvægt af 0,9$»s fysiologisk saltvand, dels 1 μg/kg aldosteron-monoaoetat i 2,5$,s alkoholisk opløsning ad subkutan vej. Dyrene anbringes i diuresebure uden hverken mad eller drikke i 4 timer. Efter dette tidsrums forløb foretager man tvungen vandladning ved tryk på blæren. Man reducerer det således samlede urinrumfang til 50 ml. Man foretager natrium- og kaliumbestemmelse på autoanalysator.

De opnåede resultater, udtrykt i procent inhibering af aktiviteten af 1 pg/kg aldosteron-monoaoetat injiceret ad subkutan vej på forholdet 12 142681 natriumkonoentration kaliumkoncentration på adrenalektomiseret rotte, er som følger:

Dosis $ inhibering indgivet forbindelse__ forbindelse ifølge eksempel 3 2 mg/kg 56$ 10 mg/kg 64$

Forbindelse A, sultin af 17-hydroxy-' -3-oxo-19-nor-(17a)-pregna-4.6- 5 mgAg inaktiv dien-21-sulfinsyre (isomer B) 10 mg/kg inaktiv forbindelse B, sultin af 7a-§cetyl-thi o-17-hydroxy-3-oxo-(17a)-pregn-4 - -en-21-sultinsyre (isomer B) 5 mg Ag 33$ forbindelse C, kaliumsaltet af 17--hydroxy-3-0X0-(17a)-pregn-4-en- -21-sulfinsyre 10 mg/kg 44$

Konklusion.

Forbindelsen ifølge eksempel 3 er langt mere aktiv end produkterne ifølge patentansøgning 4151/75.

Undersøgelse af antialdosteronaktiviteten ad subkutan vej af forbindelserne ifølge eksempel 1 (isomer B) sammenlignet med aktiviteten af forbindelserne ifølge eksempel 6 og 10 i ansøgning 4151/75. i det følgende betegnet produkt A* og forbindelse B*.

lan går frem som beskrevet umiddelbart ovenfor - dog subkutant i stedet for oralt - og får følgende resultater:

Dosis $ inhibering indgivet forbindelse ______ forbindelse ifølge eksempel 1 (isomer B) 5 mg/kg 85$ forbindelse Af, sultin af 17- -hydroxy-3-oxo-(17a)-pregna-4,6-dien- -21-=sulfinsyre (isomer B) 5 mgAg 38$ forbindelse B’, sultin af 17-hy-d roxy-3-oxo-19-nor-(17 a)-pregn-4- -en-21-sulfinsyre (isomer A) 5 mgAg 31$

Konklusion.

Forbindelsen ifølge eksempel 1 viser bA subkutan vej en langt større antialdosteron aktivitet end forbindelserne ifølge ansøgning 4151/75.

Claims (1)

13 142681 Patentkrav. Analogifremgangsmåde til fremstilling af 3-oxo-androst-4--en-17-spirosultiner med formlen I hvor B betegner en alkylgruppe med 1-4 carbonatomer i 7a- eller 7β-stiliingen, kend etegnet ved, at man omsætter en forbindelse med formlen II I NVCH2 alaO hvor alc^- betegner en alkylgruppe med 1-4 carbonatomer, med methyl-tert.-butylsulfoxid i nærværelse af n-butyllithium til opnåelse af en forbindelse med formlen III OH C~i\ » alcrO i form af en blanding af diastereoisomere A og B med hensyn til svovlatomet, og at man om ønsket skiller de diastereoisomere og derefter underkaster enten diastereoisomerblandingen eller hver isomer separat indvirkning af et dehydrogeneringsmiddel til opnåelse af forbindelsen med formlen IV