DK142823B - Fremgangsmåde og instrument til hurtig undersøgelse af en mandlig patient for Neisseria gonorrheae. - Google Patents

Description

142823 i

Den foreliggende opfindelse angår en fremgangsmåde og et instrument til hurtig undersøgelse af en mandlig patient for Neisseria gonorrheae uden dyrkning og uden gramfarvning af denne organisme.

Fra Acta Universitatis Carolinae Medica, vol. 27, nr. 1/2, side 47-50 (1971) kendes en prøvningsmetode for Neisseria gonorrheae (N.g.), der udføres uden forudgående dyrkning med henblik på vækst af organismerne, og ved hvilken man anvender en kombination af to forskellige reagenser, p-phenylendiaminosulfat og α-naphthol, som i opløst form blandes med Chelaton I til opnåelse af en opløsning, der efter indstilling til pH-værdien 3,5-4,5 anvendes til imprægnering af filtrerpapir, som derpå efter tørring benyttes til direkte diagnostisering af urinrørssekret for Neisseria gonorrheae.

Den i nævnte tidsskrift beskrevne prøve har været kendt siden 1956 og er omtalt i British J. Venereal Diseases 43 (1967), side 73, hvor prøven ved anvendelse af dimethyl= phenylendiamin plus α-naphthol som reagenser beskrives som resulterende i en lyseblå farve som følge af dannelsen af et blåt indophenolfarvestof under de herskende pH-koblings-betingelser.

Ifølge sidstnævnte litteratursted forudsætter prøvningsmetoden anvendelse af en rigelig mængde urinrørssekret, som skal være tilstrækkelig til påføring på begge sider af prøvepapiret, og prøvningsmetodensresultat kan aflæses efter 10 minutter. Det har imidlertid vist sig, at mere end 10% af prøverne fører til forkerte positive prøveresultater, og at 9% af prøverne fører til forkerte negative prøveresultater.

Uanset at den fra nævnte litteratursteder kendte prøvningsmetode er hurtigere end visse andre kendte prøvningsmetoder, er det ønskeligt at råde over en betydelig hurtigere prøvningsmetode, men navnlig er det ønskeligt at råde over en metode, der er betydelig mere pålidelig end den kendte.

142823 2

Fremgangsmåden ifølge opfindelsen er ejendommelig ved, at man udtager en prøve af patientens urinrørsekssudat direkte på en steril vatpind, bringer vatpinden i kontakt med en porøs, absorberende tampon, som er blevet imprægneret med et enkelt farvedannende reagens valgt blandt p-aminodimethyl= anilinoxalat, N,N-dimethyl-p-phenylendiamindihydrochlorid, N,N-dimethyl-p-phenylendiaminoxalat, N,N-dimethyl-p-phenylen= diaminmonohydrochlorid og Ν,Ν,Ν',N'-tetramethyl-p-phenylen= diamindihydrochlorid, hvilken tampon i tørret tilstand er placeret i et rør af transparent plast med bøjelige sidevægge og en lukket ende, hvori der i kontakt med tamponen er anbragt en skrøbelig ampul indeholdende fysiologisk saltopløsning eller vand med pH 6,5-7,2 i røret som opløsningsmiddel for reagenset i tamponen, hvilken ampul derefter brydes ved sammenpresning af de bøjelige sidevægge nær ved rørets lukkede ende, hvorefter den med det i ampullens indhold opløste reagens befugtede prøve på vatpinden iagttages i 30 til 120 sekunder til konstatering af en eventuel farvning, der angiver en positiv reaktion.

Herved bliver det muligt på enkel måde at foretage en hurtig diagnostisering for Neisseria gonorrheae direkte på det udsondrede urinrørssekret, hvorved der inden for 2 minutter kan tilvejebringes et prøvningsresultat, der viser 95-98% overensstemmelse med det resultat, der fremkommer ved gramfarvning i forbindelse med en bakteriologisk prøvningsmetode.

Det diagnostiske instrument til udførelse af fremgangsmåden ifølge opfindelsen er ejendommeligt ved, at det omfatter en steril vatpind og et i den ene ende lukket rør af transparent plast med bøjelige sidevægge, der er udformet til indføring af vatpinden, og hvori der i kontakt med hinanden er placeret dels en porøs, absorberende tampon, som er blevet imprægneret med et enkelt farvedannende reagens valgt blandt p-aminodimethylanilinoxalat, N,N-dimethyl-p-phenylendiamindi= hydrochlorid, N,N-dimethyl-p-phenylendiaminoxalat, N,N-di= methyl-p-phenylendiaminmonohydrochlorid og Ν,Ν,Ν’,N'-tetra= methyl-p-phenylendiamindihydrochlorid samt tørret, dels en U2823 3 skrøbelig ampul indeholdende fysiologisk saltopløsning eller vand med pH 6,5-7,2 nærmest ved rørets lukkede ende.

Tamponen kan være fremstillet af ethvert egnet materiale, såsom dacronfibre, bomuldsfibre eller andet porøst materiale og imprægneres eller mættes med et af de nævnte farvedan-nende reagenser under bestemte i det følgende omtalte betingelser, hvorefter den tørres. Den forbliver i den tørre tilstand, indtil den aktiveres af det i ampullen indeholdte befugtningsmiddel.

Tamponen er den vigtigste komponent i det diagnostiske instrument, da den indeholder det reaktive kemikalium, som er i stand til at identificere gonokokken. I tør tilstand vil den på denne måde fremstillede tampon vedblive at være stabil, og den har stor holdbarhed. En anden i instrumentet indeholdt komponent er befugtningsmidlet, som er adskilt fra tamponen i kraft af at være indeholdt i en skør ampul. Når den skøre ampul brydes, vil det indeholdte befugtningsmiddel frigøres og aktivere reagenset i tamponen, som efter at være blevet gjort meget følsom bringes i kontakt med prøven på spidsen af opsamlingsvatpinden. Det aktiverede reagens reagerer med de tilstedeværende gonokokker og bevirker, at prøven på vatpinden får en karakteristisk farve i afhængighed af valget af det anvendte reagens. Tamponen, som er næsten farveløs, fremkalder ikke en forstyrrende reaktion, fordi den ikke reagerer kolorimetrisk. Farveændringen finder sted på den på vatpinden opsamlede prøve. Den reaktionstid, der skal bruges til angivelse af en positiv prøve, andrager sædvanligvis fra 30 til 120 sekunder.

Det i ampullen indeholdte befugtningsmiddel kan bestå af vand, fysiologisk saltopløsning, pH-pufferopløsninger eller enhver anden opløsning eller kombination af opløsninger, som forøger eller sensibiliserer oxidasereaktionen. Styring af befugtningsmidlets pH-værdi er ønskelig til forhindring af autooxidation af reagenset i tamponen. Det foretrukne pH-område er fra 6,5 til 7,2.

142823 4

Opfindelsen forklares nærmere i det følgende under henvisning til tegningen, hvor fig. 1 viser et instrument, der er egnet til anvendelse ved udførelse af fremgangsmåden ifølge opfindelsen, idet instrumentet er vist inden det bruges til en prøve og i den form, hvori det sælges som et emballeret system bestående af to dele, og fig. 2 det i fig. 1 viste instrument, efter at det har været anvendt til udførelse af en prøve.

Under henvisning til tegningen, der viser en udførelsesform for det omhandlede instrument til udførelse af fremgangsmåden ifølge opfindelsen, betegner 10 et rør af transparent, bøjelig plast, hvori der er indført en tampon 12 af bomuld, som er blevet imprægneret eller mættet med reagenset og tørret. Tamponen er anbragt ved siden af en skør glasampul 14, der er placeret i den lukkede ende af røret, og et låg 16 er sat på den åbne ende af røret. En steril vatpind 18 med en gribepind 20 af plast til anvendelse ved udtagning af en prøve exudat er indesluttet i et separat sterilt omslag 22, og røret og omslaget er sammen emballeret i et hylster eller en anden ikke vist beholder. Selvom plastrøret 10's væg er bøjelig, er den tilstrækkelig stærk til, at røret normalt bevarer en cylindrisk facon og til at muliggøre let indføring af vatpinden, efter at en exudatprøve er udtaget.

Ampullen indeholder et egnet befugtningsmiddel, som er beskrevet i det foregående, og den er tilstrækkelig skør til let at kunne brydes i stykker, når det bøjelige rørs sider presses indad mellem tommel- og pegefingeren, hvorved ampullen brister og lader sit flydende indhold befugte det materiale, hvormed tamponen er imprægneret, idet tamponen normalt trykkes ind i væsken og glasstumperne, når vatpinden føres ind i røret. Når vatpinden indeholdende prøven kontakterer tamponen, begynder reaktionen mellem prøven på vatpinden og reagenset i tamponen øjeblikkeligt, og hvis gonokokker er til stede, skifter prøven på vatpinden farve, normalt 5 142823 til violet, rød-orange eller mørkegrå, afhængigt af det anvendte reagens i tamponen, således at en positiv prøve angives. Reaktionstiden til angivelse af en positiv prøve andrager normalt fra 30 til 120 sekunder.

En foretrukken fremgangsmåde til fremstilling af tamponen og til fremstilling af befugtningsmidlet er som følger:

En 1% opløsning af Ν,Ν,Ν1,N'-tetramethyl-p-phenylendiamin-dihydrochlorid fremstilles på følgende måde: 1 g af reagenset sættes til 35 ml destilleret vand, som har været bragt til kogning og fået lov til at afkøle til stuetemperatur. Opløsning foretages ved hjælp af hurtig omrøring.

64 ml ethylalkohol (Fisher A-407) tilsættes derpå, og der omrøres. Strimler af bomulds-Webril, 2 cm brede og 50 cm lange, dyppes en ad gangen i opløsningen, anbringes på et nylonnet i vandret stilling og får lov til at lufttørre. De tørre strimler skæres derpå i 1 1/2 cm lange stykker. Disse anvendes som tamponer.

En fysiologisk saltopløsning fremstilles ved tilsætning af 0,85 g natriumchlorid til 99 ml destilleret vand og indstilling af pH-værdien til 7,0. Opløsningen anvendes som befugt-ningsmiddel. Skøre ampuller indeholdende 1/2 ml af denne opløsning fremstilles, idet denne mængde er nødvendig til tilstrækkelig befugtning af den 2 cm x 1,5 cm store tampon.

Ampullen, som er tilnærmelsesvis 7 mm i diameter og 35 mm lang, anbringes ved bunden af et bøjeligt plastrør med en indvendig diameter på ca. 8 mm og en længde på 160 mm. En tampon, der er fremstillet som ovenfor anført, sammenrulles og trykkes ned i røret, således at den er i kontakt med ampullen. Et teleskopisk låg med en længde på ca. 65 mm sættes på den åbne ende af plastrøret til lukning af dette.

En steril "dacron"-vatkugle, som er anbragt på enden af en ca. 150 mm lang plastpind, er emballeret sammen med reagens- 142823 6 systemet, og denne kombination udgør diagnoseinstrumentet. Vatpinden er separat indeholdt i sit eget sterile pergamyn-omslag.

De ovennævnte to dele, der indgår i en enkelt pakning, kan via normale farmaceutiske kanaler sælges til læger, klinikker og hospitaler, og pakningen står umiddelbart til rådighed for en undersøgelse og hurtig diagnose af patientens tilstand på det sted, hvor en prøve skal udtages. Når en diagnostisk undersøgelse for gonorrheæskal foretages, åbnes pakningen, og den sterile vatpind udtages af sit omslag, og en prøve af exudatet opsamles på spidsen af vatpinden. Det teleskopiske låg fjernes derpå fra plastrøret, og vatpinden indføres med spidsen først i plastrøret. Det teleskopiske låg sættes på plads igen. Det bøjelige rør sammenpresses derpå ved ampuldelen, hvorved ampullen brydes og afgiver sit indhold. Samtidigt skydes det teleskopiske låg ned, hvorved vatpinden med prøven kommer i kontakt med tamponen. Denne nedtrykning presser også tamponen ned i befugtningsmidlet, hvorved reagenset aktiveres. Når prøven på vatpinden bliver farvet violet i løbet af to minutter, er prøven for gonorrheae positiv. Vatpinden kan fjernes et par centimeter fra tamponen for at lette aflæsningen af resultatet, dvs. den skete ændring af prøvens farve på vatpinden. Anvendelse af denne prøvemetode giver derfor lægen eller klinikeren et hurtigt og nøjagtigt diagnostisk redskab på det første trin i dennes differential-diagnose.

Til yderligere belysning af prøvemetodens følsomhed og dens anvendelighed ved påvisning af gonokokbakterien nøjagtigt på det sted, hvor prøven er opsamlet på vatpinden, gentages den ovennævnte procedure, og en kultur af neisseria gonor= rheae anvendes som repræsentant for exudatet i det tidligere eksempel. I dette eksempel anvendes vatpinden til udtagning af nogle få kolonier fra en petriskålkultur. Man gennemfører den samme procedure med instrumentet. En tydelig violetfarvning af bakterierne på vatpinden vil iagttages i løbet af ét minut. Den næsten farveløse tampon og "dacron"-vatpindens

Claims (2)

1A2823 hvide baggrund gør identificeringen af organismerne på vatpinden tydelig og klar, ligesom det er tilfældet, når exu= datet er udtaget direkte fra patienten. Ifølge U.S.A. patentskrift nr. 3.450.129 er der tidligere gjort brug af skøre ampuller til at rumme reagenser, men den fra nævnte patentskrift kendte metode er specielt beregnet til at transportere en prøve til et laboratorium og til at bevare bakteriernes levedygtighed, indtil de kan dyrkes. Fremgangsmåden ifølge opfindelsen er derimod en diagnosemetode, der ikke kræver dyrkning. Der er tale om en direkte undersøgelsesmetode. Diagnosen stilles på udtagningstidspunktet for prøven. Patentkrav.

1. Fremgangsmåde til hurtig undersøgelse af en mandlig patient for Neisseria gonorrheae uden dyrkning og uden gramfarvning af denne organisme, kendetegnet ved, at man udtager en prøve af patientens urinrørsekssudat direkte på en steril vatpind (18), bringer vatpinden i kontakt med en porøs, absorberende tampon (12), som er blevet imprægneret med et enkelt farvedannende reagens valgt blandt p-aminodimethylanilinoxalat, N,N-dimethyl-p-phenylendiamin= dihydrochlorid, N,N-dimethyl-p-phenylendiaminoxalat, N,N-dimethyl-p-phenylendiaminmonohydrochlorid og Ν,Ν,Ν',Ν'-tetramethyl-p-phenylendiamindihydrochlorid, hvilken tampon i tørret tilstand er placeret i et rør (10) af transparent plast med bøjelige sidevægge og en lukket ende, hvori der i kontakt med tamponen er anbragt en skrøbelig ampul (14) indeholdende fysiologisk saltopløsning eller vand med pH 6,5-7,2 i røret som opløsningsmiddel for reagenset i tamponen, hvilken ampul derefter brydes ved sammenpresning af de bøjelige sidevægge nær ved rørets lukkede ende, hvorefter den med det i ampullens indhold opløste reagens befugtede prøve på vatpinden iagttages i 30 til 120 sekunder til konstatering