DK144567B

DK144567B - Analogifremgangsmaade til fremstilling af et racemisk eller optisk aktivt alfa-aminobenzylpenicillinderivat eller salte deraf

Info

Publication number: DK144567B
Application number: DK125375A
Authority: DK
Inventors: L B Crast
Original assignee: Bristol Myers Co
Priority date: 1967-09-05
Filing date: 1975-03-25
Publication date: 1982-03-29
Also published as: DK125375A; DK144567C

Description

/ .-A

(19) DANMARK

i "T*

ffip/ (12) FREMLÆGGELSESSKRIFT ου 14^567 B

DIREKTORATET FOR PATENT- OG VAREMÆRKEVÆSENET

(21) Ansøgning nr. 1253/75 (51) Int.CI.3 C 07 D 499/80 (22) Indleveringsdag 25· mar. 1975 (24) Løbedag 30· aug. 1968 (41) Aim. tilgængelig 25· mar. 1975 (44) Fremlagt 29 · mar. 1 982 (86) International ansøgning nr.

(86) International indleveringsdag - (85) Videreførelsesdag - (62) Stamansøgning nr. K1 77/68

(30) Prioritet 5. sep. 1967, 665291, US

(71) Ansøger BRISTOL-MYERS COMPANY, New York, US.

(72) Opfinder Leonard Bruce CJrast Jr., US.

(74) Fuldmægtig Th. Ostenfeld Patentbureau A/S.

(54) Analogifremgangsmåde til fremstils ling af et racemisk eller optisk akt ivt alf a- aminob enz yip eni c il1in= derivat eller salte deraf.

Den foreliggende opfindelse angår en analogifremgangsmåde til fremstilling af et hidtil ukendt racemisk eller optisk aktivt a-aminobenzylpenicillinderivat eller salte deraf, hvilke forbindelser kan anvendes som profylaktisk tilskud til animalske foder-jq stoffer, til behandling af mastitis hos kvæg og til terapeutisk be- O- handling af fjerkræ, dyr og mennesker for infektionssygdomme forår- ^ saget af grampositive og gramnegative bakterier.

.j- Det hidtil ukendte racemisk eller optisk aktive a-aminobenzyl- -t· ^ penicillinderivat, som fremstilles ifølge opfindelsen, har formlen: *

O

2 144567

Ho-v y-cH-c = o \=/1 I ^s\ /°½

/ HN N-CH-CH c—CEL I

C1 I i | 3

/ \ C-N-CH - COOH

H^C^ ^CH,

J O

eller ikke-toxiske, farmaceutisk anvendelige salte deraf, og fremgangsmåden er ejendommelig ved det i kravets kendetegnende del anførte.

Ifølge en første variant af fremgangsmåden ifølge opfindelsen omsætter man en racemisk eller optisk aktiv forbindelse med formlen II

/CH3 H°Y=/ ·Η " c - NH - c^-ch3 n

/ ' ^2 0 = C-N---CH - COOH

Cl eller et salt deraf, med acetone ved en pH-værdi på mindst 5.

Til opnåelse af de bedste resultater foretrækkes det, at omsætningen udføres ved en pH-værdi mellem 5 og 9. Endvidere foretrækkes det, at omsætningen udføres ved en temperatur på -20°C til 50°C, og at omsætningen udføres uden tilstedeværelse af større vandmængder.

Ifølge en anden variant af fremgangsmåden ifølge opfindelsen acy-lerer man 6-aminopenicillansyre eller et carboxylsurt salt deraf med et racemisk eller optisk aktivt acylerende derivat af en syre med formlen III r,—λ

HO-/ y-CH - COOH

/ ?-*

Cl v

Y III

hvor -NXY er en beskyttende aminogruppe, i hvilken X betegner hydrogen, og Y betegner en benzyloxycarbonyl- eller 2,2,2-trichlorethoxycarbonyl-gruppe, eller X og Y tilsammen betegner 2-hydroxy-l-naphthylmethylengruppe, i acetone eller en blanding af acetone og et eller flere inerte opløsningsmidler ved en pH-værdi under 5, hvorefter pH-værdien 3 144567 hæves til 5-9.

Herved dannes forbindelsen med formel II først og reagerer dernæst in situ, eventuelt efter sædvanlige ekstraktioner og filtreringer, med acetone, når pH-værdien hæves til mellem 5 og 9 (fortrinsvis over 7) til dannelse af forbindelsen med formlen I.

Af nomenklatur-hensyn skal det bemærkes, at D-(-)-isomeren af forbindelsen med formlen II benævnes 6-[D-(-)-a-amino-a-(3-chlor-4-hydroxy-phenyl)acetamido]penicillansyre. D-(-)-isomeren af forbindelsen med formlen I benævnes 6-[D-(-)-2,2-dimethyl-4-(3-chlor-4-hydroxyphenyl)- 5- oxo-1-imida zolidiny1]penici1lansyre.

De ikke-toxiske, farmaceutisk anvendelige salte omfatter f.eks.

1) ikke-toxiske, farmaceutisk anvendelige salte af den sure carboxyl-syregruppe, såsom natrium-, kalium-, calcium-, aluminium- og ammoniumsaltene og ikke-toxiske substituerede ammoniumsalte med aminer, såsom tri-lavere alkylaminer, procain, dibenzylamin, N-benzyl-p-phenethylamin, 1-ephenamin, Ν,Ν'-dibenzylethylendiamin, dehydroabietylamin, Ν,Ν'-bis-dehydroabietylethylendiamin, N-lavere alkylpiperidiner, såsom N-ethyl-piperidin og andre aminer, der kan anvendes til dannelse af salte af benzylpenicillin, samt 2) ikke-toxiske, farmaceutisk anvendelige syreadditionssalte, (d.v.s. salte af det basiske nitrogen), såsom a) mineralsure additionssalte, såsom hydrochloridet, hydrobromidet, hydro-iodidet, sulfatet, sulfamatet, sulfonatet, fosfatet, o.s.v., samt b) de organiske syreadditionssalte, såsom maleatet, acetatet, citratet, tartratet, oxalatet, succinatet, benzoatet, fumaratet, malatet, mande-latet, ascorbatet, β-naphthaiensulfonatet, p-toluensulfonatet og tilsvarende forbindelser. Ligeledes indbefattet er let hydrolyserbare estere eller amider af sådanne syrer, der kan omdannes til den frie syreform ved kemisk eller enzymatisk hydrolyse.

Til fremstilling af udgangsmaterialet med formlen II kan 6- aminopenicillansyre eller et carboxylsurt salt deraf acyleres med et acylerende derivat af en syre med formlen 4 U4 567

H0-<( // CH “ C - °H

/-' N OH

C1 H-C-Q

O

H0"^\ y/”CH " ^ " 011

/ / NH

C1 ' jT\ 0 = C - OCH2-^ V eller /=\ ?

HO-6 // CH " C " °H

/ ' NH

Cl 0 = C - 0 - CH2CC13

Acyleringsmidlet forekommer fortrinsvis i form af det blandede syreanhydrid, men dets funktionelle ækvivalent som et acylerings-middel for en primær aminogruppe kan også anvendes. Foretrukne blandede syreanhydrider omfatter især de blandede anhydrider fremstillet ud fra stærkere syrer, såsom de lavere alifatiske monoestere af carbon-syre af alkyl- og arylsulfonsyrer og af svagere syrer, såsom diphenyl-eddikesyre. De funktionelle ækvivalenter omfatter de tilsvarende car-boxylchlorider, -bromider og syreanhydrider. Yderligere kan anvendes et syreazid eller en aktiv ester eller thioester (f.eks. med p-nitro-phenol, 2,4-dinitrophenol, thiophenol eller thioeddikesyre) eller den fri syre kan selv forbindes med 6-aminopenicillansyre efter at den fri syre først er omsat med Ν,Ν'-dimethylchlorforminiumchlorid (jfr. engelsk patent nr. 1.008.170 og Novak og Weichet, Experientia XXI/6, 360 (1965)) eller ved anvendelse af enzymer eller en Ν,Ν'-carbonyldi-imidazol eller en Ν,Ν'-carbonylditriazol (jfr. sydafrikansk patent nr.

5 U 4567 63/2684) eller et carbodiimidreagens (især Ν,Ν'-dicyclohexylcarbodiimid, N,N'-diisopropylcarbodiimid af N-cyclohexyl-N'-(2-morpholinoethyl)car-bodiimid;(jfr. Sheehan og Hess, J. Amer. Chem. Soc. 77, 1967 (1955)) eller af et alkynylaminreagens,(jfr. R. Buijle og H.G. Viehe, Angew. Chem., international udgave 3, 582 (1964)) eller af et keteniminreagens, (jfr. C.I). Stevens og M.E. Monk, J. Amer. Chem. Soc-, 80, 4065 (1968)) eller af et isoxazoliumsaltreagens,(jfr. R.B. Woodward, R.A. Olofson og H. Mayer, J. Amer. Chem. Soc., 83, 1010, (1961)). Et andet ækvivalent til syrechloridet er et tilsvarende azolid, d.v.s. et amid af den tilsvarende syre, hvis amidnitrogen er et led i en kvasiaromatisk 5-leddet ring indeholdende mindst to nitrogenatomer, d.v.s. imidazol, pyrazol, triazolerne, benzimidazol, benzotriazol og disse forbindelsers substituerede derivater. Som eksempel på en almen metode til fremstil” ling af et azolid skal nævnes omsætningen mellem N,N'-carbonyldiimida= zol og en carboxylsyre i ækvimolære forhold ved stuetemperatur i te-trahydrofuran, chloroform, dimethylformamid eller et lignende inaktivt opløsningsmiddel til dannelse af carboxylsyreimidazolidet i praktisk talt kvantitativt udbytte under frigørelse af carbondioxid og et mol imidazol. Dicarboxylsyrer giver diimidazolidet. Biproduktet imidazol bundfældes og kan isoleres og imidazolidet isoleres, men dette er ikke nødvendigt. Fremgangsmåderne til udførelse af disse reaktioner til fremstilling af penicillin, samt de metoder, der anvendes til isolering af den således fremstillede penicillin, er velkendte.

Efter at acyleringen er tilendebragt, fjernes den beskyttende gruppe til dannelse af forbindelsen med formlen II. 2-hydroxy-naphthylengruppen kan f.eks. fjernes ved syrehydrolyse·, benzyloxycarbonylgruppen kan f.eks. fjernes ved katalytisk hydrogenering, mens 2,2,2-trichlor-ethoxycarbonylgruppen f.eks. kan fjernes ved behandling med 90% eddikesyre eller med zinkstøv og iseddike. Det er klart for fagfolk, at andre funktionelt ækvivalente beskyttende grupper for en aminogruppe kan anvendes under acyleringen og derefter fjernes på kendt måde.

De inaktive opløsningsmidler, der anvendes ved acyleringen, er kendte for fagfolk og omfatter f.eks. tetrahydrofuran, dimethylformamid, methylenchlorid, diethylether, acetone, chloroform, methyliso-butylketon, ethylacetat og diethylethere af ethylenglycol og diethylen-glycol. Acyleringstemperaturen må ligge under ca. 0°C og fortrinsvis ved eller under -25°C.

Forbindelsen med formlen I fremstilles som nævnt ifølge opfindelsen ved omsætning mellem acetone og den tilsvarende penicillin med formlen II.

144567 6

Selv om der forekommer en vis reaktion uanset molforholdet mellem de anvendte reaktionskomponenter, foretrækkes det for at opnå maksimalt udbytte at der anvendes molært overskud af acetone, og at acetone eventuelt anvendes som reaktionsopløsningsmiddel. Vandet fraspaltes under reaktionsforløbet, og det er derfor hensigtsmæssigt, at der ikke er for stor vandmængde i reaktionsmediet. Reaktionsblandingens pH-værdi bør fortrinsvis ligge mellem ca. 5 og 9, og fortrinsvis på den alkaliske side. pH-værdien kan reguleres indenfor dette område, eventuelt ved tilsætning af et alkalisk materiale, såsom f.eks. natriumhydroxid, natriumcarbonat, kaliumhydroxid, kaliumcarbonat, ammoniumhydroxid, ammoniumcarbonat, organiske aminer (f.eks. triethylamin) og tilsvarende forbindelser. Temperaturen under reaktionsforløbet er ikke af væsentlig betydning. Reaktionen vil foregå på hensigtsmæssig måde ved stuetemperatur og kan eventuelt fremskyndes ved opvarmning.

Det carbonatom, der bærer den fri aminogruppe i forbindelsen med formlen Hi er et asymmetrisk carbonatom, hvorfor forbindelserne med formlerne I og II kan eksistere i to optisk aktive former (D- og L-diastereoisomerene) samt som en blanding af to optisk aktive former (den racemiske blanding).

De ved den omhandlede fremgangsmåde fremstillede forbindelser er oralt absorberbare og kan anvendes ved behandling af infektionssygdomme forårsaget af gram-positive og gram-negative bakterier.

Fra beskrivelsen til dansk patent nr. 119.163 kendes en række additionsforbindelser mellem α-aminopenicilliner og carbonylforbindel-ser, herunder additionsforbindelsen mellem α-aminobenzylpenicillin og acetone, kaldet hetacillin.

Den antibakterielle aktivitet af den ifølge opfindelsen fremstillede forbindelse 6-[D-(-)-2,2-dimethyl-4-(3-chlor-4-hydroxyphenyl)- 5-oxo-l-imidazolidinyl]penicillansyre, kaldet BL-P1453, fremgår af nedenstående tabel, hvor den for en række mikroorganismer er sammenlignet med hetacillin.

7 144567

TABEL

Antibakteriel aktivitet MIK (yg/ml)

Organisme_BL-P1453 Hetacillln D. pneumoniae + 5% serum 0,008 0,016

Str. pyogenes 0,004 0,008 S. aureus Smith 0,063 0,032 S. aureus Smith + 50% serum 0,063 0,063 S. aureus 1633-2 63 125

Pr. morganii 500 250 E. coli A 9675 500 125 E. coli Juhl A 15119 2 4

Sal.enteritidis 0,125 0,125 K. pneumoniae A 15130 125 125 K. pneumoniae A 9979 0,5 1,0

Ps. aeruginosa 500 >500

Som det fremgår, udviser den ifølge opfindelsen fremstillede forbindelse forbedrede minimale inhibitoriske koncentrationer (MIK) i forhold til en række mikroorganismer. BL-P1453 er endvidere påvist at have forbedrede CD^-værdier og blodspejlsværdier i forhold til ampi-cillin ved oral indgivelse til mus.

Ved behandlingen af bakterieinfektioner hos mennesker indgives de omhandlede forbindelser oralt eller parenteralt i overensstemmelse med den sædvanlige metode til antibiotisk indgivelse i en mængde mellem ca. 5 og ca. 60 mg/kg/dag, og fortrinsvis ca. 20 mg/kg/dag, i delte doser, f.eks. tre eller fire gange daglig. Forbindelserne kan indgives i enhedsdosisform indeholdende f.eks. 125 eller 250 eller 500 mg aktiv bestanddel i forbindelse med egnet fysiologisk anvendeligt bæremateria-le. Enhedsdoserne kan anvendes i form af flydende præparater, såsom opløsninger, dispersioner eller emulsioner eller i fast form, såsom tabletter, kapsler og tilsvarende præparater.

Fremstilling af udgangsmaterialer D-(-)-(p-hydroxyphenyl)glycin fremstilles efter følgende reaktionsskema : 8 144567

I /=\ ° H20-CH30H

CH-CMv //-C-H + NaCN + ΝΗ,ΟΗ----)

3 37°C

CH30H:C^>''H"CN T > CH3°^~^>-?H-C02H

nh2 J nh2

II

y=\ · ° CH30-<^ z)-CH-C02H + C1CH2 - C-0-C-CH2Cl + NaOH NH2 H2° /^X " ch3o^ ^ch-c-oh NH-C-CH0C1 II ^ o

III

CH30-(^ ^-CH-C02H + NH^OH + Svinenyre-acylase NH-OCH^Cl o 37°c /=\ -^ L- (+) CH30-<^ z)-CH-C02H D-(-) CH30-d Jf-CE-CO^ 2 nh9 nh O = C-CH2C1

IV

CH30-<( λ-CH-C-OH + HC1 ———> CH30-<( )}-CH-C02H

NH NH2 D-(-) ' D-(-) O = C - ch2ci v 9 144567

CH30“^ ^-CH-C02H —i8%.BBr.-^ hoh^ ^-CH-C02H

nh9 nh~ D-(-) D-(-) I. dl-2-(p-methoxyphenyl)glycin

Til en omrørt opløsning af 19,6 g (0,4 mol) af NaCN i 80 ml H20 sattes 23,6 g (0,450 mol) NH^Cl og 20 ml koncentreret NH^OH og derefter 54,5 g (0,4 mol) anisaldehyd i 160 ml methanol, og temperaturen holdtes ved 37°C i 2 timer. Methanolen fjernedes derefter i vakuum, og den tilbageblevne blanding ekstraheredes med to 150 ml portioner methyl-isobutylketon og forenedes. De forenede ekstrakter udvaskedes en gang med 30 ml H20, og derefter tilsattes 240 ml 6N HC1 under omhyggelig omrøring, og methylisobutylketonen fjernedes i vakuum. Den fremkomne opslæmning opvarmedes ved tilbagesvaling (nu i opløsning) i to timer.

100 ml H20 sattes til den varme opløsning, hvortil der sattes 8 g affarvende carbon, og efter 10 minutters omhyggelig tilbagesvaling frafiltreredes den resterende mængde carbon, og der udvaskedes med 50 ml varmt vand. De forenede varme filtrater omrørtes og behandledes med koncentreret NH^OH, indtil der fremkom en pH-værdi på 5-6 (pH-papir). Opslæmningen afkøledes derefter til 5°C, og efter en times forløb frafiltreredes krystallerne, hvorpå der udvaskedes med to 100 ml portioner vand. Kagen opslæmmedes derefter i 250 ml vand, og 50% NaOH sattes langsomt hertil, indtil produktet var opløst. To 300 ml ether-ekstrakter udtoges og bortkastedes. pH-værdien indstilledes derefter til 5,5 med 6N HC1 under afkøling. Efter en times forløb frafiltreredes produktet, udvaskedes med 3 x 100 ml H20 og lufttørredes. Udbyttet var 40 g; dekomponeringstemperatur 244°C med sublimation ved 230°C.

II. dl-2-(p-methoxyphenyl)-N-(chloracetyl)glycin

Til en omrørt suspension af 36 g (0,2 mol) dl-2-(p-methoxyphenyl)-glycin i 500 ml H20 sattes 8 g (0,2 mol) NaOH-kugler, og efter at der var fremkommet en klar opløsning, afkøledes denne til 5°C, og under kraftig omrøring tilsattes på en gang 68,2 g (0,4 mol) chloreddikesyre-anhydrid (varm). Derefter tilsattes en opløsning af 16 g (0,4 mol) NaOH i 100 ml H20 i løbet af 10 - 15 minutter. Der tilsattes yderligere 20% NaOH, således at pH-værdien holdtes på ca. 9 i 1 1/2 time. Derefter indstilledes pH-værdien til 2 med 40% H^PO^. Produktet udkrystallisere- 10 144567 des øjeblikkeligt og frafiltreredes, udvaskedes med vand og omkrystalliseredes med en blanding af ethanol og vand til dannelse af 38 g af produktet, der smeltede ved 182-183°C.

Analyse beregnet for C^H^CINO^: q, 51,21; H, 4,69.

Fundet: C, 51,49; H, 4,90.

III. D-(-)-2-(p-methoxyphenyl)-N-(chloracetyl)glycin og L-(+)-2-(p-methoxyphenyl)glycin._

Til 800 ml H2O omrørt ved 37°C sattes 38 g (0,148 mol) dl-2-(p-methoxyphenyl)-N-(chloracetyl)glycin og NH^OH sattes dråbevis hertil, indtil der var opnået en pH-værdi på 7,8. Til den fremkomne opløsning sattes 2 g svinenyre-acylase, og omrøring fortsattes ved 37°C (indre temperatur) i 21 timer. Faste stoffer, der indeholdt rå L-(+)-2-(p-methoxyphenyl) glycin frafiltreredes og udvaskedes med 2 x 100 ml E^O og pH-værdien af de forenede filtrater indstilledes til 4-5 med iseddike. Denne opløsning opvarmedes på dampbad i 30 minutter med 5 g affarvende carbon, hvorpå der filtreredes. Carbonkagen udvaskedes med 50 ml varmt vand, og de forenede filtrater afkøledes og syrnedes til en pH-værdi på 2 med 40% HgPO^. Efter en times afkøling ved 0°C frafiltreredes det krystallinske produkt, og der udvaskedes med koldt vand ( 3 gange) og lufttørredes. Udbyttet var 16 g. Ved en yderligere udvinding, hvortil der anvendtes fem gange de forud anførte mængder, fremkom der et udbytte på 83 g (87% i udbytte); smeltepunkt 170-171°C.

[a]*5 C -193°C (C=l% ethanol)

Analyse beregnet for C^H-^CINO^ C, 51,21; H, 4,69.

Fundet: C, 51,50; H, 4,99.

Ved behandling af de faste stoffer indeholdende rå L-(+)-2-(p-methoxyphenyl)-N-chloracetylglycin med varm 3N HC1 (200 ml) og carbon med påfølgende filtrering og pH indstilling til 5,5 fremkom 6 g (første udvinding) af ren L-(+)-2-(p-methoxyphenyl)glycin.

_ |-0 [alp C +150,4°C (C=l%, IN HC1) IV. D-(-)-2-(p-methoxyphenyl)-glycin 16 g D-(-)-2-(p-methoxyphenyl)-N-chloracetylglycin tilbagesvaledes i 1 1/2 time i 170 ml 2N HC1. Den fremkomne klare opløsning frafiltreredes og afkøledes ved 5°C, og pH-værdien instilledes til 5,5 med NH^OH. Produktet frafiltreredes efter afkøling i 30 minutter og udvaskedes i 3 x 25 ml koldt vand. Det tørrede materiale D-(-)-2-(p-methoxypheny1)-glycin vejede 9,5 g. En yderligere udvinding gav 54 g, hvortil anvendtes 83 g udgangsmateriale fra III.

11 144567 [α]25°C "149'9° (C=l%, IN HC1) (første udvinding) ^25°C "148,1° (C=l%, IN HC1) (anden udvinding)

Analyse beregnet for C^H^NO^: C, 59,67; H, 6,13; N, 7,74.

Fundet: C, 59,38; H, 6,16; N, 8,00.

V. D- (-)-2-(p-hydroxyphenyl)-glycin

En blanding af 1,81 g (0,01 mol) D-(-)-2-(p-methoxyphenyl)glycin ([a)25°C-D -149,9° C=l%, IN HCl) og 10 ml 48% HBr opvarmedes under om hyggelig tilbagesvaling i 2 timer. Den fremkomne opløsning koncentreredes ved formindsket tryk ved 30°C til et fugtigt, fast stof. En mini- o mal mængde vand (20 C) sattes til opløsningen af HBr-saltet og ovar afkøling tilsattes NH^OH, indtil den opnåede pH-værdi var 5. Den fremkomne tykke gel, der bundfældedes, opvarmedes til 50°C, og da opløsningen var næsten fuldkommen, begyndte der at bundfælde en forskellig fra tidligere krystallinsk form. Ved afkøling i 30 minutter ved 0-5°C fremkom 990 mg materiale efter udvaskning med koldt vand (3x1 ml) og lufttørring, D-(-)-2-(p-hydroxyphenyl)glycin.

[a]p5°C -161,2° (C=l%, IN HCl) dek. pt. 223°C.

Et yderligere udbytte fremkom ved anvendelse af 20 x den ovenfor anførte mængde med ialt 24,5 g af stoffet.

[a]^5°C -153° (C=l% IN HCl)

Analyse beregnet for CgHgNO^J C, 57,49; H, 5,43; N, 8,39.

Fundet: C, 57,41; H, 5,67; N, 8,39.

VI. D-(-)-2-(3-chlor-4-hydroxyphenyl)qlycin

Til en omrørt suspension af 5,01 g (0,03 mol) D-(-)-2-(p-hydroxy-phenyl)glycin i 100 ml iseddike bobledes gasformig HCl med stor hastighed ca. 5 minutter. Der fremkom først en klar opløsning, hvorefter det saltsure salt udkrystalliseredes. Derefter tilsattes 4,45 g (0,033 mol) sulfurylchlorid (frisk destilleret) i 25 ml iseddike under omrøring i løbet af 30 minutter; tilsætningen var dråbevis. Temperaturen var under tilsætningen 26-27°C. Efter en times omrøring tilsattes langsomt 250 ml tør ether, og udkrystallisationen begyndte. Efter 15 minutters forløb frafiltreredes produktet, hvorpå der udvaskedes med tør ether og lufttørredes. De fremkomne 7 g opløstes i 50 ml IN HCl, filtreredes, og pH-værdien indstilledes under afkøling til pH-værdien 5 med koncentreret NH^OH. Det fremkomne krystallinske produkt frafiltreredes efter 5 minutters henstand, udvaskedes med to 20 ml portioner vand og 5 x med acetone. Det vakuum-tørrede materiale vejede 4,6 g; dekomponeringspunkt 217°C (skarpt). Det infrarøde og det kernemagneti- 12 144567 ske resonansspektrum svarede til den ønskede struktur.

[a]°20c -137,1° (C=l%, IN HC1)

Analyse beregnet for CgHgClNOgi C, 47,76; H, 4,01; Cl, 17,66.

Fundet: C, 47,16; H, 3,92; Cl, 17,96.

VII. Natrium[D-(-)-N-(2-hydroxy-1-naphthylmethylen)]-a-amino-a- (3-chlor-4-hydroxyphenyl)-acetat_

Til en omrørt opløsning af 8 g (0,04 mol) af D-(-)-2-(3-chlor-4-hydroxyphenyl)-glycin, 25 ml H20, 10 ml ethanol og 1,6 g (0,04 mol) natriumhydroxid sattes på en gang en varm opløsning af 7,57 g (0,044 mol) 2-hydroxy-l-naphthalaldehyd i 40 ml 95% ethanol. Blandingen opvarmedes, indtil det til at begynde med fremkomne bundfald var genopløst, hvorpå det hurtigt afkøledes ved ca. 5°C og skrabedes. Efter afkøling i en time på isbad frafiltreredes det krystallinske produkt, hvorpå det lufttørredes. Det klare, gule produkt omkrystalliseredes med en blanding af ethanol og vand i forholdet 8:2 til dannelse af 10,1 g vakuum-tørret produkt. Det infrarøde og det kernemagnetiske resonansspektrum svarede til den ønskede struktur.

Analyse beregnet for C^gH^gClN04Na: C, 60,37; H, 3,47.

Fundet: C, 60,66; H, 3,72.

Villa. 6-[D-(-)-a-amino-a-(3-chlor-4-hydroxyphenyl)acetamido]- penicillansyre__

En suspension af 3,78 g (0,01 mol) natrium(p-(-)-N-(2-hydroxy-l-naphthylmethylenJ-a-amino-a-{3-chlor-4-hydroxyphenyl) acetat i en blanding af 95 ml acetone, 5 ml p-dioxan og 3 dråber pyridin afkøledes til -10°C. Til denne afkølede og omrørte suspension sattes 1,08 g (0,01 mol) ethylchlorformiat. Efter omrøring ved -10°C i 25 minutter, afkøledes blandingen til -35°C og filtreredes til fjernelse af bundfældet natriumchlorid. Det filtrerede, blandede anhydrid omrørtes ved -10°C, og der tilsattes i en portion ved 0°C en opløsning af 2,16 g (0,01 mol) 6-aminopenicillansyre og 1,68 g (0,02 mol) NaHCOg i 50 ml vand; i flere minutter udvikledes kraftig carbondioxid. Temperaturen holdtes ved eller under -10°C i 30 minutter og steg derefter til stuetemperatur i løbet af 35 minutter. Til reaktionsblandingen sattes 60 ml vand, og acetonen fjernedes i vakuum ved 20°C. Det vandige lag ekstraheredes med to 150 ml diethylether, og etherlagene bortkastedes. Det vandige lag indstilledes til en pH-værdi på 2 med 6N HC1 under til 13 1A4567 sætning af en tilstrækkelig mængde acetone til at opløsningen bibeholdtes. Efter henstand i 30 minutter ved stuetemperatur ekstraheredes blandingen med to 250 ml portioner ether, og etherlagene bortkastedes. Det vandige lags pH-værdi indstilledes til 4,7 med 20% NaOH og koncentreredes derefter i vakuum ved 20°C til et volumen på 25 ml. Efter filtrering til fjernelse af en ringe mængde uopløseligt stof inddampedes den vandige opløsning til tørhed ved 20°C i vakuum.

Vlllb. 6-[D-(-)-a-amino-α-(3-chlor-4-hydroxyphenyl)acetamido]- penicillansyre_

Til en omrørt suspension af 6,05 g (0,03 mol) D-(-)-2-(3-chlor-4-hydroxyphenyl)glycin i 110 ml vand ved 25°C sattes 1,2 g (0,03 mol) natriumhydroxid-kugler. Der fremkom herved en klar opløsning. Opløsningen afkøledes til 0°C og omrørtes, og 2,4 g (0,06 mol) NaOH-kugler tilsattes. Efter fuldstændig opløsning tilsattes i en portion under kraftig omrøring 13,6 g (0,08 mol) carbobenzyloxychlorid. Efter omrøring i 30 minutter ved 0-5°C var pH-værdien 7 og nogle få dråber af 50% vandig NaOH tilsattes for at holde pH-værdien omkring 8-9 under yderligere 30 minutters omrøring. Den tilsatte 300 ml vand og den fremkomne opslæmning ekstraheredes med 500 ml diethylether. Etherlaget bortkastedes, og den vandige fase (og tørstofferne) syrnedes til en pH-værdi på 2 med 6N HC1 og ekstraheredes med tre 300 ml portioner ethylacetat.

De forenede ethylacetatlag udvaskedes med to 100 ml portioner vand, to 250 ml portioner mættet Na2SO^-opløsning og filtreredes. Filtratet koncentreredes i vakuum til dannelse af D-(-)-a-benzyloxycarbonyl-amino-a-(3-chlor-4-hydroxyphenyl)eddikesyre i form af en olie, der langsomt udkrystalliseredes.

0,03 mol D~(-)-a-benzyloxycarbonylamino-a-(3-chlor-4-hydroxy-phenyl)eddikesyre opløstes i 15 ml dimethylformamid og 4 dråber 2,6-lutidin tilsattes. Opløsningen afkøledes til 0°C i isbad og omrørtes, og 3,24 g (0,03 mol) ethylchlorformiat tilsattes i løbet af 5 minutter. Efter omrøring i 15 minutter tilsattes en opløsning af 6,5 g (0,03 mol) 6-aminopeniciliansyre i 10 ml vand og 2 ml 2,6-lutidin. Opløsningen omrørtes på isbad i 20 minutter, og pH-værdien indstilledes til 2 med fortyndet H2SO^, og blandingen ekstraheredes med to 25 ml portioner ether. De forenede etherlag udvaskedes med vand og ekstraheredes derefter med 14 144567 30 ml''fortyndet NajCOg. Den vandige Na^O^-ekstrakt (pH 7,5) udrystedes med 1 g 30% palladium-på-celite i 20 minutter i hydrogenatmosfære ved 2 tryk på 3,5 kg/cm . Suspensionens volumen fordobledes med vand og pH~værdien indstilledes til 2 med fortyndet H2SO4. Katalysatoren fjernedes ved filtrering, og filtratet ekstraheredes med to 15 ml portioner methylisobutylke ton og 1 g aerosol O.T.. Ekstrakten neutraliseredes til 4,5 ved tilsætning af triethylamin og det amorfe, faste stof, der dannedes, udvandtes ved filtrering, udvaskedes med vand og tørredes i vakuum over P~0C.

Fremgangsmåden ifølge opfindelsen belyses nærmere i de følgende eksempler.

Eksempel 1 6-D-(-)-2,2-dimethy1-4-(3-chlor-4-hydroxyphenyl)-5-oxo-2-(Η)-1- imidazolidinyl peniciliansyre__

En opløsning af 6-[D-(-)-a-amino-a-(3-chlor-4-hydroxyphenyl)aceta-mido]penicillansyre (0,01 mol) opløstes i en blanding af 100 ml methanol og 1,5 ml triethylamin. Der tilsattes 100 ml acetone, og opløsnin-' gen omrørtes i 5 timer. Derpå inddampedes opløsningen til en olie ved 20°C i vakuum. 25 ml vand og 50 ml ethylacetat sattes til olien, og pH-værdien indstilledes på 3 med 40% H^PO^. Det vandige lag mættedes med'NaOl, og blandingen omrystedes. Ethylacetatlaget tørredes over Na^SO^ og koncentreredes i vakuum ved 20°C til et ringe-volumen. Det krystallinske produkt fjernedes ved filtrering, udvaskedes med vandig acetone og tørredes. Produktet, 6-D-(-)-2,2-dimethy1-4-(3-chlor-4-hydroxyphenyl)-5-oxo-2(H)-l-imidazolidinyl penicillansyre, dekomponerede ved 182°C. Stoffet inhiberede Salmonella enteritidis ved en koncentration på 0,125 ^.ug/ml, Escherichia coli Juhl ved en koncentration på 2yUg/ml, Streptococcus pyogenes ved en koncentration på 0,004yug/ml og Staphylococcus aureus Smith ved en koncentration på 0,063yug/ml.

Eksempel 2 6-D-(-)-2,2-dimethy1-4-(3-chlor-4-hydroxyphenyl)-5-oxo-2(H)-1-imida- zolidinyl penicillansyre__

Til en omrørt og afkølet (-10°C) suspension af 3,78 g (0,01 mol) natrium D-(-)-N-(2-hydroxy-l-naphthylmethylen)-a-amino-a-(3-chlor-4-hydroxypheny1)-acetat i 100 ml acetone, 5 ml p-dioxan og 3 dråber pyridin sattes 1,08 g (0,01 mol) ethylchlorformiat. Blandingen omrør- 15 144567 tes ved -10°C i 30 minutter og afkøledes derefter til -40°C og filtreredes til fjernelse af bundfældet natriumchlorid. Til dette filtrat af det blandede anhydrid, kraftigt omrørt ved -15°C, sattes på én gang en for-kølet (0°C) opløsning af 2,16 g (0,01 mol) 6-amino-penicillansyre, 1,68 g (0,02 mol) NaHCOg i 50 ml vand. Der forekom en kraftig CC^-udvikling i ca. 5 minutter. Temperaturen holdtes ved eller under -10°C i 20 minutter og hævedes derefter til stuetemperatur i løbet af 30 minutter. Til denne opløsning sattes 50 ml vand, og acetonen fjernedes under formindsket tryk ved 20°C. To 200 ml ether-ekstrakter udtoges og bortkastedes. Det vandige lag indstilledes til en pH-værdi på 2 med 6N HC1 under anvendelse af tilstrækkelig acetone til at holde alt materiale i opløsning. Denne opløsning hanstod i 30 minutter ved 22°C, hvorpå to 300 ml etherekstrakter udtoges og bortkastedes. pH-værdien indstilledes dernæst på 4,7 med 30% NaOH og koncentreredes under formindsket tryk til et volumen på 25 ml ved 20°C. En ringe mængde uopløseligt stof frafiltreredes, og 25 ml acetone sattes til filtratet. pH-værdien indstilledes på 8,8 med 20%

NaOH, og efter 3 timers forløb indstilledes pH-værdien på 3 med 40% H-jPO^, og to 100 ml ethylacetatekstrakter udtoges. De forenede ethyl-acetatekstrakter udvaskedes en gang med 20 ml H20 og filtreredes derefter og koncentreredes under formindsket tryk ved 15°C til et volumen på ca. 20 ml. Det krystallinske produkt frafiltreredes og opslæmmedes i 10 ml acetone-vand (volumenforhold 1:1) i 10 minutter og filtreredes igen.

Udbyttet var 280 mg af titelforbindelsen, der dekomponerede ved 182°C og havde et infrarødt og kernemagnetisk resonansspektrum svarende til den antagne struktur.

Analyse beregnet for ci9H22ClN3°5: c, 51,82; H, 5,04.

Fundet: C, 48,39; H, 5,28.

Dette produkt viste sig at inhibere Staphylococcus aureus Smith ved en koncentration på 0,063^ug/ml, Streptococcus pyogenes ved en koncentration på 0,004yug/ml, Staphylococcus aureus BX-1633-2 (en benzylpenicillin resistent stamme) ved en koncentration på 63^.ug/ml, Escherichia coli Juhl ved en koncentration på 2^ug/ml, Salmonella enteritidis ved en koncentration på 0,125^ug/ml og Diplococcus pneumoniae ved en koncentration på 0,008^ug/ml, og efter oral indgivelse hos mus at have en CDg^-værdi overfor Staphylococcus aureus Smith på 0,5yug/ml.

Claims

144567 16 Analogifremgangsmåde til fremstilling af en racemisk eller optisk aktiv forbindelse med formlen ΗΟ-γ -V-CH-C = 0 . ™ /1 1 ! / HH N-CH-CH C—CH, Cl X,,/ il I 3 c-N-CH - COOH H-C^ XH, 0 eller ikke-toxiske, farmaceutisk anvendelige salte deraf, kendetegnet ved, at man a) omsætter en racemisk eller optisk aktiv forbindelse med formlen II /}—^ 0 /S. CH_ /7 \ " ^ / 3 11 HCK7 7-CH - C - NH - CH-CH C—CH-, λ=/' II I 3 / NH2 0 = C-N--CH - COOH Cl eller et salt deraf, med acetone ved en pH-værdi på mindst 5, eller b) acylerer 6-aminopenicillansyre eller et carboxylsurt salt deraf, med et racemisk eller optisk aktivt acylerende derivat af en syre med formlen III HO-f y-CH - COOH \=/ ' 111 / *~x Cl Y hvor “NXY er en beskyttet aminogruppe, i hvilken X betegner hydrogen, og Y betegner en benzyloxycarbonyl- eller 2,2,2-trichlorethoxy-carbonylgruppe, eller X og Y tilsammen betegner en 2-hydroxy-l-naph-