DK148208B - Apparat til kvantitativ bestemmelse af antigen-koncentrationen i en proevevaeske ved hjaelp af en immunoadsorbent - Google Patents

Description

148208

Opfindelsen angår et apparat til kvantitativ bestemmelse af antigen koncentrationen i en prøvevæske med en i et kammer fastholdt masse af partikler (immunoadsorbent), til hvilke der er bundet over for bestemte antigener specifikke antistoffer, og med et kammerindløb 5 og et kammerudløb til at føre en prøvevæske eller en skyllevæske gennem kammeret.

En radioimmunoanalyse, som f.eks. beskrevet i tysk offentliggørelsesskrift nr. 24 12 833, er en analytisk metode, som baserer sig på et antigens konkurrence om (affinitet overfor) antigenbin-10 dingssteder pi antistofmolekyler. I praksis fastlægges der standardkurver ud fra data opnået på basis af en række prøver, der hver indeholder (a) samme kendte koncentration af mærket antigen og (b) forskellige, men kendte, koncentrationer af umærket antigen. Antigener mærkes med et radioaktivt isotopsporestof. Prøven bringes i et kontaktkammer i kontakt med en deri fastholdt masse af for antigenet specifikke antistoffer (immunoadsorbent) for derved at fremkalde en binding af en del af de mærkede og umærkede antigener til antistofferne. Det frie antigen skilles fra den fastholdte masse af antistoffer og den dertil bundne antigen og derpå bestemmes ved hjælp af en 20 passende detektor, såsom en gamma- eller beta-strålingsdetektor, det procentvise indhold af enten bundet eller frit mærket antigen eller begge. Denne fremgangsmåde gentages for en række prøver indeholdende forskellige kendte koncentrationer af umærkede antigener, og resultaterne indtegnes i et diagram.

25 Normalt aftager den relative mængde af sporestofantigenet, som er bundet til antistoffet, med stigende total antigen koncentration. Efter at der er fremstillet en standard kurve, anvendes denne til bestemmelse af koncentrationen af antigen i prøver, som underkastes analyse.

Ved den faktiske analyse blandes prøven, hvis koncentration af antigen skal bestemmes, med en kendt mængde sporestof antigen. Sporestofantigenet er det samme antigen, som vides at være til stede i prøven, men som er blevet mærket med en passende radioaktiv isotop. Prøven med sporestoffet inkuberes derpå i kontakt med 35 antistoffet. Dernæst kan der efter adskillelse af det frie fra det bundne antigen foretages en tælling af det i prøven tilbageværende frie antigen eller af det til immunoadsorbenten bundne antigen ved hjælp af en passende detektor. Derpå bestemmes ud fra standardkurven koncentrationen af antigenet i den oprindelige prøve.

148208 2

Immunoadsorbenten regenereres derpå ved at ophæve bindingen af antigenet til antistofferne for at kunne genanvendes til en kvantitativ analyse, idet den gennemskylles med et opløsningsmiddel.

5 Brugen af en genanvendelig immunoadsorbent forudsætter, at immunoadsorbenten har langtidsegenskaber, der sikrer, at immu-noadsorbentens virkning kan reproduceres. Det er derfor nødvendigt, at immunoadsorbenten ved hvert forsøg frigiver antigenet støkiometrisk. Desuden mi det sikres, at immunoadsorbenten ikke 10 udtørres og lader sig pakke på en sidan måde, at strømningsforholdene gennem massen opfylder de stillede krav i immunoadsorbentens fulde levetid.

Formålet med opfindelsen er at tilvejebringe et gennemstrømningskammer til en sådan genanvendelig immunoadsorbent, 15 hvilket kammer virker understøttende, for såvidt angår opretholdelsen af de krævede egenskaber hos immunoadsorbenten.

Dette formål opnås ifølge opfindelsen med det i krav 1 definerede apparat.

Videreudviklinger af opfindelsen er defineret i underkra- 20 vene.

Apparatet ifølge opfindelsen finder hensigtsmæssigt anvendelse i et automatisk arbejdende apparat til radioimmunoanalyse af den type, som er beskrevet i ovennævnte tyske offentliggørelses-skrift nr. 24 12 833. En genanvendelig immunoadsorbent, som med 25 fordel kan anvendes i forbindelse med det omhandlede apparat, er beskrevet i dansk patentansøgning nr. 1648/76.

Opfindelsen skal herefter beskrives nærmere under henvisning til tegningen, der viser et aksialsnitbillede gennem et apparat ifølge opfindelsen.

30 Som vist på tegningen omfatter apparatet 25 et hus 27, som for at lette fremstillingen har cylindrisk form. I huset 27 er der et kammer 30, som indeholder den immobiliserede immunoadsorbent 32, der er vist som et partikelformet materiale. Immunoadsorbenten fastholdes i kammeret ved hjælp af en porøs prop 34, hvis porer er 35 mindre end størrelsen af partiklerne, som udgør immunoadsorbenten.

Der er tilvejebragt et udløb 36 til fjernelse af materiale, som bringes til at strømme gennem kammeret fra et indløb 38. Proppen 34 sidder fast i understøtningslegemet, som kan bestå af polypropylen eller et andet formstof. Eksempelvis kan kammeret have en diameter på 3,175 148208 3 mm, en længde pi 6,35 mm, medens proppen har dimensionerne 3,175 x 3,175 mm og en porestørrelse pi 10 pm.

Anbragt i indløbsbanen befinder der sig filterelementer 41 og 43 i form af 400 maskers nylonnet, som ligger an mod en filter-5 skive 43, som fortrinsvis er af polytetrafluorethylen, og som har form som et filt med en porestørrelse pi højst 10 pm.

Som vist ender kammeret 30 ved hver ende i udvidede endesektioner 46 og 47 i form af tapforsænkninger, der hver indeholder en prop 48 henholdsvis 49. Hver prop omfatter en indre tapforsænkning 51 henholdsvis 53 og en gennemgående kanal som vist pi tegningen. Ved de ender af propperne, som grænser op til kammeret 30, har propperne en konisk åbning 56 henholdsvis 57 og en ringformet skulder, som optager et o-rings tætningselement, idet sidstnævnte danner en tætning i de respektive tap-borede ender af 15 huset 27.

Proppen 49 tjener til at presse filtrene 41 og 43 på plads, hvorhos nettet 41 tjener til at forhindre filten i at trænge ind i den koniske åbning 57.

En tilslutning af apparatet sker gennem endepropperne 48, 20 49 og endeudboringerne 51,53. Apparatet udgør et enhedsbyggeele ment med en for det pågældende forsøg specifik immunoadsorbent.

Når det ikke anvendes, kan det opbevares ved 4°C.

Den koniske åbning tjener det formål at sprede strømmen over laget af partikelformet immunoadsorbent i kammeret 30. Den 25 koniske åbning 56 virker som en kollektor for materialet, som forlader kammeret, hvorhos proppen 48 holder den porøse prop 34 i kammeret.