DK153405B - Beskyttede 3-halogen-7alfa-aminoacyl-cephalosporin-derivater til anvendelse som mellemprodukter ved fremstilling af 3-halogen-7alfa-aminoacyl-cephalosporiner - Google Patents

Description

, DK 153405B

Opfindelsen angår hidtil ukendte beskyttede 3-halogen-7a-aminoacvl-cephalosporinderivater til anvendelse som mellemprodukter ved fremstilling af 3-halogen-7oc-aminoacyl-cephalosporiner med den i kravets indledning angivne formel I. Disse cephalosporiner og ikke-toxiske farmaceutisk acceptable salte deraf er værdifulde, oralt effektive antibiotics. Mellemprodukterne ifølge opfindelsen er ejendommelige ved, at de har den i kravets kendetegnende del angivne formel.

Der kendes adskillige 7a-aminoacyl-cephalosporin-antibiotica med forskellige substituenter i 3-stilling i molekylet. F.eks. kan nævnes det velkendte antibioticum cephalexin, 7-(D-oc-phenyl-glycyl- DK 153405B .

2 amido )-3-methyl-3-cephem-4-carboxylsyre, der er en desacetoxy-cephalosporansyre med en methylgruppe i 3-stilling; antibioti-cumet cephaloglycin, 7-(D-a-phenylglycylamido)-3-acetoxymethyl- 3-cephem-4-carboxylsyre, der er en cephalosporansyre med en acet-oxymethylgruppe i 3-stilling; og endelig ct-aminoacylcephalospo-riner, hvori 3-stillingen er substitueret ved en thiadiazol-thio-rnethyl eller tetrazolthiomethyldel, og de er alle værdifulde terapeutiske midler.

ligeledes er der beskrevet et antal cephalosporinforbindelser, hvori molekylet er substitueret i 3-stilling med en 3-halogen-metfcylgruppe, f.eks. 3-brom-methyl-3-cephem-4“Carboxylsyreestre. · 3- halogennsthylcephalcsporinestre, der er beskrevet, er nyttige mellemprodukter til fremstilling af cephalosporinantibiotica.

Halogencephalosporinforbindelserne ifølge opfindelsen er strukturelt enestående forbindelser inden for cephalosporinerne, idet halogenatomet er knyttet direkte til carbonatomet i 3-stilling i dihydrothiazinringen. I modsætning hertil har de kendte halogenderivater af cephalosporiner, såsom de, der er beskrevet ovenfor, et halogenatom på en methylengruppe knyttet til carbonatomet i 3-stilling i dihydrothiazinringen. De omhandlede forbindelser har en kombination af karakteristika, der omfatter en 7-a-aminoacyldel knyttet til en cephalosporinkerne, der er substitueret i 3-stilling med et chlor- eller bromatom.

De omhandlede halogensubstituerede cephalosporinforbindelser har den i kravets kendetegnende del anførte almene formel II.

I nævnte formel refererer hydroxyphenyl til mono- og dihydroxy-phenylgrupper, såsom 4-hydroxyphenyl, 3-hydroxyphenyl, 2-hydroxy-phenyl, 3)4-dihydroxyphenyl og 2,4-dihydroxyphenyl. Halogen-phenyl refererer til mono- og di-halogen-substituerede phenylgrupper, hvori halogen refererer til fluor, chlor og brom, såsom 4- iluorphenyl, 4-chlorphenyl, 3 , 4-dichlorphenyl, 3-chlorphenyl, 2-chlorpheryl, 3-bromphenyl og 4-bromphenyl. Methylphenyl refererer til mono- og dimethylerede phenylgrupper, såsom isomere 2-, 3- og 4-methylphenylgrupper og dimethylphenylgrupper, såsom 3,4-dimethyIphenyl og 2,4-dimethylphenyl. Betegnelsen methoxy-phenyi refererer til mono- og di-methoxylerede phenylgrupper, såsom 4-metho~nhsnyl, 3-methoxynhenyl, 2-methoxyphenyl, 3,4-

3 DK 153405 B

-I

Bstergrupperne repræsenteret af R i ovennævnte formel er alle kendte esterdele, der sædvanligvis anvendes i cephalosporiner for at beskytte C^-carbozylsyregruppen i cephalosporinmolekylet, medens andre reaktioner, der omfatter andre reaktive steder i molekylet, udføres. Fremstillingen af estre med formel I (R = andet end hydrogen) udføres ved tg.ælp af følgende metode, ved hvilken der anvendes samme estergrupper til at beskytte carboxylsyre gruppen som i andre eephalosporinforbindelser.

Betegnelsen pharmaceutisk acceptable, ikke-toxiske salte refererer både til salte af CA-carboxylsyrefunktionen og syreadditions-' » salte af a-amino-gruppen af 7-glycylamido-sidekæden. Pharmaceutisk acceptable salte, der omfatter C^-carboxylsyrefunktionen, omfatter salte dannet med uorganiske baser, såsom natrium--, kalium og calciumsalte, der kan fremstilles med natriumbicarbonat, kaliuncaroonat, calciumhydroxid eller natriumhydroxid. Pharmaceutisk acceptable aninsalte kan også fremstilles, f.eks. med organiske aminer, såsom dicyclohexylamin, benzylamin, 2-amino-stkanol, diethanolamin eller diisopropylamin. Syreadditionssalte af -i-aminogruppen omfatter salte dannet med mineralsyrer, såsom hydrogenchloridsyre, hydrogenbromidsyre og sulfater og salte dannet med organiske sulfcnsyrer, såsom p-toluensulfonåt.

Det ses nemt, at når er hydrogen, kan den amfotere form af forbindelsen eksistere, idet denne form fremkommer via intra-molekulær saltdannelse.

På grund af nærværelsen af det asymetriske carbonatom i a-amino-acylgruppen omfatter de ovennævnte 3-halogen-cephalosporiner D-, L- og DL-formerne. D-formen er den foretrukne isomere form i den foreliggende opfindelse.

Eksempler på de omhandlede beskyttede 3-halogen-7a-aminoacyl-cephalosporin-derivater er følgende: 7-(B-phenylglycylamido)-3-chlor-3-cephem-4-carboxylsyre, 7-(3-pheny1glycy1ami do)-3-bron-3-cephem-4-earboxylsyre, 7-(P-3-hydrcxyphenylglycylamido)-3-chlor-3-cephem:-4-carboxylsyre, 3-2-(2-thi9nyl)glycylamidc]-3-chlor-3-cephem-4-carboxylsyre, 7-_3-2-(2-furyl)glycylamidc]-3-chlcr-3-cephem-4-carboxylsyre, 7-(3-4~chlorphenylglycylamido)-3-brom-3-cephem-4-carboxylsyre,

4 DK 153405 B

7_(p_3_nethylphenylglycylamido)-3-chlor-3-cephem“4--carbo:xylsyre, 7- (D-2,6-dime thoxyphenylglycylamido )-3-chlor-3-cephem-4-carboxylsyre, 7-Γ D-2-(3-thienyl)glycylamido]-3-chlor~3-cephem-4-carbo:xylsyre son annotere ioner og pharmaceutisk acceptable salte deraf.

Ί

Forbindelser med ovennævnte formel I, bvor R er hydrogen eller pharmaceutist acceptable ikke-toxiske salte deraf, er værdifulde antibiotika, der er anvendelige tii at bekæmpe infektioner i varmblodede pattedyr, infektioner, der er forårsaget af gram-positive og gram-negative mikroorganismer. De er også effektive, når de indgives parenteralt, f.eks. subcutant eller intramuscu-lært, samt når de indgives oralt.

7-:i-aminoacyl-3-halogen-cephalosporiner har et bredt spektrum af antibakteriel virkning som illustreret af in vitro spektret for 7-{D-phenylglycylamido)-3-chlor~3-cephem-4-carboxylsyre, der ses af følgende tabel: label I nedenfor angiver den minimale hæmningskoncentration (MIC) i ug pr. ml, der er opnået med denne forbindelse i standard-agar-fortyndingsforsøget,

Tabel_I

7-(D-phenylglycylamido)-3-chlor-3-cephem-4-carb03qrlsyre in vitro spektrum.

* MIC

Organisme'' (pg/ml)

Staphylococcus aureus 3055 1

Staphylococcus aureus 3074 1

Streptococcus faecalis Σ66 16

Proteus morganii PR15 · >128

Salmonella typhosa SA12 <0,5

Ilecsiella pneumoniae KI14 0,2

Snterobacter aerogenes SB17 8

Serratia marcescens SE3 >128

Escherichia coli EG14 2

Citrobaeter freundii CE17 >128

nnas oerueinoea XP^Q

5 DK 153405 B

Tabel_I (forts.)

MIC

Organisme" (p.g/ml)

Salmonella typhimuriun 1

Pseudomonas solanacearum X185 >128

Erwlnia amylovora 1 * lal og/eller logstaver efter navnet på organismen refererer til stammen.

Taoel II nedenfor angiver diameter i millimeter af hæmningszonen gældende for den angivne mikroorganisme i standardpladeforsøget opnået med 7-(D-phenylglycylamido)-3-chlor-3-cephem-4-carboxyl-syre.

Tabel_II

Hæmningszone (mm-diameter)

Mikroorganisme Koncentration (mg/ml) 1,0 0,1 0,01

Staphylococcus aureus 35 28 20

Bacillus subzilis 44 32 21

Sarcina lutea 48 27 27

Mycobacterium avium 24 Tr ' —

Proteus vulgaris 23 Ϊ3?

Salmonella gallinarum 35 25 13

Escherichia coli -30 20 11

Klebsiella pneumoniae 28 20 12

Pseudomonas solanacearcum 32 23 * _ . ,.

rr indicerer spor az en zone

Bn streg (—) angiver, at der ikke er observeret nogen zone. 1 tabel III nedenfor er vist den minimale hæmningskoncentration opnået med 7-(l)-phenylglycylamido)-3-clilor-3~cephem-4~carboxyl-syre over for et spektrum af gram-positive og gram-negative W Ί ^ Λ in. a «Λ 4 Λ W* Λ *V1 4 —. /Μ *m. ^ Λ ΤΛ “· ^ *7 V7 Λ» Π Γ» "VI O Λ if O “1“

6 DK 153405 B

Tabsl_III

In vitro antibiotisk spektrum af 7-(D-phenylglycylamido)-3-chlor- 3-cephem-4-carboxylsyre

Minimal hæmnings-koncentration MIG v-g/ml

Starhylo c o e eus aureus 5055 1,0 g^£r22jXococcu3 aureus 3123 1,0 c^j-uwyioccccus aursus 3074 2,0

Streptococcus (gruppe l) 9901 64 j&i-terooacter cloacae Ξ39 >128

Sr.tsro’oacter aerogenes EB17 64 ^scverichia coli ZC14 1,0 2sc>erichia cell ZC35 2,0

Escherichia coli ZC53 1,0 ELecsiella sp. HX-3 <0,5

Klebsiella sp. ELT4 2,0

Elebsielra sp. &±ϊ2;> 2,0

Prcteus miraoilis ?H5 1,0

Preteus norgerii 111 128

Proteus rstrgeri 133' >128

Pr or sus rettgeri I?,2 >128

Salmonella SA12 <0,5.

Shigella sp. 3H3 2,0 < lal Cé/-u_er bogstaver efter organismens navn henfører til ^ jt,- " ι·*·1 0“Λ ^ X sraraara-agar-forryrdingsfcrsøget viste 7-(D“phenylglycylamido)- 3-ehlor-i-sepaeu-i-earboxylsyre aktivitet over for Hemophilus inflo-enrae _eu en MlC-værdi på 1 - 4 mg/ml over for et antal stammer. 2 2 racer recenfor er vist den orale absorption af 7-(D-phenyl-glycylsmiO-’/*'c-cnlrr-3-c9phen-4-carbo2:yls2^re vea hjælp af de blod-

7 DK 153405 B

og urinkoncentrationer, der opnåedes i mus. Ved udførelsen af forsøget "blev McAllister Swiss-mus, der vejede fra 11 til 13 gran,' fastet natten over og "blev indgivet oralt 20 mg/kg af . 7_(p-ph.enylglycylamido)-3-ch.lor-3-cephem-4-carboxylsyre. Blod-og urinprøver blev udtaget ved de anførte intervaller, og koncentrationen af antibiotikum i hver prøve bestemtes ved et mikrobiologisk forsøg under anvendelse af Sarcina lutea i en agar med pH 6,0 ved et pladeforsøg.

label^IV

7-(D-phenylglycylamido)-3-chlor-3-cephem-4-carbo:xylsyre Koncentration i blod og urin M ^ Koncentration (pg/ml) efter følgende tider (min.) 5 15 50 60 90 .120 240 1 29,1 16,2 11,6 3,5 1,2 0,5 0,2 2 23,7 19,2 11,0 5,2 3,2 2,0 0,6 3 17,6 10,1 9,1 5,7 2,1 1,3 0,7 4 23,3 13,6 10,1 4,0 1,6 1,6 1,0

Gennemsnit i blod 23,4 14,8 10,5 4,6 2,0 1,4 0,6

Gennemsnit i gennem- ,.π. ΛΠ(.Α ΩΑ·ζ *no oor snitsprøve af urinen ~ 1474 1764 845 305 308 226

Den effektive dosis (ED^q) for 7-(D-phenylglycylamido)-3-chlor~ 3-cephem-4-carboxylsyre, der er illustrativ for den effektive dosis af forbindelserne ifølge opfindelsen, er 0,74 mg/kg x 2 indgivet oralt og 0,48 mg/kg x 2 s.c. over for Streptococcus pyogenes og 5,5 mg/kg x 2 oralt over for Escherichia coli og 17,6 mg/kg x 2 oralt overfor Diplococcus pneumoniae bestemt i mus.

label V nedenfor, angiver den minimale hæmningskoncentration for illustrative 3-halogen-3-cephem-forbindelser ifølge opfindelsen over for repræsentative gram-negative bakterier. Hæmningskoncen-trationeme bestemtes ved gradient plade-metoden udført i det væsentlige som beskrevet i Science 116, 45 (1952). I tabel V refererer betegnelsen R til strukturformlen.

8 DK 153405B

5abel_?

Antibiotisk virkning af substitueret 7-(phenylglycyl-amido)-3-ciilor-3-cepiieia-4-carbozylsyre over for gramnegative bakterier. ' fXj&lr-f3')

Xj=-J oCl

R 2 I

COOH

Testorganisme 2'linimal hæmningskoncentration (ug/ml)

R 3-OH 4-OH 4-C1 H

Shigella sp. 1,0 2,0 13,3 6,7

Escherichia cell 1,0 2,0 17,2 5,7

Klebsiella pneumoniae 0,9 1,5 8,0 0,9

Aerobaeter aerogenes 0,8 .1,0 5,0 0,8

Salmonella heidelberg 0,5 0,8 10,7 0,2

Pseudomonas aeruginosa >200 >200 > 200 >200 1 følgende tabel VI er anført aktiviteten af repræsentative 3-halogen-3-cephen-forbindelser over for adskillige kliniske isoiater af penicillin-resistente staphylococci. Aktiviteten er angivet i minimal hsmningskoncentrationer af den omhandlede forbindelse. Pen minimale koncentration bestemtes ved gradient-plade-metoden.

9 DK 153405 B

Sabel VI

virkning af substitueret 7-(phenylglycyl-anido-5-c2ilor-3-csp2iea-4-cart)ozylsyrer over for penicillin--'ssistent Staphylococcus cf-Νχγί>~1

\COOH

Minimal hæmningskonc entrat i on 1 (pg/ml) ·

Starhyloccccus ---------------1—

" stamme 3. 3-OH 4-OH 4-C1 H

. 741 3,0/ 5,0/ 10,5/>20 11,5/>20 732 3,5/ 7,0/ 18 />20 17 />20 Σ400 >20 >20 >20 />20 >20 />20 784 0,5/ 0,6/ 3,0/>20 2,7/ 15 21.1 . 0,4/ 0,6/ 0,4/0,7 0,4/1,0 1/ λetegr.slsen refererer til stammer af kliniske isolatsr af penicillin-resistent staphylococcus.

2/ i kolonnerne er væraisn ovenfor skråstregen den minimale v«-nir.^koncentration i fravær af humant serum. Værdien ----*---o under stregen er, når den er til stede, den minimale hæm-ninsskoncentration i nærværelse af humant serum.

Forbindelserne ifølge opfindelsen er ejendommelig ved det i den kendetegnende del af kravet anførte. De kan fremstilles ved N-acy-lering af en 7-amino-3-halogen-3-cephem-4-carboxylsyre eller en ester deraf, f.eks. benzyl, p-methoxybenzyl, p-nitrobenzyl, diphe-nylmethyl, 2,2,2-trichlorethyl, trimethylsilyl eller tert.-butyl-ester, med et aktivt derivat af en phenyl, thienyl eller furyl substitueret glycin med formlen: 10

DK 153405B

R-CH-C00H

nh2 livor R liar samme "betydning som i formel I. Ved acyleringen beskyttes aminegruppen i glycinen, f.eks. som et salt, såsom hydro-genchloria, eller med en af de sædvanligt anvendte aminobeskyt-ter.de grupper, soa f.eks. tert.-butyloxycarbonyl, benzyloxycar-bonyl, p-nitrobenzylozycarbonyl, trichlorethoxycarbonyl eller tritylgruppen, eller enaminer dannet med methylacetoacetat og acstylacetcne og lignende grupper. Aktiverede derivater af carboxyl syr øgruppen i den substituerede glycin kan være syrehaloge-nider, såsom syrechlorider, aktiverede estre, såsom de, der dannes med pentacnlorpb.er.ol, azid eller et blandet anhydrid dannet med glycin og nethvlchlorforaat og isobutylcblorformat. ligeledes kan den aminobeskyttede glycin anvendes direkte i acyleringen af den ønskede 3-hale genkerne ester ved at anvende et kondens erings-middel, såsom H-9thoxycarbonyl-2-eilioxy-1,2-dihydroquinolin (ZZPC). Por eksempel omsættes p-nitrobenzyl-7-amino-3-chlor-3-cerhen-4-csrtoxylat med N-(tert.-butyloxycarbonyl)-1-ph.enylgly-cin i et,tørt inert opløsningsmiddel, f.eks. tetrahydrofuran, til dannelse af p-nltrobenzyl-7-(l-pbenylglycylamido)-3-cblor-3-c erher—4—car coxylav.

G-er.erelt kan man anvende enhver af de kendte amid-koblingsmetoder ved acyleringen af 7-anino-3-fralogen-3-cephem-4-carboxylsyre eller -estre. Uår det aktiverede derivat er et syrehalogenid, udføres acyleringen i nærværelse af et hydrogenhalogenidbindende middel, såsem natriumbicarbonat, pyridin, natriumbisulfit eller en alkylenoxid, såsom prepylenoxid. Når et blandet anhydrid anvendes ved acyleringen, kan det dannede anhydrid dannes ved hjælp af U-ethoxycarbonyl-2-ethoxy-1,2-dihydroquinolin (EEDQ). Når en N-beskyttet phenyl, thienyl eller furylglycin anvendes, kan acyleringen udføres i nærværelse af et kondenseringsmiddel, såsom il ,111 -dicyelchexylearbo diimid.

Illustrativ for substituerede glyciner, der kan anvendes til fremstilling af de omhandlede forbindelser, er D-phenylglycyl-chlorid,- hydrochlorid, U-i-hydroxyphenylglycyl-chlorid,hydrochloria, •oenvaohlorrhenvl-U-rhenyl-il- (tert. -butyloxy carbonyl) glycinat, r er.vacLlorohenyl-i;— 2-thier.y l-N-( 2,2,2-trichlorethoxycarbonyl)-

11 DK 153405 B

glycinat, N-(tert,-butylcxycarbonyl)-D-phenylglycin, N-(1-carbo-methoxy-2-propsnyl)-D-phenylglycin, 3-thienylglycylehlorid,hy-drochlorid, ::-(tert.-fcutyl03ycarbonyl)-2-thienylglycin eller N-(t ert.-butylcxycarbonyl)-2-furylglycin.

i^cy 1$27χ2ΐgen udføres 2 ex inerx opløsningsmiddel, f.eks. i acetone, acetoni.tril, dinethylfcrmamid eller me thylenchlorid og fortrinsvis ved en temperatur på -20 - +20° C. Por eksempel fremstilles 7-(D-?henylglycylasido)-3-chlor-3-cephem-4-carboxylsyre ved at omsætte D-phenylglycylchlorid,hydrochlorid med p-nitro-bensyl-7-amire-3-ehlor-3-cepnsm-4-carboxylat i acetonitril i nærværelse af propylenoxid. istergruppen fjernes dernæst ved hydrogenering .

Typiske forbindelser, der kan benyttes som udgangsmaterialer ved fremstillingen af de omhandlede forbindelser, er 7-amino-3-chlor-3-cephem-4-carboxylsyre, p-nitrobenzyl-7-amino-3-chlor-3-cephem-4-carboxylat, diphenylmethyl-7-amino-3-brom-3-cephem-4-carboxylat eller diphenylmethyl-7-amino-3-chlor-3-cephem-4-carboxylat.

7-amino-3-halogen-3-cephem-4-2arbo3ylsyrer og -estre fremstilles på følgende måde: in 7-acylamido-cephalosporansyre eller en ester deraf omdannes til en -7-acylamido-3-exomethylencepham-4-carboxylsyre eller ester, isteren af 3-exomethylencepham-forbin-delsen oxideres med ozon til dannelse af et mellemprodukt i form af et ozonid, der dekcmponerss til opnåelse af 7-acylamido-3-hydroxy-3-cephem-4-carooxylsyreester. Denne chloreres -eller bro-meres til frembringelse af den tilsvarende 3-halogen-3-cephem-forbindelse. 7-aeylgruppen i denne forbindelse fjernes ved velkendt sidekæde-spaluningsreaktion, idet der anvendes phosphor-pentachlorid i pyridin til opnåelse af iminochloridderivatet af sideksden, der dernæst cmsstnes med en alkohol, såsom methanol, til opnåelse af iminoetheren, der herefter nemt hydrolyseres til opnåelse af 7-anino-3-nalcgen-3-cephem-4-carboxylsyreesteren.

Por eksempel omsættes'en 7-acylamido-cephalosporansyre, såsom 7-phenoxyacetamic.ocephalospcransyre, med en svovlholdig nucleo-phil forbinuelse ifølge velkendte metoder til udøvelse af en nu-cieophil substitution af acsvoxygruppen i cephalosporansyren og

12 DK 153405 B

til frembringelse af en 7-acylamido-3“thiosubstitueret-methyl- 3-cephem-4-carboxylsyre. Denne reduceres dernæst med zink/myre-syre i nærværelse af dinethylformamid eller med Raney-nikkel i-nærvsrelse af hydrogen til opnåelse af en 7-acylamido-3~exomethyl-encephan—4-carboxylsyre. Por eksempel omsættes 7-phenoxyacet-amido-3-acetezymethyl-3-*cephem-4-carho.xylsyre med kaliumethyl» xanthat til opnåelse af 7-pkenoxyacetamido-3-ethoxythionocar-bonylthiomethyl-3-cepkem-4-carboxylsyre. Reduktion af sidstnævnte forbindelse ned zink og myresyre i nærværelse af dimethylform-amid giver 7-phenoxyacetamido-3-exomethylencepham-4--carbo:xylsyre. På lignende vis kan en lang række 7-acylamido-cephalosporansy-rer omsættes ned en lang række svovlholdige nucleophile forbindelser til opnåelse af 3-thio-substitueret-methyl-3-cephem-forbin-delser. Por eksempel kan 7-acylamidogruppen være en heterocyc-lisk kæde, f»sks.- 2-thienylacetamido eller 2-furylacetamido, eller det kan være en alkanoylsidekæde som eksemplificeret af aceramido eller en lang række andre sidekæder* ligeledes kan den svovlholdige nuoleophil være en lang række forbindelser, såsem thicurir.stof og substituerede thiourinstoffer, der reagerer med cephalosporansvrer til opnåelse af isothiouroniumsalte, thiobenzoater, mercapiopyridin-N-oxid, · 1-methyl-tetrazol-5-thiol, 5-methyl-1,3,4-thiaii£20l-2-thiol og andre svovlholdige nucleo-nhile forbindelser. liter den reduktive substitutionsreaktion beskrevet ovenfor kan den således fremstillede 3-exomethylen-c s than-4-caro oxy1syre esterificeres for eksempel med p-nitro-benzylbromid, p-methozybenzylbromid, diphenyldiazomethan eller 2,2,2-trichlcrethylchlorfornat eller en anden esterdannende forbindelse, og 3-excmethylencephamesteren omsættes med ozon til opnåelse af 3-hyaroxy-5-eephen-esteren. Ozonolysereaktionen af en 3-9xomethylencephamester udføres i et inert opløsningsmiddel ved en temperatur på -SO - 0° C og fortrinsvis mellem -80 og -50° G til dannelse af det mellemliggende ozonid. Dette dekomponeres in situ i kulder. til opnåelse af den tilsvarende 3-hydroxy-3-cephem-ester som illustreret i følgende reaktionsskema:

13 DK 153405B

0 P

. E-S-iL-f' S

-Νγ> CH2 CO.OR1 .

°3 i. ozonid] v

O H

- p i ys\

. 0J—Cp-0H

COOR1 T -ormel er R hydrogen eller resten af acylamido- I ovennævn J ^ c-rvOoen son beskrevet ovenfor. Ror eksempel kan R være benzyl, phenoxymethyl, nsthyl, 2~thienylmethyl eller 2-furyImethyl, og R1 har samme betydning sen defineret i formel I.

Ozorolysen af 3-szomethylencephamesteren udføres ved at lede ozon gennem en cnløsning af esteren i et inert opløsningsmiddel, indtil ozoniddannelsen er tilendebragt. Inerte opløsningsmidler, der kan anvendes, er de opløsningsmidler, hvori 3-exomethylen-cephanestere i det mindste delvis er opløselige, og som ikke reagerer med osen under de beskrevne betingelser. Sædvanligvis anvendte opløsningsmidler er methanol, ethanol, ethylacetat, methylacetat, isoamylacetat og methylenchlorid.

Ozongassen fremstilles ved hjælp af en ozongenerator af den type, der sædvanligvis anvendes ved syntese og analytisk arbejde. Sådanne generatorer fremstiller ozon ved indvirkning af en elektrisk r) a τ·4 η T77fT£avi "-Γίο οΑΛλ-μ λ ι-ι·λιλ 4· r\-vt ΟίαΊ fPOO Λ*Ρ ΙαΓλΙ Ί ο

DK 153405B

back Corporation. Ozon frembringes i en strøm af oxygen, der ledes direkte ind i reaktionsbeholderen. Det procentvise indhold af ozon i oxygenstrømen kan varieres som ønsket, f.eks. ved at variere strømningshastigheden af oxygen igennem ozongeneratoren samt ved at variere intensiteten af den elektriske ladning.

Koncentrationen af 3-exomethylencephamester-udgangsmaterialet i det inerte opløsningsmiddel er ikke kritisk, og det foretrækkes at anvende et opløsningsmiddel-volumen, der er tilstrækkeligt til at danne en fuldstændig opløsning.

Når ozoniddannelsen er tilendebragt, fjernes ethvert overskud af ozon i reakticnsblandingen ved at boble nitrogen, oxygen eller en inert gas, såsom argon, igennem blandingen. Efter fjernelse af ethvert overskud af ozon dekomponeres ozonidet ved at sætte et reduktionsmiddsl til reaktionsblandingen, hvilket middel vælges fra gruppen bestående af natriumbisulfit, svovldioxid og trine thylphosphit til opnåelse af 3-hydroxy-3-cephem-4-carboxylsyre-estsren. Dekompositionen udføres ved at sætte et overskud af dekompositionsmidlet til blandingen og at omrøre denne, indtil der opnås en negativ kaliumiodid-stivelsesprøve. Et foretrukkent middel for dekompeneringen er gasformig svovldioxid.

3-kyarozy-3-csohen-estre udvindes fra reaktionsblandingen ved at afdampe de flygtige opløsningsmidler fra blandingen, hvorved der opnås en reaktionsproduktblanding som remanens, hvorefter der om-krystalliserss. Den således dannede 7-acetamido-3-hydroxy-3-cephen-4-carboxylsyresster halogeneres dernæst til opnåelse af 7-acylamido-3-halcgen-3-cephem-4-carboxylsyreesteren.

Forbindelser med formel 1/ hvori X er chlor eller brom, kan fremstilles ved at omsætte en 7-acylamido-3-hydroxy-3-cephem- ester eller en 3-hydrozy-3-cephem-ester i dimethylformamid med en reaktiv chlor- eller bromforbindelse, der med dimethylform-amid danner chlor eller brom-dimethyliminiumchlorid eller bromid med følgende formel·

CE, , H

><x X 1 _______· r _ ·**“ __ i _ ^ —v U Λ Ί λΙλΊ Λν λ! 1 Λν vnm ΓΤ Ρπΐ Π"

” DK 153405B

rid eller bromid. Det reaktive halogeniminiumhalogenid med ovennævnte formel dannes in situ og er et meget reaktivt chlorerings- eller broneringsmiddel. Chlor- og broforbindelser, der danner oven- . nævnte iminiumhalogenid, indbefatter sædvanligvis anvendte chlo-reringsmidler, såsom phosgen (carbonylchlorid), oxalylchlorid, 'thionylchlorid og phosphorchlorider, såsom f.eks. phosphortri-chlorid og phosphorozychlorid (pho'sphorylchlorid). Bromerings-nidler, der kan anvendes i nærværende opfindelse, omfatter carbo-nyldibromid, oxalylbromid, thionylbromid (svovloxybromid) og phos-

Ohorbromider, phosphoroxybromid og phosphortribromid. Phosphor-pentachlorid kan anvendes ved fremstilling af 3-chlor-3-eephem-forbindelser ifølge opfindelsen. Imidlertid reagerer dette middel samtidigt med 7-acylamido-sidekæden i udgangsmaterialet til dannelse af inlnochlorid, der er det reaktive mellemprodukt i den velkendte cephalcspcrinsidekædespaltningsreaktion. Derfor foretrækkes det at anvende et af de andre chloreringsmidler.

Chlcreringen og bromeringen udføres ved at sætte halogenerings-midlet til er. opløsning af 3-hydroxy-3-cephem-esteren i tør dine thylf or mamit vea en temperatur på 5 - 15° C og at lade reak-tionsblandingen stå ved stuetemperatur i 4 - 8 timer eller længers. Reaktionen er til at begynde med exotherm,og derfor køles reakticnsbehelderen først i et is-vandbad og holdes dernæst ved 25c 0 under resten af reaktionen. Dimethylformamid tørres fortrinsvis før anvendelse over en molekylsigte. Selv om reaktionen kan udføres i dimethylformamid 30m opløsningsmiddel, kan aer sammen med dimsthylformamid anvendes et andet opløsningsmiddel.

Ror eksemnel kan der anvendes tetrahydrofuran, dioxan, methylen-chlcrid, di-ethylacetamid eller dimethylsulfoxid som co-opløs-ningsmiddel.

3-chlo-r»- elisr 3-brom-3-C9phen-estre udvindes fra reaktionspro-duktblandimgS" ved at hælde denne i en vand-ethylacetatblanding og at separ=re 3-en organiske fase indeholdende produktet. Den organiske fase vaskes, tørres og inddampes til opnåelse af 3-^„cerhem-estersn som en’amorf remanens. Dette produkt otr.ås i maT-ge tilfælde krystallinsk ved at behandle remanensen med eth^r el-er — O· -a-hezan. Ved at følge fremstillingen af 7-ao“lami''o-3-“-''5--:::e2^-o-*oephem-4-carboxylsyreestre som beskrevet ovenfo·” ooioas de respektive 7-amino-3-halogen-3-eephem-4-carb-

1s DK 153405B

ozylatsyreestre ved at udføre den velkendte N-deacylering af 7-aeylamidc-sidekæden. For eksempel omsættes 7-acylamido-3-halo-gen-cephalosporinesteren med phosphorpentachlorid i methylen- . chlorid i nærværelse af pyridin til dannelse af iminochloridet. Dette omsættes ned et alkoholisk opløsningsmiddel, såsom methanol eller iscoutanol til opnåelse af den tilsvarende iminoether. Denne hydrolysenes til opnåelse af 7-ajaino-3-halogen-3“Cephem-4-carb-cxyIsyre som et hydrogenchloridsalt.

Son tidligere nævnt kan 7-amino-3-halogen-udgangsmaterialet sejleres enten som frie syrer eller som estre deraf. Åcyleringen af 7-anino-3-halogen-kernen udføres som tidligere beskrevet.

En ændret fremstillingsmetode for de omhandlede forbindelser går ud på at omsætte 7-phenoxyacetamido-cephalosporansyre med thiourin-stof til opnåelse af isothioroniumsalt ved substitution af acetoxy-gruppen i 3-stilling i cephalosporansyrens dihydrothiazinring. Iso-thiouroniumsaltet omsættes dernæst med zink og overskud af 90% myresyre i nærværelse af dimethylformamid ved en temperatur på 25° C til opnåelse af 7-phenoxyacetamido-3“exomethylencepham-4-carboxylsyre. Denne esterificeres med p-nitrobenzylbromid i nærværelse af et hydrogenhalogenidbindende middel til opnåelse af 3-ezomethylenc9phan-4-carboxylsyre-p-nitrobenzylester. Denne ozoniseres i methy1er.oklorid ved en temperatur på -70° C,og o z or. olys eelan dingsn behandles med svovldioxid for at dekomponere ozenidet til opnåelse af p-nitrobensyl-7-phenoxyaeetamido-3-hyiroxy-3-cephem-4-carboxylat. 3-hydroxy-esteren omsættes dernæst med phosphortrichlorid i tør dime thyIformami d til opnåelse af --nitrobensyl-7-phenoxyacetamido-3-chlor-3-cephem-4-carboxy-lat. 3-chlor-esteren omsættes dernæst i methylenchlorid med phos-nhcrpentachlorid i nærværelse af pyridin til opnåelse af imino-ohlorid-mellemproduktet in situ, der dernæst omsættes med methanol til otnåelse af den tilsvarende iminoether. Ted tilsætning af vand til reakticnsblandingen dekomponeres iminoetheren, hvorved der opnås p-nitro'oenzyl-7-aminc—3-chlor-3-cephem-4~carboxylat. 7-emino-3-chlor-3-cephsm-4-carcoxylsyreesteren kan dernæst acyle-res som tidligere beskrevet med D-phenylglycylchlorid, hydrochlo-rid eller med et aminobeskyttet D-phenylglycylderivat til opnåelse af 7-iF-phen3/lglyoylamido)-3-chlor-3-cephem-4“Carboxylsyre, p-nitrobensylester eller et 27-beskyttet derivat deraf. Efter

17 DK 153405 B

fjernelse af den u-amino-beskyttende gruppe og C^-carboxylsyre-estergruppen opnås der 7-(D-phenylglycylamido)-3-chlor-3-cephem- 4-carboxylsyre. Det er klart fra den foregående beskrivelse af fremstilling af udgangsmaterialerne, at der kan anvendes en lang række kendte 7-acylanidocephalosporansyrer ved fremstilling af 7-arino-3-haiogen-3-cephem-4-carboxyisyrer.

Særlig foretrukne forbindelser med formel I er sådanne, hvor X betegner chlor, er hydrogen, og R er phenyl og pharmaceutisk acceptable, og ikke-toxiske salte deraf. Por eksempel er 7-(D-a-phenylglycylamido)-3-chlor-3-cephem-4-car-boxylsyre en foretrukken forbindelse.

Dn anden foretrukken gruppe af forbindelser ifølge opfindelsen er de, der er repræsenteret ved formel I, hvor R er hydroxyphenyl, . R er hydrogen, og X er chlor, samt pharmaceutisk acceptable, ikke-toxiske salte deraf. Illustrativt for sådanne forbindelser Λ7» 7-{D--i-4-hydroxyphenylglycylamido)-3-chlor-3“Cephem-4-carboxylsyre r> °o 7-(D-a-3-hydroxyphenylglycylamido)-3-chlor-3-cephem-4-carboxylsyre.

3t særligt fcretrukkert antibiotika ifølge opfindelsen er 7-(D-phenylglycylamido)-3-chlor-3-cephem-4-carboxylsyre.

Pølgende eksempler illustrerer nærmere fremgangsmåden ifølge opfindelsen.

Dksenpel 1 n-nitroGengyl-7-amlno-2-methylenceOham-4-carboxylatz_hydrochlorid

Sil en opløsning af 9c5 mg (2 smol) p-nitrobenzyl-7-phenoxyacet-amido-3-methylenc9pham-4*-carboxylat i 10 ml methylenchlorid sattes 175 mg tør pyridir. og 46-0 mg phosphorpentachlorid, og blandingen cnrøroes ved stuetemperatur i 6 timer. 1 ml isobutanol sattes til blandingen, der henstod ved 0° -C natten over. Reak-ti r.nsproduktet, p-nitrobensyl-7-amino-3-m-ethylencepham-4-carb-oxylat,hydrochlorid, der dannedes som et krystallinsk bundfald,

18 DK 153405 B

filtreredes til opnåelse af 430 mg (58 fo udbytte).

Gr ur as i o f-ana.lv s e for C^H., ^N-Or-SCl: iu io a p teeretisk: C 46,69 - H 4,18 - N 10,89.

f'or.iet: C 46,40 - H 4,20 - N 10,62.

Ϊ.Ε. (ITu.jol l-Iull): .

Carbonylabsorption ved 5,65 (β-lactam) og 5,75 (ester) u.

GdMSO dg):

Signaler ved 6,34 (2d, 2H, C2-H2), 4,98 (d, 1H, Cg-E) 4,7.- 4,4 (m, 6Ξ, C^-H, ester. CH2, 0^-0¾ og Ογ-H) og 2,4 -1,6 (η, 4H, aromatisk E) tau.

Eksenpel_2 2~rirro'b=>^^vl_7-amina~3-Eydro3y-3“cepliem-4-,carbo^lati2_hydrochlorid -pløsrinr af 4 2 o-nitrobenzyl-7-amino-3-methylencephan-4- hydrochlorid i 620 elL methanol afkøledes i et tøris-£c-fcre-haa, og ozon cooledes igennem· den kolde, opløsning i 20 '^'-dttsr Eeakti opblandingen befriedes for den tiloversblevne 02~r Vsd ajj iea3 nitrogen igennem opløsningen, og 10 g natrium-

Ms-T-s. , . ^ ~χτ filsartes.

”sfi-t-r. ,n-,i·«o-førtes en time ved 0° C, hvorefter bian- '""‘-'-ICO -- _ cv, γ)0ίΤ0^^-7. valiumioaid-stivelsesprøve.

’ o*v "— —"o—' — —v«, i-s-.n•ipr-.-ris-gs i vakuum til opnåelse af et reaktions- ^ gc.:---------- scn et amorft gult fast stof. Remanensen omkrystalli-Ssrsd~s i acetone til opnåelse af 3,4 g p-nitrobenzyl-7-anino-3-ΓΈ-^„i.øarbozydst,hydrochlorid som et krystallinsk '~r-e3olvaf.

19 DK 153405B

I.R. (Nujol Hull):

Carbonyl-alsorptionslånd ved 5,60 (3-lactam) og 6.04 (e st er carlony Hydrogen "bundet til 3-hydroxy) ιημ.

N.M.Pl. (i:i30 d6):

Signaler ved 7,92 (s, 3H, 1/2 mol acetone), 6,22 (2d, 2E, 5.07 (a, 1H, OgE), 4.8 - 4,5 (e, 3H, ester CH2 og ΟγΗ), 2.4 -1,6 (m, 4S, aromatisk H) tau.

EksemOel_3 n-reth2^'cenz7l-7-oker2^£cetamido-3-bydroxy-3-ceohem-4-car"boxylat

En oplosning af 2,5 g p-rethoxybenzyl-7-plenoxyacetamido-3-metrylsroøoram^-earcczylat i 350 ml ethylaceiat afkøledes i et acetcne-tørisoad. Ozon "bolledes igennem den kolde opløsning i 8 minutter, og dernæst ledtes osygen igennem den ozoniserede reakticnsclanding for at fjerne overskud' af ozon. Mellemproduktet dekomponerec.es ved at sætte 25 g natriumli sulfit til reaktions "blandingen under omrøring ved en temperatur på 0° C. Reaktionscolzsningen dekanteredes og vaskedes successivt med vand, 5 fo hydrogenchloridsyre og en mættet opløsning af natriumklorid. Yaskellandingen tørredes og afdampedes til opnåelse af et reaktion spr o duk t , nemlig p-metlionylenzyl-7-plienoxyacetamido-3-liydroxy-3-ceOhen-d-car"boxylat son et amorft fast stof.

N.M.R. (CDC13):

Signaler ved 6,73 (s, 2H, C2-H2), 6,23 (s, 3H, p-methoxy), 5.53 (d, IH, C6H), 5,03 (d, IH, CgH), 4,87 (s, 2H, ester CH2), 4,47 (q, IH, C^H), 3,40 - 2,50 (m, 9H, aromatisk H), 2,33 (d, IH, amid NH) og 1.53 (bred s, IH, 3 OH) tau.

20 DK 153405 B

Eksempel 4 P-hitrobenzyl-7-[ 2-(2-thienyl)acetamido]-3-hydroxy-3-eephem-4~ —_____ -il en opløsning af 1,55 g p-nitrobenzyl-7-am.ino-3-hydroxy--3" ''Spnen-4-carboxylat,hydrochlorid i 30 ml acetone indeholdende 3ol ng (0,5 ml, 3,6 mol) triethylamin sattes 962 mg urinstof. Under omrøring ved stuetemperatur tildryppedes en opløsning af 730 mg (4,4 mmol) 2-thiophenacetylchlorid i 20 ml acetone.

Efter 2,5 timer filtreredes reaktionsblandingen og ind-darpedes. Remanensen opløstes i ethylacetat, og opløsningen vaskedes successivt med vand, en 5 $ opløsning af natriumbiearbo-nat, 5 # hydrogenchloridsyre og en mættet opløsning af natrium-chlorid. Den vaskede opløsning tørredes og koncentreredes dernæst ved inadampning i vakuum til opnåelse af 1,2 g af reaktionsproduktet som et krystallinsk fast stof. Produktet omkrystalliseredes fra ethylacetat til opnåelse af rent p-nitrobenzyl-7-[2-(2-thieny 1) ac etamido] -3-hydroxy-3-cephen-4 - carb o:xyl&t, der har følgende spektrale egenskaber: I.P.. (::u3*ol Mull) s

Ab som ti ons toppe ved 5.0 (amid ^d.) , 5,68 (3-lactam-carbonyl) og 6.1 (amid og esterhydrogen bundet til 3 OH) mu.

M.M.H. (CI5C13/DM30 dg):

Signaler ved 6,54 (2d, 2E, C^), 6,16 (s, 23, sidekæde-CH2), 4,90 (d, 13, CgH), Æ,60 (d, 23, ester CH2), 4,43 (o, 13, C7H), 3.1 -1,6 (π, 7E, aromatisk H) og 1,30 (d, 15, amid NH) tau.

DK 153405B

EkssmO6l_5 2n a·oiøsning af 10 mmol p-nitrobenzyl-7-amino-3-bydroxy-3-ceph.em-/-_c*rbc-myl2.t, hydrochlorid i en blanding af 325 ml acetone og 1?5 ml vand afkøledes i et is-vandbad. Under omrøring ledtes ori s-trøm af ketengas igennem opløsningen i 30 minutter. Heref-tuddannedes reaktionsblandingen for at fjerne' acetone, og den vandige remanens opslasmmedes i ethylacetat. Ethylacetatfasen fraserareredes og vaskedes med 5 $> bydrogenciiloridsyre og en zsttet opløsning af natriumchlorid. len vaskede ekstrakt tørredes og inddampedes i vakuum til opnåelse af et reaktions-nrcdukt sen et krystallinsk fast stof. Dette behandledes med dievnylether og vakuumtørredes til opnåelse af 3,55 g p-nitro-cer.ryl-7-aø5^ariido-3-h-ydro2y-3-ceph.em-4“Carcoxylat, der smeltede ved 146 - 152° C under dekomponering.

G-rur.dsoof-enalyse for CLÆ^T-O^S: teoretisk: C 48,85 - H 3,84 - N 10,68.

fundet: 0 48,S7 - H 3,96 - N 10,42.

1.1. (CHC1,): s

Absorptionsbånd ved 2>9 og 3,0 (amid MH og OH), 5»δ3 (S-lactam-carbonyl)og 5,95 (bredt amid og esiercarbonylhydrogen bundet ni 3 OH) mu.

-r -3 fr.~m ) .

Signaler ved 7,90 (s, 32, 7-acetaaido-CHj), β’55 (s, 2H, C2E2), 4,92 (d, 1H, CgH), 4?63 (jtl, 2H, ester CHr,), 4,30 (q, 1H, C7E), 2,81 (d, IH, amid UH), 2’5 ~ 1,8 (m, IH, aromatisk H) og 2>8 (s, 1Ξ, 0~ CH) tau.

DK 153405 B

22

Elektrometrisk titrering (65 56 vandig IMF) pKa 5,9.

Sksemoel 6 — — — — giphenyl-7-r2-(2-tnignjl)acet3Æido2-3-chlor-5-ceghem-4-car~bogylat (a) Til en opløsning af 54 g (100 mmol) 7-[2-(2-tMenyl)acet-anidoj-3-methylencepk.ani-4-carbo:xylsyre i 500 ml methylenchlorid sattes 21,4 g (110 mmol) diphenyldiazometkan, og den fremkomne "blanding omrørtes i 2 timer ved stuetemperatur. Opløsningsmidlet inddampedes under reduceret tryk, og remanensen opløstes i ethyl-acetat. Ef hylacetatopløsningen vaskedes med en 5 i° opløsning af natriurbicarbonat, dernæst ned vand og tørredes over magnesium-sulfat. Den tørrede opløsning koncentreredes til et lille volumen. Yed henstand udfældedes 40. g diphenylmstliyl-7-[2-(2-tliienyl)-acetamido]—5^istlLy-encepiiEmi-4-£;:arbozylat son et krystallinsk fast stof, der smeltens ved T52 - '133° ________________ I .R. (chlbroform} 2

Ac s o rptionstoppe -ved 2,9 (sunLi 2J-H).

5,65j 5>75 og 5,93 (3-lactam, ester og amidcarbonyl) og 6,62 (amid II) ny..

N.M.R. (CDCl^):

Signaler ved 6,72 (Amp, 2-i, , 6,21 (s, 2H, ct-CH2), 4,8ό "* (n, 4H, C4-H, Cg—H og C3-CH2), 4,39 (ot 1H, Ογ.-H), 3,4 - 2,65 (η, 15H, Ογ-NH, ester CH og aromatisk H) tau.

Co) Til en ooløsnirg af 8,1 g (16 mmol) af ovennævnte ester i 80 ml methylenchlorid sattes i,57 g (1,6 ml, 19,6 mmol) tør pyridin og 3,8 g (18,1 mmol) phosphorpentachlorid. Reaktionsblandingen - omrørtes i 2 timer ven smustemperatur og armølsdes derefter i et . is-Tåndbad. Den kolde blanding behandledes ned 8 ml isobutanol under czæzrir-». omrøring fortsattes Ή timer, hvorunder 5 g ; --t „r-ί. hvdrochlorid

DK 153405B

dannedes som et krystallinsk bundfald. Produktet filtreredes fra og Taskedes med methylenchlorid og vakuumtørredes.

G-rundstof-analyse (/*) for C^H^N^SCl: teoretisk: C 60,50 - E 5,08 - N 6,72 - Cl 8,50.

fundet: C 60,70 - H 5,02 - N 6,71 - Cl 8,80.

N.K.R. (32MSO d6):

Signaler ved 6,45 (A3g, 2H, C2-H2), 5.00 (d, 13, Og-H), 4,68 (d, IH, Cy-H), 4.60 (s, 23, 3-CH2), 4,44 (s, IH, C^-H), 3,10 (s, IH, ester CE) og 2.61 (s, 103, aromatisk H) tau.

(c) y„£22i^o-3-e:comeT2'-ylencep]iamester,hydrochloridsaltet, i alt 2,1 o- (5 mol) opløstes i 200 ml methanol, og opløsningen afkøle-d=3 i at acetone-tørisbad. Ozon bobledes igennem den kolde op--j_øsr,1r£r j_ η minutter til dannelse af ozonidet. Dette dekompo-rsr»=des ved at lede en strøm af svovldioxidgas igennem reaktions-? 2 minutter. Herefter inddamoedes reaktionsblandin- uiSP.vU-j.5s-- — „c-^ensen behandledes med diethylether til opnåelse af gci., 03 - -—- - λ c „ i^.v.^--irriethvl-7-aminc-3-hydrozy-3-cephem-4-carboxylat, hydrochlcrid som et krystallinsk fast stof.

N.I'I.Pc. (CDClj): gi r-r oler ved 6,4 (ABq, 23, 02-H2), 5.0 - 4,5 (a, 23, Cg-H og σ?-Η), 3,2 - 2,4 (a, 11H, ester CH og aromatisk H) tau.

I.H. (chloroform):

Carbonylabsorptionstoppe ved 5,57 og 5»70 'x.henholdsvis β-lactam og estercarhonyl) mu.

5.7, (rH ? tuffer): \ 3=2 275 πμ, e= 7550.

24

DK 153405B

Elextremetrisk titrering (60 tf aa. DME): titrerbare grupper ved 4,5 og 6,5.

(d) iil en opløsning at 840 mg diphenylmethyl-7“amino-3-hydroxy-3-cephem-4-carboxylat i 10 ml vand og 10 ml acetone sattes 1 g natriumbisulfit. Blandingen omrørtes, og 800 mg thiophen-2-acetylchlorid i 10 ml acetone tilsattes dråbevis. Blandingen omrørtes i 4,5 timer ved stuetemperatur og inddampedes dernæst under reduceret tryk. Remanensen opløstes i en blanding af ethyl-acetat og en vandig 5 ί» opløsning af natriunbicarbonat. Ethyl-acetatfasen frasepareredes, vaskedes med vand og tørredes. Den tørrede opløsning inddampeaes, og remanensen behandledes med ether til opnåelse af 500 mg diphenylmethyl-7-[2-(2-thienyl)acetamido]-3-hydrozy-3--cephem-4“Carbosylat.

N.I-I.R. (CDClJ:

S

Signaler ved 6,79 (s. 2H, Cp-^), 6,16 (s, 2H, a-C^), 5,0 (a, IH. C.-H), 4,32 (c, 1H, Cj-E), 3,05 - 2,16 (m, 15H, Ογ-NH, ester CH og aromatisk H) tau.

I.E. (chloroform):

Absorpticnstoppe ved 2,9 (a^ild ITH), 5,6, 5,73 og 5,95 (henholdsvis 3-lactam, ester og ami d c arbony1er) og 6,65 (amid TT) πμ.

(e) Sil en opløsning af 4,2 g diphenylmethyl-7-[2-(2-thienyl)-ac9tamido]-3-hydrozy-3-ceph9m-4“Carboxylat i 44 ml tør dinethyl-xormamid sattes Sop mg phosphortrichlorid. Blandingen omrørtes f,5 rimer ved stuetemperatur og udhældtes i en blanding af ethyl-acetar og 5 ^ vandig hydrogenchloridsyre. Ethylacetatfasen inddampedes, vaskenes med 5 5¾ hydrogenchloridsyre, vand og tørredes aemsest. .Den tørreae opløsning koncentrerede s i vakuum, og produktet krystalliserede. 3-chloresteren filtreredes fra, va-sredes med kold sthyiacetar cg tørredes til opnåelse af 2,2 g.

25

DK 153405B

Grundstof-analyse {f>) for C26H21N2°4S2C1: teoretisk: C 59,48 - H 4,03 - N 5,34 - Cl 6,75.

fundet: C 59,77 - H 4,25 - N 5,40 - Cl 6,9Ί.

(CXSGl^):

Signaler Ted 6,49 (A3q, 2H, C2-H2), 6,22 (s, 2H, a-CH2), 5.08 (d, 1H, Cg—H), 4,19 (q.,· 1H, CrH),' 3,13 - 2,5 (m, 15H, Ογ-ΝΗ, ester CH og aromatisk H) tau.

f-H. (CSC13): Åbsorptionstoppe Ted 2.9 (amid NE), 5,55, 5,72 og 5,90 (β-lactam, ester og amidcarbonyler) og 6,60 (amid II) nu.

u*v. (aioxan); >„ mas 275 nu, £=8700.

Eksempel 7 P-nitroDenzyl-7-12-(2-thienyl)acetamido] -3-chlor-3-cephem-4-carb-__£52lat (via thionylchlorid) __ _____ _______ ——— sn opløsning af 1,9 g (4 mmol) p-nitrobenzyl-7-[2-(2-thienyl)-acekanido]-3-hydrcsy-3-cephem-4-carbosylat i 10 ml dimethylform-(tørret OTer en molekylesigte) sattes 950 mg (0,58 ml, 8 £-^1) frisk destilleret thionylchlorid. Blandingen omrørtes Ted stuetemperatur i 6,5 timer og udhældtes i 100 ml ethylacetat. Blandingen ekstraherede s tre gange med 30 ml portioner 5 f> hydro-gsnehloridsyre og med en mættet opløsning af natriumchlorid. Den Tasked® ethylacetatopløsning filtreredes fra og inddampedes til tørhed i Takuum. Remanensen behandledes med ether til opnåelse af 1,2 g p-nitrobenzy1-7-12-(2-thienyl)acetamido]-3-ehlor-3-cephem- 4-oarhosylat som et brunt krystallinsk fast stof med et smelte-punkt på 164 - 166° C.

26

DK 15 3 4 O 5 B

Grundstof-analyse (^) for Ο^Η^Ν^Ο^ΟΙ: teoretisk: 0 48,63 - Η-3,27 - N 8,51 - 017,1a/ fundet: C 48,47 - Η 3,29 - Ν 8,78 - Cl 6,96.

j(chloroform):

Absorptionsbånd ved 2,9 (amid γϊΗ) , 5,59 (β-lactamcarbonyl), 5,75 (estercarbonyl) og 5,92 ημ (amidcarbonyl).

tj.v. absorptionsspektrum (acetonitril) viste maxima red λ max 235 na, e 12.100 og λ max 268 nu, 6=15.800.

vassespektret af produktet viste en .molekylærion på 493 m^e N.Z’i.B.· (CDC1,.) viste

S

signaler ved 6,39 (A3q, 2H, Cg-Hg), 6,17 (s, 2H, a-CH2), 4,99 (d, 1E, Cg-H), 4,64 (s, 2H, ester CHg), 4,19 (o, 1H, C7-H), 3,45 (d, IH, C7-NH), 3,1 - 1,67 (m, 7H, aromatisk E) tau.

2ksenOel_8 Ρ“ηχτ^°psn?7l-7~L2-(2-thisnyl)acetamido]-3-cblor-3-cep]iem-4-carb-__£27==5__iri§«2^£S£h2rtric’nlorid)_ xil en a^rs^et opløsning af 439 mg (0,93 mmol) p-nitrobenzyl-7-_2-(2-tbienyl)acetamido]-3-bydroxy-3-ceph.em-4-carboxylat i 4,4 ni dine~h.yIf omanid sattes langsomt 85 mg (0,05 ml, 0,63 mmol) pnospnornnolilorid. Seakticnsblandingen lienstod 4 timer ved stuetemperatur, og derefter egarbejdedes reaktionsproduktet ved at følge neto c. en oeskrevet i eksempel 6 til opnåelse af 374 mg p-nitro-

27 DK 153405 B

benzyl-7-i_ 2-(2-tMenyl)acelamido]-3‘-chlor-3-eepheizi-4-earbo:xylat. ITdR-spektret af produktet stemte overens med det forventede produkt og· med forbindelsen i eksempel 7- .Eksempel 9 7-pl.enozyacetamido-3-c>ilor-3-cephem-4-car,boxylsyrre

Ted at følge.chloreringsmetoden i eksempel 6 fremstilledes p-nitrobenzyl~7-phen©:8yaceta2mLdo-3-chlQr-3-'Cephein.-4-carbo:xylat med pho sphort r ichlorliL p-nitrobenzylestergruppen fjernedes ved hydrogenering aed hydrogen og 5 $ palladium-p å- car bon til opnåelse af 3-ehloreepbaløsporsn^freantiMotlkst.

Eksempel TO

p-nitrobenzyl-7-[ 2-( 2-thienyl)acetamido]-3-chlor-3-cephem-4-carb-—_2rvlat__(yia^ oxalylchlorld)_________________________________ ril en opløsning af 43S cg (0,93 mmol) p-nitrobenzyl-7-[2-(2-ihienyl)acetam-ido]^3--hydrory-3~cepkem-4-carboxylat i 4,4 ml di-· rstnylfo rniamid afkølet-i et isbad sattes dråbevis T18 mg (0,07 :ϊ^?. £)-35 ©maylnh I o r i d, Reaktionsblandingen benstod i 4 timer 'Ved StusteMpeamtur udhældtes i en blanding 'af vandig 5 n bydrogenbblie-riasyre mg sthylacetat. Een organisbe fase separeredes fra og vaskedes rtems=æt sekvventielt medS $ hydrogen-chloridsyre, vand og en mættet ooplssniing af natriunichlorid.

Een vaskede fase tørredes og inddampedes til tørbed, hvorved der opnåedes p-nibrobenzyl-7-[2-(2-lhxenyl)aeetamido]-3-chlor-3-cepbem-4-earDOzylat som et aisorft fast stof. Produktet blev op-. nået krystallinsk ved behandling med ether. Udbytte 360 mg.

Eet infrarøde spektrum og UkER-spektret af det krystallinske produkt stemte med spektret for et autentisk materiale.

nk3empel_12 7—2-(2-tbisnyl)acetamldo]-3-brom-3-ceObem-4-carbogylgyre '-il en opløsning af 13 g (40 mmol) p-nitrcbenzyl-7-[2-(2-thienyl)-

28 DK 153405B

fornanid sattes 15 g (56 nmol) phosphortribromid, og reaktions-blandingen omrørtes ved stuetemperatur natten over. Reaktions-blandingen udhsldtes i en blanding af ethylacetat og vand, og den crganiske fase frasepareredes og vaskedes derefter gentagne gangs med vand og tørredes over magnesiumsulfat. Den tørrede organiske fase inddampeaes i vakuum til tørhed. Det rå reaktionspro-£u.st, der vejede ca. 9 g, oprensedes ved kromatografi over 500 g silica-gel under anvendelse af ethylacetat-hexan (55:45 v:v) slueringsmiddel. Bluatst inddampedes til tørhed under redu-c-re-u tryk, og produktet p-nitrobenzyl-7-[2-(2-thienyl)acetainido]-"~*orom-5-cephem-4-carcoxylat opnåedes krystallinsk ved at behand- ' -2 den tørre remanens med diethylether.

ϋ»7. (ethanol): λ max. 270 ru (£=13.500) og λ max. 243 nu (£=12.700).

-iondstof-analyse beregnet fer GonE,,B-r2UC.S9: 20 lo 3 o ά 'ssretisk: C 44,61 - h 3.00 - N 7,81 - Br 14,84. ~ *—~~ -•kidet: 0 44,78 - H 5,03 - N 7,65 - Br 14,91.

r,-'~--st)sktrum (DHSO d-O: ~

O

Signaler ved 6,21 (2Ξ, a-C52)f 5,98 (432. 2E. C?-H2), 4,72 (d, 1HC6-h), 4,51 (s, 23, sster-CH^), 4,-0 v.G, In, Cj—ή), 3,04 - 1,74 (η, 7E; aromatisk H) og 0,66 (d, 1Ξ, Cy-CH) tau.

'-'•'^nnsvTxte 3-bromester dsesrerificeredes på følgende måde:

r~- T

D-o mg (1,0 mmol) af esteren hydrogeneredes ved stuetemperatur - ithancl i nærværelse af træreduceret 5 procent palladium-på-car-C:ri katalysator. Katalysatoren filtreredes fra, og filtratet iampsdes under reduceret tryk til tørhed. Remanensen behand-med diethylether sil oonfielse af ISO mg (44 f) af det kry-s~-hiinske produkt, 7-12-(2-thienyl)aoetamidoJ-3-bron-3-cephea-4-c=rbo2yisyre.

29 DK 153405B

Elektrometrisk titrering (66 $ vandig dimethylformamid) viste en pKa på 4,4 og en tilsyneladende molekylvægt på 393.

Seregnet molekylvægt = 403.

Grundstof-analyse for 1/2 diethylebherat: teoretisk: C 40,91 ~ H 3- N 6,36 - Br 18,15.

fundet: C 41,29 - -H 3,2© - N 6,29 - Br 18,50.

;IEE (CBClj) viste signaler ved 8.8 (i, dietliyletlier—GHj)s 6,68 - 5,86 (m, C2~l^i, ø-GJSg 'DS dlethylether-CØ^), 4,90 (d, 1H, C6-H), 3,0 - 2,63 (m, 3H, aromatisk-Ή) og 1.9 (d, 1Ξ, amid NE) tau.

Eksempel 12

(a,·) p-nitrohenzyl-“7~.. 2-( 2-thienyl )arstamidc]-3-iiie thylsulfonyl-oxy~;3-~£s;phem-4 - o ar o oxy la t _ _ ___J

fil en opløsning nf -'4,75 g (10 mmol) p-nitrobenzyl~7-[ 2-( 2-thienyl)-£cefamidoJ-3“-kyd;rn:cy-3-oephem-4-car'boxylat i 50 ml tør dimethyl-aoetamid 's&tzea Ϊ2 ml propylsnoxid. Til opløsningen sattes under omrøring an ækvivalent rethansulfonylchlorid,og omrøringen fortsattes i 3 timer, Reaktionsblandingen opløstes i etkylacetat, og opløsningen vaskedes med en mættet opløsning af natrlumchlorid.

Ben vaskede oorganiske fase inddampedes i vakuum til “tørhed, hvorved der opnåedes en reaktionsproduktblanding som-en...remanens.

Denne oprensedes ved præparativ tyndtlagskromatografi på silica-gel under anvendelse af 65 ethylacetat/hexan som eluerings-nidael.

Beo oprenserne produkt gav følgende procentvise sammensætning ved mikroanalyse:

Beregnet for Ορ^Η^Ι^Ο^-,: teoretisk; 0 45,56 - H 3,46 - N 7,59 - S 17,38.

30 DK 153405B

NMR-spektret og det infrarøde absorptionsspektrum stemte med strukturen af det dannede produkt.

(b) p-nitrobenzyl-7-ΐ 2~( 2-thienyl)acetamido] -3-fluor-3-*cep:!iem- 4-carboxvlat_____________*________________________________

Til 93 mg dic7clohez7i“‘I3-cro'wn.~6-etlier i 15 ml acetonitril tørret over molekylesigi3 sattes 25 mg kaliumfluorid, der var tørret i vakuum ved 90° C. Blandingen omrørtes i 10 minutter, og 138 mg p-nitrobenzyl-7-[2-(2-thi enyl)ac etamido]-3-me thylsulfonyloxy-3-cephem-4-carcosylat i 4 ml acetonitril tilsattes. Blandingen omrørtes i 1 time. Blandingen blev gjort sur ved tilsætning af fortyndet (5 fo) hydrogenchlcridsyre, og den fremkomne sure blanding ekstraheredes med ethyiaeetat. Det rene produkt opnåedes fra ethylacetatekstrakten ved præparativ tyndtlagskromatografi nå silica-sel, idet- ethyiaeetat:benzen (1:1) anvendtes. 10 mg u-ni trobe*evl-7-"2 - (2-thi any1)ac etami do]-3-fluor-3-c ephem-4-carboxylat opnåedes.

I.R.:

Absorpticnstoppe ved 1792, 1710 og 1685 cm .

NMR (CBC1-J viste

S

signaler ved 6,15 (s, 2H, 3-0H2), 4,97 (d, IH, J = 4H2, Cg-H), 4,20 (c, 1-ϋ, 0γ—Η), 3,52 (d, 1Ε, C7-NH), 2,32 - 1,7 (m, 2H, C2-H2) tau. piuor mm — (d, J = 10 Hz).

M. S.: Beregnet — 477.0465

Fundet — 477.0455.

Eksesoel_1_ 5 u-nitrobenzvl-7-amino-3-cblor-3-cephem-4-carboxylatihydroch^orid

Til en cnlc=-ius af 5C0- mg p-nitrobenz.yl-7-~2-(2-thienyl)acet- amidol-5-chicr-3-ceuiiem-4-carboxylat i 6 ml methylenchlorid sattes 95 o- tør ryridin og 237 mg phosphorpentaehlorid. Reak-

31 DK 153405 B

tionsblandingen omrørtes ^ed stuetemperatur i 1,5 timer og afkøledes derefter i et is-vandbad til ca. 5° C, og der tilsattes 0. 6 ml isobutylalkohol. Yed fortsat køling og omrøring krystalliseredes reaktionsproduktet, p-nitrobenzyl-7-amino-3-chlor-3-cepben-4-carboxylatjhydrochlorid, ud fra reaktionsblandingen, produktet filtreredes, vaskedes med kold methylenchlorid og tørredes til opnåelse af 200 mg af det krystallinske produkt, der smeltede under dekomponering ved ca. 168° C.

. c-rundstof-sralyse for C^H^CIN^O^S.HCI: teoretisk: C 41,39 - H 3,20 - W 10,34 - Cl 17,45.

fundet: 041,14 - H 3,34 - N 10,44 - Cl 17,29.

1. K. (.Tuj'ol Hull) : viste absorptionsbånd ved 5,55 (3-lactamcarbonyl) og 5,78 (estercarbonyl) ιημ.

U.7. (pH 7 buffer): viste absorptionsmaximum X max 268 mp (ε=13.800).

N.H.E. (IS'ISO

Signaler ved 5,97 (s, 23,-C2-H2), 4,8 - 4,5 (m, 4H, Cg-H, Ογ-Η og ester-CH2) og 2,35 - 1,6 (1, 4H, aromatisk H) tau.

Sksempel_24 7-£nino-3-ctt2^^S52^?z4=carbox£lsyre

Til en opløses af 750 mg (1,85 mmol) p-nitrobenzyl-7-amino-3- chl0—3-0-^-4-ο£Γ00^-1β1,ηΥάΓ°οΗ1οΓίά i 20 ml tetrahydrofuran oc- l0 ni metianol sattes en suspension af 750 mg præreduceret 5 =5 ν»1 l^divn:''?®'"03'2700'" katalysator i 20 ml ethanol, og suspen--r>cgenerea33 under er tryk på 50 paf ved stuetemperatur Hats-;-sa-oren filtreredes fra og vaskedes ned og vana. filtrater og katalysatorvaskevandet

32 DK 153405 B

kombineredes og inddampedes til tørlied. Remanensen opløstes i en vard-sthylacetatblanding, og pH indstilledes til pH 3. Det uopløselige produkt filtreredes fra og "behandledes med acetone. Produktet tørredes til opnåelse af 115 mg 7-amino-3-chlor-3-cepheu-4-carboxylsyre.

I.R. (I'lull):

Absorptionstoppe ved 5,61 (β-lactamcarbonyl) og 6,2 (carboxylsyre).

N.I'I.R. (DpO-iiaHCO^):

Signaler ved 6,25 (A3a, 2H, C2-H2), 4,88 (d, IH, Cg-H) og 4,54 (d, IH, C?-H) tau.

U.Y. (pH 7 tuffer):

Absorptionsnaximum ved λ max 265 nu, £=7550.

Eksempel 15 jji rv, av-7lnethyl-7-amino-5~ghlor~3~cephem-4~carhoxylat opløsning af 525 mg diphenylmethyl-7-[2-(2-thienyl)acet~ 5-v]„3-ohlor-3-cephezi-4-cartoxylat i 20 ml methylenchlorid ______η 1 ml tør pyridin og 237 mg phosphorpentachlorid. Re~ 5£ u ·- - - w ? — solandingen omrørte s i 2 timer ved stuetemperatur og af kø- . _ -__-^v^gst i et is-vandhad. Den kolde blanding tilsattes 0,6 s-outanol,og efter 30 minutter inddampedes reaktionsblandingen.

p^pv-^sen opløstes i ethylacetat, og opløsningen vaskedes med v ^---«i’unbicarbonai og med vand og tørredes dernæst. Den tør-5 P ----- i*s^ing inddampenes txl tørhed, og remanensen behandledes „_>er til opnåelse af 190 mg 3-chlor-kemeesteren, diphenyl-.. „i 7_i3-!ino-3-chlor-3-oephem-4-carboxylat.

7*1 — "(J V -·· ** * * _ - 'v-jf l) :

Absorpticnstoppe ved 5,7 og 5,9 (=-lactam og estercarbonyl) mu.

33 DK 153405 B

Zi.M.R. (CDClj):

Signaler ved 6,35 (ABq, 2H, C2-H2), 4.78 (2d, 2H, Cg-H og 0γ-Η), 3,05 (s, 1H, ester-CH) og 2,65 (s, 10H, aromatisk H).

gksempel 16

Ted at følge 7-acylsidekædespaltningsreaktionen beskrevet i eksempel 13 fremstilledes diphenylmethyl-7-amino-3-broiii-3-cepheiii- 4-carboxylat ud fra diplienylii9tliyl-7-ph.enoxyacetaiiiido-3-Torom-3-cephen’-4-carboxylat.

Rksempel 1_7 7-(f-a-rhen2lglycyl^ido)~3-ohlorr3-ce2kem-4~carPosyls2re 2il en suspension af 2S0 mg (1,2 mmol) 7-amino-3-ehlor-3-cephem-. jL-Cs>-”'bo3ylsyre i 14 ml acetonitr.il sattes under omrøring ved stuetemperatur 0,5 ml N,0-ci3-(trimethylsilyl>acetamid til dannelse af det opløselige disilylmethylderivat. Opløsningen afkøledes til 0° C, og der tilsattes langsomt en opløsning af def c lande de anhydrid dannet ved .reaktion mellem 408 mg (1,5 4-π-ί ) metliyl-3-u-car'boxy'bsnzylaminocrotonat, natriumsalt med 161 ^ τητηηΐ) methylchlorf ornat i nærværelse af 2 dråber dimethyl- -ζρ·τzylamin i 7 ml acetonitxH· Blandingen omrørtes i et is'bad * g ^imer, og der tilsattes 1 ml methanol til blandingen, der ’ Lmsst. filtreredes for. at fjerne uopløselige urenheder. 2 ml Tr.* sattes til -filtratet, og pH indstilledes øjeblikkeligt til q- -j 5 for at udvirke fjernelse af enaminblokken og dernæst til 4<5 med triethylamin. Sfier omrøring i yderligere 1 time ' . -? sbadtemueratur udfældede reaktionsproduktet, 7-(B-a-phenyl-amido )-3-ehlor-3-ceplies-4-carboxylsyre (amfoterion') fra . —fonshiåndingen «son et krystallinsk fast stof. Produktet fil- Y»oak -J-'" —— ~o ^ " ^,P^es fra vaskedes med acetonitril og -tørredes 1 vakuum til I^åelse af 200 mg.

ty'

DK 153405B

34

Produktet havde følgende fysiske egenskaber:

Grundstof-analyse for 1/2 H^O: teoretisk: G 47,80 - H 4,01 - N 11,15 - Cl 9,40.

fundet: C 47,55 - H 4,12 - N 10,98 - Cl 9,21.

I.R.-spektrum (Mull):

Absorptionstoppe ved 2,9 (amidNH), 5,70 (β-lactancarbony1), 5,95 (asidcarbonyl) og 6,28 (carbosylat) mp.

IR'IR-spektrum (I^O/DCI):

Signaler ved 6,5 - 6,7 (ABq, 2H, C2-H23.

4,34 (a, 1Ξ, Cg-H), 4,26 (d, 1Ξ, C^-H) og i 2,44 (s, 5H, aromatisk H) tau.

u.T.-spektrum (pH 7 buffer): . \ max 265 nu (ε=6.800).

EksemOel_18 ‘711 er. opløsning af 500 mg (1,85 mmol) methyl-3-oc-carboxybenzyl-amino cr o tonat, natriumsalt (dannet med phenylglycin og methyl-acetoacetat) i 20 ml acetonitril sattes 4 dråber dimethylbenzyl-amin, og opløsningen afkøledes i et tøris-carbontetrachlorid-bad under omrøring. Sil den kolde opløsning sattes langsomt 184 mg (1,95 mmol) methylchlorformat til dannelse af det blandede anhydrid. Efter 20 minutter tilsattes en på forhånd afkølet opløsning af 75.0 mg (1,35 mmol) p-nitrobenzyl-7-amino~3-chlor-3~ oephem-4-carboxylat og 188 mg (1,85 mmol) triethylamin i 40 ml aestene. rilsætningen forløb over 3 minutter, hvorefter reak-tionsblan ringen omrørtes i kulden i 30 minutter og dernæst ved stuetemperatur i 2 timer. Reaktionsblandingen filtreredes for at fieme uopløselige urenheder og inddampedes i vakuum. Reaktionsprodukter opløstes i en blanding af ethylacetat-vand, og pH af opløsningen indstilledes til pH 7. Den organiske fase separe-

35 DK 153405 B

redes fra og vaskedes med vand. Efter tørring over magnesium-sulfat koncentreredes den organiske fase under vakuum til et lille volumen. Efter tilsætning af n-hexan til koncentratet udfældede 620 mg p-nitrobenzyl-7-[N-(1-carboiiiet]io:xy-2-propenyl)-B-';-phenylglycylamido]“5-chlor-5-cepheiii-4--car'bo;xylat fra reaktionsolandingen.

Produktet gav følgende grundstof-analyse og NMR-spektrum:

Grund s t o f-analy s e for ^27^26^4^8^^ teoretisk: C 53,87 - H 4,35 - N 9,31.

fundet: C 54,05 - H 4,13 -N 9,36.

mm (bmso d,): o

Signaler ved 8,20 (s, 3H, enamin CH^), 6,60 (A3q,.2Ξ, C2-H2), 6,45 (s, 3H, ester-CH^), 5,48 (s, 1H, enamin-vinyl-H), 4,90 - 4,1 (m, 5H, Cg-H, Cy-H, α-CH og ester-CH^) og 5,10 - 1,5 (m, 9H, aromatisk H) tau.

piC mg (0,9 nmol) af produktet opløstes i 40 ml acetonitril indeholdende 20 ml vand, og opløsningen afkøledes først i is-vand-øs- cs dernæst gjort sur til pH 1,5, Hvorefter pH indstilledes fil 2,5. Blandingen inddampedes, og remanensen opløstes i 40 fil tetrahydrofuran og 80 ml methanol.

fil opløsningen sattes 540 mg 5 $ palladiun-på-carbon katalysator (prsreduoeret i 20 ml ethanol i 45 minutter under 50 psi hydrogen-fryk ved stuetemperatur), og opløsningen hydrogeneredes ved stuetemperatur i 2,5 timer under et hydrogentryk på 50 psi. Katalysatoren filtreredes fra vaskedes på filteret med methanol, fgirahydrofuran og vand.' filtratet og vaskevandet kombineredes 0g inddanpedes til tørhed i vakuum. Reaktionsproduktet opløstes j_ var.d-ethylacetat, og pH af opløsningen indstilledes til pH 4,5.

i)gn vandige fase seoareredes fra og vaskedes med ethylacetat og -p, diarre de 3 til et liids volumen på ca. 2 ml. Yed afkøling udvidede 65 mg af -produktet, 7-(E-s-phenylglyeylamido)-5-chlor-5-

56 DK 153405B

koncentrat.

Eksempel_19

Til. en suspension af 3,0 g (8,1 mmol) p-nitrobenzyl-7-amino-3·-chlor-3-ceph.ein-4-carboxylat i 200 ml tetrabydrofuran (tørret med molekylesigte) sattes 2,1 g (8,3 mmol) N-(t-butyloxy carbonyl)-D-a-pbenylglycin og 2,0 g (8,3 mmol) N-etboxycarbonyl-2-eth.oxy- 1,2-dihydrccuinolin (EEDQ). Reaktionsblandingen omrørtes natten over ved stuetemperatur, og opløsningsmidlet afdampedes under reduceret tryk. Remanensen opløstes i en blanding af ethylacetat og Tand, og den organiske fase frasepareredes. Denne fase afkøledes og Taskedes successivt med en kold 5 $ vandig opløsning af natriumbiearbonat, en kold opløsning af 5 hydrogenchloridsyre cg dernæst med vand. Den vaskede opløsning tørredes over magnesiumsulfat, filtreredes og koncentreredes ved inddampning under reduceret tryk til et volumen på ca. 50 ml. Fra koncentratet opnåedes 3,7 g (63 i> udbytte) af reaktionsproduktet, p-nitrobenzyl-7-Γ p-2-(t-butyloxycarbamido)-2-plienylacetamidoj-3-c]ilor-3-cep]iem- 4-carboxylat som et krystallinsk produkt. Et andet udbytte' af produktet på i alt 2 gram opnåedes ved yderligere at koncentrere filtratet.

Grundstof-analyse beregnet for OgyN^yClN^OgS: teoretisk: C 53,78 - H 4,51 - N 9,29.

fundet: C 52,66 - H 4,56 - N 8,88.

U.7. (acetcnitril) viste et maximum ved 268 mp. (e=17.100).

I.R.:

Amid NH absorptionstop ved 3,05 mu og carconylabsorptionstop ved . 5,59, 5,75 og 6,0 mp.

NKE (CD013):

Signaler ved 8,60 (s, 9H, t-30C), 6,45 (ΑΒα, 2Ξ, C2-H2), · 5,Op (d, r±i, Cv—n) , 4,o7 (s, 3Ξ, x-CE og ester-CH?), 4,12 (π, 3H, C.y-H og amid NH) og 2,72 - 1,74 (η, 10H, aromatisk Ξ og amid NH) tau.

37 DK 153405 B

Til en opløsning af 3,0 g (5,0 mmol) af produktet i 15 nol tør tetra-hydrofuran tørret med molekylesigte og 185 ml methanol .sattes 3 g præreduceret 5 procent palladium-på-carbon. Katalysatoren præreduceredes i ethanol i 30 minutter ved stuetemperatur under et hydrogentryk på 50 psi. Efter tilsætning af den præreducerede katalysator hydrogeneredes produktet ved stuetemperatur 1 time under et hydrogentryk på 50 psi. Katalysatoren filtreredes fra og vaskedes på filteret med tetrahydrofuran og methanol. Filtratet og vaskevandet kombineredes og inddampedes under reduceret tryk. Remanensen opløstes i ethylacetat,og vand tilsattes. pH af blandingen indstilledes til 7 ved tilsætning af IN natriumhydroxid. Den vandige fase separeredes og vaskedes med ethylacetat. Den vandige fase behandledes dernæst med ethylacetat og filtreredes til pH 2,5 med 1 N hydrogen-chloridsyre. Den organiske fase separeredes fra den vandige fase og vaskedes med vand og. tørredes over magnesiumsulfat. Den tørrede organiske fase inddampedes under reduceret tryk til tørhed, hvorved der opnåedes et reaktionsprodukt, 7-(D-2-(t-butyloxycarbamido)-2-phenylacetamido)-3-chlor-3-cephem-4-earboxylsyre som et tørt fast stof. Produktet krystalliseredes fra 70 ml ether indeholdende 20 ml petroleumsether.til opnåelse af 1,75 g (75 %) krystallinsk produkt .

Grundstof-analyse beregnet for teoretisk: C 51,34 - H 4,74 - N 8,98 - Cl 7,58.

fundet: C 51,02 - H 4,96 - N8,75 '. - Cl 7,30.

U.V. (acetonitril) maximum ved 268 mp (£=7400).

MR (CDC1 ): Signaler ved 8,55 (s, 9H, t-BOC), 6,48 (ABq, 2H, C2-H2), '5,0 (d, IH, Cg-H), 4,63 (d, IH, a-CH),.

4,25 (q, IH, C?-H), 3,90 (d, IH, amid NH), 2,59 (s, 5H, aromatisk H) tau.

Til en opløsning af 420 mg (2,2 mmol) p-toluensulfonsyre i 5 ml acetonitril sattes 45Ξ mg (i mmol) krystallinsk hydrogeneringsprodukt. Opløsningen henstod ved stuetemperatur i 16 timer og fortyn-

38 DK 153405 B

pH 4,5, hvorefter 320 mg (87 %) af det krystallinske produkt, 7-(B-?her.ylglycylanido)-3-chlor-3-cephem-4-carboxylsyre, udfældede fra opløsningen. Produktet opsamledes ved filtrering og tørredes.

Grundse of-analyse beregnet for C^H^ClN^O^S.l/2 H20: teoretisk: C 47,80 - H 4,01 - N 11,15 - Cl 9,40.

fundet: C 48,04 - H 3,82 - N 11,18 - Cl 9,70.

Sksenpel_20

Den antibiotiske forbindelse 7“(D-phenylglycylamido)-3-chlor-3-cephen-4-carboxylsyre fremstilledes ud fra p-nitrobenzyl-7-(D-2-(n-outy_oxycarbamido)-2-phenylaaetaniido)-3-chlor-3-cephem-4-carb-cxylat vad en deblokeringsmetode alternativ til den beskrevet i net foregående eksempel. Ved denne metode faernes den tert.--ur y oxycartonylaminobeskyttende gruppe først, og derefter spaltedes p-nitr o c er zyle st ergrupper. ned zink og hordro chloridsyre i dimethyl-fcrnanid. Denne.alternative fremstilling er beskrevet i de følgende afsnit.

Til en opløsning af 2,4 g (12,6 mmol) p-toluensulfonsyre i 60 ml acetcritril sattes 3,5 g (6 mmol) p-nitrobenzyl-7-(D-2-(t-butyl-ox}rO£rbamido)-2-phenylacetamido)-3-chlor-3-cephem-4-carboxylat. Reaktionsopløsningen omrørtes ved stuetemperatur i 15 timer, hvorunder det aminodeblokerede produkt, p-nitrobenzyl-7-(D~ phenylglycylamido)-3-chlor-3-cephem-4-carboxylat, dannedes som et krystallinsk bundfald i form af p-toluensulfonsyresaltet.

Produktet frafiltreredes, vaskedes med acetonitril og vakuumtørre des. Udbytte 3,1 g ( 81 %).

Grundstof-analyse for C^K^CIN^O^: teoretisk: C 51,58 - H 4,06 - N 8,29 - Cl 5,25.

fundet: C 51,51 - H 4,14 - N 8,12 - Cl 5,60.

m — — x— - — i q^XO^Q Γ~ O ) »

Carbonyxabscrptionstoppe ved 5,61, 5,80 og 5,95 mp.

Tosylatsaltabsorptionstop ved 6,29 mp.

39 DK 153405B

NMR-spektrum (DMSO dg):

Signaler ved 7,70 (s, 3H, p-toluensulfonsyre-salt-CH^), 6,61 (s, 3H, sidekæde NH^), 6,20 (ABq, 2H, C2~E2), 4.51 (s, 2H, ester CH2), 4.94 (bred, enkelt IH, a-CH), 4,80 (d, IH, Cg-H), 4.51 (s, 2H, ester CH2), 4,08 (q, IH, C7-H), 2.95 - 1,62 (m, 14H, aromatisk hydrogen og amid NH), 0,32 (d, IH, amid NH).

Det aninodeblokerede p-toluensulfonsyresalt, der opnåedes som beskrevet ovenfor, deesterificeredes til opnåelse af følgende antibiotiske forbindelse: En opløsning af 1,5 g (2,2 mmol) af p-tolu- ensulfonsyresaltet i 10 ml tør dimethylformamid (tørret med molekylesigte) afkøledes i et is-alkoholbad. Den kolde opløsning tilsat-ses 2 ml koncentreret hydrogenchloridsyre. 400 mg (6,1 mmol) zinkstøv satres til den kolde opløsning i løbet af 15 minutter. Eeaktionsblandingen omrørtes i kulden i 30 minutter og opvarmedes dernæst ved stuetemperatur under stadig omrøring.

Reaktionsblandingen omrørtes ved stuetemperatur i 1 time og filtreredes dernæst. pH af filtratet indstilledes til 6,8 med triethyl-amin. Produktet, 7-(D-phenylglycylamido)-3-chlor-3-cephem-4-carboxylsyre som his-dinethylfornamidsolvatet af den amfotere ion dannedes som et hvidt krystallinsk bundfald. Produktet frafiltrere-des, vaskedes med 10 ml kold dimethylformamid og dernæst med 6 ml 'diethylether. Det vaskede produkt vakuumtørredes til opnåelse af 500 mg (71 %).

Grundstof-analyse for C^^gClN^OgS^DMF: teoretisk: . C 49,0? - H 5,49 - N 14,63 - Cl 6,90.

fundet: C 48,84 - H 5,53 - N 13,48 - Cl 7,18.

u. V. spektrum (acetonitril): maximum ved 2c5 mp (£=6.000).

m ---~i, 4-4 4- „ „ _ - ( C C. c/ _ τνυτπΛ. A ac: τ η

40 DK 153405B

NMR- spektrum (D^O/DCl) :

Signaler ved 6,34 (2s, 6H, DMF-CKj), 6,33 (A3q, 2H, Cg-Hg), 4,85 (d, IH, Cg-H), . 4,64 (s, IH, a-CH), 4,27 (d, IH, C?-H), 2,41 (s, 5H, aromatisk H) og 1,S4 (s, 2H, BMF-CH) tau.

Eksempel 21

ZzI?l3-m^c.roj^henvlglYCYiani(io)-3-chlor-3-cephem--4-carbox2lsYre 2,9 g (il i^mol) N-(t-cutyloxycarbonyl)-D-3-hydroxyphenylglycin onsaxxes men 3,7 g (10 mol) p-nitrobenzyl-7-amino-3-chlor-3*-ce-Pne-"4-caroox3rlat og 2,6 g (10,5 mmol) af koblingsreagenset EEDQ. Reanxionen udførtes, cg produktet isoleredes ved at følge metoden besxrevsx i acyleringsmetoden i eksempel 18. Produktet opnåedes som ex amorzx last sxof efter behandling med ether i et udbytte 2,8 g (46 %).

Grunstof-analyse for C^h^CIN^S: teoretisk: C 52,39 - H 4,40 - N 9,05.

fundet: C 52,15 _ h 4,59 - N 8,-79.

U.V. spektrum (acsxonitril): maximum ved 270 nqi- (6=17.200).

NMR- so ektrum (CDC1X):

Signaler ved 8,59 (s, 9H, t-BOC), 6,50 (ABq, 2H, C2-H2) 5,06 (d, ih, Cg-H), 4,66 (s, ih, a-CH), 4,09 (u, 2H, C?-H), 3>i4 - i., 70 (r, 9H, aromatisk H og amid NH) tau.

41 .

DK 153405 B

3,5 g (5,6 mmol) af produktet, p-nitrobenzyl-7-(D-2-(t-butyloxy-carcarido)-2-(3-hydroxy)phenylacetamido)-3-chlor-3-cæphem--4-carb-oxylai, hydro generede s i ethanol i nærværelse af præreduceret 5 % palladium-på-carbon ved at følge deesterificeringsmetoden beskrevet i eksempel 18. Produktet, 7-(P-2-(t-butyloxycarbamido)-2-(3-hydroxy)phenylaeetanido)-3-chlor-3-cephem-4-carboxylsyre, opnåedes krystallinsk ved behandling af det amorfe stof med en opløsning af hexan i diethylether. Udbytte 1,5 g (55 %).

U.V. spektrum .(acetonitril: maximum ved 272 ιημ (£=8.280).

Elektrometrisk titrering (66 % vandig DMF): pKa på 4,5.

1,3 g (2,7 mmol) af ovennævnte produkt omsattes med 1,1 g (5,9 mmol) p-toluensulfonsyre i 28 ml acetonitril for at fjerne den tert.-bntyloxycarbonylbeskyttende gruppe. Metoden udførtes som beskrevet i eksempel 13.

produktet, 7-(D-3-nydroxyphenylglycylamido)-3-chlor~3-cephem-4-carboxylsyre krystalliseredes fra reaktionsblandingen, filtre-redes fra og vakuumtørredes. Udbytte 700 mg (64 %).

C-rurtstof-analyse for -H^ClN^O^S.l^O: teoretisk: C 44,33 - H 4,01 - N 10,46.

fur-de": C 45,12 - H 4,06 - M 10,31.

jj^^&rriolet absorptionsspektrum (pH 6 buffer): maximum ved 268 mp (6=9.750).

gpektrmm (DgO/DCl): .Signaler ved 6,31 (A3q, 2H, ^-¾), 4,81 (d, IH, Cg-H), .

4,52 (s, IH, a-CH), 4,26 (d, IH, Cy-H) og 3,1 - 2,5 (si, 4H, aromatisk H)tau.

42 DK 153405 B

Ekseagel_22 - Ved at følge metoden beskrevet i eksempel 18 acyleredes 850 mg (2,5 nnol) p-nitrobenzyl-7-amino-3-chlor-3-cephem-4-carboxylat med 700 mg (2,5 mmol) N-t-butyloxycarbonyl-D-4-chlorphenylglycin og 567 mg (2,3 amol) EEDQ til opnåelse af 1,2 g p-nitrobenzyl-7-(D- 2-(m-butylojcycarbamido)-2-(4-chlorphenylacetamido)-3-chlor-3-ce-phem-i-carboxylat.

1,2 g (1,9 mmol) af produktet hydrogeneredes ved stuetemperatur i nærværelse af præreduceret 5 % palladium-på-carbon for at fjerne p-nitrobenzylestergruppen og til frembringelse af 450 mg 7-(0-2-(t-tuiylo:cfcarbamido)-2-(4-chlorphenylacebanido))-3-chlor-3-cephem- 4-carboxylsyre som et krystallinsk produkt. Produktet opnåedes krystallinsk ved at behandle den amorfe remanens med diethylether.

Grurisrof-analyse for C2qH21 Cl^uOgS: teoretisk: C 47,82 - H 4,21 - N 8,36 - 0114,11.

fundet: C 47,75 - H 4,43 - N 8,11 - Cl 14,15.

SIektrometrisk titrering (66 % vandig. DMF): pKa ved 4.4; tilsyneladende molekylvægt = 508;’ beregnet ΜΪ/ = 502.

45G mg (0,$ mmol) af deesterificeringsproduktet omsattes med p-toluensulxonsyren i acetonitril ved at følge metoden beskrevet i de tidligere eksempler for at fjerne den tert.-butyloxycarbonyl-beskyttehde gruppe og til opnåelse af 160 mg (44 %) af det krystallinske 7-(D-4-chlorphenylglycylamido)-3-chlor-3-cephem-4-carboxyl-syre i form af den amfotere ion.

Grmdstof-analyse for C^H-^^Cl^N^O^S, lH^O: teoretisk: C 42,86 - H 3,59 - N 9,99 - Cl 16,87.

fundet: C 43,07 - E 3,63 - N 9,69 - Cl 16,75.

U.7. spektrum (pH 6 buffer): maxima ved 265 nu (i =8.100) og 2,25 mp (6=13.900).

43 DK 153405 B

Elektrometrisk titrering (66 % vandig DMF): pKa = 4,15 og 6,8; tilsyneladende molvægt = 407, beregnet molvægt = 403·

Eksemgel_23 Ζι(?ι^ΐ^Ζ^ί22ΥΕ^§5·Υ]:&ΐΥ2γ4&5ίώο)-3-2ΐ.1οΓ-33θ6ρ^Θ2-4-ΌηΓ^οχ^ΐ8γΓθ N-(t-butyloxycarbonyl)-D“.4^nydroxyphenylglycin (2,9 :g, 11 mmol)· omsattes med 3,7 g (10 mmol) p-nitrobenzyl-7-amino-3-chlor-3-cephem- 4-carboxylåt og 2,6 g (10,3 mmol) af koblingsreagenset EEDQ i tør tetrahydrofuran. Reaktionen udførtes, og.produktet .isoleredes ved at følge metoden beskrevet i eksempel 18, Produktet, i alt 3,7 g (60 % udbytte) opnåedes krystallinsk fra kold diethylether.

Produktet, p-nitrobenzyl-7(D-2-(t-butyloxycarbamido)-2-(4-hydroxy)-phenylacetanido)-3-chlor-3-eephem-4-carboxylat gav følgende procentvise grundstof-analyse og ©IR-spektrum:

Grund s tof-analyse for 0 teoretisk: C 52,39 - H .4,40 - H 9,05- fundet: C 52,12 - H 4,26 - N 8,91.

NMR-spektrum (DMS0 dr)1

* . O

Signaler vea 8,62 (s, 9H, t-B0C-CH3), 6,16 (.4Sq, 2H, C^-]^), 4,81 (d, IH, C6-H), 4,75 (d, IH,· a-CH), · · 4,53 (s, 2H, ester-CH2), 4,18 (q, IH, Cy—H), 7,04 og 2,0 (2q, 8H, aromatisk H), 0,76 (d, 1E, C7-NH) og 0,58 (s, IH, p-0H), tau.

2,2 g (3,5 mmol) af produktet hydrogeneredes i ethanol i nærværelse af præreduceret 5 % palladium-på-carbon katalysator for at udvirke Λ fjernelse af p-nitrobenzyigruppen. Det deesterificerede produkt, 7-(D-2-(t-butyl-oxycarbamide)-2-(4-hydroxy)phenyl-asetamido)-3-chlor-

44 DK 153405 B

diethylether og hexan. Der opnåedes 1 gram af produktet svarende til et udbytte på 59 /-·

Grundstof-analyse for ^20^22^^3^7^: teoretisk: C 49>64 - H 4,58 - N 8,08.

fundet: C 48,92 - H 4,40 - N 8,24.

ftl'IE-spektrum (DMS0 dg):

Signaler ved: 8,61 (s, 9H, t-B0C-CH3), 6.26 (ABq, 2H, C2-H2), 4,89 (d, IH, Cg-H), 4.78 (d, IH, α-CH), ' 4,28 (q, IH, C7-H), ' 5,06 (q, 4H, aromatisk-H) og 1,20 (d, IH, C7-NH) tau.

Der. tert-BCC-beskyttende gruppe fjernedes fra deesterificerings-produkeet ved at omsætte dette i acetonitril med p-toluensulfon-syre. Fra 1 g af produktet opnåedes 330 mg (40 %) af slutproduktet, 7_(D-4-hydroxyphenylgiycylamido)-3-chlor-3~cephem-4-carboxylsyre med fslger.de grundstof-analyse og NMR-spektrum:

Grurdseof-analyse beregnet for C^H^^CIN^O^S.IH^: teoretisk: C 44,83 - H 4,01 - N 10,46.

fundet: C 44,92 - H 3,45 - N 10,63-

Elektrometrisk titrering i 66 % vandig dmf gav værdier på 4,2, 7,7 og 12,^. Den tilsyneladende molvægt = 384; dén beregnede molvægt = 383,3.

NMR-spektrum (D20/DC1) viste signaler ved 6,32 (ABq, 2H, C2-H2), 4,84 (d, IH, Cg-H), .

4.27 (d, IH, C?-H) og 2.79 (q> 4H, aronatisk-H) tau.

45 DK 153405 B

EKsempel_ 24

Ved at følge acyleringsmetoden og ved at anvende acyleringsmidlerne i eksempel 16 fremstilledes følgende forbindelser ved acylering af den anførte 3-halogenkerne: 7-(D-a-phenylglycylamido)-3-brom-3- cephem-4-carboxylsyre fremstilles ud fra 7-amino-3-hrom-3-cephem- 4-carboxylsyre; og 7-(D-a-(4-hydroxyphenyl)glycylamido)-3-chlor- 3-cepnem-4-carboxylsyre fremstilles ud fra enaminbeskyttet 4-hy-droxypherylglycin, blandet anhydrid, dannet ud fra methylchlorfor-mat via acylering af 7-amino-3-chlor-3-cephem-4-carboxylsyre.

Eksempel_25 7-(D-2-thienylglycylanido)-3-chlor-3-cephem-4-carboxylsyre fremstilles ved II-acylering af 7-amino-3-chlor-3-cephem-4-carboxylsyre med 2-thienylglycylchlorid, hydrochlorid i acetonitril og i nærværelse af propylenoxid.

Eksemgel_26 7_(D-3-thienylglycylamido)-3-chlor-3-cephem-4-carboxylsyre fremstilles med 7-anino-3-chior-3-cephem-4-carboxylsyre via N-acylering med D^3-thienylglycylchlorid,hydrochlorid.

Scsempel_27_ A. p-27 itrobenzyl-7- [N- (t-butyloxycarbonyl) - α-D- (2-thienyl) - . glycylamido]-3-chlor-3-cephem-4-earboxylat.

N-t-butyloxycarbonyl-2-thienyl-D-glycin (3,2 g, 12,5 mM) opløstes i 300 ml tørt tetrahydrofuran. Der tilsættes p-nitrobenzyl-7-amino-3-chlor-3-cephem-4-’Carboxylat (4,6 g, 12,5 mM) og EEDQ (3»4 g, 13» B mM), og blandingen blev omrørt ved stuetemperatur natten over. Opløsningsmidlet blev fjernet i vacuum, og remanensen opløst i etlrylacetat. Ethylacetatopløsningen blev vasket med syre og base og inddampet til tørhed. Produktet krystalliserede ved udrivning mei erher.

46

DK 153405B

Udbytte 5,7 g (78¾) I.R. (CHC13)

Carbonylbånd ved 5,59 pm (3-lactam), 5,72 pm (ester), 5,89 pm (bred), og 6,55 pm (aaid) U.V. (MeCU) λ max = 269 nm, S =17 769

Analyse for C25H25'‘4°732C1: beregnet: C 50,63; - H 4,25 - N 9,45 - Cl 5,98 fundet : 0 50,42 - H4,39'- N 9,22 - Cl 6,10.

B. 7- "-I- (t-butyloxy carbonyl) -α-D- (2-thienyl)-glycylamido]-3- chlor-3-C9phem-4-carboxylsyre.

p-Nitrobenzyl-7-[N-(t-butyloxycarbonyl)-α-D-(2-thienyl)-glycyl-anido]-3-chlor-3-cephen-4-carboxylat (6,0 g, 10,2 mM) blev hycrogenol}-r59ret ved konventionelle metoder under anvendelse af en lige så stor vægtmængde forreduceret palladium-på-kul. Produktet krystalliserede ved udrivning med en blanding af ether og hexan i volumenforholdet 1:1.

Udbytte 2,9 g (64¾) U.V. (MeCU) X max = 270 nm = 7500

Analyse for ^^q^O^CI-I/^ mol ether beregnet: C 47,01 - H 4,93 - N 8,22 - Cl 6,94 fundet : C 46,53 - H 4,85 - N 8,19 - Cl 7,13.

47 DK 153405 B

C. 7-D-2-thienylglycylamido-3-chlor-3-cephem-4-carboxylsyre 7- [N- (t-butyloxycarbonyl )-x-D- (2-thienyl) -glycylamido ] -3-chlor-3-cephem-4-carboxylsyre.(2,7 g, 5,3 mM) opløstes i 150 ml aceto-nitril og behandledes med p-toluensulfonsyre (2,2 g, 11,5 mM). Blandingen blev omrørt ved stuetemperatur natten over, fortyndet med 15 ml vand, og pH-værdien indstillet til 5,7 med koncentreret ammoniumhydrogencarbonatopløsning. Produktet udfældedes i krystal-form.

Udbytte 1,7 g (86#).

I.R. (Nujol-suspension)

Carbonylband ved .

5,65 jum (3-lactam) og 5,91 pm (amid) U.V. (pH 6 puffer) 7\ max = 265 nn, £ = 9300

Analyse for C^H^N^O^S^Cl- beregnet: C 41,77 - H 3,24 - N 11,24 - 019,48 fundet : C 42,01 - H 3,02 - N 11,24 - Cl 9,34.

Eksempel 28 p-Nitrobenzyl-7-phenylglycylamido-3-chlor-3-cephem-4-carboxylat p-Nitrobenzyl-7-[N-(t-butyloxycarbonyl)-D-a-phenylglycylamido]-3-hydroxy-3-cephem-4-carboxylat (3,9 g, 6,7 mM) opløstes i 40 ml tørt dimethyl formamid. Der tilsattes phosphortrichlorid (7 ml, 7 mM), og reaktionsblandingen blev omrørt i 3 timer ved stuetemperatur. Den hældtes derpå ud i en blanding af ethylacetat og vand. Sthylacetatlaget blev skilt fra, vasket flere gange med vand, tørret over magnesiumsulfat og inddampet til tørhed i vacuum.

48 DK 153405B

Udbytte 1,95 g (5Q%)

Analyse xor 022^2_9'^Z4.0gSCl beregnet: C 52,54 - H 3,81 - N 11,14 - Cl 7,05 fundet: C 52,52 - H 4,29 - N 10,73 - Cl 7,55.

Eksemnel_29 p-Nitrobenzyl-7- (D-a-phenylglycylamido) -3-brom-3-cephem-4-carhoxylat p-Nitrobenzyl-7- [N- (t-butyloxy carbonyl) -D-oc-phenylglycylamido ]-3-hydroxy-3-c ephem-4-carooxylat (2,3 g, 4 mM) blev opløst i 25 ml dimethylformamid og behandlet med 3 ml phosphorpentabromid. Blandingen blev omrørt ved stuetemperatur natten over. Tyndtlagschro-matografi over silicagel, udviklet med ethylacetat/benzen 7:3, viste næsten fuldstændig omsætning af udgangsmaterialet til produktet. Reaktionsblandingen blev dispergeret i vand/ethylacetat.

Det organiske lag blev skilt fra, vasket med saltvand, tørret over magnesiumsulfat og inddampet til tørhed i vacuum. Den amorfe remanens blev chromatograferet over silicagel til opnåelse af det ovennævnte produkt.

N.M.R. (CDC13): 6,24 (Abq, 2H, C2-H2), 4,80 (d, IH, C6-H), 4,60 (s, 2H, ester-CH2), 4,50 (s, IH, cc-CH), 4,44 (o, IH, C7-H), 2,66 (d, IH, amid-Μϊ), 2,59 (s, 5H, aromatisk H), og 2,50-1,70 (q, 4H, ester-aromatisk H) tau.

Claims (2)

1. 49 DK 153405B Patentkrav : Beskyttede 3-halogen-7a-aminoacyl-cephalosporin-derivater til anvendelse son mellemprodukter ved fremstilling af 3-hålogen-7a:-aminoacyl-cephalosporiner med den almene formel . R-CH-C0-N1L .S. r _s' 1¾ ,1 (I) /-
2. 0 COOH hvori R betyder phenyl, hydroxyphenyl, halogenphenyl, methylphenyl, methoxyphenyl. 2-thienyl, 3-thienyl eller 2-furyl, og X betyder chlor eller brom, kendetegnet ved, at de har den almene formel R-CH-CO-ML q » \_ Mi (II) r2 CO OR1 hvori R og X har den ovenstående betydning, betyder hydrogen, benzyl,'p-methoxybenzyl, p-nitrobenzyl, diphenylmethyl, 2,2,2-trichlorethyl, trimethylsilyl eller t-butyl, og p R“ betyder hydrogen, t-butyloxycarbonyl, benzyloxycarbonyl, p-nitrobenzyloxycarbonyl, triehlorethoxycarbonyl eller -trityl, eller en enamingruppe dannet med methylacetoacetat eller acetylacetone, idet 1 2 R- og R~ ikke samtidig kan være hydrogen.