DK154511B - Fremgangsmaade til fremstilling af et diagnostisk hjaelpemiddel, der er beregnet til paavisning af en pathologisk forhoejet koncentration af dehydrogenaser - Google Patents

Description

DK 15451 1 B

Opfindelsen angår en fremgangsmåde til fremstilling af et diagnostisk hjælpemiddel med forbedrede egenskaber, der er beregnet til påvisning af en pathologisk forhøjet koncentration af dehydrogenaser i væsker fra 5 mennesker, dyr eller planter, og som består af en bærer og en stofblanding.

Medicinske diagnoser spiller i sundhedsvæsenet en betydelig rolle. Dette gælder især for diagnoser inden for 10 området forebyggende undersøgelser. Derved har diagnoser, f.eks. til tidlig erkendelse af malignomer, allerede nået en stor praktisk betydning, da man ved en rettidig konstatering af en sådan sygdom har de bedste udsigter til at opnå et godt resultat.

15

Pathologiske forandringer hos mennesker, dyr eller planter kan påvirke sammensætningen af ekstracellulære væsker for disse levende organismer, f.eks. går der ved pathologiske forandringer af celler, som det er tilfældet 20 ved dannelsen af malignomer, dehydrogenaser over i serum og i andre ekstracellulære væsker. Derved kan der for hver dehydrogenase findes en som pathologisk at betragte diagnostisk anvendelig tærskelværdi.

25 Det er allerede muligt at angive kemiske diagnosemidler, der har et til den pathologiske tærskelværdi for en dehydrogenase tilpasset omslagspunkt. Overskridelse af dette omslagspunkt kan f.eks. gøres synligt ved hjælp af et i det diagnostiske middel indeholdt redoxfarvestof, 30 som ved den pathologiske tærskelværdi slår om fra farveløs til farvet.

Et diagnosemiddel, der er beregnet til påvisning af en pathologisk forhøjet koncentration af dehydrogenaser i 35 2

DK 154511B

ekstracellulære væsker, indeholder f.eks. en til en pH-værdi i det sure område indstillet stofblanding af det til dehydrogenase svarende substrat, en hydrogenoverførende forbindelse og mindst ét redoxfarvestof. For at 5 midlet er egnet til en differentialdiagnostik, ved hvilken kun pathologisk forhøjede dehydrogenasekoncentrati-oner er omfattet, må den nævnte værdi være temmelig lav, f.eks. ligge under 5,0.

10 Til bestemte diagnosearter, såsom intrakorporale undersøgelser, er det nødvendigt at påføre det diagnostiske middel på en bærer før dets anvendelse. Dette gælder f.eks. for diagnoser hos kvinder, der skal prøves for tilstedeværelsen af carcinomer i genitalområdet. Til 15 dette formål er det fra DE patentskrift nr. 24 43 741 kendt at føre det diagnostiske middel på en hygiejnetampon og på denne form indføre det i vagina på patienten, hvor midlet kan reagere med de i vaginalsekretet indeholdte dehydrogenaser. Viser tamponen efter sin udtagel-20 se fra vagina en misfarvning, er dette et tegn på en pathologisk forandring i patientens legeme.

Fra DE patentskrift nr. 24 43 741 kendes blandt andet en fremgangsmåde til fremstilling af et diagnostisk hjælpe-25 middel, der består af en tampon og en derpå påført stofblanding. Hjælpemidlet er beregnet til fælles bestemmelse af isoenzymerne 4 og 5 fra lactatdehydrogenase og skal endelig tjene til diagnose af pathologiske forandringer hos kvinder i genitaltragten.

30

Ved den kendte fremstilling bliver en under udelukkelse af energirigt lys den på en pH-værdi i det sure område indstillet stofblanding på flydende form bragt i kontakt med tamponen. Derefter bliver kombinationen af tampon og 35

DK 15451 1 B

3 stofblanding tørret og så indesluttet i et emballagehylster, der er uigennemtrængeligt for energirigt lys.

"Energirigt lys" betyder i denne sammenhæng og i det 5 følgende sådant lys (herunder ultraviolet lys), som er mere energirigt end rødt lys.

Fra DE offentliggørelsesskrift 23 39 663 og tidsskriftet Biochem. J., 99 (1966), side 246-252, kendes tetrazoli-10 umsaltholdige reaktionssystemers oxygenfølsomhed.

I praksis har det vist sig, at bestemte egenskaber for det diagnostiske hjælpemiddel er særligt ønskelige.

15 Det tilsigtes med den foreliggende opfindelse at tilvejebringe en fremgangsmåde til fremstilling af et diagnostisk hjælpemiddel, der før sin anvendelse kan lagres i så lang tid som muligt, uden at dets funktionsdygtighed derved ændres væsentligt; f.eks. skal hjælpemidlet, 20 såfremt det indeholder et redoxfarvestof, under lagringen ikke have nogen tendens til for tidlig misfarvning.

Endvidere skal det diagnostiske hjælpemiddel under en så kort anvendelsestid som muligt (liggetid) hos patienten nå en høj diagnostisk træfsikkerhed. Også i det tilfæl-25 de, at det diagnostiske middel ved sin intrakorporale anvendelse danner et farvestof, tilstræbes en så fast som mulig binding af farvestoffet til bæreren i det diagnostiske hjælpemiddel for at undgå, at dette farvestof trænger ud, f.eks. i vaginalhuden på en kvinde, der un-30 dersøges. Endelig skal tidsforbruget for fremstillingen af det diagnostiske hjælpemiddel forkortes.

Dette opnås ved opfindelsen i form af en fremgangsmåde til fremstilling af et diagnostisk hjælpemiddel, der er 35

DK 15451 1 B

4 beregnet til påvisning af en pathologisk forhøjet koncentration af dehydrogenaser i væsker fra mennesker, dyr og planter, og som består af en bærer og en stofblanding, hvorved den til en pH-værdi i det sure område ind-5 stillede stofblanding i flydende form under udelukkelse af UV-bestråling bringes i kontakt med bæreren, hvorefter kombinationen af bærer og stofblanding tørres og indesluttes i et emballeringshylster, der er uigennemtrængeligt for lys, der er energirigere end rødt lys, og 10 fremgangsmåden er ejendommelig ved, at den tørrede kombination af bærer og stofblanding indelukkes i emballagehylstret under opretholdelse af en fugtighedsgrad på under 1% og sikret mod tilgang af fugt.

15 Ved den nævnte tørringsgrad på under 1% fugt kan det diagnostiske hjælpemiddel før anvendelse opbevares mere end 3? år uden væsentlig påvirkning af dets funktionsdygtighed.

20 Ifølge en mulig udførelsesform for fremgangsmåden anvendes en bærer, der binder et redoxfarvestof, samt en stofblanding af det til dehydrogenase svarende substrat, en hydrogenoverførende forbindelse, mindst ét redoxfarvestof og eventuelt et puffersystem, hvilken bærer har 25 polære grupper, og stofblandingen indstilles på en pH-værdi på under 5,0. Derved opnås et diagnostisk hjælpemiddel, der egner sig til en differentialdiagnostik til påvisning af pathologisk forhøjede dehydrogenasekoncen-trationer og foruden en lang lagerlevetid har en høj di-30 agnostisk træfsikkerhed i længere tid, f.eks. mere end to år.

Ved en særlig videreudførelse af fremgangsmåden ifølge opfindelsen bliver som bærer anvendt en cellulosefiber-35

DK 15451 1 B

5 holdig tampon. Det således fremstillede diagnostiske hjælpemiddel er frem for alt af værdi til intrakorporale undersøgelser, såsom diagnoser af carcinomer i genitalområdet på kvinder. Dette diagnostiske hjælpemiddel kan 5 før sin anvendelse lagres flere år, har alligevel en kort liggetid i patienten på maksimalt 10 minutter og en høj diagnostisk træfsikkerhed og garanterer en fast binding af det ved diagnosen eventuelt dannede farvestof til cellulosefibrene i tamponen, således at en overskri-10 delse af farvestoffet i vaginalslimhinden for den undersøgte patient udebliver.

Tamponer af cellulosefibre har vist sig særligt egnede til sådanne diagnostiske hjælpemidler, der er beregnet 15 til fastslåelse af carcinomer i det kvindelige genitalområde. Der kan hertil anvendes sædvanlige hygiejnetamponer. Disse er fortrinsvis ikke viklede, men har en længdesøm. Tamponerne af cellulosefibre har den særlige fordel, at de ved anvendelsen af det diagnostiske hjæl-20 pemiddel særligt stærkt binder dannet farvestof, hvorved de polære grupper i cellulosematerialet og tilsvarende polære grupper i farvestoffet formodentlig indgår en fast forbindelse.

25 Styrken af bindingen mellem cellulosefibrene og farvestoffet er vist ved forsøg, ved hvilke det er forsøgt at løsne farvestoffet (formazan) fra tamponen. Som ekstraktionsmiddel tjente fire forskellige medier.

30 a. fysiologisk kogsaltopløsning, b. en opløsning, der til efterligning af vaginalsekret (der ikke er opnåeligt i tilstrækkelig mængde) indeholder humant albumin og mucin, 35

DK 15451 1 B

6 c. en opløsning ifølge b., der yderligere omfatter et grænseoverfladeaktivt stof, f.eks. natriumlaurylsul-fat, og 5 d. chloroform.

Ikke med nogen af disse medier kunne der opløses større mængder farvestof (formazan) fra tamponen. Selv ved 6 timers opbevarmning af tamponen i kogende chloroform var 10 der kun ekstraheret ca. 7% af farvestoffet (formazan).

Da tamponen ved anvendelsen i humanmedicinen kun forbliver højst 10 minutter i en legemshulhed ved ca. 37 °C, er der åbenbart ingen fare for, at en del af det eventuelt dannede farvestof ekstraheres fra tamponen af den 15 befugtende legemsvæske og trænger ind i legemet.

Tamponen kan også bestå af andre fibre, f.eks. hydrofile kunstfibre, der til forstørrelse af deres overflade og adsorptionsevne kan være hule. Tamponer af en blanding 20 af forskellige fiberarter, f.eks. naturlige og syntetiske fibre, kan selvsagt anvendes, så længe fibrene er hydrofile og har polære grupper.

Det diagnostiske hjælpemiddel bestående af en tampon eg-25 ner sig ikke blot til intrakorporal, men også til eks-trakorporal diagnose. I det sidste tilfælde bringes den legemsvæske, der skal undersøges, i berøring med tamponen, der indeholder den nævnte stofblanding.

30 Kombinationen af bæreren og stofblandingen anbringes fortrinsvis allerede før tørringen i emballeringshylstret. På denne måde behøver man efter tørring kun at lukke emballeringshylstret. Da denne lukning kun tager kort tid, undgår man således faren for, at fornyet fugt 35

DK 15451 1 B

7 når frem til bæreren og stofblandingen og påvirker holdbarheden af det diagnostiske hjælpemiddel.

Ifølge en særlig udførelsesform lukkes emballeringshyl-5 stret, som indeholder bæreren og stofblandingen, allerede i tørringsapparatet. Derved sikres, at det ved tørringen opnåede lave fugtindhold også foreligger efter lukningen af emballeringshylstret i inderrummet.

10 Til anvendelsen af det diagnostiske hjælpemiddel i form af en tampon er det gunstigt, når tamponen er anbragt i en applikator. Derved opnår man, at tamponen kan indføres i en legemshulhed, f.eks. i vagina, uden umiddelbar berøring med fingrene og uden fare for en inficering.

15 I overensstemmelse dermed indføres tamponen i et indføringshylster for applikatoren ved fremstilling af et sådant diagnostisk hjælpemiddel. Derved er det foretrukket at anbringe tamponen i applikatoren før påføringen 20 af stofblandingen, fordi applikatoren så tjener som holder for tamponen, når man påfører stofblandingen derpå.

Det er fordelagtigt, når applikatoren har et indføringshylster med en væskeuigennemtrængelig indervæg, og tam-25 ponen anbringes således i indføringshylstret, at der inden indføringshylstret før indføringsenden af tamponen dannes et frit rum. Dette rum kan en overgang optage den stofblanding, der skal påføres tamponen, og bidrager således til en hurtigere fremgangsmåde. Den væskeuigennem-30 trængelige indervæg i indføringshylstret i applikatoren muliggør en hurtig påføring af stofblandingen på flydende form på tamponen, uden at en del af denne væske opsuges af indføringshylstrets væg eller går gennem denne og således fortabes for tamponen.

35 8

DK 15451 1 B

Ved en i praksis særligt egnet udførelsesform for fremgangsmåden indsprøjtes en opløsning af stofblandingen i det nævnte frie rum, f.eks. ved hjælp af et doseringsapparat. Denne indsprøjtning kan ske hurtigt, hvorved pro-5 duktionshastigheden kan forøges.

Som emballeringshylster anvendes fortrinsvis et i den ene ende åbent, af metal med høj varmeledningsevne bestående lille rør med en elastisk prop. Et sådant lille 10 rør af f.eks. aluminium er på den ene side let at fremstille og giver efter påsætning af proppen, der kan bestå af et gummiagtigt materiale, en varig beskyttelse af det diagnostiske hjælpemiddel mod luft, fugt, lys og mekanisk beskadigelse.

15

Desuden kan det lille rør tjene som holder for det diagnostiske hjælpemiddel under påføringen af stofblandingen på bæreren.

20 Endelig begunstiger den høje varmeledningsevne for rørmaterialet en hurtig varmetransport mellem de enkelte rør. Dette er fordelagtigt, når røret efter indsats af det diagnostiske hjælpemiddel tørres under gensidig berøring med indholdet.

25

Ved en videreudvikling af denne fremgangsmådevariant fyldes røret med kombinationen af applikator og tampon, hvorpå stofblandingen påføres tamponen og endelig lukkes røret delvis med proppen og tørres med sit indhold. Den 30 delvise lukning af røret muliggør på den ene side den ønskede tørring og på den anden side en hurtig, fuldstændig tillukning af røret efter tørringen, hvilket endda kan ske inde i tørringsanlægget.

35

DK 15451 1 B

9

Til opnåelse af en særlig lang holdbarhed for det emballerede diagnostiske hjælpemiddel bliver bæreren og stofblandingen tørret i et frysetørringsanlæg, og derefter bliver emballeringshylsteret der under formindsket tryk, 5 der allerede var indstillet til tørringen i frysetørringsanlægget, lukket.

Frysetørringen er særlig at anbefale for den foreliggende fremgangsmåde, da det materiale, der skal tørres, 10 forholdsvis hurtigt og i vidtgående grad befries for opløsningsmidlet for stofblandingen.

En hurtig tørring begunstiger en meget fin fordeling af stofblandingen på bæreren. Det betyder, at stofblandin-15 gen efter tørringen hovedsageligt er bundet til bæreren på amorf form og ikke i form af større krystaller. Bindingen mellem de enkelte bestanddele i stofblandingen, især farvestofkomponenterne, og bæreren forøges derved.

Desuden fjernes flygtige bestanddele, f.eks. vand, ved 20 frysetørring af bæreren, f.eks. tamponens cellulosefibre, hvorved rumbetingelserne for farvestofkomponentens molekyle forbedres yderligere, så der kan indgås en så snæver kontakt som muligt med bærerens molekyler. Følgen er et stort antal kovalente bindinger mellem farvestof 25 og bærer. Derved undgås faren for opløsning af farvestofmolekyler fra bæreren ved hjælp af legemsvæske i høj grad.

Det har også vist sig, at ved den faste binding mellem 30 bæreren og farvestoffet forløber den ved anvendelse af det diagnostiske hjælpemiddel forløbende farvereaktion ved et ønsket pH under 5,0 særligt specifikt, og derved forøges træfsikkerheden for diagnosen i betragtelig grad.

35

DK 15451 1 B

10

Den ved frysetørringen opnåede stærke binding mellem stofblanding og bærer er også årsag til den lange holdbarhed af på denne måde fremstillede diagnostiske hjælpemidler .

5

Det diagnostiske hjælpemiddel frysetørres optimalt, når der i et første trin tørres ved et ringe undertryk og i et andet trin ved et større undertryk. Dette begunstiger en fraskillelse af f.eks. vandmolekyler, der er inde-10 holdt i bæreren, uafhængigt af den påførte stofblanding.

Det ringere undertryk til fortørringen ligger på ca.

1,33 Pa (10-2 Torr). I det påfølgende trin indstilles eftertørringen på et større undertryk på ca. 0,13 Pa (10-3 Torr).

15 I det følgende forklares fremgangsmåden ifølge opfindelsen nærmere.

EKSEMPEL 1 20

De enkelte komponenter i stofblandingen indvejes og opløses i destilleret vand under udelukkelse af energirigt lys, f.eks. under rødt lys. Udelukkelsen af energirigt lys sikres også for de efterfølgende fremgangsmådetrin.

25 Bæreren for stofblandingen er en sædvanlig hygiejnetampon af cellulosefibre. Den anbringes i et indføringshylster i en tamponapplikator, hvori et udskydningshylster med en noget mindre ydre diameter er teleskopagtigt 30 delvist fremstillet af viklet karton eller kunststof.

Sådanne applikatorer er tilgængelige i handelen.

Ved hjælp af en udstansning i det område, hvor indføringshylstret og udskydningshylstret i applikatoren lap-35

DK 15451 1 B

11 per over hinanden/ forhindres en utilsigtet udglidning af udskydningshylstret fra indføringshylstret.

Tamponen skubbes så langt ind i indføringshylstret i ap-5 plikatoren, at den ligger an mod forenden af udskydningshylsteret, og samtidig dannes inde i indføringshylsteret før tamponen, der skal indføres, et frit rum på ca. 3 cm3 eller med en aksial længde på ca. 3 cm. Tamponens tilbagetrækningstråd strækker sig fra tamponens 10 bagende inde i udskydningshylsteret til dettes bagende.

Anordningen af applikator og tampon indføres således i et emballeringsrør af aluminium, at applikatorens indføringsende og åbningen af røret er rettet opad.

15

Derefter indsprøjtes ved hjælp af en doseringsanordning oppefra i det nævnte frie rum inde i indføringshylsteret og før indføringsenden af tamponen ca. 2 ml af den fremstillede vandige opløsning af stofblandingen.

20

Til forøgelse af produktionshastigheden sker indsprøjtningen så hurtigt, at en del af opløsningen i kort tid bliver stående i det nævnte frie rum i applikatoren, før det opsuges helt af tamponen. For at forhindre, at der 25 under denne tid og også efter opsugningen af opløsningen, at en del deraf trænger ind i den vandopløselige eller vandoptagende væg i indføringshylstret og således går tabt for tamponen, er indføringshylstret på sin in-dervæg belagt med et væskeuigennemtrængeligt stof, 30 f.eks. en aluminium- eller polyvinylidenchloridfolie.

Opløsningen af stofblandingen forårsager en opkvælning af tamponen inde i applikatoren. Da tamponen allerede ved indføringsenden ligger an mod udskubningshylsteret 35

DK 15451 1 B

12 og en udvidelse af tamponen mod applikatorbagenden for-' hindres af denne fastlæggelse ved hjælp af den nævnte indstansning, udvider tamponen sig ved volumenforstørrelse ved fugtoptagelse i retning af applikatorens ind-5 føringsende og udfylder derved i alt væsentligt det nævnte frie rum i indføringshylsteret.

Dernæst bliver der på åbningen af emballeringsrøret delvist påsat en prop af et elastisk materiale. Derved bli-10 ver proppen indført til sit første forspring i dens omkreds i røret. Ved denne position af proppen bliver ved hjælp af et udtag i proppen en strømningskanal mellem inderrummet af røret og dets ydre omgivelse fri.

15 Flere sådanne forberedte emballeringsrør stilles under gensidig berøring ved siden af hinanden og bringes ind i et frysetørringsanlæg.

Der bliver rørene med deres indhold forfrosset og der-20 næst under et første tørringstrin ved et undertryk på ca. 1,33 Pa fortørret. I et andet tørringstrin eftertør-res ved et større undertryk på 0,13 Pa. Den samlede tørring varer ca. 24 timer.

25 Når en restfugtighed på under 1% er nået, bliver emballeringsrørene i tørringsanlægget lukket under det bestående undertryk. Dette sker ved en hydraulisk sænkning af en lukkeplade, som indrykker lukkepropperne i emballeringsrørene til et andet forspring ved propkanten og 30 derved lukker rørene fuldstændigt.

Derefter kan emballeringsrørene tages ud af frysetørringsanlægget og udsættes for omgivelsernes betingelser, såsom luft, sædvanlig fugt og energirigt lys, uden at de 35 13

DK 15451 1 B

indpakkede diagnostiske hjælpemidler påvirkes.

Dernæst gives specielle eksempler med henblik på sammensætningen af stofblandingen og holdbarheden af de frem-5 stillede diagnostiske hjælpemidler.

EKSEMPEL 2

Ifølge eksempel 1 fremstilles diagnostiske hjælpemidler.

10 Som bærer tjener en sædvanlig hygiejnetampon, der består af cellulosefibre og ikke er viklet, men består af flere cellulosefiberlag, som sammen med et tilbagetagningsbånd i længderetningen af tamponen er syet og dernæst presset til den endelige tamponform.

15

Stofblandingen påføres i form af en vandig opløsning med følgende sammensætning på tamponen:

Bestanddel Mængde 20 DL-natriumlactat 57,6 mg nicotinamid-adenin-dinucleotid 3,0 mg 2,2'-azino-bis[3,3'-ethyl-benz-thiazolin-6,6'-sulfonsyre] (MTT) 272,5 pg triethanolamin 39,8 mg 25 phenozinmethosulfat 10,0 pg vand, renset ad 2,0 g pH-værdien for opløsningen indstilles med 3 n saltsyre på 4,0.

30

Efter den nævnte fremgangsmåde opnås diagnostiske hjælpemidler, der selv efter flere års forløb er funktionsdygtige.

35

DK 15451 1 B

14 EKSEMPEL 3

Ifølge eksempel 1 fremstilles diagnostiske hjælpemidler under anvendelse af en vandig opløsning af en stofblan- 5 ding med følgende sammensætning:

Bestanddel Mængde DL-natriumlactat 57,6 mg nicotinamid-adenin-dinucleotid 0,3 mg 10 nitroblå-tetra2oliumchlorid 556,0 ug diaphorase 6,4 ie triethanolamin 39,8 mg vand, renset ad 2,0 15 pH-værdien for opløsningen indstilles på -4,9.

De med denne opløsning opnåede diagnostiske hjælpemidler er anvendelige og holdbare på samme måde som de ifølge eksempel 2 fremstillede hjælpemidler.

20 EKSEMPEL 4

Ifølge eksempel 1 fremstilles diagnostiske hjælpemidler under anvendelse af en vandig opløsning af en stofblan- 25 ding med følgende sammensætning: 30 35

DK 15451 1 B

15

Bestanddel Mængde DL-natriumlactat 57,6 nicotinamid-adenin-dinucleotid 0,3 mg nitroblå-tetrazoliumchlorid 50,0 μς 5 Meldolablåt 2,5 ug triethanolaminhydrochlorid 50,0 mg vand, renset ad 2,0 pH-værdien for opløsningen er 4,0.

10

De med opløsningen opnåede diagnostiske hjælpemidler har samme egenskaber som de ifølge eksemplerne 2 og 3 fremstillede hjælpemidler.

15 EKSEMPEL 5

Ifølge eksempel 1 fremstilles diagnostiske hjælpemidler under anvendelse af en vandig opløsning af en stofblanding med følgende sammensætning: 20

Bestanddel Mængde DL-natriumlactat 37,0 mg nicotinamid-adenin-dinucleotid 2,0 mg nitroblå-tetrazoliumchlorid 490,0 ug 25 phenozinmethosulfat 48,7 ug triethanolamin-HCl 49,0 mg vand, renset ad 2,019 g

Opløsningen indstilles med 3 n saltsyre til en pH-værdi 30 på 4,5.

De opnåede diagnostiske hjælpemidler svarer i egenskaber til hjælpemidlerne ifølge eksemplerne 2-4.

/"V

35

DK 15451 1 B

16 EKSEMPEL 6

Bestanddel Mængde DL-natriumlactat 25,6 mg 5 nicotinamid-adenin-dinucleotid 1,33 mg 3,3'-(3,3'-dimethoxy-4,4'-bisphenylen)-bis-(2,5-p-nitrophenyl-2H-tetrazolium-chlorid 555,0 pg triethanolamin-HCl 49,0 mg 10 vand, renset ad 2,0 g

Opløsningen indstilles med 3 n saltsyre til en pH-værdi på 4,0.

15 EKSEMPEL 7

Ifølge eksempel 1 fremstillede diagnostiske hjælpemidler oplagres i indpakket tilstand i forskellige tidsrum og prøves derpå for deres funktionsdygtighed.

20

Tamponen bliver efter lagertiden i mørke taget ud af sin indpakning og i et reagensglas bragt i berøring med 2 ml af en prøveopløsning.

25 I alle tilfælde drejer det sig for prøveopløsningens vedkommende om en phosphatpufferopløsning med en pH-vær-di på 7,5. En første del af disse 2 ml prøver af prøveopløsningen udtages som ren phosphatpufferopløsning til opnåelse af blindværdier for de forskellige lagrede tam-30 poner. En anden del af 2 ml prøven af prøveopløsningen tilsættes yderligére tre internationale enheder (IE) lactatdehydrogenase (LDH). En tredje del af 2 ml prøverne af prøveopløsningen modificeres med 1% albumin, 0,9% natriumchlorid og 0,1% mucin. En fjerde del af 2 ml prø-35 17

DK 15451 1 B

verne af prøveopløsningen bliver foruden albumin, natri-umchlorid og mucin i de i det foregående nævnte mængder tilsat 3 IE LDH.

5 Ved denne prøvning af funktionsdygtigheden for tamponen in vitro udgør samtlige nævnte 2 ml prøver af prøveopløsningen en efterligning af en kropsvæske.

Den samlede prøvning gennemføres ved stuetemperatur og 10 under udelukkelse af energirigt lys. Hver prøve (tampon og prøveopløsning i reagensglas) bliver 20 minutter efter befugtningen af tamponen med prøveopløsningen bedømt visuelt i henseende til intensiteten af en mulig misfarvning af tamponen og også fotografisk for senere at 15 kunne efterprøve denne bedømmelse.

Resultaterne er sammen fattet i efterfølgende tabel: 20 25 30 35

18 DK 15451 1 B

** l ~r-

~ C

P -H cv + + i—I

(DE "· C + + -ri (i— 3 1—! -H i—i i—1 4—1 P- JO CJ O X Ή -H r-v 3HC03Q -P -P + CL CO X E _J + + ^ σ - c

C P -ri I—I

0 E C Ή ri

i !*- 3 Η -Η -P 3 ^ -H

>i- 3 U ϋ r-' CTI I 4-1 C 3 r-i CO 3 II — ro CL ro X E '— Ql ω ω > c > > S “-—--— -ri -ri -ri 4J3 4-14-)

r—I ro C -ri -H

^ + cn tj ro ro αρ + + >H + + rocoo

0 X + + -H + + C 0 CL CL

OO-Q »—i r-i 4-lr-ir-l P- _I + -ri -ri r-^ -H -ri 0 0 0 0 ø3 4-1-P +-P-P rorororo Q. +++^++ o o o o > c c c c CJI Dl Dl Dl ø---— — rorororo -ri -ri -ri -ri

__l p r-N TJ TJ TI "D

LU 0

CQ Q_ p > II II II II

C ØS

I— P- p

P- CL

3 TI 0

CL C O

c i i i i i i i i ro 3-Q '-r WW 3

-L: ^ C

-P

---OI 0

C r—I

•ri o

C -H

TI u u ρ > > •>-i o® »ro «ro ρ -p ro ό p csl CSI 04 L_ 0 0 Ρ Ρ \ Ρ \ p \ CO £

CJI "CO "(O r-H oCO »H "CO r—I -H

ro E «CO

·——I *——I r—1 r-| CM CM ΙΛ (Λ r-i

C C X

-- 0 CO 0 o i di ro ro »ro

C C O <H

Q C0 -ri p i—( JO

t—i

-EX II II II II

•ri P- ro ό o P -P C ^ I— fflroø. ιΛιΛ ιΛιΛιΛιΛιΛ 1+ + + ^ CJI ·· ·ι λ «s Λ «s *i -—> "—r 4> ipc <f <r <f <f <j <t <t

X O -H O. <4- TJ

19

DK 15451 1 B

Deraf fremgår det, at det diagnostiske hjælpemiddel med en tampon som bærer også er funktionsdygtigt efter 3 I års oplagring. Dette gælder også uafhængigt af, om tamponen består af cellulosefibre eller en blanding af 5 bomuld og cellulosefibre eller alene af bomuldsfibre.

Den ved fremgangsmåden ifølge opfindelsen anvendte bærer behøver ikke ubetinget bestå af fibre. Den kan f.eks. også være sammensat af et skumstof eller et påviklet el-10 ler på anden måde dannet folie. Det er blot nødvendigt, at bæreren er tilstrækkelig hydrofil, så den ved anvendelse af det diagnostiske hjælpemiddel kan optage den legemsvæske, der skal undersøges. Desuden er det vigtigt, at den nævnte stærke binding mellem bæreren og 15 farvestofkomponenterne i stofblandingen indtræder.

Ved fremgangsmåden ifølge opfindelsen bliver det diagnostiske hjælpemiddel fortrinsvis pakket under stærkt formindsket tryk, lys-, fugt- og lufttæt, hvilket hen-20 sigtsmæssigt sker umiddelbart efter frysetørringen i frysetørringsanlægget. En tilgang af luft og fugt kan dog også på anden måde forhindres. F.eks. kan man fylde emballeringshylstret med det deri værende diagnostiske hjælpemiddel med tør nitrogen og lukke. Det er også mu-25 ligt foruden det diagnostiske hjælpemiddel i emballeringshylstret at anbringe et tørremiddel, f.eks. en mo-lekylsigte.

30 35

Claims (4)

1. Fremgangsmåde til fremstilling af et diagnostisk 5 hjælpemiddel, der er beregnet til påvisning af en patho-logisk forhøjet koncentration af dehydrogenaser i væsker fra mennesker, dyr og planter, og som betår af en bærer og en stofblanding, hvorved den til en pH-værdi i det sure område indstillede stofblanding i flydende form un-10 der udelukkelse af DV-bestråling bringes i kontakt med bæreren, hvorefter kombinationen af bærer og stofblanding tørres og indesluttes i et emballeringshylster, der er uigennemtrængeligt for lys, der er energirigere end rødt lys, kendetegnet ved, at den tørrede kom-15 bination af bærer og stofblanding indelukkes i emballagehylstret under opretholdelse af en fugtighedsgrad på under 1% og sikret mod tilgang af fugt.

2. Fremgangsmåde ifølge krav 1, kendetegnet 20 ved, at der som bærer anvendes en tampon, der indeholder cellulosefibre.

3. Fremgangsmåde ifølge et vilkårligt af de foregående krav, kendetegnet ved, at kombinationen af 25 bærer og stofblanding allerede før tørring anbringes i emballeringshylstret, og dette lukkes i et tørringsapparat.

4. Fremgangsmåde ifølge et vilkårligt af de foregående 30 krav, kendetegnet ved, at der som emballeringshylster anvendes et i den ene ende åbent, af metal med stor varmeledningsevne bestående lille rør med en elastisk lukkeprop. 35