DK154667B - Fremgangsmaade til detektering af ornelugt hos individuelle dyrekroppe, fortrinsvis slagtekroppe eller dele deraf - Google Patents

Description

-i-

DK 154667 B

Den' foreliggende opfindelse angår en fremgangsmåde til detektering af ornelugt hos individuelle dyrekroppe, fortrinsvis slagtekroppe eller dele deraf, ved hvilken der bestemmes én eller flere parametre med statistisk sammenhæng med ornelugt.

5 Kødudskæringer fra ukastrerede orner kan under og efter kogning eller stegning udvikle en ubehagelig aroma, såkaldt ornelugt. Ved kogning eller stegning af udskæringer fra kastrerede orner forekommer sådanne lugtgener derimod sjældent. Hangrise kastreres så- . ledes sædvanligvis i en ung alder, for at man senere kan undgå 10 lugtgener ved tilberedningen af kødet i husholdningen.

Kastrationen af hangrisene har dog den ulempe, at fodereffektiviteten bliver lavere, og sygdomshyppigheden forøges, og samtidig fås en formindsket kødprocent i slagtekroppene.

Der har været foreslået metoder til at detektere, om individuelle 15 slagtekroppe vil udvikle orne lugt ved tilberedning af udskæringer deraf, således at det bliver muligt at frasortere disse kroppe inden videreforarbejdning til udskæringer, der er beregnet for detailhandelen, og anvende de frasorterede kroppe industrielt, fx til konserves eller pølsefremstilling, hvor lugtudviklingen vil 20 være uden betydning.

-2-

DK 154667 B

I dansk fremlæggelsesskrift nr. 145.356 foreslås det således, at slagtekroppe af ukastrerede orner sorteres på grundlag af IR-spektrofotome-triske transmissionsdata for en fedtprøve fra kroppen, idet der findes en statistisk sammenhæng mellem en subjektivt bestemt ornelugt hos en 5 prøve fra en slagtekrop og transmittansen for en fedtprøve fra kroppen målt i det infrarøde område. Metoden er imidlertid ikke tilstrækkeligt sikker til, at man alene kan basere sorteringen på metoden, idet der er en ikke ubetydelig risiko for, at der gennem kdntrollen slipper slagtekroppe, der ved tilberedning vil udvikle ornelugt. I over-10 ensstemmelse med dette foreslås det i det nævnte fremlæggelsesskrift, at der bestemmes én eller flere yderligere parametre med statistisk sammenhæng med ornelugt, fx koncentrationen af umættede fedtsyrer i fedtprøven, og at de således opnåede data anvendes sammen med de IR-spektrofotometriske data til detektion af ornelugt i den individuelle 15 slagtekrop. Der er med de beskrevne metoder dog stadig væsentlig risiko for, at udskæringer af slagtekroppe, der er behæftet med orne-lugt, slipper ud i detailhandelen, eller også er de kendte supplerende analyser af en sådan art, at de ikke kan gennemføres i industriel skala. Fx kendes flere metoder til detektion af androstenon, som an-20 tages at udgøre en væsentlig faktor i ornelugt, men disse metoder er langsommelige og arbejdskrævende og kan derfor hverken anvendes hver for sig eller sammen med den i dansk fremlæggelsesskrift nr. 145.356 omhandlede IR-metode til detektion af ornelugt hos slagtekroppe, der fremføres på en slagtelinie.

25 Det er formålet med den foreliggende opfindelse at tilvejebringe en industrielt anvendelig fremgangsmåde af den indledningsvis angivne art, ved hvilken der kan opnås en mere sikker detektion af ornelugt end ved den ovennævnte IR-metode, enten ved anvendelse af fremgangsmåden alene, eller ved anvendelse sammen med andre industrielt anven-30 delige fremgangsmåder til detektion af ornelugt.

-3-

DK 154667 B

Ifølge opfindelsen opfyldes dette formål af en fremgangsmåde, der er ejendommelig ved, at der for den individuelle krop eller del deraf bestemmes spektrofluorometriske data, og de således registrerede data sammenlignes med tidligere registrerede spektrofluorome-5 triske data, som har statistisk sammenhæng med ornelugt.

Det er ved hjælp af spektrofluorometrisk måling ifølge opfindelsen således muligt at detektere, om en individuel dyrekrop er af den art, hvor udskæringer vil udvikle ornelugt under varmebehandling, og denne metode til ornelugtbestemmelse er på grund af hastighed, 10 arbejdsindsats og nøjagtighed direkte anvendelig i forbindelse med slagteriers slagtelinier.

De spektrofluorometriske data for den individuelle krop eller dele deraf kan være fluoroscensen fra en prøve ved én eller flere bølgelængder under bestråling med UV-lys. De spektrofluorometriske data 15 kan således være fluoroscensen ved en eller flere for ornelugt karakteristiske bølgelængder, men omfatter eventuelt også måleresultater fra bølgelængder, der er uden forbindelse med ornelugt, men som fx tjener som reference.

En ud førelsesform af fremgangsmåden ifølge opfindelsen er således 20 ejendommelig ved, at fluoroscensen bestemmes for en eller flere bølgelængder, ved hvilke den har statistisk sammenhæng med orne-lugt. Ved fluoroscensen skal her og i det følgende forstås intensiteten af det fra en belyst prøve isotropt genudstrålede lys ved en eller flere bølgelængder.

25 Fluorescensen, der bestemmes ved denne udførelsesform af fremgangsmåden ifølge opfindelsen, kan være lysintensiteterne ved bestemte 'bølgelængder i forhold til lysintensiteterne hidrørende fra fluoroscensen af en standardprøve. Fluoroscensen kan også være forskellen eller forholdet mellem prøvens lysintensiteter ved flere forud 30 fastlagte bølgelængder, hvoraf nogle eller alle er karakteristiske for ornelugt, medens andre er uden forbindelse med ornelugt og tjener som referenceværdier.

f

DK 154667 B

Inden for bølgelængdeområdet 380-500 nm findes en fluoroscens, der har tydelig sammenhæng med dyrekroppes ornelugt. En udførelsesform af fremgangsmåden ifølge opfindelsen er derfor ejendommelig ved, at fluoroscensen bestemmes for en eller flere forud bestemte 5 bølgelængder inden for området 380-500 nm, hvorved der måles ved mindst en bølgelængde, ved hvilken fluoroscensen har statistisk sammenhæng med ornelugt.

Til ekscitation af prøven ved fremgangsmåden ifølge opfindelsen kan anvendes ultraviolet lys, der indeholder komponenter fra hele det 10 ultraviolette område, men for at reducere indflydelsen fra forstyrrende fluoroscerende stoffer, der ikke har statistisk sammenhæng med ornelugt i dyrekroppe, anvendes fortrinsvis smalbåndet eller monochromatisk UV-lys.

Bølgelængden af det ultraviolette lys vælges hensigtsmæssigt såle-15 des, at der fås den maksimale og/eller mest selektive fluoroscens fra de i dyrekroppen forekommende fluoroscerende stoffer, der har statistisk sammenhæng med ornelugt.

En ud førelsesform af fremgangsmåden ifølge opfindelsen er således ejendommelig ved, at der eksciteres med UV-lys af bølgelængder in-20 den for et snævert bånd beliggende i området 320-420 nm, idet der herved findes tydelige fluoroscenser, hidrørende fra i lugtende kroppe specifikt forekommende forbindelser.

Fremgangsmåden ifølge opfindelsen er af den art, der kan gennemføres på kort tid, fx i løbet af 10-20 minutter, medens slagtekrop-25 pen fortsat behandles på slagtelinien. Ved hjælp af fremgangsmåden ifølge opfindelsen er det derfor på slagteriers slagtelinier muligt løbende at afgøre, om de individuelle slagtekroppe er behæftet med . ornelugt, således at de lugtende kroppe kan frasorteres til fx konservesfabrikation eller pølsemageri, medens de øvrige kroppe kan fø-30 res i kølerum for køling og senere normal forædling, fx til bacon.

* -5-

DK 154667 B

Prøveudtagningen, der er nødvendig for fremgangsmådens gennemførelse, kan ske på et hvilket som helst sted langs slagtelinien, men foretages fortrinsvis ikke længere fremme på linien end, at resultatet af undersøgelsen foreligger inden slagtekroppene når til sor-5 teringsstedet, fx inden indgangen til kølerummet. Hensigtsmæssigt kan prøvetagningen fx ske i forbindelse med måling af slagtekroppens kødprocent (klassificering), således at prøverne kan nå at blive præpareret og analyseret inden kroppen kommer til kølerummet. Prøvetagningen kan udføres manuelt eller halv- eller helautomatisk, 10 fx i forbindelse med anvendelse af klassificeringsudstyr.

Præparationen, analysen og talbehandlingen af analyseresultatet bør udføres halv- eller helautomatisk, da det vil være meget arbejdskrævende manuelt at skulle behandle og bestemme fx 100-400 prøver i timen. For at lette behandlingen af prøvematerialet brin-15 ges dette hensigtsmæssigt på flydende form, fx ved smeltning el-• ler ekstraktion. I flydende form kan automatiske analyser eksempelvis udføres efter det såkaldte "segmented continuous flow"-system, eller ved "flow injection analysis".

Selv om der skal behandles et stort antal prøver pr. time vil der 20 ved passende udformning af analyseapparaturet være tilstrækkelig tid til, at hver prøve kan præpareres inden analysen. En præparation af prøven vil i almindelighed være en forudsætning for en sikker detektion af ornelugt. En udførelsesform af fremgangsmåden i-følge opfindelsen er derfor ejendommelig ved, at de spektrofluord-25 metriske data for den pågældende krop eller del deraf bestemmes på en opløsning, der er fremstillet ved ekstraktion af en kød- og/el-ler spækprøve. Ved anvendelse af en ekstrakt til bestemmelse af de spektrofluorometriske data ifølge opfindelsen vil det Fx ved valg af ektraktionsmiddel være muligt at fraskille stoffer, der ikke 30 har statistisk sammenhæng med ornelugt, men som virker forstyrrende på målingen af de stoffer, som er interessante i forbindelse med ornelugt. Det kan fx være stoffer, der forstyrrer, fordi de har .fluorescens i samme bølgelængdeområde som de stoffer, der skal detekteres ved fremgangsmåden ifølge opfindelsen, eller det kan væ- —6— η DK 154667 Β

Det har derved vist sig, at der ved den omhandlede ekstraktion af kød- og/eller spækprøver tilstrækkelig hurtigt kan præpareres en prøve af en sådan renhed, at det ved hjælp af den omhandlede spektrofluorometriske bestemmelse med tilfredsstil-5 lende sikkerhed kan detekteres, om individuelle dyrekroppe er er behæftet med ornelugt.

Til ekstraktion af de udtagne kød- og/eller spækprøver anvendes opløsningsmidler eller opløsningsmiddelblandinger, som opløser ét eller flere af de fluoroscerende stoffer, som bidrager til 10 ornelugt eller specifikt ledsager dyrekroppe, som er behæftet med ornelugt. Opløsningsmidlerne opløser eller oplukker eventuelt også de bestanddele, hvori disse stoffer er bundet.

Det har vist sig, at der i kød- og/eller spækprøver, som er behæftet med ornelugt, findes for disse prøver specifikke fluoro-15 scerende stoffer, som er opløselige i polære organiske opløsningsmidler.

En udførelsesform og fremgangsmåde ifølge opfindelsen er derfor ejendommelig ved, at de spektrofluorometriske data for den pågældende krop eller del deraf bestemmes på en opløsning, der er 20 opnået ved ekstraktion af en kød- og/eller spækprøve med et ekstraktionsmiddel omfattende et polært organisk opløsningsmiddel, især acetone. For at reducere ekstraktionsmidlets evne til at opløse forstyrrende lipide stoffer, kan der ifølge en udførelsesform af fremgangsmåden anvendes en opløsning, der er opnået ved ekstraktion af en kød- og/eller spækprøve med et ekstrak-25 tionsmiddel omfattende en blanding af et polært organisk opløsningsmiddel og vand, især en blanding af vand og acetone. En opløsningsmiddelblanding kan således bestå af en blanding af acetone og vand, fx i forholdet 2:1 til 10:1.

_7 DK 154667 B

Opløseligheden af de i kød- og/eller spækprøven indeholdte vandopløselige eller delvis vandopløselige stoffer kan være pH-afhængig. De polære opløsningsmidler er derfor fortrinsvis tilsat en buffer, der sikrer reproducerbarheden, optimerer opløseligheden af de for orne-5 lugt ejendommelige stoffer, og/eller nedsætter opløseligheden af u-ønskede stoffer, fx uspecifikke fluoroscerende stoffer eller disper-gerede stoffer.

En udførelsesform af fremgangsmåden ifølge opfindelsen består derfor i, at der til ekstraktionen er anvendt et ekstraktionsmiddel omfat-10 tende buffer, især et ekstraktionsmiddel, der ved hjælp af en buffer er indstillet til pH 7-8. I det angivne pH-interval går for ornelugt karakteristiske stoffer over i ekstraktionsmidlet.

Til ekstraktion af kød- og/eller spækprøver har det således vist sig særlig fordelagtigt at anvende en opløsningsmiddelblanding af acetone 15 og vandig bufferopløsning indstillet til pH 7-8, især omkring 7,5, i-det der herved opløses stoffer, der er karakteristiske for ornelugt, uden at ekstrakten belastes med et stort indhold af fedtstoffer.

Endvidere kan vandfasen af en opløsningsmiddelblanding være tilsat overfladeaktive forbindelser, der forbedrer opløseligheden af de for 20 ornelugt ejendommelige stoffer i vand.

Til ekstraktionen kan anvendes et ekstraktionsmiddel, der som buffer indeholder en vandig opløsning af et organisk bufferstof, fx tris-(hydroxymethyl)-aminomethan, hvorved blandingen samtidig indeholder en overfladeaktiv forbindelse. Bufferopløsningen kan være indstillet 25 til den ønskede pH-værdi ved hjælp af en sædvanlig syre eller base, fx saltsyre eller natriumhydroxidopløsning. Organisk opløsningsmiddel og bufferopløsning kan blandes i forhold, der er tilpasset de stoffer, man specifikt ønsker ekstraheret eller bibeholdt i kød- og/eller » spækprøven, fx kan acetone og bufferopløsning blandes i et forhold 30 på mellem 2:1 og 10:1. Ved ekstraktion af spækprøver anvendes hensigtsmæssigt en blanding., der indeholder forholdsvis meget vand, fx acetone og vand i forholdet 3:1, medens der ved ekstraktion af en kødprøve kan anvendes forholdsvis lidt vand, fx acetone og vand i forholdet 9:1.

-8-

DK 154667 B

For at beskytte oxygen-følsomme stoffer under og efter ekstraktionen af kød- og/eller spækprøven kan der arbejdes under inaktiv atmosfære.

Til ekstraktionsmidlet kan der imidlertid også før, under eller efter ekstraktionen sættes et reduktionsmiddel, som hæmmer omsætningen mel-5 lem luftens oxygen og oxygenfølsomme fluoroscerende stoffer, der er karakteristiske for ornelugt. En udføreisesform af fremgangsmåden ifølge opfindelsen består derfor i, at der til ekstraktionen er anvendt et ekstraktionsmiddel omfattende reduktionsmiddel, og/eller at der til ekstrakten sættes reduktionsmiddel.

10 Ekstraktionen af en kød- og/eller spækprøve kan udføres på sædvanlig måde, fx ved at prøven sønderdeles under blanding med ekstraktionsmidlet, hvorefter blandingen klares, således at uopløst fedt, celledele, bindevæv og lign. fjernes. Ekstrakten kan renses, således at de for ornelugt ejendommelige stoffer, der er blevet ekstra-15 heret, yderligere befries for forstyrrende stoffer.

En udførelsesform af fremgangsmåden ifølge opfindelsen er i overensstemmelse hermed ejendommelig ved, at de spektrofluorometriske data bestemmes på en opløsning, der er opnået ved oprensning af ekstrakten med en blanding af vand og et eller flere upolære organiske opløs-20 ningsmidler. Oprensningen kan foretages ved, at ekstrakten blandes med nævnte flerfaseblanding, hvorved stofferne fordeler sig med forskellig koncentration i faserne. Der opnås således en vis indbyrdes separation mellem de for ornelugt karakteristiske stoffer og forstyrrende stoffer. De spektrofluorometriske data bestemmes på en eller 25 flere af faserne.

Til oprensning af ekstrakten af kød- og/eller spækprøven anvendes fortrinsvis en opløsningsmiddelblanding omfattede buffer, som ændrer den vandige fases pH-værdi. Der opnås således yderligere isolation af de stoffer, hvis fluoroscens skal måles ved fremgangsmåden iføl-30 ge opfindelsen, idet de uønskede pH-følsomme stoffer fx føres over i en fase, der ikke anvendes til den spektrofluorometriske måling.

-9-

DK 154667 B

pH-Værdien for den vandige fase af den opløsningsmiddelblanding, der kan anvendes til rensning af .ekstrakten, ligger hensigtsmæssigt fra 4-6. En udførelsesform af fremgangsmåden ifølge opfindelsen består derfor i, at der til oprensningen af ekstrakten 5 anvendes en opløsningsmiddelblanding omfattende buffer, især en blanding, der ved hjælp af bufferen er indstillet til pH 4-6.

Til rensning af en acetone-buffer-ekstrakt kan således fx anvendes et tofasesystem af chloroform og vandig bufferopløsning med pH 5, hvorved der sker en pH-påvirket fordeling af stoffer mel-10 lem den vandige acetonefase og chloroform-acetone-fasen.

En udførelsesform af fremgangsmåden er ejendommelig ved, at de spektrofluorometriske data bestemmes på den vandige fase, fremkommet ved oprensning af ekstrakten med en blanding af vand og et eller flere upolære organiske opløsningsmidler. Der findes 15 nemlig for ornelugt ejendommelige, fluoroscerende stoffer, som er opløselige i vand eller blandinger af vand og polære organiske opløsningsmidler.

Visse af de for ornelugt uspecifikke stoffer, som findes i den vandige fase, har vist sig at udvise en fluoroscens, der er pH-20 følsom. Fasens pH-værdi indstilles derfor fortrinsvis inden den spektrofluorometriske måling, således at stoffernes indflydelse bliver mindst, og der fås den maksimale og/eller mest selektive fluoroscens af stoffer, der er karakteristiske for ornelugt.

I overensstemmelse hermed er en udførelsesform af fremgangsmåden 25 ifølge opfindelsen ejendommelig ved, at de spektrofluorometriske data bestemmes på en vandig ekstrakt, der er indstillet til en pH-værdi, der er mindre end 3, især ca. 1. Ved denne udførelses-form af fremgangsmåden ifølge opfindelsen kan man væsentligt reducere forstyrrelsen fra et for ornelugt uspecifikt B-vitaminag-30 tigt stof.

-10-

DK 154667 B

Der findes også for ornelugt ejendommelige fluoroscerende stoffer, som er opløselige i upolære organiske opløsningsmidler. En udførelsesform af fremgangsmåden ifølge opfindelsen består derfor i, at de spektro-fluorometriske data bestemmes på en eller flere af de organiske faser, 5 der er fremkommet ved oprensning af ekstrakten med en blanding af vand og et eller flere upolære organiske oplysningsmidler. Spektrofluorome-triske data kan således bestemmes på den chloroformfase, der fås ved behandling af ekstrakten med en opløsningsmiddelblanding af vandig bufferopløsning og chloroform.

10 I overensstemmelse med ovennævnte udførelsesformer af fremgangsmåden ifølge opfindelsen kan de spektrofluorometriske data bestemmes på såvel vandige som organiske faser, der opnås ved oprensning af ekstrakten med en blanding af vand og et eller flere upolære organiske opløsningsmidler. Fluoroscerende stoffer, der er karakteriske for orne-15 lugt, og som er opløselige i den vandige fase, kan således detekteres i denne fase, medens andre karakteristiske fluoroscerende stoffer, der enten er uopløselige i vand eller camoufleres i denne fase, kan detekteres i en af de organiske faser.

De ved fremgangsmåden ifølge opfindelsen bestemte spektrofluorometriske 20 data af en ekstrakt af en kød- og/eller spækprøve findes ved hjælp af et apparatur, der er indrettet til at måle de ornelugt ledsagende eller bestemmende stoffer ved en spektrofluorometrisk måling. Apparatet kan således indeholde et spektrofluorometer, der kan ekscitere og måle prøven, fortrinsvis ved flere bølgelængder eller endog ved scanning af emissionsspektret fra prøven, og det kan desuden være forsynet med hjælpeindretninger, såsom polarisationsfiltre.

-11-

DK :154667 B

Det ved fremgangsmåden ifølge opfindelsen anvendte apparatur kan endvidere omfatte en styre- og beregningsenhed, hvori det ved hjælp af et program afgøres, hvilke parametre der skal bestemmes, og hvilken indstilling spektrofluorometeret skal have under den aktuelle måling, og 5 hvori de målte date endvidere sammen med eventuelle andre data,-såsom oplysning om vægt, successivt lagres og efter indsamling af det fornødne antal data behandles i overensstemmelse med en forud opstillet model til afgørelse af, om dyrekroppen er behæftet med ornelugt.

På tale som parameter, der kan anvendes sammen med de på prøven målte 10 spektrofluorometriske data i apparatets beregningsenhed, kommer fx de IR-spektraldata, der måles i overensstemmelse med den fremgangsmåde, der beskrives i dansk fremlæggelsesskrift nr. 145.356.

Ved fremgangsmåden ifølge opfindelsen anvendes imidlertid fortrinsvis en ekstrakt af en kød- og/eller spækprøve. Det vil derfor være en for-15 del at bestemme yderligere parametre på samme ekstrakt eller en del af ekstrakten, der anvendes til bestemmelse af spektrofluorometriske data.

Fx kan ornelugt detekteres i overensstemmelse med den i dansk patent-ans. nr. 3981/81 beskrevne fremgangsmåde, eller de derved opnåede data kan sammen med de spektrofluorometriske data indgå i en talanalyse i 20 beregningsenheden, således at det med større sikkerhed er muligt at detektere, om dyrekroppen er behæftet med ornelugt, uden at der derved kræves en væsentlig arbejdsforøgelse for måling og præparation af prøven.

En fordelagtig udførelsesform af fremgangsmåden ifølge opfindelsen er 25 derfor ejendommelig ved, at der som yderligere parameter med statistisk sammenhæng med ornelugt i overensstemmelse med den i dansk patentans. nr. 3981/81 beskrevne fremgangsmåde, bestemmes spektrofotometriske data for en opløsning, der er fremstillet ved ekstraktion af en kød og/eller spækprøve fra den pågældende krop eller del deraf, og omsætning af denne 30 ekstrakt med en farvedanner for en eller flere i dyrekroppen forekommende forbindelser, der har statistisk sammenhæng med ornelugt, hvorefter de således registrerede data sammenlignes med forud fastlagte spektrofotometriske data, der har statistisk sammenhæng med ornelugt.

-12-

DK 154667 B

Ved denne udførelsesform af fremgangsmåden ifølge opfindelsen kan ekstrakten således deles i to eller flere portioner, hvoraf en anvendes til spektrofluorometrisk måling, medens andre anvendes til omsætning med farvedannere, efterfulgt af spektrofotometrisk måling.

5 Den ved omsætningen anvendte farvedanner kan derved også være en sådan, der danner en fluoroscerende forbindelse, hvorved målingen på den omsatte prøve kan udføres i samme apparat som den spektrofluoro-metriske måling på den uomsatte prøve.

En ekstrakt, der er opnået ved ekstraktion af en prøve med en blan-10 ding omfattende vand og acetone, giver tydelig farvereaktion med p-dimethylaminobenzaldehyd, når prøven udviser ornelugt. En fordelagtig udføreisesform af nævnte spektrofotometriske bestemmelse er derfor ejendommelig ved, at spektrofotometriske data bestemmes på en opløsning, der er fremstillet ved ekstraktion med en opløsnings-15 middelblanding omfattende vand og acetone, og som er omsat med p-dimethylaminobenzaldehyd.

I overensstemmelse med det ovenstående kan der foretages forskelligartede målinger på kød- og/eller spækprøver, således at ét eller flere med ornelugt associerede stoffer og deres koncentration kan be-20 stemmes med større sikkerhed. Behandles alle måleresultaterne i beregningsenheden, og sammenholdes resultaterne med den indbyggede model, kan det således med væsentligt større sikkerhed end ved enkelt-målinger afgøres, om den individuelle dyrekrop, der undersøges, vil udvise ornelugt ved tilberedning hos forbrugeren og derfor bør fra-25 sorteres til en industriel produktion, hvor lugten vil være uden betydning.

»

DK 154667B

-13-

Selv om fremgangsmåden ifølge opfindelsen hovedsagelig er beskrevet i forbindelse med sortering af slagtekroppe af ukastrerede ornegrise, vil metoden også kunne anvendes til sortering af slagtekroppe af sogrise på slagtelinien, hvis det er ønskeligt. Undersøgelse af såvel orner som sogrise for ornelugt vil dog i gennemsnit "fordoble 5 prøvefrekvensen.

Endvidere vil det også være muligt at anvende fremgangsmåden ifølge opfindelsen i forbindelse med et avlsarbejde sigtende på udskillelse af de avlsorner og -søer, der fortrinsvis giver anledning til ornelugt i afkommet. Avlsarbejdet kan være baseret alene på den orne-10 lugt, der findes hos afkommet. Det vil dog også være muligt at foretage udvælgelsen under hensyn til ornelugten af såvel forældrepar som afkom, eventuelt allerede i levende live.

Fremgangsmåden ifølge opfindelsen illustreres nærmere i nedenstående eksempler.

15 Eksempel 1

Fra slagtekroppe af ukastrerede ornegrise udtages prøver af brystflæsk eller rygspæk, der er tilstrækkeligt store til, at de hver kan deles i flere mindre prøver til lugtbedømmelse og .fremstilling af ekstrakt.

Lugtbedømmelse 20 Ca. 5 g spækprøve opvarmes langsomt i en kolbe på varmeplade. Under opvarmningen bedømmer et lugtpanel på tre til fire øvede personer graden af ornelugt fra prøven og tildeler den én af følgende karakterer: 0 ingen ornelugt 1/2 tvivlsom 25 1 svag ornelugt 2 nogen ornelugt 3 stærk ornelugt -14-

DK 154667 B

Fluoroscensmåling på kødekstrakt

En 0,2 M vandig opløsning af tris-(hydroxymethyl)-aminomethan indstillet til pH 7,5 blandes med actone i forholdet 1:9. 5 g kød afvejes og v mixes med 10 ml af denne blanding under sønderdeling af prøven, hvor-5 efter blandingen filtreres. Filtratet suppleres med tris-acetonebuffer til et rumfang på 10 ml.

En 0,1 M vandig opløsning af kaliumhydrogenphthalat indstilles til pH

5,0 med 0,1 M vandig natriumhydroxidopløsning. 5 ml af denne buffer blandes med 5 ml af det opnåede filtrat og 5 ml chloroform, og blandin- « 10 gen centrifugeres ved 1700 x G i 10 minutter. Den vandige fase suges derefter fra og tilsættes en dråbe (0,05 ml) koncentreret svovlsyre, således at pH indstiller sig på ca. 1. \

Et spektrofluorometer af fabrikat Aminco SPF 500 indstilles ved hjælp af en 0,1 mg/1 quininsulfatopløsning i 0,1 N svovlsyre til måleværdi 15 10,0 ved Pi (ex) = 350 nm, og P (em) = 450 nm. Standardens måleværdi ved 2 (ex) = 367 nm og P (em) = 460 nm er 5,73-5,83.

Prøvens fluoroscens måles herefter på det indstillede spektrofluorometer ved P (ex) = 367 nm og Pi'(em) = 460 nm, idet målingen kontrolleres med måling på en samtidigt fremstillet blindværdi.

20 Resultater

Resultaterne af målinger på kødekstrakter fremgår åf nedenstående tabel I, hvori der endvidere er anført de tilsvarende resultater fra lugtbedømmelsen. Det fremgår, at der er tydelig sammenhæng mellem lugtbedømmelsen og fluoroscensmålinger fra samme orneprøve. Der er således fun-25 det en korrelationskoefficient mellem lugtbedømmelsen og fluoroscensmålinger på 0,72.

DK 154667 B

-15-

Tabel I

Prøve Lugt- Fluoro- Prøve Lugt- Fluoro- Prøve Lugt-, Fluoro- nr. bedøm, soens nr. bedøm, soens nr. bedøm, soens 1 3,0 1,50 15 1,0 1,19 29 0,0 0,77 5 2 0,0 0,87 16 2,0 1,25 30 0,5 0,67 3 . 3,0 1,34 17 3,0 0,96· 31 0,0 0,76 4 3.0 1,30 18 3,0 1,03 32 1,0 10,92 5 1,0 0,92 19 2,0 0,92 33 0,5 0,76 6 0,0 0,79 20 2,0 0,93 34 0,5 *0,63 10 7 0,0 1,01 23 0,0 0,79 35 0,5 0,60 8 0,0 0,96 22 2,0 0,92 36 0,5 0.61 9 0,0 0,99 23 -3,0 1,22 37 0,5 0,92 10 3,0 1,27 24 0,5 0,92 38 0,5 0,99 11 3,0 1,26 25 2,0 0,85 39 2,0 1,05 15 12 0,5 0,74 26 0,5 1,00 40 0,5 0,72 13 1,0 0,77 27 0,5 0,75 14 2,0 1,13 28 0,0 0,71

Eksempel 2

Fra slagtekroppe af ukastrerede ornegrise udtages prøver af bcyst-20 flæsk eller rygspæk på samme måde som i eksempel 1, og lugten %edøm-mes efter den beskrevne metode.

Fluoroscensmåling på spækefcstrakt

En 0,2 M vandig opløsning af tris-(hydroxymethyl)-aminomethan Vindstilles til pH 7,5 og tilsættes 1¾ 0,1 M natriumsulfitopløsning. Op-25 løsningen blandes med acetone i forholdet 1:3. 5 g spæk afvejes og mixes med 10 ml af denne blanding under sønderdeling af prøven,, hvorefter blandingen filtreres. Filtratet suppleres med tris-acetone-buffer til et rumfang på TO ml.

» 5 ml af samme phthalat-buffer som anvendt i eksempel 1 blandes med 30 5 ml af det opnåede filtrat og 5 ml chloroform, og blandingen centrifugeres ved 1700 x G i 10 minutter. Den vandige fase bortkastes, mens’ chloroformfasen (ekstrakten) frasuges til spektrofluorometrisk måling.

*· -16-

DK 154667 B

Spektrofluorometret indstilles med quininsulfat som angivet i eksempel '1. Standardens måleværdi ved /)j[ex) = 360 nm og/\(em) = 426 nm er 6,40-6,50, medens måleværdien ved(ex) = 360 nm og7l (em) = 405 nm er 2,60-2,70.

5 Prøvens fluoroscens måles herefter på det indstillede spektrofluorome-ter ved7^ (ex) = 360 nm og7¾(em) = 426 nm, samt ved 7\(ex) = 360 nm og 7}(em) = 405 nm, og målingerne kontrolleres med målinger på en samtidigt fremstillet blindværdi. Fluoroscensen angives som differencen af målingerne ved de to emissionsbølgelængder.

10 Farvedannelse, spektrofotometrisk måling

Efter den i eksemplet i dansk patentans. nr. 3981/81 beskrevne fremgangsmåde udføres spektrofotometrisk bestemmelse på ekstrakter, der er fremstillet af de ovenfor undersøgte spækprøver, og som er omsat med farvereagens.

15 I korthed består fremgangsmåden i, at der af en tris-acetoneekstrakt af prøven udtages 1 ml, der blandes med 1 ml af en opløsning af 0,5 g 4-dimethylaminobenzaldehyd i 20 ml stærk svovlsyre, tilsat 30 ml 99%'s ethanol. Efter fem minutters henstand måles prøvens absorption på spektrofotometer ved 580 nm, og målingen kontrolleres med måling på en 20 samtidigt fremstillet blindværdi. Prøvens indhold af skatolækvivalenter aflæses på en standardkurve, der er opnået ved tilsvarende måling af absorbansen på opløsninger, der indeholder en kendt mængde skatol, og som er omsat med farvereagenset.

Resultater 25 Resultaterne af målinger på spækprøver fremgår af nedenstående tabel II, hvor der endvidere er anført de tilsvarende resultater fra lugtbedømmelsen. Det ses, at der er en tydelig sammenhæng mellem prøvernes lugtbedømmelse og den spektrofluorometriske måling, og at der ligeledes er sammenhæng med resultaterne fra den fotometriske måling.

30 Sammenhængen er endnu tydeligere, når lugtbedømmelsen sammenlignes med summen af fluoroscens og skatolækvivalenter.

-17- DK 154667 B

Der er således fundet en multipel korrelation på 0,79 mellem på den ene side lugtbedømmelsen, og på den anden side en kombination af fluoroscens og skatolækvivalenter. Den partielle korrelation- mellem fluoroscens og lugtbedømmelse (ved konstant skatolækvivalentniveau) 5 er beregnet til 0,51, medens den partielle korrelation mellem-ska-tolækvivalenter og lugtbedømmelse (ved konstant fluoroscensniveau) er beregnet til 0,77.

Tabel II

(1) (2) (1) (2)

Prøve- Lugt- Fluoro- Skat.æk. Sum Prøve- Lugt- Fluoro- Skat.æk. Sum nr. bedøm, scens (ppm) (1+2) nr. bedøm, soens (ppm) (1+2) 1 0,9 -0,11 0,01 -0,10 22 0,8 -0,02 0,04 0,02 2 1,5 -0,07 0,01 -0,06 23 1,3 -0,05 0,07 0,02 ✓ 3 1,3 -0,04 0,00 -0,04 24 1,0 -0,08 0.08 0,00 4 1,2 -0,10 0,06 -0,04 25 1,3 -0,10 0,08 -0,02 5 0,5 -0,12 0,01 -0,11 26 3,0 -0,03 0,40 0,37 6 1,4 -0,04 0,04 0,00 27 3,0 -0,04 0,21 0,17 7 2,0 0,04 0,07 0,11 28 1,5 0,09 0,04 0,13 8 1,2 -0,01 0,05 0,04 29 2,0 -0,04 0,04 0,00 9 0,2 -0,09 0,04 -0,05 30 2,0 -0,05 0,14 0,09 10 1,3 -0,07 0,09 0,02 31 -3,0 -0,13 0,62 0,49 11 0,7 -0,03 0,09 0,06 32 0,8 0,00 0,01 0,01 12 0,7 -0,12 0,04 -0,08 33 1,0 0,06 0,04 0,10 13 0,7 -0,06 0,06 0,00 34 0,5 -0,05 0,04 -0,01 14 0,0 -0,13 ’ 0,04 -0,09 35 1,0 -0,09 0,01 -0,08 15 1,7 -0,05 0,09 0,04 36 1,6 0,04 0,08 0,12 16 1,8 -0,02 0,15 0,13 37 0,9 -0,03 0,05 0,02 17 2,5 0,00 0,27 0,27 38 0,3 0,01 0,04 - 0,05 18 2,8 -0,08 0,37 0,29 39 0,3 -0,02 0,06 0,04 19 3,0 0,13 0,07 0,20 40 1,3 -0,05 0,05 0,00 20 1,8 -0,07 0,10 0,03 41 1,5 0,05 0,03 0,08 21 1,8 -0,01 0,12 0,11

Oprindelsen af det anvendte materiale af slagtekroppe udviser :store variationer, idet der indgår prøver af otte sogrise som kontrol (prø-30 ve nr. 1, 2, 9, 12, 14, 37, 39 og 40), og orneprøverne hidrører fra flere forskellige producentbesætninger og forskellige fodringssyste-mer. Metoden kan således anses at være robust over for variations-kilder af den nævnte art.

Claims (17)

1. Fremgangsmåde til detektering af ornelugt hos individuelle dyrekroppe, fortrinsvis slagtekroppe eller dele deraf, ved hvilken der bestemmes én eller flere parametre med statistisk sammenhæng med ornelugt, kendetegnet ved, at der for den individuelle krop eller del 5 deraf bestemmes spektrofluorometriske data, og de således registrerede data sammenlignes med tidligere registrerede spektrofluorometriske data, som har statistisk sammenhæng med ornelugt.

2. Fremgangsmåde ifølge krav 1, kendetegnet ved, at fluor- __ oscensen bestemmes for én eller flere bølgelængder, ved hvilke den har 10 statistisk sammenhæng med ornelugt.

3. Fremgangsmåde ifølge krav 1-2, kendetegnet ved, at fluor-oscensen bestemmes for en eller flere forud bestemte bølgelængder inden for området 380-500 nm, hvorved der måles ved mindst en bølgelængde, ved hvilken fluoroscensen har statistisk sammenhæng med ornelugt. .

4. Fremgangsmåde ifølge krav 1-3, kendetegnet ved, at der eksciteres med UV-lys af bølgelængder inden for et snævert bånd beliggende i området 320-420 nm.

5. Fremgangsmåde ifølge krav 1-4, kendetegnet ved, at de spektrofluorometriske data for den pågældende krop eller del deraf be- 20 stemmes på en opløsning, der er fremstillet ved ekstraktion af en kød-og/éller spækprøve.

6. Fremgangsmåde ifølge krav 5, kendetegnet ved, at de spektrofluorometriske data for den pågældende krop eller del deraf bestemmes på en opløsning, der er opnået ved ekstraktion af en kød- og/ 25 eller spækprøve med et ekstraktionsmiddel omfattende et polært organisk * opløsningsmiddel, især acetone. -19- DK 154667 B

7. Fremgangsmåde ifølge krav 6, kendetegnet ved, at der anvendes en opløsning, der er opnået ved ekstraktion af en kød- og/ eller spækprøve med et ekstraktionsmiddel omfattende en blanding af et polært organisk opløsningsmiddel og vand, især en blanding af 5 vand og acetone.

8. Fremgangsmåde ifølge krav 6-7, kendetegnet ved, at der til ekstraktionen er anvendt et ekstraktionsmiddel omfattende:buffer, især et ekstraktionsmiddel, der ved hjælp af bufferen er indstillet til pH 7-8.

9. Fremgangsmåde ifølge krav 5-8, kendetegnet ved, at der til ekstraktionen er anvendt et ekstraktionsmiddel omfattende reduktionsmiddel, og/eller at der til ekstrakten sættes reduktionsmiddel.

10. Fremgangsmåde ifølge krav 5-9, kendetegnet ved, at de spektrofluorometriske. data bestemmes på en opløsning, der er opnået 15 ved oprensning af ekstrakten med en blanding af vand og et eller flere upolære organiske opløsningsmidler.

11. Fremgangsmåde ifølge krav 10, kendetegnet ved, at der til oprensingen af ekstrakten anvendes en blanding omfattende buffer, især en blanding, der ved hjælp af bufferen er indstillet til pH 4-6.

12. Fremgangsmåde ifølge krav 10-11, kendetegnet ved, at de spektrofluorometriske data bestemmes på den vandige fase fremkommet ved oprensningen af ekstrakten med en blanding af vand og et eller flere upolære organiske opløsningsmidler.

13. Fremgangsmåde ifølge krav 5-12, kendetegnet ved, at 25 de spektrofluorometriske data bestemmes på en vandig ekstrakt, der er indstillet til en pH-værdi mindre end 3, især pH ca. 1.

14. Fremgangsmåde ifølge krav 10-11, kendetegn-et ved, at -de spektrofluorometriske data bestemmes på en eller flere af de organiske faser, der er fremkommet ved oprensning af ekstrakten med en 30 blanding af vand og et eller flere upolære organiske opløsningsmidler. -20- DK 154667 B

15. Fremgangsmåde ifølge krav 5-14, kendetegnet ved, at de spektrofluorometriske data bestemmes på såvel vandige som organiske faser, fremkommet ved oprensning af ekstrakten med en blanding af vand og ét eller flere upolære organiske opløsningsmidler.

16. Fremgangsmåde ifølge krav 1-15, kendetegnet ved, at der som yderligere parameter med statistisk sammenhæng med ornelugt bestemmes spektrofotometriske data for en opløsning, der er fremstillet ved ekstraktion af en kød- og/eller spækprøve fra den pågældende krop eller del deraf, og omsætning af denne ekstrakt med en farvedan-10 ner for en eller flere, i dyrekroppe forekommende forbindelser, der har statistisk sammenhæng med ornelugt, hvorefter de således regi-strede data sammenlignes med forudfastlagte spektrofotometriske data, der har statistisk sammenhæng med ornelugt.

17. Fremgangsmåde ifølge krav 16, kendetegnet ved, at 15 spektrofotometriske data bestemmes på en opløsning, der er fremstillet ved ekstraktion med en opløsningsmiddelblanding omfattende vand og acetone, og som er omsat med p-dimethylaminobenzaldehyd. HBC/TF