DK154840B - Fremgangsmaade til magnetisk separering af celler, bakterier og vira og mikrokugler til brug ved fremgangsmaaden - Google Patents

Fremgangsmaade til magnetisk separering af celler, bakterier og vira og mikrokugler til brug ved fremgangsmaaden Download PDF

Info

Publication number
DK154840B
DK154840B DK083580AA DK83580A DK154840B DK 154840 B DK154840 B DK 154840B DK 083580A A DK083580A A DK 083580AA DK 83580 A DK83580 A DK 83580A DK 154840 B DK154840 B DK 154840B
Authority
DK
Denmark
Prior art keywords
microspheres
protein
parts
albumin
antibodies
Prior art date
Application number
DK083580AA
Other languages
English (en)
Other versions
DK154840C (da
DK83580A (da
Inventor
Andrew E Senyei
Kenneth J Widder
Original Assignee
Kendrew Biosystems Inc
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Family has litigation
First worldwide family litigation filed litigation Critical https://patents.darts-ip.com/?family=21774226&utm_source=google_patent&utm_medium=platform_link&utm_campaign=public_patent_search&patent=DK154840(B) "Global patent litigation dataset” by Darts-ip is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 International License.
Application filed by Kendrew Biosystems Inc filed Critical Kendrew Biosystems Inc
Publication of DK83580A publication Critical patent/DK83580A/da
Publication of DK154840B publication Critical patent/DK154840B/da
Application granted granted Critical
Publication of DK154840C publication Critical patent/DK154840C/da

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N7/00—Viruses; Bacteriophages; Compositions thereof; Preparation or purification thereof
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
    • A61K35/12—Materials from mammals; Compositions comprising non-specified tissues or cells; Compositions comprising non-embryonic stem cells; Genetically modified cells
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N1/00—Microorganisms; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
    • C12N1/02—Separating microorganisms from their culture media
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
    • G01N33/543—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor with an insoluble carrier for immobilising immunochemicals
    • G01N33/54313—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor with an insoluble carrier for immobilising immunochemicals the carrier being characterised by its particulate form
    • G01N33/54326—Magnetic particles
    • G01N33/5434—Magnetic particles using magnetic particle immunoreagent carriers which constitute new materials per se
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
    • G01N33/543—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor with an insoluble carrier for immobilising immunochemicals
    • G01N33/544—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor with an insoluble carrier for immobilising immunochemicals the carrier being organic
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12M—APPARATUS FOR ENZYMOLOGY OR MICROBIOLOGY; APPARATUS FOR CULTURING MICROORGANISMS FOR PRODUCING BIOMASS, FOR GROWING CELLS OR FOR OBTAINING FERMENTATION OR METABOLIC PRODUCTS, i.e. BIOREACTORS OR FERMENTERS
    • C12M47/00—Means for after-treatment of the produced biomass or of the fermentation or metabolic products, e.g. storage of biomass
    • C12M47/04—Cell isolation or sorting
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2710/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA dsDNA viruses
    • C12N2710/00011—Details
    • C12N2710/16011—Herpesviridae
    • C12N2710/16051—Methods of production or purification of viral material
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N2333/00—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature
    • G01N2333/195—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature from bacteria
    • G01N2333/305—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature from bacteria from Micrococcaceae (F)
    • G01N2333/31—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature from bacteria from Micrococcaceae (F) from Staphylococcus (G)
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N2333/00—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature
    • G01N2333/435—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature from animals; from humans
    • G01N2333/76—Assays involving albumins other than in routine use for blocking surfaces or for anchoring haptens during immunisation
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N2446/00—Magnetic particle immunoreagent carriers
    • G01N2446/20—Magnetic particle immunoreagent carriers the magnetic material being present in the particle core
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N2446/00—Magnetic particle immunoreagent carriers
    • G01N2446/30—Magnetic particle immunoreagent carriers the magnetic material being dispersed in the polymer composition before their conversion into particulate form
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N2446/00—Magnetic particle immunoreagent carriers
    • G01N2446/80—Magnetic particle immunoreagent carriers characterised by the agent used to coat the magnetic particles, e.g. lipids
    • G01N2446/84—Polymer coating, e.g. gelatin
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
    • Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10S436/00—Chemistry: analytical and immunological testing
    • Y10S436/828—Protein A

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • General Physics & Mathematics (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Developmental Biology & Embryology (AREA)
  • Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
  • Immobilizing And Processing Of Enzymes And Microorganisms (AREA)
  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
  • Hard Magnetic Materials (AREA)
  • Geophysics And Detection Of Objects (AREA)

Description

χ DK 154840 B
Opfindelsen angår en fremgangsmåde til separering af en valgt population af celler, bakterier eller vira fra en blandet population deraf samt mikrokugler til brug ved fremgangsmåden.
En almen fremgangsmåde til magnetisk sortering af celler, bak-5 terier og vira er beskrevet i US patentskrift nr. 3.970.518.
Ved denne fremgangsmåde bringes uovertrukne partikler af et magnetisk materiale såsom jernoxid i kontakt med en højkoncentrerede flydende dispersion af det selektive antistof,og efter at tilstrækkeligt antistof er vedhæftet de magnetiske par-10 tikler^ bringes de overtrukne partikler i kontakt med den blandede population, der skal fraktioneres, idet den valgte celle eller lignende binder til de magnetiske partikler, og de bundne celler separeres så magnetisk fra resten af populationen. Som et yderligere trin kan de valgte celler separeres fra det mag-15 netiske materiale ved anvendelsen af en spaltningsmiddelopløsning og magnetisk fjernelse af de magnetiske partikler.
Selv om der i litteraturen er rapporter, der beskriver anvendelsen af magnetiske mikrokugler ved cellesortering, er der 20 ingen litteratur, som godtgør, at uovertrukne magnetiske partikler kan bringes til effektivt at binde antistoffer. I de beskrevne fremgangsmåder er partiklerne af magnetisk materiale indeholdt i mikrokugler dannet af polymere, der kan kobles kemisk til antistoffer. Jf. f.eks.: Molday et al, Nature, 268, 25 437 (1977), KOrnick et al, Science, 200, 1074 (1978) og Antoi ne et al, Immunochemistry, 15, 443 (1978). Disse referencer beskriver magnetisk følsomme mikrokugler dannet af acrylatpo-lymere, såsom hydroxyethylmethacrylat,eller polyacrylamid-agarosemikrokugler. Sådanne mikrokugler kan kemisk kobles 30 til antistoffer med glutaraldehyd eller et andet dialdehyd.
Som beskrevet af de nævnte Molday (1977) og Kornick litteratursteder omfatter en fremgangsmåde den kemiske vedhæftning af diaminoheptanafstandsgrupper til mikrokuglerne, som så bindes kemisk til antistofferne ved hjælp af glutaraldehydreak-35 tion. Selv om effektiv binding af antistofferne kan opnås ^ 2
DK 154 840 B
er sådanne fremgangsmåder vanskelige, da aggregation af mikrokugler let kan optræde^og fremstillingsmetoden er tidsrøvende. Reaktionen til vedhæftning af afstandsgrupper kan således f.eks. kræve fra 5-12 timer kemisk reaktionstid og efterføl-5 gende dialyse til fjernelse af reagensoverskud. Kobling af antistofferne kan så kræve andre 12-24 timer efterfulgt af dialyse til fjernelse af overskud af koblingsmiddel. Yderligere kan sådanne antistofreagenser ikke anvendes effektivt, da det sædvanligvis er nødvendigt, at der er et overskud af antistof-10 fer til stede under den kemiske kobling.
En anden ulempe ved magnetisk partikel- eller mikrokuglesepa-reringsmetoder, som er beskrevet i'teknikken, er, at antistofferne er hæftet til mikrokuglerne på tilfældig måde. Antigen-15 binding optræder gennem antistoffernes Fab-områder, som er i de ydre dele af armene. Med tilfældig vedhæftning af antistofferne kan en eller begge Fab-armene være utilgængelige for antigenbinding. Et overskud af antistof skal således anvendes for at sikre, af.de overtrukne mikrokugler effektivt binder 20 til antigenerne,, som er forbundet med cellerne eller andre stoffer, der skal sorteres.
Den foreliggende opfindelse udnytter stafylokokkisk protein A til at undgå begrænsningerne ved de hidtil i teknikken kendte 25 magnetiske sorteringsmetoder,som beskrevet ovenfor. Det er kendt, at stafylokkisk protein A selektivt binder til antistoffer via Fc-området af antistofferne, som er placeret i haledelene af antistofferne langt væk fra Fab-armene. Se Fors= gren et al, J. Immunol., 99, 19 (1967). Hidtil er denne egen-30 skab ved protein A imidlertid ikke blevet anvendt til at dan ne magnetiske mikrokugler. Protein A er blevet koblet til sepharoseperler (tværbundne agarosegeler) til frembringelse af et søjlemateriale med immunoglobulinbindende egenskaber. Søjlen kan anvendes til affinitetskromatografi, f.eks. af 35 IgG-fraktionen af serum. Sådanne kromatografiske søjlemate rialer er i handlen.
Protein A er også blevet anvendt ved fremgangsmåder til celle-
DK 154840 B
3 separering ved hjælp af densitetgradientcentrifugering. Se f.eks. Ghetie et al, Scand. J. Immunol., 4, 471 (1975). I en typisk fremgangsmåde overtrækkes fåreerythrocytter med protein A ved hjælp af CrCl^-koblingjog de overtrukne erythrocyt-5 ter bringes så i kontakt med muselymfocytter, som forud er ble vet omsat med antistoffer til fremstilling af celleoverflader til binding til protein A, hvilket resulterer i rosetdannelse af lymfocytterne rundt om erythrocytterne. De resulterende rosetformede celler udvindes ved densitet-gradient—centrifu-10 gering.
Ifølge den foreliggende opfindelse bliver i modsætning til kendte fremgangsmåder magnetisk følsomme mikrokugler fremstillet med protein A forbundet med overfladerne derafjog de re- 3-5 suiterende mikrokugler omsættes først med de valgte antistoffer før mikrokuglerne anvendes til celleseparering. Med de ved fremgangsmåden ifølge opfindelsen anvendte mikrokugler anbringes antistofferne derved i orienteret vedhæftning på deres udvendige overflader med Fab-armene af antistofferne for-20 løbende udad. Effektiviteten af mikrokuglerne til antigen binding og anvendelse i magnetiske sorteringsmetoder gøres derved så stor som muligt. Dette forøger i høj grad effektiviteten, hvormed de valgte antistoffer kan anvendes. Det eliminerer behovet for kemisk kobling af antistofferne.
25
Ved en foretrukket udførelsesform fremstilles mikrokuglerne ved at blande protein A med en polymer grundmasse, som ikke tilslører antistofbindingsstederne af protein A.
De resulterende mikrokugler med protein A i de udvendige 30 overflader deraf kræver ikke kemisk kobling af protein A til forud dannede mikrokugler. Albumin viser sig at være en særligt velegnet grundmas.se til fremstilling af sådan- , ne mikrokugler. Når mikrokuglerne dannes af en vandig suspension af albumin, protein A og magnetiske partikler^er prote-35 in A effektivt tilgængelig i de udvendige overflader af mikrokuglerne og danner i virkeligheden overfladelag på mikrokuglerne med protein A i høj koncentration.
4
DK 154840 B
Forklaringen af dette resultat forstås ikke fuldstændigt, men viser sig at hænge sammen med befugtningsmidlet eller overfladespændingsegenskaber af protein A, når det er dispergeret i en vandig opløsning i blanding med albumin.
5 Opfindelsen angår en fremgangsmåde til separering af en valgt population af celler, bakterier eller vira fra en blandet population deraf, ved hvilken mikrokugler indeholdende magnetiske partikler belægges med et lag af antistoffer, som selektivt binder til den valgte population. De belagte mikrokugler 2Q bringes i kontakt med den blandede population, således at mikrokuglerne bindes til den valgte population, og den bundne valgte population separeres magnetisk fra resten af den blandede population.. Fremgangsmåden ifølge opfindelsen er ejendommelig ved det i krav l's kendetegnende del anførte.
15
Hvor der anvendes kemiske koblingsmetoder, kan mikrokuglerne dannes af enhver grundmasse., der kan blive kemisk koblet til protein Ayinklusive albumin eller anden aminosy- repolymer og syntetiske polymere såsom acrylatpolymere. Mi- 2g krokuglerne kan f.eks. dannes af methylmethacrylat, hydroxy= ethylmethacrylat, methacrylsyre, ethylenglycoldimethacrylat, agarosepolymere, polyacrylamidpolymere eller blandinger af sådanne polymere. Protein A kan blive direkte koblet til faste støtteflader indeholdende magnetisk følsomme materialer ved hjælp af forskellige metoder. Se f.eks. Molday et al, J. Cell Bioligy, 64, 75 (1975). Mikrokugler kan afledes med enten aminokapronsyre eller diaminoheptan, som giver udstrakte funktionelle grupper til kobling af proteiner til uopløselig- gjorte grundmaterialer. Alternativt kan der mad faste overflader
allerede indeholdende funktionelt tilgængelige grupper (amino-w U
grupper på albuminmikrokugler) da blive etableret en direkte glutaraldehydkobling af protein A.
35
DK 154840B
5
En alternativ foretrukket fremgangsmåde er at inkorporere protein A i mikrokuglerne ved at blande det med grundmassema-terialet før tilberedningen af mikrokuglerne og gennemføre fremstillingen således, at protein A er tilgængelig i de ud-5 vendige overflader af mikrokuglerne.
Til brug i forbindelse med den foreliggende opfindelse kan protein A fremstilles af Staphylococcus aureus ved hjælp af de i litteraturen beskrevne metoder· Se f.eks. Forsgren et al J.
10 Immun., 97, 822 (1966) og Kronvall et al, Immunochemystry, 7, 124, (1970). Stafylokokkisk protein A er også tilgængelig fra komercielle kilder såsom Pharmacia Fine Chemicals, Piscataway, New Jersey.
15 Det foretrukne grundmateriale til dannelse af mikrokuglerne ved blanding med protein A er en aminosyrepolymer såsom albumin. Animalsk eller human albumin kan anvendes f.eks. human serumalbumin. Andre vandopløselige proteiner kan anvendes såsom hæmoglobin eller syntetiske aminosyrepolymere in-20 klusive poly-L-lycin og poly-L-glutaminsyre.
Når protein A forblandes med grundmassepolymeren og de deraf dannede mikrokugler, bør der indgå tilstrækkeligt protein A til, at de udvendige overflader af mikrokuglerne vil binde 25 antistoffer via den selektive virkning af protein A. Mikro kuglerne kan almindeligvis indeholde fra 2-40 vægtdele protein A pr. 100 vægtdele af grundmassepolymeren^såsom albumin. Foretrukne mængder er fra ca. 10-35 dele af protein A pr. 100 dele af grundmassepolymeren.
30
En tilstrækkelig mængde findelte partikler af et magnetisk materiale bør også indgå,således at mikrokuglerne er magnetisk følsomme. De magnetiske partikler kan f.eks. være ferri- eller ferro-magnetiske forbindelse, såsom magnetiske jernoxider. Andre anvendelige magnetiske materialer i partikelform er beskre-35 vet i US patentskrift nr. 3.970.518. Et foretrukket magnetisk materiale er magnetit (Fe^O^). Afhængig af størrelsen af mi-
DK 154840 B
6 krokuglerne kan de magnetiske partikler variere med hensyn til størrelse fra 100-20.000 ångstrøm. Mikrokuglerne kan indeholde fra 10 til 150 vægtdele af det magnetiske materiale pr. 100 dele af grundmassepolymeren. Mikrokuglerne kan variere g med hensyn til størrelse fra 0,2 til 100 mikron i diameter.
Mikrokuglerne har imidlertid fortrinsvis en gennemsnitsstørrelse i intervallet fra ca. 0,5-2,0 mikron. Med mikrokugler i dette størrelsesområde foretrækkes det, at de magnetiske partikler har diametre på ikke over 300 ångstrøm^ såsom en 10 middelstørrelse på ca. 100 ångstrøm.
Mikrokuglerne ifølge opfindelsen til brug ved fremgangsmåden ifølge opfindelsen er ejendommelige ved det i krav 3's kendetegnende del anførte.
15
Det foretrækkes ifølge opfindelsen, at der i mikrokuglerne indgår protein A i en mængde fra 10 til 30 vægtdele pr. 100 vægtdele af aminosyrepolymeren. Yderligere fordelagtige udførelsesformer for mikrokuglerne ifølge opfindelsen er de-20 fineret i krav 6-8.
De fremgangsmåder, som tidligere er publiceret vedrørende fremstillingen af albuminmikrokugler, kan anvendes. Widder et al, J. Pharm. Sci., 68, 79 (1979). Den foretrukne fremgangsmåde er den, der er beskrevet vedrørende varmestabili-25 serede mikrokugler. Der fremstilles almindeligvis en vandig blanding til brug ved fremstillingen af mikrokugler, idet blandingen indeholder albuminet og anden hydrokolloidgrund-massepolymer, protein Ά og de' magnetiske partikler. De faste stoffer dispergeres i vand og blandes omhyggeligt dermed, f.eks. under anvendelse af 20-40 dele faststof ialt pr. 100 dele vand. Der bør indgå tilstrækkelig vand til at danne en vandig gel med grundmassehydroko1loidet. Mængden af vand kan i almindelighed variere fra 10-60 dele pr. 100 dele samlet tørstofmængde. Den vandige blanding emulgeres så med en
DK 154840 B
7 olie, såsom en vegetabilsk olie, idet emulgeringen gennemføres med kraftig omrøring f.eks. under anvendelse af lydbehandling til opnåelse af en smådråbedispersion af den vandige blanding i den vegetabilske olie med den passende dråbestørrelse til 5 dannelse af mikrokuglerne. Emulgeringen gennemføres fortrins vis ved lave temperaturer, såsom temperaturer i intervallet fra 20-30°C. Efter dannelsen af.emulsionen sættes emulsionen til en større mængde olie, som fortrinsvis er den samme olie, som blev anvendt til dannelse af elmulsionen. Bomuldsolie gi-10 ver i praksis gode resultater. Til fremme af separeringen af vanddråber kan emulsionen tilsættes i små portioner til oliebadet, såsom ved dråbevis tilsætning. Tilsætningen gennemføres fortrinsvis også ved hurtig omrøring af olien, hvori emulsionen indføres.
15 I forbindelse med den foreliggende opfindelse kan dråberne blive varmehærdede til stabilisering heraf og derved danne mikrokuglerne. Dette kan hensigtsmæssigt gennemføres ved at anvende et opvarmet oliebad, dvs. ved at dispergere emulsion-20 en i varm olie, såsom olie ved en temperatur i intervallet fra 70-160°C. Virkningen af varmestabilisering på albuminmi-krokugler er beskrevet i US patentskrift nr. 3.937.668.
Efter varmehærdning skilles de fremstillede mikrokugler fra ^ olien. Dette kan ske ved centrifugering eller filtrering, og mikrokuglerne vaskes med et egnet organisk opløsningsmiddel, såsom diethylether/til fjernelse af olien fra mikrokuglernes udvendige overflader. Mikrokuglerne er så klar til reaktion med et specifikt antistof, såsom et antistof fremstillet i 30 kaniner. Sådanne kaninimmunogluboliner, der binder til protein A,omfatter alle underklasser af IgG. Antistoffer fremstillet ud fra andre kilder kan imidlertid også anvendes, forudsat at de også binder til protein A. Antistofferne vil sædvanligvis blive overført til mikrokuglerne i vandig suspension. Koncen-35 trationen af antistoffer kan være lav, da protein A vil fjerne antistofferne fra behandlingsopløsningen selv ved lave
DK 154840 B
8 koncentrationer. Som tidligere beskrevet er bindingen via Fc-området af antistofferne, hvorved der tilvejebringes en orienteret vedhæftning af antistofferne med de antigenbindende Fab-arme udstrakt udad fra mikrokuglernes udvendige o- verflader. Mikrokuglerne er så klar til brug i magnetisk cel-5 leseparering, som tidligere beskrevet i litteraturen.
Fremgangsmåden til separering ifølge opfindelsen og de foretrukne mikrokugler.til anvendelse deri er yderligere beskrevet og belyst i de følgende specifikke eksempler. Til præcisere) ring af beskrivelsen anvender eksemplerne visse forkortelser, der har følgende betydninger:
SpA: : staphy3oKokId.sk protein A
FITC: fluoroceinisothiocyanat CRBC: rød blodcelle fra kylling 15 SRBC: rød blodcelle fra får RBC: rød blodcelle FCS: f øtal kalveserum HBSS: Hank's afbalancerede saltvandsopløsning EDC: carbodiimid: l-cyklohexyl-3-(2-morpholinyl- ^ (4)-ethylcarbodiimidmethotoluensulfonat)
Eksempel 1 .
Magnetiske albuminmikrokugler indeholdende staphylokokkisk protein A (SpA) som en del af grundmassen blev fremstillet ved 25 hjælp af en emulsionspolymerisationsmetode. Der blev fremstillet en 0,5 ml vandig suspension indeholdende ialt 150 mg tørt stof bestående af 66% humant serumalbumin, 19% Fe^O^ (partikler 15-20 nm) og 15% SpA. Hertil blev der sat 60 ml bomuldsfrø-olie, og emulsionen blev homogeniseret ved lydbehandling i 1 minut . Hamogenisatet blev ved tildrypning sat til 200 ml konstant 55 omrørt bomuldsfrøolie ved 120-125°C i 10 min. Suspensionen blev vasket 4 gange i diethylether ved centrifugering i 15
DK 154840 B
9 min. ved 2000 xg og lagret ved 4°C indtil efterfølgende brug.
En prøve af mikrokugler blev koblet med FlTC-konjugeret kanin IgG ved inkubation ved 37°C i 20 min. og undersøgt for overflade-fluorescens med et fluorescensmikroskop . Intensiteten og den 5 tilsyneladende ensartede fordeling af fluorscens viste, at
SpA var orienteret på mikrokugleoverfladen på en måde, som tillod, at IgG-molekyler reagerede med Fc-bindingsstederne på SpA.
Eksempel 2 10
Mikrokugler fremstillet som beskrevet i eksempel 1 blev anvendt
til at separere CRBC fra suspensioner indeholdende både CRBC
51 og SRBC. Prøver af CRBC og SRBC blev mærket med Cr for at bestemme separeringens omfang såvel som celleintegritet. Mærk- g 15 ning af CRBC blev udført ved at inkubere 1 x 10 CRBC suspenderet i 0,2 ml Hank's afbalanceret saltopløsning (HBSS) indeholdende 2,5% varmeinaktiveret føtal kalveserum (FCS) med 100 /iCi Na251Cr04 (1 mCi/ml) i 90 min. ved 37°C. SRBC blev mærket ved hjælp af en lignende behandling,bortset fra inkubation natten over ved 37°C. Antistof blev koblet til mikro-20 kuglerne ved at inkubere 0,5 mg af mikrokuglerne suspenderet i 0,2 ml 0,9% NaCl-opløsning indeholdende 0,1%"Tween "80 (salt-vand-Tween"80) med enten 0,5 mg kanin anti-kyllinge RBC (IgG-fraktion) eller 0,5 mg normal kanin IgG i 45 min. ved 37°C.
Ubundne IgG blev fjernet ved centrifugering med overskud af saltvand-"Tween" 80 ved 1500 xg i 2 min. ved ved 4°C. Mikro- 25 kugler blev så resuspenderet i 2,5 ml saltvandi'Tween"80 ved kortvarig lydbehandling i et ultrasonisk vandbad. Til denne g suspension blev der sat en blanding af 1 x 10 CRBC og g 1 x 10 SRBC i 0,2 ml HBSS. Cellerne blev så inkuberet med de IgG-belagte mikrokugler i 30 min. ved 37°C ved svag om- 30 . røring. Cellerne med vedhæftede magnetiske mikrokugler blev fjernet fra suspensionen ved at påføre 4000 gauss (gradient - 1500 gauss/cm) stangmagnet til siden af hvert testrør i 1 min.
Både overliggende og pillefraktioner blev talt i en Beckman- 51 model 8000 gammatæller for Cr. Kontrolmærkede celler inkube- 51
DK 154840 B
10 ret i saltvand-"Tween"80 blev talt for Cr til bestemmelse af spontan frigivelse.
Baseret på ^Cr-tal viste det sig, at når 1 x 10® ®^Cr CRBC i 5 kombination med 1 x 10® SRBC blev inkuberet med 0,5 mg mikro-kugler, der bærer anti-CRBC-antistoffer,blev 97,8% af de mærkede celler fjernet magnetisk fra suspensionen·. Hæmocytometer- * N' tal af erythocytter i den overliggende fraktion visté kun 0,26% rest CRBC blandet resterende SRBC. Under anvendelse af denne celle- 10 separeringsmetode blev der dannet en population af SRBC, som var 97-99% homogen med 90,5% genvinding af udgangs SRBC-massen.
51
Den ikke specifikke vedhæftning af Cr CRBC blev testet under anvendelse af mikrokugler, der bærer henholdsvis anti-SRBC og normal kanin IgG ,og viste sig at være mindre end 10%.
15
Eksempel Til
Mikrokugler fremstillet som beskrevet i eksempel I blev anvendt til at fraktionere Lewis rotte splenocytten Baseret på nærvæ-20 reisen eller fraværelsen af overfladeimmunoglobuliner er det muligt at skelne mellem thymus-afledte T-lymphocytter og ben-marvafledte B-lymphocytter Normale ikke-IgG'-bærende spleno-cytter/ som antages overvejende at være T-lymphocyttep blev renset ved at inkubere splenocytter med mikrokugler indehol-25 dende kanin anti-rotte IgG.
Der blev opnået en cellesuspension af miltceller ved at behandle rottemilt på en metalsigte i HBSS med 10% varmeinakti-veret FCS. Cellerne blev vasket 3 gange og overlejret på"Fi-30 coll-Hypague"(massefylde 1,072). Gradienten blev så centrifugeret ved 1200 xg i 25 min. ved 25°C for at fjerne døde celler og røde blodceller. Det resulterende grænsefladebånd blev fjernet og bestemt med hensyn til levedygtighed ved hjælp af trypanblå farveeksklusion. Antallet af IgG-bærende celler 35 blev bestemt ved at inkubere cellerne ved 37°C med FITC konjugeret kanin anti-rotte IgG og optælling af antallet af fluorescens mærkede celler. Kanin anti-rotte IgG, normal kanin IgG og kanin anti-kyllinge RBC blev koblet til 0,5 mg af 11
DK 154340 B
SpA mikrokuglerne (0,5 mg IgG/0,5 mg mikrokugler). Speno-
C
cytter (2 x 10 ) suspenderet i HBSS med 2,5% varmeinaktiveret FCS blev sat til de 0,5 mg mikrokugler. For at formindske kappefænomenet og opretholde levedygtighed blev reaktions-5 blandingerne inkuberet i 2 1/2 time ved 4°C. Cellerne med vedhæftede mikrokugler blev separeret magnetisk som beskrevet i eksempel II#og de overliggende fraktioner blev analyseret for samlet celletal, levedygtighed og fluorescens.Resultaterne er sammenfattet i tabel A. Levedygtighed af ufraktionerede 10 celler efter centrifugering i"Ficoll-Hypaque"var 96%. Over-fraktionscellelevedygtighed efter magnetisk separering var 93%, hvilket viser et minimalt tab af levedygtighed. Mellem 47 og 51% af ufraktionerede splenocyter var IgG-bærende celler, som bestemt ved fluorescensmikroskopi. Efter magnetisk se-15 parering af splenocytter i forsøgsgruppen havde imidlertid kun 0,5% af overfraktionscellerne påviselig IgG på deres overflade, hvilket viser en kraftigt beriget population af ikke-IgG-bærende lymphocytter.
20 Antistofspecificitet blev verificeret ved at vise ubetydelig reduktion af IgG-bærende celler efter inkubation af splenocyt-"' ' ter med mikrokugler’ indeholdende enten normal kanin IgG eller anti-CRBC. Rottethymocytter, normalt indeholdende 4-6% IgG-bærende lymphocytter, blev fuldstændigt befriet for disse celler 25 efter inkubation med mikrokugler koblet med anti-rotte IgG.
Sensitiviteten af systemet blev testet ved seriefortyndinger af mikrokugler med kanin anti-kyllinge RBC med tilsætning af 6 51 1 x 10 Cr CRBC ved hver fortynding. Inkubation af mikro- 30 kugler og celler blev gennemført i 30 min. ved 37°C. Celler med vedhæftede mikrokugler blev ma gnetisk fjernet og både 51 pille- og overliggende fraktioner talt med hensyn til Cr.
% CRBC bundet til mikrokuglerne forholdt sig lineært til mængden af mikrokugler, som fandtes indtil, der optrådte mi-35 krokuglemætning. Der blev ikke observeret under 99% binding af 1 x 10 CRBC, når der blev anvendt > 104 pg mikrokugler.
~ 12 DK 154 840 B
Q
<
CO
<D
Ό +1 ti
ti O
(0 -rl *H
5-1 Ό -P
fB P A4 A fB P rt
I > (D P <N
< ' H . tM— (¾ CD g CO Ό O CD iJi Ό ω Ό g H -H ti Η rl g Ρ CD Ρ
4J 0) tn <D
g H Co P
+j O h -H fd η n <D CO Q) H ft ^ w
H U M dJ
n +> 0) co O ,i4 <D > m cm co: A >i O “ o- ·*· ·»
Ρ ti CO O HH
5-1 -P CD C Ή (D Ό P CD -P +1 +1
i« ti fB Ό CD
ih Λ C! ^ O iji f -H CO ** j_) O O cd l> 'i* ω tr> Q) g «i'
rl CD H CO
.jj Cn (ti 5-i
ti ti ih Λ <D
Cd Cd Id Η -P
|J> -rl -*H
IH o\° -P (0
Cd CD
P
CD -P
to P
H .p. CD
(D CD Η I
Γζ) tr> H -rl ril ti cd <D g
CD -P O
Ω f> ti HH
M ti <D Cd ·Η p pq cd Co . -P -P (D m co ril OH “ *·
PH H CO +) -P Co O H O CN
<D & CD ti Ό CD P >6 X +1 +1 -Η +1
ti P cd ti O
p O. ti P OLDOLD.
m o\° A Λί IT) Η Η * Ρ ω
CD (D
Η Co I—1 Η 1 r—ν (D Η (D r-1.
Ο Η Η ^ Ρ Ρ Ρ
(D Η CD Ρ CD (D
Η Λ! CD ti -Ρ CD -Ρ -Ρ .
Ο to ΟΟ -μ-Ρ-Ρ-Ρ ,π| Ρ ·Η >c ·Ρ >ι >ι .
ft Ο iHCQ Ο >ι Ο Ο g iH cdti Ο Ο Ο Ο .
>, CD ti Ο ti ti
Η Ο CD ft (D g CD CD
-p ft CO Η Pm Η H
ffl >i ti ft A ft ft
p Eh CO CD B M W
tji CD
0 · P
P CD
Eh CD -P „ „
H ti CD O
(D Co CD CO CO
+) p CO Η H
-Ρ A4 fB . m m
OOP CD CD CD
pp ft -PP -P-PCoU
,ϋ! CD CD CD +J-PHW
IH’rl p HH 00 Ph
cdg A CO PPtiU
P O ti I I -Η I
&i CD CD Λ4 H -rl ti Ή .
cj^4 +J Ο -Ρ -P cti -P
•η to cd mp titi^iti p-h+j ο ^ cdcdcd
CD -Ρ Η -Ρ -Η H
PCD ti tog titititi
td ti CO Η H -H g H
ftco CD -PH titiPti (Did Pi β H cdcdocd
CO g rtj -p ¢4 id 2 K
13 DK 154840 B
Fodnoter til tabel A
(1) 2 x 106 celler/0,2 ml HBSS + 2,5% FCS, inkuberet med 0,5 mg mikrokugler, der bærer antistof som anført. Reaktionsblandingen blev inkuberet i 2 1/2 time ved 4°C.
5 (2) Procentdelen af IgG-bærende celler,som ikke blev fjernet ved hjælp af magnetiske mikrokugler^ blev bestemt ved at inkubere overfraktionsceller med 0,1 ml FITC konjugeret kanin anti-rotte IgG i 20 min. ved 37°C. Mængden af kontaminant IgG-bærende celler blev bestemt ved ^fluorescensmikroskopi. Desuden blev der fundet 95,3% af de forventede ikke-IgG-bæ-rende splenocytter i overfraktionen som bestemt ved tre optællinger i et hæmocytometer af ikke-fluorescensceller, I5 (3) Mellem 44 og 51% udgangssplenocytter er IgG-bærende celler bestemt ved fluorescensmikroskopi^og 4-6% rottethymocytter er IgG bærende celler bestemt ved hjælp af den samme metode.
Eksempel IV
. ... . 20
Magnetiske albuminmikrokugler blev fremstillet som beskrevet i eksempel I, bortset fra at protein A blev udeladt. Albuminmængden blev forøget tilsvarende, således at det tørre stof, der blev anvendt til dannelse af mikrokuglerne^var 81% albu-25 min og 19% Fe^O^. Protein A kan overføres til de således dannede mikrokugler som beskrevet i eksempel V.
Eksempel V
30 5 mg/ml protein A i HBSS fremstilles som udgangsopløsning.
Til et—trins vandig carbodiimidkoblingen sættes 10 mg EDC til 20 mg af enten en acrylatpolyroer mikrokuglegrundmasse præderivateriseret med ξ.-"amino capronsyre eller 20 mg albuminmikrokugler suspenderet i. 10 ml af udgangsprotein A op-35 løsningen og får lov til at reagere i 4 timer ved 4°C under kraftig omrøring. Koblingsreaktionen afsluttes så ved tilsætning

Claims (8)

1. Fremgangsmåde til separering af en valgt population af celler, bakterier eller vira fra en blandet population deraf, ved hvilken fremgangsmåde mikrokugler indeholdende magnetiske partikler belægges med et lag af antistoffer, som selektivt binder til den valgte population, de belagte mikrokugler brin-25 ges i kontakt med den blandede population, således at mikro- kuglerne bindes til den valgte population, og den bundne valgte population separeres magnetisk fra resten af den blandede population, kendetegnet ved, at mikrokuglerne, der er dannet af en polymergrundmasse i blanding med de magnetiske 30 partikler, og på hvis overflader der foreligger bundet staphy-lokokkisk protein A, der enten er iblandet grundmassen eller er bundet kemisk på overfladen, belægges med antistoffer, som binder til protein A, og som også binder selektivt til nævnte valgte population, hvorved nævnte antistoffer bindes på over-35 fladerne af mikrokuglerne med deres Fab-arme udstrakt udad.
2. Fremgangsmåde ifølge krav 1, kendetegnet ved, DK 154840 B at grundmassen er albumin, og mikrokuglerne indeholder fra 2 til 40 vægt% protein A pr. 100 dele albumin.
3. Mikrokugler til brug ved fremgangsmåden ifølge krav 1, kendetegnet ved, at mikrokuglerne er dannet af en 5 aminosyrepolymergrundmasse i blanding med staphylokokkisk protein A og har en størrelse svarende til en diameter fra fra 0,2 til 100 mikron, hvilke mikrokugler indeholder fra 2 til 40 vægtdele af nævnte protein A pr. 100 dele af nævnte aminosyrepolymer, og idet nævnte protein A indgår i mikro-10 kuglernes udvendige overflader til antistofbinding, idet nævnte mikrokugler også indeholder magnetiske partikler af en størrelse fra 100 til 20.000 Å og i en mængde, som er tilstrækkelig til at gøre nævnte mikrokugler magnetisk følsomme.
4. Mikrokugler ifølge krav 3, kendetegnet ved, at aminosyrepolymeren er albumin.
5. Mikrokugler ifølge krav 3 eller krav 4, kendetegnet ved, at protein A indgår i en mængde fra 10 til 30 vægt- 20 dele pr. 100 vægtdele af aminosyrepolymeren.
6. Mikrokugler ifølge krav 3, kendetegnet ved, at mikrokuglerne er dannet i en vandig suspension af albumin, staphylokokkisk protein A og magnetiske partikler, idet nævnte 25 mikrokugler har en middeldiameter fra 0,5 til 2,0 mikron og indeholder fra 22 til 40 dele af nævnte protein A pr. 100 dele af nævnte albumin, og nævnte protein A indgår i de udvendige overflader af nævnte mikrokugler til antistofbinding, idet nævnte magnetiske partikler har en størrelse, som ikke er over 30 300 Å og indgår i en mængde, som er tilstrækkelig til at gøre nævnte mikrokugler magnetisk følsomme.
7. Mikrokugler ifølge krav 6, kendetegnet ved, at de magnetiske partikler er Fe3C>4 og indgår i en mængde fra 10 35 til 150 vægtdele pr. 100 dele af nævnte albumin. DK 154840 B
8. Mikrokugler ifølge krav 6 eller 7, kendetegnet ved, at protein A indgår i en mængde fra 10 til 35 vægtdele pr. 100 dele af nævnte albumin.
DK083580A 1979-02-28 1980-02-27 Fremgangsmaade til magnetisk separering af celler, bakterier og vira og mikrokugler til brug ved fremgangsmaaden DK154840C (da)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US06/015,895 US4230685A (en) 1979-02-28 1979-02-28 Method of magnetic separation of cells and the like, and microspheres for use therein
US1589579 1979-02-28

Publications (3)

Publication Number Publication Date
DK83580A DK83580A (da) 1980-08-29
DK154840B true DK154840B (da) 1988-12-27
DK154840C DK154840C (da) 1989-05-29

Family

ID=21774226

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
DK083580A DK154840C (da) 1979-02-28 1980-02-27 Fremgangsmaade til magnetisk separering af celler, bakterier og vira og mikrokugler til brug ved fremgangsmaaden

Country Status (11)

Country Link
US (1) US4230685A (da)
EP (1) EP0016552B2 (da)
JP (1) JPS55143440A (da)
AT (1) ATE1648T1 (da)
CA (1) CA1127571A (da)
DE (1) DE3060928D1 (da)
DK (1) DK154840C (da)
IE (1) IE49266B1 (da)
IL (1) IL59464A (da)
NZ (1) NZ192959A (da)
ZA (1) ZA801062B (da)

Families Citing this family (200)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4450150A (en) * 1973-05-17 1984-05-22 Arthur D. Little, Inc. Biodegradable, implantable drug delivery depots, and method for preparing and using the same
US4430318A (en) 1978-11-29 1984-02-07 The United States Of America As Represented By The Department Of Health And Human Services Immunoassay utilizing 125 I Protein A
US4560484A (en) * 1980-04-25 1985-12-24 Purdue Research Foundation Method and apparatus for magnetically separating particles from a liquid
SE8201972L (sv) * 1982-03-29 1983-09-30 Gambro Lundia Ab Magnetiskt paverkbara kristalliserade kolhydrat sferer eller partiklar att anvendas tillsammans med bioadsorberande material
US4469787A (en) * 1982-05-14 1984-09-04 Mallinckrodt Inc. Immunoassay involving soluble complex of second antibody and labeled binding protein
US4471058A (en) * 1982-07-26 1984-09-11 Board Of Trustees Operating Michigan State University Method for the detection and/or determination of a polyvalent antigen using at least two different monoclonal antibodies
US4493825A (en) * 1982-10-05 1985-01-15 Iowa State University Research Foundation Purified and antigenically selective vaccines for domestic animals
US4628037A (en) * 1983-05-12 1986-12-09 Advanced Magnetics, Inc. Binding assays employing magnetic particles
US4695393A (en) * 1983-05-12 1987-09-22 Advanced Magnetics Inc. Magnetic particles for use in separations
US4695392A (en) * 1983-05-12 1987-09-22 Advanced Magnetics Inc. Magnetic particles for use in separations
US4672040A (en) * 1983-05-12 1987-06-09 Advanced Magnetics, Inc. Magnetic particles for use in separations
US4526681A (en) * 1983-10-31 1985-07-02 Purdue Research Foundation Magnetic separation method utilizing a colloid of magnetic particles
SE8401125L (sv) * 1984-03-01 1985-09-02 Ulf Schroder Sett vid diagnostisering in vitro och diagnostiskt medel
US4704366A (en) * 1984-06-22 1987-11-03 Bio-Rad Laboratories, Inc. Process for binding IgG to protein A
GB8427436D0 (en) * 1984-10-30 1984-12-05 Lepetit Spa Receptor assay
DE3444939A1 (de) * 1984-12-08 1986-06-12 Bayer Ag, 5090 Leverkusen Magnetische microspheres
US4663029A (en) * 1985-04-08 1987-05-05 Massachusetts Institute Of Technology Method and apparatus for continuous magnetic separation
US4666595A (en) * 1985-09-16 1987-05-19 Coulter Electronics, Inc. Apparatus for acoustically removing particles from a magnetic separation matrix
US4710472A (en) * 1985-09-25 1987-12-01 The United States Of America As Represented By The Secretary Of The Navy Magnetic separation device
US4795698A (en) * 1985-10-04 1989-01-03 Immunicon Corporation Magnetic-polymer particles
US5512332A (en) * 1985-10-04 1996-04-30 Immunivest Corporation Process of making resuspendable coated magnetic particles
JP2588181B2 (ja) * 1985-10-04 1997-03-05 ニコメド イマギング アクスイェ セルスカプ 磁性・ポリマ−粒子
US4752563A (en) * 1985-11-19 1988-06-21 Coulter Corporation Monoclonal antibody for recovery of leukocytes in human peripheral blood and method of recovery employing said monoclonal antibody
US5076950A (en) * 1985-12-20 1991-12-31 Syntex (U.S.A.) Inc. Magnetic composition for particle separation
AU7358187A (en) * 1986-04-11 1987-11-09 Murex Corp. Colorimetric ratioing immunoassay
US5069216A (en) * 1986-07-03 1991-12-03 Advanced Magnetics Inc. Silanized biodegradable super paramagnetic metal oxides as contrast agents for imaging the gastrointestinal tract
US5219554A (en) 1986-07-03 1993-06-15 Advanced Magnetics, Inc. Hydrated biodegradable superparamagnetic metal oxides
US4770183A (en) * 1986-07-03 1988-09-13 Advanced Magnetics Incorporated Biologically degradable superparamagnetic particles for use as nuclear magnetic resonance imaging agents
US4951675A (en) * 1986-07-03 1990-08-28 Advanced Magnetics, Incorporated Biodegradable superparamagnetic metal oxides as contrast agents for MR imaging
US5238812A (en) * 1987-03-13 1993-08-24 Coulter Corporation Method and apparatus for rapid mixing of small volumes for enhancing biological reactions
CA1326435C (en) * 1987-03-13 1994-01-25 Wallace H. Coulter Method and apparatus for rapid mixing of small volumes for enhancing biological reactions
US5136095A (en) * 1987-05-19 1992-08-04 Syntex (U.S.A.) Inc. Reversible agglutination mediators
US4812401A (en) * 1987-05-19 1989-03-14 Syntex (U.S.A.) Inc. Reversible agglutination mediators for separating cells from whole blood
US6013531A (en) * 1987-10-26 2000-01-11 Dade International Inc. Method to use fluorescent magnetic polymer particles as markers in an immunoassay
JP2736467B2 (ja) * 1987-10-26 1998-04-02 デイド、インターナショナル、インコーポレイテッド 磁気応答ポリマー粒子の製造法およびその応用
FR2624613B1 (fr) * 1987-12-15 1994-08-26 Toledano Jacques Support microspherique de detection immuno-enzymatique, fluorescente, cheminumilescente ou radio-active de substances microdosees dans les milieux biologiques
AU2613988A (en) * 1988-01-04 1989-08-01 E.I. Du Pont De Nemours And Company Multiple stage affinity process for isolation of specific cells from a cell mixture
DE3806431A1 (de) * 1988-02-29 1989-09-07 Boehringer Mannheim Gmbh Verfahren zur herstellung einer festphasenmatrix
US5268306A (en) * 1988-02-29 1993-12-07 Boehringer Mannheim Gmbh Preparation of a solid phase matrix containing a bound specific binding pair
AU2985289A (en) * 1988-03-18 1989-09-21 Idetek Inc. Sulfa drug screening for domestic animals
US5593897A (en) * 1988-04-04 1997-01-14 Northwestern University Binding of immune complexes by modified forms of C-reactive protein
US5256532A (en) * 1988-05-02 1993-10-26 Zynaxis Technologies, Inc. Methods, reagents and test kits for determination of subpopulations of biological entities
US5385822A (en) * 1988-05-02 1995-01-31 Zynaxis, Inc. Methods for detection and quantification of cell subsets within subpopulations of a mixed cell population
AU2612688A (en) * 1988-06-03 1990-01-05 E.I. Du Pont De Nemours And Company Procedure for designing efficient affinity cell separation processes
US5108933A (en) * 1988-09-16 1992-04-28 Immunicon Corporation Manipulation of colloids for facilitating magnetic separations
US5536475A (en) * 1988-10-11 1996-07-16 Baxter International Inc. Apparatus for magnetic cell separation
US5385707A (en) * 1988-12-28 1995-01-31 Stefan Miltenyi Metal matrices for use in high gradient magnetic separation of biological materials and method for coating the same
ES2067018T3 (es) * 1988-12-28 1995-03-16 Stefan Miltenyi Procedimiento y materiales para la separacion en alto gradiente magnetico de materiales biologicos.
US6020210A (en) * 1988-12-28 2000-02-01 Miltenvi Biotech Gmbh Methods and materials for high gradient magnetic separation of biological materials
US5698271A (en) * 1989-08-22 1997-12-16 Immunivest Corporation Methods for the manufacture of magnetically responsive particles
US5139933A (en) * 1989-09-26 1992-08-18 Vicam, L.P. Assay method for detecting listeria
AU6847890A (en) * 1990-01-19 1991-07-25 Promega Corporation Immunospecific and bioluminescent assay of cellular atp
US5378624A (en) * 1990-04-23 1995-01-03 Cellpro, Incorporated Methods for removing ligands from a particle surface
CA2090126C (en) * 1990-08-02 2002-10-22 John W. Schrader Methods for the production of proteins with a desired function
US5204451A (en) * 1990-08-13 1993-04-20 Baxter International Inc. Activating hydroxyl groups of polymeric carriers using 4-fluorobenzenesulfonyl chloride for binding biologically active ligands
US5541072A (en) * 1994-04-18 1996-07-30 Immunivest Corporation Method for magnetic separation featuring magnetic particles in a multi-phase system
US5200084A (en) * 1990-09-26 1993-04-06 Immunicon Corporation Apparatus and methods for magnetic separation
US6013532A (en) * 1990-09-26 2000-01-11 Immunivest Corporation Methods for magnetic immobilization and manipulation of cells
US5484584A (en) * 1990-10-02 1996-01-16 Board Of Regents, The University Of Texas System Therapeutic and diagnostic use of modified polymeric microcapsules
US5491068A (en) * 1991-02-14 1996-02-13 Vicam, L.P. Assay method for detecting the presence of bacteria
US5466574A (en) * 1991-03-25 1995-11-14 Immunivest Corporation Apparatus and methods for magnetic separation featuring external magnetic means
US5646001A (en) * 1991-03-25 1997-07-08 Immunivest Corporation Affinity-binding separation and release of one or more selected subset of biological entities from a mixed population thereof
US5795470A (en) * 1991-03-25 1998-08-18 Immunivest Corporation Magnetic separation apparatus
US5186827A (en) * 1991-03-25 1993-02-16 Immunicon Corporation Apparatus for magnetic separation featuring external magnetic means
US5589575A (en) * 1992-07-23 1996-12-31 Her Majesty The Queen In Right Of Canada, As Represented By The Minister Of Agriculture Purification of hapten-carrier generated antibodies
WO1994007138A1 (en) 1992-09-14 1994-03-31 Fodstad Oystein Detection of specific target cells in specialized or mixed cell population and solutions containing mixed cell populations
DE4309333A1 (de) * 1993-03-17 1994-09-22 Silica Gel Gmbh Superparamagnetische Teilchen, Verfahren zu ihrer Herstellung und Verwendung derselben
ATE156706T1 (de) * 1993-03-17 1997-08-15 Silica Gel Gmbh Superparamagnetische teilchen, verfahren zu ihrer herstellung und verwendung derselben
EP0672458A3 (en) * 1994-03-04 1996-02-28 Cleveland Clinic Foundation Magnetic cytometry method and apparatus.
NO180658C (no) 1994-03-10 1997-05-21 Oeystein Fodstad Fremgangsmåte og anordning for deteksjon av spesifikke målceller i spesialiserte eller blandede cellepopulasjoner og opplösninger som inneholder blandede cellepopulasjoner
US5693784A (en) * 1994-09-19 1997-12-02 Promega Corporation Methods for creating agglomerates from colloidal particles
US5567326A (en) * 1994-09-19 1996-10-22 Promega Corporation Multisample magnetic separation device
US5646263A (en) * 1994-09-19 1997-07-08 Promega Corporation High efficiency method for isolating target substances using a multisample separation device
AU691040B2 (en) * 1994-09-20 1998-05-07 Miltenyi Biotech, Inc. Enrichment of fetal cells from maternal blood
FI944937A0 (fi) † 1994-10-20 1994-10-20 Labsystems Oy Separeringsanordning
US6500343B2 (en) 1995-02-21 2002-12-31 Iqbal W. Siddiqi Method for mixing and separation employing magnetic particles
WO1996026011A1 (en) 1995-02-21 1996-08-29 Siddiqi Iqbal W Apparatus and method for mixing and separation employing magnetic particles
US6884357B2 (en) 1995-02-21 2005-04-26 Iqbal Waheed Siddiqi Apparatus and method for processing magnetic particles
US5705059A (en) * 1995-02-27 1998-01-06 Miltenyi; Stefan Magnetic separation apparatus
DE19516323C2 (de) * 1995-04-27 1997-02-27 Dirk Dipl Chem Guenther Verfahren zur Herstellung von magnetisierbaren Dispersionen und deren Verwendung
US5655546A (en) * 1995-06-07 1997-08-12 Halpern; Alan A. Method for cartilage repair
US5639669A (en) * 1995-06-07 1997-06-17 Ledley; Robert Separation of fetal cells from maternal blood
DE19528029B4 (de) 1995-07-31 2008-01-10 Chemagen Biopolymer-Technologie Aktiengesellschaft Magnetische Polymerpartikel auf der Basis von Polyvinylalkohol, Verfahren für ihre Herstellung und Verwendung
IL116163A0 (en) * 1995-11-28 1996-01-31 Univ Ramot Detection of specific entities in a sample
GB9524393D0 (en) * 1995-11-29 1996-01-31 Mini Agriculture & Fisheries Extraction and labelling of materials
US6297062B1 (en) * 1996-03-07 2001-10-02 Bio-Magnetics Ltd. Separation by magnetic particles
NO961031D0 (no) 1996-03-13 1996-03-13 Det Norske Radiumshospital Tum Fremgangsmåte til å drepe uönskede målceller
US5795784A (en) 1996-09-19 1998-08-18 Abbott Laboratories Method of performing a process for determining an item of interest in a sample
US5856194A (en) 1996-09-19 1999-01-05 Abbott Laboratories Method for determination of item of interest in a sample
FR2758884B1 (fr) 1997-01-30 1999-04-02 Bio Merieux Procede pour isoler, notamment detecter ou quantifier un analyte dans un milieu
WO1998043067A1 (en) * 1997-03-25 1998-10-01 Immunivest Corporation Apparatus and methods for capture and analysis of particulate entities
ATE326228T1 (de) * 1997-07-01 2006-06-15 Vicam Lp Verfahren zur geschlechtsbestimmung von säuger- nachkommenschaft
US6103468A (en) * 1997-10-07 2000-08-15 Labatt Brewing Company Limited Rapid two-stage polymerase chain reaction method for detection of lactic acid bacteria in beer
DE69941689D1 (de) * 1998-02-12 2010-01-07 Univ Texas Verfahren und reagenzien zur raschen und effizienten isolierung zirkulierender krebszellen
DE69934449T2 (de) * 1998-03-12 2007-09-27 Miltenyi Biotech Gmbh Mikrokolonnen-System für Magnettrennung
JP4601166B2 (ja) 1998-05-11 2010-12-22 ミルテニィ バイオテック ゲーエムベーハー 抗原特異的ｔ細胞の直接的選択方法
US6361749B1 (en) 1998-08-18 2002-03-26 Immunivest Corporation Apparatus and methods for magnetic separation
CN1320060A (zh) * 1998-08-24 2001-10-31 露斯·F·埃登 浓集所选微生物群的方法和装置
US7071005B1 (en) * 1998-08-24 2006-07-04 Centrus International, Inc. Method and device for concentrating selected groups of microorganisms
US6153411A (en) 1998-10-30 2000-11-28 American Water Works Company, Inc. Methods and kits for detection of Cryptosporidium parvum using immunomagnetic separation and amplification
US5973138A (en) * 1998-10-30 1999-10-26 Becton Dickinson And Company Method for purification and manipulation of nucleic acids using paramagnetic particles
JP3863373B2 (ja) * 1999-03-02 2006-12-27 クオリジエン・インコーポレイテツド 生物学的流体の分離のための装置を用いる方法
AU775558B2 (en) * 1999-05-04 2004-08-05 Dan A. Pankowsky Products and methods for single parameter and multiparameter phenotyping of cells
US6682940B2 (en) 1999-05-04 2004-01-27 Dan A. Pankowsky Products and methods for single parameter and multiparameter phenotyping of cells
US6828157B1 (en) 1999-05-04 2004-12-07 Dan A. Pankowsky Products and methods for single parameter and multiparameter phenotyping of cells
AU1429401A (en) 1999-07-02 2001-02-05 Conceptual Mindworks, Inc. Organic semiconductor recognition complex and system
US6623982B1 (en) * 1999-07-12 2003-09-23 Immunivest Corporation Increased separation efficiency via controlled aggregation of magnetic nanoparticles
GB9922971D0 (en) * 1999-09-29 1999-12-01 Secr Defence Reaction system
US6503761B1 (en) * 1999-10-19 2003-01-07 Kimberly-Clark Worldwide, Inc. Selective removal of contaminants from a surface using articles having magnets
US6841393B2 (en) 1999-10-19 2005-01-11 Kimberly-Clark Worldwide, Inc. Selective removal of contaminants from a surface using colored particles and articles having magnets
AU4989501A (en) * 2000-04-06 2001-10-23 Luminex Corp Magnetically-responsive microspheres
US7169618B2 (en) 2000-06-28 2007-01-30 Skold Technology Magnetic particles and methods of producing coated magnetic particles
US20030207271A1 (en) * 2000-06-30 2003-11-06 Holwitt Eric A. Methods and compositions for biological sensors
US6649419B1 (en) 2000-11-28 2003-11-18 Large Scale Proteomics Corp. Method and apparatus for protein manipulation
US20020164659A1 (en) * 2000-11-30 2002-11-07 Rao Galla Chandra Analytical methods and compositions
US20030022203A1 (en) * 2001-04-23 2003-01-30 Rajan Kumar Cellular Arrays
GB0110476D0 (en) * 2001-04-30 2001-06-20 Secr Defence Reagent delivery system
US7285412B2 (en) * 2001-07-27 2007-10-23 Surface Logix Inc. Device for magnetic immobilization of cells
US7169577B2 (en) * 2001-07-27 2007-01-30 Surface Logix, Inc. Cell isolation and screening device and method of using same
US7169578B2 (en) 2001-07-27 2007-01-30 Surface Logix, Inc. Cell isolation and screening device and method of using same
US20030049836A1 (en) * 2001-08-15 2003-03-13 Phi-Wilson Janette T. Cell separation system
US7863012B2 (en) * 2004-02-17 2011-01-04 Veridex, Llc Analysis of circulating tumor cells, fragments, and debris
US20030099954A1 (en) * 2001-11-26 2003-05-29 Stefan Miltenyi Apparatus and method for modification of magnetically immobilized biomolecules
US20030119057A1 (en) * 2001-12-20 2003-06-26 Board Of Regents Forming and modifying dielectrically-engineered microparticles
US7018849B2 (en) * 2002-01-15 2006-03-28 Piasio Roger N Process for (A) separating biological/ligands from dilute solutions and (B) conducting an immunochromatographic assay thereof employing superparamagnetic particles throughtout
DE10224352A1 (de) * 2002-06-01 2003-12-11 Mueller Schulte Detlef Thermosensitive Polymerträger mit veränderbarer physikalischer Struktur für die biochemische Analytik, Diagnostik und Therapie
US20040067532A1 (en) 2002-08-12 2004-04-08 Genetastix Corporation High throughput generation and affinity maturation of humanized antibody
CN1230531C (zh) * 2002-12-09 2005-12-07 清华大学 从样品中分离细胞粒子的方法
CN1223680C (zh) * 2002-12-10 2005-10-19 清华大学 扩增靶细胞或病毒的核酸的方法
US20040142384A1 (en) * 2003-01-16 2004-07-22 Cohen Barb Ariel Magnetic separator
US7601491B2 (en) * 2003-02-06 2009-10-13 Becton, Dickinson And Company Pretreatment method for extraction of nucleic acid from biological samples and kits therefor
US20040157219A1 (en) * 2003-02-06 2004-08-12 Jianrong Lou Chemical treatment of biological samples for nucleic acid extraction and kits therefor
US20070003975A1 (en) * 2003-05-02 2007-01-04 Canon Kabushiki Kaisha Structured construct and producing method therefor
US20050277204A1 (en) * 2003-08-12 2005-12-15 Massachusetts Institute Of Technology Sample preparation methods and devices
CA2535153A1 (en) * 2003-08-12 2005-05-19 Massachusetts Institute Of Technology Sample preparation methods and devices
DE10350248A1 (de) * 2003-10-28 2005-06-16 Magnamedics Gmbh Thermosensitive, biokompatible Polymerträger mit veränderbarer physikalischer Struktur für die Therapie, Diagnostik und Analytik
US20050266394A1 (en) * 2003-12-24 2005-12-01 Massachusette Institute Of Technology Magnetophoretic cell clarification
WO2005064349A2 (en) 2003-12-30 2005-07-14 3M Innovative Properties Company Detection cartridges, modules, systems and methods
US20050181353A1 (en) * 2004-02-17 2005-08-18 Rao Galla C. Stabilization of cells and biological specimens for analysis
US20060024824A1 (en) * 2004-07-16 2006-02-02 Steven Woodside Magnetic cell separation method
AU2005271688B2 (en) * 2004-08-03 2011-10-06 Becton, Dickinson And Company Use of magnetic material to direct isolation of compounds and fractionation of multipart samples
DE102005002343A1 (de) * 2005-01-18 2006-07-27 Fraunhofer-Gesellschaft zur Förderung der angewandten Forschung e.V. Verfahren zur spezifischen oder unspezifischen Separation von Zellen und/oder Viren aus flüssigen Medien und dessen Verwendung
US7989065B2 (en) * 2005-05-20 2011-08-02 Seradyn, Inc. Magnetically-responsive microparticles with improved response times
US20090014682A1 (en) * 2005-05-20 2009-01-15 Jsr Corporation Carrier Polymer Particle, Process for Producing the Same, Magnetic Particle for Specific Trapping, and Process for Producing the Same
US7901950B2 (en) * 2005-08-12 2011-03-08 Veridex, Llc Method for assessing disease states by profile analysis of isolated circulating endothelial cells
ES2761937T3 (es) * 2005-10-24 2020-05-21 Magsense Life Sciences Inc Método para preparar micropartículas recubiertas con polímero
US9056291B2 (en) 2005-11-30 2015-06-16 Micronics, Inc. Microfluidic reactor system
US7763453B2 (en) * 2005-11-30 2010-07-27 Micronics, Inc. Microfluidic mixing and analytic apparatus
GB0606822D0 (en) 2006-04-05 2006-05-17 Alaska Food Diagnostics Assay System
WO2008007270A2 (en) * 2006-06-21 2008-01-17 Spinomix S.A. A method for manipulating magnetic particles in a liquid medium
US8870446B2 (en) 2006-06-21 2014-10-28 Spinomix S.A. Device and method for manipulating and mixing magnetic particles in a liquid medium
US8999732B2 (en) * 2006-06-21 2015-04-07 Spinomix, S.A. Method for manipulating magnetic particles in a liquid medium
US7862813B2 (en) 2006-07-29 2011-01-04 Bjork Jr Robert Lamar Bi-specific monoclonal antibody (specific for both CD3 and CD11b) therapeutic drug
CN101795744A (zh) * 2007-09-11 2010-08-04 阿尔利克斯公司 用于分选物体的结合方法和仪器
EP3124497B1 (en) 2007-09-14 2020-04-15 Adimab, LLC Rationally designed, synthetic antibody libraries and uses therefor
US8877688B2 (en) 2007-09-14 2014-11-04 Adimab, Llc Rationally designed, synthetic antibody libraries and uses therefor
US12529164B2 (en) 2007-09-14 2026-01-20 Adimab, Llc Rationally designed, synthetic antibody libraries and uses therefor
ES2640216T3 (es) 2007-12-07 2017-11-02 Miltenyi Biotec Gmbh Sistemas y métodos para procesamiento de células
JP2011509405A (ja) * 2008-01-07 2011-03-24 ルミネックス コーポレーション 生物学的標的の免疫磁気捕捉および撮像の方法
WO2009091643A1 (en) * 2008-01-07 2009-07-23 Luminex Corporation Isolation and enumeration of cells from a complex sample matrix
US20100018674A1 (en) * 2008-07-22 2010-01-28 Donald John Enzinna Reservoir with moveable partition for quick recovery
WO2010068812A1 (en) * 2008-12-10 2010-06-17 Abqmr, Inc. Nuclear magnetic resonance apparatus, methods and associated technology
US8697435B2 (en) 2009-08-31 2014-04-15 Mbio Diagnostics, Inc. Integrated sample preparation and analyte detection
EP2311564A1 (en) 2009-10-05 2011-04-20 Nederlandse Organisatie voor toegepast -natuurwetenschappelijk onderzoek TNO Microfluidic system with chamber and means for generating alternating magnetic fields
US8747677B2 (en) 2010-04-09 2014-06-10 Luminex Corporation Magnetic separation device
US9428547B2 (en) 2010-04-21 2016-08-30 Dna Electronics, Inc. Compositions for isolating a target analyte from a heterogeneous sample
US8841104B2 (en) 2010-04-21 2014-09-23 Nanomr, Inc. Methods for isolating a target analyte from a heterogeneous sample
US9476812B2 (en) 2010-04-21 2016-10-25 Dna Electronics, Inc. Methods for isolating a target analyte from a heterogeneous sample
US20110262989A1 (en) 2010-04-21 2011-10-27 Nanomr, Inc. Isolating a target analyte from a body fluid
EP2390661B1 (en) 2010-05-02 2015-06-24 Miltenyi Biotec GmbH An anchoring/capturing means for selecting or analyzing a CHO cell according to a product secreted by the CHO cell
US10126296B2 (en) 2010-08-05 2018-11-13 Abbott Point Of Care Inc. Immunoassay method and device with magnetically susceptible bead capture
US9329175B2 (en) 2010-08-05 2016-05-03 Abbott Point Of Care Inc. Oscillating immunoassay method and device
US9233370B2 (en) 2010-08-05 2016-01-12 Abbott Point Of Care Inc. Magnetic immunosensor and method of use
US11402375B2 (en) 2010-08-05 2022-08-02 Abbott Point Of Care Inc. Magnetic immunosensor with trench configuration and method of use
BR112013009008A2 (pt) 2010-10-14 2017-10-17 Veridex Llc métodos e kits para a detecção de células circulantes de tumor em pacientes pancreáticos com o uso de reagentes de detecção de captura e de coquetel poliespecíficos
SG190009A1 (en) * 2010-11-24 2013-06-28 Univ Nanyang Tech Method for encapsulating particles
EP2659002B1 (en) 2010-12-27 2017-02-01 Abbott Molecular Inc. Quantitating high titer samples by digital pcr
EP2597153B1 (en) 2011-11-25 2016-10-05 Miltenyi Biotec GmbH Cell separation method
JP6301263B2 (ja) 2011-12-23 2018-03-28 デピュイ・シンセス・プロダクツ・インコーポレイテッド ヒト臍帯組織由来細胞の検出
WO2013101741A1 (en) 2011-12-30 2013-07-04 Abbott Molecular, Inc. Channels with cross-sectional thermal gradients
US9804069B2 (en) 2012-12-19 2017-10-31 Dnae Group Holdings Limited Methods for degrading nucleic acid
US9434940B2 (en) 2012-12-19 2016-09-06 Dna Electronics, Inc. Methods for universal target capture
US9599610B2 (en) 2012-12-19 2017-03-21 Dnae Group Holdings Limited Target capture system
US10000557B2 (en) 2012-12-19 2018-06-19 Dnae Group Holdings Limited Methods for raising antibodies
US9551704B2 (en) 2012-12-19 2017-01-24 Dna Electronics, Inc. Target detection
US9995742B2 (en) 2012-12-19 2018-06-12 Dnae Group Holdings Limited Sample entry
CN103212377B (zh) * 2013-04-19 2014-09-24 哈尔滨益材新材料有限公司 一种琼脂糖免疫磁性微球的制备方法及其应用
JP6694819B2 (ja) 2014-01-21 2020-05-20 ステムセル テクノロジーズ インコーポレイテッド 表面に結合した単一特異性四量体抗体複合体の組成物を使用して、試料から標的実体を分離する方法
US9568404B2 (en) 2014-05-16 2017-02-14 Junyu Mai Method and apparatus for biomolecule analysis
EP2955521A1 (en) 2014-06-11 2015-12-16 Centre Hospitalier Universitaire Vaudois (CHUV) Methods for separating cells
CN107614458B (zh) 2015-05-01 2021-05-11 百进生物科技公司 稳定的纳米磁性颗粒分散体
WO2016183032A1 (en) 2015-05-08 2016-11-17 Biomagnetic Solutions Llc Apparatus and method for immunomagnetic cell separation
WO2016180948A1 (en) 2015-05-12 2016-11-17 INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) Methods and kits for labeling, detection and isolation of foxp3+ regulatory t cells, isolated population of foxp3+ regulatory t cells thus obtained and uses thereof
EP3347485B1 (en) 2015-09-11 2021-11-03 Bacteria Detection Ltd Methods for isolating microbial cells from a blood sample
AU2016353453B2 (en) 2015-11-11 2022-08-11 Serimmune Inc. Methods and compositions for assessing antibody specificities
JP6639906B2 (ja) * 2015-12-25 2020-02-05 東ソー株式会社 生物試料検出方法
US20190127697A1 (en) 2016-04-30 2019-05-02 BioLegend, Inc. Compositions and methods for performing magnetibuoyant separations
CN112135789B (zh) 2018-05-08 2023-09-08 生物磁性解决方案有限责任公司 从柔性一次性袋中分离细胞的刚性腔室
CN114397464B (zh) * 2022-03-24 2022-06-10 天津德祥生物技术有限公司 一种红细胞膜碎片与载体的偶联复合物、其偶联方法和应用
CA3257731A1 (en) 2022-06-29 2024-01-04 Abbott Laboratories OUTSIDE THE LABORATORY, MAGNETIC SYSTEMS AND ANALYSES FOR DETERMINING GLIOFIBRILLARY ACID PROTEIN IN BIOLOGICAL SAMPLES

Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US3937668A (en) * 1970-07-15 1976-02-10 Ilse Zolle Method for incorporating substances into protein microspheres
US3970518A (en) * 1975-07-01 1976-07-20 General Electric Company Magnetic separation of biological particles
DK150810B (da) * 1972-11-06 1987-06-22 Pharmacia Ab Fremgangsmaade til bestemmelse af et eller flere antigener i en proeve ved hjaelp af antistof bundet til smaa partikler

Family Cites Families (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
DE2322533C2 (de) * 1972-11-06 1986-08-28 Pharmacia AB, Uppsala Verfahren zum Binden von Immunoglobulin und Hilfsmittel zur Durchführung des Verfahrens
CA1039649A (en) * 1973-08-30 1978-10-03 General Electric Company Method of forming multilayer immunologically complexed films
US4018886A (en) * 1975-07-01 1977-04-19 General Electric Company Diagnostic method and device employing protein-coated magnetic particles
FR2334106A1 (fr) * 1975-12-02 1977-07-01 Pasteur Institut Gel magnetique convenant pour dosages immunoenzymatiques
GB1575805A (en) * 1976-03-12 1980-10-01 Technicon Instr Automatic diagnostic apparatus

Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US3937668A (en) * 1970-07-15 1976-02-10 Ilse Zolle Method for incorporating substances into protein microspheres
DK150810B (da) * 1972-11-06 1987-06-22 Pharmacia Ab Fremgangsmaade til bestemmelse af et eller flere antigener i en proeve ved hjaelp af antistof bundet til smaa partikler
US3970518A (en) * 1975-07-01 1976-07-20 General Electric Company Magnetic separation of biological particles

Also Published As

Publication number Publication date
IL59464A (en) 1983-09-30
EP0016552B2 (en) 1988-01-13
DE3060928D1 (en) 1982-11-18
US4230685A (en) 1980-10-28
EP0016552A1 (en) 1980-10-01
ATE1648T1 (de) 1982-10-15
JPS55143440A (en) 1980-11-08
EP0016552B1 (en) 1982-10-13
NZ192959A (en) 1982-09-14
IE800317L (en) 1980-08-28
ZA801062B (en) 1981-03-25
IL59464A0 (en) 1980-05-30
CA1127571A (en) 1982-07-13
DK154840C (da) 1989-05-29
IE49266B1 (en) 1985-09-04
DK83580A (da) 1980-08-29

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US4230685A (en) Method of magnetic separation of cells and the like, and microspheres for use therein
AU654278B2 (en) Antigen/anti-antigen cleavage
US6020210A (en) Methods and materials for high gradient magnetic separation of biological materials
US5385707A (en) Metal matrices for use in high gradient magnetic separation of biological materials and method for coating the same
US5411863A (en) Methods and materials for improved high gradient magnetic separation of biological materials
Ugelstad et al. Monodisperse magnetic polymer particles: new biochemical and biomedical applications
Urushihara et al. Immunological detection of cell surface components related with aggregation of Chinese hamster and chick embryonic cells
CA1217934A (en) Magnetic iron dextran microspheres
JP6716683B2 (ja) 安定なナノ磁性粒子分散
DE68925899T2 (de) Bindung von immunkomplexen durch modifizierte formen von c-reaktiven proteinen
JP4612982B2 (ja) 磁性細胞分離カラムにおける選択された細胞の改変方法
CA2095148A1 (en) Biodegradable particle coatings having a protein convalently immobilized by a crosslinking agent
US5248589A (en) Separation of cells and biological macromolecules by ferritin conjugates
Widder et al. Magnetic protein A microspheres: a rapid method for cell separation
JP2004003991A (ja) ゼラチン−アミノデキストラン被膜を有する粒子およびその製造方法
Karr et al. Cell separation by immunoaffinity partitioning with polyethylene glycol-modified protein A in aqueous polymer two-phase systems
Lonberg-Holm Attachment of animal virus to cells: an introduction
JPS61140523A (ja) 磁気微小球、それらを製造する方法、それらの使用および生物学的粒子の単離
CN107709366B (zh) 用于双功能免疫复合物的原位形成的方法
JPS6041618A (ja) モノクロナル抗体製剤
US11420136B2 (en) Affinity cell extraction by acoustics
Chang Blood compatible coating of synthetic immunoadsorbents
Streifel Microspheres and cell separation
Wang et al. Cell sorting using immunomagnetic beads
Skov Removal and refixation of surface Ig from isolated rat mast cells

Legal Events

Date Code Title Description
PBP Patent lapsed