DK158347B

DK158347B - Analogifremgangsmaade til fremstilling af 1-acyl-2,3-dihydro-1h-indol-2-carboxylsyrer eller derivater deraf samt mellemprodukter til brug ved fremgangsmaaden

Info

Publication number: DK158347B
Application number: DK348280A
Authority: DK
Inventors: Dong H Kim; Ronald J Mccaully
Original assignee: American Home Prod
Priority date: 1979-08-13
Filing date: 1980-08-12
Publication date: 1990-05-07
Also published as: ES8106292A1; JPS5636453A; MX160132A; PT71694A; ZA804946B; IL60799A0; PT71694B; AR229394A1; PH18414A; KR850001548B1; IL60799A; KR890001194B1; ES494201A0; FI802530A7; DK348280A; KR830003421A; AR227348A1; DK158347C; PH18389A

Description

i

DK 158347 B

Den foreliggende opfindelse angår en analogifremgangsmåde til fremstilling af l-acyl-2,3-dihydro-lH-indol--2-carboxylsyrer og derivater deraf med formlen 5 _ y r ,1 si o λ·*— il »

Jv / ^J— C—R— 5 10 1 0=C-CHR1-(CHo) -R.

1 4 n 4 15 hvor n er 0 eller 1, ^ er hydrogen eller C^-C^-alkyl, R5 er hydroxy eller c1-c4-alkoxy/ X er hydrogen, hydroxy, C1-C4-alkyl, c1-c4-alkoxy eller halogen, R4 er

20 O

11 -SH, -S-C-R8 eller -NH-CH-(CH2)m-phenyl COR2i hvor Rg er C1-C4-alkyl eller phenyl, m er 1, 2 eller 3, og 25 r2i er hydroxy eller C1-C4-alkoxy, eller pharmaceutisk acceptable salte deraf.

Forbindelserne med formlen I optræder som inhibitorer for det angiotensin-omdannende enzym og er værdifulde som midler til behandling af hypertension.

30 Opfindelsen angår endvidere mellemprodukter til brug ved fremgangsmåderne.

Som udtrykkene anvendes her, betyder "aryl" phenyl eller phenyl substitueret med en halogen-, en lavere alkyl-eller en lavere alkoxygruppe. "Aralkyl" er benzyl eller 35 benzyl substitueret som ovenfor for phenyl. "Aroyl" er benzoyl eller benzoyl substitueret som ovenfor for phenyl.

DK 158347 B

2

Halogen er chlor, brom og fluor.

I den pharmakologiske forskning af hypertension er opmærksomheden for nylig blevet fokuseret på undersøgelsen af renin-angiotensin-aldosteronsystemet og især på udviklin-5 gen af et effektivt anti-hypertensivt middel, der teoretisk når et resultat ved at inhibere virkningen af antiotensin--omdannnende enzym ved omdannelsen af angiotensin I til angiotensin II. Inhiberingen af angiotensin Il-produktionen bliver vigtig, fordi det har vist sig, at angiotensin II er 10 det kraftigste pressor-middel (karsammentrækkende), der er til stede i pattedyrets krop, og desuden stimulerer binyrebarken til at frigive aldesteron og derved forårsager for stor natriumretention og væskeretension, hvilket bidrager yderligere til den hypertensive tilstand. Ved således at 15 inhibere omdannelsen af angiotensin I til angiotensin II mener man direkte at kunne gribe ind i de primære biokemiske mekanismer, der skaber forøget blodtryk. Med hensyn til en beskrivelse af mekanismerne og af det renale angiotensin--aldosteronsystem hos pattedyr henvises til Hypertension af 20 Genest m.fl., kap. 6,1, 6,2, 7,1, 7,2 og 7,3 (McGraw Hiil, 1977) og til John H. Laragh, "The Renin System in High Blood Pressure, From Disbelief to Reality: Converting-Enzyme Blockade for Analysis and Treatment", Prog, in Cardio. Vase. Disease, XXI, nr. 3, 159-166 (november, 1978).

25 En omfattende liste over inhibitorer af angiotensin- -omdannende enzym er anført i Suzanne Oparil's artikel "Angiotensin I Converting Enzyme and Inhibitors" af Genest m.fl. overfor, kap. 6,3 side 159-161. Disse inhibitorer er samlet i tabel I på side 161 og omfatter chelateringsmidler, 30 sulfonyleringsmidler, tunge metalioner, sulfhydrylbindemidler og forskellige peptider. De polypeptider, der her er beskrevet som angiotensin-omdannende enzyminhibitorer, omfatter hormoner såsom bradykinin, produkter af substratfordøjelse såsom His-Leu, Phe-Arg og Arg-Pro-Pro, og forskellige poly-35 peptidekstrakter af slangegifte. To af de kraftigste og mest undersøgte inhibitorer er giftekstrakten fra Bothrops

DK 158347B

3 jararacaslangen, pentapeptidet (Pyr-Lys-Trp-Ala-Pro), også kaldet BPP5a, og nonapeptidet (Pyr-Lys-Trp-Pro-Arg-Pro-Gln--Ile-Pro-Pro), også kaldet BPPga. (BPP står for bradykinin--potentierende peptid). BPPga har vist sig at være et effek-5 tivt antihypertensivt middel ved kliniske undersøgelser af mennesker med visse former for hypertension. Imidlertid er BPPga ikke aktivt som ant i-hyper tens ivt middel ved oral indgivelse. Med hensyn til en oversigt over de kliniske aspekter for BPPga henvises til Genest m.fl., ovenfor, kap.

10 6,3, side 163—4.

Senere har en række prolinderivater vist sig at være betydelig stærkere som inhibitorer af angiotensin-omdannende enzym og som anti-hypertensive midler end BPPga. Af disse prolinderivater har D-3-mercapto-2-methylpropanoyl-L-prolin 15 været rapporteret som det mest effektive, idet det også er effektivt, når det indgives oralt. Disse prolin- og mercap-toprol inder ivater og forskellige pharmakologiske prøveresultater med dem er beskrevet i Cushman m.fl. "Design of New Anti-hypertensive Drugs: Potent and Specific Inhibitors of 20 Angiotensin Converting Enzyme", Prog, in Cardio. Diseases, bd. XXI, nr. 3 (nov./dec. 1978) samt i USA-patentskrifterne nr. 4.046.889 og 4.105.776.

En almen beskrivelse af forbindelserne, der fremstilles ved fremgangsmåden ifølge opfindelsen, er givet med 25 ovenstående formel I. En foretrukket gruppe (IC) forbindelser med formlen I er sådanne, hvor R4 er -SH eller 0 u -S-C-Rg , hvor R8 er C1-C4-alkyl eller phenyl. En anden foretrukket 30 gruppe (ID) forbindelser med formlen I er sådanne, hvor R4 er -NH-CH-(CH2)m-phenyl, hvor m er 1, 2 eller 3, og R2i er C0R2i hydroxy eller C^-C4-alkoxy. Foretrukne forbindelser i denne (ID) gruppe er sådanne, hvor m er 2, og R2i er ethoxy eller 35 hydroxy.

Andre foretrukne forbindelser med formlen I omfatter

DK 158347B

4 sådanne, hvor R^ er hydrogen eller C1-C4-alkyl; R4 er mer-capto eller benzoylthio; n er 1; n er 0; eller R5 er hydroxy. Særlig foretrukne forbindelser med formlen I omfatter sådanne, hvor X er hydrogen; R^ er C1-C4-alkyl; R4 er mercap-5 to eller benzoylthio; n er 1, og Rx er C]_-C4-alkyl; eller n er 0, og R;l er C1-C4-alkyl. En særlig foretrukket forbindelse med formlen I er forbindelsen ifølge eksempel 40.

Når R^ i formlen I ikke er hydrogen, er det carbon-atom, hvortil den er knyttet, et asymmetrisk carbonatom.

10 Desuden er carbonatomet betegnet 2 i formlen I asymmetrisk.

Når R4 er -NH-CH(C0R2 χ)~(CH2)m-phenyl, er carbonatomet, hvortil -COR2i-gruppen er knyttet, asymmetrisk. Forbindelserne, der fremstilles ved fremgangsmåden ifølge opfindelsen (inkl. mellemprodukterne), forekommer således i stereoisomere 15 former eller i racemiske blandinger deraf.

Opfindelsen omfatter ligeledes mellemprodukterne med formlen

” --Cp-U

0=C-CHR1-(CH2)n-NH2 25 hvor n er 0 eller 1, Rx er hydrogen eller Ci-C4-alkyl, X er hydrogen, hydroxy, C1-C4-alkyl, C1-C4-alkoxy eller halogen og hvor R5 er hydroxy eller C^-C^-alkoxy, eller salte deraf.

Analogifremgangsmåden til fremstilling af forbindel-30 serne med formlen I er karakteriseret ved, at

a) en forbindelse med formlen B

DK 158347 B

5 H9C=C-C=0 i hvor X, og R5 har de ovenfor anførte betydninger, omsættes 10 med en thiosyre med formlen

O

II

h-s-c-r8, til dannelse af en forbindelse med formel I, hvor R4 betyder 15 0

II

-S-C-R8, der eventuelt underkastes hydrolyse eller ammonolyse til dannelse af sådanne forbindelser med formlen hvor R4 er 20 -SH, eller b) en forbindelse med formlen c 0=C-CHR1(CH2)n-NH2 hvori n, R^, R5 og X har de ovenfor angivne betydninger, 30 kondenseres med en forbindelse med formlen

Br-CH(COR2i)-(CH2)ln-phenyl eller R21OC-CO-(CH2)m-phenyl, til dannelse af en forbindelse med formlen I, hvori R4 betyder -NH-CH(COR21)-(CH2)m-phenyl, eller c) en 2,3-dihydro-indol-2-carboxylsyre med formlen 35

DK 158347 B

6 i i i

H

5 hvori R5 og X har de ovenfor angivne betydninger, kondenseres med et alkyl- eller phenylthioalkanoylhalogenid med formlen

O O

10 II II

R8-C-S-(CH2)n-CHRi-C-W

hvori R8, R! og n har de ovenfor angivne betydninger, og W betyder chlor, brom eller iod, til dannelse af en forbindelse med formlen I, hvori R4 be-15 tyder 0

II

-S-C-Rg, som derefter om ønsket underkastes hydrolyse eller ammonolyse 20 til dannelse af de forbindelser med formlen I, hvori R4 betyder -SH, eller med en N-substitueret syre eller syrehalo-genid med formlen 0

II

25 HOC-CHR1-(CH2)n-NH-CH(COR2i) -(CH2)m-phenyl til dannelse af en forbindelse med formlen I, hvori R4 betyder -NH-CH(C0R21)-(CH2)m-phenyl, hvorefter et ved en af de foregående reaktioner fremstillet produkt om ønsket omsættes med en passende syre eller base 30 til dannelse af et farmaceutisk acceptabelt salt af et sådant produkt.

DK 158347B

7

Nedenstående reaktionsskema viser fremgangsmåden til fremstilling af sådanne forbindelser med formlen I, hvor n er 1, og R5 er hydroxy.

DK 158347B

8

Skema I

x_€O00Z whQci « C02Z ... « CO 2 H - HC~C-CO 2

i I

111 15\ ' , IV

B

V

x_C30 ΐ co2h J co2h

RqCOSCH—CHCO H(f j-00

*15*1 la ^ «I VA

' D V

r^N—^ x—c Ί

^TC0oH

I 2

HSCH—CHCO

li -R15 1 Ib

DK 158347B

9 hvor X, Ri og R8 har de ovenfor anførte betydninger, R15 betyder hydrogen eller Ci-C4-alkyl, og Z er en carboxylsyre--beskyttende gruppe (inkl. en lavere alkylgruppe).

Fremstillingen af udgangsmaterialet (III) er beskrevet 5 af Corey m.fl. i J. Am. Chem. Soc., 92, 2476-2488 (1970).

De ønskede X-substituenter kan fås fra udgangsmaterialet III på kendt måde.

Når den carboxylsyre-beskyttende gruppe (Z) er den ønskede lavere alkylgruppe, er trinnet B til fjernelse af 10 beskyttelsen ikke nødvendigt. I sådanne tilfælde er R5 som ønsket i slutproduktet.

I trin A i skema I omsættes den beskyttede forbindelse III med et acryloylderivat med formlen R15HC=CRiCORig (VI), hvor Ri og R15 er som defineret ovenfor, og COR15 er en 15 aktiveret carboxylgruppe såsom et acylhalogenid, en aktiv ester eller et blandet anhydrid. Acylhalogenidgruppen er foretrukket. Denne reaktion foretages i et inaktivt organisk opløsningsmiddel såsom ether eller methylenchlorid i nærværelse af et syrefjernelsesmiddel såsom triethylamin, når 20 der dannes en syre under reaktionen.

Eventuelt kan i trin A en substitueret alkylacylforbindelse med formlen Br(CH2)nCHRiCORig (VII), hvor n, Ri og Ri5 har de ovenfor anførte betydninger, omsættes med udgangsmaterialet III. Ved denne metode behøver carboxyl-25 syregruppen ikke at være beskyttet, og trin B kan derfor udelades. Anvendelsen af denne måde (dvs. anvendelse af reaktant VII i trin A) tillader fremstilling af alle forbindelser med formlen I med hensyn til n, Ri og R3.

Den carboxylsyre-beskyttende gruppe kan vælges blandt 30 de kendte carboxylsyrebeskyttende grupper, f.eks. methyl-, ethyl og tert.butylestere og forskellige amidgrupper. Forskellige carboxylsyre-beskyttende grupper og deres anvendelse er beskrevet i McOmie, Protective Groups in Organic Chemistry, kap. 5 (Plenum Press, 1973). En egnet beskyttende 35 gruppe skal vælges på grundlag af, (1) at den reaktant, ved hjælp af hvilken den indføres, ikke reagerer med en

DK 158347B

10 anden del af molekylet, (2) at den beskyttende gruppe ikke griber ind i følgende reaktioner, og (3) at den proces, hvorved den fjernes, ikke virker på andre dele af molekylet.

I trin B i skema I fjernes beskyttelsen fra carboxyl-5 gruppen. Til fjernelse af en alkyl-beskyttende gruppe ved hjælp af hydrolyse er behandling af mellemproduktet IV først med en vandig dimethylsulfoxid-kaliumhydroxidopløsning og derefter ved behandling med en fortyndet mineralsyre såsom saltsyre eller svovlsyre en passende metode. Andre metoder 10 til fjernelse af beskyttelsen for carboxylsyregrupper er beskrevet i litteraturen, f.eks. McOmie, ovenfor.

I trin C kobles thiogruppen R4 med formlen

O

it “S-C-Rg, 15 hvor Rg er hydrogen, C1-C4-alkyl eller phenyl, til mellemproduktforbindelsernes (V) sidekæde eller til mellemproduktforbindelserne VIII, der fremstilles ved omsætning af udgangsmaterialet III med reaktanten VII. De reaktanter, der anvendes i trin c til dannelse af den ønskede R4-thiogruppe 20 (undtagen når R4 er -SH), er thiosyrer og thioler. Disse danner en thioacyl- eller thiogruppe ved tilføjelse til det 3. carbonatom i alkensidekæden (mellemprodukt V) eller ved substituering af bromet ved det andet og tredje carbonatom i sidekæden, hvor reaktanten VII blev anvendt. Disse reak-25 tioner kan foretages i et inaktivt organisk opløsningsmiddel såsom methylenchlorid, THF eller dioxan.

Til fremstilling af forbindelser med formlen I, hvor R4 er SH, dannes der fortrinsvis i trin C en thiobenzoylfor-bindelse, der fjernes ved hydrolyse eller ammonolyse i trin 30 D. En sådan ammonolyse kan ske ved først at behandle et passende mellemprodukt la med en methanolisk ammoniakopløsning og derefter at behandle det fremkomne produkt med syre såsom saltsyre til pH ca. 2.

Det skal bemærkes, at de forskellige forbindelser 35 med formlen la, hvor R4 er

DK 158347B

11 o u -S-C-Rg , hvor Rg har den ovenfor anførte betydning, er mellemprodukter, der er anvendelige ved fremstillingen af mercaptofor-5 bindeiserne med formlen IB, hvor R4 er -SH.

Forbindelser, hvor R4 er -NHCH(COR2i)“(CH2)m-pheny1, kan fremstilles ud fra et mellemprodukt med formlen N-[NH2-(CH2)n-CHR1-CO]-B (XI), hvor B er det ønskede 2,3--dihydro-lH-indolcarboxylsyre-udgangsmateriale, der er pas-10 sende beskyttet, ved kondensering med forbindelser med formlerne BrCH(COR21)-(CH2)m-phenyl (XV) eller RziOC-CO-(Ch2)m-phenyl (XVI). Mellemproduktet XI kan fremstilles ved omsætning af et passende mellemprodukt med formlen VIII med ammoniak. Når XV er reaktant, kan der anvendes 15 betingelser, der giver kerneombytning, f.eks. et polært opløsningsmiddel såsom dimethylformamid i nærværelse af en base med eller uden tilsætning af katalytiske mængder ka-liumiodid. Når det er XVI, der er reaktant, anvendes der betingelser, der giver reduktiv alkylering. Således kan XI 20 kondenseres med XVI i et opløsningsmiddel i nærværelse af hydrogen og en hydrogeneringskatalysator ifølge de metoder, der er beskrevet af W.E. Emerson, organic Reactions IV, 174 (1948). Alternativt kan XI kondenseres reduktivt med XVI i et surt pufret opløsningsmiddel med et alkalimetalcyanobor-25 hydrid. Gængse metoder til sådanne kondensationer er beskrevet af R.F. Borch, M.D. Bernstein og H.D. Dust, i J.

Am. Chem. Soc., 93, 2897 (1971).

En foretrukket metode til fremstilling af optisk aktiv 1- (S)-2,3-dihydro-l-[(S)-3-mercapto-2-methyl-l-oxo-30 propyl]-lH-indol-2-carboxylsyre, 3-benzoylthio-forstadiet dertil eller dicyclohexylaminsaltene af sidstnævnte omfatter følgende trin: (a) Fremstilling af l-3-benzoylthio-2-methylpropionyl-chlorid ved blanding af l-3-benzoylthio-2-methylpropionsyre 35 med thionylchlorid i nærværelse af en katalytisk mængde trialkylamin ved stuetemperatur og afdampning af de flygtige

DK 158347 B

12 komponenter i vakuum.

(b) Kondensering af propionylchloridet med d,1-2,3-dihydro-lH-indol-2-carboxylsyre i et med vand ikke blandbart opløsningsmiddel i nærværelse af to ækvivalenter trialkylamin 5 ved 0-10°C i 2-15 minutter og ved stuetemperatur i 1-5 timer.

(c) Isolering af det rå kondensationsprodukt ved syrning, ekstraktion, dehydratisering og inddampning.

(d) Udfældning af l-(S)-2,3-dihydro-l-[(S)-3-benzoyl-thio-2 -methyl-l-oxopropylJ-lH-indol-2-carboxylsyredicyclo- 10 hexylaminsalt ud fra en acetonitrilopløsning ved tilsætning af dicyclohexylamin til en acetonitrilopløsning af det nævnte rå kondensationsprodukt.

(e) Eventuel omkrystallisering af dicyclohexylamin-saltet ud fra en lavere alkanol, 15 (f) Regenerering af l-(S)-2,3-dihydro-l-[(S)-3-ben- zoylthio-2-methyl-l-oxopropyl]-lH-indol-2-carboxylsyren ved syrning med kaliumhydrogensulfat, ekstraktion med et med vand ikke blandbart opløsningsmiddel, dehydratisering og inddampning, og 20 (g) fraspaltning af benzoyl-thiobindingen, ved at 1- (S) -2,3-dihydro-l-[ (S) -3-benzoylthio-2-methyl-l-oxopropyl]--ΙΗ-indolcarboxylsyren i en inaktiv atmosfære bringes i berøring med en alkoxy-lavere alkylamin såsom 2-methoxyethyl-amin efterfulgt af syrning, ekstraktion i et med vand ikke 25 blandbart opløsningsmiddel, dehydratisering og inddampning, hvilket giver den ønskede 1-(S)-2,3-dihydro-l-[(S)-3-mer-capto-2-methyl-l-oxopropyl]-lH-indol-2-carboxylsyre, der yderligere kan renses ved omkrystallisering ud fra ethyl-acetat/hexan.

30 Udgangsmaterialet l-3-benzoylthio-2-methylpropionsyre kan fås ved opløsning af den racemiske syre ved dannelse af et salt med dehydroabietylamin efterfulgt af syrning. Udgangsmaterialet d,l-2,3-dihydroindol-2-carboxylsyre er beskrevet i litteraturen.

35 Forbindelserne, der fremstilles ved fremgangsmåden ifølge opfindelsen, danner basiske salte med forskellige

DK 158347B

13 uorganiske og organiske baser. Sådanne salte omfatter ammoniumsalte, alkalimetalsalte såsom natrium- og kaliumsalte (der er foretrukket), jordalkalimetalsalte såsom calcium-og magnesiumsalte, salte med organiske baser, f.eks. dicyc-5 lohexylaminsalt, benzathin, N-methyl-D-glucamin, hydrabamin-salte, salte med aminosyrer såsom arginin, lys in og lignende.

De ikke-toksiske fysiologisk acceptable salte er foretrukket, selv om andre salte også kan anvendes, f.eks. til isolering eller rensning af produktet som vist i eksemplerne for di-10 cyclohexylaminsaltets vedkommende.

Forbindelserne med formlen XI danner syresalte med forskellige uorganiske og organiske syrer, f.eks. saltsyre, methansulfonsyre (mesylat) og toluensulfonsyre (tosylat).

Saltene dannes på gængs måde ved at omsætte den fri 15 syreform af produktet med 1 eller flere ækvivalenter af en passende base, der giver det ønskede kation i opløsningsmiddel eller medium, hvori saltet er uopløseligt eller i vand, og ved at fjerne vandet ved frysetørring. Ved neutralisering af saltet med en uopløselig syre såsom en kat i onby tt erharpiks 20 i hydrogenform, f.eks. polystyrensulfonsyreharpiks såsom "Dowex" 50, eller med en vandig syre og ekstraktion med et organisk opløsningsmiddel f.eks. ethylacetat, dichlormethan eller lignende, fås den frie syreform, og der kan om ønsket dannes et andet salt.

25 Forbindelsernes inhiberende egenskaber over for det angiotensin-omdannende enzym (ACE) måles in vitro og in vivo. In vitro benyttes der til prøven kaninlungeekstrakt og et særligt tripeptidsubstrat, hippuryl-L-histidyl-L-leu-cin, der er foretrukket, og man følger Cushman m.fl. 's metode 30 i Biochem. Pharmacol., 20, 1637-1648 (1971).

Forbindelsernes ACE-inhiberende virkning in vivo måles ved den af Rubin m.fl. i J. Pharmacol. Exp. Ther., 204, 271-280 (1978) beskrevne metode, der benytter en rotte ved bevidsthed og med normalt tryk til prøven. Ved denne metode 35 anbringes halsvene- og halspulsårekanylerne i en ether-an-æsteritiseret Sprague-Dawley hanrotte med normalt tryk til

DK 158347B

14 injicering eller oral dosering af forbindelser og direkte måling af det systemiske arterietryk. Blodtryksreaktionerne på i.v. injektioner af angiotensin I (300 ng/kg) angiotensin II (100 ng/kg) og bradykinin (10 Mg/kg) noteres og sammen-5 lignes med identiske doser, der indgives med forskellige tidsintervaller efter oral indgivelse af en eventuel an-giotensin-omdannende enzyminhibitor. Det forventes ikke nødvendigvis, at inhibitoren for det angiotensin-omdannende enzym sænker arterietrykket hos en rotte med normalt tryk, 10 men det forventes, at angiotenin I-pressor-reaktioner blokeres uden i højere grad at ændre angiotensin Il-reaktioner.

Det forventes yderligere, at vasodepressorreaktionen på bradykinin ville være forøget, idet man ved, at det angiotensin-omdannende enzym i reglen inaktiverer bradykinin.

15 Når forbindelserne med formlen I indgives oralt og intravenøst på denne måde, udviser de en evne til at inhibere angiotensin-omdannende enzym ved doser på 0,1-10 mg/kg.

Forbindelsernes anti-hypertensive virkning måles på spontant hypertensive rotter. Ved denne metode måles det 20 systoliske tryk på spontant hypertensive hanrotter ved hjælp af en indirekte teknik under anvendelse af Decker Caudal Pelthysmograph eller et andet egnet apparat. Grupperne består i reglen af 4 eller flere rotter. Præparaterne indgives i reglen oralt. Trykkene aflæses i reglen før præparatind-25 giveisen og 1,5, 4 og 24 timer derefter. Dette skema kan ændres afhængigt af præparatets virkemåde.

Ved denne metode måles de pågældende forbindelsers hypotensive virkning på et hypertensivt individ ved anvendelse af en enkelt dosis og ved måling af reaktionen over 30 en periode på 24 timer. Når forbindelserne, der fremstilles ved fremgangsmåden ifølge opfindelsen, indgives oralt, frembringer de en betydelig nedgang i blodtrykket i doser på 1-50 mg/kg. Når forbindelserne skal anvendes til behandling af hypertension hos varmblodede dyr, skal der anvendes doser 35 på mindre end 15 mg/kg/dag, og fortrinsvis doser på mindre end 5 mg/kg/dag. Sådanne effektive behandlingsdoser indgives

DK 158347B

15 i reglen ved en antihypertensiv langtidsterapi. Angioten-sinomdannende enzyminhibitorer er, når de anvendes som anti-hypertensive midler, mest effektive ved en sådan længevarende indgivelse og viser ingen udprægede bivirkninger, når de 5 indgives i moderate eller lave doser. Som tidligere bemærket udviser forbindelserne, der fremstilles ved fremgangsmåden ifølge opfindelsen, kun hypotensiv (depressor) reaktion, når de indgives til hypertensive individer og kan ikke forventes at sænke blodtrykket mærkbart hos individer med nor-10 malt tryk.

Porbindelserner med formlen I kan indgives oralt, intravenøst, intraperitonealt, intramuskulært eller sub-cutant. Oral indgivelse foretrækkes.

Når forbindelserne anvendes til at sænke blodtrykket 15 hos hypertensive individer, varierer den effektive dosis forbindelse, der anvendes ved en sådan behandling, alt efter den særlige forbindelse, der anvendes, arten og graden af den lidelse, der behandles, og det enkelte individ, der behandles. Terapien skal påbegyndes ved lavere doser (i 20 mg/kg/dag) i de effektive intervaller, der er anført ovenfor, idet dosis derefter forøges, om nødvendigt, til at frembringe den ønskede anti-hypertensive virkning.

Når de anvendes som anti-hypertensive midler eller som angiotensin-omdannende enzyminhibitorer, kan forbindel-25 serne, der fremstilles ved fremgangsmåden ifølge opfindelsen, indgives alene eller kombineret med farmaceutisk acceptable bærere. Mængden og arten af sådanne bærere bestemmes af den - valgte forbindelses opløselighed og andre kemiske egenskaber, den valgte indgivelsesvej og farmaceutisk standardpraksis.

30 Opfindelsen vil i det følgende blive nærmere belyst ved hjælp af eksempler.

35

DK 158347 B

16

Eksempel 1 2,3-Dihydro-l-(2-methyl-1 -oxo-2-propeny 1) -lH-indol-2-carb- oxvlsvreethvlester_

Til en afkølet og omrørt blanding af 4,78 g (25,0 5 mmol) 2,3-dihydroindol-2-carboxylsyreethylester, 2,7 g (26,7 mmol) triethylamin og 500 ml vandfri ether sættes dråbevis 2,9 g (27,7 mmol) methacryloylchlorid opløst i en lille smule ether. Efter at tilsætningen er tilendebragt, fjernes isbadet, og reaktionsblandingen omrøres i 4 timer. Bundfal-10 det, der udskilles, fjernes ved filtrering, og filterremanensen vaskes med ether. Det forenede filtrat og vaskevæske vaskes med vand (2 x 700 ml), derefter med saltvand og tørres med vandfrit magnesiumsulfat. Afdampning af opløsningsmidlet under formindsket tryk på en rotations fordamper giver pro-15 duktet som en olie. Produktet renses ved præparativ HPLC (»Prep LC/System 500", Waters Associates) under anvendelse af en mikroporasilkolonne elueret med blanding af 95% hexan og 5% ethylacetat. den rå olie kan anvendes direkte i den følgende reaktion.

20 MS rn/e 259 (M+), 186 (M+-C02Et); NMR (CDC13) 1,25 (t, 3H, CH3CH2), 2,03 (s, 3H, CH30) , 3,35 (ABX m, 2H, CH2) , 4,25 (g, 2H, CH3CH2), 5,05 (g, IH, CHC02) , 5,30 (m, 2H, CH2=) , 7,07 og 7,70 (m, 4H, aromatiske); TLC URF 0,89.

DK 158347B

17

O I

Eksempel 2 2,3-Dihydro-l-(2-methyl-l-oxo-2-propenyl)-lH-indol-2-carbox- ylsyre

En blanding af 3,9 g 2,3-dihydro-l-(2-methyl-l-oxo-5 -2-propenyl)-lH-indol-2-carboxylsyreethylester (15,0.mmol) 90 ml 80% vandig dimethylsulfoxid og 1,3 g (19,9 mmol) kaliumhydroxid som 86% pellets omrøres under nitrogenatmosfære i 2 dage ved stuetemperatur, inddampes derefter under formindsket tryk på en roterende fordamper, hvilket giver en olieag-10 tig remanens. Remanensen opløses i vand (alt uopløseligt materiale fjernes ved filtrering), og den vandige opløsning gøres sur ved forsigtig tilsætning af fortyndet saltsyre, hvorpå en olie udskilles. Det olieagtige produkt ekstraheres med ether, og etherekstrakten vaskes med vand 3 gange, derefter 15 med saltvand. Etheropløsningen tørres med vandfrit magnesiumsulfat og inddampes under formindsket tryk, hvilket giver et olieagtigt produkt. Olien opløses i tør acetonitril, og der tilsættes dråbevis dicyclohexylamin, indtil opløsningens pH er ca. 8,5. Et krystallinsk bundfald filtreres fra.

20 Blandingen henstår natten over ved stuetemperatur, og bundfaldet opsamles på et filter, og filterremanensen vaskes med ether flere gange, hvilket giver 3,46 g 2,3-dihydro-l-(2-me-thyl-1-oxo-2-propenyl)-lH-indol-2-carboxylsyre-dicyclohexyl-aminsalt (smeltepunkt 185-190°C). Omkrystallisation ud fra 25 2-propanol giver 3,1 g (50,0%) af den i overskriften nævnte forbindelse som dicyclohexylaminsaltet (smeltepunkt 193-195°C) (smeltepunktet er ukorrigeret).

Analyse:

Beregnet for C25H33N3°3.1/4 ^0: C 72,16, H 8,60, N 6,75.

30 Fundet: C 72,05, H 8,83, N 6,64.

Saltet deles mellem 50 ml 5% vandig kaliumbisulfat-opløsning og 3 gange ethylacetat, og ethylacetatekstrakten vaskes med vand, tørres derefter med vandfrit magnesiumsulfat.

35

DK 158347B

O

18

Inddampning af ethylacetatopløsningen under formindsket tryk på en roterende fordamper giver 1,8 g fri 2,3-dihydro-l-(2--methyl-1-oxo-2-propenyl)-lH-indol-2-carboxylsyre i harpiksform, der størkner ved henstand. Det faste stof opløses i 5 ether, og etheropløsningen inddampes i fri luft, hvorefter et bundfald udskilles. Blandingen afkøles i is, og bundfaldet opsamles på et filter og vaskes med ether. Produktet smelter ved 138-140°C.

Analyse: 10 Beregnet for ci3Hi3N03: c 67,52, H 5,67, N 6,06.

Fundet: C 67,15, H 5,75, N 5,76.

Eksempel 3 1-(3-Benzoylthio-2-methyl-l-oxopropyl)-2,3-dihydro-lH-indol-2-15 -carboxylsyre A. 0,75 g (5,2 mmol) 95% thiobenzoesyre opløses i ca. 3 ml tør methylenchlorid sættes til en opløsning af 1,2 g (5,2 mmol) 2,3-dihydro-l-(2-methyl-1-oxo-2-propenyl)-lH-in-dol-2-carboxylsyre i 25 ml tør methylenchlorid afkølet i is-20 bad. Isbadet fjernes, og reaktionsblandingen omrøres ved stuetemperatur i 0,5 time. Reaktionsblandingen nedsænkes derefter i et oliebad, idet temperaturen holdes på 85 * 5°C i 3 timer, og inddampes under formindsket tryk under anvendelse af en roterende fordamper, hvilket giver en harpiksagtig 95 remanens. Tilsætning af en lille smule ethanol til remanensen forårsager delvis størkning af remanensen. Det faste materiale skilles fra ved filtrering og omkrystalliseres ud fra ethanol, hvilket giver 0,4 g (21%) af et produkt, der smelter ved 187-188°C. En analytisk prøve, der fås ved omkrystalli-30 sation ud fra ethanol smelter ved 188-190°C. Tyndtlagschro-matografi udført på en Merck silcagelplade under anvendelse af en.blanding af methylenchlorid (8), ethanol (2), triethy1-amin (1) og toluen (1) viser én plet med 0,7.

Analyse: 35 Beregnet for C2oHi9N04S: C 65,02, H 5,18, N 3,79.

Fundet: C 64,63, H 5,27, N 3,69.

O

DK 158347 B

19 B. Modervæskerne fra de ovennævnte omkrystalli-sationer inddampes, hvorved fås et harpiksagtigt materiale. Remanensen opløses i ether, og etheropløsningen inddampes under en langsom nitrogenstrøm, der får det krystallinske 5 materiale til at afsættes. Den krystallinske afsætning filtreres og omkrystalliseres ud fra ether, hvilket giver 0,5 g (25%) produkt, der indeholder 1/4 mol ethersolvat., smeltepunkt 116-117°C. Dette produkt er den racemiske dia-stereoisomer af det materiale, der smelter ved 188-190°C 10 (eksempel 3A). Tyndtlagschromatografi udført på en Merck silicagelplade under anvendelse af en blanding af methylen-chlorid (8), ethanol (2), triethylamin (1) og toluen (1) som fremkaldende opløsning viser én plet med 0,6.

Analyse: 15 Beregnet for ^oH-^gNO^S.1/4 Et20: C 65,01, H 5,59, N 3,61. Fundet: C 64,71, H 5,51, N 3,32.

Eksempel 4 2,3-Dihydro-l-(3-mercapto-2-methyl-l-oxopropyl)-IH-indo1-2-20 -carboxylsyre

En blanding af 0,6 g (1,6 mmol) 1-[3-(benzoylthio}--2-methyl-l-oxopropyl]-2,3-dihydro-lH-indol-2-carboxylsyre (eksempel 3A, smeltepunkt 188-190°C) og 9 ml 5,5N methanolisk ammoniakopløsning omrøres ved stuetemperatur i 2,5 timer, ind-25 dampes derefter under formindsket tryk på en roterende fordamper, hvilket giver et harpiksagtigt materiale. Remanensen opløses i vand, og derefter vaskes den vandige opløsning med ether tre gange. Det vandige lag gøres surt ved dråbevis tilsætning af fortyndet saltsyre, indtil opløsningens pH er ca.

30 2 (ved hjælp af pH-papir). Den således fraskilte olie eks- traheres med ethylacetat to gange, og ethylacetatekstrakten vaskes med vand, derefter med saltvand og tørres over vandfrit magnesiumsulfat. Afdampning af ethylacetat på en roterende fordamper under formindsket tryk og derefter i vakuum 35 giver en olie. Remanensen opløses i tør acetonitril, og der tilsættes dråbevis dicyclohexylamin, indtil opløsningens pH er ca. 8,5. Den fremkomne blanding holdes ved stuetemperatur

. DK158347B

20

O

i to timer og derefter i et koldt rum i ca. 0,5 time. Bundfaldet, der udskilles, opsamles på et filter og vaskes med acetonitril, hvilket giver 0,63 g 2,3-dihydro-l-(3-mercapto--2-methyl-l-oxopropyl)-lH-indol-2-carboxylsyre-dicyclohexyl-5 aminsalt, smeltepunkt 203-205°C. Smeltepunktet for en blanding af dette salt og DCHA-saltet i eksempel 5 bliver lavere. Analyse:

Beregnet for C25H38^2^3^: C 67,22, H 8,58, N 6,27.

Fundet: C 66,88, H 8,33, N 6,29.

10 De 0,6 g salt sættes til 10 ml 5% vandig kaliumbi- sulfatopløsning og rystes kraftigt. Den således dannede frie syre ekstraheres med 17 ml ethylacetat på to gange. Ekstrakten vaskes ført med vand og dernæst med saltvand og tørres over vandfrit magnesiumsulfat. Afdampning af ethylacetat på 15 en roterende fordamper under formindsket tryk giver en glasagtig remanens. Remanensen opløses i en lille smule ether, og etheropløsningen sættes dråbevis under kraftig omrøring til et stort volumen hexaner afkølet i is. Det fnuggede hvide bundfald, der udskilles, opsamles på et filter og tørres i va-20 kuum, hvilket giver 0,12 g 2,3-dihydro-l-(3-mercapto-2-methyl--1-oxopropyl)-lH-indol-2-carboxylsyre.

Analyse:

Beregnet for C13H15N03S: C 58,84, H 5,70, N 5,28.

Fundet: C 59,24, H 5,95, N 5,16.

25 IR 2570 (SH), 1720 (C02H) og 1620 cm-1 (CON).

Eksempel 5 2,3-Dihydro-l-(3-mercapto-2-methyl-l-oxopropyl)-lH-indol-2-30 -carboxylsyre

En blanding af 1,0 g (2,6 mmol) 1-[3-(benzoylthio)--2-methyl-l-oxopropyl]-2,3-dihydro-lH-indol-2-carboxylsyre (eksempel 3B, smeltepunkt 116-117°C) isoleret med 1/4 mol e-ther fra 1T5-°dervæsken i eksempel 3A og 100 ml methanolisk 5,5N 35 ammoniakopløsning omrøres ved stuetemperatur i 2,5 timer, inddampes derefter under formindsket tryk på en roterende fordamper, hvilket giver et harpiksagtigt materiale. Remanensen opløses i 20 ml vand, og den vandige opløsning gøres alkalisk ved tilsætning af 5 dråber 2N vandig natriumhydroxidopløsning.

21

DK 158347 B

O

Den alkaliske opløsning vaskes med ether tre gange og gøres derefter sur ved tilsætning af fortyndet saltsyre. Det o-lieagtige produkt, der således skilles fra, vaskes tre gange med ether og gøres derefter sur ved tilsætning af fortyn-5 det saltsyre. Det olieagtige produkt, der skilles fra, eks-traheres med 110 ml ether på tre gange. Etherekstrakten vaskes med vand, derefter med saltvand og tørres over vandfrit magnesiumsulfat. Afdampning af ether under formindsket tryk på en roterende fordamper giver et harpiksagtigt materiale, 20 der opløses i 15 ml acetonitril. Dråbevis tilsætning af ca.

0,65 g dicyclohexylamin til acetonitrilopløsningen under omrøring, indtil opløsningens pH er 8,5 (med pH-papir) og følgende afkøling i et koldt rum natten over giver udskilning af 2,3-dihydro-l-(3-mercapto-2-methyl-l-oxopropyl)-lH-indol-2-25 -carboxylsyre-dicyclohexylaminsalt som bundfald. Bundfaldet opsamles på et filter og vaskes med acetonitril, hvilket giver 1,0 g materiale, der smelter ved 190-193°C. Omkrystalli-sation ud fra 2-propanol forbedrer smeltepunktet til 193-195°C. Smeltepunktet for en blanding af dette salt og DCHA-saltet af 2q forbindelsen i eksempel 4 er lavere.

Analyse:

Beregnet for C^HjgN^S: C 67,22, H 8,58, H 6,27.

Fundet: C 67,09, H 8,58, H 6,33.

Saltet (0,744 g) sættes til 10 ml 5% vandig kalium-.jg bisulfatopløsning og rystes kraftigt. Den frie syre, der dannes, ekstraheres med 25 ml ethylacetat på to gange. Ekstrakten vaskes først med vand og derefter med saltvand og tørres over vandfrit magnesiumsulfat. Afdampning af ethylacetat på en roterende fordamper under formindsket tryk giver en glas-2Q agtig remanens. Remanensen opløses i 25 ml ether, og etherop-løsningen tilsættes dråbevis under kraftigt omrøring til et stort volumen (300 ml) hexaner, der er afkølet i is. Det hvide faste bundfald, der udskilles, opsamles på et filter og vaskes med hexaner, hvilket giver 280 mg af den i overskriftet ten nænvnte forbindelse. Massespektret, der fås ved anvendelse af et "AEI MS 902-Kratos DS 50 S" spektrometer viser spidser ved m/e 265 (M+), 163 og 118.

O

DK 158347B

22 isrfc^

Analyse:

Beregnet for C^H^NO^S: c 58,64, H 5,70, N 5,28.

Fundet: C 58,61, H 5,62, N 4,88.

5 Eksempel 6 2.3- Dihydro-l-(l-oxo-2-propenyl)-lH-indol-2-carboxylsyre- ethylester

Til en afkølet og omrørt blanding af 14,34 g 2,3--dihydroindol-2-carboxylsyreethylester, 7,65 g triethylamin 10 og 600 ml vandfri ether sættes dråbevis 7,1 g acryloylchlo-rid opløst i en lille smule ether. Isbadet fjernes, og reaktionsblandingen omrøres ved stuetemperatur i 4 timer. Reaktionsblandingen afkøles i is, derefter fjernes et bundfald ved filtrering. Filterremanensen vaskes med ether. Det 15 forenede filtrat og vaskevæske vaskes med vand, derefter med saltvand og tørres over vandfrit magnesiumsulfat. Afdampning af opløsningsmidlet under formindsket tryk på en roterende .fordamper giver 14,4 g af den i overskriften nævnte forbindelse som en olie.

20 IR 1730 (C02Et) og 1653 cm-1 (CON).

Eksempel 7 2.3- Dihydro-l-(l-oxo-2-propenyl)-lH-indol-2-carboxylsyre 25 En blanding af 14,4 g 2,3-dihydro-l-(l-oxo-2-prope- nyl)-lH-indol-2-carboxylsyreethylester, 200 ml 80% vandigt dimethylsulfoxid og 3,83 g 86% kaliumhydroxid som pellets omrøres under nitregenatmosfære i 2,5 dage ved stuetemperatur, inddampes derefter under formindsket tryk på en roterende for-30 damper, hvilket giver en olieagtig remanens. Remanensen opløses i vand ved hjælp af en lille smule fortyndet natriumhydroxidopløsning. Den vandige opløsning vaskes to gange med ether og gøres derefter sur med tilsætning af fortyndet saltsyre til pH ca. 2. Den således fraskilte olie ekstraheres 35 tre gange med ether. Den forende etherekstrakt vaskes med vand, derefter med saltvand og tørres over vandfrit magnesiumsulfat. Afdampning af etheren på en roterende fordamper under formindsket tryk giver en fast remanens, der smelter ved 158-160°C og vejer 9,2 g. Omkrystallisation ud fra ethylace-

DK 158347B

O

23 tat forbedrer smeltepunktet til 167-169°C.

Analyse:

Beregnet for ^i2H11^3: ^ ^6*35, H 5,11, N 6,45.

Fundet: C66,16,H5,10,N6,33.

5

Eksempel 8 1-[3-(Benzoylthio)-l-oxo-propyl]-2,3-dihydro-lH-indol-2-carb- oxylsyre

Til en omrørt blanding af 6,52 g 2,3-dihydro-l-(1-10 -oxo-2-propenyl)-lH-indol-2-carboxylsyre og 160 ml methylen-chlorid sættes dråbevis 4,36 g 95% thiobenzoesyre opløst i en lille smule methylenchlorid. Under tilsætningen afkøles reaktionsblandingen i is. Isbadet fjernes 10 minutter efter at tilsætningen er tilendebragt, men omrøringen fortsættes 15 en time. Reaktionsblandingen nedsænkes derefter i et oliebad, der holdes på 80°C i 2,5 timer. Reaktionsblandingen inddampes på en roterende fordamper under formindsket tryk til ca. 30 ml og opbevares i køleskab i 1 dag. Der opsamles et bundfald på et filter, og bundfaldet vaskes med me-20 thylenchlorid, hvilket giver den i overskriften nævnte forbindelse, der smelter ved 173-175°C og vejer 11,0 g.

Analyse:

Beregnet for c19h;l7N04S: C 64,21, H 4,82, N 2,94.

25 Fundet: C 64,38, H 4,93, N 3,96.

Eksempel 9 2,3-Dihydro-l-(3-mercapto-l-oxopropyl)-lH-indol-2-carboxylsyre En blanding af 3,0 g 1-[3-(benzoylthio)-1-oxopropyl]-3q -2,3-dihydro-lH-indol-2-carboxylsyre og 45 ml 5,5N methanolisk ammoniakopløsning omrøres ved stuetemperatur i 2,5 timer og inddampes derefter under formindsket tryk på en roterende fordamper, hvilket giver et harpiksagtigt materiale. Remanensen opløses i vand, og den vandige opløsning vaskes med ethyl-35 acetat tre gange. Den vandige fase gøres sur til pH ca. 2 ved dråbevis tilsætning af fortyndet saltsyre, hvorved der:·' udskilles en olie. Olien ekstraheres to gange med ethylacetat. De forenede ekstrakter vaskes med vand, derefter med saltvand 24

DK 158347B

O

og tørres over vandfrit natriumsulfat. Ethylacetaten inddampes på en roterende fordamper under formindsket tryk, hvilket giver en olieagtig remanens, der anbringes under højt vakumm, hvilket giver et fast materiale. Det rå produkt op-5 løses i en lille smule varm ethylacetat under opvarmning på dampbad (der er noget uopløseligt materiale, der fjernes ved filtrering). Ethylacetatopløsningen holder under en mild nitrogenstrøm, indtil der begynder at udfældes et bundfald. Blandingen afkøles i is og derefter anbringes den i et køle-]_q skab. Bundfaldet opsamles på et filter og vaskes med aceto-nitril, hvilket giver l,l'-dithiobis-[3-oxo-l,3-propandiyl]-bis[2,3-dihydro-lH-indol-2-carboxylsyre], smeltepunkt 213-216°C. Analyse:

Beregnet for C24H24N2°6S2: C 57»58, H 4,83, N 5,60.

15 Fundet: C 57,56, H 4,96, N 5,43.

Modervæsken og vaskevæskerne forenes og inddampes på en roterende fordamper under formindsket tryk til tørhed. Remanensen opløses i acetonitril under opvarmning på et dampbad. Der sættes dicyclohexylamin til opløsningen, intil op-2o løsningens pH er ca. 8,0 (med pH-papir). Det således dannede dicyclohexylaminsalt opsamles på et filter og omkrystalliseres ud fra ethanol. Saltet smelter ved 203-205°C.

Analyse:

Beregnet for ci2Hi3N03S: C 66,63, H 8,39, N 6,48.

Fundet: C 66,35, H 8,14, N 6,06.

Saltet rystes med 70 ml 5% vandig kaliumbisulfatop-løsning, og den således fraskilte frie syre ekstraheres med 70 ml ethylacetat ad to gange. De forenede ekstrakter vaskes med vand, derefter med saltvand og tørres over vandfrit 2o natriumsulfat. Inddampning af ethylacetat på en roterende fordamper under formindsket tryk giver en fast remanens, der omkrystalliseres ud fra ethylacetat. Den i overskriften nævnte forbindelse smelter ved 146-148°C under sønderdeling.

Analyse: 35 Beregnet for ci2H13N03S: c 57,35, H 5,21, N 5,57.

Fundet: C 57,39, H 5,27, N 5,37.

25

DK 158347B

O

Eksempel 10

Opløsning af d, 1-2,3-dihydro-l- (2-methyl-l-o.xo-2-propenyl) --lH-indol-2-carboxylsyre i d-2,3-dihydro-l-(2-methyl-l-oxo--2-propenyl)-lH-indol-2-carbo.xylsyre og 1-2,3-dihydro-l-(2-5 -methyl-l-oxo-2-pronenyl)-lH-indol-2-carboxylsyre A. Til en varm kraftigt omrørt methanolisk opløsning af d,1-2,3-dihydro-l-(2-methyl-l-oxo-2-propenyl)-lH-in-dol-2-carboxylsyre fra eksempel 2 (29 g i 300 ml methanol) sættes langsomt en varm methanolisk opløsning af 18,9 g dehy-10 droabietylamin (DHAA) i 60 ml methanol. Omrøringen fortsættes i yderligere 5 minutter og derefter får den lov at sætte sig ved stuetemperatur i 10 minutter. Blandingen opvarmes igen til kogning, og til den varme kraftigt omrørte opløsning sættes 240 ml varmt vand. Den fremkomne blanding an-15 bringes i et køleskab natten over. Det hvide bundfald, der udskilles, opsamles på et filter og vaskes med kold vandig methanolopløsning (methanol 300 ml og vand 250 ml) 5 gange, hvilket giver 27,9 g d-2,3-dihydro-l-(2-methy1-1-oxo-prope-nyl)-lH-indol-2-carboxylsyre, DHAA-salt, smeltepunkt 207-20 209°C. Det forenede filtrat og vaskevæskerne sættes til si de til isolering af 1-2,3-dihydro-l-(2-methyl-l-oxo-2-prope-nyl)-lH-indol-2-carboxylsyre. Omkrystallisation af DHAA-sal-tet (filterremanens) ud fra methanol forbedrer smeltepunktet til 218-219°C, a] = 84,24 (c = 0,985%, EtOH).

75 Analyse:

Beregnet for c13H13N03.C2()H31N: C 76,60, H 8,58, N 5,42.

Fundet: C 76,15, H 8,53, N 5,19.

Saltet pulveriseres i en morter og deles mellem IN vandig natriumhydroxidopløsning og ether. Det vandige lag 3Q opsamles og vaskes med ether to gange og gøres sur med fortyndet saltsyre. Den frie syre, der fraskilles, ekstraheres tre gange med ether. De forenede ekstrakter vaskes med vand, derefter to gange med saltvand og tørres over vandfirt natriumsulfat. Afdampning af ether under formindsket tryk giver 35 d-2,3-dihydro-l-(2-methyl-l-oxo-2-propenyl)-lH-indol-2-carb- oxylsyre, smeltepunkt 148-150°C, = +133,45 (c = 1,11%

EtOH).

26

DK 158347B

O

Analyse:

Beregnet for c13H13N03(231,24): C 67,52, H 5,67, N 6,06.

Fundet: C 67,36, H 5,71, N 5,96.

B. Det oprindelige forenede filtrat og vaskevæsker 5 (vandig methanolopløsning) inddampes forsigtigt på roterende fordamper under formindsket tryk til ca. 120 ml og anbringes derefter i køleskab natten over. Det faste materiale, der udskilles, opsamles på et filter, vaskes med koldt vand og tørres i vakuum. Den tørrede filterremanens (18,7 g, smelte-10 punkt 130-134°C) pulveriseres i en morter og opløses i 600 ml varm vandfri ether. Den ovenpå flydende væske filtreres gennem et groft foldet filterpapir. Den uopløselige remanens varmes med ca. 300 ml vandfri ether, og den ovenpå flydende væske forenes med det oprindelige filtrat, idet der filtreres 15 gennem det samme filtrerpapir. Denne etherekstraktion gentages yderligere to gange (ca. 200 ml og ca. 100 ml hver gang). De forenede etherekstrakter får lov at sætte sig ved stuetemperatur natten over. En lille smule fnugget materiale, der afsættes, fjernes ved filtrering, og filtratet inddampes på 20 en roterende fordamper til en opslæmning. Remanensen afkøles og filtreres på et sugefilter. Filterremanensen vaskes med kold ether, hvilket giver 12,3 g 1-2,3-dihydro-l-(2-methy1-1--oxo-2-prophenyl)-lH-indol-2-carboxylsyre (smeltepunkt 140-143°C). Det rå produkt opløses i ca. 600 ml vandfri ether i 25 tre portioner, filtreres, og filtratet inddampes til ca. 300 ml. Den koncentrerede opløsning filtreres igen, og filtratet fortyndes med hexan, indtil den bliver uklar. Blandingen opbevares i fryser natten over. Bundfaldet, der udskilles, opsamles på et filter og vaskes med kold ether, hvilket giver o 25 5 30 10 g af 1-isomeren med smeltepunkt 147-148°C og a] = -122,5 (c. = 0,835, EtOH). Yderligere rensning ved omkrystallisation på ovennævnte måde giver 1-2,3-dihydro-l-(2-methyl-1-οχο-α--propenyl)-lH-indol-2-carboxylsyre med smeltepunkt 152-154°C og a]p5 = 135,9 (c = 0,935, EtOH).

35 Analyse:

Beregnet for C^3H^3N03: c 67,52, H 5,67, N 6,06.

Fundet: C 67,33, H 5,68, N 6,04.

DK 158347B

O

27

Eksempel 11 1-(S)-1-[(S)-3-(benzoylthio)-2-methyl-l-oxopropyl3-2,3-dihy-dro-lH-indol-2-carboxylsyre-dicyclohexylaminsalt Til en omrørt opløsning af 8,0 g thiobenzoesyre 5 (95% renhed) i 450 ml acetone under nitrogenatmosfære sættes 0,61 g 4-dimethylaminopyridin. Den fremkomne blanding omrøres i 5 minutter, og derefter tilsættes 11,56 g 1-2,3-di-hydro-1-(2-methyl-l-oxo-2-propenyl)-lH-indol-2-carboxylsyre (eksempel 10B). Den fremkomne blanding opvarmes under tilba-10 gesvaling i 6 timer. Afdampning af acetonen i vakuum giver en harpiksagtig remanens, der opløses i methylenchlorid. Me-thylenchloridopløsningen vaskes to gange med kold IN saltsyre, to gange med saltvand og tørres over vandfri magnesiumsulfat. Inddampning af methylenchloridopløsningen på en roterende for-15 damper under formindsket tryk giver et skUmagtigt harpiksmateriale. Remanensen opløses i 250 ml tør acetonitril, og opløsningen afkøles i is. Der tilsættes langsomt 9,2 g dicy-clohexylamin til den kolde acetonitrilopløsning under omrøring, og den fremkomne blanding afkøles i 2 timer. Bundfal-20 det opsamles på et filter og vaskes med acetonitril 5 gange, derefter gentagene gange med ethanol, hvilket giver 17,76 g rå 1-(S)-1-[(S)-3-(benozylthio)-2-methyl-l-oxo-propyl]-2,3--dihydro-lH-indol-2-carboxylsyre-dicyclohexylaminsalt (smeltepunkt 193-198°C). Filtratet og vaskevæskerne forenes og 25 sættes bort til isolering af d-(S)-1-[(R)-3-(benzoylthio)-2--methyl-l-oxopropyl]-2,3-dihydro-lH-indol-2-carboxylsyre-di-cyclohexylaminsalt. Omkrystallisation af det rå produkt ud fra ethanol forbedrer smeltepunktet til 219-221°C (udbytte 12,13 g), a]2D3 = -69,16 (c = 1,035%, EtOH) . Prøven, der smel-30 ter ved 222-224°C viser et]22'5 = 76,6 (c = 1,135%, EtOH).

D ^ r

Prøven, der smelter ved 222-224°C viser a] D' =76,6 (c = 1,135%, EtOH).

Analyse:

Beregnet for c20H19NO4S.C12H23N: C 69,78, H 7,69, N 5,09 35 Fundet: C 69,53, H 7,73, N 5,14.

DK 158347B

O

28

Eksempel 12 d-(S)—l-[(R)-3-(benzoylthio)-2-methyl-l-oxopropyl]-2,3-dihy-dro-lH-indol-2-carboxylsyre-dicyclohexylaminsalt

En blanding af 5,78 g 1-2,3-dihydro-l-(2-methy1-1-5 -oxo-2-propenyl)-lH-indol-2-carboxylsyre fra eksempel 10B, 5 g thiobenzoesyre (95% renhed) og 70 ml methylenchlorid tilbagesvales under nitrogenatmosfære i 8,5 timer, inddampes derefter på en roterende fordamper under formindsket tryk, hvilket giver en harpiksagtig remanens. Remanensen opløses i 50 10 nil acetonitril, og der tilsættes ca. 5,0 g dicyclohexylamin dråbevis til acetonitrilopløsningen (blandingen pH er ca. 6,5, når den afprøves med vådt pH-papir). Den fremkomne blanding afkøles i køleskab i 1,5 timer. Bundfaldet opsamles på et filter, og filterremanensen vaskes med acetonitril, hvilket 15 giver råt 1-(S)-1-(S)-3-(Benzoylthio)-2-methy1-1-oxopropyl]--2,3-dihydro-lH-indol-2-carboxylsyre-dicyclohexylaminsalt som i eksempel 11. Det forenede filtrat og vaskevæsker anbringes i et stinkskab natten over og afkøles i is. Bundfaldet, der udskilles, fjernes ved filtrering, og modervæsken behand-20 les med en yderligere mængde dicyclohexylamin, indtil opløsningens pH er 8. Den fremkomne opløsning inddampes, ved at man lader den fordampe i stinkskabet natten over, og afkøles derefter i is. Bundfaldet, der udskilles, opsamles på et filter og vaskes med acetonitril, hvilket giver 7,39 g råt d—(S)— 95 [(R)-3-(benzoylthio)-2-methyl-l-oxopropyl]-2,3-dihydro-lH- -indol-2-carboxylsyre-dicyclohexylaminsalt (smeltepunkt 127-130°C), smeltepunkt 132-134°C, a]2^'5 = +26,00 (c = 1,04%, EtOH) . Analyse:

Beregnet for c20HigNO4S.C12H23N: C 69,78, H 7,69, N 5,09.

30 Fundet: C 69,83, H 7,64, N 5,01.

Eksempel 13 d-(R)-1-[(R)-3-(Benzoylthio)-2-methyl-l-oxopropyl]-2,3-dihydro--lH-indol-2-carboxylsyre-dicyclohexylaminsalt 35 En blanding af 2,31 g d-2,3-dihydro-l-(2-methy1-1- . -oxo-2-propenyl)-lH-indol-2-carboxylsyre (eksempel 10 A), 1,60 g thiobenzoesyre (95% renhed) og 50 ml methylenchlorid opvar-

DK 158347B

O

29 mes under tilbagesvaling i 6 timer, inddampes derefter på en roterende fordamper under formindsket tryk, hvilket giver et harpiksagtigt materiale. Remanensen opløses i acetonitril og afkøles. Den kolde opløsning behandles med ca. 2,0 g dicy-5 clohexylamin, intil blandingen pH er ca. 8,5. Den fremkomne blanding afkøles i is i 1,5 timer, og der opsamles ét bundfald på et filter og vaskes med acetonitril, hvilket giver 2,65 g råt d-(R)-1-[(R)-3-(benzoylthio)-2-methyl-l-oxopropyl]--2,3-dihydro-lH-indol-2-carboxylsyre-dicyclohexylaminsalt, 10 smeltepunkt 201-204°C. Filtratet og vaskevæskerne forenes og sættes til side til isolering af l-(r)-l-[(s)-3-(benzoyl-thio)-2-methyl-l-oxopropyl]-2,3-dihydro-lH-indol-2-carboxyl-syre-dicyclohexylaminsalt. Omkrystallisation af det rå produkt ud fra ethanol forbedrer smeltepunktet til 219-221°C, ud- 15 bytte 1,4 g. En yderligere omkrystallisation ud fra ethanol o 25 5 giver en analytisk prøve, smeltepunkt 222-224 C, a] ' = +70,59 (c = 0,975%, EtOH).

Analyse:

Beregnet for C20H19NO4S-C12H23N:C 69,78, H 7,69, N 5,09.

20 Fundet: C 69,52, H 7,64, N 5,09.

Eksempel 14 1-(R)-1-[(S)-3-(benzoylthio)-2-methyl-l-oxopropyl]-2,3-dihydro--lH-indol-2-carboxylsyre-dicyclohexylamin 25 Efter at det forenede acetonitrilfiltrat og vaske væskerne fra eksempel 13 har fået lov at sætte sig ved stuetemperatur i flere dager opsamles bundfaldet, der udskilles, på et filter og vaskes med acetonitril, hvilket giver 0,94 g råt l-(R)-l-[(S)-3-(benzoylthio)-2-methyl-l-oxopropyl]-2,3-30 -dihydro-lH-indol-2-carboxylsyre-dicyclohexylaminsalt, smeltepunkt 131-133°C.

Omkrystallisation ud fra acetonitril og derefter ud n 24 5 fra ethylacetat forbedrer smeltepunktet til 133-135 C, a] ' = -20,8 (c = 1,02%, EtOH).

35 Analyse:

Beregnet for C20H19NO4S.C12h23N: c 69r78/ H 7,69, N 5,09.

Fundet: C 69,96, H 7,63, N 5,02.

0

DK 158347B

30 fr

Eksempel 15 1-(S) -1-[(S)-3-(Benzoylthio)-2-methyl-l-oxopropyl]-2,3-dihy-dro-lH-indol-2-carboxylsyre 2,0 g pulveriseret 1-(S)-1-[(S)-3-(benzoylthio)-2-5 -methyl-l-oxopropyl]-2,3-dihydro-lH-indol-2-carboxylsyre-di- cyclohexylaminsalt fra eksempel 11 rystes kraftigt med en blanding af 50 ml 5% vandig kaliumhydrogensulfat og 45 ml ethylacetat i en skilletragt, og ethylacetatlaget skilles fra. Det vandige lag ekstraheres to yderligere gange med 10 20 ml og 10 ml ethylacetat. De forenede ethylacetatekstrak ter vaskes med vand, derefter med saltvand og tørres over vandfrit natriumsulfat. Afdampning af opløsningsmidlet på en roterende fordamper under formindsket tryk giver en olieagtig remanens, der størkner ved henstand. Omkrystallisa-15 tion ud fra ether og hexaner giver 1,25 g 1-(S)-1-[(S)-3- -(benzoylthio)-2-methyl-l-oxopropyl]-2,3-dihydro-lH-indol- o 25 -2-carboxylsyre, smeltepunkt 144-146 C, a] = -183,6 (c = 1,07%, EtOH).

Analyse: 20 Beregnet for C20H19NO4S: C 65,02, H 5,18, N 3,79.

Fundet: C 65,05, H 5,39, N 3,78.

Eksempel 16 d-(S)-1-[(R)-3-(Benzoylthio)-2-methyl-l-oxopropyl]-2,3-dihy-25 dro-lH-indol-2-carboxylsyre

Den i overskriften nævnte forbindelse fås i harpiksagtig form ud fra det tilsvarende dicyclohexylaminsalt ifølge eksempel 12 (2,5 g) ved behandling med 5% vandig kaliumhy- 22 5 drogensulfatopløsning som beskrevet i eksempel 15. a] ' = 30 +65,29 (c = 1,45%, EtOH).

Analyse:

Beregnet for C20H19NO4S: C 65,02, H 5,18, N 3,79.

Fundet: C 64,90, H 5,30, N 3,51.

35

O

31

.. DK 158347 B

!·'*

Eksempel 17 d-(R)-1-[(R)-3-(Benzoylthio)-2-methyl-l-oxopropyl]-2,3-dihydro--lH-indol-2-carboxylsyre

Der fås 0,38 g af den i overskriften nævnte forbin-delse ud fra det tilsvarende dicyclohexylaminsalt fra eksempel 13 (0,7 g) ved behandling med 5% vandig kaliumhydrogen-sulfatopløsning som beskrevet i eksempel 15, smeltepunkt 143-145°C, [a]25D'5 = +179,33 (c = 1,04%, EtOH) .

Analyse:

Beregnet for C2oH19N04S: c 65r°2r H 5,18, N 3,79.

Pundet: C 64,92, H 5,32, N 3,79.

Eksempel 18 1-(R)-l-[(S)-3-(Benzoylthio)-2-methyl-l-oxopropyl]-2,3-dihydro-15 -lH-indol-2-carboxylsyre

Den i overskriften nævnte forbindelse fås ud fra det tilsvarende dicyclohexylaminsalt i eksempel 14 ved behandling med 5% vandig kaliumhydrogensulfatopløsning som beskrevet i eksempel 15. Harpiks; [a]^5 = -82,6° (0,97, EtOH).

20 , IR 1740 (C02H og 1664 cm-1 (COS); [a]p5 = 82,6 (C = 0,97%, EtOH).

Eksempel 19 d,1-1-[3-(Acetylthio)-2-methyl-l-oxopropyl]-2,3-dihydro-lH-25 -indol-2-carboxylsyre-dicyclohexylaminsalt

En blanding af 6,94 g 2,3-dihydro-l-(2-methyl-l-oxo-propenyl)-lH-indol-2-carboxylsyre, 3,9 g thioeddikesyre med 95% renhed og 90 ml methylenchlorid opvarmes ved tilbagesvaling i 5,5 timer og inddampes derefter på en roterende for-30 damper under formindsket tryk, hvilket giver en harpiksagtig remanens. Remanensen opløses i 70 ml acetonitril og afkøles i is. Ca. 5 g dicyclohexylamin sættes dråbevis til den kolde acetonitrilopløsning, indtil opløsningens pH er ca. 8. Den fremkomne blanding får lov at sætte sig ved stuetemperatur 35 i to timer og derefter i køleksab i 1 time. Der opsamles et bundfald på et filter og vaskes med acetonitril 4 gange. Filtratet og vaskevæskerne forenes og opbevares til isolering af produktets diastereoisomere, der udfældes først.

Flere omkrystallisationer af remanensen ud fra ethanol giver

O

32

DK 158347B

d,l-l-[3-(acetylthio)-2-methyl-l-oxopropyl]-2,3-dihydro-lH--indol-2-carboxylsyre-dicyclohexylaminsalt (2,65 g) med smeltepunkt 218-220°C.

Analyse: 5 Beregnet for c15H17N04S.C12H23N: C 66,36, H 8,25, N 5,75.

Fundet: C 66,60, H 8,08, N 5,62.

Det forenede acetonitrilfiltrat og vaskevæskerne inddampes til ca. 30 ml og får derefter lov at sætte sig ved stuetemperatur i flere dage. Bundfaldet, der fraskilles, op-10 samles på et filter og omkrystalliseres ud fra ethanol flere gange, hvilket giver 1,66 g d,1-1-[3-(acetylthio)-2-methyl--1-oxopropyl]-2,3-dihydro-lH-indol-2-carboxylsyre-dicyclohex-ylaminsalt med smeltepunkt 201-203°C. Dette produkt er den diastereoisomere af produktet, der isoleres først og smelter 15 ved 218-220°C.

Analyse:

Beregnet for C15H17N04S.C12H23N: C 66,36, H 8,25, N 5,73.

Fundet: C 66,41, H 8,41, N 5,66.

20 Eksempel 20 d,1-1-[3-(Acetylthio)-2-methyl-l-oxopropyl]-2,3-dihydro-lH--indol-2-carboxylsyre

Behandling af 1,93 g d,1-1-[3-(acetylthio)-2-methyl--1-oxopropyl]-2,3-dihydro-lH-indol-2-carboxylsyre-dicyclohexyl-25 aminsalt fra eksempel 19 med smeltepunkt 218-220°C med 5% vandig kaliumhydrogensulfatopløsning som beskrevet i eksempel 15 giver 0,6 g af den i overskriften nævnte forbindelse, der smelter ved 125-126°C. Produktet renses ved omkrystallisationer ud fra ethylacetat og hexan.

30 Analyse:

Beregnet for C^H^NC^S: C 58,61, H 5,58, N 4,56.

Fundet: C 58,39, H 5,59, N 4,51.

35

DK 158347B

O

33

Eksempel 21 d,1-1-[3-(Acetylthio)-2-methyl-l-oxopropyl]-2,3-dihydro-lH--indol-2-carboxylsyre, den racemlske diastereoisomere i eks. 20 Den i overskriften nævnte forbindelse fås ud fra d,l~ 5 -1-[3-(acetylthio)-2-methyl-l-oxopropyl]-2,3-dihydro-lH-in- dol-2-carboxylsyre-dicyclohexylaminsalt fra eksempel 19 med smeltepunkt 201-203°C ved behandling med 5% vandig kaliumhy-drogensulfatopløsning som beskrevet i eksempel 15. Produktet smelter, når det er renset ved omkrystallisation ud fra ether og hexan, ved 94,5-96°C.

Analyse:.

Beregnet for C15H17N04S: C 58,61, H 5,58, N 4,56.

Fundet: C 58,93, H 5,66, N 4,37.

15 Eksempel 22 2,3-Dihydro-5-methoxy-lH-indol-2-carboxylsyreethylester

En trehalset 3-liter kolbe med rund bund udstyret med mekanisk omrører, vandkondensator og gasindløbsrør fyldes med 500 ml absolut ethanol og afkøles i et bad af tøris og 9Q acetone. Der tilsættes tør hydrogenchloridgas med en stor hastighed i 0,5 time. Der tilsættes 50 g 5-methoxyindol-2--carboxylsyreethylester (B. Heath-Brown og P.G. Philpott, J. Chem. Soc. 1965, 7185) efterfulgt af 100 g tinmetal (30 mesh) til opløsningen under omrøring. Med tørisbadet på plads, 25 men uden yderligere afkøling omrøres reaktionsblandingen forsigtigt i 6 timer. Det krystallinske faste stof, der udskilles, fjernes ved filtrering. Modervæsken inddampes under formindsket tryk, hvilket giver en olie. Olien opløses i 500 ml absolut ethanol og anbringes i en 3-liter kolbe med rund 3Q bund og udstyret med omrører og termometer og afkøles til 10°C. Der bobles gasformig ammoniak ind i blandingen, indtil pH er 9 (med vådt pH-papir), og blandingen henstår ved 10°C i en time. Det hvide bundfald filtreres fra, og filtratet inddampes på en roterende fordamper til tørhed. Det 35 første hvide bundfald og remanensen fra inddampningen forenes og tritureres gentagne gange med varm ether. De forenede ethertriturater vaskes med en natriumchloridopløsning (vand/ mættet salt-opløsning 1:1) under kraftig omrystning, hvorpå

DK 158347B

O

34 det meste af de basiske tinsalte suspenderes og skilles fra i den vandige fase. Begge faser filtreres gennem Celite og skilles fra. Etheropløsningen tørres over magnesiumsulfat og inddampes under formindsket tryk på den roterende fordam-5 per. Den olieagtige remanens tørres i vakuum, hvilket giver 22 g d,l-2,3-dihydro-5-methoxy-lH-indol-2-carboxylsyreethyl-ester.

Analyse:

Beregnet for C12Hi5N03: C 65,14, H 6,83, N 6,33.

10 Fundet: C 64,70, H 6,75, N 6,32.

Eksempel 23 2.3- Dihydro-5-methoxy-l- (2-methyl-l-oxo-2-propenyl) -lH-indol- -2-carboxvlsvreethvlester_ 15

Ved at anvende 2,3-dihydro-5-methoxy-lH-indol-2-car-boxylsyreethylester i stedet for 2,3-dihydro-indol-2-car-boxylsyreethylester ved fremgangsmåden ifølge eksempel l fås 2,3-dihydro-5-methoxy-l-(2-methyl-l-oxo-2-propenyl)-1H--indol-2-carboxylsyreethylester som en tyk olie.

20 TLC Rf 0,87; NMR (CDCI3) 1,25 (t, 3H, CH3CH2), 2,03 (S, 3H, CH3C=), 3,30 (ABXm, CH2)/ 3,75 (s, 3H, CH30), 4,23 (q, 2H, CH3CH2), 5,10 (m, IH, CHC02), 5,35 (m, 2H, CH2=) , 6,75 og 7,60 (m, 3H, aromatiske).

IR 1740 (C02Et) og 1630 cm"1 (CON).

25 , 1

Analyse:

Beregnet for C^H^NO^ C 66,42, H 6,62, N 4,84.

Fundet: C 66,25, H 6,65, N 4,70.

Eksempel 24 30 2.3- Dihydro-5-methoxy-l-(2-methyl-l-oxo-2-propenyl)-lH-indol- -2-carboxylsyre

Til en opløsning af 8,5 g 2,3-dihydro-5-methoxy-l- -(2-methyl-1-oxo-2-propenyl)-lH-indol-2-carboxylsyreethylester fra eksempel 23 i 45 ml reagens-kvalitet methanol sættes en 35 opløsning af 1,32 g natriumhydroxid med 98% renhed i 16 ml destilleret vand under omrøring med hånden. Denne reaktionsblanding omrøres ved stuetemperatur i 2 timer. Under kraftig mekanisk omrøring hældes reaktionsopløsningen i saltvand og den let uklare masse gøres sur med koncentreret saltsyre.

DK 158347B

O

35

Den fremkomne blanding omrøres, afkøles i et bad af is, vand og salt i en time, og de faste stoffer opsamles i en sintret glastragt og vaskes to gange med koldt vand, hvilket giver 7,32 g 2,3-dihydro-5-methoxy-l-(2-methyl-l-oxo-2-propenyl)-5 -lH-indol-2-carboxylsyre, smeltepunkt 108-111°C. Omkrystallisation ud fra ethylacetat forbedrer smeltepunktet til 115-118°C Analyse:

Beregnet for C^H^NO^: C 64,35, H 5,79, N 5,36.

10 Fundet: C 63,89, H 5,76, N 5,22.

Eksempel 25 1-[3-(Benzoylthio)-2-methyl-l-oxopropyl]-5-methoxy-2,3-dihy-dro-lH-indol-2-carboxylsyre-dicyclohexylaminsalt 15 2,61 g 2,3-dihydro-5-methoxy-l-(2-methyl-l-oxo-2- -propenyl)-lH-indol-2-carboxylsyre fra eksempel 24 sættes til en omrørt blanding af 0,122 g 4-dimethylaminopyridin, 1,6 g thiobenzoesyre med 95% renhed og 70 ml acetone under nitrogenatmosfære. Reaktionsblandingen opvarmes ved tilbagesva-20 - ling i 8 timer og afkøles derefter i en fryser. Bundfaldet fjernes ved filtrering. Filtratet inddampes på en roterende fordamper under formindsket tryk, hvilket giver et harpiks-agtigt materiale. Remanensen opløses i methylenchlorid, og methylenchloridopløsningen vaskes to gange med IN kold salt-25 syre, derefter to gange med saltvand og tørres over vandfrit natriumsulfat. Inddampning af methylechloridopløsningen på en roterende fordamper under formindsket tryk giver et harpiks-agtigt materiale, der opløses i acetonitril. Dicyclohexyla-min tilsættes dråbevis til den afkølede acetonitrilopløsning, 30 indtil opløsningens pH er ca. 8. Den fremkomne blanding afkøles i is, og der opsamles et bundfald på et filter og vaskes med acetonitril. Omkrystallisation af filterremanensen ud fra ethanol giver 0,9 g 1-[3-(benzoylthio)-2-methyl-l-oxopropyl] -5-methoxy-2,3-dihydro-lH-indol-2-carboxylsyre-dicyclo-

QC

hexylaminsalt, der smelter ved 204-206 C.

Analyse:

Beregnet for ^2^21^55*c;l2H23N: C 68,24, H 7,64, N 4,82.

Fundet: C 68,28, H 7,62, N 4,95.

's*

O

36

DK 158347B

Eksempel 26 1- [3- (Benzoylthio) -2-methyl-l-oxopropyl3-5-methoxy-2,3-dihydro- -lH-indol-2-carboxylsyre ;

Den i overskriften nævnte forbindelse fremstilles 5 ud fra det tilsvarende dicyclohexylaminsalt, der fås i eksempel 25, smeltepunkt 204-206°C, ved behandling med 5% vandig kaliumhydrogensulfatopløsning som beskrevet i eksempel 15,

Smp. 244-244,5°C (sønderdeling).

Eksempel 27 10 2,3-Dihydro-l-(3-mercapto-2-methyl-l-oxopropyl)-5-methoxy-lH- -indol-2-carboxylsyre

Den i overskriften nævnte forbindelse fremstilles ud fra 1-[3-(benzoylthio)-2-methyl-l-oxopropyl]-5-methoxy--2,3-dihydro-lH-indol-2-carboxylsyre fra eksempel 26 ved be-15 handling med methanolisk ammoniak som beskrevet i eksempel 5.

Eksempel 28 2,3-Dihydro-5-methoxy-l-(l-oxo-2-propenyl)-lH-indol-2-carbox- ylsyreethylester 20 Ved at anvende 2,3-dihydro-5-methoxy-lH-indol-2- -carboxylsyreethylester i stedet for 2,3-dihydro-lH-indol-2--carboxylsyreethylester ved fremgangsmåden ifølge eksempel 6 fås 2,3-dihydro-5-methoxy-l-(l-oxo-2-propepnyl)-lH-indol-2--carboxylsyreethylester med smp. 87-89°C.

25 Analyse:

Beregnet for ci5Hi7N04: c 65,44, H 6,22, N 5,09.

Fundet: C 65,45, H 6,14, N 4,89.

Eksempel 29 30 2,3-Dihydro-5-methoxy-l-(l-oxo-2-propenyl)-lH-indol-2-carboxyl- syre

Ved at anvende 2,3-dihydro-5-methoxy-l-(l-oxo-2--propenyl)-IH-indol-2-carboxylsyreethylester fra eksempel 28 i stedet for 2,3-dihydro-5-methoxy-l-(2-methyl-l-oxo-2-prope-35 nyl)-lH-indol-2-carboxylsyreethylester ved den i eksempel 24 beskrevne fremgangsmåde fås den i overskriften nævnte forbindelse.

DK 158347B

O

37

Eksempel 30 1-[3-(Benzoylthio)-1-oxo-propyl]-2,3-dihydro-5-methoxy-lH- -indol-2-carboxylsyre

Ved at anvende 2,3-dihydro-5-methoxy-l-(l-oxo-2-5 -propenyl)-IH-indol-2-carboxylsyre fra eksempel 29 i stedet for 2,3-dihydro-l-(1-oxo-2-propenyl)-IH-indol-2-carboxylsyre ved fremgangsmåden ifølge eksempel 8 fås den i overskriften nævnte forbindelse.

10 Eksempel 31 2,3-Dihydro-l-(3-mercapto-l-oxopropenyl)-5-methoxy-lH-indol- -2-carboxylsyre

Den i overskriften nævnte forbindelse fremstilles ud fra 1-[3-(benozylthio)-1-oxopropyl]-2,3-dihydro-5-methoxy-15 -IH-indol-2-carboxylsyre fra eksempel 30 ved behandling med methanoliske ammoniak som beskrevet i eksempel 4.

Eksempel 32 5-Chlor-2,3-dihydro-IH-indol-2-carboxysyreethylester 20 Ved at anvende 5-chlorindol-2-carboxylsyreethyle ster (B·. Heath-Brown og P.G. Philpott, J. Chem. S.oc., 1965, 7185) i stedet for 5-methoxyindol-2-carboxylsyreethylester ved fremgangsmåden ifølge eksempel 22 fås 5-chlor-2,3-dihydro- IH-indol-2-carboxylsyreethylester (smeltepunkt 51-55°C).

25 Analyse:

Beregnet for C^H^CINC^: C 58,54, H 5,36, N 6,21.

Fundet: C 58,57, H 5,23, N 6,31.

Eksempel 33 5-Chlor-2,3-dihydro-(2-methyl-1-oxo-2-propenyl)-lH-indol-2--carboxylsyreethylester

Ved at anvende 5-chlor-2,3-dihydro-lH-indol-2-carb-oxylsyreethylester fra eksempel 32 i stedet for 2,3-dihydro-indol-2-carboxylsyreethylester ved fremgangsmåden ifølge ek-35 sempel 1 fås 5-chlor-2,3-dihydro-(2-methyl-1-oxo-2-propenyl)--lH-indol-2-carboxylsyreethylester som en olie.

O

38

DK 158347B

Analyse:

Beregnet for C-^H^gClNO^: C 61,33, H 5,49, N 4,77.

Fundet: C 60,94, H 5,60, N 4,64.

5 Eksempel 34 5-Chlor-2,3-dihydro-l- (2-methyl-l-oxo-2-propenyl) -lH-indol- -2-carboxylsyre

Ved at anvende 5-chlor-2,3-dihydro-l-(2-methyl-l--oxo-2-propenyl)-lH-indol-2-carboxylsyreethylester fra eksem-10 pel 33 i stedet for 2,3-dihydro-5-methoxy-l-(2-methyl-l-oxo--2-propenyl)-IH-indol-2-carboxylsyreethylester ved fremgangsmåden ifølge eksempel 24 fås den i overskriften nævnte forbindelse.

15 Eksempel 35 1- [3- (Benzoylthio) -.2-methyl-l-oxopropyl3 -5-chlor-2,3-dihydro--lH-indol-2-carboxylsyre

Ved at anvende 5-chlor-2,3-dihydro-l-(2-methy1-1--oxo-2-propenyl)-lH-indol-2-carboxylsyre fra eksempel 34 i 20 stedet for 2,3-dihydro-5-methoxy-l-(2-methyl-l-oxo-2-prope- nyl)-IH-indo1-2-carboxylsyre ved fremgangsmåden ifølge eksempel 25 fås 1-[3-(benzoylthio)-2-methyl-l-oxopropyl]-5-chlor--2,3-dihydro-lH-indol-2-carboxylsyre-dicyclohexylamin. Dette salt behandles derefter med 5% vandigt kaliumhydrogensulfat 25 som i eksempel 15, hvilket giver den i overskriften nævnte forbindelse.

Eksempel 36 5-Chlor-2,3-dihydro-l-(3-mercapto-2-methyl-l-oxopropyl-lH-in-30 dol-2-carboxylsyre

Behandling af 1-[3-(benzoylthio)-2-methy1-1-oxopro-pyl]-5-chlor-2,3-dihydro-IH-indol-2-carboxylsyre fra eksempel 35 med methanolisk ammoniak som beskrevet i eksempel 4 giver den i overskriften nævnte forbindelse.

35

O

39

DK 158347B

Eksempel 37 2,3-Dihydro-IH-indol-2-carboxylsyre

Metode Å 19,1 g 2,3-dihydro-lH-indol-2-carboxylsyreethylester 5 opløses delvis i 200 ml methanol ved stuetemperatur. Der fås en vandig kaliumhydroxidopløsning ved at opløse 6,56 g KOH-pellets (86% renhed) i 70 ml vand, og denne opløsning sættes til den methanoliske opløsning. Den fremkomne opløsning omrøres under nitrogenatmosfære ved stuetemperatur i 1,5 timer.

10 Reaktionsblandingen inddampes på en roterende fordamper under 15 20 , 25 30 35 0

DK 158347B

40 formindsket tryk til ca. 100 ml og overføres derefter til en Erlenmeyer-kolbe. Den afkølede opløsning syrnes først med afkølet koncentreret, derefter med fortyndet saltsyre til pH ca. 5. Skrabning af den fremkomne blanding under afkøling 5 fremkalder udskillelse af et bundfald, der opsamles på et filter og vaskes med koldt vand gentagne gange, hvilket giver 12,7 g (udbytte 76%) af produktet, smeltepunkt 165-170°C (sønderdeling).

Analyse: 10 Beregnet for CgH9N02.1/4H20 (167.67): C 64,47, H 5,71, N 8,33. Fundet: C 64,64, H 5,78, N 8,25.

Metode B

En blanding af 9,56 g 2,3-dihydro-lH-indol-2-carb-oxylsyreethylester, 250 ml 80% vandig DMSO og 3,26 g kalium-15 hydroxid (86% pellets) omrøres under nitrogenatmosfære ved stuetemperatur natten over, inddampes derefter på en roterende fordamper under vakuum, hvilket giver en tyk olieagtig remanens. Remanensen opløses i 100 ml vand. Der tilsættes flere dråber 2N vandig NaOH-opløsning til opløsningen, for 20 at gøre den let alkalisk. Den vandige opløsning vaskes med ether flere gange for at fjerne alt ureageret udgangsmateriale, derefter syrnes under afkøling i is først med koncentreret, derefter med fortyndet saltsyre til pH ca. 5, hvorpå der udskilles et bundfald. Blandingen afkøles i is, bundfal-25 det opsamles på et filter og vaskes med koldt vand. Det således fremkomne produkt smelter ved 176-170°C (sønderdeling) og vejer 8,73 g (100%).

Analyse:

Beregnet for CgHgN02.l/6H20 (166,17): C 65,05, H 5,66, N 8,43 30 Fundet: C 65,23, H 5,67, N 8,28.

Eksempel 38 R-3-Benzoylthio-2-methylpropanoylchlorid

Til en omrørt blanding af 30 ml thionylchlorid (Al-25 drich Chemical Co.) og 13,44 g l-S-3-benzoylthio-2-methylpro-pansyre i en 100 ml rundbundet kolbe med hætte med et calcium-chlorid-tørrerør sættes to dråber triethylamin. Omrøringen

ii DK 158347 B

41 o fortsættes ved stuetemperatur i 7 timer, og reaktionsblandingen inddampes på en roterende fordamper under formindsket tryk. Den flydende remanens, der fås, holdes under højt vakuum i flere timer.

5 IR 1780 (COC1) og 1667 cm"1 (COS).

Eksempel 39 1-(S)—1—[(S)-3-(Benzoylthio)-2-methyl-l-oxopropyl]-2,3-dihy-10 dro-lH-indol-2-carboxylsyre (metode B)

Til en omrørt suspension af 9,79 g 2,3-dihydro-lH--indol-2-carboxylsyre i 250 ml methylenchlorid sættes 12,3 g triethylamin. Den klare opløsning,: der fås, afkøles i is. R-3-Benzoylthio-2-methylpropanoylchlorid (hele den mængde, der 15 fås af 13,44 g af den tilsvarende syre i eksempel 38) opløst i 50 ml methylenchlorid tilsættes langsomt under kraftig omrøring. Isbadet fjernes i 15 minutter, og omrøringen fortsættes i 2,5 timer. Reaktionsblandingen vaskes med 5% vandig kaliumhydrogensulfatopløsning tre gange (250 ml, 200 ml 20 og 150 ml), derefter to gange med saltvand og tørres med vandfrit natriumsulfat. Afdampning af methylenchloridet på en roterende fordamper under formindsket tryk (i en stor rundbun-det kolbe) giver en harpiksagtig remanens, der holder under højt vakuum i ca. 1 time. Remanensen opløses i 150 ml aceto-25 nitril, og opløsningen afkøles. 11 g Dicyclohexylamin (DCHA) til pH 7,5-8,0 sættes langsomt under god omrøring til den kolde opløsning, og den fremkomne blanding opbevares i et køleskab i 1,5 timer. Bundfaldet opsamles på et filter, og filterremanensen vaskes gentagne gange med acetonitril. DCHA-sal-30 tet smelter ved 212,5-215°C og vejer 16,1 g (98% af det teoretiske) . Omkrystallisation ud fra ethanol forbedrer smelte-punktet til 219-221°C og giver 12,49 g af produktet, a] ' = -68,93 (c = 1,15%, EtOH).

Analyse: 35 Beregnet for C20H19NO4S *c;l2H23N: c 69,78, H 7,69, N 5,09.

Fundet: C 69,38, H 7,58, N 5,26.

Saltet (38,0 g) hældes i en morter og stødes til fine partikler og rystes kraftigt med 450 ml vandig 5% KHSO^ og 200 ml ethylacetat i en skilletragt. Ethylacetatlaget op-

O

42

DK 158347B

samles, og det vandige lag ekstraheres med ethylacetat yderligere to gange under anvendelse af 150 ml og 100 ml hver gang. De forenede ethylacetatekstrakter vaskes med vand, derefter med saltvand og tørres over vandfrit natriumsulfat 5 (eller magnesiumsulfat). Ethylacetatet afdampes på en roterende fordamper under formindsket tryk. I fordampningens sidse faser podes den koncentrerede opløsning med produktet fra eksempel 15, og inddampningen fortsættes til tørhed, hvorved der fås et krystallinsk produkt som en stor masse. Massen 10 brækkes i små stykker og opløses i ca. 100 ml varm ethylacetat. Den filtrerede opløsning fortyndes med hexan, indtil den bliver uklar og afkøles først i is, derefter i en fryser. Bundfaldet opsamles på et filter og vaskes med vandfri ether, hvilket giver 21,6 g 1-(S)-1-[(S)-3-(benzoylthio)-2-methyl-l-15 -oxopropylj-2,3-dihydro-lH-indol-2-carboxylsyre, smeltepunkt 140,5-142°C, ocj^5 = -184,9 (c = 1,156%, EtOH) . Tyndtlags-chromatografi på en i forvejen overtrukket silicagel 60F-254 (fra Brinkmann) med fremkaldelse med en opløsning af CI^C^-(8}/EtOH(2)/toluen(l)/NEt2(1) viser en plet ved Rf 0,653 un-20 der UV-lys. Den diastereomere fra reaktionen viser en plet ved Rf 0,54.

Analyse:

Beregnet for C20HigNO4S (369,42): C 65,02, H 5,18, N 3,79. Pundet: C 65,05, H 5,04, N 3,81.

25

Eksempel 40 1-(S)-2,3-Dihydro-l-[(S)-3-mercapto-2-methyl-l-oxopropyl]-1H--indol-2-carboxylsyre

En blanding af 5,0 g 1-1-[3-(benozylthio)-2-methyl-30 -1-oxopropyl]-2,3-dihydro-lH-indol-2-carboxylsyre og 40 ml 2--methoxyethylamin i en 500 ml rundbundet kolbe omrøres under nitrogenatmosfære i 15 minutter ved 0°C, derefter i 10 minutter ved stuetemperatur. Overskydende amin afdampes på en roterende fordamper under formindsket tryk, hvilket giver en 35 olie, der holdes under højt vakuum i 15 minutter. Remanensen opløses i ca. 200 ml koldt oxygenfrit vand, og den vandige opløsning vaskes med frisk åbnet vandfri ether 3 gange. Straks i r'f r ·,

O

43

DK 158347B

derefter (for at undgå disulfiddannelse under alkaliske betingelser) gøres det vandige lag surt med fortyndet saltsyre til pH ca. 1. Det således udskillede olieagtige produkt ekstraheres med ether 3 gange (150 ml, 100 ml og 50 ml).

O

De forenede etherekstrakter vaskes med saltvand 3 gange og tørres over vandfrit natriumsulfat i en time. Etheren af-dampes på en roterende fordamper under formindsket tryk, og remanensen holdes under højt vakuum i 20 minutter. Det så-10 ledes fremstillede faste produkt opløses i ca. 30 ml varm ethylacetat. Ethylacetatopløsningen overføres kvantitativt til filterpapir ved anvendelse af en pipette og filtreres forsigtigt under anvendelse af "Reeve Angel" filtrerpapir. Filtratet fortyndes med hexan, indtil det bliver uklart (det 15 samlede volumen hexan, der anvendes til fortyndingen, er ca.

110 ml) og holdes ved stuetemperatur i en time og afkøles derefter i is i flere timer. Bundfaldet opsamles på et filter og vaskes med en blanding af ethylacetat og hexan (3:10 efter volumen), hvilket giver 2,95 g (82%) af den i overskrif- o 24 20 ten nævnte forbindelse, der smelter ved 140,5-142 C. a] Q = -178,1 (c = 1,133%, EtOH). TLC fås som tidligere beskrevet og viser en plet ved Rf 0,45. Der er ligeledes en svag plet ved Rf 0,25, som menes at stamme fra spor af disulfid-urenhed.

25 Analyse:

Beregnet for C^H-^NC^S (265,3): C 58,84, H 5,70, N 5,28.

Fundet: C 58,65, H 5,73, N 5,46.

30 35

DK 158347B

44

Eksempel 41 1-1-[3-(Acetylthio)-2-methyl-l-oxopropyl]-2,3-dihydro-lH- -indol-2-carboxylsyre_

Adskillige dråber triethylamin sættes til en blanding 5 af 24 g S-(-)-3-acetylthiopropansyre og 100 ml thionylchlo-rid. Den dannede opløsning, der beskyttes mod fugtighed ved anvendelse af et calciumchloridrør, omrøres natten over ved stuetemperatur og inddampes derpå på rotationsfordamper under formindsket tryk. Remanensen opløses i en lille mængde 10 toluen, og opløsningen inddampes på rotationsfordamper.

Denne opløsning i toluen og geninddampning under formindsket tryk gentages endnu engang, hvilket giver S-(-)-3-acetyl-thiopropanoylchlorid. Det sidstnævnte syrechlorid sættes til en afkølet (i isbad) og kraftigt omrørt opløsning af 15 24,14 g 2,3-dihydro-lH-indol-2-carboxylsyre, 29,9 g tri ethylamin og 500 ml methylenchlorid. Reaktionsblandirigen omrøres natten over ved stuetemperatur og behandles derpå med 20 ml 5%'s vandig kaliumhydrogensulfatopløsning. Det olieagtige materiale, der udskilles, ekstraheres to gange 20 med ethylacetat. De samlede ekstrakter vaskes med saltvand, tørres med vandfrit natriumsulfat og inddampes på rotationsfordamper under formindsket tryk. Remanensen opløses i 200 ml acetonitril. Der tilsættes 26,8 g dicyclohexylamin til acetonitrilopløsningen, og blandingen afkøles adskillige 25 timer i køleskab. Et bundfald opsamles på et filter og vaskes med acetonitril. Filterremanensen, der smelter ved 208-212eC, tritureres gentagne gange med varm acetonitril, indtil dens smeltepunkt forbedres til 217-218°C; [a]^5 = -113,88 (C = 0,98%, EtOH). På dette punkt vejer produktet (som dicyclo-30 hexylaminsalt) 18,17 g (udbytte 25%).

Analyse for C27H40N2O4S

Beregnet: C 66,36, H 8,25, N 5,73

Fundet: C 65,99, H 8,06, N 5,70 35 14,84 g af det således fremstillede dicyclohexylamin- salt fordeles mellem 200 ml 5%'s vandigt kaliumhydrogensulfat

DK 158347 B

45 og ethylacetat. Ethylacetatlaget opsamles, vaskes med saltvand og tørres derpå med vandfrit natriumsulfat. Ved afdampning af ethylacetatet på rotationsfordamper under formindsket tryk fås en fast remanens, der omkrystalliseres adskillige 5 gange fra ethylacetat og hexan, smeltepunkt 137-138eC, 25 [a]D = -269,41 (Calfl%f EtOH); udbytte 3,0 g (32%).

Analyse for C^H^NC^S

Beregnet: C 58,61, H 5,57, N 4,51

Fundet: C 58,57, H 5,65, N 4,43 10

Eksempel 42 N-(3-mercapto-2-methyl-l-oxopropyl)-2,3-dihydro-lH-indol-2- -carboxylsyre_

Under nitrogenatmosfære forenes 150 ml ammoniumhy-15 droxid og 100 g (0,325 mol) N-(3-acetylthio-2-methyl-l-oxo-propyl)-2,3-dihydro-lH-indol-2-carboxylsyre, og blandingen omrøres i 30 minutter ved 20 til 25°C. Reaktionsblandingen fortyndes med 500 ml vand og ekstraheres derpå med 200 ml methylenchlorid, hvorpå methylenchloridlaget bortkastes.

20 Til det resterende vandige lag sættes 500 ml methylenchlorid, og ved 10 til 20°C indstilles blandingens pH til 2,0 til 2,2 ved tilsætning af ca. 400 ml fortyndet saltsyre. Blandingen omrøres godt, lagene adskilles, og det resterende vandige lag ekstraheres igen med 200 ml methylenchlorid.

25 Methylenchloridopløsningen klares derpå ved omrøring med 5 g magnesiumsulfat og filtreres derpå.

Denne methylenchloridopløsning inddampes under vakuum ved 30 til 35°C til et rumfang på ca. 200 ml. Der tilsættes 250 ml alkohol (3A), og den dannede opløsning inddampes 30 igen til et rumfang på 200 ml. Den resulterende koncentrerede alkoholopløsning sættes derpå langsomt i løbet af 1 time ved 20° C til en forud fremstillet opløsning af 750 ml vand og 75 ml alkohol (3A) , der indeholder 3 g podekrystaller af det ønskede produkt (alt under nitrogenatmosfære). Tempera-35 turen sænkes derpå til 3 til 5°C, og blandingen omrøres i endnu 1 time. Bundfaldet udfældes først klæbrigt og krystal-

DK 158347B

46 liserer derpå efterhånden. Den i overskriften angivne forbindelse opsamles ved filtrering og vaskes en gang med 50 ml vand og to gange med 50 ml hexan og tørres derpå til konstant vægt i vakuum ved 40°C. Udbytte 82 g (95%) ; smp.

5 139,5-1420C; optisk drejning -172,2° (1% EtOH).

Eksempel 43 (S)—1—[(2S)-3-(benzoylthio)-2-methyl-l-oxopropyl~]-5-ethyl- -2,3-dihvdro-lH-indol-2-carboxvlsvre_ 10 Den i overskriften angivne betydning fremstilles ved anvendelse af 5-ethylindol-2-carboxylsyre-ethylester (B. Heath-Brown og P.G. Philpott, J. Chem. Soc., 1965. 7185) i stedet for 5-methoxyindol-2-carboxylsyreethylester ved fremgangsmåden ifølge eksempel 23-26.

15 IR: 1730 (C02H) og 1655 cm"1 (COS); [a]^8 = -166,88 (c = 1,08%, EtOH).

Eksempel 44 (-) - (S) -1-[(2S)-l-[[(IS)-l-ethoxycarbonyl-3-phenylpropyl]-20 amino] -1-oxopropyl] -2,3-dihydro-lH-indol-2-carboxylsyre- maleinat__

En blanding af 2,34 g (S)-l-[ (S)-2-amino-l-oxopropyl]--2,3-dihydro-lH-indol-2-carboxylsyre, 1,01 g triethylamin, 2,6 g 2-oxo-4-phenylbutansyreethylester, 10 g pulveriseret 25 molekylesigte 3Å, 250 ml vandfri ethanol og 3,0 g Raney-nik-kel hydrogeneres ved stuetemperatur ved anvendelse af et Parr-hydrogeneringsapparat med et hydrogentryk på 3,16 kg/cm2, indtil hydrogenoptagelsen ophører. Reaktionsblandingen filtreres gennem et Celite-lag, og filterremanensen 30 vaskes gentagne gange med ethanol. Filtrat og vaskevæsker samles og inddampes på rotationsfordamper under formindsket tryk, hvilket giver en harpiksagtig remanens. Remanensen opløses i en blanding af 80 ml vand og 25 ml ether, og blandingen gøres basisk til pH 9,6 ved tilsætning af fortyndet 35 vandig natriumhydroxidopløsning. Etherlaget skilles fra, og det vandige lag vaskes yderligere to gange med ether. Den

DK 158347B

47 vandige opløsning syrnes til pH 4,2 ved tilsætning af fortyndet saltsyre og mættes derpå med natriumchlorid. Den syrlige vandige opløsning ekstraheres fire gange med ethyl-acetat. De samlede ekstrakter tørres med natriumsulfat og 5 inddampes til tørhed på rotationsfordamper. Remanensen opløses i en ringe mængde ethylacetat (ca. 5 ml). Der tilsættes 0,9 g maleinsyre til opløsningen, og den dannede blanding omrøres ved stuetemperatur, indtil der fås en klar opløsning (ca. 1,5 time). Der tilsættes langsomt ca. 70 ml vandfri 10 ether under kraftig omrøring, indtil der ikke udskilles yderligere mælkeagtigt bundfald. Blandingen afkøles, og den ovenstående væske dekanteres fra. Remanensen genopløses i en lille mængde ethylacetat. Opløsningen dryppes til en stor mængde (ca. 3,5 liter) vandfri ether, hvorved det meste 15 af produktet opløses. Etheropløsningen filtreres, og filtratet inddampes på rotationsfordamper til ca. 150 ml og afkøles i is i adskillige timer. Den ovenstående væske dekanteres fra, og remanensen opløses i ca. 2 liter vandfri ether under opvarmning på dampbad. Opløsningen inddampes på 20 -rotationsfordamper til ca. 100 ml og afkøles i is. Den ovenstående væske dekanteres fra og opsamles separat (se det følgende eksempel). Denne omkrystallisation gentages endnu otte gange, hvilket giver 210 mg af den i overskriften angivne forbindelse som fint hvidt pulver. Forbindelsen har 25 ikke noget bestemt smeltepunkt (smelter ved 69-80°C) og giver én plet på TLC (silicagel, methylenchlorid/methanol ?5 4:1) med Rf 0,41, [<*]£ = -84,6° (c=0,755%, MeOH) .

Analyse for C24H28N205*C4H4°4 Beregnet: C 62,21, H 5,97, N 5,18, 30 Fundet: C 62,27, H 5,97, N 5,38.

35

DK 158347B

48

Eksempel 45 (-) - (S) -1-[ (2S) -2-[ [ (IR) -l-(ethoxycarbonyl)-3-phenylpro-pyl ] amino] -1-oxopropyl] -2,3 -dihydro-lH-indol -2 -carboxylsyre- -maleinat_ 5 De dekanterede etheropløsninger fra det foregående eksempel samles og inddampes på rotationsdamper til ca. 100 ml, der afkøles i is. Den ovenstående væske dekanteres fra, og remanensen renses på samme måde som beskrevet i det foregående eksempel, hvilket giver 360 mg af den i overskriften 10 angivne forbindelse som et meget let hvidt pulver. Forbindelsen har ikke et bestemt smeltepunkt og udviser en plet ved TLC (silicagel, methylenchlorid/methanol 4:1) ved Rf 0,48; [a]p7 = -101,18° (c = 0,99%, MeOH).

Analyse for C24H29N2O5 ^0^4()4: 15 Beregnet: C 62,21, H 5,97, N 5,18,

Fundet: C 62,87, H 6,09, N 5,48.

Eksempel 46 (S) -1— [ (S) -2- [ [ (S) -l-carboxy-3-phenylpropyl]amino]-1-oxo- 20 propyl1-2.3-dihvdro-lH-indol-2-carboxvlsvre_

En blanding af 1,722 g (S)-l-[(S)-1-ethoxycarbonyl--3-phenylpropyl]amino]-1-oxopropyl]-2,3-dihydro-lH-indol-2--carboxylsyre-tartrat, 12,7 ml IN vandig natriumhydroxidopløsning og 10 ml ethanol omrøres i 45 timer ved stuetempe-25 ratur under nitrogenatmosfære. Reaktionsblandingen afkøles natten over i fryser og filtreres til fjernelse af natriumsalt af vinsyre. Filtratet inddampes på rotationsfordamper, og den olieagtige remanens opløses i en ringe mængde (ca.

12 ml) vand. Den vandige opløsning syrnes forsigtigt med 2N 30 saltsyre. Ved pH 4 udskilles et gummiagtigt materiale. Den ovenstående væske dekanteres fra og syrnes yderligere med IN saltsyre til pH ca. 2 under kraftig omrøring, hvilket får et bundfald til at udskilles. Blandingen afkøles, og bundfaldet opsamles på et filter og vaskes med koldt vand, 35 hvilket giver 0,64 g af den i overskriften angivne forbindelse. Den første gummiagtige portion opløses i en meget

DK 158347 B

49 fortyndet natriumhydroxidopløsning. Den basiske opløsning vaskes tre gange med chloroform. Det vandige lag opsamles og syrnes som ovenfor til pH 2, hvilket giver yderligere 0,4 g af produktet med smp. 140-145°C under sønderdeling.

5 Analyse for 022^4^050/4 H2O

Beregnet: C 64,45, H 6,27, N 6,83 Fundet: C 64,52, H 5,98, N 7,38.

Eksempel 47 10 l-3-Benzovlthio-2-methylpropansvre

En opløsning af 127 g (0,368 mol) d-dehydroabietyl-amin, fremstillet fra d-dehydroabietylaminacetat, 39,2 g (54 ml, 0,387 mol) triethylamin, 75 ml vand og 1500 ml ethyl-acetat ved 50-55°C, afkøles til 45°C og sættes så hurtigt 15 som muligt ved 30°C til en opløsning af 150 g (0,66 mol) d,l-3-benzoylthio-2-methylpropionsyre i 1500 ml ethylacetat. Temperaturen stiger til 40°C, opløsningen podes, afkøles til 30°C i løbet af 30 minutter, derefter til 20°C i løbet af 30 minutter. Det faste stof filtreres fra, opslæmmes med 20 .500 ml ethylacetat, filtreres igen og vaskes med 75 ml ethylacetat. Den våde kage opløses i 3000 ml vandfri ethanol 3A ved 70-75°C i fem minutter, idet alle uopløselige stoffer filtreres fra, afkøles til 20°C og henstår i en time. Det faste bundfald filtreres fra og tørres i en vakuumovn ved 25 35°C til konstant vægt, hvorved fås det rene 1-3-benzoylthio- -2-methyl-propansyre-d-dehydroabietylaminsalt (93,0 g),

OK

smeltepunkt 153-153,5°C, [a]^ = +16,2°C (c=2, THF), udbytte 54,5%.

De 100 g l-3-benzoylthio-2-methylpropansyre-d-déhydro-30 abietylaminsalt (0,196 mol) deles mellem 400 ml methylen-chlorid og 200 ml (0,2 mol) IN vandigt natriumhydroxid, og væskerne filtreres til nedbrydning af den dannede emulsion. Methylenchloridlaget fraskilles og vaskes med 100 ml vand.

De vandige lag forenes og vaskes med 100 ml methylenchlorid.

35 Det vandige lag bringes til pH 3 med IN vandig saltsyre, og den udfældede olie ekstraheres med 150 ml og 50 ml methylen-

DK 158347B

50 chlorid. Den tørre methylenchloridekstrakt fortyndes med 400 ml hexan, og opløsningen inddampes under omrøring til 400 ml, idet temperaturen ikke overstiger 35-40eC. Blandingen afkøles under omrøring ved 20-25°C i en time.

5 Filtrering, vask med 2 x 25 ml hexan og tørring i en vakuumovn (under 35°C) giver 36,6 g l-3-benzoylthio-2-methyl-propansyre (udbytte 83,2%), smeltepunkt 68,5-69,5°C, [a]p5 = —42,4°C (c = 2 i EtOH).

10 Eksempel 48 iS)-Phthalovlalanvlchlorid

En blanding af 32,88 g (S)-phthaloylalanin, 75 ml thienylchlorid og fire dråber triethylamin omrøres natten over ved stuetemperatur og inddampes derefter på rotations-15 fordamper under formindsket tryk. Remanensen opløses i vandfri ether, og etheropløsningen inddampes på rotationsfordamper under formindsket tryk, hvilket giver en olieagtig remanens. Endnu to gange gentages opløsningen af remanensen i vandfrit ether efterfulgt af inddampning. Den olieagtige 20 remanens størkner langsomt ved stuetemperatur. Det krystallinske faste stof anbringes i adskillige timer i højvakuum. Produktet smelter ved 51-53°C [a]p7 = -8,34° (c = 1,04% CHC13).

25 Eksempel 49 (S) -2,3-Dihydro-l-[ (S) -2- (1,3-dihydro-l, 3-dioxo-2H-isoindol--2-yl) -1-oxopropyl ] -lH-indol-2-carboxylsyre-dicyclohexyl- aminsalt_ 0,15 mol (S)-phthaloylalanylchlorid (hele mængden 30 fra det foregående eksempel) opløst i en lille mængde (60 ml) tørt methylenchlorid sættes i løbet af 10 minutter til en til 0°C afkølet, hurtigt omrørt opløsning af 24,5 g (0,15 mol) 2,3-dihydroindol-2-carboxylsyre, 30,7 g (0,3 mol) triethylamin og 700 ml methylenchlorid under nitrogen-35 atmosfære. Den dannede blanding omrøres i yderligere 15 minutter ved 0°C og derpå i 2 timer ved stuetemperatur.

DK 158347B

51

Reaktionsblandingen vaskes tre gange med 600 ml, 500 ml og 400 ml 5%’ s vandig kaliumhydrogensulfatopløsning og derpå to gange med saltvand og tørres med natriumsulfat. Ved afdampning af methylenchloridet på rotationsfordamper under 5 formindsket tryk fås et amorft fast stof, der tørres under højvakuum i adskillige timer, hvilket giver 59 g råprodukt som en diastereomerblanding i forholdet 6:4.

Produktet opløses i 300 ml acetonitril og afkøles derpå til 10°C. Der tilsættes langsomt 27 g dicyclohexylamin 10 til acetonitrilopløsningen under kraftig omrøring. Den dannede blanding får lov til at stå i 1,5 timer ved stuetemperatur og afkøles derpå i køleskab i 0,5 time. Det udskilte bundfald opsamles på et filter og vaskes 6 eller 7 gange med ialt 200 ml acetonitril, hvilket giver 28,0 g delvis 15 adskilt produkt med smp. 199-201,5°C, [a]£ = -143,3° (c = 1,12%, EtOH).

Produktet opløses i ca. 150 ml varm ethanol. Opløsningen får lov til at afkøle til stuetemperatur og bratkøles derpå i køleskab i 1 til 2 timer. Bundfaldet opsamles på et 20 -filter og vaskes med kold ethanol adskillige gange og derpå med acetonitril adskillige gange. Det således opnåede produkt 28 smelter ved 201-203°C og vejer 21,25 g, [<*]D = -150,1° (c = 1,01%, EtOH). En analytisk prøve smelter ved 204,5-?5 -206,5°C, [a]£ = -156,45° (c = 0,6%, EtOH).

25 Analyse for C20HI6N2O5°C12H23N:

Beregnet: C 70,43, H 7,20, N 7,70,

Fundet: C 70,26, H 7,05, N 7,70.

Eksempel 50 30 (R)-2,3-dihydro-l-[ (S)-2-(1,3-dihydro-1,3-dioxo-2H-isoindol- -2-yl) -1-oxopropyl] -lH-indol-2-carboxylsyre-dicyclohexyl- aminsalt_

Kombinerede acetonitrilfiltrater og vaskevæsker fra det foregående eksempel (eksempel 49) filtreres for at fjer-35 ne en ringe mængde af et bundfald og inddampes til tørhed på rotationsfordamper, hvilket giver 27 g amorft fast stof,

DK 158347B

52 [a]J° = -8,01° (c =1/15%/ EtOH).

Analyse for 02(^16^05-03^2311:

Beregnet: C 70,43, H 7,20, N 7,70,

Fundet: C 70,30, H 7,29, N 7,62.

5

Eksempel 51 (S) -2,3 -dihydro-1- [ (S) -2 - (1,3 -dihydro-1,3 -dioxo-2H-isoindol--2-vi) -l-oxopronvll -lH-indol-2-carboxvlsYre-hemiethvlacetat.

25,9 g dicyclohexylaminsalt af den i overskriften 10 angivne forbindelse rystes med 400 ml 5%’ s vandig kalium-hydrogensulfatopløsning, og den frie syre ekstraheres tre gange med ialt 550 ml ethylacetat.

De kombinerede ekstrakter vaskes to gange med mættet vandig natriumchloridopløsning og tørres med vandfrit na-15 triumsulfat. Ved afdampning af ethylacetat på rotationsfordamper under formindsket tryk og derpå i vakuum fås 20 g 25 amorft fast stof, [a]£ = -250,01° (c = 1,165%, EtOH), ms (C.I.): m/e 265.

Analyse for C2oHi6N205^ EtOAc: 20 Beregnet: C 64,70, H 4,94, N 6,86,

Fundet: C 64,58, H 4,84, N 7,01.

Eksempel 52 (S)-1-[(S)-2-amino-l-oxopropyl]-2,3-dihydro-lH-indol-2-car- 25 boxvlsvre_ 20,4 g (S)-2,3-dihydro-l-[(S)-2-(l,3-dihydro-l,3--dioxo-2H-isoindol-2-yl)-1-oxopropyl]-lH-indol-2-carboxyl-syre-dicyclohexylaminsalt behandles med 300 ml 5%'s vandig kaliumhydrogensulfatopløsning, og den dannede frie syre 30 ekstraheres tre gange med methylenchlorid (samlede ekstrakter 450 ml). De samlede ekstrakter vaskes to gange med saltvand og tørres derpå med vandfrit natriumsulfat. Ved afdampning af methylenchloridet ved rotationsfordamper under formindsket tryk og derpå i højvakuum fås et amorft fast stof, der op-35 løses i 200 ml methanol. Der tilsættes 1,43 g 95%'s hydrazin til methanolopløsningen. Den dannede blanding omrøres i 24

53 DK 158347B

timer ved stuetemperatur under nitrogenatmosfagre og bratkøles herpå i 3 timer i en is/salt-blanding. Der opsamles et bundfald af 4,06 g phthalhydrazid på et filter, og det vaskes med methanol. Det kombinerede filtrat og vaskevæskerne ind-5 dampes på rotationsfordamper under formindsket tryk og derpå i vakuum, hvilket giver en fast remanens. Remanensen tritu-reres med ca. 250 ml methylenchlorid og filtreres. Filterremanensen vaskes adskillige gange med methylenchlorid og tørres i vakuum. Råproduktet opløses i ca. 50 ml vand ved 10 stuetemperatur og filtreres. Filterremanensen vaskes med vand. Det kombinerede filtrat og vaskevæskerne inddampes omhyggeligt på rotationsfordamper under formindsket tryk, hvilket giver en fast remanens, der tørres over phosphorpent- oxid i vakuum, hvilket giver 6,31 g af den i overskriften . 25 15 angivne forbindelse, [a]D - -140,85° (c = 1,44%, vand). Analyseprøven, der fås ved omkrystallisationer fra methanol, smelter ved 171-172 ° C (når smeltepunktet bestemmes ved hurtig opvarmning, smelter forbindelsen ved 206,5-209°C), [a]^5 = -161,17° (c = 1,065%, EtOH).

20 . Analyse for C12H14N2°3:

Beregnet: C 61,52, H 6,02, N 11,96,

Fundet: C 61,44, H 6,20, N 12,26.

Eksempel 53 25 Forsøg in vitro med inhibering af det angiotensinom- dannende enzym (ACE) ved anvendelse af kaninlungeekstrakt ved fremgangsmåden ifølge Cushman og Cheung, Biochem., Pharmacol., 20, 1637-1638 (1971), giver følgende resultater, der er angivet som IC5Q, dvs. den molære koncentration, som 30 er nødvendig til 50% inhibering. Styrken af salte er angivet omregnet til den frie forbindelse.

35

DK 158347B

54

Forb. ifølge eks. nr. Ic50

5 3A 7,8 X ΙΟ-8 M

3B 4,1 X 10-8 M

4 7,4 X 10"8 M

5 3,0 X 10“7 M

8 5,9 X 10“8 M

10 9 1,0 X 10~7 M

11 3,2 X 10~8 M

12 5,4 X ΙΟ-7 M

14 3,5 X 10“6 M

15 3,8 X 10“8 M

15 16 3,8 X 10“7 M

18 1,2 X 10”6 M

20 1,1 X 10“8 M

21 1,5 X ΙΟ-5 M

25 9,7 X 10”8 M

20 26 9,4 X 10"8 M

40 3,7 X 10“9 M

43 3,0 X 10“8 M

44 1,2 X 10“7 M

45 9,0 x 10“7 M

25 46 6,8 x 10~9 M

52 (mellemprodukt) 3,1 x 10-6 M

Eksempel 54 30 Når forbindelsen ifølge eksempel 44 undersøges i den normotensive, bevidste rotte ved fremgangsmåden ifølge Rubin m.fl., J. Pharmacol. Exp. Ther., 204. 271.280 (1978), in-hiberede den angiotensin I's vasopressorvirkning 46 procent 2 timer efter oral indgivelse i en dosis på 1 mg/kg legems-35 vægt.

: DK 158347B

55

Eksempel 55 Når forbindelsen ifølge eksempel 44 indgives oralt til den spontant hypertensive rotte, udviser den følgende reduktioner i blodtrykket: 5

Reduktion af systo-

Dosis lisk blodtryk Antal mg/kg mm Hg forsøgsdyr 10 _ 2,5 -13 4 5,0 -23 4 10,0 -33 4 15

Eksempel 56

Forbindelsen ifølge eksempel 40 er blevet afprøvet ved den i eksempel 53 angivne metode (Cushman og Cheung) ved et sammenlignings forsøg med den fra US patentskrift nr.

20 - 4.105.776 kendte forbindelse "Captopril" (l-L-prolin-3-mer-capto-2-methyl-l-oxopropyl). Foruden det i eksempel 53 omtalte forsøg in vitro er der gennemført forsøg in vivo til bestemmelse af aktiviteten imod angiotensin I hos rotter ved bevidsthed og af den antihypertensive aktivitet målt 25 på spontant hypertensive rotter (SHR). Der er herved opnået nedenstående resultater.

ACE-Inhibering Antihyperten-

Forbindelse In vitro3) In vivo*3) siv aktivitet0) 30 Eks. 40 3,7 x 10“9 M 0,36 mg/kg 0,88 mg/kg

Capropril 1,1 x 10“8 M 0,57 mg/kg 17,78 mg/kg a) Resultater angivet som i eksempel 53.

b) Dosis (peroralt), som er nødvendig til inhibering af 50% 35 af den af angiotensin I fremkaldte vasopressorreaktion.

c) Dosis (peroralt), som er nødvendig til sænkning af blod-

DK 158347B

56 trykket hos SHR med 25 mm Hg 4 timer efter indgivelsen.

Af disse resultater vil det ses, at den ved fremgangsmåden ifølge opfindelsen fremstillede forbindelse i alle tilfælde har bedre virkning end den kendte, selv om 5 styrkeforøgelsen varierer afhængigt af forsøgsmetoden.

Claims

1. Analogifremgangsmåde til fremstilling af 1-acyl- 2,3-dihydro-lH-indol-2-carboxylsyrer og derivater deraf med formlen 5 v r j-Ά o λ—r 11 tv l / 3L.c-.R_

2. Fremgangsmåde ifølge krav 1, kendetegnet ved, at

20 R^ betyder methyl, og R4 betyder -SH eller -SCORg, hvori Rg betyder methyl eller phenyl.

2 I Ri 35 hvor X, R-l og R5 har de ovenfor anførte betydninger, omsættes med en thiosyre med formlen DK 158347B O II h-s-c-r8, til dannelse af en forbindelse med formel X, hvor R4 betyder 5 O II -S-C-Rg, der eventuelt underkastes hydrolyse eller ammonolyse til dannelse af sådanne forbindelser med formlen hvor R4 er 10 -SH, eller b) en forbindelse med formlen C 15 (C) 0=C-CHR1(CH2)n-NH2 hvori n, R^, R5 og X har de ovenfor angivne betydninger, 20 kondenseres med en forbindelse med formlen Br-CH (COR21) - (CH2) m-phenyl eller R2 ^C-CO- (CH2) m-phenyl, til dannelse af en forbindelse med formlen I, hvori R4 betyder -NH-CH(COR21)-(CH2)m-pheny1, eller c) en 2,3-dihydro-indol-2-carboxylsyre med formlen 25 H 30 hvori R5 og X har de ovenfor angivne betydninger, kondenseres med et alkyl- eller phenylthioalkanoylhalogenid med formlen O O 35. ii II R8-C-S-(CH2)n-CHR1-C-W hvori Rg, R^ og n har de ovenfor angivne betydninger, og W betyder chlor, brom eller iod, til dannelse af en forbindelse med formlen I, hvori R4 be- DK 158347 B tyder O I! -S-C-Rg, 5 som derefter om ønsket underkastes hydrolyse eller ammonolyse til dannelse af de forbindelser med formlen I, hvori R4 betyder -SH, eller med en N-substitueret syre eller syrehalo-genid med formlen 0

10 II HOC-CHR]-(CH2)n-NH-CH(COR21)-(CH2)m-phenyl til dannelse af en forbindelse med formlen I, hvori R4 betyder -NH-CH(COR2i)-(CH2)m-phenyl, hvorefter et ved en af de foregående reaktioner fremstillet 15 produkt om ønsket omsættes med en passende syre eller base til dannelse af et farmaceutisk acceptabelt salt af et sådant produkt.

3. Fremgangsmåde ifølge krav 1, kendetegnet ved, at R^ betyder methyl, R4 er 2 5 -NH-CH-(CH2)m-phenyl, cor21 hvor m betyder 2, og R2i er hydroxy eller ethoxy.

4. Fremgangsmåde ifølge krav 1, 30 kendetegnet ved, at de fremstillede forbindelser er 1- (3 -benzoyl thio-2-methyl-l-oxopropyl) -2,3-dihydro-lH-indol-2-carboxylsyre, 1-(3-benzoylthio-l-oxopropyl)-2,3--dihydro-lH-indol-2-carboxylsyre, 2,3-dihydro-l-(3-mercapto--2-methyl-l-oxopropyl)-lH-indol-2-carboxylsyre, 2,3-dihydro- 35 -l-(3-mercapto-l-oxopropyl)-lH-indol-2-carboxylsyre, 1-(S)--2,3-dihydro-l-[ (S) -3-mercapto-2-methyl-l-oxopropyl]-1H-indol-2-carboxylsyre, l-[2-[[l-(ethoxycarbonyl)-3-phenyl-propyl] -amino] -1-oxopropyl ] -2,3-dihydro-lH-indol-2-carboxyl- DK 158347 B syre, 1-[2-[(l-carboxy-3-phenylpropyl]amino]-1-oxopropyl]--2,3-dihydro-lH-indol-2-carboxylsyre, (—) — (S) -l-[ (2S) -2-[ [ (IS) -1-(ethoxycarbonyl) -3-phenylpropyl]amino]-1-oxopropyl] --2,3-dihydro-lH-indol-2-carboxylsyre eller (-)-(S)-1-[(2S)-5 -2- [ [ (IR) -1- (ethoxycarbonyl) -3-phenylpropyl]amino]-1-oxo propyl]-2,3-dihydro-lH-indol-2-carboxylsyre eller pharmaceu-tisk acceptable salte deraf.

5. Mellemprodukt til fremstilling af forbindelser med formlen I ifølge krav 1, kendeteg net ved, at det 10 det har formlen 0=C-CHR1-(CH2)n-NH2 15 hvor n er 0 eller 1, er hydrogen eller C^-c4-alkyl, X er hydrogen, hydroxy, C^-C^-alkyl, Ci-C4-alkoxy eller halogen, 20 og R5 er hydroxy eller C^-C^-alkoxy, eller salte deraf.

5 I io . i 0=C-CHR1-(CH2)n-R4 hvor n er 0 eller 1, er hydrogen eller C^-C^·-alkyl, R5 15 er hydroxy eller C1-C4-alkoxy/ X er hydrogen, hydroxy, C1-C4-al]cyl, C^-C^-alkoxy eller halogen, R4 er o II

20 -SE, -S-C-Rg eller -NH-CH-(CH2)m-phenyl COR2i hvor Rg er c^-C^-alkyl eller phenyl, m er 1, 2 eller 3, og R2i er hydroxy eller Ci~C4-alkoxy, eller pharmaceutisk accep-25 table salte deraf, kendetegnet ved, at a) en forbindelse med formlen B

30 N *>}Lr (B) I L 5 H„C=C~C=0

6. Mellemprodukt ifølge krav 5, kendetegnet ved, at X er hydrogen, R5 er hydroxy, er methyl, og n er 0.