DK159854B

DK159854B - N6-substituerede adenosinderivater, fremstilling af disse samt farmaceutiske praeparater indeholdende saadanne forbindelser

Info

Publication number: DK159854B
Application number: DK488385A
Authority: DK
Inventors: Bharat Trivedi
Original assignee: Warner Lambert Co
Priority date: 1984-10-26
Filing date: 1985-10-24
Publication date: 1990-12-17
Also published as: ES548237A0; EP0181128B1; AU4877585A; DK488385A; EP0181128A3; CA1254888A; EP0181128A2; ES8607338A1; DE3573427D1; DK159854C; AU576717B2; DK488385D0

Description

DK 159854 B

USA-patent nr. 3 838 147, tysk offentliggørelses-skrift nr. 2 249 396 og europæisk patentansøgning nr.

C

40325A1 omhandler visse N -bicycloalkyladenosinderiva-ter, som har kredsløbsaktivitet samt antilipolytisk, 5 anticonvulsant, muskelafslappende og sedativ aktivitet og kan bruges mod smerter forbundet med angina pectoris. USA-patent 3 840 521 omhandler N^-methyl-N^-[bicyclo- (2,2,1)-heptyl-2]adenosin, som har antilipolytisk, anti-hyperlipæmisk og antihyperchlolesterolæmisk aktivitet.

10 Fra Journal of Medicinal Chemistry 25 (1982), nr.

g 3, s. 197-207 er det kendt, at visse N -substituerede g adenosiner, f.eks. N -cyclohexyladenosin, har et gunstigt forhold mellem affiniteter til A1- og A2-recepto-rer.

15 Det har nu overraskende vist sig, at visse hidtil g ukendte N -bicycloadenosiner både har et gunstigt forhold mellem affiniteter til A1- og A2-receptorer og meget ønskelige analgetiske og antiinflammatoriske egenskaber.

g 20 Opfindelsen angår derfor N -substituerede adeno- sinderivater, der er ejendommelige ved, at de har den almene formel (I): Λ 25 o-f 1.1 01*2- hvori NH- er enten endo eller exo; R21 og R^' betegner 35 uafhængigt hydrogen eller lavere alkonoyl eller tilsammen lavere alkyliden, og Rg' betegner halogen, hydrogen eller R^' 0, hv'or ' betegner hydrogen eller lavere alkanoyl, individuelle diastereomere deraf

DK 159854 B

2 eller blandinger af disse, eller et farmaceutisk acceptabelt syreadditionssalt deraf.

Opfindelsen angår også et farmaceutisk præparat omfattende en terapeutisk effektiv mængde af en forbin-5 delse med formlen I sammen med en farmaceutisk acceptabel bærer.

I forbindelserne med formlen I skal udtrykket "lavere alkyl" omfatte en ligekædet eller forgrenet al-kylgruppe med fra 1 til 6 carbonatomer, såsom f.eks.

10 methyl, ethyl, propyl, isopropyl, butyl, sec-butyl, isobutyl, tert-butyl, amyl, isoamyl, neopentyl, hexyl og lignende.

Halogen omfatter fortrinsvis fluor, chlor eller brom.

15 Lavere alkoxy er O-alkyl med fra 1 til 6 carbon atomer som defineret ovenfor for "lavere alkyl".

Lavere alkanoyl betyder en ligekædet eller forgrenet O

ri C-alkylgruppe med fra 1 til 6 carbonatomer i alkylkæden 20 som defineret ovenfor.

Forbindelserne med formel I er anvendelige både i form af frie baser og i form af syreadditionsalte. Begge former omfattes af opfindelsen. I praksis anvendes saltformen lige så meget som baseformen. Farmaceutisk accep-25 table salte omfattet af opfindelsen er sådanne, som er afledt fra uorganiske syrer,såsom saltsyre og svovlsyre, og organiske syrer, såsom ethansulfonsyre, benzensul-fonsyre, p-toluensulfonsyre og lignende, til opnåelse af henholdsvis hydrochloridet, sulfatet - ethansulfona-30 tet, benzensulfonatet, p-toluensulfonatet og lignende.

Syreadditionsaltene af de basiske forbindelser fremstilles enten ved opløsning af den frie base i vandig eller vandig alkoholisk opløsning eller andre egnede opløsningsmidler indeholdende syren og isolering af 35 saltet ved inddampning af opløsningen eller ved omsætning af den frie base og syre i et organisk opløsningsmiddel, i hvilket tilfælde saltet direkte udskilles eller kan opnås ved koncentration af opløsningen.

DK 159854 B

3

Forbindelserne ifølge opfindelsen kan indeholde asymmetriske carbonatomer. Opfindelsen omfatter de individuelle diastereomere, den rene S-isomer, den rene R-isomer og blandinger deraf. De individuelle diastereome-5 re kan fremstilles eller isoleres ved kendte fremgangsmåder .

Opfindelsen angår fortrinsvis en forbindelse med formlen I, hvori ~NH- er enten endo eller exo; Rg' betegner chlor; og R2' og R^' har de ovenfor angivne be-•jO tydninger.

g

Specielt omfatter opfindelsen N -2-endo-bicyclo[2, - g 2,1]heptyladenosin, N -2-exo-bicyclo[2,2,1]-heptyladeno- g sin og N -2-endo-bicyclo[2,2,1]heptyl-51-chlor-5'-deoxy-adenosin. Mest foretrukket er N6.-2-endo-bicyclo[2,2,1 ]- 15 heptyl-5'-chlor-5'-deoxy-adenosin.

Opfindelsen angår også fremgangsmåder til fremstilling af forbindelser med formlen I, specielt sådanne, hvor Rg' betegner chlor eller hydrogen, og disse fremgangsmåder er ejendommelige ved det i henholdsvis krav 20 3, 4 og 5 omhandlede.

Forbindelserne med formlen I kan hensigtsmæssigt syntetiseres ved omsætning af et 6-halogenpurin-ribosid med formlen III med en bicycloamin med formlen IV.

som vist nedenfor i et indifferent opløsningsmiddel, såsom en alkohol, eller et aprotisk opløsningsmiddel, 25 n såsom dimethylformamid, mellem ca. 25 og ca. 130 C i fra 1-48 timer. Bicycloaminerne med formlen IV er kommercielt tilgængelige, kan fremstilles ved kendte fremgangsmåder eller kan fremstilles ved fremgangsmåder ^ analoge med kendte fremgangsmåder. Det er hensigtsmæssigt at tilsætte en base, såsom triethylamin eller cal-ciumcarbonat,til neutralisering af det som biprodukt ved reaktionen dannede hydrogenhalogenid, men dette kan også opnås ved anvendelse af et yderligere ækvivalent af al-kylaminen. Det er også hensigtsmæssigt, men ikke nødvendigt, at beskytte ribofuranose-hydroxylgrupperne i form af acetat- eller benzoatestere, hvor beskyttelsesgrupperne kan fjernes med ammoniumhydroxid eller natrium- g methoxid efter syntese af den N -substituerede adenosin. Reaktionen kan illustreres som følger:

DK 159854 B

4

Hal R^.O 0¾. X r’ er Rjo . _ III IV.

10 hvori Hal betegner halogen, fortrinsvis chlor eller brom, og R21, R3' og R5' har de ovenfor for formel I angivne betydninger.

Endvidere kan forbindelser med formlen I, hvori 15 Rg' betegner halogen, også fremstilles udfra en forbindelse med formlen I, hvori Rg' betegner R^'O, hvori 1, R^' og Rj.' alle betegner hydrogen, ved en trinvis fremgangsmåde, hvor forbindelsen først omsættes til dannelse af en beskyttelsesgruppe for oxygen i OR2' og OR^1, 20 dvs. at R£' og R^' kommer til at betegne andet end hydrogen, f.eks. dimethoxypropan, i acetone til opnåelse af en forbindelse med formlen I med beskyttelsesgrupper, hvorefter 51-hydroxymethyl chloreres ved anvendelse af thionylchlorid i tetrahydrofuran, og beskyttelsesgruppen 25 fjernes under vandige sure betingelser ved anvendelse af syrer, f.eks. saltsyre, eddikesyre, svovlsyre og lignende som vist nedenfor.

' /-3 5

DK 159854 B

t γυλ -~-c c Β3 > fn *V^>|· ^>i^N 2. H* HO—T^OvJ HO—ι,ο^ π L·. π H0 0E ,—cTa 2x? NH N/ ci-V°s 15 Π

HO OH

Forbindelserne med formlen 1/ hvori Rg* betegner hydrogen, fremstilles ifølge følgende reaktionsskema: 20 H3C OAc /'°N 1. Kondensation iJO> + yjf 1

AcO OAc 25 Sædvanligvis er reaktionsbetingelserne ved denne reaktion analoge med kendte betingelser.

Under visse omstændigheder er det nødvendigt at beskytte enten N- eller O-mellemprodukterne i den ovenfor angivne fremgangsmåde med egnede kendte beskyttelses-30 grupper. Indføring og fjernelse af sådanne egnede oxygen-og nitrogen-beskyttelsesgrupper er kendt indenfor den organiske kemi; se f.eks.(l) "Protective Groups in Organic Chemistry," J. F. W. McOmie, ed., (New York, 1973), pp 43ff, 95ff; (2) J. F. W. McOmie, Advances in Organic 35 Chemistry, Vol. 3, 191-281 (1963); (3) R. A. Borssonas, Advances in Organic Chemistry, Vol. 3, 159-190 (1963); og (4) J. F. W. McOmie, Chem. & Ind., 603 (1979).

DK 159854 B

e

Eksempler på egnede oxygen-beskyttelsesgrupper er benzyl, t-butyldimethylsilyl, methyl, isopropyl, ethyl, tertiær butyl, ethoxyethyl og lignende. Beskyttelse af en NH-holdig gruppe er nødvendig ved nogle af de be-5 skrevne fremgangsmåder til fremstilling af forbindelser ifølge opfindelsen. Egnede nitrogen-beskyttelsesgrupper er benzyl, triphenylmethyl, trialkylsilyl, trichlore-thylcarbamat, trichlorethoxycarbonyl, vinyloxycarbamat og lignende.

10 Under visse omstændigheder er det nødvendigt at beskytte to forskellige oxygenatomer med forskellige beskyttelsesgrupper, således at den ene kan fjernes selektivt, medens den anden bliver tilbage. Benzyl- og t-butyldimethylsilyl-grupper anvendes på denne måde; Den 15 ene af disse kan fjernes i nærværelse af den anden, idet benzyl fjernes ved katalytisk hydrogenolyse, og t-butyl-dimethylsilyl fjernes ved omsætning ved f.eks. tetra-n-butylammoniumf lu orid.

Ved den her beskrevne fremgangsmåde til fremstil-20 ling af forbindelser ifølge opfindelsen vil kravet til beskyttelsesgrupper sædvanligvis være velkendt for en fagmand indenfor den organiske kemi, og anvendelsen af beskyttelsesgrupper er nødvendige ved fremgangsmåderne ifølge reaktionsskemaerne, skønt dette ikke udtrykkeligt 25 er illustreret.

Produkterne fra de her beskrevne reaktioner isoleres ved sædvanlige fremgangsmåder, såsom ekstraktion, destillation, chromatografi og lignende.

Forbindelserne med fojmlen I har vist sig at have O Λ forskellige affiniteter til adenosinreceptorer (af bekvemmelighedshensyn betegnet A1~ og A2-receptorer). Disse forbindelser er aktive ved afprøvninger i dyr og ud·'-viser her analgetiske egenskaber, hvorfor de er egnede til behandling af smerte og inflammation.

DK 159854 B

7

FARMAKOLOGISK VURDERING

Adenosinreceptorbinding - A-^-receptor affinitet (RBAl) Fremstilling af membraner.

5 Hele hjerner, undtagen lillehjerne og hjer nestamme, fra han-Long Evans rotter (150-200 g) blev homogeniseret i 30 volumener iskold 0,05 M Tris-HCl puffer, pH 7,7, ved anvendelse af en Brinkman Polytron PT-10, (indstilling på 6 i 20 sekunder) og centrifugeret i 10 10 minutter ved 20.000 x g (Sorvall RC-2), 4°C. Superna-tanten blev borthældt, og det sammenpressede bundfald blev gensuspenderet og centrifugeret som ovenfor. Det sammenpressede bundfald blev gensuspenderet i 20 ml Tris-HCl-puffer indeholdende to internationale enheder/ml adeno-15 sindeaminase (Sigma type III fra kalve-tarmslimhinde), inkuberet ved 37°C i 30 minutter og derefter ved 0°C i 10 minutter. Homogenatet blev igen centrifugeret, og det herefter opnåede sammenpressede bundfald blev gensuspenderet i iskold 0,05 M Tris-HCl-puffer, pH 7,7, til 20 en koncentration på 20 mg/ml af oprindeligt fugtigt væv, hvorefter det straks blev anvendt.

Forsøgsbetingelser.

Vævshomogenisat (10 mg/ml) blev inkuberet i 0,05 25 M Tris-HCl puffer, pH 7,7, indeholdende 1,0 nM [3H]-N6-

O

cyclohexyladenosin ([ H]-CHA) med eller uden test-forbindelser in triplo i en time ved 25°c. Inkubations- 3 volumenet var 2 ml. Ubundet ( H]-CHA blev fraskilt ved hurtig filtrering under reduceret tryk gennem Whatman 30 glasfiberfiltre (GF/B). Filtrene blev skyllet tre gange med 5 ml iskold 0,05 M Tris-HCl-puffer, pH 7,7. På filtret tilbageholdt radioaktivt mærket ligand blev målt ved væskescintillationsspektrofotometri efter rystning af filtrene i en time eller mere på mekanisk rysteapparat 35 i 10 ml Beckman Ready-Solv HP scintillationscocktail.

DK 159854 B

8

Beregninger.

Ikke-specifik binding blev defineret som den binding, der forekom i nærværelse af 1 mM theophyllin. Koncentrationen af testforbindelse, som hæmmede den speci-5 fikke binding med 50% (IC^Q},blev bestemt ved tilpasning af ikke-lineær computerkurve. Scatchard-plot blev beregnet ved lineær regression af linien opnået ved afsætning af mængden af bundet radioaktivt mærket ligand ,__-i / , j r bundet radioaktivt mærket ligand ·, (pmol/gram v*v) modr £rl radioaktivt mærket liganj- 1 · 1 Ω

Da mængden af bundet radioaktivt mærket ligand var en lille del af den totale tilsatte mængde, blev fri radioaktivt mærket ligand defineret som koncentrationen (nM) af til inkubationsblandingen sat radioaktivt mærket ligand. Hill-koefficienten blev beregnet ved linær regres-1 5 sion af linien opnået ved afsætning af logaritmen af bundet radioaktivt mærket ligand mod logaritmen af r bundet radioaktivt mærket ligand ' ' , L Bmax “ t*undet radioaktivt mærket ligand J *

Det maksimale antal bindingssteder (Bm^y) blev be- 20 regnet fra Scatchard-plot.

Adenosinreceptorbinding - A^-receptor affinitet (RBA2) Vævspræparat.

Hjerner fra Sprague-Dawley-rotter af blandet køn 25 med en vægt på 200-500 g blev købt hos Pel-Preez (Rogers, Arkansas). Friske hjerner fra han-Long-Evans af-skærmede rotter (Blue Spruce Farms, Altamont, NY) gav i det væsentlige identiske resultater. Hjerner blev optøet og derefter holdt på is, medens striata blev disse-30 keret ud. Striata blev splittet i 10 volumener iskold 50 mM Tris-HCl (pH 7,7 ved 25°C, pH 8,26 ved 5°C) (Tris) i 30 sekunder i en polytron PT-10 (Brinkmann) ved indstilling på 5. Suspensionen blev centrifugeret ved 50.000 xg i 10 minutter, supernatanten blev borthældt, og det 35 sammenpressede bundfald blev gensuspenderet i 10 volumener iskold Tris som ovenfor, gencentrifugeres, gensuspenderet til en koncentration på 1 g/5 ml og lagret i plasticflasker ved -70°C (stabilitet i mindst seks måneder).

DK 159854 B

9

Efter behov blev væv optøet til stuetemperatur, splittet i en polytron og anbragt på is til anvendelsen.

Inkubationsbetingelser.

5 Alle inkubationer varede i 60 minutter ved 25°C

i 12x75 mm glasrør indeholdende 1 ml Tris med 5 mg (op- 3 rindelig vævsvægt) rottestriatal-membraner, 4 nM [ H]- N-ethyl-adenosin-5'-carboxamid([^H]NECA), 50 nM N®-cy- clopentyladenosin (til eliminering af A^-receptorbinding) 10 10 mM MgCl0, 0,1 enheder/ml adenosindeaminase og 1% di-£ 6 methylsulfoxid. N -cyclopentyladenosin blev opløst til 10 mM i 0,02 N HCl og fortyndet i Tris. Stamopløsninger g og fortyndinger af N -cyclopentyladenosin kunne lagres ved -20°C i flere måneder. Testforbindelser blev opløst 15 til 10 mM i dimethylsulfoxid på forsøgsdagen og fortyndet i dimethylsulfoxid til 100 x den endelige inkubationskoncentration. Til kontrol-inkubationer blev sat det samme volumen (10 μΐ) dimethylsulfoxid; den resulterende koncentration af dimethylsulfoxid havde ingen 3 20 indvirkning på bindingen. [ H]NECA blev fortyndet til 40 nM i Tris, Membransuspensionen (5 mg/0,79 ml) indeholdt en tilstrækkelig mængde MgCl^ og adenosindeaminase til opnåelse af en slutkoncentration på henholdsvis 10 mM og 0,1 enheder/ml ved inkubationen. For test-for-25 bindeiser med IC^Q-værdier mindre end 1 μΜ var rækkefølgen for tilsætninger: test-forbindelse (10 μΐ), N^-cy-clopentyladenosin (100 μΐ), [ H]NECA (100μ1) og membraner (0,79 ml). For test-forbindelser med IC50-værdier større end 1 μΜ og med begrænset vandopløselighed var 30 rækkefølgen for tilsætninger (samme volumener); test-for- 6 3 bindelse, membraner, N -cyclopentyladenosin og [ H]NECA.

Efter alle tilsætninger blev stativet med rør vortex-behandlet, og rørene blev derefter inkuberet i 60 minutter ved 25°C i et ryste-vandbad. Stativet med rør 35 blev vortexbehandlet igen efter halvdelen af inkubationstiden.

Inkubationerne blev afsluttet ved filtrering gennem 2,4 cm GF/B-filtre under reduceret tryk. For hvert

DK 159854 B

10 rør foregik filtreringen på følgende måde: Rørets indhold blev udhældt på filtret, der blev .sat 4 ml iskold Tris til røret, og indholdet blev udhældt på filtret, hvorefter filtret blev vasket to gange med 4 ml 5 iskoldt Tris. Filtreringen var afsluttet i løbet af ca.

12 sekunder. Filtrene blev anbragt i scintillations-flasker, der blev tilsat 8 ml Formula 947 scintillations-væske, og flaskerne blev henstillet natten over og rystet, hvorefter der blev talt i en væskescintillations-10 tæller ved 40%'s virkningsgrad.

Dataanalyse.

Ikke-specifik binding blev defineret som binding g i nærværelse af 100 yM N-cyclopentyladenosin, og spe-Ί 5 cifik. binding blev defineret som totalbinding minus ikke-specifik binding. IC5Q blev beregnet ved vægtet ikke-li-neær mindste kvadraters'kurvetilpasning til massevirkningsligningen.

D

Y = T - S* —-—

D + K

20 hvori Y er cpm bundet T er cpm totalbinding uden lægemiddel S er cpm specifik, binding uden lægemiddel D er koncentrationen af lægemiddel 25 og K er ICaf lægemidlet.

Vægtningsfaktorer blev beregnet under antagelse af, at standardafvigelsen var proportional med den beregnede værdi af Y. Ikke-specifik binding blev behandlet som en meget stor (uendelig) koncentration af lægemiddel ved 30 computeranalysen.

IC50—værdier (nM) for adenosin A^- og A2“recep-toraffinitet er vist i tabellen.

ANALGETISK VURDERING 35

Antivridningstesten (AW) giver en præliminær vurdering af forbindelser med mulig analgetisk aktivitet. Testen udføres på han Swiss-Webster mus. Forbindelser administreres subcutant i vandig 0,2% methylcel-

DK 159854 B

11 lulose eller andre egnede bæremidler i volumener på 10 ml/kg. Doser betegner aktive bestanddele.

Eddikesyre (0,6%, 10 ml/kg) injiceres intraperi-tonealt 20 minutter efter administrering af adenosinago-5 nisten. Vridninger tælles i 5 minutter, idet der startes 7 minutter efter eddikesyreinjektionen. Vridning defineres som abdominal sammentrækning og udstrækning af krop og bagben med konkav krumning af ryggen. Data er udtrykt som ED^^-værdier, hvor ED^q er den dosis, der 10 kræves til at undertrykke vridning med 50% i forhold til kontroller, som er indgivet bæremiddel. ED^Q-værdier beregnes ved ikke-lineær regressionsanalyse.

ΑΝΤΙINFLAMMATORISK AFPRØVNING 15

Bestemmelse af immuninflammatorisk eller anti-inflammatorisk aktivitet foretages ved forsøg med carra-geenan-lungehindebetændelse, Carrageenan-lungehlndebetasidelse fremkaldes som tidligere beskrevet af Carter, G. W., et 20 al., i J, Pharm. Pharmacol 34:66-67, 1982. Carrageen η (310 yg/rotte) injiceres intrapleuralt i 0,25 ml pyro-genfrit saltvand. 4 timer senere aflives rotterne, og der sættes 2 ml opløsning af phenolrødt (325 mg phenol-rødt i 1 liter 0,05 M phosphat pufret saltvand) til hver 25 pleuralkavitet. Indholdene i kaviteterne blandes og overføres til reagensglas af glas. En portion på 50 yl fjernes fra hvert reagensglas, og exudatceller tælles efter lysering af røde blodceller (med zapoglobin;

Coulter Electronics, Hialeah FL) ved anvendelse af en 30 Coulter model ZBI tæller. Den tilbageværende blanding af exudat og phenolrødt centrifugeres ved 750 xg i 15 minutter. 100 yl af supernatantvæsken fortyndes med 3,9 ml phosphatpuffer (0,072 M tribasisk natriumphosphat,

Na^PO^ ,12^0, i vand) og absorbansen måles ved 560 nm.

35 Exudatvolumen beregnes som følger: •Vi = V2 ^A2- ~ Å3^ (A3 - Αχ)

DK 159854B

12 hvor = ukendt volumen af exudat, = volumen af farvestof sat til kavitet (2 ml], A1 = absorbans af exudat (antaget af være 0), A2 = absorbant af phenolrødtopløsning / A^ = absorbans af exudat og phenolrødt-opløs-5 ning.

Hæmning af exudat eller dannelse heraf beregnes ved følgende ligninger: %hæmning (exudat) = 10 Exudatvolumen (bærestof) - exudatvolumen (inhibitor) ,nn

Exudatvolumen (bærestof) x %hæmning (celletælling) =

Antal celler (bærestof) - antal celler (inhibitor)

Antal celler (bærestof) x 15 ID^Q-værdier beregnes ved Probit-analyse.

Forbindelsen ifølge eksempel 1 blev administreret 1 time før injection af carrageenan.

De biologiske data er sammenfattet i tabellen.

20 Opfindelsen angår således også et farmaceutisk præparat til behandling af smerte og inflammation, hvilket præparat omfatter en analgetisk eller antiinflamma-torisk effektiv mængde af en forbindelse med formlen I som defineret ovenfor sammen med en farmaceutisk accep-2 5 tabel bærer.

Receptorbinding

Eksempel RBA-1 (nM) RBA-2 (nM) 3Q 1 0,85 1300 2 1,4 1400 5 0,69 3093 AW-test (test vedrørende analgetisk virkning) 35

Eksempel AW ed5q mg/kg 1 0,03 13

DK 159354 B

Forsøg med carrageenanlungehindebetændelse (test vedrørende 'immuninflammatorisk aktivitet) TD5q (mg/kg)

5 Eksempel Exudat WBC

1 ............0.,15 ......... 0.,,12

Eller specielt for forskellige doser som følger: 10 ---——

Forsøg med carrageenanlungehindebetændelse

Eksempel Dosis %hæmning

mg/kg Exudat WBC

15 1 0,1 49,3 74,1 0,2 60,0 70,0 0,4 81,3 90,0 0,8 42,7 68,4 2 0,3 24,3 25,7 20 1,0 22,9 52,9 5 0,1 11,7 18,4 0,3 16,8 40,0 25 Til fremstilling af farmaceutiske præparater ud fra forbindelserne ifølge opfindelsen kan indifferente farmaceutiske acceptable bærere være enten faste eller væskeformige. Faste præparater omfatter pulvere, tabletter, dispergerbare granulater, kapsler, cacheter og suppo-30 sitorier. En fast bærer kan være et eller flere stoffer, som også kan virke som fortyndingsmidler, smagsstoffer, opløselighedsfremmende midler, smøremidler, suspenderingsmidler, bindemidler eller sprængmidr . ler. Den kan også være et indkapslingsmateriale. I pul-35 vere er bæreren et findelt fast stof, der er blandet med findelt aktiv forbindelse. I tabletten er den aktive forbindelse blandet med bærer, som har de nødvendige sammenbindende egenskaber, i egnede forhold og presset

DK 159854 B

14 til den ønskede form og størrelse. Pulvere og tabletter indeholder fortrinsvis fra 5 eller 10 til ca. 70% aktiv bestanddel. Egnede faste bærere er magnesiumcarbonat, magnesiumstearat, talkum, sukker, lactose, pectin, dex-5 trin, stivelse, gelatine, tragant, methylcellulose, natriumcarboxymethylcellulose, en lavtsmeltende voks, cacaosmør og lignende. Udtrykket "præparat" skal omfatte formuleringen af aktiv forbindelse med indkapslingsmateriale som bærer til opnåelse af en kapsel, i hvilken 10 den aktive bestanddel (med eller uden andre bærere) er omgivet af bærer, som således er i forbindelse med den. Ligeledes omfattes cacheter. Tabletter, pulver, cachetter og kapsler kan anvendes som faste doseringsformer egnede til oral administrering.

15 Til fremstilling af suppositorier smeltes først en lavtsmeltende voks, såsom en blanding af fedtsyregly-cerider eller cacaosmør, og den aktive bestanddel dis-pergeres homogent deri, f.eks. ved omrøring. Den smeltede homogene blanding udhældes derefter i forme af eg-20 net størrelse og henstilles til afkøling, hvorved den størkner.

Væskeformige præparater omfatter opløsninger, suspensioner og emulsioner. Som eksempel kan nævnes vandeller vand-propylenglycol-opløsninger til parenteral in-25 jection. Væskeformige præparater kan også formuleres i opløsning i vandig polyethylenglycolopløsning. Vandige opløsninger egnet til oral anvendelse kan fremstilles ved opløsning af den aktive bestanddel i vand og tilsætning af egnede farvestoffer, smagsstoffer, stabiliseringsmid-30 ler og fortykningsmidler efter ønske. Vandige suspensioner egnet til oral anvendelse kan fremstilles ved dis-pergering af findelt aktiv bestanddel i vand med viskost materiale, dvs. naturlige eller syntetiske gummier, harpikser, methylcellulose, natriumcarboxymethylcellulose 35 og andre velkendte suspenderingsmidler.

Opfindelsen omfatter også faste præparater, der er beregnet til kort før anvendelse at omdannes til væskeformige præparater til enten oral eller parenteral admi- 15

DK 159354 B

nistrering. Sådanne væskeformer omfatter opløsninger, suspensioner og emulsioner. Disse specielle faste præparater foreligger mest hensigtsmæssigt i enhedsdosisform og anvendes som sådan til opnåelse af en enkelt væske-5 formig dosisenhed, Alternativt kan foreligge en så stor mængde fast stof, at der efter omdannelse til væskeform kan opnås flere individuelle væskedoser ved afmåling af forudbestemte volumener af det væskeformige præparat, f.eks. med en sprøjte, teske eller en anden volumetrisk 10 beholder. Når der på denne måde fremstilles flere væskeformige doser, er det foretrukket at opbevare den ubrugte del af væskedoserne ved lav temperatur (dvs. under køling) for at forsinke en mulig nedbrydning. De faste præparater, der er beregnet til omdannelse til væskeform 15 kan foruden aktivt stof indeholde smagsstoffer, farvestoffer, stabiliseringsmidler, puffere, kunstige og naturlige sødestoffer, dispergeringsmidler, fortykningsmidler, opløselighedsfremmende midler og lignende. Den væske, som anvendes til fremstilling af det væskeformige 20 præparat, kan være vand, isotonisk vand, ethanol, glycerin, propylenglycol og lignende samt blandinger deraf. Naturligvis vælges den væske, som anvendes, under hensyn til administreringsvejen, f.eks. er væskeformige præparater indeholdende store mængder ethanol ikke egnede til 25 parenteral anvendelse.

Det farmaceutiske præparat forekommer fortrinsvis i enhedsdosisform. I en sådan form er præparatet opdelt i enhedsdoser indeholdende passende mængder aktiv bestanddel, Enhedsdosisformen kan være et indpakket præ-30 parat, hvor indpakningen indeholder adskilte mængder præparat, f.eks, indpakkede tabletter, kapsler og pulvere i flasker eller ampuller. Enhedsdosisformen kan også være en kapsel, cachet eller tablet i sig selv, eller den kan være et passende antal af en hvilken som helst 35 af disse i indpakket form.

Mængden af aktiv forbindelse i et enhedsdosis-

DK 159854 B

16 præparat kan varieres eller indstilles fra 1 mg til 500 mg, fortrinsvis fra 5 til 100 mg, afhængigt af den specielle anvendelse og styrken af den aktive bestanddel. Præparaterne kan om ønSket også indeholde andre hermed 5 forenelige terapeutiske midler.

Ved terapeutisk anvendelse som beskrevet ovenfor er dosisområdet for et pattedyr med en vægt på 70 kg fra 0,1 til 150 mg pr, kg. legemsvægt pr. dag, fortrinsvis fra 1 til 50 mg/kg legemsvægt pr. dag. Doserne kan imid-10 lertid varieres afhængigt af patientens krav, alvoren af den tilstand, som behandles, og den forbindelse som anvendes.

Bestemmelse af en passende dosis til en speciel situation foretages af en fagmand. Sædvanligvis startes 15 behandlingen med doser, der er mindre end den optimale dosis af forbindelsen. Derefter forøges dosis langsomt, indtil den optimale effekt under omstændighederne opnås.

Af bekvemmelighedsgrunde kan den totale daglige dosis om ønsket opdeles og administreres i portioner i løbet 20 af dagen.

Opfindelsen belyses nærmere ved hjælp af de følgende eksempler.

Eksempel 1 g 25 N -2-endo-bicyclo[2,2,1Jheptyl-adenosin

En blanding af 4,0 g 6-chlorpurin-ribosid, 2,57 g endo-2-aminonorbornan—hydrochlorid og 3,53 g triethyl-amin tilbagesvales i 100 ml ethanol under nitrogen i 20 timer. Opløsningsmidlet afdampes til tørhed. Tilbagevæ-30 rende fast materiale opløses i en minimal mængde 2-pro-panol og fortyndes med et overskud af koldt vand. Den klare vandige opløsning afdekanteres. Det tilbageværende faste stof opløses i ethanol, og flygtige stoffer afdampes. Dette gentages, hvorved der opnås 3,8 g (75%) N-2-35 endobicyclo[2,2,l]heptyladenosin med et smeltepunkt på 128-130°C.

DK 159854 B

17

Analyse beregnet for C^7H23N5^4: C, 56,49; H, 6,41; N, 19,37;

Fundet: C, 56,44; H, 6,81; N, 18,78.

5

Eksempel 2 g N -2-exo-bicvclo [2,2,1]heptyladenosin

En blanding af 4,0 g 6-chlorpurin-ribosid, 1,8 g exo-2-aminonorbornan og 2,1 g triethylamin tilbagesvales i 100 ml ethanol under nitrogen i 20 timer. Opløs-10 ningsmidlet afdampes til tørhed. Det tilbageværende faste stof behandles med 50 ml kold H20. Den klare vandige opløsning fradekanteres, og det faste stof opløses i ethanol. Flygtige stoffer afdampes under vakuum. Dette gentages 2 gange til opnåelse af et fast stof, som kry-15 stalliseres fra ethanol-ethylacetat-hexan til opnåelse

C

af 4,1 g (81%) N -2-exo^bicycld2,2,1]heptyladenosin med smeltepunkt 110-112°C.

Analyse beregnet for ci7H23N5^4: C, 56,49; H, 6,41; N, 19,37; zu Fundet: C, 55,88; H, 5,89; N, 18,59.

Eksempel 3 g N -2- ;endo; -norbornyl-2 ', 31 -O-isopopyliden-adenosin g 12,7 g (35 mmol) N -2-·endo-norbornyladenosin, 25 35 ml 2,2-dimethoxypropan og 12,8 g (38 mmol) bis-p-nitrophenylphosphat-hydrat blev omrørt i 150 ml acetone ved stuetemperatur i 18 timer. Reaktionen blev afbrudt med 100 ml 0,1 N NaHCO^, og der blev omrørt i 1 time.

Acetonen blev afdampet i vakuum, og den vandige opløs-30 ning blev ekstraheret med 200 ml methylenchlorid. De organiske ekstrakter blev tørret over magnesiumsulfat og inddampet i vakuum til opnåelse af et gråhvidt skum.

Skummet blev opløst i 100ml methanol og hældt gennem en prop af Dowex 1x8 (NaHCO^-form) harpiks. Harpiksen blev 35 vasket med 300 ml methanol og de kombinerede filtrater

DK 159854 B

18 blev inddampet i vakuum til opnåelse af 10,6 g (75%) af et hvidt fast stof med smeltepunkt 90-98°C.

Analyse beregnet for ^20^27N5°4: C, 59,84; H, 6,78; N, 17,45; 5 Fundet: C, 59,48; H, 6,71; N, 17,24.

Eksempel 4 g N -2- endo-norbornyl-51-chlor-51-deoxy-21,31-0-i sopropy 1 iden-'adeno sin 6,3 g (15,7 mmol) af isopropylidenanalogen fremstillet som beskrevet i eksempel 3 ovenfor blev omrørt i 100 ml THF og behandlet med 2,8 g (23,5 mmol) thionylchlorid. Reaktionsblandingen blev omrørt ved stuetemperatur natten over. Opløsningsmidlet blev afdampet 1 c i vakuum, og resten blev opløst i 100 ml methylenchlorid og vasket med 2 x 100 ml vand. Det organiske lag blev tørret over magnesiumsulfat og inddampet i vakuum. Resten blev opløst i 25 ml ethylacetat og renset ved prep 500A chromatografi (silicagel,1 søjle, 100 ml/min). Den 20 langsomtløbende fraktion blev isoleret ved afdampning af opløsningsmidlet til opnåelse af 4,4 g (67%) af et hvidt skum med smeltepunkt 61-70°C.

Analyse beregnet for ^qE^øCIN^O^ : C, 57,20; H, 6,24; N, 16,68; Cl, 8,44;

ZD

Fundet: C, 56,97; H, 6,13; N, 16,59; Cl, 8,62.

Eksempel 5 g N -2-endo-norbornyl-51-chlor-5 *-deoxy-adenosin 2Q 4,3 g (10,2 mmol) af 51-chlor-isopropylidenanalo- gen fremstillet som beskrevet i eksempel 4 ovenfor blev omrørt i 100 ml 50% myresyre ved 50°C i 4 timer. Syren blev afdampet i vakuum, og resten blev afdampet med 2 x 50 ml methanol til opnåelse af et gråhvidt skum. Skummet 22 blev opløst i 25 ml acetone og renset ved prep 500A chromatografi (silicagel, 1 søjle, 100 ml/min). Den væsentligste fraktion bestemt ved måling af refraktionsindeks blev isoleret ved afdampning af opløsningsmidlet

DK 159854 B

19 til opnåelse af 2,4 g (62%) af et hvidt fast fast stof mal smeltepunkt 96-99°C.

Analyse beregnet forC.^^ 2^1^0^: C, 53,75} H, 5,84} N, 18,44; 5 Fundet: C, 53,89; H, 6,05; N, 18,23.

Eksempel 6 "g N -3-endQ-no'rbornyl-'5 * -deoxyadenosin 2,3 g (15 mmol) 6-chlorpurin, 3,5 g (35 mmol) 10 triethylamin og 2,5 g (17 mmol) 2-endo-aminonorbornan-hydrochlorid blev omrørt ved tilbagesvaling i 100 ml ethanol i 72 timer. Opløsningen blev afkølet til stuetemperatur og ethanolen blev afdampet i vakuum. Resten blev opløst i chloroform og vasket med 100 ml vand. Den 15 organiske fraktion blev tørret over magnesiumsulfat, og opløsningsmidlet blev afdampet i vakuum. Resten blev tørret ved 65°C i vakuum natten over til opnåelse af 2,1 g (62%) af et lysegrønt fast stof med smeltepunkt 217-219°C.

20 4,4 g (19,1 mmol) af adeninen og 6,1 g (23 mmol) 5’-deoxyribose blev smeltet og omrørt ved 200°C. Til smelten blev sat en mikro-dråbe koncentreret svovlsyre, og den dannede eddikesyre belv fjernet i en svag strøm af nitrogen. Opløsningen blev omrørt i 4 timer, før den 25 blev afkølet til stuetemperatur. Den glasagtige rest blev splittet i 100 ml ethylacetat i ultralydsbad. Opløsningen blev derefter renset ved chromatografi til opnåelse efter afdampning af opløsningsmidlet af 1,6 g af et gråhvidt skum, identificeret i eksempel 7 nedenfor.

30 1,4 g (3,3 mmol) af skummet blev derefter opløst i 100 ml methanolisk ammoniak (mættet ved 0°C), og opløsningen blev omrørt ved stuetemperatur i 6 timer. Opløsningen blev inddampet i vakuum, og resten blev renset ved chromatografi til opnåelse efter afdampning af opløsnings-35 middel af 0,9 g (18%) af et hygroskopisk hvidt fast stof, smeltepunkt 93-101°C.

Claims

10 Fundet: C, 58,32; H, 6,48; N, 14,86. g

1. N -Substitueret adenosinderivat, kendetegnet ved, at det har den almene formel (I): cL· Vs Od ' v^d r3-<5 or2«. 25 hvori NH- er enten endo eller exo; R21 og Rg' betegner uafhængigt hydrogen eller lavere alkanoyl eller tilsammen lavere alkyliden, og Rg 1 betegner halogen, hydrogen eller Rg' O, hvor Rg* betegner hydrogen eller lavere alkanoyl, individuelle diastereomere deraf eller blandin-30 ger af disse, eller et farmaceutisk acceptabelt syreadditionssalt deraf.

2. Forbindelse ifølge krav 1, kendetegnet ved, at den er g N -2-endo-bicyclo[2,2,1]heptyladenosin; g

35 N -2-exo-bicyclo[2,2,1]heptyladenosin; g N -2-endo-bicyclo[2,2,1]heptyl-5'-chlor-5'-deoxyadenosin; 2 N -2-endo-norbornyl-5'-deoxyadenosin; DK 159854 B C , N -2-endo-norbornyl-5'-deoxy-21,3'-dlacetyladenosin; C N -2-endo-norbornyl-2',3'-O-isopropylidenadenosin; eller N6-2-endo-norbornyl~5'-chlor-5'-deoxy-2',3'-O-isopro-py1i denadenos i n.

3. Fremgangsmåde til fremstilling af en forbin delse ifølge krav 1, kendetegnet ved, at man omsætter et 6-halogenpurin-riboxid med formlen (lin): 15 «3.0 0¾. , hvor R2', R3' og R^' har de i krav 1 angivne betydninger, og 20 hvori Hal betegner halogen, med en forbindelse med formlen (IV): *" (IV) 30 i et indifferent opløsningsmiddel ved fra ca. 25 til ca. 130°C i fra 1-48 timer, og om ønsket omdanner R^'O til halogen eller hydrogen; og at man yderligere ved kendte fremgangsmåder omdanner den resulterende frie base til et 35 farmaceutisk acceptabelt syreadditionssalt. DK 159854 B

4. Fremgangsmåde til fremstilling af en forbindelse ifølge krav 1, hvori Rg* betegner chlor, kendetegnet ved, at man omsætter en forbindelse med formlen a Co HD-1/0\ Ό R3,0 ORj, 15 ’ ’ . hvori 1 og ^ovenfor angivne betydninger, idet dog ingen af dem betegner hydrogen, med thionyichlorid, og at man an ønsket omdanner både R^' og R21 til hydrogen ved yderligere behandling med en vandig syre.

5. Fremgangsmåde til fremstilling af en forbin- 2 0 delse ifølge krav 1, hvor Rg'betegner hydrogen, kendetegnet ved, at man omsætter en forbindelse med formlen 25 NH 00 H 30 med en forbindelse med formlen H,C OR* ΰ 0 °. R’ R .23 DK 159854 B hvori R* betegner lavere alkanoyl.

6. Farmaceutisk præparat, kendetegnet ved, at det omfatter en terapeutisk effektiv mængde af en forbindelse ifølge krav 1 sammen med en farmaceutisk 5 acceptabel bærer.