DK161082B - Analogifremgangsmaade til fremstilling af syn-isomere oximderivater af 7-aminothiazolylacetamidocephalosporansyre - Google Patents

Description

- i -

DK 161082 B

Opfindelsen angår en analogifremgangsmåde til fremstilling af hidtil ukendte syn-isomere oximderivater af 7-aminothiazolylacetamidocephalosporansyre med den i krav l's indledning angivne almene formel I.

5 Blandt værdier af R' skal nævnes methyl, ethyl, propyl, isopropyl, butyl, sec.-butyl, tert.-butyl, vinyl, propenyl, butenyl, ethynyl og propargyl.

Blandt værdierne af A skal især nævnes et ækvivalent natrium, kalium, lithium, calcium eller magnesium.

10 Blandt de organiske baser, som kan repræsenteres ved A, skal nævnes trimethylamin, triethylamin, methylamin, pro-pylamin, Ν,Ν-dimethylethanolamin, tris-(hydroxymethyl)-ami-nomethan, arginin og lysin.

Opfindelsen angår specielt en fremgangsmåde til 15 fremstilling af forbindelserne med formlen I, hvor A betegner et hydrogenatom, et natriumatom eller et ækvivalent diethylamin.

Blandt forbindelserne med formlen I skal især nævnes de forbindelser, som er beskrevet nedenfor i eksem-20 pierne, og navnlig: - 3-acetoxymethyl-7-(2-(2-amino-4-thiazolyl)-2-methoxyimi-noacetamido)-ceph-3-em-4-carboxylsyre, syn-isomer, - natriumsaltet af 3-acetoxymethyl-7-(2-(2-amino-4-thiazo-lyl)2-methoxyiminoacetamido)-ceph-3-em-4-carboxylsyre, syn- 25 isomer, - 3-acetoxymethyl-7-(2-(2-amino-4-thiazolyl)-2-methoxyimi-noacetamido)-ceph-3-em-4-carboxylsyre, som opnået ved fremgangsmåden ifølge eksempel 4, - natriumsaltet af 3-acetoxymethyl-7-(2-(2-amino-4-thiazo-30 lyl)-2-methoxyiminoacetamido)-ceph-3-em-4-carboxylsyre, som opnået ved fremgangsmåden ifølge eksempel 7, - det krystalliserede natriumsalt af 3-acetoxy-methyl-7-(2-{2-amino-4-thiazolyl)-2-methoxyiminoacetamido)-ceph-3-em-4-carboxylsyre, syn-isomer, 35 - 3-acetoxymethyl-7-(2-(2-amino-4-thiazolyl)-2-ethoxyimino- acetamido)-ceph-3-em-4-carboxylsyre, syn-isomer, og dens

DK 161082 B

- 2 - salte med alkalimetaller, jordalkalimetaller, magnesium og organiske aminerede baser, - 3-acetoxymethyl-7-(2-(2-amino-4-thiazolyl)-2-((2-prope-nyl)-oxyimino)-acetamido)ceph-3-em-4-carboxylsyre, syn-iso- 5 mer, og dens salte med alkalimetaller, jordalkalimetaller, magnesium og organiske aminerede baser og - 3-acetoxymethyl-7-(2-amino-4-thiazolyl)-2-((1-methyletho-xy)-imino)-acetamido)-ceph-3-em-4-carboxylsyre, syn-isomer, og dens salte med alkalimetaller, jordalkalimetaller, mag- 10 nesium og organiske aminerede baser.

Det vil forstås, at de ovennævnte forbindelser med formlen I kan eksistere: - enten i den med formlen I angivne form - eller i form af produkterne med formlen I„:

Li 15 tf i x 20 (½) Ίτνί 25 cd2a hvor R' og A har samme betydning som ovenfor.

Det vil ligeledes forstås, at produkterne med formlen 1' kan eksistere i de samme to former som angivet ovenfor for produkterne med formlen I.

Fremgangsmåden til fremstilling af produkterne med formlen 1' er ejendommelig ved det i krav l's kendetegnende del anførte.

Fremgangsmåden til fremstilling af produkterne med formlen I er ejendommelig ved det i krav l's kendetegnende del anførte.

35 - 3 -

DK 161082 B

I en foretrukken udførelsesform for fremgangsmåden til fremstilling af produkterne med formlen I behandler man 7-aminocephalosporansyre med et funktionelt derivat af syren med formlen II såsom et syreanhydrid eller syrechlo-5 rid, idet anhydridet kan være dannet in situ ved indvirkning af isobutylchlorformiat eller dicyclohexylcarbodiimid på syren. Man kan ligeledes benytte andre halogenider eller også andre anhydrider dannet in situ ved indvirkning af andre alkylchlorformiater, et dialkylcarbodiimid eller 10 et andet ' dicycloalkylcarbodiimid. Man kan ligeledes benytte andre syrederivater såsom syreazidet, det aktiverede syreazid eller en aktiveret syreester dannet med f.eks.

hydroxysuccinimid, p-nitrophenol eller 2,3-dinitrophenol.

I det tilfælde, hvor omsætningen af 7-aminocephalosporan-15 syre sker med et halogenid af syren med den almene formel Ile eller II eller med et anydrid dannet med et isobutylchlorformiat, arbejder man fortrinsvis i nærværelse af et basisk middel.

Som basisk middel kan man f.eks. vælge et alkali-20 metalcarbonat eller en tertiær organisk base såsom N-me-thylmorpholin, pyridin eller en trialkylamin såsom triethylamin.

Som surt hydrolysemiddel, hvormed man eventuelt behandler produkterne med formlen la, skal nævnes myre-25 syre, trifluoreddikesyre eller eddikesyre. Disse syrer kan anvendes vandfrie eller i vandig opløsning. Som hydrolysemiddel skal især nævnes systemet bestående af zink og eddikesyre.

Man benytter fortrinsvis et surt hydrolysemiddel 30 såsom vandfri trifluoreddikesyre eller myresyre eller eddikesyre, begge i vandig tilstand, til eliminering af tert.-butoxycarbonyl- eller tritylgrupperne.

Man benytter fortrinsvis systemet bestående af zink og eddikesyre til eliminering af trichlorethylgruppen 35 og en katalytisk halogenering til eliminering af benzyl-, dibenzyl- og carbobenzyloxygrupperne.

Produkterne med formlen Ib kan omdannes til salte - 4 -

DK 161082 B

efter gængse metoder. Saltdannelsen kan f.eks. opnås ved indvirkning på disse syrer af en uorganisk base såsom f.eks. natrium- eller kaliumhydroxid eller natriumbicarbo-nat eller et salt af en substitueret eller usubstitueret 5 aliphatisk carboxylsyre såsom diethyleddikesyre, ethyl-hexansyre eller specielt eddikesyre.

De foretrukne salte af ovennævnte syrer er natriumsaltene.

Saltdannelsen kan ligeledes opnås ved indvirkning 10 af en organisk base såsom triethylamin.

Til fremstilling af saltene kan solvaterne af de frie syrer ligeledes benyttes som udgangsprodukter i stedet for de frie syrer. Man kan f.eks. nævne de solvater, som fås med vand, myresyre eller en alkohol.

15 Solvaterne med en alkohol, specielt ethanol, kan også opnås, idet man f.eks. behandler med en blanding, af alkohol og vand det solvat, som er dannet med myresyre, idet denne behandling efterfølges af en inddampning af opløsningen.

20 Denne saltdannelse udføres fortrinsvis i et opløs ningsmiddel eller en blanding af opløsningsmidler såsom vand, ethylether, methanol, ethanol eller acetone.

Saltene fås i amorf eller krystallinsk ' form afhængende af de benyttede reaktionsbetingelser.

25

De krystallinske salte fremstilles fortrinsvis, idet man omsætter de frie syrer eller deres 'solvater, som er dannet med f.eks. myresyre eller ethanol, med et af saltene af de aliphatiske carboxylsyrer, som er nævnt ovenfor, fortrinsvis natriumacetat.

^ Ved fremstillingen af et natriumsalt udføres reaktionen i et passende organisk opløsningsmiddel såsom f.eks. methanol, hvilket opløsningsmiddel kan indeholde små mængder vand.

Det er desuden muligt at omdanne de amorfe salte 35 til deres krystallinske form. Til dette formål kan et amorft natriumsalt, som kan foreligge i form af et solvat med f.eks. 0,5, 1 eller 1,5 mol vand, opløses i et passende - 5 -

DK 161082 B

organisk opløsningsmiddel, fortrinsvis en lavmolekylær alkohol såsom methanol, og krystallisationen kan da foretages direkte eller ved tilsætning af andre opløsningsmidler, f.eks. ethanol, isopropanol, n-butanol, acetone, 5 ethere og i almindelighed med methanol blandbare organiske opløsningsmidler.

Hvis udgangsproduktet, opløsningsmidlet eller de to bestanddele indeholder vand, kan det krystallinske salt fås i hydratiseret form, f.eks. har man kunnet isolere det 10 krystallinske natriumsalt af 3-acetoxymethyl~7~(2-amino-4-thiazolyl)-2-methoxyiminoacetamido)-ceph-3-em-4-carboxylsy-re, syn-isomer, med f.eks. 0,5, 1 eller 1,5 mol vand.

Den benyttede syre til hydrolyse er saltene af produkterne med formlen la, hvor betegner en ved sur X' 15 hydrolyse let eliminerbar gruppe, og R betegner en ved sur hydrolyse let eliminerbar gruppe eller en mættet eller umættet alkylgruyppe med 1-4 carbonatomer, er fortrinsvis myresyre. Man kan imidlertid benytte trifluoreddikesyre eller eddikesyre. Disse syrer kan benyttes vandfrie eller i 20 vandig opløsning.

Som hydrogenolysemiddel, hvormed man behandler saltene af produkterne med formlen la, hvor R^ betegner en X« ved hydrogenolyse let eliminerbar gruppe, og R betegner en ved hydrogenolyse let eliminerbar gruppe eller en mættet 25 eller umættet alkylgruppe med 1-4 carbonatomer, kan nævnes katalytisk hydrogenering.

Produkterne med formlen II kan fremstilles ved, at man behandler en forbindelse med formlen IV

30 NH2

/NN

S N

\=t/__^^-C02alc (jy)

N

35 OR' hvor R' betegner et hydrogenatom, en ved sur hydrolyse

DK 161082B

- 6 -

eller hydrogenolyse let eliminerbar gruppe eller en mættet eller umættet alkylgruppe med 1-4 carbonatomer, og alc betegner en alkylgruppe med 1-4 carbonatomer, med et funktionelt derivat af en ved sur hydrolyse eller hydrogenolyse 5 let eliminerbar gruppe, til opnåelse af et produkt med formlen V

NH-R*·

A

10 A/^-COjalo (V) 11

N

i 1’

OR

15 hvor R^ betegner en ved sur hydrolyse eller hydrogenolyse 1»

let eliminerbar gruppe og R betegner en ved sur hydrolyse eller hydrogenolyse let eliminerbar gruppe eller en mættet eller umættet alkylgruppe med 1-4 carbonatomer, hvilket produkt med formlen V man behandler med en base og derefter 20 med en syre til opnåelse af et produkt med formlen II

NH-R^

A

S N

\==/ co2H

25 il

N

· * i i' hvor R og R har samme betydning som ovenfor.

I en foretrukket udførelsesform for fremstilling 30 af produkterne med formlen Ile og produkterne med formlen II er det funktionelle derivat af en ved sur hydrolyse eller hydrogenolyse let eliminerbar gruppe fortrinsvis tritylchlorid, der benyttes i nærværelse af triethyl-amin eller andre tertiære aminerede baser såsom andre 35 trialkylaminer, methylmorpholin eller pyridin.

Man kan ligeledes benytte andre funktionelle derivater af ved sur hydrolyse eller hydrogenolyse let eli- - 7 -

DK 161082 B

minerbare grupper. Blandt disse derivater skal nævnes tert.-butylchlorformiat fremstillet in situ eller tert.-butylazidoformiat, trichlorethyl- eller benzylchlorformi-at, blandet myresyre-eddikesyre-anhydrid fremstillet in 5 situ, benzyl- eller dibenzylchlorid eller et andet -halogenid, phthalsyreanhydrid eller N-carbethoxyphthalimid.

Det funktionelle derivat af chloracetylgruppen er fortrinsvis chloreddikesyreanhydrid eller et halogenid såsom monochloracetylchlorid.

10 Den base, som man benytter til hydrolyse af produktet med formlen V, er fortrinsvis natriumhydroxid, men man kan ligeledes benytte andre baser såsom kaliumhydroxid eller bariumhydroxid.

Den syre, som man benytter til isolering af syren 15 med formlen II, er fortrinsvis fortyndet saltsyre, men man kan ligeledes benytte eddikesyre eller myresyre.

Produkterne med formlen IV kan fremstilles ved at man omsætter thiourinstof med et produkt med formlen III

Cl-CH2-C-C-C02alc 20 " " 0 N (III) OR' hvor R' betegner et hydrogenatom, en ved sur hydrolyse

25 eller ved hydrogenolyse let eliminerbar gruppe eller en mættet eller umættet alkylgruppe med 1-4 carbonatomer, og alc betegner en alkylgruppe med 1-4 carbonatomer, til opnåelse - efter behandling med en base - af et produkt med formlen IV

30 ^η2

Ah W,co23Ic <it> '11

N

„ I

35 OR' hvor R1 og alc har samme betydning som ovenfor.

- 8 -

DK 161082 B

I en foretrukken udførelsesform for denne fremgangsmåde er den base, som man benytter til opnåelse af produktet med formlen IV, kaliumacetat. Man kan imidlertid benytte carbonaterne og bicarbonaterne af alkalimetallerne 5 samt fortyndet natrium- eller kaliumhydroxid.

En variant af fremgangsmåden til fremstilling af produkterne IV og med formlen Vb X1

10 S x N

^C02alc Y (Vb> 0R"b 15 hvor R^ betegner en ved sur hydrolyse eller ved hydro-genolyse let eliminerbar gruppe, R"b betegner en mættet eller umættet alkylgruppe med 1-4 carbonatomer, og alc betegner en alkylgruppe med 1-4 carbonatomer . og svarende til et produkt med formlen V defineret som ovenfor, hvor R^ 20 betegner en ved sur hydrolyse eller ved hydrogenolyse let • . 11 eliminerbar gruppe, og R betegner en mættet eller umættet alkylgruppe med 1-4 carbonatomer, består i, at man behandler et produkt med formlen IV" NH,

25 /W

S N

_jCOpalc II CIV") ¥

OH

30

med et ækvivalent af et funktionelt derivat af en ved sur hydrolyse eller ved hydrogenolyse let eliminerbar gruppe til opnåelse af et produkt med formlen X

35

DK 161082 B

- 9 -

NHR S N

\=^^/C°2alC (X)

II

s N

5 i

OH

som man behandler med et alkyleringsmiddel til opnåelse af det forventede produkt med formlen Vb, 10 I en udførelsesform for denne fremgangsmåde er det funktionelle derivat af en ved sur hydrolyse eller ved hydrogenolyse let eliminerbar gruppe fortrinsvis trityl-chlorid. Man arbejder da i nærværelse af en base, fortrinsvis triethylamin. Man kan ligeledes benytte andre baser 15 såsom andre trialkylaminer, methylmorpholin eller pyridin.

Man kan ligeledes benytte andre funktionelle derivater af ved sur hydrolyse eller hydrogenolyse let eliminerbare grupper såsom tert.-butylchlorformiat eller -azidoformiat, trichlorethyl- eller dibenzylchlorformiat, 20 in situ fremstillet blandet anhydrid af myresyre og eddikesyre, benzyl- eller dibenzylchlorid eller et andet -halogenid, phthalsyreanhydrid eller N-carbethoxyphthalimid.

Det alkyleringsmiddel, som man benytter til fremstilling af produkterne med formlen Vb, er fortrinsvis et 25 alkylhalogenid såsom alkyliodid eller et alkylsulfat.

En variant af fremgangsmåden til fremstilling af produkterne IV og med formlen IVa nh2

30 A

S N

>COo3lc (IVa) OR'a 35 - 10 -

DK 161082 B

hvor alc betegner en alkylgruppe med 1-4 carbonatomer, og R'a betegner en mættet alkylgruppe med 1-4 carbonatomer og svarende til et produkt med formlen IV, hvor R1 betegner en mættet alkylgruppe med 1-4 carbonatomer, består i at man 5 behandler et produkt med formlen VI

CH3-C-C-C02alc

fl II

0 N (VI)

10 0H

hvor alc har samme betydning som ovenfor, med et alkyle-ringsmiddel til opnåelse af et produkt med formlen VII

CH3-C-C-C02alc

II II

15. 0 N (VII) OR'a hvilket produkt man behandler med et bromeringsmiddel til opnåelse af et produkt med formlen VIII 20 BrCH2-C-C-C02alc

II II

0 ^ (VIII) OR1 a 25 på hvilket produkt man lader indvirke thiourinstof og derefter en base til opnåelse af et produkt med formlen IVa.

I en udførelsesform for denne fremgangsmåde er det alkyleringsmiddel, som man benytter til omdannelse af pro-30 dukterne med formlen VI til produkter med formlen VII, fortrinsvis et alkylhalogenid såsom alkylchloridet, -bro-midet eller -iodidet eller et alkylsulfat med 1-4 carbonatomer .

Det bromeringsmiddel, som man benytter til 35 omdannelse af produkterne med formlen VII til produkter med formlen VIII, er fortrinsvis bromider.

Den base, som man benytter efter indvirkning af - 11 -

DK 161082 B

produktet med formlen VIII på thiourinstoffet, er fortrinsvis et alkalimetalcarbonat eller -bicarbonat. Man kan imidlertid benytte fortyndet natrium- eller kaliumhydroxid eller kaliumacetat.

5 Det er konstateret, at syn- eller anti-konfigu- rationen af produkterne med formlen I er bundet til konfigurationen af produkterne med formlen IV, thi konfigurationen af de ud fra produkterne med formlen IV opnåede produkter kan opretholdes gennem forløbet af syntesen.

10 Det samme gælder naturligvis for de ud fra pro dukterne med formlerne IVa og IV" opnåede produkter, da disse sidste er omfattet af formlen IV.

Konfigurationen af produkterne med formlen IV afhænger af et vist antal parametre, som spiller ind under 15 fremstillingen af disse produkter.

Således har man konstateret, at når indvirkningen af thiourinstof på produkterne med formlen III udføres enten i et vandigt opløsningsmiddl såsom vandig acetone eller vandig ethanol eller ved stuetemperatur, idet man 20 lader en praktisk taget støkiometrisk mængde thiourinstof indvirke i et ret kort tidsrum af størrelesesordenen 1-3 timer, eller endelig når alle ovennævnte betingelser er kombineret, får man syn-isomeren.

En fremgangsmåde til fremstilling af produkterne 25 med formlen IV ovenfor i syn-form består i, at man omsætter thiourinstof og derefter en base med et produkt med formlen III' X-CH2-C-C-C02alc

II II

30 0 N (III' ) OR'b hvor X betegner et chlor- eller bromatom, og R'b betegner et hydrogenatom, en ved sur hydrolyse eller ved hydrogeno-35 lyse let eliminerbar gruppe eller en mættet eller umættet alkylgruppe med 1-4 carbonatomer, når X betegner et chlor- - 12 -

DK 161082 B

atom, eller R'b betegner et hydrogenatom eller en mættet alkylgruppe med 1-4 carbonatomer, når X betegner et bromatom, og at man vedrørende thiourinstoffets reaktion enten arbejder i et vandigt opløsningsmiddel eller arbej-5 der ved-stuetemperatur i nærværelse af en praktisk taget støkiometrisk mængde thiourinstof og under udførelse af reaktionen i et til nogle timer begrænset tidsrum eller arbejder under forening af alle de ovenfor angivne betingelser.

10 En fremgangsmåde til fremstilling af produkterne med formlen IV i syn-form, hvor man omsætter thiourinstof med et produkt med formlen III som defineret ovenfor, består i, at man enten arbejder i et vandigt opløsningsmiddel, eller arbejder ved stuetemperatur i nærværelse af 15 en praktisk taget støkiometrisk mængde thiourinstof og under udførelse af reaktionen i et til nogle timer begrænet tidsrum eller arbejder under forening af alle ovenfor angivne betingelser.

En fremgangsmåde til opnåelse af produkterne med 20 formlen IVa som defineret ovenfor, hvor man omsætter thiourinstof med et produkt med formlen VIII, består i, at man enten arbejder i et vandigt opløsningsmiddel eller arbejder ved stuetemperatur i nærværelse af en praktisk taget støkiometrisk mængde thiourinstof og under udførelse 25 af reaktionen i et til nogle timer begrænset tidsrum eller arbejder -under forening af alle ovenfor angivne betingelser.

Således har produkterne med formlen IV, som fås i eksemplerne 3, 8, 10, 12 og 15 nedenfor, syn-konfiguration.

30 Produkterne med den almene formel I', især pro dukterne med den almene formel I og især sådanne i syn-form har en meget god antibiotisk virkning dels på grampositive bakterier såsom stafylokokker og streptokokker, især penicillinresistente stafylokokker, dels på gramnegative bakte-35 rier, især coliforme bakterier, Klebsiella, Salmonella og Proteus.

Disse egenskaber gør de nævnte farmaceutiske pro- - 13 -

DK 161082 B

dukter acceptable til anvendelse som medikamenter i behandlingen af lidelser påført af modtagelige kim og navnlig i behandlingen af staphylococci i ansigtet eller på huden, pyodermitis, septiske eller suppurante sår, 5 anthrax, phlegmone, erysipel, primitiv eller efter influenza optrædende akut staphylococci, bronchopneumoni og pul-monære suppurationer.

Disse farmaceutisk acceptable produkter kan ligeledes anvendes som medikamenter ved behandlingen af coli-10 baciliose og dermed forbundne infektioner, ved infektioner med Proteus, Klebsiella og Salmonella og andre lidelser fremkaldt af gramnegative bakterier.

De farmaceutisk acceptable produkter med formlen I kan anvendes til fremstilling af farmaceutiske produkter, 15 der som aktiv bestanddel indeholder i det mindste et af de nævnte produkter og navnlig et sådant med syn-struktur ifølge eksemplerne.

Blandt disse produkter skal navnlig nævnes de farmaceutiske produkter, der som aktiv bestanddel indeholder i det mindste et af produkterne med den almene for-20 mel I, hvor R betegner et hydrogenatom, R' betegner et hydrogenatom eller en mættet eller umættet alkylgruppe med 1-4 carbonatomer, og A betegner et hydrogen- eller natriumatom.

Ligeledes skal nævnes de farmaceutiske produkter, 25 der som aktiv bestanddel indeholder: - 3-acetoxymethyl-7-(2-(2-amino-4-thiazolyl)-2-methoxyimi-noacetamido)-ceph-3-em-4-carboxylsyre, syn-isomer; dette produkter navnlig beskrevet i eksempel 4, 6, 20 eller 22, - eller natriumsaltet af 3-acetoxyméthyl-7-(2-(2-amino-4-30 thiazolyl) -2-methoxyiminoacetamido) -ceph-3-em-4-carboxylsyre, syn-isomer; dette produkt er navnlig beskrevet i eksempel 7, - eller det krystallinske natriumsalt af 3-acetoxymethyl-7-(2-(2-amino-4-thiazoly1)-2-methoxyiminoacetamido)-ceph-3-em 35 -4-carboxylsyre, syn-isomer, eller i det mindste et af følgende produkter: - 14 -

DK 161082 B

- 3-acetoxymethyl-7-(2-amino-4-thiazolyl)-2-ethoxyiminoa-cetamido)-ceph-3-em-4-carboxylsyre, syn-isomer, og dens salte med alkalimetaller, jordalkalimetaller, magnesium eller farmaceutisk acceptable aminerede organiske baser, 5 - 3-acetoxymethyl-7-(2-(2-amino-4-thiazolyl)-2-((2-prope- nyl)-oxyimino)-acetamido)-ceph-3-em-4-carboxylsyre, syniso-mer, og dens salte med alkalimetaller, jordalkalimetaller, magnesium eller aminerede organiske baser, som er farmaceutisk acceptable, 10 - 3-acetoxymethyl-7-(2-amino-4-thiazolyl)-2-((1-methyletho- xy)-imino)-acetamido)-ceph-3-em-4-carboxylsyre, syn-isomer, og dens salte med alkalimetaller, jordalkalimetaller, magnesium eller aminerede organiske baser, som er farmaceutisk acceptable.

15 Disse produkter kan indgives ad oral, rektal eller parenteral vej eller lokalt i topisk applikation på huden og slimhinderne.

De kan være faste eller flydende og foreligge i de i den humane medicin gængs benyttede farmaceutiske former 20 såsom f.eks. uoversukrede eller oversukrede tabletter, gelatinekapsler, granulater, stikpiller, injektionspræparater, pomade, creme eller gelé. De fremstilles efter de gængse metoder. Den eller de aktive bestanddele kan inkorporeres deri sammen med i disse farmaceutiske produkter 25 gængs benyttede tilsætningsstoffer såsom talkum, gummi ara-bicum, lactose, stivelse, magnesiumstearat, kakaosmør, vandige eller ikke-vandige bærestoffer, fedtstoffer af animalsk eller vegetabilsk oprindelse, paraffinderivater, gly-coler, forskellige fugte-, dispergerings- eller emulge-30 ringsmidler samt konserveringsmidler.

Den indgivne dosis varierer efter den behandlede lidelse, den pågældende patient, indgiftsmåden samt produktet. Den kan f.eks. ligge mellem 0,250 g og 4 g pr. dag ad oral vej hos mennesker med det i eksempel 4 eller 7 35 beskrevne produkt eller mellem 0,500 g og 1 g, 3 gange om dagen ad intramuskulær vej.

De produkter med formlen III, som er hidtil ukend- - 15 -

DK 161082 B

te, kan fremstilles ud fra gamma-chlor-alpha-oximinoacetyl-eddikesyreethylester beskrevet i J. of Medicinal Chemistry 1973, bd. 16, nr. 9, som angivet nedenfor.

Man får de produkter, hvor R' betegner en ved sur 5 hydrolyse eller ved hydrogenolyse let eliminerbar gruppe, ved de klassiske reaktioner, som gør brug af funktionelle derivater af disse grupper.

Man får produkterne, hvor R' betegner en mættet eller umættet alkylgruppe med 1-4 carbonatomer, ved ind-10 virkning på gamma-chlor-alpha-oximinoacetyleddikesyreethyl-ester af de tilsvarende alkylhalogenider eller -sulfater.

Produkterne med formlen III', hvor X betegner et bromatom, og R'b betegner et hydrogenatom, kan fås ved behandling med et bromeringsmiddel af produkter med formlen 15 vi CH3-C-C-C02alc

11 II

O N (VI)

20 0H

under samme betingelser som beskrevet for behandlingen af produkterne med formlen VII.

Foruden de i eksemplerne beskrevne produkter udgør følgende produkter yderligere stoffer, som kan fås gennem 25 opfindelsen: - 3-acetoxymethyl-7-(2-(2-amino-4-thiazolyl)-2-propyloxyimi-noacetamido)-ceph-3-em-4-carboxylsyre, syn-isomer, og dens salte med alkalimetaller, jordalkalimetaller, magnesium eller aminerede organiske baser, 30 - 3-acetoxymethyl-7-(2-(2-amino-4-thiazolyl)-2-butyloxyimi- noacetamido)-ceph-3-em-4-carboxylsyre, syn-isomer, og dens salte med alkalimetaller, jordalkalimetaller, magnesium eller aminerede organiske bser, - 3-acetoxymethyl-7-(2-(2-amino-4-thiazolyl)-2-(2-methylpro-35 pyloxyimino)-aeetamido)-ceph-3-em-4-carboxylsyre, syn-isomer, og dens salte med alkalimetaller, jordalkalimetaller, magnesium eller aminerede organiske baser,

. 16_ DK 161082 B

- 3-acetoxymethyl-7-(2-(2-amino-4-thiazolyl)-2-(l,l-dimethylethoxy-imino)-acetamido)-ceph-3-em-4-carboxylsyre, syn-isomer, og dens salte med alkalimetaller, jordalkalimetaller, magnesium eller aminerede organiske baser, 5-3-ace t oxymethy1-7-(2-(2-amino-4 -t hi az o ly 1) -2 - (2-but enyloxyimino)--acetamido)-ceph-3-em-4-carboxylsyre, syn-isomer, og dens salte med alkalimetaller, jordalkalimetaller, magnesium eller aminerede organiske baser, - 3-acetoxymethyl-7-(2-(2-amino-4-thiazolyl)-2-(3-butenyloxyimino)- LO -acetamido)-ceph-3-em-4-carboxylsyre, syn-isomer, og dens salte med alkalimetaller, jordalkalimetaller, magnesium eller aminerede organiske baser, - 3-acetoxymethyl-7-(2-(2-amino-4-thiaz oly1)-2-(2-butynyloxyimino)--acetamido)-ceph-3-em-4-carboxylsyre, syn-isomer, og dens salte L5 med alkalimetaller, jordalkalimetaller, magnesium eller aminerede organiske baser, - 3-acetoxymethy1-7-(2-(2-amino-4-thiazoly1)-2-(3-butynyloxyimino)--acetamido)-ceph -3-em-4-carboxylsyre, syn-isomer, og dens salte med alkalimetaller, jordalkalimetaller,magnesium eller aminerede 20 organiske baser, - 3-acetoxymethyl-7-(2-(2-amino-4-thiazolyl)-2-(vinyloxyimino)-acet-amido)-ceph-3-em-4-carboxylsyre, syn-isomer, og dens salte med alkalimetaller, jordalkalimetaller, magnesium eller aminerede organiske baser, 25 - 3-acetoxymethy1-7-(2-(2-amino-4-thiazolyl)-2-(l-propenyloxyimino)--acetamido)-ceph-3-em-4-carboxylsyre, syn-isomer, og dens salte med alkalimetaller, jordalkalimetaller, magnesium eller aminerede organiske baser, - 3-acetoxymethyl-7-(2-(2-amino-4-thiazolyl)-2-(1-propynyloxyimino)- 10 -acetamido)-ceph-3-em-4-carboxylsyre, syn-isomer, og dens salte med alkalimetaller, jordalkalimetaller, magnesium eller aminerede organiske baser, - 3-acetoxymethyl-7-(2-(2-amino-4-thiazolyl)-2-(l-butenyloxyimino)--acetamido)-ceph-3-em-4-carboxylsyre, syn-isomer, og dens salte 35 med alkalimetaller, jordalkalimetaller, magnesium eller aminerede organiske baser, - 3-acetoxymethyl-7-(2-(2-amino-4-thiazolyl)-2-(l-ethynyloxyimino)--acetamido)-ceph-3-em-4-carboxylsyre, syn-isomer, og dens salte med alkalimetaller, jordalkalimetaller, magnesium eller aminerede organiske baser,

-17- DK 161082 B

- 3-acetoxymethyl-7-(2-(2-amino-4-thiazolyl)-2-(2-propynyloxyimino)--acetamido)-ceph-3-em~4-carboxylsyre, syn-isomer, og dens salte med alkalimetaller, jordalkalimetaller, magnesium eller aminerede organiske baser, r 5 - 3-acetoxymethy1-7-(2-(2-amino-4-thiazolyl)-2-(1-butynyloxyimino)--acetamido)-ceph-3-em-4-carboxylsyre, syn-isomer, og dens salte med alkalimetaller, jordalkalimetaller, magnesium eller aminerede organiske baser,

Nedenstående eksempler illustrerer fremgangsmåden ifølge 10 opfindelsen.

15 20 25 30 35

DK 161082 B

- 18 - • "

Eksempel 1« 3-aoetoxymethy 1-7-( 2-(2 -tritylamino-4-thiazolyl) -2-tritylhydroxy-iminoaoetamido) -ceph-3-em-4-oarboxylsyre.

Trin A; 2-(2-amino-4-thiazolyl·)-2-hydroxyiminoeddikesyreethylester.

5 Man indfører 2 g γ-chlor-a-oximinoacetyleddikesyreethylester i 5 ml ethanol og 0,76 g thiourinstof, og man omrører ved stuetemperatur i alt 16 timer. Hydrochloridet krystalliserer ud, og man fortynder med 5 ml ether, suger fra, skyller med en blanding af ethanol og ether i forholdet lsl og derefter med ether og får 1,55 g 10 hydrochlorid.

Man opløser de 1,55 g hydrochlorid ved 40-50GC i 8 ml vand og neutraliserer derefter indtil en pH-værdi på 5-6 ved tilsætning af natriumacetat. Den frie amin krystalliserer ud. Man isafkøler og suger derefter fra, vasker med vand, tørrer og får 1,22 g anti-iso-*5 mer med smp. 154°C.

Man forener moderludene og vaskevæskerne fra flere forsøg, inddamper, optager i vand, vasker med ether, tilsætter natriumbicar-bonat, suger fra, vasker med vand og får 1,9 g produkt med 2.pletter ved tyndtlagschromatografi og renser ved chromatografi på silicagel 20 under eluering med ether. Man forener de rene fraktioner af syn-iso-meren, inddamper, udriver med ether, suger fra, tørrer og får 50 mg af denne isomer.

Trin B: 2-(2-trit.vlamino-4-thiazolyl)-2-trit.vlhydroxyiminoeddikesyre-ethylester.

Til en opløsning af 5,4 g produkt fra trin A i 54 ml chloroform og 7»5 ml triethylamin sætter man ved 10°C en opløsning af 15 g tritylchlorid i 30 ml chloroform. Efter 1 times henstand vasker man med 40 ml vand og 20 ml vand indeholdende 4 ml 1 M saltsyre, hvorpå man dekanterer, tørrer og inddamper til tørhed.

30

Resten optages i 10 ml ether, og man tilsætter 50 ml methanol, rører om, suger fra, vasker med methanol og får, i to udbytter, 14,2 g af det forventede produkt.

Trin C: 2-(2-trit.vlamino-4-thiazolyl)-2-tritylhydroxyiminoeddikes.vre 35 10,5 g ester fra trin B suspenderes ved nær tilbagesvalings temperatur i 55 ml dioxpn. Man tilsætter langsomt 17 ml 2 R natriumhydroxidopløsning. Man fortsætter en svag tilbagesvaling, afkøler og frasuger saltet. Saltet optages i 60 ml methylenchlorid, 20 ml vand og 2 ml eddikesyre. Man frasuger syren, vasker med vand og får et første udbytte på 7 g syre.

-19- DK 1610 8 2 B

Man afdamper dioxanet fra moderluden og tilsætter 20 ml methylenchlorid, 10 ml vand og 1 ml eddikesyre. Man isolerer et andet udbytte på 1,5 g af samme produkt, altså ialt 8,5 g.

Analyse. C^^H^^0^3J^S,0,5 HgO 5 beregnet: C# 75,85 H# 5,03 6,17 S# 4,7 fundet: 75,8 4,9 5,9 4,6 grin D: 5-acetoxymethyl-7-( 2-(2-trit.ylamino-4 -tbiazolyl )-2-trityl- h.vdroxyiminoacetamido) -ceph-3-em-4 -carboxylsyre.

Man omrører en suspension af 8,5 g syre fra trin C i 50 ml methanol og tilsætter 5 ml N-methylmorpholin. Man omrører i 10 minutter ved 30°C, tilsætter 30 ml methylenchlorid, inddamper, tilsætter 100 ml ether, findeler, suger fra, vasker med ether, tørrer og får et første udbytte på 7,2 g salt. Man inddamper til tørhed, optager i ether og får et andet udbytte af samme produkt.

Man suspenderer under omrøring under indifferent gas 4,24 g af morpholinsaltet ovenfor i 60 ml methylenchlorid.

Man omrører i 5 minutter, afkøler til -5°C og tilsætter 6 ml 1 M opløsning af isobutylchlorformiat i methylenchlorid. Man lader henstå 15 minutter under omrøring ved -5°C, afkøler til -20°C og 20 tilsætter en opløsning af 1,36 g 7-aminocephalosporansyre i 25 ml methylenchlorid og 1,4 ml triethylamin. Man lader henstå 1 time ved stuetemperatur, vasker med 50 ml vand indeholdende 10 ml 1 S saltsyre, suger fra, dekanterer, vasker med vand og inddamper til tørhed. Man udriver i ether, suger fra, vasker med ether og får 4,5 g råpro-25 dukt.

Man omrører råproduktet 1 time ved 10°C i 10 ml methylenchlorid, Det uopløselige materiale suges fra og skylles med methylenchlorid. Man tilsætter 50 ml ether til filtratet, omrører, frasuger udfældningen, vasker med ether og får 2,29 g af det forventede pro-30 dukt.

Man får yderligere et andet udbytte på 0,856 g, dvs. 3,146 g af det forventede produkt.

35 3-aoetoxymethy 1-7-(2-(2-amino-4-thiazolyl)-2-hydrox.viminoacetamido)-~ce ph-3-em-4-carboxylsyre.

Man suspenderer 2,29 g af det i eksempel 1 opnåede produkt i 18,4 ml 50#'s vandig myresyre. Man opvarmer under kraftig omrøring i 15 minutter til 55°C.

Man afkøler, tilsætter 10 ml vand, suger fra, vasker med

-20- DK 161082 B

vand, inddamper under vakuum, tilsætter acetone, suger fra, tilsætter 30 ml ether, omrører, suger fra, vasker med ether og får 0,665 g produkt# Der fås yderligere 0,123 g produkt, som krystalliserer ud, altså 0,788 g« 5 Man opløser 0,735 g produkt i 7,5 ml ethanol og 7,5 ml ace tone. Man tilsætter 70 mg aktivkul, suger fra, uddriver opløsningsmidlerne, findeler i ethanol, vasker med ethanol og får 0,450 g i et første udbytte og derefter 0,105 g i et andet udbytte.

I. R. spektrum: 10 )c=0 1774 cm"1 (β-lactam) 1740 cm”1 1676 cm”1 C=C KH2 1630 cm”1 UH 1520 cm”1 15

Eksempel 3.

5-acetox-vmethyl-7-(2-(2-tritylamino-4-thiazolyl)-2-methoxyiminoacet-amido )-ceph-3-em-4-carboxylsyre.

Trin A: 2-(2-amino-4-thiazolyl)-2-methoxyiminoeddikesyreethylester. 20 Man indfører 1 g γ-chlor-a-methoxyiminoaeetyleddikesyre- ethylester i 3 ml absolut ethanol og tilsætter 0,42 g pulveriseret thiourinstof, Man omrører ved stuetemperatur i- ca. 2 timer. Man fortynder det opnåede krystallinske hydrochlorid med 60 ml ether, omrører, frasuger, vasker, tørrer og får 685 mg hydrochlorid. Man oplø-25 ser i 4 ml vand ved 50°C, tilsætter kaliumacetat indtil en pH-værdi på 6, og den frigjorte amin krystalliserer ud. Man afkøler, suger fra, vasker med vand, tørrer og får 270 mg af det forventede produkt. Smp. 161°0.

Det opnåede produkt har syn-konfiguration, H.M.B.spektrum 30 (GD01^, 60 MHz) p.p.m.i 4 (H-OCH^), 6,7 (proton i thiazolring).

Trin B: 2-(2-trit.vlamino-4-thiazolyl)-2-methox.viminoeddikesyre-ethylester.

4,6 g af det i forrige trin fremstillede produkt opløses ved 30°0 i 92 ml methylenchlorid. Man afkøler til -10°C, tilsætter 2,9 ml triethylamin, afkøler yderligere til -35°0, tilsætter i lø- * bet af 15 minutter 6,1 g tritylehlorid, lader genantage stuetemperatur, alt i løbet af 2 timer 30 minutter. Man vasker med vand og derefter med 0,5 Ή saltsyre og med natriumacetat i vand. Man tørrer, inddamper, optager i ether, inddamper atter, opløser i methanol, tilsætter vand og ether, lader krystallisere, suger fra, vasker med

-21- DK 1610 8 2 B

ether og får 6,15 g af det forventede produkt. Smp. 120°C.

Det opnåede produkt har syn-konfiguration.

Trin G; 2-(2-tritvlamino-4-thiazolyl)-2-methoxyiminoed dikesyre.

7,01 g ester fra trin B opløses i 35 ml dioxan. Man opvarmer 5 til 110°C på oliebad og tilsætter i løbet af 5 minutter 9 ml 2 IT natriumhydroxidopløsning og lader henstå 30 minutter under tilbagesvaling og under omrøring. Natriumsaltet krystalliserer ud. Man afkøler, suger fra, vasker med dioxan og derefter med ether og får et første udbytte på 5,767 g salt. Man inddamper moderluden og får et 10 andet udbytte på 1,017 g, altså i alt 6,784 g salt.

Man indfører 3,06 g salt i 65 ml methylenchlorid og 6,5 ml 2 H saltsyre, vasker med vand, tørrer og inddamper til tørhed, hvorved man kvantitativt får den frie syre.

Det opnåede produkt har syn-konfiguration, N.M.E.spektrum 15 (DISO, 60 MHz) p.p.m.: 3,68 (N-OCHj), 6,6 (proton i thiazolring).

Trin D: 3-acetoxyme thyl-7-(2-(2-trit.vlamino-4-thiazolyl)-2-meth-oxviminoace tamid o) -ceph-3 -em-4 -carboxylsyre.

Den tørre syre fra trin C opløses i 30 ml tørt methylen-2Q chlorid. Man tilsætter 0,78 g dicyclohexylcarbodiimid og omrører 1 time ved stuetemperatur. Man frasuger det dannede dicyclohexyl-urinstof, afkøler til -10°C, tilsætter en opløsning af 1,01 g 7-ami-nooephalosporansyre i 13 ml methylenchlorid og 0,9 ml triethylamin. Man lader genantage stuetemperatur, tilsætter 1 ml eddikesyre, suger __ fra, vasker med vand tilsat saltsyre og med vand, tørrer, inddamper til tørhed, optager i 10 ml dioxan og tilsætter 1 ml vand og 3 ml mættet natriumbiearbonatopløsning. Man omrører, suger fra, vasker og inddamper til tørhed. Man optager i methylenchlorid, vasker med 10 ml vand og 5 ml 1 N saltsyre, dekanterer, vasker med vand, tør-3Q rer, findeler i ether og får 1,747 g råprodukt, som man renser ved opløsning i ethylacetat efterfulgt af fældning i ether. Der fås 1,255 g rent produkt.

Det opnåede produkt har syn-konfiguration. γ-ehlor-oc-methoxyiminoacetyleddikesyreethylester, der be- nyttes som udgangsprodukt i eksempel 3, fremstilles som følger: 35

Man indfører 22,5 g γ-chlor-a-oximinoacetyleddikesyreethyl-ester i 100 ml methylenchlorid.

Man anbringer på isbad og tilsætter langsomt under omrøring en frisk opløsning af diazomethan (21,6 g pr. liter) eller 275 ml.

Man lader henstå 5 minutter i kontakt' og ødelægger overskuddet af

-22- DK 161082 B

diazomethan med lidt aluminiumoxid. Man inddamper og renser ved eluering på silicagel med methylenohlorid. Der fås 11,93 g af det forventede produkt.

2-(2-amino-4-thiazolyl)-2-methoxyiminoeddikesyreethylester, 5 der "benyttes i eksempel 3, fremstilles på følgende måde:

Trin a: 2-acetyl-2-methoxyiminoeddikesyreethylester.

Man indfører 180 g 2-acetyl-2-hydroxyiminoeddikesyreethyl-ester i rå tilstand i 900 ml ren acetone. Ved 10°C og under nitrogenatmosfære tilsætter man 234 g kaliumcarbonat. Man indfører derpå 10 103 ml dimethylsulfat. Man omrører i 3 timer ved stuetemperatur, tilsætter is, hælder i 4 liter vand, ekstraherer med methylenohlorid, vasker med vand, tørrer og afdestillerer opløsningsmidlerne. Der fås 185 g af det forventede produkt.

15 Trin β: 4-brom-2-methoxyiminoaoetyleadikesyreethylester.

Man anbringer 197 g af det i trin α opnåede produkt i 1 liter methylenohlorid og tilsætter 200 mg p-toluensulfonsyre. Ved 20°C indfører man 1/10 af en opløsning af 191 g rent brom i 200 ml methy-lenchlorid. Hår reaktionen er startet, indfører man resten af brom-2Q opløsningen i løbet af 1 time ved ca. 20°0. Man lader derefter temperaturen stige til 25°0 til afslutning af reaktionen. Man vasker med iskoldt vand, genekstraherer med methylenohlorid, tørrer og afdestillerer opløsningsmidlet. Der fås 268 g af det forventede produkt.

25 Trin y: 2-(2-amino-4-thiazolyl)-2-methoxyiminoeddikes.vreethylester.

Man indfører 80 g thiourinstof i 270 ml ethanol og 540 ml vand. Man indfører under nitrogenatmosfære i løbet af 30 minutter 268 g af det i trin β opnåede produkt i 270 ml ethanol. Man omrører 1 time ved ca. 20°0. Man afkøler til ca. 15°C og indfører i småpor-30 tioner kaliumbicarbonat indtil en pH-værdi på 5. Man suger fra, vasker med vand, tørrer og får 133,8 g af det forventede produkt.

Det opnåede produkt er identisk med det i trin A opnåede.

Eksempel 4.

35 5-acetoxymethyl-7-(2-(2-amino-4-thiazolyl)-2-methoxyiminoacetamido)--ceph-3-em-4-carboxylsyre.

0,975 g af det i eksempel 3 opnåede produkt omrøres i 10 minutter ved 55°C i 4 ml 50$’s vandig myresyre. Man tilsætter 4 ml vand, suger fra, inddamper til tørhed under vakuum og findeler i 2 ml ethanol, suger fra, vasker med ethanol og derefter med ether

-23- DK 161082 B

og får 0,428 g rent produkt.

Analyse· ^16^17^7^5^2 beregnet: C# 42,19 3,76 15,37 14,08 fundet: 42,3 4,1 15,2 13,8 5 Det opnåede produkt har syn-konfiguration, N.M.E. spektrum (DMSO, 60 MHz) p.p.m.: 2,03 (-C0CH5), dublet 9,58, J = 8 Hz (COM) 6,76 (proton i thiazolring).

Eksempel 5.

10 Piethvlaminsaltet af 3-acetoxymethyl-7-(2-(2-tritylamino-4-thia-zolyl)-2-methoxyimino)-acetamido)-ceph-3-em-4-carboxylsyre.

Den rå 3-acetoxymethyl-7-(2-(2-tritylamino-4-thiazolyl)-2--(methoxyimino)--acetamid o )-ceph-3-em-4-carboxylsyre fremstillet som angivet i eksempel 3 ud fra kondensationen af 2-(2-tritylamino-4-15 -thiazolyl)-2-methoxyiminoeddikesyre i form af anhydrid fremstillet ved hjælp af dicyclohexylcarbodiimid og 40,8 g 7-aminoeephalosporan-syre opløses i 350 ml dioxan. Man tilsætter langsomt under omrøring 350 ml ether og dernæst 33 ml diethylamin. Man omrører i 20 minutter og frasuger diethylaminsaltet af 2-(2-tritylamino-4-thiazolyl)-20 -2-methoxyiminoeddikesyre, som er krystalliseret ud. Man vasker dette salt 2 gange med 30 ml blanding af dioxan og ether ovenfor og får 62,6 g. Man inddamper filtratet til sirupagtig konsistens og tilsætter ca. 2,5 liter ether. Man rører om og suger fra. Der fås 110,3 g af .det. forventede diethylaminsalt. Det opnåede produkt har 25 syn-konfiguration.

Eksempel 6.

3-acetoxymethyl-7-(2-(2-amino-4-thiazolyl)-.2-(methoxyimino)-acet-amid o)-ceph-3-em-4-carboxylsyre.

30 Man sætter 36 g af produktet fra eksempel 5 til 180 ml 50$·s vandig myresyre, som holdes ved 50°C. Man omrører i 20 minutter ved 50°C og frasuger det dannede triphenylcarbinol. Man tilsætter 180 ml ethanol, inddamper til tørhed under formindsket tryk og optager resten i en blanding af 100 ml vand og 20 ml ethanol og inddamper' 35 atter. Man optager i 100 ml vand, omrører i 15 minutter ved 15°C, suger fra, vasker med vand og derefter med ether og får 15,6 g af det forventede produkt.

Produktet er identisk med det i eksempel 4 opnåede.

- 24 - DK 161082 B

Eksempel 7»

Natriums alt et af 3-aoetox.ymethyl-7-( 2-(2-amino-4 -thiazolyi )-2-( meth-oxyimino) -acetamid o )-ceph-3-em-4 -carboxylsyre.

45,55 g ren 3-acetoxymethyl-7-(2-(2-amino-4-thiazolyl)-2-5 -(methoxyimino)-acetami&o)-ceph-3-em-4-carboxylsyre opnået ifølge fremgangsmåderne fra eksempel 4 eller 6 tilsættes 100 ml destilleret vand. Man tilsætter gradvis 8 g natriumbicarbonat under tilsætning, af ca. 20 ml ethanol. -

Man tilsætter atter 80 ml ethanol, 4,5 g aktivkul, omrører 10 5 minutter, filtrerer, skyller med ethanol og inddamper til tørhed under vakuum. Man optager i 100 ml ethanol, inddamper til tørhed og opløser resten i 100 ml methanol. Man tilsætter 2 liter acetone, omrører voldsomt, suger fra og skyller med acetone og derefter med ether. Efter tørring under vakuum fås 43,7 g af et hvidt produkt, 15 som genhydratiseres i luften for at nå en slutvægt på 45,2 g, = +55° +2° (0,8¾vand).

Analyses beregnet: 0# 40,24 H# 3,38 N# 14,67 S# 13,43 Na# 4,81 fundet: 40,3 3,8 14,4 13,3 4,84 20 Det opnåede produkt har syn-konfiguration, N.M.R.spektrum (60 MHz, D20) p.p.m.: 2,01 (COCH^), dublet ved 9,53, J = 8 Hz (NHCO) 6,75 (thiazolproton).

Eksempel 8.

25 3-ace toxyme th.vl-7-(2-(2-tritylamino-4-thiazolyi)-2-( (2-propenyl)--oxyimino) -acetamid o) -ceph-3-em-4-carboxylsyre.

Trin_A: 2-(2-amino-4-thiazoly1)-2-((2-propeny1)-oxyimino)-eddike-syreethylester.

a) 9,7 g 2-hydroxyimino-4-chloracetyleddikesyreethylester, 30 ml 30 acetone og 9,15 ml 3-iodpropen afkøles i is, og man tilsætter 27,5 ml 2 N natriumhydroxidopløsning og lader henstå 1 time 30 minutter ved stuetemperatur.

b) Til reaktionsmilieuet sætter man 3,8 g thiourinstof og opvarmer til 60°C i 15 minutter efterfulgt af 45 minutter ved stuetempe- 35 ratur, hvorefter man uddriver acetonen og tilsætter methylenchlorid, vand og kaliumcarbonat og omrører, dekanterer, genekstraherer med methylenchlorid, tørrer, inddamper til tørhed og får 9,75 g rest, som man chromatograferer på silicagel under eluering med ether, hvorefter man isolerer 2,7 g produkt, som man optager i isopropyl-ether. Man suger krystallerne fra, skyller og tørrer dem. Der fås

-25- DK 161082 B

783 mg af det forventede produkt. Smp. 100°0. Det opnåede produkt har syn-konfiguration.

grin B: 2-(2-tritylamino-4-thiazolyl)-2-( (2-propen.yl)-oxyimino)--eddikesyreeth.vlester.

5 Man blander 511 mg af det i trin A fremstillede produkt, 0,92 ml dimethylformamid, 1,8 ml methylenchlorid og 0,29 ml triethyl-amin. Man afkøler til -15°C og tilsætter 615 mg tritylchlorid. Man lader henstå ved stuetemperatur i 1 time 30 minutter, tilsætter 2 ml 1 N saltsyre og derefter 5 ml vand, dekanterer, tørrer, inddamper til tørhed og får 1,28 g råprodukt.

Det opnåede produkt har syn-konfiguration.

grin C: 2-(2-tritylamino-4-thiazol.vl )-2-( (2-propenyl)-oxyimino)--eddikes.vre.

15 Man opvarmer til 120°C 1,28 g produkt fra trin B, 6,2 ml dioxan og 3 ml 2 I natriumhydroxidopløsning. Man opvarmer til tilbagesvaling i 1 time. Natriumsaltet krystalliserer, og man suger fra, skyller med en blanding af ether og dioxan, tørrer og isolerer 8Ο5 mg produkt.

20 Man optager i 10 ml methylenchlorid og 3 ml 1 N saltsyre, omrører indtil opløsning, dekanterer, tørrer, inddamper til tørhed, optager i ether, suger fra og får 715 mg af det forventede produkt. Smp. 170°C.

Det opnåede produkt har syn-konfiguration.

25 gyla D: 5-acetoxymethyl-7-(2-(2-tritylamino-4-thiazolyl)-2-((2-propenyl )-oxyimin o )-aoetamid o)-ceph-3-em-4-carboxylsyre.

Man blander 470 mg produkt fra trin C, 5 ml methylenchlorid og 130 mg dicyclohexylcarbodiimid, skyller med lidt methylenchlorid og lader henstå under omrøring 1 time ved stuetemperatur, frasuger 30 det dannede dicyclohexylurinstof, afkøler filtratet og tilsætter under indifferent gas 136 mg 7-aminocephalosporansyre opløst i 2,4 ml methylenchlorid og 0,14 ml triethylamin. Man lader henstå 1 time 30 minutter ved stuetemperatur, tilsætter 2 ml 1 N saltsyre og vand, omrører, dekanterer, vasker med vand, tørrer, inddamper og får 610 mg 35 råprodukt.

Det opnåede produkt har syn-konfiguration.

-26- DK 161082 B

Eksempel 9« 3-acetoxymethyl-7-(2-(2-amino-4-thia2olyl)-2-( (2-propenyl)-oxyimino)-acetamido)-oeph-3-em-4-carboxylsyre.

Man opvarmer de 610 mg produkt fra eksempel 8 og 3 ml 50$'s 5 vandig myresyre til 60°C i 15 minutter, tilsætter 4 ml vand, omrører, frasuger triphenylcarbinolet, skyller med vand, inddamper til tørhed under vakuum, optager i vand, findeler, suger fra skyller og får 120 mg af den ønskede syre. Smp. ca. 160°C* U.V.spektrum (ethanol)s 10 max 236 nm E^ = 375 ε = 18.000 vendepunkt 252 nm E^ = 316 vendepunkt 295 nm E^ = 138 ε = 6.600 IT. ?. spektrum (ethanol og HC1, U/lO): 15 max 263 nm = 380 ε = 18.300 vendepunkt 280 nm E^ = 317 H.M.ll.spektrum (DMS0, 90 MHz) p.p.m,: 2,02 (OAc), 6,68 (thiazolpro-ton).

Produktet har altså syn-konfiguration.

Eksempel 10.

5-acetoxvmethyl-7-(2-(2-tritvlamino-4-thiazolvl)-2-(ethoxyimino)--acetamid o)-ceph-3-em-4-carboxylsyre.

Trin A: 2-(2-amino-4-thiazolvl)-2-ethoxyiminoeddikesyreethylester.

a) Man anbringer 19,4 g γ-chlor-a-oxyiminoacetoeddikesyreethyl-ester i 60 ml acetone og 14,3 ml diethylsulfat. Man afkøler i 10 minutter på isbad og tilsætter i løbet af 30 minutter 55 ml 2 N natriumhydroxidopløsning og omrører i 40 minutter.

b) Til-reaktionsmilieuet sætter man 7,6 g thiourinstof, opvar- 30 o mer til 55 C i 20 minutter, uddriver acetonen, optager i ethylacetat, tilsætter 6,9 g kaliumcarbonat, rører om, dekanterer, genekstraherer med ethylacetat, tørrer og inddamper til tørhed. Man isolerer 17,4 g rest, som man chromatograferer på silicagel under eluering med ether.

Man samler det forventede produkt, optager i isopropylether, suger 3 5 fra, skyller, tørrer og får 2,8 g af det forventede produkt. Smp. 129°0, Det opnåede produkt har syn-konfiguration.

Trin B: 2-(2-tritylamino-4-thiazolyl)-2-ethoxyiminoeddikesyreethyl-ester.

3,16 g produkt fra trin A, 6 ml tørt dimethylformamid, 12 ml

- 27 - DK 161082 B

methylenchlorid og 1,89 ml triethylamin anbringes under indifferent atmosfære. Man afkøler til -15°C og tilsætter langsomt 3,98 g tri-tylohlorid. Man lader henstå 30 minutter, temperaturen stiger til 10°C, man holder derefter 3 timer 30 minutter ved stuetemperatur.

5 Man tilsætter 13 ml 1 N saltsyre, rører om, dekanterer, vasker med 1 H saltsyre og derefter med vand. Der ekstraheres med methylenchlorid, tørres, inddampes til tørhed og fås 7,89 g rå rest.

Det opnåede produkt har syn-konfiguration.

Trin C: 2-(2-tritylamino-4-thiazolyl)-2-ethoxyiminoeddikesyre.

10 Man opvarmer til 110°C 87,9 g produkt fra trin B, 40 ml dioxan og 19,5 ml 2 N natriumhydroxidopløsning i 1 time. Man suger fra, skyller med en blanding af ether og dioxan og derefter med ether alene og tørrer. Der fås 6,25 g natriumsalt, som man optager i 60 ml methylenchlorid og 20 ml 1 I saltsyre, man omrører de to fa-15 ser, tilsætter 20 ml methanol, dekanterer, vasker igen med vand, genekstraherer med en blanding af methylenchlorid og methanol, tørrer, inddamper og isolerer 5,85 g ren 2-(2-tritylamino-4-thiazolyl)--2-ethoxyiminoeddikesyre.

Det opnåede produkt har syn-konfiguration.

20 8 5-acetoxymethyl-7-( 2-( 2-tri tylamino-4-thiazolyl)-2-( ethoxy- imino)-acetamid o)-ceph-3-em-4-carboxylsyre.

Man anbringer 3,43 g 2-(2-tritylamino-4-thiazolyl)-2-ethoxy-iminoeddikesyre fra trin C i 34 ml methylenchlorid, afkøler suspen-25 sionen og tilsætter 970 mg dicyclohexylcarbodiimid, skyller med methylenchlorid og omrører 1 time ved stuetemperatur. Man frasuger d icyclohexylurinstoffet.

Man afkøler filtratet til -20°C og tilsætter på én gang en opløsning ved -20°C af 1,02 g 7-aminocephalosporansyre i 18 ml me-30 thylenchlorid og 1,06 ml triethylamin. Man lader opvarme i 1 time 30 minutter, tilsætter 1,8 ml eddikesyre, tilsætter 9 ml 1 N saltsyre, rører om, dekanterer, vasker med vand, ekstraherer med methylenchlorid, tørrer, inddamper og får 4,56 g af det forventede produkt.

35 Det opnåede produkt har syn-konfiguration.

Eksempel 11.

5-acetoxymethyl-7-(2-(2-amino-4-thiazolyl)-2-(ethoxyimino)-acet-amido)-ceph-3-em-4-carboxylsyre.

Man anbringer de 4,56 g produkt fra eksempel 10 i 23 ml

“ 28 ~ DK 161082 B

50$'s vandig myresyre, opvarmer 15 minutter til 55°C, fortynder med vand (30 ml), frasuger triphenylcarbinolet, Man inddamper filtratet til tørhed, optager i vand, omrører, suger fra, skyller, tørrer og får 116 mg urent produkt. Der fås et andet udbytte på 674 mg 5 produkt, som krystalliserer ved inddampning af filtratet, altså i alt 790 mg.

Man foretager følgende rensning:

Man udriver 1,063 g råprodukt i 5 ml vand, opvarmer til 70°0 1 5 minutter, afkøler, omrører 30 minutter, suger fra, skyller, 10 tørrer og isolerer 815 mg renset produkt. Disse 815 mg optages i 2 ml vand og 3 ml acetone, man opvarmer svagt, frasuger uopløseligt materiale, tilsætter 3 ml vand, opvarmer til 60°C og uddriver acetonen ved gennembobling af nitrogen, frasuger de dannede korn, skyller med vand og derefter med ether og isolerer 438 mg af det forven- 15 tede produkt.

Analyse: C^yH^gOyli^Sg beregnet: 43,49 W° 4,08 W° 14,92 S# 13,66 fundet: 44,5 4,4 14,8 13,3

Produktet har syn-konfiguration, N.M.R. spektrum (60 MHz, 20 DMS0) p.p.m,: 2,05 (OAc), 6,75 (proton i thiazolringen).

Eksempel 12.

3-aoetoxymethyl-7-(2-(2-tritylamino-4-thiazolyl)-2-(1-methylethoxy-imino)-acetamido)-ceph-3-em-4-carboxylsyre.

25 Trin A: 2-acetyl-2-(l-methylethoxyimino)-eddikesyreethylester.

Man anbringer 39,8 g 2-acetyl-2-hydroxyiminoeddikesyreethyl-ester i 200 ml ren acetone. Man afkøler på isbad og tilsætter 52 g kaliumearbonat og derefter i løbet af 30 minutter 25 ml 2-iodpropan. Man omrører.derpå 2 timer, tilsætter 800 ml vand og 500 ml methylen-30 chlorid, omrører, dekanterer, genekstraherer med methylenchlorid, tørrer, suger fra, inddamper og isolerer 41,5 g af det forventede produkt.

Trin B: 4-brom-2-(l-methylethoxyimino)-aoetyleddikesyreeth.vlester.

35 Man anbringer de 41,5 g produkt fra forrige trin i 190 ml methylenchlorid med spor af p-toluensulfonsyre. Man omrører og indfører i løbet af 1 time ved stuetemperatur en opløsning af 11,9 ml brom i 50 ml methylenchlorid. Man omrører, tilsætter iskoldt vand, dekanterer, genekstraherer med ethylenchlorid, vasker igen med iskoldt vand, tørrer, inddamper og isolerer 55 g af det forventede derivat.

-29- DK 161082 B

Trin C: 2- (2 -amino -4 -tfa iaz oly1)-2-( 1-meth.vle thox.vimino)-eddike syre - ethylester.

Man anbringer 14»9 g thiourinstof i 55 ml ethanol og 105 ml vand og tilsætter i løbet af 40 minutter en opløsning af 55 g pro-5 dukt fremstillet i trin B i 55 ml ethanol. Man omrører 2 timer 30 minutter ved stuetemperatur, tilsætter 220 ml lO^’s vandig natriumbi carbonatopløsning, rører om, suger fra, skyller, tørrer og isolerer 42,15 g råprodukt, som man chromatograferer på silicagel under eluering med ether. Man samler de fraktioner, som er rige på det 10 forventede produkt, inddamper, optager krystallerne i isopropylether, suger fra, skyller og får 10,75 g af det forventede produkt.

Det opnåede produkt har syn-konfiguration.

Trin D: 2- (2-trit.vlamino-4-thiazolyl )-2-( 1-methylethoxyimino) -eddi- kesyreetfaylester.

15 Man anbringer 11 g produkt fra trin C i 20 ml tørt dimethyl- formamid, 40 ml methylenchlorid og 6,2 ml triethylamin. Man afkøler blandingen og tilsætter langsomt 13,2 g tritylchlorid, omrører 2 timer 30 minutter, tilsætter 43 ml 1 N saltsyre, omrører, dekanterer, vasker igen med 40 ml vand, ekstraherer med methylenchlorid, tørrer, 20 suger fra, inddamper til tørhed og får 27,7 g af det forventede produkt.

Det opnåede produkt har syn-konfiguration.

Trin E: 2-(2-tritylamino-4-thiazolyl)-2-(1-methylethoxyimino)-25 -eddikesyre.

Man opvarmer en blanding af 27,7 g produkt fra trin D, 150 ml dioxan og 65 il 2 I natriumhydroxidopløsning til tilbagesvaling i 2 timer. Natriumsaltet krystalliserer, man afkøler, suger fra, skyller med en blanding af ether og dioxan (1:1), tørrer og får 30 16,85 g råt natriumsalt. Man opløser 15,9 g af dette natriumsalt i 15,9 g dimethylformamid, 100 ml vand og ca. 500 ml methanol. Man tilsætter 30 ml 2 N saltsyre, uddriver methanolet, fortynder med vand, suger fra, skyller, tørrer, optager de 9,8 g viskost produkt i 220 ml af en blanding af methylenchlorid og methanol (50:50), 35 inddamper til tørhed, optager i ether, findeler, frasuger krystallerne, skyller og tørrer. Der fås 4,9 g af den forventede syre.

Smp. ca. 170°C.

Man får en analytisk prøve, idet man opløser 300 mg råprodukt i 2 ml methylenchlorid og 1 ml methanol, fortynder med vand og med methylenchlorid, rører rundt, frasuger krystallerne, skyller

- 30 - DK 161082 B

med methylenchlorid og med vand, tørrer og isolerer 230 mg analyserent produkt.

Analyse: beregnet: C# 68,77 W° 5,34 H# 8,91 6,8 5 fundet: 68,6 5,5 8,8 6,8

Det opnåede produkt har syn-konfiguration.

grin ff: 3-acetoxymethyl-7-(2-(2-tritylamino-4-thiazoly1)-2-(1-methyl-ethoxyimino) -ao'etamido) -oeph-3-em-4-carboxylsyre.

Man anbringer under argonatmosfære 4,89 g af den i trin E opnåede syre i 13,5 ml dimethylformamid. Efter opløsning afkøler man i et isbad og tilsætter 1,62 g dicyclohexylcarbodiimid i 16 ml methylenchlorid. Dicyclohexylurinstof krystalliserer. Man omrører i et isbåd, suger fra, skyller med methylenchlorid, tørrer og isolerer 1,424 g dicyclohexylurinstof. Man afkøler i et bad af methanol og is og tilsætter en opløsning af 1,41 g 7-aminocephalosporan-syre i 30 ml methylenchlorid og 1,45 ml triethylamin. Man omrører 3 timer ved stuetemperatur, tilsætter 20 ml 1 I saltsyre, rører om, dekanterer, genekstraherer med methylenchlorid, tørrer, suger fra og får 9,05 g blanding af det forventede produkt og udgangsproduktet.

20

Man optager i methylenchlorid, indleder en krystallisation, lader krystallisere under omrøring,-frasuger krystallerne, skyller, tørrer, får 1,6 g rent udgangsprodukt, inddamper til tørhed, optager resten i isopropylether under energisk omrøring og isolerer 4,91 g viskost uopløseligt produkt, som er det forventede produkt. Det op- 25 nåede produkt har syn-konfiguration.

Eksempel 13.

3-acetoxymethyl-7-(2-(2-amino-4-thiazolyl)-2-( 1-meth.vlethoxyimino) --acetamido)-ceph~3-em-4-carboxylsyre.

Man anbringer 4,91 g råprodukt fra eksempel 12 i 30 ml 50$'s vandig myresyre. Man omrører i et vandbad ved 60°0, fortynder med vand, frasuger det dannede triphenylcarbinol, skyller med vand, tørrer og isolerer 1,39 g triphenylcarbinol. Man inddamper til tørhed, optager i vand, findeler, suger fra, skyller med vand, tørrer og 35 får 800 mg af det forventede produkt.

Man får en analyseprøve, idet man opløser 972 mg råprodukt i 4 ml methanol, man fortynder med 20 ml ether, frasuger uopløseligt materiale, skyller, tørrer og får 404 mg af den forventede rene syre. Smp. ca. 200°C.

' 31 - DK 1610 8 2 B

Analyse: beregnet: C/° 44,71 B# 4,38 N/o 14,48 S# 13,26 fundet: 44,5 4,5 14,1 13,2

Produktet har syn-konfiguration, H.M.R.spektrum (60 MHz, 5 DMSO) p.p.m,: 2,01 (CH^CO),dublet ved 9,46, J = 8 Hz (COBH), 6,7 (proton i thiazolring).

Eksempel 14.

3-acetoxymethyl-7-(2-(2-amino-4-thiazolyl)-2-methoxyiminoacetamido)-10 -ceph-3-em~4-carboxylsyre, syn-is om«? r.

Trin A: 2-(2-chloracetamido-4-thiazolyl)-2-methoxyiminoeddikesyre-ethylester, syn-isomer.

Man indfører 45,8 g 2-(2-amino-4-thiazolyl)-2-methoxyimino-eddikesyreethylester, syn-isomer fremstillet ifølge trin A i eksem-15 pel 3, i 200 ml methylenchlorid. Man afdestillerer 20 ml deraf til tørring, afkøler til 10°C og tilsætter 50 ml pyridin. Man tisætter 41 g monochloreddikesyreanhydrid og opvarmer svagt indtil opløsning. Man lader henstå 6 timer ved .20°C under nitrogen, tilsætter 5 ml vand, omrører og hælder i 300 ml iskold 2 H saltsyre. Man de- o n kanterer, ekstraherer med methylenchlorid, vasker med vand og med natriumbicarbonat, tørrer, behandler med aktivkul, inddamper og tilsætter 300 ml isopropylether. Dette produkt krystalliserer. Man inddamper indtil opnåelsen af en tyk pasta, isafkøler, suger fra, vasker, tørrer og får 45,4 g produkt med smp. 113°C, 25 Man får en ren prøve ved omkrystallisation af en blanding af methylenchlorid og isopropylether, Smp. 118°C.

H.M.R.spektrum (CDCl^, 60 MHz): Q

(f) H-M“i-CH2C1 30 S ri o (a) <e) i 23 35 ^OCHj (b) (a) triplet centreret omkring 1,38 p.p.m., J = 7 Hz (b) singulet 4,05 p.p.m.

(c) kvadruplet centreret omkring 4,44 p.p.m, J = 7 Hz (d) singulet 4,33 p.p.m.

(e) singulet 7,27 p.p.m.

(f) singulet 9,95 p.p.m.

- 32 - DK 161082 B

grin B: 2-(2-ohloraoetamido-4-thiazolyl)-2-methoxyiminoeddikesyre. syn-isomer.

Man anbringer 46 g af det i trin A ovenfor opnåede produkt i 230 ml absolut ethanol. Man tilsætter ved 20°C under nitrogen 5 50 ml ren natriumhydroxidopløsning. Produktet opløses, og natriumsaltet begynder at krystallisere, hvorefter milieuet størkner. Efter 16 timers forløb suger man fra og tørrer. Det opnåede salt opløses i vand, man isafkøler, tilsætter 100 ml 2 U saltsyre, nætter med natriumchlorid og ekstraherer med ethylacetat indeholdende 10$ 10 ethanol. Man tørrer, behandler med aktivkul, destillerer under vakuum, medslæber vandet med benzen, optager i methylenchlorid, destillerer til tørhed, optager i methylenchlorid, isafkøler, suger fra, vasker, tørrer og får 34»5 g af det forventede produkt. Smp. ca, 200°C. Man renser produktet ved omkrystallisation af en blanding af 15 acetone og isopropylether.

Analyse: GgHgO^U^ClS = 277,68 beregnet: 0$ 34,60 H$ 2,90 . 15,13 01$ 12,77 S$ 11,55 fundet: 34,81 2,8 14,8 12,6 11,5 H.M.R.spektrum (DMS0, 60 MHz): 20 Q (b) (e) H-N-å-CH2Cl

Sr\ \=J C02H (c) 25 γ (d) N ' NSsOCH3 (a) (a) singulet 3,92 p.p.m.

30 (b) singulet 4,38 p.p.m.

(c) singulet ca. 5 p.p.m.

(d) singulet 7,58 p.p.m.

(e) singulet 12,6 p.p.m.

Trin 0: 3-acetoxymethyl-7-(2-(2-chloraoetamid o-4-thiazolvl)-2- -methoxyiminoacetamido)-ceph-5-em-4-oarboxylsyre. syn-isomer. Man indfører 15,3 g af det i trin B ovenfor opnåede produkt i 80 ml methylenchlorid. Ved 5°C tilsætter man 8 ml triethylamin.

Ved 0°C indfører man under nitrogenatmosfære 3,8 ml thionylchlorid og 26 ml methylenchlorid. Man lader henstå 15 minutter ved 0°C og tilsætter derpå 7 ml triethylamin. Man indfører ved 0°C under nitro-

' 33 ~ DK 161082 B

genatmosfære 13,6 g 7-aminocephalosporansyre i 100 ml methylenchlo-rid og 14 ml triethylamin. Man lader temperaturen stige til 20°C igen og omrører derpå 1 time# Denne opløsning destilleres til tørhed under vakuum ved 30-35°C, Man opløser resten i 250 ml vand, behand-5 ler med aktivkul og tilsætter 50 ml 2 H saltsyre. Man frasuger udfældningen og vasker med vand. Det opnåede råprodukt suspenderes i 80 ml vand. Yed 5°C tilsætter man 7 ml triethylamin. Man tilsætter på én gang under omrøring ved 5°C 15 ml 4 N svovlsyre, og produktet krystalliserer efter 15 minutters forløb. Man suger fra, vasker med 10 ethanol ved udrivning og derefter med ether, tørrer under vakuum og får 18,6 g af det forventede produkt, = +26° +1° (1$, dime-thylformamid).

H.M.R.spektrum (DMS0, 60 MHz): Q(=> 15 H-N-C-CH-C1 (e)

/V O

8 N

^=h3 « (b) Y CH2-°fCH3 4o2h δ (a) singulet 2,03 p.p.m.

25 (b) singulet 3,90 p.p.m.

(c) singulet 4,38 p.p.m.

(d) singulet 7,45 p.p.m.

Trin D: 3-acetoxymethyl-7-(2-(2-amino-4-thiazolyl)-2-methox.yimino- acetamido)-ceph-3-em-4-carboxyls.vre. syn-isomer.

30

Man suspenderer 5,32 g syre fra trin C ovenfor i 10,6 ml vand og 912 mg thiourinstof. Ved 20°C tilsætter man 1 g kaliumbicar-bonat. Efter opløsning omrører man 6 timer ved ca. 20°0 under nitrogenatmosfære. Den gummiagtige udfældning begynder efter ca. 1 time 30 minutter. Man tilsætter da 30 ml vand og 3 ml myresyre. Man afkø-35 ler til 5°C, suger fra og vasker med vand indeholdende 10$ myresyre. Man opløser resten ved ca. 5°C i 30 ml vand indeholdende triethylamin. Ved 5°C tilsætter man 3 ml myresyre, frasuger udfældningen, vasker ved udrivning med vand indeholdende myresyre og eliminerer den mørkebrune gummi. De vandige faser forenes og behandles med aktivkul. Der fås en lysegul opløsning, som man mætter med ammonium-

- 34 - DK 161082 B

sulfat. Man. frasuger udfældningen, udriver med vand, suger fra, vasker med vand og får en udfældning a.

Moderlud ene mættes med ammoniumsulfat, hvilket giver en udfældning, som man suger fra og vasker tre gange, hvorved man får 5 udfældning B.

Udfældningerne A og B slås sammen. Man optager i ethanol, omrører 1 time ved 20°C og lader henstå 16 timer ved 0°C. Man suger fra, vasker med ethanol og ether, tørrer under vakuum og får 3,47 g af det forventede produkt i form af syn-isomeren.

10 N.M.R. spektrum (DMSO, 60 MHz): 15 ! <Cl h i Nm\ ksxfH (b)

(a> N I I

(a) (b) o T ch2-oc-ch3

20 C02H

(a) singulet 2,03 p.p.m, (b) singulet 3,55 p.p.m, (o) dublet 5,19 p.p.m. J = 5 Hz (d) singulet 6,8 p.p.m.

25 Dette produkt er identisk med det i eksempel 4 og 6 frem stillede.

Eksempel 15.

Diethylaminsalt af 3-acetoxymethyl-7-(2-f2-trit.ylamino-4-thiazolyl)-30 -2-methoxyiminoaoetamido)-ceph-3-em-4~oarboxylsyre. syn-isomer.

Trin A: 2-aoet.vl-2-methoxyiminoeddikesyreethylester,

Man indfører 4,69 kg 2-acetyl-2-hydroxyiminoacetyleddikesyre-ethylester svarende til 4,21 kg rent produkt i 21 liter ren vandfri acetone. Ved 20-25°C tilsætter man 6,1 kg kaliumcarbonat. Man omrø-35 rer suspensionen 10 minutter og tilsætter derpå ved 20-25°C 3,72 kg dimethylsulfat. Man omrører 3 timer ved 20-25°C. Man hælder da i 126 liter afmineraliseret vand og ekstraherer ved hjælp af 4 gange 5 liter og derefter 2 liter methylenchlorid. Man vasker med 10 liter afmineraliseret vand. Man tørrer, suger fra og skyller med 2 liter methylenchlorid. Man destillerer under vakuum og får 4,88 kg

- 35 - DK 161082 B

af det forventede produkt.

Rf = 0,7 ved silicageltyndtlagschromatografi, eluerings -middel: methylenchlorid og ethylacetat (9ί1).

Produktet er identisk med det i trin α i eksempel 3 frem-5 stillede.

Trin B: 4-brom-2-methoxyiminoacetyleddikesyreethylester.

Man anbringer 3,53 kg produkt fra trin Å ovenfor i 18,6 liter methylenchlorid og 3,5 g p-toluensulfonsyre, I løbet af 30 minutter og under opretholdelse af temperaturen på 22°C +1°0 sætter 10 man til ovenstående opløsning en opløsning af 2,96 kg brom i 3,5 liter methylenchlorid. Man iagttager en frigørelse af hydrogenbromid efter 15 minutters tilledning. Man omrører i 45 minutter ved 22°C og hælder derpå om og vasker med 2 gange 14 liter iskoldt afminera-liseret vand. Man genekstraherer vaskevæskerne med to gange 3,5 liter methylenchlorid. Man tørrer, filtrerer, skyller og destillerer under vakuum. Der fås 4,73 kg af det forventede produkt.

Dette produkt er identisk med det i trin β i eksempel 3 fremstillede.

20 Trin 2-(2-amino-4-thiazolyl)-2-methoxyimino®ddikesyreethylester, syn-isomer.

Man indfører 1,43 kg thiourinstof i 3,55 liter ethanol og 7,1 liter afmineraliseret vand. Man omrører 10 minutter ved 20°C og tilsætter derefter ved 20-25°C 4,730 kg af det i trin B ovenfor 25 fremstillede produkt i 3,55 liter ethanol. Man omrører 3 timer ved 20-25°C, afkøler til 15-20°C og neutraliserer til en pH-værdi på 7 med ca. 1,6 liter 22° Bé ammoniakvand.

Man omrører yderligere 15 minutter ved 20-25°C, suger fra og vasker med 5 gange 1,8 liter afmineraliseret vand. Der fås 2,947 3Q kg af det forventede produkt. Smp. 162°C.

Produktet er identisk med det i trin A og γ i eksempel 3 fremstillede.

Trin D: 2-(2-tritylamino-4-thiazolyl)-2-methoxyiminoeddikesyre-ethylester. syn-isomer.

35 Man anbringer 3,41 kg af det i trin C ovenfor opnåede pro dukt i 17 liter methylenchlorid og 2,275 liter triethylamin. Man omrører 15 minutter og tilsætter i løbet af 1 time under omrøring og under nitrogenatmosfære ved 20-25°C 4,55 kg tritylchlorid. Man omrører i 20 timer ved 2o-25°C under nitrogenatmosfære, og der sker en krystallisation af triethylamin-hydrochlorid·

-36- DK 161082 B

Man omhælder og vasker med 10,2 liter 0,5 N is hold saltsyre og to gange 10,2 liter iskoldt afmineraliseret vand. Man gen-ekstraherer vaskevæskeme i serie med 1,2 liter methylenchlorid.

Man tørrer, filtrerer og skyller med 1,7 liter methylenchlorid. i 5 Man destillerer til tørhed under vakuum ved en temperatur under i 50°C. . i

Der fås 8,425 kg råprodukt.

o

Dette produkt genopløses ved 20-25 G i 8,4 liter methanol, og man tilsætter i løbet af 1 time ved 20-25°C under omrøring un-10 der indledning af en krystallisation 2,8 liter afmineraliseret vand. Man omrører yderligere 1 time, suger fra, udriver med 2 gange 1,7 liter methanol med 25$ vand, tørrer ved 40°C og får 7*165 kg af det forventede produkt.

Produktet er identisk med det i trin B i eksempel 3 frem-15 stillede.

Trin E; Natriums alt et af 2-(2-tritylamino-4 -thiazolyl) -2-methox.y- iminoacetamidosyre« syn-isomer.

Man indfører 4,175 kg produkt fra trin D ovenfor i 20,9 liter ethanol. Man opvarmer til tilbagesvaling under omrøring og un-20 der nitrogenatmosfære. Der fås en fuldstændig opløsning fra 55°C at regne.

Man indfører under tilbagesvaling og under nitrogenatmosfære 5,235 liter ca. 2 N natriumhydroxid opløsning. Der sker en hurtig krystallisation. Man omrører 1 time til tilbagesvaling under nitro- 25 o genatmosfære. Man bringer på 20-25 C og holder 2 timer på denne temperatur. Man suger fra, vasker med 4 gange 2,1 liter ethanol, tørrer og får 4,02 kg af det forventede produkt.

Trin ff: 2-(2-trltylamino-4-thiazolyl)-2-methoxyiminoeddikesyre, 30 syn-isomer.

Man anbringer 500 g af det i trin E ovenfor opnåede produkt svarende til 440 g tørt produkt i 2,5 liter methylenchlorid. Man tilsætter i løbet af 2 minutter ved 20-25°C under omrøring og under nitrogenatmosfære 2 liter ca. 1 N saltsyre. Man omrører 2 timer 35 ved 20-25°C under nitrogenatmosfære. Man fradekanterer methylen-chloridfasen og vasker den med 3 gange 2 liter afmineraliseret vand. Man genekstraherer i serie med 1 liter methylenchlorid. Man tørrer, tilsætter 25 g aktivkul, suger fra, skyller, destillerer til tørhed og får 481 g råprodukt. Man optager denne stofmængde i 2,1 liter isopropylether. Man suger fra og vasker med 2 gange 420 ml

- 37 - DK 161082 B

iaopropylether. Man tørrer under vakuum indtil konstant vægt og får 424,6 g af det forventede produkt.

Produktet er identisk med det i trin C i eksempel 3 fremstillede.

5 grin Gi Dieth.vlaminsaltet af 3-aoetoxyinethyl-7-(2-(2-tritylamino--4-thiazolyl)-2-methoxyiminoacetamido)-oeph-3 -em-4 -carboxylsyre. s.vn-is omer.

Man anbringer i en kolbe 200 g 2-(2-tritylamino-4-thiazolyl)--2-methoxyiminoeddikesyre fra trin P ovenfor og derefter 1200 ml methylenchlorid. Man opvarmer suspensionen til tilbagesvaling under omrøring under argon og afdestillerer derefter ved atmosfærisk tryk 600 ml methylenchlorid. Man bringer på 18-20°C og indfører derefter under opretholdelse af denne temperatur 54 g dicyclohexylcarbodi- imid i 54 ml methylenchlorid. Man omrører 1 time ved 18-20°C under 15 argon og tilsætter derefter i løbet af 15 minutter ved denne temperatur en på stedet fremstillet opløsning af 61,4 g 7-aminocephalo-sporansyre i 900 ml methylenchlorid og 63 ml triethylamin. Man omrører 1 time 30 minutter ved 20°C (pH-værdi 6,5-7)# Man tilsætter derpå 50 ml eddikesyre, lader henstå 15 minutter under omrøring 2 0 ved 20°C og suger derpå fra til eliminering af den som udgangsprodukt benyttede 7-aminocephalosporansyre. Man skyller med 4 gange 200 ml methylenchlorid. Hen organiske opløsning vaskes med 3 gange 400 ml afmineraliseret vand og tørres derefter over magnesiumsulfat.

Man suger fra, skyller med 2 gange 200 ml methylenchlorid og destil- 25 lerer til tørhed under vakuum og under argon. Hen tørre olieagtige ekstrakt opløses ved 20-25°0 under omrøring og under argon i 700 ml dioxan. Man destillerer under vakuum og under argon ved en temperatur under 30°C 300 ml af en blanding af dioxan og methylenchlorid.

Man bringer på 20°C +2°C og tilsætter derpå 500 ml ether. Man til- 30 “ sætter 52 ml diethylamln. Efter ca. 10 minutters forløb udkrystalliserer diethylaminsaltet af 2-(2-tritylamino-4-thiazolyl)-2-meth-oxyiminoeddikesyre. Man lader henstå 1 time under argon ved 20°C.

Man suger fra og skyller med 3 gange 100 ml af en opløsning af dioxan og ether. Man tørrer det opnåede diethylaminsalt og får 113,6 35 g deraf. Hen organiske opløsning fældes i løbet af 30 minutter under omrøring i 3,25 liter isopropylether. Man lader henstå 15 minutter under omrøring og suger derpå fra under vakuum. Man skyller med 2 gange 400 ml isopropylether, tørrer under vakuum og får 182 g produkt, som er identisk med det i eksempel 5 opnåede.

'38~ DK 161082 B

Eksempel lg- 5-acetoxymethyl-7-( 2-(2-amino-4-thiazolyl) -2-methoxyiminoacetamid o) --ceph-5-em-4 -carboxylsyre« syn-is omer« 182 g af det i eksempel 15 ovenfor opnåede produkt indfø-5 res under omrøring og under argon ved 28-30°C i 347 ml myresyre og 87 ml afmineraliseret vand. Der sker en fuldstændig opløsning og krystallisation af triphenylcarbinol. Man lader henstå under omrøring og under argon i 2 timer 30 minutter ved 28-30°C og udfælder derpå i løbet af 15 minutter under omrøring i 1740 ml afmineralise-10 ret vand og 847 g ammoniumsulfat. Man lader henstå 30 minutter under omrøring. Man suger fra, skyller med 2 gange 174 ml afmineraliseret vand, tørrer under vakuum ved 25-30°C og får 147 g af en blanding af det forventede produkt og triphenylcarbinol. Man udriver råproduktet i 1 time med 735 ml ether ved 18-20°C. Man suger fra, 15 skyller med 2 gange 147 ml ether, tørrer ved 25~30°C og får 89 g af det forventede produkt.

Dette produkt udrives under omrøring og under nitrogenatmosfære med 445 ml ethanol. Suspensionen bringes på 45-50°C under omrøring og holdes 1 time under disse betingelser. Man omrører derpå 1 time 20 ved 18-20°C. Man suger fra, skyller med 2 gange 45 ml ethanol, tørrer under vakuum ved 20°0 og får 76,85 g af det forventede produkt.

Dette produkt bringes i kontakt med 230 ml eddikesyre.

Man omrører 15 minutter under nitrogenatmosfære og tilsætter derpå 77 ml afmineraliseret vand, Man tilsætter derpå denne op-25 løsning ca, 700 ml vand. Man lader henstå 1 time under omrøring ved 18-20°C, tilsætter derpå i løbet af ca. 10 minutter 269 g ammoniumsulfat, lader henstå 15 minutter og tilsætter derpå 3,85 g aktivkul. Man lader henstå 15 minutter under omrøring, suger fra og skyller med 77 ml afmineraliseret vand med 25$ eddikesyre. Man tilsætter 30 ved 18-20°0 og under omrøring 154 ml myresyre og tilsætter en krystal af slutproduktet og fremmer derefter krystallisationen ved skrabning. Man lader henstå 2 timer under omrøring ved 18-20°C og derefter 2 timer ved 0-5°C. Man suger fra og vasker med 4 gange 77 ml afmineraliseret vand med 5$ myresyre. Man tørrer ved 20-25°0 35 under vakuum. Der fås 49,45 g produkt i form af formiat.

Det opnåede formiat udrives under omrøring 1 time ved 45-50°C i 25Ο ml ethanol og henstår derpå 1 time ved 18-20°0. Man suger fra og skyller med 2 gange 50 ml ethanol. Man tørrer ved 20°0 under vakuum og derpå 10-15 timer ved 35-40°C, Der fås 45,45 g af det forventede produkt, a-p = +65,5° (0,5$, vand med 0,5$ NaHCO^).

-39- DK 161082 B

Produktet er identisk med det i eksempel 4, 6 og 14 fremstillede.

Eksempel 17.

5 Natriumsaltet af 3-acetoxymethyl-7-(2-(2-amino-4-thiazolyl)-2--methoxyiminoacetamido)-ceph-5-em-4-earboxylsyre, krystalliseret. ayn-isomer.

Man opløser 19,8 g 3-acetoxymethyl-7-(2-(2-amino-4-*thia-zolyl)-2-methoxyiminoacetamido)-ceph-3~em-4-carboxylsyre, syn-iso-10 mer, fremstillet ifølge eksempel 4, 6, 14 eller 15 i 65 ml 1 M natriumacetatopløsning i methanol. Man lader krystallisere 35 minutter ved stuetemperatur, tilsætter i løbet af 1 time 40 ml ethanol, fortsætter omrøringen i isbad i 2 timer 30 minutter, suger fra, vasker 2 gange ved hjælp af 10 ml af en blanding af methanol og 15 ethanol (1:1), 2 gange ved hjælp af 10 ml ethanol og derefter to gange ved hjælp af 20 ml ether. Efter tørring i 2 timer ved 45°C under vakuum og derefter 48 timer i dessicator under vakuum med svovlsyre får man 16,191 g af det krystallinske produkt.

Idet man arbejder under undgåelse af enhver kontakt med 20 atmosfærens fugtighed, får man et produkt, hvis fysiske konstanter er som følger:

HgO (Karl Fischer) = 0,2$ methanol under 0,1$ ) -bestemmelse ved dampfasechromatografi ethanol 0,45$) 25 Analyse: G-^gH^gOyN^SgNa = 477,5 beregnet: C$ 40,24 H$ 3,38 N$ 14,67 S$ 13,43 Na$ 4,81 fundet: 39,9 3,5 14,5 13,1 4,8

Ved henstand i luften rehydratiseres produktet. Røntgenstrålespektret (Debye-Scherrer) har gjort det mu-30 ligt at bekræfte den krystallinske karakter af det opnåede produkt.

Man kan ligeledes benytte isopropanol i stedet for ethanol til opnåelse af det forventede produkts krystallisation.

Eksempel 18 35 Natriumsaltet af 3-acetoxymethyl-7-(2-(2-amino-4-thiazolyl)-2-meth-oxyiminoacetamido)-ceph-3-em-4-carboxylsyre, krystalliseret, syn--isomer.

Trin A: Solvat mellem 3-acetoxymethyl-7-(2-(2-amino-4-thiazolyl)--2 -me thox.yiminoace tamid o )-ceph-3-em-4 -carboxylsyre, syn-4aomer. og myresyre.

I småportioner og under omrøring sætter man 87,2 g diethyl- DK 161082 B , aminsalt af 3-acetoxymethyl-7-'(2-(2~tritylamino-4-thiazolyl)-2- | -methoxyiminoacetamido )-ceph-3-em-4-carboxylsyre, fremstillet ifølge j eksempel 5, til ep blanding af 220 ml ren myresyre og 220 ml vand.

Man omrører 30 minutter ved 50°C, afkøler og eliminerer ved filtre-5 ring 30,1 g triphenylcarbinol. Man hælder 450 ml vand i filtratet, eliminerer en svag udfældning med aktivkul og inddamper ved 40°C under vakuum, indtil der dannes en udfældning. Man tilsætter 200 ml vandfrit ethanol, afkøler med is, filtrerer, vasker med ethanol og med ether og tørrer under vakuum.

10 Der fås 31»1 g af det forventede produkt.

Analyse; C^gH-j^I^0yS2,HC02H,H20 = 541,5 beregnet: C$ 39,3 H$ 4,08 13,48 S# 12,34 H20$ 3,46 .

fundet: 39,2 4,1 13,2 12,8 4,15 s

Trin B: Krystalliseret natriumsalt.

15 15 g frisk fremstillet solvat fra trin A opløses i 75 ml methanol, og man behandler opløsningen med 4,5 g kaliumacetat og 3 g aktivkul. Efter filtrering tilsætter man 5 ml isopropanol under omrøring. Efter 16 timer ved 0°C isolerer man krystallerne, vasker med ethanol og ether og tørrer 2 timer under ekstremt vakuum ved 20 50°0.

Der fås 7,95 g af det forventede produkt.

Produktet opholder sig derefter kortvarigt i den frie luft.

Man får følgende

Analyse: Ο^Η-^Ν^Ο^,ΙΙ^Ο = 495,5 25 beregnet: C$ 38,78 H$ 3,66 B$ 14,14 Ba$ 4,64 S$ 12,94 fundet: 38,6 3,7 13,8 4,6 13,2

Eksempel 19.

Natriumsaltet af 3-acetoxymeth.vl-7-(2-(2-amino-4»thiazolyl)-2~ 30 -methoxyiminoacetamido)-ceph-3-em-4-carboxylsyre. amorf, syn-iso.mer. Trin A: Solvat mellem 3-acetoxymethyl-7-(2-(2-amino-4-thiazolyl)--2-methoxyiminoacetamid o)-oeph-3-em-4-carboxylsyre, syn--isomer, og ethanol.

Man opløser 52 g solvat med myresyre fra trin Å i eksempel 35 18 i en blanding af 3 liter 96$*s ethanol og 350 ml vand. Man inddamper under vakuum indtil opnåelse af et rumfang på ca. 300 ml, Solvatet begynder at krystallisere i løbet af inddampningen. Man afkøler 1 time på isbad, filtrerer, vasker med lidt ethanol og tørrer under vakuum ved stuetemperatur i nærværelse af koncentreret

DK 1610 8 2 B

svovlsyre.

Der fås 44 g af det forventede produkt.

Analyses ^16^17^5^7½9 0,8 mo1 G2H5OH s 492,3 beregnet: C£ 42,94 H# 4,46 N# 14,23 S# 13,02 5 fundet: 43,0 4,4 14,1 12,9

Trin B; Amorft natriumsalt.

Man indfører 3 g solvat med ethanol fra trin A i 60 ml vand ved 0°C og tilsætter under omrøring 0,504 g natriumbicarbonat opløst 1 6 ml vand. Man filtrerer den neutrale opløsning og lyofiliserer 10 straks. Produktet opholder sig en kort tid i den frie luft.

Analyse: ^16^16½^8½½919^½0 = 504,47 beregnet: <# 38,09 3,8 N% 13,88 fundet: 38,2 3,9 13,6 15

Eksempel 20.

Natriumsaltet af 3-acetoxymethyl-7-(2-(2-amino-4-thiazolyl)-2--methoxyiminoaoetamido)-ceph-3-em-4-oarboxylsyre. krystalliseret. syn-isomer.

Til 4,95 g 3-acetoxymethyl-7-(2-(2-amino-4-thiazolyl)-2- 2 0 -methoxyiminoacetamid o)-ceph-3-em-4-carboxylsyre, syn-isomer, fremstillet ifølge eksempel 4, 6, 14 eller 16, sætter man 5 ml ethanol og derefter under omrøring på isbad 10 ml af en 1 M vandig opløsning af natriumbicarbonat. Efter opløsning tilsætter man 15 ml ethanol, inddamper ved 30°0 under vakuum, optager i ethanol og tør-25 rer til konstant vægt. Per fås et pulver, som man optager i 15 ml methanol. Man indleder en krystallisation og lader henstå natten over i køleskab. Per isoleres 3,407 g krystalliseret produkt.

Eksempel 21.

O Π

Natriumsaltet af 3-acetoxymethyl-7-(2-(2-amino-4-thia,zolyl)-2--methoxyiminoaoetamido)-oeph-5-em-4-oarboxylsyre. krystalliseret. syn-isomer.

Man opløser 0,5 g amorft natriumsalt fra eksempel 19 i 2 ml methanol, tilsætter langsomt under omrøring 0,25 ml n-butanol 35 og afkøler 48 timer i køleskab ved ca. 6°C, Krystallerne vaskes med lidt koldt methanol og tørres 3 timer under vakuum ved 40°0 i nærværelse af koncentreret svovlsyre,

Per fås 0,2 g krystalliseret produkt.

Produktet opholder sig derpå en kort tid i den frie luft.

- « - DK 161082 B

Analyse: ^i6%6^5^a^7S2,‘*','’H2^ = 504,47 beregnet: C fo 38,09 Efo 3,8 Ef» 13,88 O fo 26,96 fundet: 38,4 3,8 13,8 .27,1

Idet man arbejder under analoge betingelser, får man lidet 5 forskellige krystallinske former, der f.eks. indeholder 0,5 mol j vand eller 1 mol vand og 1 mol methanol. j Eøntgenspektrene (Debye-Scherrer) af de ovenfor opnåede j produkter bekræfter den krystallinske karakter af de opnåede pro- j dukter. j 10 ' i

Eksempel 22.

3 -aoet oxymethy1-7 -(2 -(2-tri ty lamino -4 -thiaz olyl) -2 -viny loxyimino -acetamido)-ceph-5-em-4-carboxylsyre« syn-isomer.

Trin A: Ethylester af 2-(2-bromethoxyimino)-2-(2-tritylamino-4- I

15 -thiazolyl)-eddikesyre« syn-isomer.

Man anbringer under argon en blanding af 4,94 g hydrochlorid af ethylesteren af 2-hydroxyimino-2-(2-tritylamino-4-thiazclyl)-ed- j dikesyre, syn-isomer, i 10 ml dimethylformamid og indfører ved stue- i temperatur i løbet af 3 minutter 4,14 g kaliumcarbonat. Man omrører | 20 20 minutter ved 20°0 og tilsætter 8,65 ml 1,2-dibromethan, Man om rører 30 timer og hælder i et milieu omfattende ICO ml destilleret vand og 20 ml methylenchlorid, hvorpå man dekanterer, genekstrahe-rer med methylenchlorid, vasker med destilleret vand, genekstrahe-rer, tørrer de organiske opløsninger, suger fra, skyller og destil-25 lerer til tørhed. Man får råproduktet, som man chromatograferer på silicagel under eluering med benzen tilsat 5$ ether. Man samler en første fraktion, som man omkrystalliserer af methanol efter opløsning ved 50-60°0 og frasugning ved 0-5°C. fer fås 1,16 g cremehvidt produkt med smp, 117°0, 30 Der fås derefter en homogen fraktion på 1,258 g.

H.M.R. spektrum, ppm (CDCl^):

Triplet = 3,55 J = 7 Hz CH2Br triplet =4,51 J = 6 Hz H-0-CH2 singulet 6,55, proton i thiazolring.

35 Trin B; Ethylester af 2-(2-tritylamino-4-thiazolyl)-2-vinyloxyimino-eddikesyre, syn-isomer.

Man anbringer 6,9 g ethylester af 2-(bromethoxyimino)-2--(2-tritylamino-4-thiazolyl)-eddikesyre, syn-isomer, fremstillet i trin A i 35 ml dimethylsulfoxid, Derpå indfører man ved 20-25°C

DK 161082 B

i løbet af 5 minutter 16 ml 1 M opløsning af kalium-tert.-butylat i tetrahydrofuran, Man omrører 30 minutter og indfører ved stuetemperatur 3 ml 1 M kalium-tert.-butylatopløsning i tetrahydrofuran. Man omrører atter 30 minutter, indfører atter 3 ml af samme kalium-5 -tert.-butylatopløsning og efter 30 minutters forløb en tredie gang 3 ml af opløsningen.

Efter den sidste indføring omrører man 30 minutter cg hælder i en blanding af 350 ml vand og is og 90 ml methylenchlorid.

Man syrner til en pH-værdi på 2 med 28 ml 1 li saltsyre, 10 dekanterer og genekstraherer med 3 gange 50 ml methylenchlorid.

Man vasker med destilleret vand, tørrer, suger fra, skyller og de-stillerer til tørhed, der fås en sort harpiks, som man renser ved chromatografi på silicagelsøjle under eluering med methylenchlorid. Der fås således 3,227 g af det forventede produkt, som umiddelbart 15 benyttes i det næste trin.

I.M.R,spektrum, ppm (CDCl^):

Massiv fra 4,16 til 4,83 ppm = CHg massiv fra 6,66 til 7,33 ppm = CH singulet ved 6,65, proton i thiazolring.

20 Efter omkrystallisation af absolut ethanol får man et pro dukt med smp, 114°0,

Analyse: ^28^25^3^3^ beregnet: C1* 69,54 H# 5,21 W° 8,69 S# 6,36 fundet: 69,2 5,2 8,3 6,6 2 5

Trin G: 2-(2-tritylamino-4-thia2;olyl)-2-vinyloxyiminoeddikesyre. syn-isomer.

Man anbringer 3,227 g ethylester af 2-(2-tritylamino-4- -thiazolyl)-2-vinyloxyiminoeddikesyre, syn-isomer, fremstillet i trin B i 3,2 ml dioxan. Man tilsætter ved stuetemperatur 20 ml 30 0,5 M opløsning af kaliumhydroxid i absolut ethanol og 12 ml absolut ethanol. Man opvarmer til 50°C under omrøring og argonatmosfære og opretholder i 1 time. Kaliumsaltet krystalliserer ud. Man bringer på 20°C, suger fra, skyller med ethanol og optager produktet i en blanding af 50 ml ethylaeetat og 50 ml destilleret vand.

35

Man syrner ved hjælp af 6 ml 2 I saltsyre og rører om indtil opnåelse af to homogene faser. Man dekanterer, vasker med 3 gange 20 ml destilleret vand, genekstraherer med ethylaeetat, tørrer, suger fra og skyller med ethylaeetat. Man inddamper til 15 ml og isafkøler ved 0-5°C. Man suger fra og skyller med ethylaeetat. Man tørrer og får 2,53 g af det forventede produkt. Produktet benyttes

' 44 ' DK 161082 B

umiddelbart i det næste trin.

Efter omkrystallisation får man en renset prøve med smp.

150°C.

Trin D: 3-acetoxymethyl-7-(2-(2-tritylamino-4-thiazolyl)-2-vinyl-5 ———— oxyiminoacetamido)-ceph-3-em-4-carboxylsyre, syn-isomer.

Man indfører 2,53 g 2-(2-tritylamino-4-thiazolyl)-2-vinyl-oxyiminoeddikesyre, syn-isomer, fremstillet i trin C i 20 ml methy-lenchlorid. Man afkøler til 5°C og indfører på én gang 0,632 g di- | eyclohexylcarbodiimid. Man lader genantage stuetemperatur. Man om-rører under argon i 1 time til opnåelse af suspension A. På separat måde indfører man under argonatmosfære 0,718 g 7-aminocephalosporan-syre i 10 ml methylenchlorid. Man afkøler til 10°C og indfører 1,1 ml triethylamin til opnåelse af opløsning B.

Man indfører suspension A i løbet af 10 minutter ved 5-10°C

15 i opløsning B. Man omrører, idet man lader genantage stuetemperatur (i løbet af 35 minutter). Derefter omrører man 3 timer ved 20-25°C.

Man tilsætter derpå 0,6 ml eddikesyre, omrører 10 minutter og frasuger derpå det dannede dicyclohexylurinstof. Man vasker den organiske opløsning med vand, tørrer og destillerer under vakuum.

Der fås en gul harpiks, som man optager i ethylacetat, idet man frafiltrerer en smule uopløseligt materiale. Man inddamper til tørhed og får 3,475 g af det forventede produkt.

Hydrochloridet af ethylesteren af 2-hydroxyimino-2-(2-tri-tylamino-4-thiazolyl)-eddikesyre, syn-isomer, der benyttes som udgangsprodukt i eksempel 1-Y, fremstilles som følger: 2-(2-amino-4-thiazolyl)-2-hydroxyiminoeddikesyreethylester, syn--isomer.

Man opløser 0,8 g thiourinstof i 2,4 ml ethanol og 4,8 ml 30 vand. Man sætter i løbet af 5 minutter opløsningen af 2 g 4-chlor--2-hydroxyiminoacetyleddikesyreethylester til og omrører 1 time ved stuetemperatur. Man uddriver størstedelen af ethanolet under delvis vakuum og neutraliserer til en pH-værdi på 6, idet man tilsætter fast natriumbicarbonat. Man isafkøler, suger fra, vasker 35 med vand og tørrer under vakuum ved 40°C. Der fås 1,32 g af det forventede produkt, Smp. 232°C.

Analyse: beregnet: C$6 39,06 W° 4,21 Wfo 19,52 S % 14,9 fundet: 38,9 4,4 19,7 14,6

DK 161082 B

Hydrochloric!et af 2-(2-trit,ylamino-4-thiazolyl)--2-h,ydroxyiminoed-dikesyreeth.v lester, syn-isomer.

Man indfører 43*2 g 2-(2-amino-4~thiazolyl)-2-hydroxyimino-eddikesyreethylester, syn-isomer, fremstillet ovenfor i 120 ml 5 tørt dimethylformamid.

Man afkøler til -35°C, indfører 32 ml triethylamin og derefter i løbet af 30 minutter portionsvis 60 g tritylchlorid. Man lader temperaturen stige, iagttager en fuldstændig opløsning og derefter en opvarmning til 30°C. Efter 1 times forløb hælder man 10 i 1,2 liter iskoldt vand indeholdende 40 ml 22° Be saltsyre.

Man omrører i et isvandbad, suger fra, skyller med 1 N saltsyre og udriver med ether, Der fås 69,3 g hydrochlorid.

Eksempel 23.

15 Natriumsaltet af 3-aoetoxymeth.vl--7-(2-(2-tritvlamino-4-thiazol.vl)--2-vin.yloxyiminoaoetamido)-ceph-3-em-4~carboxyls.yre, syn-isomer.

Man opløser ved stuetemperatur 2,628 g produkt fremstillet i eksempel 22 i form af en harpiks i 5,2 ml acetone. Man tilsætter på én gang 10,4 ml 1 M opløsning af natriumbicarbonat i vand.

20 Man frasuger natriumsaltet efter 1 times kontakt ved 20°0, og man skyller med 2 gange 2 ml af en blanding af vand og acetone (1:1) og med 2 ml destilleret vand. Man tørrer under vakuum ved 40°C og får 1,612 g af det forventede råprodukt.

25 Eksempel 24.

3-acetoxymethyl-7-(2-(2-amlno-4-thiazolyl)-2-vinylox.viminoacetamido)--ceph-3~em-4-oarboxylsyre. syn-isomer.

Man anbringer 1,612 g natriumsalt af 3-acetoxymethyl~7--(2-(2-tritylamino-4-thiazolyl)-2-vinyloxyiminoacetamido )-oeph-3-30 -em-4-carboxylsyre, syn-isomer, fremstillet i eksempel 23 i 4 ml 98$’s myresyre. Man tilsætter straks efter 4 ml destilleret vand.

Man omrører ved 40°C i 15 minutter. Man formaler den heterogene suspension i 30 minutter ved stuetemperatur. Man frasuger ved 20°C og skyller med 2 gange 1,6 ml 50$'s myresyre. Man destillerer til 35 tørhed og optager i 5 ml destilleret vand. Man frasuger ved stuetemperatur, skyller med destilleret vand og dernæst med ether. Man tørrer og får 300 mg af det forventede produkt. Man fraskiller det uopløselige materiale på samme måde som ovenfor ved hjælp af 50$'s myresyre. Der fås således 0,214 g yderligere syre.

DK 161082

- 4« - I

_ - i * |

Analyse: C17%7®7^5^ j beregnet: Ofo 43*68 3*66 W$> 14*98 13*72 i fundet: 44*2 3,9 15,1 13,0 j E.M.R.spektret, ppm (DMSO): j 5 6,91 (proton i thiazolring) 7,28 (fri amin IH2)

Eksempel 25.

Hatriumsaltet af 5-acetoxymethyl-7-(2-(2-amino-4-thiazolyl)-2-vinyl-10 oxyiminoacetamido)-ceph-3-em-4-carboxylsyre.

Til 5,08 g 3-acetoxymethyl-7-(2-(2-amino-4-thiazolyl)-2--vinyloxyiminoacetamido)-ceph-3-em-4-carboxylsyre, syn-isomer, fremstillet efter eksempel sætter man 5 ml ethanol qg dernæst ] under omrøring i isvandbad 10 ml 1 I vandig opløsning af natrium-15 bicarbonat. Efter opløsning tilsætter man 15 ml ethanol* hvorpå man inddamper til 30°C under vakuum, optager i ethanol og tørrer I til konstant vægt« Man får det forventede produkt, j 20

Eksempel 26.

Man fremstiller et injektionspræparat efter recepten: - 3-acetoxymethyl-7-(2-(2-amino-4--thiazolyl)--2-hydroxyiminoaeetamido)-ceph-3-em-4-carb- 25 oxylsyre 500 mg - sterilt vandigt tilsætningsstof ad 5 ml

Eksempel 27.

Man fremstiller et injektionspræparat efter recepten: 30 - 3-acetoxymethyl-7-(2-(2-amino-4-thiåzolyl)-2- -methoxyiminoacetamido)-ceph-3-em-4-carboxylsyre 500 mg - sterilt vandigt tilsætningsstof ad 5 ml

Eksempel 28.

35 Man fremstiller et injektionspræparat efter recepten: - natriumsaltet af 3-acetoxymethy1-7-(.2-(2- -amino-4-thiaz oly1)-2-methoxyiminoacetamid o)--ceph-3-em-4-carboxylsyre 500 mg - sterilt vandigt tilsætningsstof ad 5 ml

. 47 . DK 161082 B

Eksempel 29.

Man fremstillet et injektionspræparat efter recepten: - 3-acetoxymethyl-7-(2-(2-amino-4-thiazolyl)--2-(1-methylethoxyimino)-acetamido)-ceph-3- 5 -era-4-carboxylsyre 500 mg - sterilt vandigt tilsætningsstof ad 5 ml

Eksempel 30.

Man fremstiller gelatinekapsler efter recepten: 10 - 3-acetoxymethyl-7-(2~(2-amino-4-thiazolyl)-2- -methoxyiminoacetamido)-ceph~3-em-4-carboxylsyre 250 mg - tilsætningsstof til dannelse af 1 gelatinekapsel på 400 mg

Eksempel 31.

15 Man fremstiller gelatinekapsler efter recepten: - natriumsaltet af 3-acetoxymethyl-7-(2-(2-amino-4--thiazoly1)-2-methoxyiminoacetamido)-ceph-3-em- -4-carboxylsyre 250 mg - tilsætningsstof til dannelse af 1 gelatinekapsel på 400 mg 20

Eksempel 32.

Man fremstiller gelatinekapsler efter recepten: - 3-acetoxymethyl-7-(2-(2-amino-4-thiazolyl)-2--(1-methylethoxyimino)-acetamid o)-ceph-3-em-4- 25 -carboxylsyre 250 mg - tilsætningsstof til dannelse af 1 gelatinekapsel på 400 mg

Eksempel 33.

30 -K-—

Man fremstiller et injektionspræparat efter recepten: - 3-acetoxymethy1-7-(2-amino-4-thiazolyl)-2- -vinyloxyiminoacetamid o)-ceph-3-em-4-carboxylsyre, syn-isomer 500 mg - sterilt vandigt tilsætningsmiddel ad 5 ml 35

Eksempel 34.

Man fremstiller gelatinekapsler efter recepten: - 3-acetoxymethyl-7-(2-(2-amino-4-thiazolyl)-2- -vinyloxyiminoacetamido)-ceph-3-em-4-carboxylsyre, syn-isomer 250 mg - tilsætningsstof til dannelse af en gelatinekapsel på 400 mg

DK 161082B

Farmakologisk undersøgelse.

Aktivitet in vitro.

Metode med fortyndinger i vseskemilieu.

Man fremstiller en række glas, hvori man fordeler samme 5 mængde sterilt næringsmilieu, I hvert glas fordeler man voksende mængder af det produkt, som skal undersøges, og derefter podes hvert glas med en bakteriestamme.

Efter inkubering i 24 eller 48 timer i varmeskab ved 37°C vurderes vækstinhiberingen ved gennemlysning, hvilket gør det mu-10 ligt at bestemme de minimale inhiberende koncentrationer MIC ud-trykt i μg/ml.

Opnåede resultater, 15 20 25 30 35 - 49 -

DK 161082 B

Η Λ H

C'- S O H

\ 00

H &£ CM m CM O KO O CM O

+5 <D ri H

φ P

p bo g -H

-d Η Φ a H

O S 10 O o H

h 4 ~ *

UtI ¢) s « H CM CM O H IP H O

Η ·> Η Λ «n<f g o cm •H \ cq ·> ·>

W H CM KO O CM fP H O

Ρ Φ1-1 P

*! ft ^

P g JT H

d φ^ o o Λ £M Λ1

d ,¾ * H O CM CM

fc Φνο S <!· - * *

CM H CM fP O CM CM O O

•H MD

d i <1-

Φ Η H

ft d g φ <t o 00 ft LP «

tp H

mo oo <r s CM d 1^-¾ m h d h cm m d VO to fe (Οι ·Η

o H · LP M3 H

o ft oo o

Eh O XCinO0V£)t>, < JD Φ o H CO CO IQ O Cd CO^ CQ CO φ ·Η Ή O d

jO 3 d d Η Η EH PO

L φΗ φ φ Φ CO CO <d Φ CM

Φ dr^ d d h0 O O -P O

g dR d d O <0 <0 CG H

g (O^cd (0 i>> C0 Cd ·Η Ή

S „ +> ft <H <H Η H O

+3 CQ ‘1 CQ d Μ -H O J3

rn d dddtQWCO-PO

ogo-podddrQii OO O CO O O O O d CO

O CQ O ·Η O O O O ω·ΗΟ-

OHOCQOOOO ,d tP

OS ΟΦ O O O O CQ O UD

Η Ή H d H O O O d *H

!>,d >>d -Ρ -Ρ -Ρ H doo ,d -Η ,d ·Η ,d ftftftH Φ PH ftH ft Φ Φ Φ ·Η rd Ο

cOHcOHcOdddOdO -Ρ ·Η -Ρ·Η -Ρ -Ρ -Ρ -Ρ (0 WEH

CQO CO Ο CO CQ CQ CO PQ W <£

' 50 ' DK 161082 B

Η P CM lf\ CM CM

^ S O O HO CM O CO H

\ 00 - - --Ρ H ht <h O O O O O O O O

X Φ Φ a V// \V \>

3 bO p. ' V

X5 H S H

O S! Φ P CM IA CM CM

β H too O O HO CM O CM H

ft Ή P i—i <( ^ »v ·> ·* ~ *V ·*

Φ S CM 0 0-0 0 OOOO

^ V/ •

H * H il CM H CM CM

<H<r S OH t O CO O CM

Ή \ 00 Λ *· Ό *- * ^ »v

Hvo &£<f- O O - O OOOO

-P Φ i—i i. O <t P ft

β β - H

P 0) ^ p CM CM CM

O BH ϋ OH CO O Ό O CM

β P · I—1 -Cj" Λ r. ** w *

ft ΦΡ g CM O O O O O O CM O

β

-P H

β -P O

φ β h -p <D g ω -P in cd in •h ra -4" -Ρ ΚΛ

ro Ή Η β CM CM

φ w o) ip

β Φ CM faQ CM

β co β ir\

H cq £ CO ^ <J

H CO Η · K\ I o

O CM O ft (A H CM

O Η X O -f* -zi'

O Eh S Φ CM Ti H

P , « β O g β Η · -PP Φ Φ HP β -ΡΌΛβφφ^β.Η Φ CM X Φ rp ·Η ·Η Η β +3 Η Φ hO CM β β · ^ 3 Η Ο Ο g β ·Η ϋ Ή Ή g g Η Μ ·Η Φ Ηβ) Η ΗΙΡ β β ^ Η Ρ 8 Ο Ο Ο ΙΓ\ Φ φ ·Η βρ, ε ΟΙΙΟΟ ββ Ρ Φ ϊ>> Φ ft ft ft φ ho -Ρ -Ρ Φ Κ\ Φ φ β Η C0 ·Η Ο ·Η ·Η β Φ Φ ·Η β Φ Ρ tP Ρ pH Η Η -Ρ g Ρ Η Ο Ο Ο Ο Η Η β Η •Η Η ·Η ·Η >» Φ Φ Φ IQ CQ Φ βΗββε-ΗΗ-Ρβββ Φ Φ ΦφωωΕΟφφο ίϋ Ρ ί β Ρ PH -Ρ Η ε ΟΟ Ο Ο Ρ Φ Φ Μ Ο Ο Η ΦΕΗ W W Ο Η Η Φ β β Φ

Η< Μ Η-Ρ ft fccj β ft ft CQ

-51- DK 161082 B

Η Λ

C- g CM O H

S 00 CM

-P H b£ <1- M Φ Φ 3 3 bOfl ϋ H S ·Η O S <D Æ

t<<HIQ ϋ Η O H

H <f H

® g W

. Lf\ LTl ΙΛ

H * Η ί CMOOO

<M<i- g

•H S 00 mOiHOOHOOOO

tt <3- <1- <t <f

+3 Φ ^ =i A

3 §l\Jr *h in tn in 6 §2 Λ h o o o O tQ^ O ·>»>*»»>

- H <1- inOHOOHOOOO

P-) (DVD s CM H -4- <|- C\1 ΚΛ ΙΛ

C\J

•P

£ Φ O +3 in in co w h is ts •h co in oo jL, · w co Φ

φ p4 φ Η ΙΛ CO

g Κ^ΦΕηΛΗ cm cn

g Φ £ cd C5 -P Φ CO

Cd ·Η ϋ βί Ή O H ^ ti -P co m o cd g CO 4 m Η O H CO «Η ·Η ·Η Ή

cn g H in HHHH

acoocnwoooo tn-p co 3 o o o o g ^ o ζΰωΦΦωοΦΦΦΦ •P Cd t>0 +3 Cd O ·Η ·Η ·Η ·Η ο sd ο sd ο £ ,d Λ £ fiOCdCdOOOOOO Φ g ·Η η g Η ·Ρ ·Ρ ·Ρ ·Ρ Ό Ο "Ρ Ο Ο ?η £η £η £-ι •Η'ΟΦ^'ϋΛΦΦΦΦ ΟΦ?Η·ΡΦΦΟΟΟΟ ^Φφβω-ΡΜωωιο PnOnCOWf^coW Η Η Η

' 52 ' DK 161082 B

Produkt ifølge eksempel 9 Stammer MIG i itg/ml ____ 24 h 48 h 5 Staphylococcus aureus ATCC + 638 penicillinfølsom 1 2

Staphylococcus aureus UC 1 128 penicillinresistent 2 2

Staphylococcus aureus exp, nr. 54 146 . 2 2 10 Staphylococcus aureus Co 15 cephalexinresistent 10 20

Streptococcus pyogenes A 561 0,02 0,02

Streptococcus faecalis 5 432 2 10 15 Bacillus subtilis ATCC 6 633 1 . 1

Escherichia coli tetracyclinfølsom ATCC 9 637 1 1

Escherichia coli tetracyclinresistent ATCC 11 303 0,1 0,1 20

Escherichia coli exp. TOggBg 1 1

Escherichia coli gentamicinresis^6^ tobramycin B. 55 123 D 11

Klebsiella pneumoniae exp. 52 145 0,05 0,1 25 Klebsiella pneumoniae 2 536 gentamiclnresistent 2 5

Proteus mirabilis (indol-) A 235 0,2 0,2 30 35

-53- DK 161082 B

Produkt ifølge eksempel 9 Stammer MIO i ug/ml _ 24 h 48 h 5 Proteus vulgaris (indol+) A 232 2 10

Salmonella typhimurium 420 1 10

Providencia Du 48 35 10

Pseudomonas 3 935 exp. SG 20 20

Serratia gentamicinresistent 2 532 0,4 1 15 20 25 30 35

. 54 . DK 161082 B

CM

Φ ,β O <f 60 ^ ^ Η Η 00 CM ΓΟ CM Ο Ο Ο Ο Η S Η g Η CM .

Ρ Η \ •Η 6£ ri 3 +3 φ ^ Ρ ·γ|

β Β CM

'd φ ο ,β ο ο ω η ~

β ,ϋ S<t- CM CM CM O CM · CM Ο H

P-ι Φ CM

β •H $.

H β

Η -H

•H rri

ϋ H

•H *H VO

β o <r Φ ·Η rri ft β ε Φ <f ο CD ft m cq ro Η vo æ s cm β is «Η in η β η cm m β νο m fe m ·η

ο η · in -4- vo H

β o ft σι o φ Bok<incnvoi>> ε <j jd φ o g iq cq co o cd cd cq co cq φ ·η ·η ο β p dddCHHiri-p co φφφφ(ΰΐΰ<:Φ

β β β ho Ο Ο -P

2 β d ο φ φ ra cd cd cd k"5 cd cd ·Η Ή ft P P rri rri

CQ CQ CQ ·Η O

dddlQCQCQ -PO ο ο ο β β 2 p oooo oodcd Ο O OOOOCQt-US O OP Ο Ο Ο Ο ίκΐ

Ο Ο β O O O O . CQ OVO

rri rri Φ i—' Ο Ο Ο β ·Η >>B !sP !s P P P Η βΟλ ,β O ,β CQ ,β ft ft ftrri Φ

(¾ CQ fVH ft φ Φ Φ ·Η ,β O

cdH cd ω cd β β β ο ου PS ΡΦ Ρ Ρ Ρ Ρ Cd CQ Η COP CO β CO CO CO CO PQ H<

-55- DK 161082 B

m in φ ,β cm <j- vo o o føQ * λ *» ·» ·«·

Η H CO O O O O CM O CM Η ΙΛ O CM

8H g 'HH \ •H b£

H P -P Φ X P -H

3 g mm d Φ O ,β cm -d- ido o OM I—I ·* ·» ·» «·. ·>

^ g O O O O CMOHHmOCM

CL, (1) CM CM

β -P ·> ·Η β -p o φ β ·η -ρ φ g cm μ -ρ m cd m •η μ -p m m

Μ ·Η Η β m CM

φ Μ Φ CM m CM

Ρ Φ CM bQ CM

β Μ) β m < ^ -P

•H CQ β M3 <! β Η Μ) ·η · m Ο Φ

Ο CMC ftm I ^ CM ο-P

r*i OH X H + COCO

β O EH g Φ CM OH Ή φ cd cd τ) ο β · m S β · -Pfl Φ Φ β ’ϋ β ft

g -p ρ, β cd cd ·η β *h X P

cd φ X φ m ·η h w-Ηβ Φβ

-P -P Φ bOCM β β w 3 ’H

CO HOOM .HCDinO

•Η ·Η ·Η g g ·Η Μ ·Η <f m H

Η Η H m β β Η ·Η Λ c^g ο ο ο m φ φ ·η β ρ, β cd ο οο ββ ρ cd !>» Q m -Ρ οί ρ, Ρη cd bo -Ρ β edro cd cd βΗ cdωφ •η Ο ·Η ·η β cd cd ·η ρ cd «η cd bo ίο Ρ! ,β-Η Η Η -Ρ g > Η Ο β Ο Ο Ο Ο Η Η β Η β Ο Cd •Η Η ·Η ·Η >> Φ Φ Φ Μ Μ Φ Φ g Η βΗ β β g ·Η ·Η +3 Ρ Ρ βΌΟ-Ρ Φ φφcdωMωΦΦO·H'dcΰ ΡοΡΡΡΡΡΗ-Ρ-Ρ g > Ρ β ΟΟ ο Ο Ρ φ ΦΜ ο ΟΗ Ο Φ β ΜΗ Μ Μ Ο Η Η Φ β β Cd β Μ Φ

HC Η (3-Ρ W W β (¾ Ρ CO CP Ρ CO

" 56 ' DK 161082 B

CM

0) & O IA

60 #* ·«

Η H CO LTv iniAOOOCM CM O

SKI S -i <f- CM

cp H •P bi rH 3.

-P 0)

X P- -P

38 CM

ti ® o il o in in

O CO H

Si.^ S cm m cm o in in o cm o & ω cm S3

•Η I

Η S3 Η ·Ρ H i-1

O H

•Η *H VO -p S o β

<D ·Η H CD

ft S3 S -P

CD <3* O CO

co ft tn co -η tn i—i co

co oo s CD

CM U t>~ <p Si tnn β h cm tn β β ί co tn ft tn ·η ή

U H · in <3- co Η H

O ft CT\ o o

Si ^ O KC tn<TiCO!>> t>> CD , <J 30 CD o o S co co to o cd cd S CO CO Μ φ -Η -P O Si Si

cd 3 3 3 3 Η Η ^ -P -P

P CD CD CD CD Cd Cd <! CD CD

CO Si in Si bo O O -P-P

3 3 3 o ω ω co cd cd cd i>> cd cd ·η ·η ή ft Ή Ή Η Η Η CO CO CQ ·Η Ο Ο 3 3 3 to co to -ρ ο ο ο ο ο 3 3 3 γΩ ο ο oooo3cd edin ο ο ΟΟΟ ΟΚ>·ΗΙ>-·Ηθ ο ο-ρ ο ο ο ο & tn Λ tn ο ο S3 ο ο Ο Ο-CQ oco ο Η Η CD Η Ο Ο Ο 3 ·Η ·Η Η >^·Ρ >> -Ρ -Ρ -Ρ Η ίπΟ\ ίπΗ

ί ο ϋ 10 i ft ft ρ, Η (D CD

ft CO ft-P ft CD CD CD ·Η 430 i3 ϋ cdHcdcocdSiSiSiOOOOO -pta-pcD-p-p-p-PcdcogHioEH CO <P CO Si CO CO CO CO SQ ft <; ft <3

' 57 " DK 161082 B

φ rj o o o oooooooo

ω O O <T OCMOOOOOO

Η H 00 Η Η H H H ^ T1 H

s ^ s o- f\ Λ N /\ N

H bC

H d +J Φ

Mg 'H

<§ i o Λ o O O OOOOOOOO

OWH O O <fr OHOOOOOO

u ,¾ S <j- Η Η Η HHHHHH

*φ w i\ \ A K Λ α> .d c\i in hD ·* *

H H CO H HO OOHCMIAOIOO

υιό S 4 H -i <r <hh \ H b£ h d

-P Φ Λ P Ή d S

•d Φ O ,β CM min

fi.« g -ί Η HO OOOCMmOCMO

fL, φ C\J H <r <r β

•H

-P o d Ή Φ S Od -P in cd m m -p in m •h h si m cm οι ω cm m c\i

Φ CM bO CM

vo β m <i P

PQ d co < ^ S

ιο h . m ^ o φ cm o am i ^ cm o-p, OH X H + wwrn Η β Φ CM ΟΗ_ H ^ S ti o s . m co

. -p p ΦΦ β ·ΰ d &P/D

β ft β cd co h d h £ β 2 φ (xj φ m Η H ' Η β Φ β *? « φ hø CM d Cl w 0. H ^ g ποθώ s q m o cd

Cd HH SS H w H <]· m H O

-P γΗγΗΙΠΡΡ co ooinøcD ·η h ft 3 ti u

o o G G Pd^fiin-P

(¾ ft ft cd bo -P β "

CdCd β Η β ™ J}5 .p η h G cd cd h 3 co h cd bo γ ÆÆhhh-p S >h o G p OOOHHd Ρ β 2 ^ o Η Η Φ ΦΦ W CO Φ Φ S Η H - β β S Η Η -P d d β 'β o P ? φ φ cd οι οι οι φ φ oho cd w «ΰΛβ,Ω,αΗ-Ρ-Ρθ > d βΦ

o Od φ Φ CO o OH O Φ β -P

CO ΙΟΟΗΗΦ β β cd β Φ Φ fi

l3Eiq-PWfc*^ftftt0ftP-iCQW

- 58 - DK 161082 B

Eksperimentel infektion med Escherichia coli (T) °26B6* A) Man undersøger virkningen af produktet ifølge eksempel j 4, 6, 14 og 16 på en eksperimentel infektion med Escherichia coli j på mus. Man inficerer hold på 10 hanmus med en gennemsnitsvægt på i 5 21,5 g ved intraperitoneal indsprøjtning af 0,5 ml af én 24 timer j gammel kultur i næringsbouillon af stammen Escherichia coli (!)

OggBg fra Pasteur-inétituttet fortyndet til 1/6 med destilleret vand.

Man indgiver en bestemt mængde af produktet ved subkutan 10 injektion eller oralt 1 time, 5 timer og 24 timer efter indsprøjtningen.

Man noterer dødeligheden i løbet af 8 dage.

Opnåede resultater: . .Dødelighed efter Overlevende . 15 1)08:18_ 21 h 50 28h 50 52 h mus den 8«daé

Kontrol 9 1 0/10 0,05 mg subkutant 10/10 0,1 mg subkutant 10/10 0,25 mg subkutant 10/10 20 o,l mg oralt 1 9/10 0,25 mg oralt 10/10 0,5 mg oralt 10/10 B) Idet man arbejder under lignende betingelser, og idet man inficerer mus med en gennemsnitsvægt på 22,5 g ved intraperi- 25 toneal indsprøjtning af en 24 timer gammel kultur af stammen Escherichia coli (T) °26B6 fortyndet til 1/5, får man følgende: Resultater med produktet ifølge eksempel 4. 6« 14 og 16; 30 35

- 59 - DK 161082 B

w

<D

•d b0

£ cd OOOOOOO

Φ Ti Η Η Η Η Η Η H

φ · O 4 O CM in O

H CO HH

U

Φ £ > Φ 0 *d

bo I

'dl· cm

-i I

Λ I h

O

IH I Λ I

VO O CM

<f· ni

Λ I CM CM

CM

Φ Λ H

•P H <H η I Φ

Λ I

-d u)0 H

Φ CM N

§ Λ I

•ri LT\ θ| H

h cm n| Φ

S -i | HH

P CM | no cm cm ni ,£ , CM O 00 CM <1- cm n|

Λ n| η H

c^nl

Λ n| H

1S<H

-μ -μ -μ -p *π> £ £ £ £ 1 Φ cd cd cd cd -ti > -P -P -P ·Ρ

£ cq 2222 -P-P-P

cd bo ^^^^HHH

££ ,α ,ω ,q ,ω cd cd cd ΦΗ d d £ d £ £ £

pq H raracQtQOOO

rH

s W bO bO bO b0 bO b0 •h nn seeess ra o - o £ o η n Q •p'dHCMnn n

i£ M £ O O O O H CM

·ν #» * * * * wn> o o o o o o 60 - DK 161082 B j i

Eksperimentel infektion med Salmonella typhimurium.

Man undersøger virkningen af produktet fra eksempel 7 på en eksperimentel infektion med Salmonella typhimurium på mus* j

Man inficerer hold på 10 mus med en gennemsnitsvægt på j 5 20,5 g ved intraperitoneal indsprøjtning af 0,5 ml af en 24 timer j i gammel kultur i oxoidbouillon af stammen Salmonella typhimurium 52K —fortyndet til 1/75 med destilleret vand*

Man indgiver en bestemt mængde af produktet ved subkutan injektion 4 timer, 8 timer, 24 timer og 32 timer efter injektionen. 10 Opnåede resultater; 15 i

J

20 25 30 » 35

. 61 _ DK 161082 B

(1) a

Φ O O O O O O

J>fi HHHHHH

Φ di bi \ \ \ \ — \ h d cd o ro in n σι o in d h

Q> W

> 3 * oeco •dj c\i CTi|

'dl HH H

ool

dj ro c\J H

dj ro H

•

dj H

in| u ώ φ dj -p

<H

Φ dl d o| <f

Q) H

Λ w •Η Λ ri \D H ω in| d s P o

3 H

in <r dj

OM H CM I

d|

00 H

cmI

d|

ιη| H

cm I

O

m d h

H

CM

H bO

O bO 6 bp M U S S fcn

•Η -P in bo bO

ra d H cm in S S

o o ·> *

p W O O O H CM

- 62 - DK 161082 B

Eksperimentel infektion med Proteus mirabilis.

Man undersøger virkningen af produkterne fra eksempel31 på en eksperimentel infektion med Proteus mirabilis på mus.

Man inficerer hold på 10 mus med en gennemsnitsvægt på 22 g 5 ved intraperitoneal indsprøjtning af 0,5 ml af en 24 timer gammel I kultur i oxoidbouillon af stammen Proteus mirabilis A.23?fortyndet 1 til 1/4. .

Man indgiver en bestemt mængde af produktet 1 time, 5 timeri og 24 timer efter indsprøjtningen. j 10 ^ 1

Opnåede resultater: j i i i i i 15 20 j 25 30 35

' 63 - . DK 161082 B

Φ τ5 g > Φ 6C Ο Ο Ο Ο Ο Ο Ο 0) ti Cd Η Η Η Η Η Η Η \ \ ^ ^ Μ ο ο m ο ο ο Ο) 0 . Η Η Η > SCO Ο

θ| CM

Μ

«I

Λΐ

VD CM CM

<π

LO

<t Η Λ Η ro| §ι

CMI

Λ\ 00 CM Η

CMI

Ρ φ ο

•ρ CM

<H Λ HH

0) -ί CM •ϋ Φ ΙΟ Λ -5 •η ro

Η CM

φ •d ο s ro Ρ £

ίο CM

Ο γΗ Λ ro

CM

in Η

& HH

CM

CM

O

IO

Λ σι ro Η

CM

in «0

-S Η VD

«#»♦*·

HH HH HH HH HH HH

<MH CH Η Ή H *HH <H H 'HH

•Η ·Η ·Η ·Η ·Η ·Η Η 60 Η Η Η Η Η Η-ΡΦΕ-ΡΦ&Ο-ΡΦ -Ρ Φ 60 -Ρ Φ -Ρ Φ Ο ,Μ ft ^ ft g ,¾ ft 60 £5 ft g ^ftbO^ft ^ døm dB 3 g g d g 3 6 B 3 6 n Ρ -d ®cm d 0)tn xi (i) d Φΐη d φ ti φ 60 c! O CO O O WO O 10 H O to CM O to LO O CO g

isd ft®0 ft Φ O ft Φ O ft Φ O ft ΦΟ ft Φ H

- 54 " DK 161082 B

Undersøgelse af den akutte toksicitet på mus ad intravenøs ve .i.

Den akutte toksicitet af produktet fra eksempel 7 "bestemmes på hunmus på 19-21 g, Swiss CDI Specific Pathogen Free (opdræt CH. Hiver - Frankrig), på hold på 8-10 dyr pr. dosis af forbindel-5 sen«

Dyrene holdes i observationsperiodens 4 dage i et beskyttet bur (temperatur 21°C +1°C, konstant fugtighed,, luftovertryks-lokale) med fri adgang til mad og drikkevand.

Produktet fra eksempel 7 opløses i en koncentration på 10 100 mg/m-l i apyrogent sterilt destilleret vand. Det indsprøjtes i en halevene i et variabelt rumfang med en hastighed på 1 ml pr. minut.

Dosis mg/kg Dødelig på dag nr. Total dødelighed _ 1 2 5 4 _ 15 500 0/10 1000 0/10 2000 0/8

Den dødelige dosis er over 2000mg/kg.

Symptomatologi.

20 Der konstateres intet forgiftningssymptom hverken under indsprøjtningen eller i iagttagelsesperioden.

25 30 35

Claims (13)

1. Analogifremgangsmåde til fremstilling af syn-isomere ce-phalosporansyrederivater med formlen I NH A . 10 ' O co2a hvor R' betegner et hydrogenatom eller en mættet eller umættet alkylgruppe med 1-4 carbonatomer, og A betegner 15 enten et hydrogenatom eller et alkalimetal, jordalkali-metal, magnesium eller en protoneret organisk amin, kendetegnet ved, at a) 7-amino-cephalosporansyre med formlen Η-,Ν S 20 Ύ-Γ Ί y^-*^^ai2-o-c-cH3 ' o co2h 25 omsættes med en syre med formlen II NH-R, X S » (II) 30 '-=Li c /C02H II N OR' 1 syn-isomer 35

66. DK 161082 B j eller et funktionelt derivat af denne syre, i hvilken | formel II R^ betegner en gruppe, som let kan elimineres ved I sur hydrolyse eller ved hydrogenolyse, og R', betegner en | -L i gruppe, som let kan elimineres ved sur hydrolyse eller ved 5 hydrogenolyse, eller en mættet eller umættet alkylgruppe med 1-4 carbonatomer, til fremstilling af et produkt med formlen la j j NHR1 ] 10 1 S N \ — / s (la) ! ''C-C-NH ---^ ^ j LJ 1 I —n\^^ch,-o-c-ch 0R,1 T 2 o CO-H 15 syn-isomer hvor R^ og R'^ betegner det samme som ovenfor, og forbind-20 elsen med formlen la hydrolyseres eventuelt i surt miljø eller hydrogenolyseres til fremstilling af en forbindelse med formlen Ib NH_ 2S X Δ S N \ — / (Ib·) s-s-NH -i—τ'S r or’ υ γ ch2-o-c-ch3 30 c°2" ° syn-isomer hvor R' betegner et hydrogenatom eller en mættet eller 35 umættet alkylgruppe med 1-4 carbonatomer, hvilken formel svarer til en forbindelse med formlen I, hvor A betegner et hydrogenatom, og forbindelsen med formlen Ib omdannes om

67. DK 161082 B ønsket til salt, eller b) til fremstilling af forbindelser med formlen Ib NH, 5 1 S H 0 \ —(Ib) T .s ? η—r ^ OR' λ-Nv. 10 0^ y ch2-oc-ch3 o co2H syn-isomer og salte deraf, i hvilken formel Ib R' betegner et 15 hydrogenatom eller en mættet eller umættet alkylgruppe med 1-4 carbonatomer, hvilken formel Ib svarer til en forbindelse med formlen I, hvor A betegner et hydrogenatom, behandles enten et salt af en forbindelse med formlen la, hvor R^ betegner en gruppe, som let kan alimineres ved sur 20 hydrolyse, og R'^ betegner en gruppe, som let kan elimineres ved sur hydrolyse, eller en mættet eller umættet alkylgruppe med 1-4 carbonatomer, med en syre til fremstilling af en forbindelse med formlen Ib, eller også behandles et salt af en forbindelse med formlen la, hvor betegner 25 en gruppe, som let kan elimineres ved hydrogenolyse, og R* ^ betegner en gruppe, som let kan elimineres ved sur hydrolyse, eller en mættet eller umættet alkylgruppe med 1-4 carbonatomer, med et hydrogenolysemiddel til fremstilling af et salt af en forbindelse med formlen Ib. 30

2. Analogifremgangsmåde ifølge krav lr kendetegnet ved, at man fremstiller 3-acetoxy-methyl-7-(2-(2-amino-4-thiazolyl)-2-methoxy-iminoacetamido)-ceph-3-em-4-carboxylsyre, syn-isomer. 35

3. Analogifremgangsmåde ifølge krav 1, kendetegnet ved, at man fremstiller natriumsaltet af 3-acetoxy-

68. DK 161082 B -methyl-7-(2-(2-amino-4-thiazolyl)-2-methoxy-imino-acetami-do)-ceph-3-em-4-carboxylsyre, syn-isomer.

4. Analogifremgangsmåde ifølge krav 1, kend e t e g-5 n e t ved, at man fremstiller det krystallinske natriumsalt af 3-acetoxy-methyl-7-(2-(2-amino-4-thiazolyl)-2-me-thoxy-imino-acetamido)-ceph-3-em-4-carboxylsyre, syn-isomer.

5. Analogifremgangsmåde ifølge krav 1, kendetegnet ved, at man fremstiller det krystallinske natriumsalt af 3-acetoxy-methyl-7-(2-(2-amino-4-thiazolyl)-2-me-thoxy-imino-acetamido)-ceph-3-em-4-carboxylsyre, syn-iso- mer, i hydratiseret eller solvatiseret form. 15

6. Analogifremgangsmåde ifølge krav 1, kendetegnet ved, at man fremstiller forbindelser med den almene formel I ifølge krav 1, hvor A betegner et hydrogenatom, et natriumatom eller en protoneret diethylaminbase. 20

7. Analogifremgangsmåde ifølge krav 1, kendetegnet ved, at man fremstiller 3-acetoxy-methyl-7-(2-(2--amino-4-thiazolyl)-2-ethoxy-imino-acetamido)-ceph-3-em-4- . . -carboxylsyre, syn-isomer, og salte deraf med alkali-, 25 jordalkalimetaller, magnesium eller protonerede organiske aminer.

8. Analogifremgangsmåde ifølge krav 1, kendetegnet ved, at man . fremstiller 3-acetoxy-methyl-7-(2-(2- 30 -amino-4-thiazolyl)-2-((2-propenyl)-oximino)-acetamido)- -ceph-3-em-4-carboxylsyre, syn-isomer, og salte deraf med alkali-, jordalkalimetaller, magnesium eller protonerede organiske aminer.

9. Analogifremgangsmåde ifølge krav 1, kendetegnet ved, at man fremstiller 3-acetoxy-methyl-7-(2-(2--amino-4-thiazolyl)-2-((1-methyl-ethoxy)-imino)-acetamido)-

69. DK 161082 B -ceph-3-em-4-carboxylsyre, syn-isomer, og denne forbindelses salte med alkali-, jordalkalimetaller, magnesium eller en protoneret organisk amin. 5 10 15 20 25 30 35