DK161384B - Pyrazolooe3,4,5-klaaacridinforbindelser og farmaceutiske praeparater indeholdende saadanne forbindelser - Google Patents

Description

i

DK 161384 B

i i

Den foreliggende opfindelse angår hidtil ukendte pyrazolo[3,4,5-kl]acridinforbindelser og farmaceutiske præparater indeholdende sådanne forbindelser.

Forbindelserne ifølge opfindelsen har farmakologiske 5 egenskaber og er nyttige antimikrobielle midler og antitumormidler .

Pyrazolo[3,4,5-kl]acridinringsystemet er kendt, omend ikke i fuldstændig aromatisk form. De følgende rapporter er repræsentative for den kendte litteratur 10 vedrørende pyrazolo[3,4,5-kl]acridinringsystemet: Tetrahedron Lett. 1970, 3091; JSC Perkin I, 1973, 2697;

Chem. Ber., 109, 1898 (1976).

Opfindelsen angår pyrazolo[3,4,5-kl]acridinfor-bindelser, der i fri baseform har strukturformlen 1 15 eller 2:

Rr^ N-N N" 9 aVV3 JliifYirV*3

«ι-t I JL IJ il J

20 7 R6 N02 *6 *°2 1 2 25 og farmaceutisk acceptable salte heraf, i hvilke formler R. og R0 hver betegner alkylen-NR R . hvor alkylen \ δ x y er lige eller forgrenet C2-C^-alkylen, og Rx og R hver især betegner H, lige eller forgrenet C^-C^-alkyl eller 30 lige eller forgrenet C^-C^-hydroxyalkyl, hvorhos, når Rx og Ry begge er C^-C^-alkyl, aminogruppen eventuelt er N-oxygeneret; R^ er H eller N02; R^ er H eller lige eller forgrenet C^-C^-alkyl; R^ er H eller én eller to grupper valgt blandt hydroxy, chlor, lige eller forgre- ! 35 net C1-C4-dialkylamino, lige eller forgrenet C.j-C4-al-kyl, lige eller forgrenet -Cg-alkoxy, der eventuelt er substitueret med diethylaminoethoxy; benzyloxy eller benzyloxy substitueret med methoxy, lige 2 DK 1613848 eller forgrenet C^-C-j g-trialkylsilyloxy, lige eller forgrenet 2-alkanoyloxy, benzoyloxy eller benzoyloxy substitueret med methoxy.

Opfindelsen angår fortrinsvis pyrazolo[3,4,5-kl]-5 acridinforbindelser, der i fri baseform har strukturformlen 1 eller 2, hvori og R2 hver betegner ch2ch2nhch2ch2oh, ch2ch2n(c2h5)2, CH2CH2N(CH3)2, CH2CH2NHCH3, CH2CH2NHC2H5 eller CH2CH2CH2N(CH3)2; R3 er H eller N02; Rg er H eller me-10 thyl; R^ er H, OH, lige eller forgrenet -Cg-alkoxy, lige eller forgrenet Q-trialkylsilyloxy eller lige eller forgrenet C2-C^2-alkanoyloxy.

Forbindelserne ifølge opfindelsen danner farmaceutisk acceptable salte med både organiske og uorgani-15 ske syrer. Eksempler på passende syrer til saltdannelse er saltsyre, svovlsyre, fosforsyre, eddikesyre, citronsyre, oxalsyre, malonsyre, salicylsyre, æblesyre, fumar-syre, ravsyre, ascorbinsyre, maleinsyre, methansulfon-syre, isethionsyre, mælkesyre, gluconsyre, glucuron-20 syre, sulfaminsyre, benzoesyre, vinsyre, pamoesyre og lignende. Saltene fremstilles ved at bringe den frie baseform i kontakt med en ækvivalent mængde af den ønskede syre på konventionel måde. De frie baseformer kan gendannes ved behandling af saltformen med en base.

25 Der kan f. eks. anvendes fortyndede vandige baseopløsninger. Fortyndede vandige natriumhydroxid-, kalium-carbonat-, ammoniak- og natriumhydrogencarbonatopløsnin-ger er egnede til dette formål. De frie baseformer adskiller sig i nogen grad fra deres respektive salte med 30 hensyn til visse fysiske egenskaber, såsom opløselighed i polære opløsningsmidler, men saltene er iøvrigt ækvivalente med deres respektive frie baseformer for så vidt angår opfindelsen.

Forbindelserne ifølge opfindelsen kan forekomme 33 i såvel usolvatiserede som solvatiserede former, herunder hydratiserede former. Almindeligvis er de solvatiserede former med farmaceutisk acceptable opløsningsmidler, såsom vand, ethanol og lignende, ækvivalente med

DK 161384 B

3 de usolvatiserede former for så vidt angår opfindelsen.

Forbindelserne med formlerne 1 og 2 kan eksistere i ligevægt i tautomere former som vist nedenfor: 5 N-N -n ® Ύθ2 10 2 R1nn_n _ H no2 no2 20

Opfindelsen angår mere foretrukket forbindelser, der i fri baseform har strukturformlen 2a:

N-N

25 JL R

3 r6 N02 30 og farmaceutisk acceptable salte heraf, i hvilken formel R2, R3 og Rg har de ovennævnte betydninger, og R^1 er H, lige eller forgrenet C^-C^-alkyl, lige eller forgrenet C2-Ci2-alkan°yl eller lige eller forgrenet C^-C^Q-tri-35 alkylsilyl.

Opfindelsen angår ydermere forbindelser med strukturformlerne 1 og 2, og farmaceutisk acceptable salte heraf, der er mest foretrukne for deres farmako- j

DK 161384B

4 logiske egenskaber. Disse forbindelser i fri baseform har følgende navne: 2—[[2—(5-nitropyrazolo[3,475-kl]acridin-2(6H)-yl)-ethyl]amino]ethanol, 5 9-methoxy-N,N-dimethyl-5-nitropyrazolo[3,4,5-kl]-acri-din-2(6H)-ethanamin, N,N-diethyl-9-methoxy-5-nitropyrazolo-[3,4,5-kl]-acri-din-2(6H)-ethanamin, N,N-diethyl-9-methoxy-5-nitropyrazolo[3,4,5-kl]-acridin-10 1(6H)-ethanamin, N,N-diethyl-5-nitropyrazolo[3,4,5-kl]acridin-2(6H)-ethanamin, 2-[2-(diethylamino)ethyl]-2,6-dihydro-5-nitropyrazolo-[3,4,5-kl]acridin-9-ol, 15 9-ethoxy-N,N-diethyl-5-nitropyrazolo[3,4,5-kl]acridin-2(6H)-ethanamin, 9-butoxy-N,N-diethyl-5-nitropyrazolo[3,4,5-kl]-acridin-2 (6H)-ethanamin 2,2-dimethylpropansyre-2-[2-(diethylamino)ethyl]-2,6- 2 0 dihydro-5-nitropyrazolo[3,4,5-kl]acridin-9-yl-ester, 9-[[(1, l-dimethylethyDdimethylsilylioxyl-iSUN-diethyl- S-nitropyrazolol 3,4,5-kl]acridin-2(6H)-ethanamin, 2—[2—(diethylamino)ethyl]-2,6-dihydro-5-nitropyrazolo-[3,4,5-kl]acridin-9-ol-acetatester, 25 N,N-diethyl-5-nitro-9-propoxypyrazolo[3,4,5-kl]-acridin-2(6H)-ethanamin, kulsyre-[2-[2-(diethylamino)ethyl]-2,6-dihydro-5-nitro- pyrazolo[3,4,5-kl]acridin-9-yl]ethylester, butansyre-[ 2 - [ 2- (diethylamino) ethyl ] -2,6-dihydro-5-nitro- 3 0 pyrazolo-[3,4,5-kl]acridin-9-yl]ester, 9-ethoxy-N,N-dimethyl-5-nitropyrazolo[3,4,5-kl]-acridin-2(6H)-ethanamin, N,N-diethy1-9-methoxy-5-nitropyrazolo[3,4,5-kl]-acridin-2(6H)-propanamin, 35 9-methoxy-N,N-dimethyl-5-nitropyrazolo[3,4,5-kl]-acri-din-2(6H)-propanamin, 9-ethoxy-N,N-dimethyl-5-nitropyrazolo[3,4,5-kl]-acridin-2(6H)-propanamin,

DK 161384 B

5 2-[3-(dimethylamino)propyl]-2,6-dihydro-5-nitro-pyra-zolo[3,4,5-kl]acridin-9-ol, 2-[3-(dimethylamino)propyl]-5-nitropyrazolo[3,4,5-kl]-acridin-9-ol-acetatester, 5 2,2-dimethylpropansyre-[2-[3-(dimethylamino)-propyl]-2,6-dihydro-5-nitropyrazolo[3,4,5-kl]-acridin-9-yl- ester, N-ethyl-9-methoxy-5-nitropyrazolo[3,4,5-kl]acridin-2(6H)-ethanamin, 1 o 9-methoxy-N,N-dimethyl-3,5-dinitropyrazolo[3,4,5-kl]-acridin-2(6H)-ethanamin, 9-methoxy-N,N-dimethyl-3,5-dinitropyrazolo[3,4,5-kl]-acridin-2(6H)-propanamin, 9-ethoxy-N,N-diethyl-3,5-dinitropyrazolo[3,4,5-kl]-15 acridin-2(6H)-ethanamin, 2-[2-(diethylamino)ethyl]-2,6-dihydro-3,5-dinitro-pyrazolo[3,4,5-kl]acridin-9-ol, N,N-diethy1-9-methoxy-3,5-dinitropyrazolo[3,4,5-kl]-acridin-2(6H)-ethanamin, 20 og farmaceutisk acceptable salte heraf.

Fremstilling af forbindelser med strukturformlen 3:

RK

N-N

25 /S/vW113 ra—r Thi H no2 kan ske ved, at man omsætter en 1,9-dichloracridin med 30 strukturformlen 4:

Cl Cl r ^yVVR3 H N02 og R1-substitueret hydrazin med strukturformlen H2NNHR^ og isolerer produktet i fri baseform eller farmaceutisk

DK 161384 B

6 acceptabel saltform, i hvilke formler har den ovennævnte betydning, og R er H eller én eller to grupper ϋ valgt blandt hydroxy, chlor, lige eller forgrenet C.|-C4-dialkylamino, lige eller forgrenet C^-C^-alkyl, lige 5 eller forgrenet -Cg-alkoxy, der eventuelt er substi tueret med diethylaminoethoxy; eller benzyloxy eller benzyloxy substitueret med methoxy. Reaktionsbetingelserne kan varieres i vid udstrækning. ;

Reaktionen udføres sædvanligvis i et opløsningsmiddel 10 ved temperaturer mellem ca. 0° og ca. 80°C. Egnede opløsningsmidler er THF, THF-methanol, toluen, chlorbenzen, acetonitril og chloroform. Når R^ er nitro, kan forbindelser med strukturformlen 3 også opnås ved på én gang - - at tilsætte to ækvivalenter af en R^-substitueret hydra-15 zin til et 1-chlor-2,4-dinitroacridinonderivat ved ca.

25°til 50°C. Når reaktionen ophører, syrnes blandingen med overskud af en stærk syre.

Fremstilling af forbindelser med strukturformlen 2: 20 y&2

• N—N

k~\Å„kJ

25 R6 N02 kan ske ved, at man omsætter 1-chlor-4-nitro-9(10H)-acridon med strukturformlen 5: 0 Cl 30

ra—f T T T

L6 no2 og mindst to ækvivalenter af en R2”substitueret hydrazin 35 med strukturformlen H2NNHR2 og isolerer produktet i fri baseform eller farmaceutisk acceptabel saltform, i hvilke formler R2 og Rg har de ovennævnte betydninger, og

DK 161384 B

7 R^ er H eller én eller to grupper valgt blandt hydroxy, chlor, lige eller forgrenet C^-C^-dialkylamino, lige eller forgrenet C^-C^-alkyl, lige eller forgrenet C^-Cg-alkoxy, der eventuelt er substitueret med diethylamino-5 ethoxy; eller benzyloxy eller benzyloxy substitueret med methoxy. Reaktionsbetingelserne kan varieres i vid udstrækning. Reaktionen udføres sædvanligvis i et opløsningsmiddel ved temperaturer mellem ca. 25° og ca. 130°C. Egnede opløsningsmidler 10 er toluen, tetrahydrofuran, acetonitril og pyridin. Der kan anvendes syrebindende midler, såsom Et3N el ler pyridin-opløsningsmiddel, idet der dog foretrækkes et overskud af hydrazinen.

Fremstilling af forbindelser med strukturformlen 15 6: /*2

N-N

^rW°2

ra—t Jfi ff J

20 r6 no2 kan ske ved, at man omsætter en 1-chlor-2,4-dinitro-9(10H)-acridon med strukturformlen 7: 25 O Cl NO, i6 «°2 30 med ét ækvivalent af en R2-substitueret hydrazin i nærværelse af en tertiær amin, såsom triethylamin eller pyridin, ved temperaturer mellem ca. -20° og ca. 0°C. Reaktionen kan udføres i et opløsningsmiddel, såsom acetonitril, pyridin, THF eller THF-methanol.

35 De nødvendige hydraziner fremstilles ved omsæt ning af hydrazin med det pågældende alkylhalogenid, XR^ eller XR2, hvori R^ og R2 har de ovennævnte betydninger

DK 161384 B

8 [j. Med. Chem., 7, 403 (1964)] , eller ved andre i teknikken kendte fremgangsmåder.

Fremstilling af forbindelser med strukturformlen 2, hvori Rg har den ovennævnte betydning, er H, R2 er 5 CH„CHnNR R , hvor R og R har de ovennævnte betydninger, 2 2 x y' x^y 3 og R er H eller én eller to grupper valgt blandt hy-droxy, chlor, lige eller forgrenet C^-C^-dialkylamino, lige eller forgrenet C^-C^-alkyl, lige eller forgrenet C^-Cg-alkoxy, der eventuelt er substitueret med diethyl-10 aminoethoxy; eller benzyloxy eller benzyloxy substitueret med methoxy, kan ske ved, at man omsætter en 1-chlor-4-nitro-9( 10H)acridon med hydroxyethylhydrazin, hvorefter produktet behandles med p-toluensulfonyl-chlorid ved ca. 100°C i ca. 30 minutter i nærværelse af 15 pyridin og et passende opløsningsmiddel til opnåelse af en chlorethylforbindelse, hvis chloridion erstattes med en aminogruppe-NR R ved omsætning af chlorethylforbin- x y delsen med den pågældende amin i en autoklav ved ca.

100°C.

20 Fremstilling af forbindelser med formlen 1 eller 2, hvori R1, R2, R3 og Rg har de ovennævnte betydninger, °g Ra er lige eller forgrenet C^—g—trialkylsilyloxy, lige eller forgrenet C2~C12-alkanoyloxy, benzoyloxy eller benzoyloxy substitueret med methoxy, i fri baseform eller 25 farmaceutisk acceptabel saltform, kan ske ved, at man omsætter en forbindelse med formlen R-u.

N-N N-N

(<^VyV3

30 HtHξ! jTiJ 61161 HOn^BjjLJ

r6 N02 *6 med et tilsvarende reaktivt derivat af en R^-carboxyl-syre, R^-carbaminsyre, R^-kulsyre eller R^-halogenid ved 35 stuetemperatur eller over stuetemperatur i konventionelle opløsningsmidler og i nærværelse af en organisk base.

Et reaktivt derivat af en carboxylsyre, kulsyre eller carbaminsyre er et halogenid eller anhydrid deraf

DK 161384 B

9 og fortrinsvis de tilsvarende syrechlorider.

Det foretrukne halogenid er chloridet eller bro-midet, og den foretrukne organiske base er triethylamin eller diisopropylethylamin.

5 Reaktionen udføres ved ca. 25 til 100°C i opløs ningsmidler, såsom tetrahydrofuran (THF) eller 1,2-di-chlorethan.

Rensning af forbindelser eller produkter foretages på vilkårlig egnet måde, fortrinsvis ved kolonnekro-10 matografi eller krystallisation.

Opfindelsen angår desuden et farmaceutisk præparat, der omfatter en forbindelse med strukturformlen 1 eller et farmaceutisk acceptabelt salt heraf i kombination med en farmaceutisk acceptabel bærer.

15 Opfindelsen angår endvidere et farmaceutisk præpa rat, der omfatter en forbindelse med strukturformlen 2 eller et farmaceutisk acceptabelt salt heraf i kombination med en farmaceutisk acceptabel bærer.

Sammenfattende kan det anføres, at de omhandlede 20 forbindelser med formlerne 1 og 2 finder anvendelse til behandling af mikrobielle infektioner hos mammalia-individer, til behandling af leukæmi hos mammalia-indivi-der og til behandling af faste tumorer hos mammalia-in-divider, idet man administrerer en tilstrækkelig mængde 25 af en forbindelse med formlen 1 eller 2 eller et farmaceutisk acceptabelt salt heraf i kombination med en farmaceutisk acceptabel bærer til et mammalia-individ, der har behov herfor.

30 Fysiske og farmakologiske egen skaber af forbindelserne.

Pyrazolo [3,4,5-kl] acridinforbindelserne ifølge opfindelsen varierer i farve fra beige til orange. De er krystallinske stoffer, som er stabile under normale 35 atmosfæriske betingelser. Forbindelserne har typisk smeltepunkter eller dekomponeringspunkter i området fra ca. 100° til ca. 300°C.

10

DK 1613 8 4 B

Forbindelserne er nyttige som farmakologiske midler til behandling af bakterieinfektioner eller faste tumorer hos varmblodede dyr eller mennesker. Aktiviteten af repræsentative forbindelser ifølge opfindelsen 5 blev godtgjort ved hjælp af tests, der skal beskrives kort i det følgende.

Testprotokoller 1. In vitro 10 a) Én test er cellescreeningstesten med in vitro prolifererende humane colon-adenocarcinoma(HCA)celler.

Ved denne test trypsiniseredes HCT-8-celler (HCA-celle-linie modtaget fra Yale University) under anvendelse af trypsin-EDTA. En enkeltcellesuspension opnås ved at 3 15 passere cellerne gennem en 26 gauge nål med en 20 cm sprøjte. Der fremstilles en cellesuspension under anvendelse af RPMI 1640 + 10% FCS + 50 //g/ml gentamicin-sulfat med en cellekoncentration på 30.000 celler/ml. Cellesuspensionen dispenseres i Linbro-plader med 24 20 brønde, 1 ml/brønd. Pladerne inkuberes i ca. 48 timer ved 37°C i en 5% CC^-atmosfære. På dette tidspunkt tilsættes testforbindelser i den rette koncentration. 5 μΐ af 200 μg/ml-stammeopløsning sættes til hver brønd ved en primær test. 10 μΐ af den rette fortynding sæt-25 tes til hver brønd til en titreringstest. Pladerne re-inkuberes i yderligere 60 til 65 timer ved 37°C i en 5% CC^-atmosfære. Cellerne lyseres under anvendelse af en blanding af kationisk overfladeaktivt middel, iseddike og natriumchlorid. 2 ml af den lyserede cellesuspension 30 fra hver brønd sættes til 8 ml fortyndingsmiddel. Antallet af kærner bestemmes under anvendelse af en Coulter-tæller (ZBI-model), og der beregnes en procen-tisk vækst for hver medikamentkoncentration. Ud fra denne bestemmes en ID^-q (den molære koncentration af 35 forbindelsen, der bevirker 50% væksthæmning).

b) En anden test er in-vitro-antibakterie/anti-fungus(ABF)testen. Forbindelserne testes for antimikro-biel virkning ved en agarskive-diffusionsprøve, en mi-

DK 161384 B

11 krobiologisk standardmetode til testning af antibiotika. '

Efter inkubering af hver kultur med en testforbindelse bestemmes der en hæmningszone. Zonediameteren (mm) for aktive forbindelser ligger i området fra et minimum på 5 14 mm til så meget som 60 mm, idet en større diameter er udtryk for højere aktivitet. Af bekvemmelighedsgrunde er der angivet værdier for Alcaligenes viscolactis,

Sarcina lutea, Branhamella catarrhalis, Bacillus subtilis og Streptococcus faecalis.

10 c) En anden test er PDC-testen. L1210 celler, en museleukæmicellelinie, dyrkedes i RPMI 1640 suppleret med 10% fetal okseserum og genamicin (50 μg/ml). Der fremstilledes medikamentfortyndinger i et passende opløsningsmiddel, og 20 μΐ af hver fortynding sattes til 15 Linbro-vævskulturplader med 24 brønde efterfulgt af til- 4 sætning af 2,0 ml cellesuspension indeholdende 3 x 10 celler pr. ml. Opløsningsmiddel- og mediumkontrolprøver blev medtaget ved hver test. Efter inkubering ved 37°C i tre dage i 5% CO2 i luft fjernedes indholdet af hver 20 brønd, og cellerne taltes i en ZBI Coulter-tæller. Den procentiske vækst beregnedes i forhold til kontrolprøverne, og medikamentaktivitetsniveauerne udtryktes som IDcjq angivet som molaritet (M) .

d) Endnu en test er in-vitro-antibakterietesten 25 (ABMF-testen), der er en anerkendt mikrofortyndingsføl-somhedsstandardprøve i Mueller-Hinton-broth mod grampositive og gram-negative bakterietestorganismer. Prøven er en modificeret udførelse af en kendt prøve, der er rapporteret i Manual of Clinical Microbiology, 30 Lennette, E. H., ed., af Barry, A.L. og C. Thornsberry på side 463-474 og af Gavan, T.L. og A.L. Barry på side 459-462, American Society for Microbiology, Washington, 1980.

Ved testen anvendes der en given bakteriekultur 35 til podning af individuelle testbrønde i mikrofortyn-dingsbakker, der indeholder vækstmedium og testforbindelse, den sidstnævnte i en mikrofortyndingsrække: 1000, 333, 111, 37, 12, 4, 1,4 og 0,46 mikrogram pr ml. De

DK 161384 B

12 opnåede podede bakker bliver hver lukket tæt til, inkuberes med blindkontrolprøver ved 37°C i 16-24 timer og aflæses derefter for minimal hæmningskoncentration (MIC), den laveste koncentration af testforbindelse, som 5 fuldstændig hæmmer bakterievæksten. MIC-værdier lavere end 333 /^g/ml angiver antimikrobiel virkning. Af bekvemmelighedsgrunde er der angivet værdier for Escherichia coli, Branhamella catarrhalis, Alcaligenes viscolactis, Streptococcus pneumoniae og Bacillus cereus.

10 2. In vivo

En anden test er in vivo-lymfocytisk leukæmi-P388-testen. De anvendte dyr er enten han- eller hun-CD2F-|-mus, seks eller syv dyr pr. testgruppe. Tumorover-15 føringen foregår ved intraperitoneal injektion af fortyndet ascitesvæske indeholdende celler af lymfocytisk leukæmi P388. Testforbindelserne administeres intra-peritonealt én gang dagligt i fem på hinanden følgende dage i forskellige doser efter tumorindpodningen. Dyre-20 ne vejes, og overlevende dyr registreres på vedtægtsmæssigt basis i 30 dage. En forbindelse betegnes "toksisk", hvis, ved eh given dosis, alle dyrene dør før fire dage efter den første injektion af medikament. Der beregnes et overlevelsestidsforhold for behandlede (T)/-25 kontrol (C) dyr. Et kriterium for effektiv virkning er et forhold T/C x 100 på større end eller lig med 125.

Se Cancer Chemotherapy Reports, del 3, 3, 1 (1972), med hensyn til en omfattende redegørelse for testen.

Disse testprocedurer gav de i de nedenstående 30 tabeller anførte resultater for repræsentative forbindelser ifølge opfindelsen.

_13____

DK 161384 B

CO i

H -I

m ^^ ^^ +; A <t ’SI ^ i—ί

^ ^ in P

E -P ‘P P

Q o o ·* S w w ID B ^ £ 03 0 ----—— -“ Q · % la t- S g s 43 to ^ ^ ω cj \o no g “ I_L_____ •H ~ "

1 8 i P

0 -¾ s s N ^ ... ή £ « CD---—----- < J _

Q tv *N

.So o

er* A CO

'-c τ— — QC // \\ <M <=>

A ' /' \V° > X

Z —< '>- Z ,H C_) Q A r- CM CO CO

^<- \ / >\ $£££ 8 £3 CO \ / I— ^ >=< .5—-- m 03 ZJXi/ Z-0C° g j? "5 \ / £ $ P, 8 a cm a 8 8 cm £

Ή \ _ / CL· CO O1 w»\*v rs r.r»r»*N

LO \ —ZZ1S O E ΠιΛΝΌ ΟιΛΝ lA CM \fl ΙΛ ^ l \ Q ^ LA CM t— A CM r- CM ί

ο/, V C

r- Vl // C CD I Γ-ρ \ // -H ° ^ ? 'o

_ _ e£ 4-3 A X X

OM 00 CJ ·Η o CM

X > i—i ~ _T

A ^ < *--—

X

o 0 O

C-J ΓΛ T““ o as i· é SI ¥- CM Ό

A _A

CD

A _ A

P ZA Ά JA “ΤΑ 1 ^ s 4" s

ft T- A PO _A

_cf^5_ cTS_ A ΓΑ

χ3" ^ T

_ ON_ON ____

NO aP X

QC Π

^CM

uj “i i S__5_ —r-: .......

Cl) I H

3C E 1) NO A

uj ω cl_ ' 14_

DK 161384 B

CD

‘H

H ^ ^ ^

S A ΙΑ A

.8 3 SS

χ—s j·) VO Γ*·* ιΛ g ___^^_ 'σι 3 p p p ε j=> p P p

H s S SS

ins S £

CO

Q -—-- 0 .

w § ^ — — s S Z«· p £

+j In S SS

<D CJ

1 - S ._E S_

g 8 P P

0 3 S S P

N —· tn 0\ Mf M3 1^ tn r- ^ ------- «1. _ ^

’> S SS

< O CM ON

_ CM_CM_v-_

Od // \\ CM O

i // \\ o O <~ Z —\ 'V- Z J · <f MD· in M CM ιΛ CO r-

\ / 'dS 00 CM M3M3CM I" CM CO

\ / >\ v- t- s- r- CM CM s— W ,p--- ^ Z—/ z-cr0 00 01

^ \ / 88R

f, \ / Q_ CO ·>»% *sr»*s W«\c\

^ s: \___/ οε A CM MO A CM CO A CM

ro t \ O 'S CM. r-. in CM ^ (D CM / \ ........——---- 0 0) \ ,) c g ^ 3 \ -5 o & T ^ ^

,η V__J fci O O O O

<Γ _ι_ϊ lA s— ’c- w m P ^ x x ^ d 2 o o o I ^ 1”Π r\ r\ rs t ΓΑ x~ <C -----—--- “

CC C3 O O

Os s— O

cj co <)· <r

o CM CM

. JL I · I

• ra OS ο ΓΟΟ. CO ΓΑ CD ΓΑ

ε Ϊ- CM "O CM

cn

' tA

CM CM O

r-1 O A Z

_, A Z Z AO

—1 Z Z A A Q CM

0) <r. A -r- Q cKz E CM Q CM UO Z ΓΆΜ g XCM^ £5> £ u°5 cr v °p ·

' " fA

< z ^ §

ad X I

A

A

M3 z -r T

Od CJ z z — _

^ CM

P 4-> ^ uj W £ I- %. Hm I« 5cm 5m _______§_5 5__

ID I H

^ ε o) n *- ro • LJ (U CL______

DK 161384B

15 -tø- Ή x-->s ω ^

Φ S

^ co ^ ji

r—I

ε ...........——-- -H ^ E -U - - 3 a

<U 33 S

CO

O---- Q .

- € r_, U T-

7? CO O

0 u c>

4-> CO

0) O M3 1 » •H —--.

"S CO "lA

“ <U *· C i<3 i ) 0 3 —

N ^ ON

u. 1/1 CD -—-- < ri ~ O i— 8 o

•ri W

^ ON

< <~ ™ /-Λ o or /7 \\ csi o I // V\ O O r—

x-< 7-z Z& 8 S SS

W --- ^ ~y —/ \ r^° æ 1:11 z=\ 7 S 8 8 88 •s>=/ l|e s a s a XD ^ / \ Qw ” <B \ \ c* ^ \ // C (D Γ- “ \__fj 'H 2 O 'o

< -t-> ιΑ X

U ΉΟ CD

X >~ no" < *.....—-- cr οω °f5 i 5 = r·*.

LO *-

fA

O

lA

Ή Z. □=

E 3TS

t-ι CO IA

jf___cT5 < 3= cr "γλ M3 δ —--Γ^Ί-

CM

CM δ cr i2

CM

δ„ —F--lSj- CO I I-C - x. ε ω <t u ο a__

DK 161384 B

16 -hn- ·’ ·" ------ .

•H —{ CO LT\

CO S P

+- w C

• ΙΛ Λ Λ T- i—f r— ia—:-:- ε -p la •h i s s 03 23 OO 00

CD

O -—--- w £ ^ ^

p ca - 'T

ω .u o o 4J "I — g LA <t 5 1] N *—

CO

Ό ® ^ <n a la

C -U _T O

O O O

N ·-* m <t <* U. -r- 'ΓΟΟ ——---- < A _ m p o > ^ <

Al /-Λ O

er // Vv ai O

// \\ ° 9 ^ 1Λ CO N N ΙΑ 0N 00 CO

^ Z-< '>“ Z .^cj 00 LA CA Csl LJ3 <3- CA CA

LA \ / >\ ^ ^ ^r-^r- ‘p )------( cl___ :- <r* CO / \ _ Ή

/ \ ^° cn 'ni O O LA Al O O O LA

^ ^ Z3 X—00 00 .§ O LA CN1 *— O O LA Al \—/ ε»]? a i ^" sfai'0" W :il v fe

CJ -H Q X ON

X > M CA ^ ““ -- - i • o„ g- 8 £

£ CA IA

UD A A

CA Q^

O LA

t—I LA ZL

Ti Z ON

LU p- ς— .

u =T £ Xco O

O £ X d~ =

Ip__CJ ______

CA

<c z S

ce i σ\_ Ό IC "t~ aT _ —_—=—---

ΖΠ. ' '’IC

°A, §4

Hn,

Al U U

°= ^CM

x 5, x 5

χΑΐ CM

-F-N 0J_____ό__ CD 1 rH ' —-‘ £ QJ fA A-

~Lil 11 α___L

DK 161384 B

17 ----—--

CO

♦H ^ * o ^ ^ \0 g J/7_______

'rn "M

σ> >h ε tf - S 8 æ d i'» CO ______ Q ———--- 0 .

~ £ p s S d +J CO ^

ω O CO

1 p ___ 1 s C .B ^ 0 3 C· N r-4 , LO ^

Lu ' CO -—-—-—- * i p •S s > <c £

CM /-Λ O

K // n 0° -pi 1' VV-Z >x O 00 ON 00 iitScvi

Z-\ Γ ^ ° S Λ·}ΙΛ os^r^J

«Λ \ / >8 ^ « ΡΛ „ s—----

i—I / ' P° 03 CT

CD ^ Z—£K CO -* O O ΙΛ 00

-Q \ / 1Λ J)\ ΟίΑΓ^Ι^ι S O O

ca OJ \ / o^cncn ° o ia TJ \-z=zJ O E 1Λ ^ O □ p·'·' l \ q ^ ° la cm ^ \____^ N r \ /) s o I f -v \__7 u o 'o o <C 4J ιΛ r- T- Ϊ '5 2 4 ·*

*- CM

< .............

% %

•si . CM

s §1_sj_ ΙΛ P^i O O _

lA ~t~ ιΑ X

'Ή -7 811 7 (A

<D ,- r-p Q

t ^ ^ I- £ ? 5_P?_ _J" -J_ “ s_M___ md x n: CE __________—

CM CM

7~N

4J _|_)

Ld LJ

CM Z 21

CC CM pM

I* I- F--- ' .........

to I -i -> 1 E Φ 2 Ξ

Ld 03 CL ^

DK 161384 B

18 π» η

•H

?! ^ .8 S cd ^ A £2 oo r-H ^ *“· is--:- E -y ^ * S 8 s (D 3D o ΰ CO ^ o ------- 0 .

w £ -p

Jj* 8 R. ^

“ 00 S

(DU ^

1 Ώ ^ '•O

CO

•H — ' ‘ Ό frt ^ ^ 03 S ^ ^ § 3 s s U. « “ 2 m ---------- < J _

> S

< (Ά _ CM._.________

/ \ CM O

/ \ O O v- z3 //“z -π n r-^ la o a- oo

\ // Γ V m 3 r vo VO ΙΆ CM A~ PA

\ f ^ 'r N r- r- t— *— s— r— r-( C................*...........

CM // \ *H " i " \ /"* I Λ 8 R S 8 8 8 R 8 8

I— Γ-* )-( O E LA CM Q LA QLACMQLA

qo / — \ o— cmt-lacm K n r- la cm Κι/' -s o i \ i 'i__J f-ι O O- ‘o ^ æ υΐο^ ^ § X > 1-1 ~ ° σ\ *- c · *~ _____ o:

CJ °vn O

o 8 R

£--¾ 7 .

E 3 LA U

J2__8__ . 0s1

03 2^ ΧΡΑ z' ^PA

g CM s as O ^ pf =0 χ^

. ^ dT 9 <_^ R

< -Γ “ x 8 __OS__ Ό X _*

CC X

^_CM CM

+J Q

UJ bJ

02 X^ xN

Hm 5.

-F-:----^___

CO I i—I

E 03 oo os ~ LU 03 Q-

DK 161384 B

19 '< 111 1' ....................‘ <D vn S3 <? ^ ^

H O CM CM

CD V τ— i ^ $ $ cn 9 ^ 9 fis <* ^

-U \ 4 O r- O

co S m v v CD S _ s s s CQ · . o O o c x c; v v v 9 <? ^ § °· $ s x "o o τ- Ο

> X

irl \n r— O ΟΜΛ N Γ' Γ;

H O O N Ό ΙΛ (N \0 (O

c— CNCSI^— r-CSjT— t—

f-H

dT* f/ <M æ - // Vi ” ^ æ Z \ / ^ ω<1 ^ ^ ^ \ / CO LJ1 n ri ·> *< *" *» ** ^

^ \ J o £ CM N N vO ΙΟ N lO (O

l*\ CO / \ ^ τ- T- τ-

1—I τ— z —/ Z— X

^ \ / r- r~ r- D 1) \ _ / Sil I,—.

CO -o \=y -0 Q O O

t— -H / \ CJlAX .£ CO / \ Q Q ^ ^ □(, V- cl i-η vo i-- <r \lf —--- ^ m & ^ ^ 9 o ° ° °

< < ιΛ X X X

C£ U O ^ I H ιΛ τ— ΙΌ 0 co <r o

3. £ S S

§ & i S

LO I— CM CM

ΓΛ ΓΛ PI

“lax °ιλχ “mx Η Z „CO X CO 2f 1 χ^|λ χ^|λ ° J5 cj^ cT? 1 ΓΑ ΙΛ I , ^

< 5 "^N X^E

“ 9 H S 4m ^ ac o( 5

CM CM CM

jj -p 4-;

Ld Ld Ld v_/ v_x \_x

z 2 Z

CM 04 CM

°f 5<s 5m §m 5 5 5_ i i CO E H fs CO ^ _V£ Q) (D t— I Ld al_ -.........— _____20_

DK 161384 B

I £ 3 5S

ff? o' o'

CD V V

E ro <? <t· L. r. r\ rs

U. CM O

in v E ΓΛ CD »> ·« »>

^ O CM r- O

Ql · τ— V

4J 3- CD

CD 'w-_____..._ 03 i u S ss ss u. · ·ε3 *- <r <r § 1-1 · <f o' o £?*<-- v v *=3: Έ. ^___

•H

"o r- <T

Q . τ- ΙΆ • ^— LU __

O

O

O

> X

-c> ^ 1—1 ___

CO

CO '"“'N γλ σ>

n_ _v A CM VQ

^ n\CT A ιΛ(Νγ·ιΛ LU X rv ft t\ *\ *\ æ co o cm cm so γ·<ν το ε *- *- γλ - |Q.W..___—-—--

CO ^-N

^ (M ^ ^ T *7 ^

-Q rj lA ^ O O O O

e® Qfl ^ x ^ S x H- 1=3 Q_ HH CM \0 CM MD 0\ *- <F oo r-^ <f

S °f T

o o o

O x X

< la ^ 0^ ο Ο Γ- <f x y-i___________— 0n <f NN CNJ τ- Ο CO r*· 00 <t -ί-

Ο <r- CnJ τ— CM CNJ

å é ά ύ é é

CJ5 r- CM τ- CNI CM

nn <fr <d· <f

ΡΛ OXOO O

rrl O NO NN ιΛ X UN X UNX

Cl ιΛΙ X Q X (ΛΖ NN X NN

E z NN <1- &3 On Q 1ΛΟ lCNQ

H ON Q ΙΛ ΙΛ NW CMM CMOO

0 CM UD X X X NN X NNO X NNO

Ll. ΧΛ NN in O Γ-'Χ τ-X CM v-X CM

1ΛΙ CM CM CM O CM O X CMCJ X

CM CJ CJ · O · O · · O · C_) »_____________

C4 N

NN +J NN «-s NN

5 & δ ?Τ δ

A CM O U O

* CM 5 Q.I '— =t X CM NO -Η "tj

cr o XXX Y

X Q , J o O Cj CJ 0\ ^ I I CD *V Vs on on on r- co

CM CM CM CM CM

4-> 4J +J 4-J 4-J

CM UJ UJ UJ Ld y er x x x 'z x^

CM CM CM CM CM

X X X X X

CJ CJ O CJ CJ

CM CM JM CM CM

x x at x x cj_ cj_o_o_y__ co i Ή -Υέωο τ- cm nn <f

U S Q. CM CM CM CM CM

i _21_

DK 161384 B

S ve o ω <f Q *- t- n *. o ·* * • o <r <t CQ V /\ I s § <f $

• O r— t~ O

^ tf) V /\ V

- “ cn cd T * -S $ 8 3 <r

Li_ ^ 4 O «- O r-^ Σ CQ V /\ mu·------ ' 2 i $ s s > r IV, ri rv

• CD ΙΆ O O

< V V

•H _ r-I \Q Q ΓΛ O <F Q ΓΛ

O O csl JA

• O r- r- IA

LJ V /N _____

O

O

X ι-ΟΟ-ϊιΛΟΟαΐ ΙΛγ-Ν , , ι-ίΛιΛιΟτ-ΪΛ Ν Ν ιΛ Ο Ο Nr-i-i-Nr- ΝΝΝ > \ ^ C--------- “ C0 1-1 ηπ rA L- Ια CJ1 CD Q_(D^ inNiDiANip ιΛ CN ιΛ ι_! 03 Ν r ιΛ Ν r- ιΛ Ν r- Ν Q3 ΙΑ 5? M^N'Cr— νΟΓΛτ— XI α3 ^_ ” § Q ^ 3 3 °ί ^ •Η υΣ 'ο 'ο 'ο Ο Ο w Ρ 3d *χ "χ "χ "χ w “ in cS r> co cm ca |Ά rv r\ »v i' ** !=i r' s— γα mj· c on o on

<31 i U U

n & O O O

i= T— T““ T“

-C O XXX

tA <Γ ΙΑ Γ>· r. r. r» t-4 NO LA ON ______ C_) ΓΑ tA *— ' ' LA Csl

O r- τ— LA < fA CNJ

CM CM CM O CM CM

£· 4- r^· ον "Ό iA d)

03 A- O <r — ΓΑ CM

CM CM CM CM__CM__ — rA ή <r

Pa Pa <r <r la x

fl} S X °LAX °lAX °LAX ^Q

s O CA Z PA Z ΙΑ Z ΓΑ CM LO

£ =¾ =¾ =5^33^ 5? ? o® ,F® if|·

ΙΑ I flP J'Xf 5 CA

< S3 § Rm å §ί 85cm ^ ON <r- ON ^ ON___ON cid ON 5--

----CM CM "CM CM CM

44 4-1 4-> 4-> 4->

LU LU LJ LJ LJ

CM Pn 'Pm 5m 5n 5m 01 5 5 5 5 5

CM CM CM CM CM

5 5_5_5 5 j^j^g^CMCMCMC^^M !

J

_22_

DK 161384 B

fi § 3 .·. ω " S £ ♦ I I 5? <t ^ 10 V o' 'r~' jj Ή V , E—--- “om ^ 3. -y i m \± % cJ ^ "1

S CD τ— CM

- O--—---^-- « g £_J?_9

•H

8 r- tr ^ ,· fA <f ΓΛ

uJ

O

O

* co m tnh ® y , , M3 O LA CM Γ~· <)" O CO <r- CM r- ^ ^ ^ 1— CO > c----——---“

(4- M

^ CO ^ ^ Ώ £ «λ ^ S.g o e ^ ^ a"a£ 1- -l-i ___^ _-____-___^- rc w C_) ^ σ\ ΟΝ ΟΝ Γ·~ £ o 'o 'o 'o 'o

dt 5 5 x S

Μ PA O CM O

_ <f~_(A_PA_ON__ c f" 0 §» ' 'o ' 1 s 4 Q fA~ °°. s a s s 9- T 'V ^ °l λ $ a & s *- CM s-_CM_ _,. LA CM 5a i—i <f O ___ O O o ^ O LTME Lf\ vom S ιΛΧ 0 2 PA 2 2 2 irs

F Z ΙΛ N LAO lA PA M3 _^A

W LAQ X CM O CMQ CM CE

ια PAG3 X ΓΑΟ I Μ X O

-1- X PALA NOX CM CM A «— CM

A'X _A CMO X CMX CM .

f CMO O O « · O O O

..--r-:r:-— :-1-’-CA---

I I NO I

O _*> O CM ^CM

fj£ H CM O O lA I A

cc 9l PA O O X 20 X

π\ O X J I CM I O

Ά w O ON_ON O ON-----

CM CM CM

ΓΗ +> 4J 4J

S- LU LJ LO

dT1 5m %, ^ %i 5m 5 5 5 5 5 5 5 —X.....--—----

J? X "H _ <r- CM fA

ffl g g. R ^ ^ __23_

DK 161384 B

i % § * ^ ^ . ω ^ X_ *9 i * , $ $ $ - w ° y O 9 9 I 1 _.-----—- m ε “ Di CO' I ^ ffl fA <? <f <J-

'—^ CJ rv *S ^ *S »N

Σ ώ 9 £ ^ *" < 9 -------- j ! $ ,- s ^ $ > »S ** _f' _T . -Τ'

• q <t O O O

< V V V V

Έ| ΓΛ ΓΛ <t_ g . · CM CM 9 °

O

O

r“

w Γ~00 ΙΆ O CA -q- «“ Q CO CA

* VO (M N®\0 KiONinNr· r— t— CM *— N Γ” ΐ” ϊ" r- __ C--—--- ’ ~ '"N h-1 00 æ , S3 ni lA lA n 03 .X 1Λ N lAlACM*- IA m ϊ! ·Χ «s» ·»·>···> m M \ CM VO ΟιΛΝ Ν'ίΚΛΟα

O CP r“ lA CN t— r— O O

-H LA O £ ^ <“ 0 W____ -____- _Q ø --L —1 “" ” us r- Ύ 9 9 *- ·η q e. i iQ o o m d_ O 9

^ cP X XXX

S MD ^ ^ ^ CO _CM_Al_CM__ < έ 9 9 9 9 U O' o o o o x s £ S Λ i LJ r\ ^ *r^ ^ Jv, r™ CNI \0 <P S 8~ S S 3 å 2 SI i % §

!r- CM CM CM

9a fA 9a 1α9α IA

rH cT* cP 53 O 9λ 5? 9a 53 LA

1 Z^a Zca zTSn Zv-zp 9a E “tao <- Q f- α x cnq Ai o £ ;£* ΓΑ X^ CM 9o CM LA 9acM 9a ΓΑ Ί35 > ^ o" d~ r O cTV~ lT 5 cj · ο · _;_· --— ------ ' "lA 1 ΓΛ X *H ^ ΓΛ X r fsj -D ΓΑ i 9 9 J§ on ca ca ^

CM CM -O CM CM

4-1 4-> X-2! . flj -ffl LJ UJ AJ X 5 l· T l· il: 5s1 ?T_5 5

"iÉé^I «S * R s I

DK 161384 B

| _24_ 1 ΓΛ $ ΓΑ 3 ... m £ $ £ 9 § <f <? IA <?

• ^ o' cm" O

'''in \y <r- \J

-p rj--“ CO ,= “ cn co’ I "CO ΓΛ <r- o- ^ , CJ *n Λ *\

Li- · CM <t r- O

s: cd *- v g 7----

• δ! NQ NO

Σ -g ^ <£ ^ g *£ *~ V 9 ξΓ 'o γλ *- <? Π Λ *. t\ n

• CM <t IA O

LxJ r- \/

O

O

X

o\ <t vo ιλ o\ vo sf <f σ\ r- o u æ md cm o\ vo m Pv a- la <r <t· > \ t— τ— r— ^^^— K— <r- ς— τ—* r- > - £--“

CD

S A lA A CM VO

λ tu_ A CJ> A CM A CM A CM <r- A

ΙΑ _ n rti v *n ** r> λ λ λ λ λ CO m^c LA CM VO Q LA CM VO N VO (O r "TiCMf- 1Λ CM r *-

iH O O

ø LO O Ξ JO__^ _____—-—-- CO ω i— cj lir •Η o ^ r- 17 7 ro CL Q o o o o S x x x x

M O CM LA ON

NQ~_17_m£__lt£_ < £ 8 °? 8 8 u & o o o o ~T ,—. e- <r- c- <r—

Q X X X X

riy VO CM A

{—i «Ν »V *N «Ν

·—I CO IA CM

J-> O NO ΙΑ V—

Q- S ^ CM ^ S

cH dj S Λ 8 J< 8

_ CM ^ c5 w CM /N

•Cj·

, Mf- O IA

r-H CM O ΙΛ2 O O

(U 0„2 LT\ O 2 IA CM LA

F NO IA 2 CM LAQ 2 2

5 2 0 r- 2 CMu)_ CTN

Li_ CM IA O 2^ LA 5- 2 *8 2~ 1—I

χσν5 2^ ££ ^ cT1? 9 £8 CM CM 0 2 0 ,_ O · -4_y—:—:-:—:-—> ia ‘ 1 ! Al lA ^~X, . ^ ^ 5s1 *** 4 5 8 § · 8 __ON ° 2^ CM " ---1°^ LJ|-1- 'cm 'cm

o X 2 O

2 _ U _ O 2-2 Οί4 ^ “cM 2™ ^ 5 5 5 5 8 5

5 cmlm xcmx<m lT

^_O O_CJ CJ_CJ CJ

c§ ^^^^ (____25_

DK 161384 B

T £ 8 ^ 3 <t • »s Λ ** . CD O i- is ^ $ O- r\ vn r\ •o o o ^ CO V V __ ϊ'Τ—- V "I - S <f

Lu · <f O r~

2: CD V

ω0*_----- • Si \D vo Ά ^ o σ o' < V V_V__ 8 <r $ ^

. O CN

LlI V" r-

O

o t—

X

Ο -cl; CN NO lA D Q NN r- NO; n CJ r- CO O I'' NO M3 □ CO VO NO CN 03 5 N^ CN r— CN ^ r— <r- CN CN r- τ— N N r ^ > *“ 00 C----

>-H

O

^ ra $ "o A CM MD 00 Ον ΙΛ

£Λ fl) v A ACM r- A A ACM

Γ-ν* t·*·" 71 ,"* n r> r. r> *\ r> *\ λ ·>

—* 2 \ A CM Q A CM VO A r- O O A CM VO

0 O O1 CM r in CM r CM r'

_q 0) O E

ro 13 w _____—-- I— ^ o S' ^ Ύ "" ° ° ° s 4 4 4 r— r“__<j~ • «i 21 r- co u ^ i i i x o o ° 9

A X X X

Q M3 CN <f «““1 n, *v »\ Γ>._r- r .._

A v— CM

d £ CN OM

«fid· cA cA

ON A CM

r- CM CM

A

<-7* A AO

i Ra X i^X

o ^a dp ^Ovq iJn53

Lu CM UJ v*"uj H~_ A

X AO X AO U^x

r- X CM OOX CM r-D

, CN O X , <-□ X CJ · CJ _ CJ · » __ ΙΆ ΙΆ

« S 3 S

°= s_<»_s ^ d: d:

CN CN CN

cn 5 5 5

Γ£ CN CN OsJ

5 ^ 5 -όΓ 5 4* • _ δ"!5_5^5 5^5 ‘4éTp~ * 18 1 26

DK 161384 B

TI

8 r- <? r^N

CD ^ R

' · n t\ r> r, ~ oi * Θ * ^--- H- — j3 ! ,· * 8 * 3 <f

Li- · *» *n *» CD O r* ^ · V 1 S «---- 2 i $ $ $ i Ό Ό ° 3 ΓΛ $ Π Λ ·* ^ . CM CD ΓΛ

Ld ν Ο Ο c—

X

nCJ CM On 1"^ CM Ν CO ^ 1^LP\ _ >g Ώ 8 £ 03 c---—----- ‘

ΙΛ q_ 1-1 CD §R

®00s!®|‘^a^««sp5^»Fs O CD ^s. rx rx *x #S *s »s *N *N «\«s

m o cn CM VO [Λ r- *- ^ CD CD τ- CD

” ® Q E *“ ^ Ό ^ •H ---“-------

w of <7 °? °T

£"o ° ° °

-JA XXX

Q CM Os GO

HH «S «Ν CM 'T- Os

<C 2L CD CD

CJ O’ l_ l_ 3: q £2 £2

_UN X X

Θ £ ^

°3 58 3 S

Q. CM CVI CM

*” « S § __CM_CM_CM_ * S cP °^x

E LA X Z r<N Γ- Q

C Z ΡΛ <T- Q CM tn O p"} Q cm En x γλ ·- xox^ Ώ5 J3S c_^ u ·

LA

< 5* «a s3 “ g 5 g 3 z x

xCM ^CM

CM CJ CJ CJ

a* CM CM CM

X CM X CM X CM

CJ ^ CJ <·—* CJ

CMOJ CM® CMJ! CJ ^_CJ ^_5 ' j ^ 5 s ,27_

DK 161384 B

ΓΠΓΙ

Sko !

<f r- IA

• ~ 1A

CD O <ί A

£ $ $ . O o ^

-s (Λ v V

*J "g-- (0 * ® CJi to

'*1S SS s? jA

Σ . ώ o ° ^ S --- 1-1 o S I 3 3 $ £ 9 9 9 ί S S § UJ v v J\ CM g i -

S* S S $ S

DU Cs| r- r- r- r fe____ ώ cq R 'σ\ la cm °- «< r a ^ o σ> ο 3 ϋΣ ^ ^ Ύ ^ £ο 9 ° 9 9 9 4 4 4 4

\cf <Γ γ^Γ rC

σ\ co ---- “ < έ °? < CJ » ο cc -1- <5 χ dT * I—I \0 Α CO Ο ΙΑ

• LA Γ" æ LA

Q. Csl Csl CM CM

Λ O' ri CO r-

<r A- A- LA

CM _Al_CM_CM_

LA LA

r-t LA LA O O

1 °V0 X O °S0X Z^5a Z^^CM

C ΓΛ CM z ΓΛ <f Q NOQ X

I Ί3 S X SS X^AO X^NMA

“* Zf ΓΑιΑ χ_ ΓΑ O i—X CM SOX «

ΤΛ X ·> jpx Cs| CMO X , CMU O

, f- Q O CMQ X CJ · · CJ · · C_) · · CJ « ·____ " la r-'

A X X

_ X CM Γ- o? ί ? 9 9 __0\_On_ON_ON__

CM CM CM CM

-U -p 4J 4J

LJ UJ U LU

af4 4n Hm ^ ^ 5 5 5 5 _5^ 5^ 5s1 5* ._ iliir R K " 1 __28_

DK 161384 B

( $ 3 SS

U h Vs Λ o o o

CD v V

I $ $ $ ^ΙΛ v" ° N? -

01 E

® » i

•jp s ^ ^ SS

1 ,o 9' ° v s«-- 1-1 si ss s§ 3 <· 9 ° 9 i ^ ss $ O λ ^ λ • o o o

Id V V

o o i— * mj cm σ\ r-* cm ΓΑ ΓΑ \Q ΓΆ tA O o CM CM *— *— r- |H t— C--=-- n $ σ.

^ S οι 3* ’ la ^ ^ « ^ ® O 'σι N N vo" Λ r-" ω <” Q5 -£} (D ----------.--- i- -H Uz 3N Γγ rj- w S '~Q o o □ LA c— ς— ’L—

Q XX X

H CO (NI cm^

_ viT CM* CM

c co 2 & '° x s ^ S ΙΛ

rP IN

i ‘Vil -

Cn m T3 oo

*— >— CM

CM _

LA

LA O

<“t M3 O M3 X^ fll O LO I Z„ ΓΑ

E VO I X ΓΑ O Q

B X tA 00 Q CM U0 £ 8 8 X- X o , =Sn pf ^ X^ 8 5 x^ cr ?

CM C_J O

U __ V"· I , zP x^ E< 8 ω h a

_ cÅx^g ol_cA

^_CM ^_CM

ΰ ϋ ^CM

οΓ4 ^m X

5 5 5 ^

CM CM CM OJ

xx x s: cj o cj ^ iél1R « K 1

DK 161384 B

29

Ib

j R

^ ΓΛ

• CM

-—·> (/) r~ ---- CO ^ “ s: i 1 5 S !λ

Lu ·

S CD

£ p---

Ί ύ VQ

* > o"

< V

•H

»-H

8 § lJ *“ CM g O ° z ^ \ ^ / \ o~ 3" _ ί -s' /, \ ο. ω ^ ^ // \ z__/' zx ae H \ / v^/ ω p \_/ ------- ro oc~ ) \ u X ^ *~ / \ £ O ° °\_l/ _ 0\ <X> rz < te cj σ'

< ^ Q

rv- US

^ O

t-H

cP S - « CM ·

g- -A S

* S3 lTs

S °vO

i ZCM

cP 5 " ”"~k\ ^ 1_

CM

-U

Ui

v- X

DC

D

__ 5" - _ CO i ^ a éli «

DK 161384 B

30

Fremstilling af farmaceutiske præparater.

Når de anvendes som antimikrobielle og antitumormidler kan de omhandlede forbindelser tilberedes og administreres i mange forskellige topiske, orale og par-5 enterale doseringsformer. Det er klart for fagmanden, at de nedenstående doseringsformer som de aktive komponenter kan omfatte én eller flere forbindelser med formlen 1, et tilsvarende farmaceutisk acceptabelt salt af en vilkårlig af nævnte forbindelser, eller en blanding af 10 sådanne forbindelser og/eller salte.

Til tilberedning af farmaceutiske præparater ud fra de omhandlede forbindelser kan indifferente, farma-· ceutisk acceptable bærere være enten faste eller flydende. Præparater i fast form indbefatter pulvere, tablet-15 ter, dispergerbare granulater, kapsler, cachetter og stikpiller. En fast bærer kan være én eller flere stoffer, der også kan virke som fortyndingsmidler, smagsstoffer, opløseliggørere, smøremidler, suspensionsmidler, bindemidler eller tabletdesintegreringsmidler, og 20 det kan også være et indkapslende materiale. I pulvere er bæreren et findelt. fast stof, som er blandet med den findelte aktive forbindelse. Til opnåelse af tabletter blandes den aktive forbindelse med bærer med de nødvendige bindeegenskaber i passende mængder og komprimeres i 25 den ønskede form og størrelse. Pulvere og tabletterne indeholder fortrinsvis fra 5 eller 10 til ca. 70% af den aktive bestanddel. Egnede faste bærere er magnesiumcar-bonat, magnesiumstearat, talkum, sukker, lactose, pectin, dextrin, stivelse, gelatine, tragacanth, methylcel-30 lulose, natriumcarboxymethylcellulose, et lavtsmeltende voks, kakaosmør og lignende. Udtrykket "tilberedning" skal indbefatte formulering af den aktive forbindelse med indkapslende materiale som bærer til tilvejebringelse af en kapsel, hvori den aktive komponent (med eller 35 uden andre bærere) er omgivet af bæreren, som således er forenet med den. Tilsvarende er cachetter indbefattet. Tabletter, pulvere, cachetter og kapsler kan anvendes som til oral administrering egnede faste doseringsfor-

DK 161384 B

31 mer.

Præparater i flydende form indbefatter opløsninger, suspensioner og emulsioner. Som eksempel kan der nævnes vand eller vand-propylenglycol-opløsninger til .

5 parenteral injektion. Flydende præparater kan også formuleres i opløsning i vandig polyethylenglycolopløsning.

Til oral anvendelse egnede vandige opløsninger kan fremstilles ved at opløse den aktive komponent i vand og tilsætte passende farvestoffer, smagsstoffer, stabili-10 seringsmidler og fortykkelsesmidler efter ønske. Til oral anvendelse egnede vandige suspensioner kan fremstilles ved at dispergere den findelte aktive komponent i vand med viskost materiale, dvs. naturlige eller syntetiske gummier, harpikser, methylcellulose, natrium-15 carboxylmethylcellulose og andre velkendte suspensionsmidler.

Topiske præparater indbefatter cremer, lotioner, geler og sprays. Disse forskellige topiske præparater kan formuleres ved hjælp af velkendte metoder. Se f.

20 eks. Remington's Pharmaceutical Sciences, kapitel 43, 14. udgave, Mack Publishing Co., Easton, Pennsylvania 18042, USA.

Det farmaceutiske præparat er fortrinsvis i enhedsdosisform. I denne form underopdeles præparatet i 25 enhedsdoser, der indeholder passende mængder af den aktive komponent. Enhedsdosisformen kan være et emballeret præparat, idet emballagen indeholder adskilte mængder præparat, f.eks. emballerede tabletter, kapsler og pulvere i medicinflasker eller ampuller. Enheds-30 dosisformen kan også være en kapsel, cachet eller tablet selv, eller det kan være et passende antal af enhver af disse emballerede former.

Mængden af aktiv forbindelse i en enhedsdosis af et præparat kan varieres eller reguleres fra 50 mg til 35 500 mg alt efter den særlige anvendelse og styrken af den aktive bestanddel.

Ved terapeutisk anvendelse som antimikrobielle midler og antitumormidler administreres de anvendte ! 32

DK 1613 8 4 B

forbindelser i en begyndelsesdosis på ca. 0,1 mg til 50 mg pr. kg. Et dosisområde fra ca. 0,5 mg til ca.

10 mg pr. kg foretrækkes. Doseringerne kan imidlertid varieres afhængigt af patientens behov, alvorligheden 5 af den tilstand, der behandles, og den forbindelse, der anvendes. Bestemmelse af den rette dosering til en bestemt situation er et fagmandsspørgsmål. Almindeligvis indledes behandlingen med mindre doser, der er mindre end den optimale dosis af forbindelsen. Derefter forø-10 ges dosen i små spring, indtil den optimale virkning under de pågældende omstændigheder opnås. Af nemheds-grunde kan den totale daglige dosis om ønsket opdeles og administreres i portioner i løbet af dagen.

De aktive forbindelser kan også administreres 15 parenteralt eller intraperitonealt. Opløsninger af den aktive forbindelse som en fri base eller et farmaceutisk acceptabelt salt kan tilberedes i vand, der hensigtsmæssigt er blandet med et overfladeaktivt stof, såsom hydroxypropylcellulose. Dispersioner kan også fremstil-20 les i glycerol, flydende polyethylenglycoler og blandinger heraf og i olier.

Under sædvanlige oplagrings- og anvendelsesbetingelser indeholder disse præparater et konserveringsmiddel til forhindring af væksten af mikroorganismer.

25 De farmaceutiske former, der er egnede til inj.ek- tionsanvendelse, indbefatter sterile vandige opløsninger eller dispersioner og sterile pulvere til fremstilling af sterile injektionsopløsninger eller -dispersioner på bestilling. Ved tørring og frysetørringsmetoden opnås 30 der et pulver af den aktive bestanddel plus enhver yderligere ønsket bestanddel ud fra en i forvejen sterilfil-treret opløsning deraf.

Som anvendt heri omfatter "farmaceutisk acceptabel bærer" ethvert og alle opløsningsmidler, disper-35 sionsmidler, overtræksmidler, antibakterielle og anti-fungale midler, isotoniske og absorptionsforsinkende midler og lignende. Anvendelsen af sådanne medier og midler 33

DK 161384 B

til farmaceutisk aktive stoffer er velkendt på området. Bortset fra de tilfælde, hvor konventionelle medier eller midler er uforligelige med den aktive bestanddel, skal deres anvendelse i de terapeutiske præparater tages 5 i betragtning. Supplerende aktive bestanddele kan også inkorporeres i præparaterne.

Det er særlig fordelagtigt at formulere parente-rale præparater i enhedsdosisform for at lette administreringen og opnå ensartede doser. Enhedsdosisformer 10 som anvendt heri refererer til fysisk adskilte enheder, der er egnede som enhedsdoser til de mammalia-individer, der skal behandles, idet hver enhed indeholder en forudbestemt mængde aktivt materiale, beregnet til at frembringe den ønskede terapeutiske virkning, sammen med den 15 nødvendige farmaceutiske bærer. Specifikationen for de på opfindelsen baserede nye enhedsdosisformer dikteres af og afhænger direkte af (a) det aktive materiales unikke egenskaber og den særlige terapeutiske virkning, der skal opnås, og (b) den naturlige begrænsning med 20 hensyn til at sammensætte et sådant aktivt materiale til sygdomsbehandling af levende individer med en sygdomstilstand, ved hvilken sundhedstilstanden svækkes, som nærmere beskrevet heri.

Den væsentlige aktive bestanddel sammensættes med 25 henblik på bekvem og effektiv administrering i effektive mængder med en egnet farmaceutisk acceptabel bærer til en enhedsdosisform som beskrevet ovenfor. En enhedsdosisform kan f.eks. indeholde den væsentlige aktive forbindelse i mængder i området fra ca. 0,1 til ca. 500 mg, 30 idet fra ca. 0,5 til ca. 250 mg foretrækkes. Udtrykt i mængdeforhold er den aktive forbindelse almindeligvis til stede i fra ca. 0,1 til ca. 500 mg/ml af bærer. I tilfælde af præparater, der indeholder supplerende aktive bestanddele, bestemmes doserne under hensyn til den 35 sædvanlige dose og administreringsmåden for de nævnte bestanddele. De daglige parenterale doser for mammalia-individer, der skal behandles, ligger i området fra 0,1 mg/kg. Den foretrukne daglige dosis ligger i området

DK 161384 B

34 fra 0,3 mg/kg til 10 mg/kg.

Fremstillingseksempler

Opfindelsen belyses ved hjælp af de efterføl-5 gende eksempler på udvalgte forbindelser og deres fremstilling. Temperaturangivelser er i °C.

Eksempel 1 N,N-Diethyl-5-nitropyrazolo[3,4,5-kl]acridin-2(6H) -10 ethanamin-methansulfonat (1:1).

En suspension af 13,74.g. (0,05 mol) 1-chlor-4-nitro-9(10H)acridinon i 180 ml THF, 180 ml methanol og 15,0 g (0,115 mol) [2-(diethylamino)ethyl]hydrazin om-rørtes ved stuetemperatur i to timer og ved 45 “C i to 15 timer. Blandingen afkøledes, og det orange faste stof opsamledes, vaskedes med THF-methanol og acetonitril og tørredes til opnåelse af 13,0 g (74%), smp. 185 -187°C.

Et vandopløseligt salt fremstilledes ud fra 20 0,08 g af den frie base og ét ækvivalent methansulfon-syre i methanol-ether, smp. 239 - 241 °C. (dec.).

Eksempel 2 N,N-Diethyl-6-methyl-5-nitropyrazolo[3,4,5-kl]acridin-25 2 (6H)-ethanamin-methansulfonat.

En blanding af 4,1 g (0,014 mol) 1-chlor-10-methyl-4-nitro-9(1 OH)-acridinon, 50 ml methanol, 50 ml THF og 4,0 g (0,03 mol) [2-(diethylamino)ethyl]hydrazin omrørtes ved stuetemperatur i 20 timer. Den opnå-30 ede opløsning inddampedes til tørhed, remanensen tritu-reredes i 200 ml vand og filtreredes, og bundfaldet omkrystalliseredes af 125 ml ethanol, hvorved der opnåedes 4,5 g (87%) af den i overskriften anførte forbindelse som fri base, orange nåle, smp. 148 - 150°C.

35 Methansulfonatsaltet (1:1) opnås ved, at man op løser basen i methanol indeholdende et ækvivalent me-thansulfonsyre og tilsætter diethylether, smp. 185-188 C.

DK 161384B

35

Eksempel 3 2-[[2-(5-Nitropyra zolo[3,4,5-kl]acridin-2(6H)-yl) ethyl]-amino]ethanol-monohydrochlorid.

En suspension af 1,37 g (0,005 mol) 1-chlor-4-5 nitro-9(1 OH)-acridinon, 0,70 g (0,0059 mol) 2-[ (hydra-zinoethyl)amino]ethanol, 25 ml THF og 25 ml methanol omrørtes under svag tilbagesvaling i 16 timer. Det orange faste stof opsamledes, resuspenderedes i 50 ml THF og opsamledes, resuspenderedes i 50 ml acetone, opsamledes 10 og tørredes til opnåelse af 1,42 g (77%) af den i overskriften anførte forbindelse, smp. over 300°C.

Eksempel 4 2-[[2-[6-Methyl-5-nitropyrazolo[3,4,5-kl] acridin-2-(6H)-15 yljethyl]amino]ethanol-methansulfonat.

En varm opløsning af 0,87 g (0,003 mol) 1-chlor-10-methyl-4-nitro-9(1 OH)-acridinon i 10 ml THF sattes til en omrørt blanding af 0,83 g (0,007 mol) 2-[(hydra-zinoethyl)amino]ethanol og 50 ml THF, og den opnåede 20 blanding omrørtes i 18 timer ved 25°C. Det orange faste stof opsamledes, vaskedes med methanol og tørredes til opnåelse af 0,95 g. 0,9 g af denne frie base opløstes i 5 ml methanol og behandledes med 5 ml 1N me-thansulfonsyre i methanol. Det orange bundfald omkry-25 stalliseredes af 25 ml chloroform-methanol og 50 ml ethylacetat til opnåelse af 0,98 g (77%) af den i overskriften anførte forbindelse, smp. 177 - 178°C.

Eksempel 5 30 N,N-Diethyl-9-methoxy-5-nitropyrazolo-[3,4,5-kl]-acri-din-2(6H)-ethanamin-methansulfonat (1:1).

Til 4,57 g (0,015 mol) 1-chlor-7-methoxy-4-nitro- j 9(1 OH)acridinon suspenderet i 75 ml THF og 75 ml methanol sattes 4,00 g (0,031 mol) [2-(diethylamino)ethyl]-35 hydrazin, og suspensionen omrørtes i 6 timer ved 25°C. |

Det orange faste stof opsamledes, vaskedes med THF-methanol (1), og tørredes til opnåelse af 4,55 g (79%) af den i overskriften anførte forbindelse som fri base, smp.

DK 161384 B

36 183 - 185°C. En portion på 1,14 g omdannedes til me-thansulfonatsaltet i methanol indeholdende 0,35 g me-thansulfonsyre og nogle få dråber vand, smp. 228 - 231°C (dec.).

5 På analog måde, under anvendelse af [2-(dimethyl- amino)ethyl]-hydrazin, opnås der 9-methoxy-N,N-dimethyl- 5-nitropyrazolo[3,4,5-kl]acridin-2(6H)-ethanamin-methan-sulfonat, 5a, (1:1), smp. 237 - 240°C.

10 Eksempel 6 N,N-Diethyl-9-methoxy-6-methyl-5-nitropyrazolo-[3,4,5-kl 3 acridin-2 (6H) -ethanamin-monomethansul fonat.

Til en omrørt blanding af 0,96 g (0,003 mol) 1- chlor-7-methoxy-10-methyl-4-nitro-9(1 OH)-acridinon i 15 25 ml THF og 25 ml methanol sattes 0,86 g (0,0066 mol) [2-(diethylamino)ethyl]hydrazin. Efter omrøring af blandingen i 4,5 timer ved 25°C og derefter i 2,5 timer ved 50°C fjernedes de flygtige stoffer ved afdampning, hvorved der opnåedes en remanens, som vaskedes med vand 20 og kromatograferedes på 50 g silicagel i chloroform- methanol (50:1 vol). Hovedfraktionen inddampedes til en rød olie (0,03 g), som omdannedes· til den i overskriften forbindelse, smp. 190 - 193°C, ved krystallisation fra methanol/ether indeholdende 0,24 g methansulfonsyre.

25

Eksempel 7 2- [[2-(9-Methoxy-5-nitropyrazolo[3,4,5-kl]acridin-2(6H)-yl]ethyl]aminoethanol-monohydrochlorid.

Til en suspension af 3,14 g (0,0103 mol) 1-chlor-30 7-methoxy-4-nitro-9(1 OH)-acridinon i 40 ml THF ved 25°C sattes 1,47 g (0,0124 mol) 2-[hydrazinoethyl)amino]-ethanol i 20 ml methanol, og blandingen omrøres i tre timer. Det orange faste stof opsamledes og vaskedes ved triturering efter hinanden i THF, DMF og acetone og tør-35 redes til opnåelse af 2,8 g (67%) produkt, smp. over 315°C, med mørkfarvning over 285°C.

DK 161384 B

37

Eksempel 8 N,N-Diethyl-5-nitropyrazolo[3,4,5-kl]acridin-1(6H)-ethanamin-monomethansulfonat.

5 En blanding af 3,0 g 1-chlor-4-nitro-9(10H)- acridinon, 12 ml chlorbenzen og 12 ml phosphoroxychlorid omrøres og koges under tilbagesvaling i 7,5 timer. Der tilsættes cyclohexan (24 ml) og chlorbenzen (7 ml), og blandingen koges og inddampes, indtil den er homogen, 10 hvorefter man lader den afkøle. Bundfaldet af 1,9-di-chlor-4-nitro-acridin opsamles og anvendes umiddelbart.

Hele bundfaldet fra den ovennævnte reaktion sættes til en opløsning af 8,2 g [2-(diethylamino)-ethyl]-hydrazin i 100 ml THF, og blandingen omrøres ved stue-15 temperatur i to timer. Det orange bundfald opsamles.

Filtratet inddampes til tørhed, remanensen tritureres med vand, og det orange faste stof opsamles. Begge produkter er den frie base af den i overskriften anførte forbindelse, smp. 204 - 206°C fra ethanol. 1:1-saltet 20 med methansulfonsyre udkrystalliseres af methanol-ether, smp. 237 - 245°C under dekomponering.

Eksempel 9 N,N-Diethyl-9-methoxy-5-nitropyrazolo[3,4,5-kl]-acridin-25 1 (6H)-ethanamin-monomethansulfonat.

En suspension af 0,98 g 1,9-dichlor-7-methoxy- 4-nitroacridin og 1,31 g [ 2- (diethylamino) ethyl]hydrazin i 15 ml THF og 15 ml methanol omrøres og opvarmes til 50°C i 41 timer. Det gule faste stof opsamles og vaskes 30 med methanol og derefter med THF og omkrystalliseres af acetonitril-chloroform, hvorved der opnås den i overskriften anførte forbindelse som den frie base, smp.

214 - 216°C. Den i overskriften anførte forbindelse fremstilles i vandigt methanol indeholdende et ækviva-35 lent methansulfonsyre som et gult fast stof, der smelter ved 265 - 270°C under dekomponering under afgivelse af gas.

DK 161384 B

38

Eksempel 10 2-[2- (D iethylamino) ethyl]-2,6-d ihydro-5-nitropyrazolo -[3,4,5-kl 3acridin-9-ol-monomethansulfonat.

5 En blanding af 1,16 g 1-chlor-7-hydroxy-4-nitro- 9(10H)-acridinon, 20 ml THF, 20 ml methanol og 1,31 g [2-(diethylamino)ethyl]hydrazin omrøres ved 25°C i 5,5 timer og ved 40 - 50°C i 18 timer. Bundfaldet suspenderes i 16 ml varmt methanol indeholdende 0,3 g methan-10 sulfonsyre, og der tilsættes vand, indtil der indtræder opløsning. Den i overskriften anførte forbindelse udfældes fra blandingen ved afkøling som mørk orange krystaller, smp. 241 - 244°C under dekomponering.

15 Eksempel 11 N,N-Diethyl-5-nitro-9-(phenylmethoxy)pyrazolo[3,4,5-kl]-acridin-1(6H)-ethanamin-monomethansulfonat.

En blanding af 3,26 g 1-chlor-4-nitro-7-(phenylmethoxy) -9 (1 OH) -acridinon og 2,45 g [2-(diethylamino)-20 ethyl]hydrazin i 50 ml THF og 50 ml methanol omrøres ved stuetemperatur i 18 timer. Det orange bundfald opsamles og omkrystalliseres af toluen og af chloroform-cyclo-hexan, hvorved der opnås den frie base af den i overskriften anførte forbindelse, smp. 161 - 164°C. Det i 25 overskriften anførte salt opnås ved krystallisation af methanol-ethylacetat-diethylether indeholdende ét ækvivalent methansulfonsyre og omkrystallisation af chloroform-methanol som dybt orange krystaller, smp. 216 -218°C.

30

Eksempel 12 6-Chlor-2-[(4-methoxyphenyl)amino]-3-nitrobenzoesyre.

Til 74 g (0,60 mol) p-anisidin, omrørt mekanisk ved 75°C, sattes 35,4 g (0,15 mol) 2,6-dichlor-3-nitro-35 benzoesyre [Lehmstedt og Schrader, Berichte 70B, 1526 (1937)] i små portioner i løbet af en halv time. Blandingen opvarmedes til 75°C i 24 timer, idet der omrørtes i de første to timer. Reaktionsblandingen afkøledes, og

DK 161384 B

39 den faste masse knustes og tritureredes i et mekanisk blandeapparat med 300 ml 2,4 N saltsyre. Det faste stof opsamledes, vaskedes med 3 N saltsyre, omrørtes i 400 ml 0,5 N natriumcarbonat og filtreredes. Filtratet 5 fortyndedes med 250 ml vand og syrnedes lidt efter lidt med 4 N saltsyre. Bundfaldet opsamledes, vaskedes med vand og tørredes til opnåelse af 38,5 g (79%) af den i overskriften anførte røde forbindelse, smp. 205 - 213°C.

En renset prøve, fra toluen, smelter ved 212 - 215°C.

10 1-Chlor-7-methoxy-4-nitro-9(1 OH)-acridinon.

En blanding af 12,9 g 6-chlor-2-[(4-methoxy-phenyl)amino]-3-nitrobenzoesyre, 25 ml chlorbenzen og 50 ml phosphoroxychlorid omrørtes og opvarmedes til til-15 bagesvalingstemperatur over et tidsrum på én time og holdtes under tilbagesvaling i 4,5 timer. Blandingen afkøledes og filtreredes, og filtratet koncentreredes til en viskos mørk remanens ved inddampning under formindsket tryk. Inddampningsremanensen og det tidligere 20 opsamlede bundfald opløstes i 130 ml eddikesyre og behandledes forsigtigt med 15 ml vand under omrøring. Den i overskriften anførte mørkerøde forbindelse opsamledes, vaskedes med vand og tørredes til opnåelse af 11,5 g (95%), smp. 262 - 264°C.

25

Eksempel 13 1-Chlor-10-methyl-4~nitro-9(1 OH)-acridinon.

En blanding af 8,24 g (0,03 mol) 1-chlor-4-nitro-9(1 OH)-acridinon, 50 ml DMF og 1,8 g af en 57%'s 30 dispersion af natriumhydrid i mineralolie omrørtes i en halv time ved stuetemperatur og behandledes med 3,0 ml methyliodid. Omrøringen fortsattes i 17 timer, hvorefter der tilsattes 1,0 ml mere methyliodid. Efter 22 timer tilsattes der 0,1 g mere af natriumhydriddisper-35 sionen og efter 24 timers forløb 1,0 ml mere me thyliodid, og denne blanding omrørtes i endnu 16 timer.

Den opnåede mørkerøde blanding afkøledes til 0°C, og bundfaldet opsamledes, vaskedes med en lille mængde

DK 161384B

40 koldt DMF og derefter med n-hexan og tritureredes i 200 ml vand. Den vandige suspension filtreredes, og bundfaldet tørredes til opnåelse af 5,76 g (66%) af den i overskriften anførte forbindelse, smp. 188 - 190°C.

5 På samme måde omdannedes 7,62 g (0,025 mol) 1-chlor-7-methoxy-4-nitro-9(1 OH)-acridinon til 5,05 g (63%) 1 -chlor-7-methoxy-10-methyl-4-nitro-9(1 OH)-acri dinon, smp. 235 - 240°C efter omkrystallisation af toluen.

10

Eksempel 14 1,9-Dichlor-7-methoxy-4-nitroacridin.

En omrørt blanding af 12,9 g 6-chlor-2[(4-meth-oxyphenyl)amino]-3-nitrobenzoesyre, 25 ml chlorbenzen 15 og 50 ml phosphoroxychlorid opvarmedes til tilbagesvalingstemperatur over et tidsrum på én time og holdes under tilbagesvaling i 4,5 timer. Man lader blandingen afkøle, og bundfaldet opsamles til opnåelse af den i overskriften anførte gule forbindelse, smp. 243 - 246°C 20 efter omkrystlalisation af toluen.

Eksempel 15 1- Chlor-7-hydroxy-4-nitro-9(1 OH)-acridinon.

10 g 2-chlor-5-nitro-6-[[4-phenylmethoxy)phenyl]-25 amino]benzoesyre, 30 ml 1,2-dichlorethan og 30 ml phosphoroxychlorid omrøres og opvarmes til tilbagesvaling i løbet af 10 - 15 minutter og tilbagesvales i 70 minutter. Den opnåede suspension filtreres, og bundfaldet vaskes med iseddike og derefter med acetone. Det røde 30 faste stof suspenderes i kogende toluen, opsamles og tørres til opnåelse af den i overskriften anførte forbindelse, smp. over 325°C.

2- Chlor-5-nitro-6-[[4-(phenylmethoxy) phenyl]amino]-35 benzoesyre.

En blanding af 50,0 g 2,4-dichlor-3-nitrobenzoe-syre, 85,7 g 4-benzyloxyanilin og 115 ml N,N-dimethyl-anilin opvarmes på et dampbad i 24 timer. Den afkølede

DK 161384 B

41 blanding tritureres med 600 ml chloroform og filtreres. Bundfaldet omrøres i en blanding af 350 ml chloroform og 350 ml 1 N vandigt NaOH, og det røde natriumsalt opsamles og omrøres med en blanding af 300 ml 1 N saltsyre 5 og 1,5 1 chloroform. Chloroformlaget koncentreres til opnåelse af den i overskriften anførte forbindelse som røde krystaller, smp. 172 - 174°C.

Eksempel 16 10 1-Chlor-4-nitro-7-(phenylmethoxy)-9-(1 OH)-acridinon.

4 g 2-chlor-5-nitro-6-[[4-phenyl-methoxy)phenyl ]-amino]benzoesyre opløses i 50 ml varm chloroform, og der tilsættes 0,2 ml Ν,Ν-dimethylanilin efterfulgt af 8,0 ml phosphoroxychlorid. Blandingen omrøres under til-15 bagesvaling i 80 minutter. Den opnåede suspension afkøles i is, og det faste stof opsamles til opnåelse af den 1 overskriften anførte forbindelse som et rødt fast stof med smp. 216 - 217 °C.

20 Eksempel 17 N,N-Diethyl-7-methoxy-5-nitropyrazolo[3,4,5-kl]acridin- 2 (6H) - ethan aminmeth an sul fonat (1:1).

En blanding af 1,52 g 1-chlor-5-methoxy-4-nitro-9(1 OH)-acridinon og 1,50 g [2-(diethylamino)ethyl]hy-25 drazin i 15 ml THF og 15 ml methanol omrørtes ved 50°C i to timer, henstilledes ved stuetemperatur natten over og inddampedes til tørhed. Remanensen, i chloroform, vaskedes med vandigt natriumhydrogencarbonat og kromato-graferedes på 150 g silicagel i chloroform, idet der 30 elueredes med 2% methanolisk chloroform, og der inddampedes til opnåelse af den i overskriften anførte forbindelse som den frie base, smp. 129 - 131°C.

Det i overskriften anførte salt, smp. 195 - 198° C, udkrystalliserede af en methanolisk etheropløsning af 35 basen og et ækvivalent methansulfonsyre.

DK 161384 B

42 1-Chlor-5-methoxy-4-nitro-9(1 OH)-acridinon.

En blanding af 23,6 g 2,6-dichlor-3-nitro-ben-zoesyre, 100 ml Ν,Ν-dimethylanilin og 27,1 g o-anisi-din holdtes ved 140°C i 24 timer. Blandingen fortynde-5 des med chloroform og ekstraheredes med 300 ml 1 N

vandigt natriumhydroxid. Syrning af ekstrakten bevirkede udfældning af 6-chlor-2-[(2-methoxyphenyl)amino]-3-nitrobenzoesyre.

En godt omrørt blanding af 6,45 g af den oven-10 nævnte syre, 75 ml chloroform, 0,5 ml N,N-dimethyl-anilin og 13,0 ml phosphoroxychlorid opvarmedes under tilbagesvaling i 1,5 timer, og bundfaldet omkrystalliseredes af chlorbenzen til opnåelse af den i overskriften anførte forbindelse, smp. 315 - 320°C, 15

Eksempel 18 N,N-Diethyl-9-ethoxy-5-nitropyrazolo[3,4,5-kl]-acridin-2(H)-ethanamin-methansulfonat (1:1).

En suspension af 2,53 g 1-chlor-7-ethoxy-4-20 nitro-9(1 OH)acridinon, 2,93 g [2-(diethylamino)-ethyl ]-hydrazin og 150 ml THF omrørtes i 18 timer ved stuetemperatur. Den opnåede opløsning filtreredes og koncentreredes i vakuum til et fast stof, der vaskedes med vand. Det tørrede faste stof kromatograferedes på sili-25 cagel, idet der elueredes med 1% methanol i chloroform.

De ønskede fraktioner hældtes sammen og koncentreredes i vakuum til opnåelse af den frie base af den i overskriften anførte forbindelse, smp. 165 - 167°C. En varm THF-opløsning af den frie base behandledes med et ækvi-30 valent af methanolisk methansulfonsyre til opnåelse af det i overskriften anførte salt, smp. 212 - 214°C.

1-Chlor-7-ethoxy-4-nitro-9(1 OH)-acridinon.

En blanding af 28,0 g p-phenetidin, 23,6 g 35 2,6-dichlor-3-nitrobenzoesyre og 80 ml Ν,Ν-dimethylani lin opvarmedes i fem timer på et dampbad. Den opnåede blanding fortyndedes med chloroform og ekstraheredes med 1 N natriumhydroxid. Ved syrning af den vandige ekstrakt

DK 161384 B

43 opnåedes 6-chlor-2-[(4-ethoxyphenyl) amino]-3-nitroben-zoesyre som rødbrune krystaller.

15 g af den ovennævnte syre omrørtes sammen med 1,5 ml Ν,Ν-dimethylanilin og 30 ml phosphoroxychlorid i 5 200 ml chloroform under tilbagesvaling i to timer. Ef ter henstand ved stuetemperatur natten over filtreredes blandingen til opnåelse af den i overskriften anførte forbindelse som skinnende sorte krystaller, smp. 244 -246°C.

10

Eksempel 19 N,N-Diethyl-5-nitro-9-propoxypyrazolo[3,4,5-kl]-acridin-2(6H)-ethanamin-methansulfonatsalt.

En opslæmning af 2,0 g 1-chlor-4-nitro-7-prop-15 oxy-9(1 OH)acridinon i 175 ml THF omrørtes natten over med en opløsning af 1,6 g [2-(diethylamino)-ethyl]hydrazin i 30 ml methanol ved stuetemperatur. Ved triture-ring i methanol af remanensen fra koncentreringen af reaktionsblandingen opnåedes den frie base, smp. 141 -20 142°C. Ved behandling af en chloroformopløsning af det te stof med methanolisk methansulfonsyre opnåedes det i overskriften anførte salt, smp. 209 - 210°C.

1-Chlor-4-nitro-propoxy-9(1 OH)acridinon.

25 En blanding af 24,5 g 4-propoxyanilin, 19,8 g 2,6-dichlor-3-nitrobenzoesyre og 150 ml Ν,Ν-dimethylanilin opvarmedes under nitrogen ved 100°C natten over.

Den afkølede reaktionsblanding behandledes med fortyndet base og chloroform. Efter at det vandige lag var vasket 30 flere gange med chloroform, behandledes det med saltsyre, og de opnåede nåle opsamledes ved filtrering og vaskedes med vand til opnåelse af 6-chlor-3-nitro-2-[(4-propoxy-phenyl)amino]benzoesyre, smp. 194 - 196°C.

En blanding af 21,05 g af den ovennævnte syre, 35 1 ml Ν,Ν-dimethylanilin, 42 ml phosphoroxychlorid og 200 ml 1,2-dichlorethan opvarmedes under tilbagesvaling i 30 minutter. Reaktionsblandingen afkøledes til stuetemperatur, og det opnåede røde faste stof opsamledes 5

DK 161384 B

44 ved filtrering og vaskedes med chloroform til opnåelse af den i overskriften anførte forbindelse, smp. 174 -175°C.

Eksempel 20 9-Butoxy-N,N-diethyl-5-nitropyrazolo:[ 3,4,5-kl ] -acridin-2(6H)-ethanamin-methansulfonat.

En afkølet (-10°C) opslæmning af 2,5 g 7-butoxy-10 1-chlor-4-nitro-9(10H)acridinon behandledes med 1,84 g [2-(diethylamino)ethyl]hydrazin og omrørtes ved stuetemperatur i 18 timer. Reaktionsblandingen koncentreredes i vakuum til en olie, opløstes i chloroform, vaskedes med fortyndet base og tørredes. Det rå materiale kroma-15 tograferedes på silicagel, idet der elueredes med 1% methanol i chloroform til opnåelse af den frie base, smp.

142,5 - 143°C.

En opløsning af den frie base i THF behandledes med et ækvivalent methanolisk methansulfonsyre til opnå-20 else af det i overskriften anførte salt, smp. 187 - 189° C.

7-Butoxy-1-chlor-4-nitro-9(1 OH)acridinon.

En opløsning af 25 g p-butoxyanilin og 17,85 g 25 2,6-dichlor-3-nitrobenzoesyre i 50 ml N,Kf-dimethylani-lin opvarmedes under nitrogen til 100°C i 18 timer. Reaktionsblandingen behandledes med 500 ml 0,2 N natriumhydroxid og 500 ml chloroform. Det vandige lag vaskedes med yderligere chloroform og syrnedes til opnåelse af 30 2-[(4-butoxyphenyl)amino]-6-chlor-3-nitrobenzoesyre, smp. 166 - 169°C.

En blanding af 17,9 g af den ovennævnte syre, 45 ml phosphoroxychlorid, 3 ml Ν,Ν-dimethylanilin og 500 ml chloroform opvarmedes under tilbagesvaling i to timer 35 og afkøledes derefter i is. Det opnåede røde faste stof opsamledes ved filtrering og vaskedes med koldt chloroform til opnåelse af den i overskriften anførte forbindelse, smp. 154 - 155°C.

DK 161384 B

45

Eksempel 21 9-[2-(Diethylamino)ethoxy]-N,N-diethyl-5-nitropyrazolo-[3,4, 5-kl]acridin-2(6H)-ethanamin-methansulfonat (1:2).

5 Til en omrørt opløsning af 1,95 g 1-chlor-7- [2-(diethylamino)ethoxy3-4-nitro-9(10H)-acridinon i 40 ml THF sattes 5 ml opløsning af 1,44 g [2-(diethyl-amino)ethyl]hydrazin i THF over et tidsrum på 45 minutter. Der tilsattes methanol (10 ml) til opløsning af 10 bundfaldet. Man lod blandingen henstå i 24 timer og inddampede den til tørhed. Remanensen vaskedes med vand og kromatograferedes på 20 g silicagel i chloroform, idet der elueredes med chloroform indeholdende op til 10% methanol. Den frie base af den i overskriften an-15 førte forbindelse, smp. 137 - 139°C, omdannedes til det i overskriften anførte salt, smp. 212 - 214°C, i methanol isk ethylacetat indeholdende to ækvivalenter methan-sulfonsyre.

20 1-Chlor-7-[2-(diethylamino)ethoxy]-4-nitro-9(1 OH)-acri dinon.

Til en kold opløsning af 41,8 g 4-nitrophenol i 250 ml DMF sattes 16,0 g af en 57%'s dispersion af na-triumhydrid i mineralolie, efterfulgt af 46,0 g 2-di-25 ethylaminoethylchlorid. Efter 20 timers forløb filtreredes blandingen og befriedes for opløsningsmiddel ved inddampning under formindsket tryk, og remanensen opløstes i ether og vaskedes med vand. Der ekstraheredes med 2 N saltsyre, og ekstrakten blev gjort basisk, hvor-30 ved der opnåedes N,N-diethyl-2-(4-nitrophenoxy)ethan-amin.

Det ovennævnte nitrobenzenderivat (26,2 g) i THF hydrogeneredes over Raney-nikkelkatalysator, og den opnåede blanding filtreredes og inddampedes til opnåelse 35 af 25,0 g 4-[2-(diethylamino)ethoxy]benzenamin.

Den ovennævnte amin sattes til en opløsning af j 23,6 g 2,6-chlor-3-nitrobenzoesyre i 60 ml N,N-dime-thylanilin, efterfulgt af 17,5 ml N,N-diisopropylethyl-

DK 161384 B

46 amin, og den opnåede blanding opvarmedes til 60 C i 25 timer under argon. Der tilsattes chloroform (300 ml), og det orange bundfald af 6-chlor-2-[[4-[2-(diethyl-amino)ethoxy]phenyl]amino]-3-nitrobenzoesyre, smp. 212 -5 215°C, opsamledes.

En suspension af 18/3 g af den ovennævnte carboxylsyre i 120 ml 1,2-dichlorethan og 28,5 ml Ν,Ν-dimethylanilin behandledes med 5,0 ml phosphoroxy-chlorid, omrørtes og opvarmedes i 19 timer under argon 10 og filtreredes. Bundfaldet rystedes med chloroform og 100 ml 0,5 N vandigt natriumhydroxid, og det organiske lag inddampedes til opnåelse af den i overskriften opnåede forbindelse, smp. 148 - 151°C.

15 Eksempel 22 N, N-D iethy1-9-[(4-methoxypheny1)methoxy]-5-nitropyrazo-lo[3,4,5-kl]acridin-2(6H)-ethanamin-methansulfonat (salt) (1:1).

Til en suspension af 1,23 g 1-chlor-7- [(4-20 methoxyphenyl)methoxy ]-4-nitro-9(1 OH)-acridinon i 40 ml THF og 5 ml methanol sattes en opløsning af 0,86 g [2-(diethylamino)ethylIhydrazin i 5 ml THF i løbet af 40 minutter. Blandingen omrørtes i 24 timer og inddampedes til tørhed, og remanensen vaskedes med vand og 25 kromatograferedes på 55 g silicagel i chloroform, idet der elueredes med chloroform-methanol (50:1), hvorved der opnåedes den frie base af den i overskriften anførte forbindelse, smp. 156 - 157°C.

Det i overskriften anførte salt, smp. 182 - 183°C 30 (dec.), fremstilledes i methanol-ethylacetat indeholden de ét ækvivalent methansulfonsyre.

1-Chlor-7-[(4-methoxyphenyl)methoxy]-4-nitro-9(10H) — acridinon.

35 Til en opløsning af 24,2 g natrium-p-nitrophen- oxid i 60 ml DMF sattes 23,5 g 4-methoxybenzylchlorid. Bundfaldet opsamledes efter 24 timer, vaskedes med vand og omkrystalliseredes af chloroform-cyclohexan til opnå-

DK 161384 B

47 else af1-methoxy-4-[(4-nitrophenoxy)methyl]benzen, smp.

122 - 124 °C.

Den ovennævnte nitroforbindelse hydrogeneredes i THF-ethanol i nærværelse af Raney-nikkel-katalysator, 5 hvorved der opnåedes 4-[(4-methoxyphenyl)methoxy]-benzenamin, smp. 118 - 120°C.

En blanding af 25 g N,N-dimethylanilin, 9,23 g N,N-diisopropylethylamin, 11,8 g 2,6-dichlor-3-nitro-benzoesyre og 11,5 g 4-[(4-methoxyphenyl)methoxy]ben-10 zenamin opvarmedes til 50 - 80°C i 135 timer og hældtes ud i 1200 ml diethylether. Det gummiagtige bundfald opløstes i chloroform og omrørtes med 100 ml 1 N vandigt natriumhydroxid. Det røde faste stof, der dannedes, opsamledes og suspenderedes i 300 ml vand, og der til-15 sattes 25 ml 1 N saltsyre, og 6-chlor-2-[[4-[(4-methoxyphenyl )methoxy]phenyl]amino]-3-nitrobenzoesyre ekstra-heredes med chloroform. Ved inddampning af ekstrakten opnåedes røde krystaller, smp. 173 - 175°C.

En blanding af 8,15 g af den ovennævnte carboxyl-20 syre, 50 ml 1,2-dichlorethan, 15,0 ml N,N-dimethylani-lin og 2,15 g phosphoroxychlorid henstilledes ved stuetemperatur i 15 timer. Bundfaldet opsamledes til opnåelse af den i overskriften anførte forbindelse, smp.

187 - 189°C.

25

Eksempel 23 N,N-Diethyl-7,9-dimethoxy-5-nitropyrazolo[3,4,5-kl]-acridin-2(6H)-ethanamin-methansulfonat-hydrat (1:1).

En afkølet (-20°C) opslæmning af 2,5 g 1-chlor-30 5,7-dimethoxy-4-nitro-9(10H)-acridinon i 150 ml THF be handledes med 1,98 g [2-(diethylamino)ethyljhydrazin i 50 ml methanol og omrøres ved stuetemperatur natten over. Efter at reaktionsblandingen var koncentreret i vakuum, opløstes remanensen i chloroform, vaskedes efter 35 hinanden med fortyndet base og vand og tørredes. Den koncentrerede opløsning kromatograferedes på silicagel, idet der elueredes med 2% methanol i chloroform til opnåelse af den frie base af den i overskriften anførte

DK 161384 B

48 forbindelse. Saltet, smp. 241 - 242°C, fremstilledes ved at behandle en chloroformopløsning af den frie base med et ækvivalent methanolisk methansulfonsyre, fortynde med 2-propanol, og opsamle det fremkomne orange fa-5 ste stof ved filtrering.

1-Chlor-5,7-dimethoxy-4-nitro-9(10H)-acridinon.

En blanding af 23,6 g 2,6-dichlor-3-nitrobenzoe-syre, 31,0 g 2,4-dimethoxyanilin og 100 ml N,N-dime-10 thylanilin opvarmedes i 24 timer på et dampbad og derefter i tre timer til 150°C. Den opnåede blanding rystedes med 1 liter chloroform og 1 liter 4% ammoniumhydro-chlorid, og lagene adskiltes. Det vandige lag vaskedes med chloroform, syrnedes og ekstraheredes med chloroform, 15 og ekstrakten koncentreredes til 200 ml og fortyndedes med cyclohexan. Der opsamledes mørkerøde krystaller af 6-chlor-2-[(2,4-dimethoxyphenyl)amino]-3-nitrobenzoe-syre, smp. 166 - 170°C.

Den ovennævnte syre (7,36 g), 15 ml phosphoroxy-20 chlorid, 1,0 ml Ν,Ν-dimethylanilin og 125 ml chloroform hældtes sammen og omrørtes under tilbagesvaling i 1,5 timer, hvorefter blandingen henstilledes ved stuetemperatur natten over. Det røde bundfald af den i overskriften anførte forbindelse, smp. 289 - 293°C, opsamle-25 des.

Eksempel 24 N,N-Diethyl-8,10-dimethoxy-5-nitropyrazolo[3,4, 5-kl] -acridin-2(6H)-ethanamin-methansulfonat-hydrat (1:1:1).

30 En opslæmning af 2,0 g 8-chlor-1,3-dimethoxy- -5-nitro-9(1 OH)acridinon i 200 ml kold THF behandledes med 1,56 g [2-(diethylamino)ethyl]-hydrazin i 50 ml methanol og omrørtes i 18 timer. Efter at reaktionsblandingen var koncentreret i vakuum, opløstes remanensen i 35 chloroform, vaskedes med vand og fortyndet base og kroma-tograferedes på silicagel, idet der elueredes med 2% methanol i chloroform til opnåelse af den frie base, smp.

213 - 215°C. Saltet fremstilledes ved at behandle en

DK 161384B

49 chloroformopløsning af den frie base med et ækvivalent methanolisk methansulfonsyre til opnåelse af et orange fast stof, smp. 240 - 241°C.

5 8-Chlor-1,3-dimethoxy-5-nitro-9(10H)acridinon.

En blanding af 25 g 2,5-dimethoxyanilin, 19,2 g 2,6-dichlor-3-nitrobenzoesyre og 60 ml Ν,Ν-dimethylani-lin opvarmedes under nitrogen til 100°C i 4 dage. Den afkølede reaktionsblanding behandledes med 2 N natrium-10 hydroxid og dichlormethan. Det vandige lag vaskedes flere gange med dichlormethan og syrnedes derefter til opnåelse af 6-chlor-2-[ (3,5-dimethoxyphenyl) amino]-3-nitrobenzoesyre, smp. 174 - 177°C.

En blanding af 17 g af den ovennævnte syre, 40 ml 15 phosphoroxychlorid, 3 ml Ν,Ν-dimethylanilin og 600 ml 1,2-dichlorethan opvarmedes under tilbagesvaling i to timer. Efter at reaktionsblandingen var koncentreret i vakuum, behandledes den opnåede remanens med varm iseddike og fortyndedes med vand. Det opnåede faste stof 20 opsamledes ved filtrering og vaskedes med vand og methanol til opnåelse af den i overskriften anførte forbindelse, smp. 291 - 294°C.

Eksempel 25 25 10-Chlor-N,N-diethyl-9-methoxy-5-nitropyrazolo[3,4,5- kl]acridin-2(6H)ethanamin-methansulfonat-hydrat.

En opslæmning af 0,85 g 1,8-dichlor-2-methoxy- 5-nitro-9(1 OH)acridinon i 100 ml THF behandledes med 1,4 g [2-(diethylamino)ethyl]hydrazin og omrørtes i én 30 time. Efter 2 dages henstand i kulden fjernedes opløsningsmidlet i vakuum, og remanensen tritureredes i methanol til opnåelse af den frie base, smp. 202 - 204°C.

Ved behandling af en chloroformopløsning af basen med ethanolisk methansulfonsyre opnåedes det i overskriften 35 anførte salt, smp. 271 - 273°C.

DK 161384 B

50 1,6-Dichlor-7-methoxy-4-nitro-9(1 OH)acridinon og 1,8-dichlor-2-methoxy-5-nitro-9(10H)acridinon.

En blanding af 30 g 3-chlor-4-methoxyanilin, 5 18,9 g 2,6-dichlor-3-nitrobenzoesyre og 150 ml N,N-di- methylanilin opvarmedes til 100°C under nitrogen i 24 timer. Reaktionsblandingen opløstes i chloroform og vaskedes med fortyndet ammoniumhydroxid. Efter at det vandige lag var vasket med chloroform, syrnedes det, og 10 det opnåede orange faste stof opsamledes til opnåelse af 6-chlor-2-[ (3-chlor-4-methoxyphenyl)amino]-3-nitrobenzoesyre, smp. 222 - 228°C.

En blanding af 17 g 6-chlor-2-[(3-chlor-4-meth-oxyphenyl)amino]-3-nitrobenzoesyre, 35 ml phosphoroxy-15 chlorid, 1 ml Ν,Ν-dimethylanilin og 150 ml 1,2-di-chlorethan opvarmedes under tilbagesvaling i 45 minutter. Det opnåede faste stof opsamledes ved filtrering fra den varme reaktionsblanding og vaskedes med chloroform til opnåelse af 1,6-dichlor-7-methoxy-4-nitro-9-20 (1 OH)-acridinon, smp. 284 - 285°C.

Fra det afkølede filtrat opnåedes der et andet fast stof, som kromatograferedes på silicagel med di-chlormethan til opnåelse af 1,8-dichlor-2-methoxy-5-nitro-9(1 OH)acridinon, smp. 251 - 253°C.

25

Eksempel 26 9-[[(1,1-Dimethylethyl)dimethylsilyl]oxy]-N,N-diethyl-5-nitropyrazolo[3,4,5-kl]acridin-2(6H)-ethanamin-me-thansulfonat (salt) (1:1).

30 En suspension af 1,47 g 2—[2—(diethylamino)- ethyl]-2,6-dihydro-5-nitropyrazolo[3,4,5-kl]acridin-9-ol, 40 ml dichlormethan, 1,05 g tert-butyldimethylsi-lylchlorid og 0,10 g 4-dimethylaminopyridin omrørtes ved stuetemperatur i 72 timer. Den opnåede mørkegule 35 opløsning fortyndedes med 100 ml dichlormethan, vaskedes med vand, koncentreredes og kromatograferedes på 85 g silicagel i chloroform, idet der elueredes med chloroform-methanol (50:1). Det ønskede eluat inddampedes til

DK 161384 B

51 opnåelse af den frie base af den i overskriften anførte forbindelse, smp. 218 - 220°C. Det i overskriften anførte salt opnåedes fra methanol-chloroform-ethylacetat indeholdende ét ækvivalent methansulfonsyre og omkry-5 stalliseredes af acetonitril, smp. 207 - 213°C.

Eksempel 27 2 — C2 —(Diethylamino ethyl]-2,6-dihydro-5-nitropyrazolo-) [3,4,5-kl]acridin-9-ol-acetat (ester)-methansulfonat 10 (salt) (1:1).

En blanding af 1,10 g 2-[2-(diethylamino)ethyl]- 2,6-dihydro-5-nitropyrazolo[3,4,5-kl]acridin-9-ol, 40 ml dichlormethan, 0,26 ml acetylchlorid og 0,78 ml N,N-diisopropylethylamin omrørtes i 2,5 timer ved stuetempe-15 ratur. Blandingen inddampedes til tørhed, og remanensen tritureredes med ethanol og kromatograferedes på 60 g silicagel i chloroform, idet der elueredes med chloro-form-methanol (50:1). Det ønskede eluat inddampedes til tørhed, og remanensen hældtes sammen med ét ækvivalent 20 methansulfonsyre i methanol-ethylacetat. Det opnåede salt omkrystalliserectes af methanolisk acetonitril til opnåelse af den i overskriften anførte forbindelse, smp. 250 - 251°C under dekomponering.

25 Eksempel 28 2-[2-(Diethylamino)ethyl]-2,6-dihydro-5-nitropyrazolo-[3,4,5-kl]acridin-9-ol-2,2-dimethylpropanoat (ester)-methansulfonat (salt) (1:1).

En suspension af 1,84 g 2-[2-(diethylamino)-3 0 ethyl]-2,6-dihydro-5-nitropyrazolo[3,4,5-kl]-acridin-9-ol, 60 ml dichlormethan, 0,74 ml trimethylacetylchlorid og 1,31 ml Ν,Ν-diisopropylethylamin omrørtes ved stuetemperatur i 24 timer. Der tilsattes 0,5 ml mere af syrechloridet og 1,4 ml diisopropylethylamin, og omrø-35 ringen fortsattes i 65 timer. Den opnåede mørkegule opløsning fortyndedes med 100 ml dichlormethan, vaskedes med vand og inddampedes til en fugtig remanens, der suspenderedes i 40 ml ethanol og filtreredes. Det faste

DK 161384 B

52 stof omkrystalliseredes af 80 ml acetonitril til opnåelse af den frie base af den i overskriften anførte forbindelse, smp. 255 - 258°C (dec.)· Det i overskriften anførte salt, 233 - 235°C (dec.), udkrystalliserede af 5 en opløsning af basen i methanol-ethylacetat-diethyl-ether indeholdende et ækvivalent methansulfonsyre.

Eksempel 29 [2-[2-(Diethylamino) ethyl 3-2,6-dihydro-5-nitropyrazolo-10 [3,4,5-kl]acridin-9-yl]butansyreester-methansulfonat (salt) (1:1).

En blanding af 1,47 g 2-[2-(diethylamino)ethyl]- 2,6-dihydro-5-nitropyrazolo[3,4,5-kl]acridin-9-ol, 100 ml 1,2-dichlorethan, 0,63 ml butyrylchlorid og 1,74 ml 15 Ν,Ν-diisopropylethylamin omrørtes ved 50 C i 2,5 timer og befriedes for opløsningsmiddel ved inddampning under formindsket tryk, og remanensen tritureredes med vand og opsamledes. Det rå produkt, i chloroform, vaskedes med 5% vandig natriumhydrogencarbonat og kromatografe-20 redes på 65 g silicagel i chloroform. Det ønskede eluat inddampedes til tørhed og hældtes sammen med methansulfonsyre i methanolisk ethylacetat til opnåelse af den i overskriften anførte forbindelse, smp. 220 - 222°C.

25 Eksempel 30

Octansyre-t 2 - [ 2 - (diethylamino) ethyl] -2,6-dihydro-5-nitro-pyrazolo[3,4,5-kl]acridin-9-yl]ester-methansulfonat (1:1 )-hemihydrat.

En blanding af 1,84 g 2-[2-(diethylamino)ethylΙ-ΙΟ 2,6-dihydro-5-nitropyrazolo[3,4,5-kl]acridin-9-ol, 50 ml 1,2-dichlorethan, 1,57 ml Ν,Ν-diisopropylethylamin og 1,20 ml octanoylchlorid omrørtes ved 50°C i to timer og inddampedes til tørhed. Remanensen vaskedes med vand, opløstes i chloroform og vaskedes med 5% natriumhydro-35 gencarbonat. Opløsningen kromatograferedes på 100 g silicagel i chloroform og inddampedes til en remanens af den frie base af den i overskriften anførte forbindelse, smp. 136 - 138°C.

DK 161384 B

53

Det i overskriften anførte salt, smp. 159 - 163°C, opnåedes fra methanol-ethylacetat indeholdende en ækvivalent mængde methansulfonsyre.

5 Eksempel 31 2—E 2—(Diethylamino)ethyl]-2,6-dihydro-5-nitropyrazolo-[3,4,5-kl]acridin-9-ol-benzoat (ester)-methansulfonat (1:1) (salt)-monohydrat.

Til en suspension af 1,84 g 2-[2-(diethylamino)-10 ethyl]-2,6-dihydro-5-nitropyrazolo[3,4,5-kl]acridin-9-ol i 50 ml 1,2-dichlorethan sattes 1,15 ml benzoyl-chlorid og 2,10 ml Ν,Ν-diisopropylethylamin, og blandingen omrørtes i fem timer til 75°C. Den opnåede orange opløsning inddampedes til tørhed. Remanensen vaske-15 des med vand, opløstes i chloroform og vaskedes med vandigt natriumhydrogencarbonat, hvorefter der omkrystalliseredes af toluen-cyclohexan til opnåelse af den frie base af den i overskriften anførte forbindelse, smp.

192 - 195°C. Det i overskriften anførte salt, smp. 225 20 - 228°C, udkrystalliserede af en opløsning af basen og ét ækvivalent methansulfonsyre i methanolisk ethylace-tat.

Eksempel 32 25 [2-[2-(Diethylamino)ethyl]-2,6-dihydro-5-nitropyrazolo- [3,4,5-kl]acridin-9-yl]kulsyreethylester-methansulfonat (salt) (1:1).

En blanding af 1,47 g 2-[2-(diethylamino)ethyl]- 2,6-dihydro-5-nitropyrazolo[3,4,5-kl]acridin-9-ol, 50 ml 30 dichlormethan, 0,57 ml ethylchlorformiat og 1,05 ml Ν,Ν-diisopropylethylamin omrørtes i 1,5 timer ved stuetemperatur og inddampedes til tørhed, og remanensen tri-tureredes med vand og kromatograferedes på 60 g silica-gel i chloroform. Den ønskede portion af eluatet ind-35 dampedes til tørhed, opløstes i ethylacetat og behandledes med 3 ml 1 N methanolisk methansulfonsyre, hvilket bevirkede udfældning af den i overskriften anførte forbindelse, smp. 199 - 201°C.

DK 161384B

... 54

Eksempel 33 9-(Dimethylamino)-N,N-diethyl-5-nitropyralozo[3,4, 5-kl]-acridin-2(6H)-ethanamin-methansulfonat (1:2).

5 En suspension af 1,27 g 1-chlor-7-(dimethyl amino) -4-nitro-9(1 OH)-acridinon, 15 ml THF og 15 ml methanol, og 1,31 g [2-(diethylamino)-ethyl]hydrazin om-rørtes i 24 timer ved stuetemperatur, afkøledes i is og filtreredes. Det faste stof vaskedes med kold methanol 10 og derefter med vand, opløstes i chloroform, vaskedes med fortyndet ammoniakvand og kromatograferedes på sili-cagel, idet der elueredes med chloroform og chloroform-methanol (50:1). Det ønskede eluat inddampedes, og der krystalliseredes fra toluen-isoactan til tilvejebringel-15 se af den frie base af den i overskriften anførte forbindelse, smp. 192 - 196°C. Det i overskriften anførte salt, smp. 206 - 208°C, krystalliserede fra en methano-lisk opløsning af basen og to ækvivalenter methansulfon-syre efter tilsætning af ethylacetat.

20 1-Chlor-7-(dimethylamino)-4-nitro-9(1 OH)acridinon.

En blanding af 41,0 g N,N-dimethyl-p-phenylen-diamin, 100 ml Ν,Ν-dimethylanilin og 23,6 g 2,6-di-chlor-3-nitrobenzoesyre opvarmedes i syv timer på et 25 dampbad. Den opnåede kage suspenderedes i dichlorme- than og filtreredes, og det faste stof vaskedes med vand.

Ved omkrystallisation af DMF-ethanol opnåedes 6-chlor-21[4-(dimethylamino) phenyl]amino]-3-nitrobenzoesyre, smp. 222 - 223°C (dec.).

30 Til en opløsning af 8,40 g af den ovennævnte syre i 300 ml 1,2-dichlorethan og 19,0 ml triethylamin sattes 4,2 ml phosphoroxychlorid, og blandingen omrørtes i to timer og behandledes med 10,0 ml methanol. Denne blanding koncentreredes under formindsket tryk til en 35 remanens, der tritureredes med 80 ml methanol. Det faste stof opsamledes, tritureredes med ammoniakvand, tørredes og omkrystalliseredes af DMF til opnåelse af den i overskriften anførte forbindelse, et sort fast stof med smp. over 300°C.

DK 161384B

55

Eksempel 34 N,N-Diethyl-9-methyl-5-nitropyrazolo[3,4,5-kl]acridin-2(6H)-ethanamin-methansulfonat (salt) (1:1) .

5 En suspension af 1/44 g 1-chlor-7-methyl-4-ni- tro-9(10H)-acridinon i 20 ml methanol og 20 ml THF indeholdende 1,44 g [2-(diethylamino)ethyl]hydrazin omrørte s ved stuetemperatur i 20 timer. Det orange faste stof omkrystalliseredes af toluen til opnåelse af den 10 frie base af den i overskriften anførte forbindelse, smp.

213 - 217°C.

Det i overskriften anførte salt, smp. 204 - 207°C, udkrystalliserede af en methanol-ether-opløsning af basen og ét ækvivalent af methansulfonsyre.

15 1-Chlor-7-methyl-4-nitro-9(1 OH)-acridinon.

En blanding af 10,7 g p-toluidin, 11,8 g 2,6-dichlor-3-nitrobenzoesyre og 25 ml N,N-dimethylanilin omrørtes ved 135°C i 160 minutter. Blandingen fortyn-20 dedes med ether og ekstraheredes med 1 N vandigt natriumhydroxid. Ved syrning af den vandige opløsning, ekstraktion med chloroform og inddampning af ekstrakten opnåedes der 6-chlor-2-[(4-methylphenyl)amino]-3-nitro-benzoesyre som orange prismer, smp. 192 - 197°C.

25 En opløsning af 10,2 g af den ovennævnte carboxyl syre i 135 ml chloroform indeholdende 0,4 ml N,N-dime-thylanilin og 20,0 ml phosphoroxychlorid opvarmedes under tilbagesvaling i tre timer og afkøledes, og der opsamledes rødorange krystaller af den i overskriften an-30 førte forbindelse, smp. 239 - 241°C.

Eksempel 35 N,N-Diethyl-5-nitropyrazolo[3,4,5-kl]acridin-2(6H)-ethanamin-N-oxid-methansulfonatsalt (5:6)-hydrat (4:3).

35 En opløsning af 1,5 g N,N-diethyl-5-nitro-pyra- zolo[3,4,5-kl]acridin-2(6H)-ethanamin i 50 ml chloroform behandledes med en opløsning af 1,1 g 3-chlorperbenzoe-syre i 50 ml chloroform og omrørtes i én time ved stue-

DK 161384 B

56 temperatur. Det opnåede faste stof, 3-chlorbenzoatet af den i overskriften anførte forbindelse, smp. 143 — 145°C, opsamledes ved filtrering og vaskedes med chloroform. En methanolisk opløsning af dette stof adsorbere-5 des på basisk aluminiumoxid og elueredes med chloroform, og de fraktioner, der indeholdt den ønskede frie base, koncentreredes i vakuum til et gummiagtigt stof. Ved behandling af en chloroformopløsning af dette stof med methanolisk methansulfonsyre opnåedes det i overskriften 10 anførte salt, smp. 173 - 180°C.

Eksempel 36 N-Ethyl-9-methoxy-5-nitropyrazolo[3,4,5-kl]acridin-2(6H)-ethanamin-1,25-methansulfonatsalt (4:5)- hemihy-15 drat.

En opslæmning af 1,43 g 2-(2-chlorethyl)-2,6-dihydro-9-methoxy-5-nitropyrazolo[3,4,5-kl]acridin i 20 ml ethylamin opvarmedes i en trykbeholder i 18 timer til 100°C. Efter at overskuddet af ethylamin var fjer-20 net i vakuum, tritureredes det opnåede faste stof i methanol til opnåelse af den frie base, smp. 168 - 170°C.

Det i overskriften anførte salt, smp. 228 - 230°C, fremstilledes ved behandling af en chloroformopløsning af basen med methanolisk methansulfonsyre.

25 2-(2-Chlorethyl)-2,6-dihydro-9-methoxy-5-nitropyrazolo-[3,4,5-kl]acridin.

En opløsning af 3,6 g 2-hydroxyethylhydrazin i 5 ml methanol og 20 ml THF sattes i løbet af 1,5 timer 30 til en blanding af 6,09 g 1-chlor-7-methoxy-4-nitro-9(10H)-acridinon i 75 ml methanol og 55 ml THF, og den opnåede suspension omrørtes i 20 timer ved stuetemperatur. Bundfaldet opsamledes og omkrystalliseredes af DMSO-me-thanol til opnåelse af 9-methoxypyrazolo[3,4,5-kl]acri-35 din-2(6H)-ethanol, smp. 275 - 276°C.

En blanding af 6,0 g af den ovennævnte alkohol, 7,0 g 4-toluensulfonylchlorid, 1,69 g 4-dimethylamino-pyridin, 5 ml triethylamin og 100 ml Ν,Ν-dimethylforma-

DK 161384 B

57 mid opvarmedes til 100°C i 30 minutter og fortyndedes derefter med en liter vand. Det opnåede faste stof opsamledes ved filtrering og tritureredes derefter i methanol. Ved omkrystallisation af varm N,N-dimethyl-5 formamid opnåedes den i overskriften anførte forbindelse, smp. 264 - 265°C.

Eksempel 37 9-Ethoxy-N,N-dimethyl-5-nitropyrazolo[3,4,5-kl]-acridin-10 2(6H)ethanamin-methansulfonat (4:5).

En opslæmning af 2,0 g 1-chlor-7-ethoxy-4-nitro-9(1 OH)acridinon i 200 ml koldt (-10°C) THF behandledes med 1,42 g [2-(dimethylamino)ethyl]hydrazin i 20 ml methanol og omrørtes ved stuetemperatur i to timer. Efter 15 at opløsningsmidlerne var fjernet under formindsket tryk, kromatograferedes remanensen på silicagel, idet der elueredes med 2% methanol i chloroform til opnåelse af den frie base, smp. 195 - 197°C. Ved behandling af en chloroformopløsning af den frie base med methanolisk 20 methansulfonsyre opnåedes det i overskriften anførte salt, smp. 214 - 216°C.

Eksempel 38 7,9-Dimethoxy-N,N-dimethyl-5-nitropyrazolo[3,4,5-kl]-25 acridin-2(6H)-ethanamin-methansulfonat (1:1.

En opslæmning af 2,0 g 1-chlor-5,7-dimethoxy-4-nitro-9(1 OH)-acridinon i 150 ml koldt (0°C) THF behandledes med 1,5 g [2-(dimethylamino)ethyl]hydrazin i 50 ml methanol og omrørtes ved stuetemperatur i tre dage.

30 Det opnåede faste stof opsamledes ved filtrering og vaskedes grundigt med methanol til opnåelse af den frie base, smp. 239 - 241°C. Ved behandling af en chloroformopløsning af dette stof med methanolisk methansulfonsyre opnåedes det i overskriften anførte salt, 35 smp. 260 - 262°C.

DK 161384B

58

Eksempel 39 9-(Dimethylamino)-N,N-dimethyl-5-nitropyrazolo[ 3,4,5-kl]-acridin-2(6H)-ethanamin-methansulfonat (1:2)-dihydrat.

En blanding af 1,59 g 1-chlor-7-(dimethylamino)-5 4-nitro-9(1 OH)-acridinon, 20 ml THF, 20 ml methanol og 1,35 g [2-(dimethylamino)ethyllhydrazin omrørtes ved stuetemperatur i tre timer, afkøledes i is og filtreredes. Bundfaldet vaskedes med koldt methanol og derefter med vand og kromatograferedes på 50 g silicagel, idet 10 der elueredes med chloroform og chloroform-methanol (50:1). Det ønskede eluat inddampedes og omdannedes til den i overskriften anførte forbindelse, smp. 200 - 206°C, ved udkrystallisation fra methanol-ethylacetat indeholdende to ækvivalenter methansulfonsyre.

15

Eksempel 40 2-[[2-(9-Ethoxy-5-nitropyrazolo[3,4,5-kl]acridin-2(6H) -y1) ethyl]amino]ethanol-monohydrochlorid-hydrat (4 :1) .

En opslæmning af 2,32 g 1-chlor-7-ethoxy-4-ni-20 tro-9(1 OH)acridinon i 40 ml THF behandledes med 0,95 g 2-[(hydrazinethyl)amino]ethanol i 50 ml methanol og omrørtes ved stuetemperatur i 18 timer.

Et orange fast stof opsamledes ved filtrering og omkrystalliseredes i 25% methanolisk DMF til opnåelse af 25 det i overskriften anførte salt, smp. 283 - 285°C.(dec.).

Eksempel 41 2-[[2-(9-Butoxy-5-nitropyrazolo[3,4,5-kl]acridin-2(6H)-yl)ethyl]amino]ethanol-methansulfonat-hemihydrat.

30 En opslæmning af 2,0 g 7-butoxy-1-chlor-4-nitro- 9(1 OH)acridinon i 100 ml methanol behandledes med 1,5 g 2-[(hydrazinoethyl)amino]ethanol i 50 ml methanol og omrørtes ved stuetemperatur i 18 timer. Den opnåede frie base, smp. 170 - 172°C, af det i overskriften anførte 35 salt opsamledes ved filtrering, idet der vaskedes med methanol. Ved behandling af en chloroformopløsning af den frie base med overskud af methanolisk methansulfonsyre opnåedes det i overskriften anførte salt, smp. 239

DK 161384 B

59 - 241°C.

Eksempel 42 2-[[2-(9-Methyl-5-nitropyrazolo[3,4,5-kl]acridin-2(6H)-5 yl)ethyl]amino]ethanol-monohydrochlorid.

En suspension af 1,44 g 1-chlor-7-methyl-4-ni-tro-9(1 OH)-acridinon i 20 ml THF og 20 ml methanol, og indeholdende 0,71 g [2-(hydrazinoethy1)amino]ethanol, omrørtes ved stuetemperatur i syv timer. Den opnåede 10 suspension filtreredes, og bundfaldet vaskedes efter hinanden med THF, DMF og acetone til opnåelse af den i overskriften anførte forbindelse, smp. >300°C.

Eksempel 43 15 N,N-Diethyl-9-methoxy-5-nitropyrazolo[3,4,5-kl]acridin-2(6H)-propanamin-methansulfonat-hydrat (1:1).

En opslæmning af 2,0 g 1-chlor-7-methoxy-4-ni-tro-9(10H)acridinon i 150 ml THF behandledes med 2,09 g [3-(diethylamino)propyl]hydrazin i 30 ml methanol og om-20 rørtes i to timer. Efter at opløsningsmidlerne var fjernet i vakuum, krystalliseredes remanensen i methanol til opnåelse af den frie base, smp. 143 - 145°C. Det i overskriften anførte salt, smp. 191 - 193°C, opnåedes ved behandling af en chloroformopløsning af basen med 25 methanolisk methansulfonsyre.

Eksempel 44 2-[3-(Dimethylamino)propyl]-2,6-dihydro-5-nitropyrazolo-[3,4,5-kl]acridin-9-ol-methansulfonat.

30 En suspension af 3,85 g 1-chlor-7-hydroxy-4- nitro-9(1 OH)-acridinon i 50 ml tetrahydrofuran og 50 ml methanol indeholdende 3,30 g [3-(dimethylamino)propyl]-hydrazin omrørtes ved 60°C i 88 timer under argon. Det orange bundfald opsamledes, opløstes i 120 ml vand ved 35 80 C og blev gjort basisk til pH 8-9 med vandigt natrium- hydrogencarbonat. Den opnåede suspension filtreredes til opnåelse af den frie base af den i overskriften anførte forbindelse, smp. 244 - 247°C.

DK 161384 B

60

Den i overskriften anførte forbindelse, smp. 259 - 261°C, opnåedes ved opløsning af basen i vandigt methanol indeholdende ét ækvivalent methansulfonsyre og tilsætning af ethylacetat.

5

Eksempel 45 9-Methoxy-N,N-dimethyl-5-nitropyrazolo[3,4,5-kl]acridin-2(6H)-propanamin-methansulfonat.

En blanding af 2,13 g 1-chlor-7-methoxy-4-nitro-10 9(1 OH)-acridinon og 1,8 g [3-(dimethylamino)propyl]- hydrazin i 20 ml methanol og 20 ml THF omrørtes ved stuetemperatur i 7,5 timer og inddampedes til tørhed. Remanensen tritureredes med vand og omkrystalliseredes af 30 ml toluen og 20 ml isooctan til opnåelse af den 15 frie base af den i overskriften anførte forbindelse, smp.

176 - 178°C.

Den ovennævnte base opløstes i 20 ml vandigt methanol indeholdende ét ækvivalent methansulfonsyre, og ved tilsætning af ethylacetat opnåedes den i overskrif-'20 ten anførte forbindelse som orange krystaller, smp.

229 - 232°C.

Eksempel 46 9-Ethoxy-N,N-dimethyl-5-nitropyrazolo[3,4,5-kl]acridin-25 2(6H)-propanamin-methansulfonat (1:1.

En opslæmning af 2,0 g 1-chlor-7-ethoxy-4-nitro-9(1 OH)acridinon i koldt (-10°C) THF behandledes med 1,47 g [3-(dimethylamino)propyl]hydrazin i 25 ml methanol og omrørtes ved stuetemperatur i tre timer.

30 Efter at opløsningsmidlerne var fjernet under formindsket tryk, kromatograferedes Stoffet på silicagel med eluering med 5% methanol i chloroform til tilvejebringelse af den frie base, smp. 175 - 176°C. Ved behandling af en chloroformopløsning af dette stof med et 35 ækvivalent methanolisk methansulfonsyre opnåedes det i overskriften anførte salt, smp. 266 - 268°C.

DK 161384 B

61

Eksempel 47 2—Γ 3—(Dimethylamino)propyl]-5-nitropyrazolo[3,4,5-kl]-acridin-9-ol-acetat (ester)-methansulfonat (salt) (1:1).

En blanding af 1,24 g 2-[3-(dimethylamino)-pro-5 pyl]-2,6-dihydro-5-nitropyrazolo[3,4,5-kl]acridin-9-ol, 40 ml 1,2-dichlorethan, 0,96 ml acetylchlorid og 2,88 ml Ν,Ν-diisopropylethylamin omrørtes og opvarmedes til 80°C under argon i tre timer. Blandingen afkøledes, og det orange faste stof opsamledes og omrørtes med en 10 blanding af chloroform og vand under tilsætning af na-triumhydrogencarbonat, indtil den vandige fase nåede ca. pH 9. Denne blanding filtreredes, lagene adskiltes, og chloroformopløsningen inddampedes til opnåelse af et orange fast stof. Dette stof, i 40 ml ethylacetat, be-15 handledes med 2,4 ml 1 N methansulfonsyre, hvilket fremkaldte udfældning af den i overskriften anførte forbindelse, smp. 260 - 264°C.

Eksempel 48 20 2-[3-(Dimethylamino) propyl]-5-nitropyrazolo[3,4,5-kl3 - acridin-9-ol-2,2-dimethylpropanoat (ester)-methansulfonat (salt) (1:1).

En blanding af 0,96 g 2-[3-(dimethylamino)-propyl ]-2,6-dihydro-5-nitropyrazolo[3,4,5-kl]acridin-9-ol, 25 40 ml 1,2-dichlorethan, 0,50 ml trimethylacetylchlorid og 0,97 ml Ν,Ν-diisopropylethylamin omrørtes under argon ved 60°C i 80 minutter. Den opnåede blanding inddampedes til tørhed, opløstes i chloroform, vaskedes med fortyndet natriumhydrogencarbonat og kromatograferedes 30 på 75 g silicagel, idet der elueredes med chloroform-methanol (50:1). Den Ønskede fraktion befriedes for opløsningsmidler, opløstes i 40 ml ethylacetat og behandledes med 1,9 ml 1 N methanolisk methansulfonsyre, hvilket fremkaldte udfældning af den i overskriften an-35 førte forbindelse, smp. 243 - 245°C.

DK 161384B

62

Eksempel 49 2—[2—(Diethylamino)ethyl]-2,6-dihydro-3,5-dinitropyra-zolo[3,4,5-kl]acridin-9-ol-methansulfonat-hemihydrat.

En opslæmning af 0,9 g 1-chlor-7-hydroxy-2,4-5 dinitro-9(1 OH)-acridinon i 150 ml 0°C THF behandledes dråbevis i løbet af et tidsrum på én time med en blanding af 0,35 g [2-(diethylamino)ethyl]hydrazin og 0,36 g Ν,Ν-diisopropylethylamin og omrørtes derefter i to timer. Efter at opløsningsmidlet var fjernet i vakuum, 10 behandledes remanensen grundigt med methanol til opnåelse af den frie base, smp. >290°C. Det i overskriften anførte salt, smp. 249 - 253°e, fremstilledes ved behandling af en chloroformopløsning af den frie base med methanolisk methansulfonsyre, idet man opsamlede det 15 opnåede faste stof ved filtrering og vaskede med ethanol .

1- Chlor-7-hydroxy-2,4-dinitro-9(10H)-acridinon.

En blanding af 5,0 g 2-chlor-6-[[4-[(4-methoxy-20 phenyl)methoxy]phenyl]amino]-3,5-dinitrobenzoesyre, 10 ml phosphoroxychlorid, 0,2 ml Ν,Ν-dimethylanilin og 50 ml 1,2-dichlorethan opvarmedes under tilbagesvaling i 15 minutter, og reaktionsblandingen filtreredes varmt. Filterkagen vaskedes med 1,2-dichlorethan til opnåelse 25 af den i overskriften anførte forbindelse, smp. 278 -281°C.

2- Chlor-6-[[4-[4-(methoxyphenyl)methoxy]phenyl]-amino]- 3,5-dinitrobenzoesyre.

30 En opløsning af 12,65 g 4-[(4-methoxyphenyl)- methoxy]benzenamin i 150 ml chloroform sattes dråbevis i løbet af 30 minutter til en opløsning af 15,7 g 2,6-dichlor-3,5-dinitrobenzoesyre og 15 ml Ν,Ν-diisopropylethylamin i 250 ml chloroform. Efter omrøring af reak-35 tionsblandingen ved stuetemperatur i 18 timer behandledes den med fortyndet ammoniumhydroxid. Det opnåede orange faste stof opsamledes ved filtrering, vaskedes med vand og opslæmmedes i fortyndet saltsyre til opnåel-

DK 161384 B

63 se af den i overskriften anførte forbindelse, snip. 172 -174°C.

Eksempel 50 5 N,N-Diethyl-9-methoxy-3,5-dinitropyrazolo[3,4,5-kl]acri-din-2 (6H) -ethanamin-methansulfonat (1 :1 [-hydrat.

En opslæmning af 1,0 g 1-chlor-7-methoxy-2,4-dinitro-9(1 OH)-acridinon i 150 ml THF behandledes med 0,76 g [2-(diethylamino)ethyl]hydrazin og omrørtes ved 10 stuetemperatur i to timer. Efter fjernelse af opløsningsmidlet i vakuum opløstes remanensen i chloroform, vaskedes med vand og kromatograferedes på silicagel med 1% methanol i chloroform til opnåelse af den frie base, smp. 243 - 246°C. Ved behandling af en chloroformopløs-15 ning af basen med methanolisk methansulfonsyre opnåedes det i overskriften anførte salt, smp. 277 - 278°C.

1-Chlor-7-methoxy-2,4-dinitro-9(10H)-acridinon.

En opløsning af 17,6 g p-anisidin i 500 ml 20 chloroform sattes i løbet af et tidsrum på 2,5 timer til en 0°C opløsning af 40 g 2,6-dichlor-3,5-dinitro-benzoesyre og 47 ml Ν,Ν-diisopropylethylamin i 800 ml chloroform, hvorefter blandingen omrørtes ved stuetemperatur natten over.

25 Reaktionsblandingen ekstraheredes med 6 liter 5% ammoniumhydroxid i 1-liter portioner. Efter at de vandige lag var syrnet med fortyndet saltsyre, opsamledes det opnåede røde faste stof ved filtrering og vaskedes med vand til opnåelse af 2-chlor-6-[(4-methoxyphenyl)-30 amino]-3,5-dinitrobenzoesyre, smp. 241 - 245°C.

En blanding af 21,5 g af den ovennævnte syre, 43 ml phosphoroxychlorid, 2 ml Ν,Ν-dimethylanilin og 100 ml 1,2-dichlorethan opvarmedes under tilbagesvaling i én time. Efter afkøling opsamledes det opnåede røde 35 faste stof ved filtrering og vaskedes grundigt med 1,2-dichlorethan til opnåelse af den i overskriften anførte forbindelse, smp. 253 - 254°C.

DK 161384 B

64

Eksempel 51 9-Ethoxy-N,N-diethyl-3,5-dinitropyrazolo[3,4,5-kl]acri-din-2(6H)-ethanamin-methansulfonat-hydrat.

En kold opslæmning af 3 g 1-chlor-7-ethoxy-2,4-5 dinitro-9(1 OH)-acridinon i 150 ml THF behandledes dråbevis med en opløsning af 1,15 g [2-(diethylamino)ethyl]-hydrazin og 1,1 g Ν,Ν-diisopropylethylamin i 75 ml THF over et tidsrum på to timer. Reaktionsblandingen omrør-tes i to timer i kulden, hvorefter man lod den henstå 10 i kulden i tre dage. Efter fjernelse af et uopløseligt gummiagtigt stof ved filtrering koncentreredes filtratet i vakuum til opnåelse af et fast stof, som opløstes i chloroform og kromatograferedes på silicagel med 2% methanol i chloroform til opnåelse af den frie base. Ved 15 behandling af en chloroformopløsning af den frie base med methanolisk methansulfonsyre opnåedes det i overskriften anførte salt, smp. 278 - 280°C.

1-Chlor-7-ethoxy-2,4-dinitro-9(1 OH)-acridinon.

2q En opløsning af 10,5 g 4-ethoxyanilin i 250 ml acetonitril sattes i løbet af 1,5 timer til en opløsning af 20 g 2,6-dichlor-3,5-dinitrobenzoesyre og 11 g Ν,Ν-diisopropylethylamin i 400 ml acetonitril og omrørtes ved stuetemperatur i fem timer. Efter fjernelse af op-25 løsningsmidlet i vakuum opløstes remanensen i 500 ml chloroform og ekstraheredes med flere portioner 5% ammoniumhydroxid. De vandige ekstrakter vaskedes med chloroform og syrnedes med fortyndet syre. Det opnåede faste stof opsamledes ved filtrering og vaskedes med 3Q vand til opnåelse af 2-chlor-6-[(4-ethoxyphenyl)amino]- 3,5-dinitrobenzoesyre, smp. 202 - 206°C.

En blanding af 13,8 g af den ovennævnte syre, 26 ml phosphoroxychlorid, 1 ml Ν,Ν-dimethylanilin og 200 ml 1,2-dichlorethan opvarmedes under tilbagesvaling i én 25 time. Efter let afkøling opsamledes de opnåede rødligsorte plader ved filtrering og vaskedes med 1,2-dichlor-ethan til opnåelse af den i overskriften anførte forbindelse, smp. 238 - 241°C.

DK 161384 B

65

Eksempel 52 N,N-Diethyl-3,5-dinitro-9-(phenylmethoxy)pyrazolo-[3/4,5-kl3-2(6H)-ethanamin-methansulfonat-hemihydrat.

En opslæmning af 2,0 g 1-chlor-7-(phenylmethoxy)-5 2,4-dinitro-9(10H)-acridinon i 150 ml 0eC THF behandledes dråbevis med en opløsning af 0,67 g [2-(diethyl-amino)ethyl]hydrazin og 1,3 g N,N-diisopropylethylamin i 50 ml over et tidsrum på én time, og blandingen omrør-tes i 18 timer ved stuetemperatur. Efter opsamling af 10 en lille mængde fast stof ved filtrering inddampedes filtratet i vakuum til et fast stof, som tritureredes i methanol til opnåelse af den frie base. Saltet fremstilledes ved behandling af basen med methanolisk me-thansulfonsyre og omkrystallisation af det opnåede faste 15 stof i vandigt ethanol til opnåelse af det i overskriften anførte salt, smp. 251 - 253°C.

1- Chlor-2,4-dinitro-7-(phenylmethoxy)-9(1 OH)-acridinon.

En blanding af 9,7 g 2-chlor-3,5-dinitro-6-[[4-20 (phenylmethoxy)phenyl]amino]benzoesyre, 200 ml 1,2-di-chlorethan, 20 ml phosphoroxychlorid og 1,0 ml N,N-di-methylanilin opvarmedes under tilbagesvaling i 30 minut ter. Ved afkøling dannedes der et fast stof, som opsamledes og vaskedes med 1,2-dichlorethan til opnåelse af 25 den i overskriften anførte forbindelse, smp. 217 - 220°C.

2- Chlor-3,5-dinitro-6-[[4-(phenylmethoxy) phenyl]amino]-benzoesyre.

En opslæmning af 12,6 g 4-benzyloxyanilin-hydro-30 chlorid i vand behandledes med fortyndet natriumhydroxid, og den opnåede olie ekstraheredes med 600 ml chloroform.

Den tørrede opløsning sattes dråbevis i løbet af to timer til en opløsning af 15 g 2,6-dichlor-3,5-dinitro-benzoesyre og 6,9 g Ν,Ν-diisopropylethylamin i 200 ml 35 acetonitril, og blandingen omrørtes i 24 timer. Efter fjernelse af opløsningsmidlerne under formindsket tryk opløstes remanensen i chloroform og behandledes med fortyndet ammoniumhydroxid. Det dannede gummiagtige stof 66

DK 16 1384 B

opsamledes, behandledes med saltsyre, ekstraheredes tilbage i chloroform og koncentreredes derefter til opnåelse af den i overskriften anførte forbindelse, smp.

208 - 211°C.

5

Eksempel 53 N,N-Diethyl-9-[(4-methoxyphenyl)methoxy]-3,5-dinitropy-razolo[3,4,5-kl]acridin-2(6H)-ethanamin-methansulfonat (1:1) .

10 Til en suspension af 1,71 g 1-chlor-7-[(4- methoxyphenyl)methoxy]-2,4-dinitro-9(10H)-acridinon i 65 ml THF, omrørt og afkølet i et isbad, sattes en 10 ml opløsning af 0,53 g [2-(diethylamino)ethyl]hydrazin og 1,40 ml Ν,Ν-diisopropylethylamin i THF over et tidsrum 15 på to timer. Blandingen holdtes i is i endnu fem timer, hvorefter man lod den opvarme til stuetemperatur i løbet af 15 timer. Blandingen inddampedes til tørhed, og remanensen vaskedes med vand, opløstes i chloroform og kromatograferedes på silicagel i chloroform til opnåelse 20 af den frie base af den i overskriften anførte forbindelse, smp. 204 - 208°C.

Dét i overskriften anførte salt, smp. 218 - 219°C, (dec.), opnåedes fra methanolisk ethylacetat indeholdende et ækvivalent methansulfonsyre.

25 1-Chlor-7-[(4-methoxyphenyl)methoxy]-2,4-dinitro-9(10H)-acridinon.

Til en omrørt, iskold blanding af 2,67 g 2-chlor-6-[[4-[(4-methoxyphenyl)methoxy]phenyl]amino]-3,5-dini-30 trobenzoesyre, 18 ml 1,2-dichlorethan og 4,4 ml N,N-dimethylanilin sattes 0,70 ml phosphoroxychlorid. Efter 2,5 timers forløb fjernes isbadet, og blandingen omrør-tes i 24 timer ved stuetemperatur. Bundfaldet opsamledes, vaskedes med vand og derefter med methanol og tør-35 redes til opnåelse af den i overskriften anførte forbindelse, som smeltede over 240°C under dekomponering.

DK 161384 B

67

Eksempel 54 9-Methoxy-N,N-dimethyl-3,5-dinitropyrazolo[3,4,5-kl]-acridin-2(6H)-ethanamin-methansulfonat (1:1)-hydrat.

En opslæmning af 2,0 g 1-chlor-7-methoxy-2,4-5 dinitro-9(1 OH)-acridinon i 150 ml -5°C THF behandledes med 1,5 g [2-(dimethylamino)ethyl]-hydrazin i 50 ml methanol og omrørtes i 18 timer. Efter fjernelse af opløsningsmidlerne i vakuum opløstes remanensen i chloroform og kromatograferedes på silicagel med 2% me-10 thanol i chloroform til opnåelse af den frie base, smp.

237 - 239*C. Ved behandling af en chloroformopløsning af basen med methanolisk methansulfonsyre opnåedes det i overskriften anførte salt, smp. 281 - 282°C.

15 Eksempel 55 N,N-Dimethy1-3,5-dinitro-9-methoxypyrazolo[3,4,5-kl]-acridin-2(6H)-propanamin-methansulfonat (1:1).

En opslæmning af 2,0 g 1-chlor-2,4-dichlor-7-methoxy-9(1 OH)acridinon i 200 ml THF behandledes med 20 0,68 g [3-(dimethylamino)propyl]hydrazin og omrørtes i tre timer ved stuetemperatur. Det opnåede faste stof, hydrochloridsaltet af den i overskriften anførte forbindelse, opsamledes ved filtrering og vaskedes med THF.

Saltet opslæmmedes i vand, behandledes med fortyndet 25 ammoniumhydroxid og chloroform og filtreredes til fjernelse af uopløseligt stof. Chloroformopløsningen vaskedes med vand, tørredes over magnesiumsulfat, behandledes med methanolisk methansulfonsyre og fortyndedes med acetone. Opløsningen koncentreredes i vakuum, indtil der 30 fremkom et fast stof. Dette faste stof opsamledes ved filtrering og omkrystalliseredes i vandigt methanol til opnåelse af det i overskriften anførte salt, smp. 267 -269 °C.

35 Eksempel 56 N,N-Diethyl-9-methoxy-3,5-dinitropyrazolo[3,4,5-kl]acri-din-1(6H)-ethanamin-methansulfonat.

En opslæmning af 5,69 g 1-chlor-7-methoxy-2,4-

DK 161384B

68 dinitro-9(1 OH)-acridinon i 400 ml THF behandledes med 4,32 g [2-(diethylamino)ethyl]hydrazin og omrørtes i 18 timer ved stuetemperatur. Det opnåede gule faste stof, smp. 191 - 193°C, opsamledes ved filtrering og vaskedes 5 med THF. Dette faste stof omrørtes i to timer i en blanding af 400 ml methanol og 4 ml methansulfonsyre.

Ved omkrystallisation af det opnåede faste stof af vandigt methanol opnåedes det i overskriften anførte salt, smp. 275 - 278°C.

10

Fremstilling af intravenøse formuleringer.

Eksempel 57

En opløsning af 14,7 g 2-[[2-[5-nitropyrazolo-[3,4,5-kl]acridin-2(6H)-y1) ethyl]amino]ethanol (fra 15 eksempel 3) som hydrochloridsaltet fremstilles i 1 liter vand til injektion ved stuetemperatur under omrøring. Opløsningen sterilfiltreres ned i 500 5-ml hætteglas, der hver indeholder 2 ml opløsning indeholdende 25 mg medikament, beregnet som base, og forsegles under ni-20 trogen.

Alternativt kan man, efter steril filtrering ned i hætteglassene, fjerne vandet ved lyofilisering, og derefter forsegle hætteglassene aseptisk, til tilvejebringelse af et pulver, som genopløses før injektion.

35

Claims (8)

1. Pyrazolo[3,4,5-kl]acridinforbindelser, der i fri baseform har strukturformlerne 1 og 2: Εκ Λ

2. Pyrazolo[3,4,5-kl]acridinforbindelser ifølge 30 krav 1, kendetegnet ved, at R^ og R2 hver betegner CH2CH2NHCH2CH2OH, CH2CH2N(C2H5)2 r CH2CH2N(CH3)2, CH2CH2NHCH3, ch2ch2nhc2h5 eller CH2CH2CH2N(CH3)2; R3 er H eller N02; Rg er H eller 35 methyl, R^ er hydrogen, hydroxy, lige eller forgrenet -Cg-alkoxy, lige eller forgrenet C3~C^Q-trialkylsilyl-oxy eller lige eller forgrenet C2-C12-alkanoyloxy. DK 161384B

3. Pyrazolo[3,4,5-kl]acridinforbindelser ifølge krav 2, kendetegnet ved, at de i fri baseform har formlen: , Ri-

4. Pyrazolo[3,4,5-kl]acridinforbindelser ifølge 15 krav 2, kendetegnet ved, at de i fri baseform har formlen: Al N-N 20 f^rfV'W*3 % ~\A kJ r6 no2 25 og farmaceutisk acceptable salte heraf, i hvilken formel R2, R3, Rg og I^har de i krav 2 anførte betydninger.

5. Pyrazolo[3,4,5-kl]acridinforbindelser ifølge krav 2,kendetegnet ved, at de i fri baseform har formlen: 30 ^2 N-N R'A°TDCXb"R3

35. N02 og farmaceutisk acceptable salte heraf, i hvilken formel R2r R3 °9 R6 har ^e i ktav 2 anførte betydninger, og R^' DK 161384 B er H, lige eller forgrenet C^-C^-alkyl, lige eller forgrenet C2~C^2-alkanoyl eller lige eller forgrenet C^-C^q-trialkylsilyl.

5 N-N rfVVV3 Ljj r6 no2 10 og farmaceutisk acceptable salte heraf, i hvilken formel R.j, R^, Rg og Ra har de i krav 2 anførte betydninger.

5 N-N N-N ra—ITT *A-f- Thi R6 N02 r6 n02 10 1 2 og farmaceutisk acceptable salte heraf, i hvilke formler og R2 hver betegner alkylen-NR^R^, hvor alkylen 15 er lige eller forgrenet C2-C£-alkylen, og Rx og R hver især betegner H, lige eller forgrenet C^-C^-alkyl eller lige eller forgrenet C2-C^-hydroxyalkyl, hvorhos, når R^ og Ry begge er C^-C^-alkyl, aminogruppen eventuelt er N-oxygeneret; R^ er H eller N02; Rg er H eller lige 20 eller forgrenet C^-C^-alkyl; RA er H eller én eller to grupper valgt blandt hydroxy, chlor, lige eller forgrenet -C^-dialkylamino, lige eller forgrenet C^-C^-al-kyl, lige eller forgrenet -Cg-alkoxy, der eventuelt er substitueret med diethylaminoethoxy; benzyloxy 25 eller benzyloxy substitueret med methoxy, lige eller forgrenet C^-C^^-trialkylsilyloxy, lige eller forgrenet C^-C^2~alkanoyloxy, benzoyloxy eller benzoyl-oxy substitueret med methoxy.

6. Forbindelse ifølge krav 1,kendeteg-5 n e t ved, at det er N,N-diethy1-5-nitropyrazolo[3,4,5 —k1]acridin-2(6H) -ethanamin, 2-[2-(diethylamino)ethyl]-2,6-dihydro-5-nitropyrazolo-[3,4,5-kl]acridin-9-ol, 10 9-ethoxy-N,N-diethyl-5-nitropyrazolo[3,4,5-kl]acridin-2(6H)-ethanamin, 9-butoxy-N,N-diethyl-5-nitropyrazolo[3,4,5-kl]acridin-2(6H)-ethanamin, 2,2-dimethylpropansyre-2-[2-(diethylamino) ethyl]-2,6-15 dihydro-5-nitropyrazolo[3,4,5-kl]acridin-9-yl-ester, 9-[[(1,1-dimethylethyl)dimethylsilyl]oxy]-N,N-diethyl-5-nitropyrazolo[3,4,5-kl]acridin-2(6H)-ethanamin, 2-[2-(diethylamino) ethyl]-2,6-dihydro-5-nitropyrazolo-[3,4,5-kl]acridin-9-ol-acetatester,

20 N,N-diethyl-5-nitro-9-propoxypyrazolo[3,4,5-kl]acridin-2(6H)-ethanamin, kulsyre-[2-[2-(diethylamino)ethyl]-2,6-dihydro-5-nitropyrazolo [3,4,5-kl]acridin-9-yl]ethylester, butansyre-[2-[2-(diethylamino)ethyl]-2,6-dihydro-5-ni-25 tropyrazolo-[3,4,5-kl]acridin-9-yl]ester, 9-ethoxy-N,N-dimethyl-5-nitropyrazolo[3,4,5-kl]acridin-2(6H)-ethanamin, N,N-diethyl-9-methoxy-5-nitropyrazolo[3,4,5-kl]acridin-2(6H)-propanamin, 30 9-methoxy-N,N-dimethyl-5-nitropyrazolo[3,4,5-kl]acridin-2(6H)-propanamin, 9-ethoxy-N,N-dimethyl-5-nitropyrazolo[3,4,5-kl]acridin-2(6H)-propanamin, 2-[3-(dimethylamino)propyl]-2,6-dihydro-5-nitropyrazolo-3^ [3,4,5-kl]acridin-9-ol, 2-[3-(dimethylamino) propyl]-5-nitropyrazolo[3,4,5-kl]-acridin-9-ol-acetatester, DK 161384 B | 2,2-dimethylpropansyre-[2-[3-(dimethylamino)-propyl]- 2,6-dihydro-5-nitropyrazolo[3,4,5-kl]acridin-9-yl-ester, N-ethyl-9-methoxy-5-nitropyrazolo[3,4,5-kl]acridin-2(6H)-ethanamin, 5 9-methoxy-N,N-dimethyl-3,5-dinitropyrazolo[3,4,5-kl]-acridin-2(6H)-ethanamin, 9-methoxy-N,N-dimethyl-3,5-d initropyra zolo[3,4,5-kl]-acridin-2(6H)-propanamin, 9-ethoxy-Ν,Ν-diethy1-3,5-dinitropyrazolo[3,4,5-kl]-10 acr idin-2(6H)-ethanamin, N,N-diethyl-9-methoxy-3,5-dinitropyrazolo[3,4,5-kl]-acridin-2(6H)-ethanamin eller 2-[2-(diethylamino)ethyl]-2,6-dihydro-3,5-dinitro-pyra-zolo[3,4,5-kl]acridin-9-ol, 15 eller et farmaceutisk acceptabelt salt af en vilkårlig af ovennævnte forbindelser.

7. Farmaceutisk præparat, kendetegnet ved, at det omfatter en forbindelse med formlen 1 ifølge krav 1 i kombination med en farmaceutisk acceptabel 20 bærer.

8. Farmaceutisk præparat, kendetegnet ved, at det omfatter en forbindelse med formlen 2 ifølge krav 1 i kombination med en farmaceutisk acceptabel bærer.