DK162104B - Fremgangsmaade til chromatografisk adskillelse af blandinger af insulin, insulinderivater og eventuelt urenheder - Google Patents
Fremgangsmaade til chromatografisk adskillelse af blandinger af insulin, insulinderivater og eventuelt urenheder Download PDFInfo
- Publication number
- DK162104B DK162104B DK536282A DK536282A DK162104B DK 162104 B DK162104 B DK 162104B DK 536282 A DK536282 A DK 536282A DK 536282 A DK536282 A DK 536282A DK 162104 B DK162104 B DK 162104B
- Authority
- DK
- Denmark
- Prior art keywords
- insulin
- mixtures
- volumes
- silica gel
- derivatives
- Prior art date
Links
- NOESYZHRGYRDHS-UHFFFAOYSA-N insulin Chemical compound N1C(=O)C(NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(NC(=O)CN)C(C)CC)CSSCC(C(NC(CO)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)NC(CCC(N)=O)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CCC(O)=O)C(=O)NC(CC(N)=O)C(=O)NC(CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)NC(CSSCC(NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC=2C=CC(O)=CC=2)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(C)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC=2NC=NC=2)NC(=O)C(CO)NC(=O)CNC2=O)C(=O)NCC(=O)NC(CCC(O)=O)C(=O)NC(CCCNC(N)=N)C(=O)NCC(=O)NC(CC=3C=CC=CC=3)C(=O)NC(CC=3C=CC=CC=3)C(=O)NC(CC=3C=CC(O)=CC=3)C(=O)NC(C(C)O)C(=O)N3C(CCC3)C(=O)NC(CCCCN)C(=O)NC(C)C(O)=O)C(=O)NC(CC(N)=O)C(O)=O)=O)NC(=O)C(C(C)CC)NC(=O)C(CO)NC(=O)C(C(C)O)NC(=O)C1CSSCC2NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CC(N)=O)NC(=O)C(NC(=O)C(N)CC=1C=CC=CC=1)C(C)C)CC1=CN=CN1 NOESYZHRGYRDHS-UHFFFAOYSA-N 0.000 title claims description 48
- 239000000203 mixture Substances 0.000 title claims description 16
- 108090001061 Insulin Proteins 0.000 title claims description 14
- 102000004877 Insulin Human genes 0.000 title claims description 14
- 229940125396 insulin Drugs 0.000 title claims description 14
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims description 9
- 238000013375 chromatographic separation Methods 0.000 title description 2
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 24
- ZMANZCXQSJIPKH-UHFFFAOYSA-N Triethylamine Chemical compound CCN(CC)CC ZMANZCXQSJIPKH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 21
- HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N Chloroform Chemical compound ClC(Cl)Cl HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 16
- BDAGIHXWWSANSR-UHFFFAOYSA-N methanoic acid Natural products OC=O BDAGIHXWWSANSR-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 16
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 12
- 239000000741 silica gel Substances 0.000 claims description 10
- 229910002027 silica gel Inorganic materials 0.000 claims description 10
- OSWFIVFLDKOXQC-UHFFFAOYSA-N 4-(3-methoxyphenyl)aniline Chemical compound COC1=CC=CC(C=2C=CC(N)=CC=2)=C1 OSWFIVFLDKOXQC-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 8
- 235000019253 formic acid Nutrition 0.000 claims description 8
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 8
- 239000002904 solvent Substances 0.000 claims description 7
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 claims description 6
- 239000012535 impurity Substances 0.000 claims description 4
- 239000011877 solvent mixture Substances 0.000 claims description 4
- 101000976075 Homo sapiens Insulin Proteins 0.000 description 7
- PBGKTOXHQIOBKM-FHFVDXKLSA-N insulin (human) Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H]1CSSC[C@H]2C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@H](C(N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC=3C=CC(O)=CC=3)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC=3C=CC(O)=CC=3)C(=O)N[C@@H](CSSC[C@H](NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CC=3C=CC(O)=CC=3)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CC=3NC=NC=3)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)CNC1=O)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(O)=O)=O)CSSC[C@@H](C(N2)=O)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)[C@@H](NC(=O)CN)[C@@H](C)CC)[C@@H](C)CC)[C@@H](C)O)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@@H](N)CC=1C=CC=CC=1)C(C)C)C1=CN=CN1 PBGKTOXHQIOBKM-FHFVDXKLSA-N 0.000 description 7
- 108010005991 Pork Regular Insulin Proteins 0.000 description 5
- 239000004473 Threonine Substances 0.000 description 5
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 5
- 101000993800 Sus scrofa Insulin Proteins 0.000 description 4
- 239000000047 product Substances 0.000 description 4
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 3
- 239000000463 material Substances 0.000 description 3
- CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N Acetone Chemical compound CC(C)=O CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102000004142 Trypsin Human genes 0.000 description 2
- 108090000631 Trypsin Proteins 0.000 description 2
- 239000007857 degradation product Substances 0.000 description 2
- 239000000945 filler Substances 0.000 description 2
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 2
- 239000012588 trypsin Substances 0.000 description 2
- 241000251468 Actinopterygii Species 0.000 description 1
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical compound [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 1
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 1
- 102000006947 Histones Human genes 0.000 description 1
- 108010033040 Histones Proteins 0.000 description 1
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 1
- AYFVYJQAPQTCCC-UHFFFAOYSA-N Threonine Natural products CC(O)C(N)C(O)=O AYFVYJQAPQTCCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000007983 Tris buffer Substances 0.000 description 1
- 235000004279 alanine Nutrition 0.000 description 1
- 125000003295 alanine group Chemical group N[C@@H](C)C(=O)* 0.000 description 1
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 1
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 1
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 1
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 1
- 238000011097 chromatography purification Methods 0.000 description 1
- 229910052681 coesite Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000000356 contaminant Substances 0.000 description 1
- 238000011109 contamination Methods 0.000 description 1
- 229910052906 cristobalite Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000012043 crude product Substances 0.000 description 1
- 206010012601 diabetes mellitus Diseases 0.000 description 1
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 1
- 239000003480 eluent Substances 0.000 description 1
- 150000002148 esters Chemical class 0.000 description 1
- 229910021389 graphene Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000002209 hydrophobic effect Effects 0.000 description 1
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 description 1
- 230000014759 maintenance of location Effects 0.000 description 1
- QSHDDOUJBYECFT-UHFFFAOYSA-N mercury Chemical compound [Hg] QSHDDOUJBYECFT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910052753 mercury Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000003791 organic solvent mixture Substances 0.000 description 1
- 238000002264 polyacrylamide gel electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 1
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 1
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 1
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 1
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 1
- 239000002994 raw material Substances 0.000 description 1
- 238000010898 silica gel chromatography Methods 0.000 description 1
- 239000000377 silicon dioxide Substances 0.000 description 1
- 235000012239 silicon dioxide Nutrition 0.000 description 1
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 1
- 229910052682 stishovite Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 1
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 238000004809 thin layer chromatography Methods 0.000 description 1
- 230000009466 transformation Effects 0.000 description 1
- 229910052905 tridymite Inorganic materials 0.000 description 1
- LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N tris Chemical compound OCC(N)(CO)CO LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000010626 work up procedure Methods 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K1/00—General methods for the preparation of peptides, i.e. processes for the organic chemical preparation of peptides or proteins of any length
- C07K1/14—Extraction; Separation; Purification
- C07K1/16—Extraction; Separation; Purification by chromatography
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/575—Hormones
- C07K14/62—Insulins
- C07K14/625—Extraction from natural sources
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Zoology (AREA)
- Endocrinology (AREA)
- Toxicology (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Diabetes (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
Description
DK 162104 B j
Opfindelsen angår en fremgangsmåde til adskillelse af blandinger af insulin, insulinderivater og eventuelt urenheder.
Det er kendt at omdanne naturligt svineinsulin til 5 humaninsulin ad semisyntetisk vej ved kemisk eller enzymatisk ombytning af alaninet i stilling B 30 med threonin, jfr.
R. Obermeier og R. Geiger, Hoppe-Seyler·s Z.physiol.Chemie, 357. 759-767 (1976), M.A. Ruttenberg, Science, 177, 623-626 (1972), K.Morihara, T.Oka og H.Tsuzuki, Nature, 280, 412-413 10 (1979), K.Inouye, J.Am.Chem.Soc., 101. 751-752 (1979), E.-
Schmitt og H.G. Gattner, Hoppe-Seyler's z.physiol.Chemie, 359, 799-802 (1978) og W.W. Bromer og R.E. Chance, Biochem. Biophys.Acta, 133. 219-223 (1967).
Formålet med denne omdannelse er ved behandlingen af 15 diabetes hos mennesker af immunologiske grunde at kunne anvende artsidentisk insulin.
Fordelene ved denne behandling kan kun da komme til deres ret, når det lykkes fra råmaterialet fra semisyntesen med sikkerhed at skille insulinderivater og urenheder fra 20 humaninsulinet.
De kendte adskillelsesmetoder er ikke egnet til med sikkerhed at gennemføre adskillelsen af humaninsulinet fra svineinsulinkomponenter. Af de i litteraturen offentliggjorte aminosyreanalyser kan det udledes, at det i det semi-25 syntetiske humaninsulin er muligt at have en forurening med svineinsulin op til en størrelsesorden på 25%.
For at kunne undgå selv sporvis forekommende forureninger af humaninsulin med svineinsulin eller enzymer ved hjælp af den gentagne anvendelse af regenerérbare fyldmate-30 rialer til chromatograf isøj ler er det ønskeligt at have et billigt éngangsmateriale med optimal adskillelsesevne som ’ søjlefyldning. Ved den analytiske højtryksvæskechromato- j graf i opnås der udelukkende kraftigt opløsende, chroraatogra- ! fiske adskillelser på hydrofob, med organiske rester deriva-35 tiseret kiselgel ("reversed phase"). De høje omkostninger for i dette materiale forbyder imidlertid anvendelsen deraf som
DK 162104 B
2 éngangs-søjlefyldninger.
Fra Pickart et al., Preparative Biochemistry, 5 (5 og 6), 397-412 (1975), er det endvidere også kendt at rense vækstfremmende peptider og proteiner samt histoner ved høj-5 trykschromatografi på kiselgel; på side 411 i dette litteratursted er der specielt til den chromatografiske rensning af insulin angivet en løbemiddelblanding af methanol, vand og myresyre i forholdet 8:4:1. Heller ikke dette system er imidlertid fyldestgørende til adskillelsen af humaninsulin-10 (-ester) fra et forurenet produkt.
Det har nu overraskende vist sig, at den chromatografiske adskillelse af råblandinger fra enzymatiske semisyn-teser af insulin på søjler, der er pakket med gængs kiselgel, som ikke er derivatiseret med organiske rester, ved anven-15 delse af bestemte organiske opløsningsmiddelblandinger som løbemiddel, f.eks. chloroform/methanol/vand/triethylamin/-myresyre, er alle andre adskillelsesmetoder overlegen. Denne overlegenhed er for det første et resultat af de til dels store forskelle i retentionstiderne for komponenterne i de 20 blandinger, der skal adskilles, og for det andet et resultat af den store hastighed af et søjlegennemløb. Omkostningerne for den efter et gennemløb kasserede kiselgel kan i sammenligning med den behandlede insulinmængde lades ude af betragtning.
25 Opfindelsen angår således en fremgangsmåde til adskil lelse af blandinger af insulin, insulinderivater og eventuelt urenheder, ved at man chromatograferer blandingerne på en med kiselgel fyldt søjle, og denne fremgangsmåde er ejendommelig ved, at kiselgelen ikke er derivatiseret med organiske 30 rester, og at man til chromatograferingen anvender et løbemiddel bestående af en blanding af chloroform, methanol, vand, triethylamin samt eventuelt myresyre.
Fremgangsmåden egner sig navnlig til rensning af insulin og til adskillelse af insulin eller dets nedbrydnings-35 produkter fra trypsin eller lignende fermenter og insulinestere eller andre insulinderivater.
DK 162104 B
3
Som søjlefyldning kommer enhver handelsgængs, med organiske rester ikke derivatiseret kiselgel i betragtning, f.eks. handelsproduktet SiO2“60® fra Merck a Co., Darmstadt.
Som løbemidler kan der til chromatograferingen anven-5 des alle de i krav 1 omhandlede løbemiddelblandinger, i hvilke insulinestere eller -derivater på den ene side og insulin eller dets nedbrydningsprodukter på den anden side udviser forskellige Rf-værdier på i handelen værende tyndt-1agschromatografi-plader.
10 Særligt gode adskillelseseffekter opnås, når man ifølge opfindelsen chromatograferer råproduktet i en løbemid-delblanding af 1500-2100 rumfangsdele chloroform, 1000-1500 rumfangsdele methanol, 350-450 rumfangsdele vand, 35-55 rumfangsdele triethylamin og 0-15 rumfangsdele myresyre.
15 Særlig fordelagtig er fremgangsmåden i forbindelse med adskillelsen af humaninsulin-B 30-di-tert.butyl-threonin fra svineinsulin og trypsin, en blanding, der forekommer ved den enzymatiske omdannelse af svineinsulin til humaninsulin.
Fremgangsmåden ifølge opfindelsen belyses nærmere i 20 de følgende eksempler.
Anvendelseseksempler 1. 4 gram af en blanding af 70% humaninsulin-B 30-di-tert.butyl-threonin og 30% svineinsulin opløses i 20 ml af 25 et opløsningsmiddel bestående af chloroform, methanol, vand, triethylamin og myresyre i rumfangsforholdet 1800:1500:375:-45:9 og sættes ved hjælp af en éngangssprøjte til en tør Lobar®-færdigsøjle, størrelse C. Søjlen fremkaldes med samme opløsningsmiddel. Efter fremkomsten af opløsningsmiddelfron-30 ten indsamles der enkeltfraktioner (10 ml).
Humaninsulin-B 30-(But)2 forekommer i fraktionerne 37-53. Disse forenes og koncentreres på en rotationsfordamper til et rumfang på 30-50 ml. Til denne opløsning sættes der ca. 500 ml acetone, og det udfældede produkt isoleres ved 35 centrifugering.
Svineinsulinet elueres i fraktionerne 120-137 og iso-
DK 162104B
4 leres som ovenfor beskrevet. Begge produkter tørres i let vakuum.
Udbytte: 2,59 gram humaninsulin-B 30-(But)2 1,03 gram insulin (S).
5 2. NaB^-tert. butyloxycarbonyl-B 30-di-tert.butyl-thre-onin-insulin i en mængde på 4 gram opløses som i eksempel 1 og sættes til en med 300 gram kiselgel S1O2-6O® fyldt søjle (2,5 x 50 cm), der er ækvilibreret med chloroform. Søjlen 10 elueres med den samme opløsningsmiddelblanding som i eksempel 1. Den først fremkommende top indeholder B^-BOC-insulin B 30-(But)2/ medens svineinsulin elueres i de senere fraktioner. Oparbejdningen sker som i eksempel 1.
3. En blanding som i eksempel 1 (4 gram) sættes til 15 en Lobar®-færdigsøjle C, ækvilibreret med en blanding af 70% ethanol og 30% tris-puffer (0,05 M, pH=8,0), og der chromatograferes med det samme elueringsmiddel. De tilsvarende fraktioner, der adskilt fra hverandre indeholder hu-maninsulin-B 30-di-tert.butyl-threonin og svineinsulin, opar-20 bejdes som i eksempel 1.
4. 4 gram urenset svineinsulin opløses i en blanding af chloroform, methanol, vand, triethylamin og myresyre i forholdet 1200:1100:370:47:11 og chromatograferes som i eksempel 2 over en kiselgelsøjle. Det i portioner på 10 ml 25 fraktionerede eluat oparbejdes som i eksempel 1. Fraktioner, der efter undersøgelse ved HPLC og polyacrylamidgel-elek-troforese indeholder rent svineinsulin, forenes. Udbytte: 3,61 gram.
Claims (2)
1. Fremgangsmåde til adskillelse af blandinger af insulin, insulinderivater og eventuelt urenheder, ved at man chromatograferer blandingerne på en med kiselgel fyldt 5 søjle, kendetegnet ved, at kiselgelen ikke er derivatiseret med organiske rester, og at man til chromato-graferingen anvender et løbemiddel bestående af en blanding af chloroform, methanol, vand, triethylamin samt eventuelt myresyre. 10
2. Fremgangsmåde ifølge krav 1, kendeteg net ved, at chromatograferingen udføres i en løbemid-delblanding af 1500-2100 rumfangsdele chloroform, 1000-1500 rumfangsdele methanol, 350-450 rumfangsdele vand, 35-55 rumfangsdele triethylamin og 0-15 rumfangsdele myresyre.
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| DE19813147842 DE3147842A1 (de) | 1981-12-03 | 1981-12-03 | "verfahren zur trennung von gemischen aus insulin, insulinderivaten und gegebenenfalls verunreinigungen" |
| DE3147842 | 1981-12-03 |
Publications (3)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| DK536282A DK536282A (da) | 1983-06-04 |
| DK162104B true DK162104B (da) | 1991-09-16 |
| DK162104C DK162104C (da) | 1992-02-17 |
Family
ID=6147790
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| DK536282A DK162104C (da) | 1981-12-03 | 1982-12-02 | Fremgangsmaade til chromatografisk adskillelse af blandinger af insulin, insulinderivater og eventuelt urenheder |
Country Status (15)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US4677192A (da) |
| EP (1) | EP0082359B1 (da) |
| JP (1) | JPS58103323A (da) |
| KR (1) | KR880002607B1 (da) |
| AR (1) | AR230430A1 (da) |
| AT (1) | ATE18057T1 (da) |
| AU (1) | AU563350B2 (da) |
| CA (1) | CA1245633A (da) |
| DE (2) | DE3147842A1 (da) |
| DK (1) | DK162104C (da) |
| ES (1) | ES8607343A1 (da) |
| FI (1) | FI75349C (da) |
| GR (1) | GR77764B (da) |
| IL (1) | IL67378A (da) |
| ZA (1) | ZA828864B (da) |
Families Citing this family (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| DE3511269A1 (de) * | 1985-04-12 | 1986-10-09 | Veb Berlin-Chemie, Ddr 1199 Berlin | Verfahren zur reinigung von insulin |
| DE4028120C2 (de) * | 1990-09-05 | 1996-09-19 | Hoechst Ag | Verfahren zur Reinigung von Insulin und/oder Insulinderivaten |
| US5278284A (en) * | 1992-05-14 | 1994-01-11 | Miller Brewing Company | Protein purification method |
| US5451660A (en) * | 1993-12-13 | 1995-09-19 | Genentech, Inc. | Method for purifying polypeptides |
| DE19652713C2 (de) * | 1996-12-18 | 2001-11-22 | Aventis Pharma Gmbh | Verfahren zur Reinigung von Insulin und Insulinderivaten durch Chromatographie an stark saurem Kationenaustauscher |
| EP3171888B1 (en) | 2014-07-21 | 2022-12-28 | Merck Sharp & Dohme LLC | Chromatography process for purification of inlsulin and insulin analogs |
Family Cites Families (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS532492A (en) * | 1976-06-26 | 1978-01-11 | Shimizu Seiyaku Kk | Process for preparing pure insuline |
| JPS5542185A (en) * | 1978-09-22 | 1980-03-25 | Kawasaki Heavy Ind Ltd | Detecting device for arc welding or the like |
| JPS6016673B2 (ja) * | 1978-12-25 | 1985-04-26 | 川崎重工業株式会社 | サ−ボ系における被検体認識装置 |
-
1981
- 1981-12-03 DE DE19813147842 patent/DE3147842A1/de not_active Withdrawn
-
1982
- 1982-11-30 EP EP82111061A patent/EP0082359B1/de not_active Expired
- 1982-11-30 DE DE8282111061T patent/DE3269252D1/de not_active Expired
- 1982-11-30 AT AT82111061T patent/ATE18057T1/de not_active IP Right Cessation
- 1982-12-01 ES ES517844A patent/ES8607343A1/es not_active Expired
- 1982-12-01 FI FI824135A patent/FI75349C/fi not_active IP Right Cessation
- 1982-12-01 IL IL67378A patent/IL67378A/xx not_active IP Right Cessation
- 1982-12-01 GR GR69942A patent/GR77764B/el unknown
- 1982-12-01 AR AR291468A patent/AR230430A1/es active
- 1982-12-02 DK DK536282A patent/DK162104C/da not_active IP Right Cessation
- 1982-12-02 AU AU91102/82A patent/AU563350B2/en not_active Ceased
- 1982-12-02 JP JP57210699A patent/JPS58103323A/ja active Granted
- 1982-12-02 CA CA000416875A patent/CA1245633A/en not_active Expired
- 1982-12-02 ZA ZA828864A patent/ZA828864B/xx unknown
- 1982-12-03 KR KR8205395A patent/KR880002607B1/ko not_active Expired
-
1985
- 1985-12-04 US US06/804,325 patent/US4677192A/en not_active Expired - Fee Related
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| DK162104C (da) | 1992-02-17 |
| US4677192A (en) | 1987-06-30 |
| FI824135L (fi) | 1983-06-04 |
| AU9110282A (en) | 1983-06-09 |
| KR840002771A (ko) | 1984-07-16 |
| IL67378A (en) | 1985-12-31 |
| AR230430A1 (es) | 1984-04-30 |
| DE3269252D1 (en) | 1986-03-27 |
| KR880002607B1 (ko) | 1988-12-04 |
| FI75349B (fi) | 1988-02-29 |
| JPS58103323A (ja) | 1983-06-20 |
| FI824135A0 (fi) | 1982-12-01 |
| CA1245633A (en) | 1988-11-29 |
| EP0082359A1 (de) | 1983-06-29 |
| ZA828864B (en) | 1984-05-30 |
| ES517844A0 (es) | 1986-05-16 |
| ES8607343A1 (es) | 1986-05-16 |
| GR77764B (da) | 1984-09-25 |
| DE3147842A1 (de) | 1983-06-23 |
| FI75349C (fi) | 1988-06-09 |
| ATE18057T1 (de) | 1986-03-15 |
| DK536282A (da) | 1983-06-04 |
| IL67378A0 (en) | 1983-05-15 |
| EP0082359B1 (de) | 1986-02-19 |
| JPH0354678B2 (da) | 1991-08-20 |
| AU563350B2 (en) | 1987-07-09 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| US5208041A (en) | Essentially pure human parathyroid hormone | |
| Hancock et al. | Use of mixed-mode, high-performance liquid chromatography for the separation of peptide and protein mixtures | |
| Joubert | Hemachatus haemachatus (Ringhals) Venom. Purification, Some Properties and Amino‐Acid Sequence of Phospholipase A (Fraction DE‐I) | |
| HK1004340B (en) | Essentially pure human parathyroid hormone | |
| Gueguen et al. | Large‐scale purification and characterisation of pea globulins | |
| van der Rest et al. | A comprehensive approach to the study of collagen primary structure based on high‐performance liquid chromatography | |
| Sugeno et al. | The amino acid sequence of Scenedesmus ferredoxin | |
| DK162104B (da) | Fremgangsmaade til chromatografisk adskillelse af blandinger af insulin, insulinderivater og eventuelt urenheder | |
| Hayashi et al. | Pea Histones H2A and H2B: Variable and Conserved Regions in the Sequences | |
| CN105153284B (zh) | 一种利那洛肽的纯化方法 | |
| Folena-Wasserman et al. | Kibdelins (AAD-609), Novel Glycopeptide Antibiotics II. Isolation, Purification and Structure | |
| KR100383435B1 (ko) | 고순도 아카보스 제조방법 | |
| KR890001244B1 (ko) | 성장 호르몬-양 물질의 정제방법 | |
| EP0087066A1 (en) | Process for purifying secretin | |
| CN116429950B (zh) | 多肽pd-dp-005的有关物质分析方法 | |
| RU2332248C1 (ru) | Способ хроматографической очистки бусерелина | |
| Mucha et al. | Monitoring of the purification of systemin by capillary electrophoresis | |
| Kullmann | Liquid adsorption chromatography on preparative scale of protected synthetic peptides | |
| Aubert et al. | Glycosylated proline‐rich peptide of human parotid saliva. Circular dichroism study | |
| Liu et al. | Primary structure of an inactive mutant of phospholipase A2 in the venom of Bungarus fasciatus (banded krait) | |
| Hradec et al. | Purification of the fatty acid present in carcinolipin | |
| Grosser, Y.,* Eales, L.* & Sano | The chemical structure of porphyrin-peptide variegata | |
| Marshall Jr | Isolation and purification of cottonseed 7S storage protein and its subunits | |
| Dillon et al. | HETEROGENEITY OF INSULIN: I. ISOLATION OF A CHROMATOGRAPHICALLY PURIFIED, HIGH-POTENCY INSULIN AND SOME OF ITS PROPERTIES | |
| Champagne et al. | The Core Histones from the Slime Mold Physarum polycephalum: Isolation and Characterization |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PBP | Patent lapsed |