DK162880B

DK162880B - Fremgangsmaade til behandling af acycli hos faar og kvaeg, og anvendelse af gestagener og lh-rh eller dettes analoge ved behandling af acycli hos faar og kvaeg

Info

Publication number: DK162880B
Application number: DK004783A
Authority: DK
Inventors: Rainer Humke
Original assignee: Hoechst Ag
Priority date: 1982-01-09
Filing date: 1983-01-07
Publication date: 1991-12-23
Also published as: ZA8393B; GR77149B; DE3200459A1; US4673665A; CA1230557A; NZ202978A; FI830040A7; ATE22659T1; NO830041L; EP0083925B1; BR8300068A; DE3366663D1; DK4783A; EP0083925A1; DK4783D0; FI830040L; DK162880C; FI830040A0

Description

DK 162880B

Den foreliggende opfindelse angår en fremgangsmåde til behandling af acycli hos får eller kvæg og anvendelsen af gestagener og LH-RH eller dettes analoge ved behandling af acycli hos får eller kvæg.

5 Acycli hos kvæg eller får er kendetegnet ved udeblivel se af cycliske processer i det hunlige reproduktionsapparat og cyclusbundne adfærd småøs sige fænomener. Denne tilstand hidrører fra hormonale forstyrrelser af systemet hypothalamus/hypofyse/-æggestok, som æggestokkenes funktion beror på.

10 Hos kvæg optræder acycli hos ungdyr, der skal bedækkes eller befrugtes for første gang, samt hos køer i et varierende langt tidsrum efter en fødsel. Særlig udpræget er acycli efter fødsel hos køer af kødracer samt hos moderdyr, der dier en eller flere kalve. Da økonomien for et moderdyr bestemmes af en 15 regelmæssig kælvning, om muligt med 1 års mellemrum, er der fra dyreholderens side stor interesse for, at acycliperioden er så kort som muligt.

Får er af naturen sæsonmæssigt polyøstriske, dvs. brunst optræder kun med regelmæssige intervaller i et begrænset tids-20 rum af året. Efter befrugtning og fødsel optræder der indtil begyndelsen af næste brunstperiode en flere måneders acyclifase. Rentabiliteten af fårehold kunne forbedres tydeligt, hvis det lykkedes at holde moderdyrene kunstigt i brunst og gøre dem drægtige i denne acyclifase og dermed i praksis fordoble re-25 produktionsraten pr. år.

Det er længe blevet forsøgt at ophæve acycli hos kvæg og får ved indgivelse af forskellige hormoner enkeltvis eller i kombination med hinanden. Der er derved fremfor alt blevet anvendt gestagener (progesteron og syntetiske derivater), til 30 dels i kombination med østrogener og PMSG ("Pregnant mare's serum gonadotropin") i forskellige præparatformer ved injektion, implantation samt ved oral eller vaginal indgivelse over et tidsrum på flere dage (Kvæg: J. Anim. Sci., 19., 674--677 (1960); J. Anim. Sci., 25., 497-503 (1966); Tierårztl.

35 Umschau, 26., 1-4 (1971); Vet. Rec., 101., 13-14 (1977); Vet. Rec., 104. 523-525 (1979); Vet. Rec., 104., 603-604 (1979); 0 2

DK 162880 B

J. Reprod. Fert., 53., 289-296 (1978); J. Reprod. Fert., 54., 447-458 (1978); Theriogenology, 10., 307-312 (1978). Får; J. Endocrinol., 24., 33 (1962); J. Anira. Sci., 34., 1011-1019 (1972); Res. in Vet. Sci., 22., 324-329 (1977); J. Reprod.

5 Fert., 44., 59-68 (1975); VHIth Intern. Congr. Anim. Reprod. Krakow, 62 (1976); Theriogenology, 15., 389-403 (1981)).

Afhængigt af forskellige faktorer, især den pågældende race og tidspunktet for behandling efter den sidste fødsel , har behandlingsresultaterne været ret forskellige og 10 overvejende utilfredsstillende. Den fortsatte søgen efter forbedrede metoder, der under hensyntagen til den naturlige hormonale regulering kunne føre til bedre resultater, er derfor forståelig.

For nogle få år siden er det nu hos forskellige arter 15 blevet påvist, at der før og under en menstruations- eller brunstcyclus sker pulserende udskillelse af det i hypofysen dannede luteiniserende hormon (LH) og follikelstimulerende hormon (FSH) , der tydeligvis fremkaldes af pulserende udskillelse af det LH/FSH-frigørende hormon. Sådanne undersøgelser hos 20 får og kvæg er omtalt af Yuthasastrakol et al. (J. Reprod. Fert., 50., 319-321, 1977); Baird (Biology of Reproduction, 18., 359-364, 1978) og Carruthers et al. (J. Anim. Sci., 50., 919-925, 1980), Forrest et al. (Biol. Reprod., 22., 197-201, 1980), Peters et al. (J. Reprod. Fert., 62., 567-573, 1981).

25 Det har været nærliggende at simulere den pulserende udskillelse af LH og FSH ved pulserende indgivelse af LH-RH til acycliske dyr. Sådanne forsøg med får er beskrevet af McLeod og Haresign, Proc. Annual Conference Soc. for the Study of Fertility Abstr., 6., 15, 1980. Ved intravenøs injektion af 30 250, 500 eller 1000 ng LH-RH med intervaller på 2 timer over et tidsrum på 8 dage kan der måles pulserende LH-frigørelse, og der optræder dosisafhængigt med intervaller på 40-60 timer efter behandlingen en stærk LH-stigning som den, der kan måles før hver ægløsning. Efter ægløsningen konstateres 35 der en stigning af progesteronværdierne over et tidsrum på 10-12 dage, hvilket optræder sammen med udviklingen af et 0 3

DK 162880 B

gult legeme. Der kan imidlertid ikke fremkaldes brunst med denne behandlingsmetode, så det er ikke muligt at parre de behandlede får naturligt. Det viser sig også, at funktionen af det gule legeme i de fleste tilfælde ikke svarer til funk-5 tionen af et normalt gult legeme under en cyclus.

Først efter en 14 dages forbehandling af 5 får med et subcutant indgivet, progesteronholdigt implantat og en påfølgende 48 timers indgivelse af 250 ng LH-RH med 2 timers intervaller kan der udløses brunst og ægløsninger, og 3 ud af 5 par-10 rede får bliver drægtige (McLeod og Haresign, Proc. Annual Conference Soc. for the Study of Fertility, Abstr., 6., 13, 1981).

Pulserende LH-RH-behandlinger med 1-2 timers intervaller er også blevet anvendt på andre arter og fører ligeledes 15 til tilsvarende, pulserende LH-frigørelse og påbegyndelse af en ovariecyclus (Menneske: Crowley et al., J. Clin. Endorcri-nol. Metab., 51., 173-175, 1980; Leyendecker et al., 61st Ann. Endocrine Soc. Meeting, Anaheim, California, Abstr., 926, 1979; Kvæg; Riley et al., 73rd Ann. Meeting Soc. Anim. Sci., North 20 Carolina State University, Raleigh, Abstr., 1981; Abe: Knobil,

Rec. Progr. Horm. Research, 36., 53-88, 1980).

Forsøg på ved kontinuerlig intravenøs LH-RH-indgivelse at bevirke den samme pulserende LH-frigørelse med cyclus- og ægløsnings fremkaldel se hos aber har derimod slået fejl (Knobil, Rec.

25 Progr. Horm. Research, 36., 53-88, 1980). Det skulle derfor forventes, at der heller ikke hos andre arter kunne opnås de samme virkninger ved kontinuerlig indgivelse af LH-RH som ved pulserende indgivelse. På den anden side er en pulserende indgivelse af virksomme stoffer til landbrugs-nyttedyr for tids-30 og omkostningskrævende og derfor af økonomiske grunde uacceptabel.

Det har nu vist sig, at der hos acydiske får og kvæg efter 4-16 dages indgivelse af et gestagen og efterfølgende kontinuerlig intravenøs indgivelse af ca. 250 ng/time af LH-RH over et 35 tidsrum på 2-6 dage sker en pulserende frigørelse af LH i plasma samt en udløsning af brunst og ægløsninger, der efter bedækning af dyrene medfører drægtighed.

4

DK 162880 B

Opfindelsen angår en fremgangsmåde til behandling af acycli hos får eller kvæg, hvilken fremgangsmåde er ejendommelig ved, at et får eller kreatur behandles i 4-16 dage, fortrinsvis 7-12 dage, med et protraheret virksomt gestagen, 5 og at der i tilslutning til denne behandling ved kontinuerlig indgivelse af LH-RH eller en mindst lige så virksom analog i 2-6 dage, fortrinsvis 2-3 dage, frembringes et LH-plasmaniveau, der er tilstrækkeligt til inducering af ægløsning. Dosis af det protraheret virksomme gestagen vælges således, at der under be-10 handlingen induceres et blod-niveau, der er tilstrækkeligt til at hæmme frigørelsen af LH og FSH fra hypofysen, jf. f.eks. Endocrinology 108, 568-572 (1981), J. Reprod. Fert. 60, 177--185 (1980), og Res. Vet. Sci. 22^, 324-329 (1977).

Hæmningen af LH- og FSH-frigørelsen fra hypofysen er 15 nødvendig for, at endogent LH og FSH ikke interfererer med den frigørelse, der induceres ved kontinuerlig indgivelse af LH-RH eller analoge deraf.

Opfindelsen angår endvidere anvendelsen af gestagener og LH-RH eller dettes analoge ved behandling af acycli hos 20 får eller kvæg ved 4-16 dages anvendelse af et protraheret virkende gestagen og påfølgende, 2-6 dages kontinuerlig indgivelse af LH-RH eller en mindst lige så virksom analog i en dosis, der giver et til inducering af ægløsning tilstrækkel igt LH-plasmaniveau.

25 Foruden LH-RH kan der til det her omhandlede formål og så anvendes LH-RH-analoge, der bevirker udskillelse af LH og FSH. Egnede er fremfor alt forbindelser med en stærkere biologisk virkning kombineret med en længere virkningsvarighed. På tale kommer især LH-RH-analoge, der i 6-stilling indeholder 30 en D-aminosyre, i 7-stilling N-methyl-leucin og/eller i 10-stil-ling ethylamin, cyclopropylamin eller semicarbazid.

På tale som D-aminosyrer kommer fremfor alt lipofile aminosyrer. For eksempel har D-Leu, D-Trp, D-Phe, D-SeriBu*"), D-His(Bzl), D-naphthylalanin, D-GluiOBu^ og D-AadiOBu1") vist 35 sig at være særlig egnede.

5

DK 162880 B

Opretholdelsen af LH-plasmaniveauet med LH-RH og de nævnte LH-RH-analoge i det nævnte tidsrum opnås ved hjælp af forsinket virkende indgivelsesmetoder og lægemidde1former. Foruden infusioner, injektioner, transdermal indgivelse eller ind-5 givelse via slimhinder, f.eks. i næsen, med de frigivelsesprincipper, der ligger til grund derfor, kan der også anvendes implanterbare lægemiddelformer, såsom depotlegemer eller pumper, intravaginale eller intrauterine frigivelsessystemer eller næsespænder. Ved transdermal indgivelse og indgivelse via slim-10 hinder skal doseringen erfaringsmæssigt forhøjes med faktoren 10-50.

Den i første fase af den her omhandlede fremgangsmåde anvendte 4-16 dages gestagenbehandling kan ligeledes udføres med et implantat, men også ved hjælp af de ovennævnte indgi-15 velsesmetoder og lægemiddelformer til retarderet gestagenfrigivelse på tilsvarende måde.

Gestagenforbehandlingen af fårene, der i regelen har en vægt på 40-75 kg, kan f.eks. udføres ved parenteral indgivelse af 5-25 mg, fortrinsvis ca. 10 mg progesteron pr. dag.

20 Endvidere er det muligt at implantere subcutane implantater (f.eks. "Sil-Estrus" fra fa. Abbott eller implantaterne, der er beskrevet i J. Reprod. Fert. 60, 177-185 (1980)) med et indhold på 100-500 mg progesteron i tidsrummet på 6-14 dage. Norgestomet-øreimplantater (fa. Searie) indeholder ca. 3 mg 25 Norgestomet og implanteres også i indtil 14 dage. Ved intrava-ginal indgivelse anvendes der f.eks. små svampe, der indeholder 10-50 mg, fortrinsvis 20-40 mg Flurogestonacetat i et tidsrum på indtil 14 dage (f.eks. "Synero-Mate"-svampe med Crono-lone fra fa. Searie) . Den orale behandling med MAP (medroxy-30 progesteron-acetat) beskrives f.eks. i J. Animal Sci.,

Albany, N.Y. 48/ 1015-1019 (1979).

Gestagenforbehandlingen af kreaturerne, der i regelen har en vægt på 400-750 kg, kan f.eks. udføres ved subeutan injektion af 20-200 mg, fortrinsvis ca. 50 mg progesteron pr. dag 35 i ca. 10 dage. Der kan f.eks. også oralt indgives ca. 120 mg di-hydroprogesteron-acetophenid pr. dag i ca. 10 dage. Det mere 6 0

DK 162880 B

virksomme 19-nortestosteron skal kun indgives’oralt i daglige doser på ca. 10 mg. Inden for samme størrelsesorden ligger doseringen af Chlormadinonacetat (jf. Berl. Munch. Tierårztl. Wschr. 8j5, 384-387 (1973). "Synchro-Mate"-øreimplantater in-5 deholder ca. 6 mg Norgestomet og forbliver i dyret i indtil 9 dage. Intravaginal-anordningen "PRID" (fa. Abbott) indeholder indtil 1,6 g progesteron og anvendes i regelen 7-9 dage.

LH-RH-behandlingen kan f.eks. gennemføres som beskrevet i det følgende: 10 Indgivelserne af LH-RH eller dets analoge udgør bereg net på LH-RH hos får i regelen 20-1000, fortrinsvis 50-500 ng/-time (ved intravenøs indgivelse eller ved infusion). Subcutant implanterede depotlegemer indeholder indtil 500 pg, fortrinsvis 10-100 jag LH-RH eller den tilsvarende mængde af en analog 15 (opholdstid 2-6 dage).

Hos kvæg indgives der i regelen 40-2000, fortrinsvis 120-1000 ng LH-RH pr. time (eller den tilsvarende mængde af en analog) intravenøst eller ved infusion. Subcutant implanterede depotlegemer indeholder indtil 6000 pg, fortrinsvis 150-20 -1200 pg LH-RH eller den tilsvarende mængde af en analog (op holdstid 2-6 dage).

Eksempel 1

Til 28 kønsmodne hunfår af to forskellige racer ("Clun 25 Forest" og "Welsh Halfbred") gives over et tidsrum på 14 dage subcutant progesteronholdige implantater.

2 Timer før udtagelsen af implanterne modtager hvert af 12 får over et tidsrum på 48 timer en langtidsinfusion, med hvilken der indgives 125 og 250 ng LH-RH pr. time. 4 Får, 30 der behandles på tilsvarende måde med en natriumchloridopløs-ning, tjener som kontrol. Til undersøgelse af ægløsningerne laparoskoperes fårene. Desuden udtages der blodprøver til pro-gesteronbestemmelse. 24 Timer efter infusionernes begyndelse undersøges tidspunktet for brunstens begyndelse med 4 timers 35 intervaller ved hjælp af frugtbare væddere, og fårene, der er i brunst, bedækkes.

0 7

DK 162880 B

Resultaterne er sammenfattet i den efterfølgende tabel.

Antal Antal Ægløsnings-

Behandlinq_bedækkede får ægløsninger_rate a) 125 ng LH-RG 10* 9XX 1,4 5 pr. time__ 250 ng LH-RH 11 12 1,5 pr. time__ fysiolog.NaCl- 0 00 -opløsning_ 10 x) Et får havde mistet progesteronimplantatet før LH-RH-be-handlingen og kunne derfor ikke komme i brunst, xx) Et får kunne på grund af indre sammenvoksninger ikke la-paroskoperes.

a) Gennemsnitligt antal ægløsninger pr. dyr.

15 På grundlag af de progesteronværdier, der foreligger på undersøgelsestidspunktet hos 12 med LH-RH behandlede får, må 9 får betragtes som drægtige.

Den dermed opnåede drægtighedsrate på 75% svarer til 20 den gennemsnitsværdi, der kan opnås under en naturlig parringssæson.

Eksempel 2

Til 17 køer af kødkvægracer gives der i de første uger 25 efter fødslen over et tidsrum på 2-4 dage med 2 timers mellemrum 1,0, 2,5 eller 5 pg LH-RH ved injektion. 21 Tilsvarende køer modtager i det samme tidsrum en langtidsinfusion med de samme doseringer pr. tidsenhed.

Før og under behandlingen udtages blodprøver til be-30 stemmelse af LH. Der tages blodprøver til bestemmelse af pro-gesteron over et længere tidsrum efter behandlingen.

Resultaterne af progesteronbestemmelsen fremgår af den efterfølgende tabel: 35 8 0

DK 162880 B

Tabel

Antal køer

Behandling_Dosis (pg) i alt med progesteronstigning

Injektioner 1,0 6 4 5 med intervaller 2,5 6 4 på 2 timer_5,0_5_4_

Langtidsinfusion 1,0 6+3 2 (pg/2 timer) 2,5 6 4 5,0 6 4 10

Hos køerne, der med 2 timers mellemrum er injiceret med doseringer på hhv. 1,0, 2,5 og 5,0 pg, sker der hos 4 ud af 6, 4 ud af 6 hhv. 4 ud af 5 dyr en stigning af progesteronniveau-et, hvilket indicerer en forud sket ægløsning. Efter langtids-15 infusioner med analoge doseringer optræder der progesteronfor-højeiser hos 2 ud af 9, 4 ud af 6 hhv. 4 ud af 6 dyr.

6 Af de 9 køer, der modtager langtidsinfusioner på 1,0 pg/2 timer behandles efter forårskælvninger og reagerer ikke. De tre resterende køer har kælvet om sommeren, og af 20 dem reagerer 2 dyr.

Uafhængigt af indgivelsesmåden og de ovennævnte doseringer sker der hos alle forsøgsdyrene under behandlingsfasen i sammenligning med forbehandlingsfasen en tydelig stigning af LH-koncentrationen i plasma, hvorved de med LH-indgivelserne 25 inducerede pulsfrekvenser svarer til de endogene LH-mønstre under kontrolfasen.

Det kan klart udledes af disse resultater, at der ved LH-RH-langtidsinfusion hos kvæg opnås de samme farmakologiske og kliniske effekter som ved pulserende LH-RH-indgivelse.

30

Eksempel 3 5 Køer af kødkvægracer behandles i de første uger efter fødsel i et tidsrum på 8 dage med en progesteronholdig intravaginalspiral ("PRID", fa. Abbott). Efter udtagelse af 35 spiralen gives der som beskrevet i eksempel 2 en langtidsin-

DK 162880B

0 9 fusion med 2,5 pg LH-RH/2 timer. Hos alle køerne sker der under behandlingen en ægløsning, der er kendetegnet ved en stigning af progesteron-plasmaniveauet.

5 10 15 20 25 30 35

Claims

1. Fremgangsmåde til behandling af acycli hos får eller kvæg, kendetegnet ved, at et får eller kreatur behandles i 4-16 dage med et protraheret virksomt 5 gestagen, og at der i tilslutning til denne behandling ved kontinuerlig indgivelse af LH-RH eller en mindst lige så stærkt virksom analog i 2-6 dage frembringes et LH-plasma-niveau, der er tilstrækkeligt til inducering af ægløsning.

2. Anvendelse af gestagener og LH-RH eller dettes 10 analoge ved behandling af acycli hos får eller kvæg ved 4- 16 dages anvendelse af et protraheret virkende gestagen og påfølgende, 2-6 dages kontinuerlig indgivelse af LH-RH eller en mindst lige så virksom analog i en dosis, der giver et til inducering af ægløsning tilstrækkeligt LH-plasmaniveau.