DK164225B - Cephalosporinforbindelser til anvendelse som ernaeringsmaessige tilskud i dyrefoder - Google Patents

Description

i

DK 164225 B

Den foreliggende opfindelse angår hidtil ukendte syntetiske cephalosporinforbindelser, som er værdifulde som ernæringsmæssige tilskud i dyrefoder.

Mere specielt angår den foreliggende opfindelse kondensations-5 produkterne af aldehyder, som er forskellige fra formaldehyd og acet-aldehyd, med 3-thiolerede cephalosporiner, der i 7-stil1 ingen har en a-aminophenylacetamido-substituent, som er substitueret i benzenringen med en para-hydroxygruppe.

Derivater af forskellige a-aminocephalosporiner med nitrosub-10 sti tuerede heterocycli skealdehyder er beskrevet i USA patentskrift nr. 3.647.781. Reaktionsprodukter af forskellige α-aminocephalosporiner med formaldehyd er omtalt i Sydafrikansk patentskrift nr. 72/8475, med acet-aldehyd i Sydafrikansk patentskrift nr. 72/8474 og med forskellige aldehyder og ketoner i Sydafrikansk patentskrift nr. 72/8476.

15 Derivater af cephalosporiner, som i acylaminogruppen i 7-stillingen har en α-aminogruppe, der er blevet omsat med et aldehyd (men begrænset til methyl eller acetoxymethyl i 3-sti11 ingen) er omtalt i USA patentskrift nr. 3.880.842, USA patentskrift nr. 3.887.546 og Farmdoc 49804W.

Reaktionsprodukterne af acetone med forskellige a-aminocephalo-20 spori ner er omtalt i patentlitteraturen som følger 1) med cephaloglycin, i USA patentskrift nr. 3.303.193, 2) med cephalexin, i USA patentskrift nr. 3.714.146 og britisk patentskrift nr. 1.314.758 samt USA patentskrift nr. 3.780.028, 3) med 7-[a-amino-(2'-thienyl)acetamido]cephalosporansyre, i USA 25 patentskrift nr. 3.311.621, 4) med visse ring-substituerede cephaloglyciner, i USA patentskrift nr. 3.464.985, og 5) med visse ring-substituerede cephalexiner og cephaloglyciner, i USA patentskrifterne nr. 3.489.750, 3.489.751 og 3.489.752.

30 De fra USA patentskrifterne nr. 3.489.751 og 3.489.752 kendte reaktionsprodukter er blandt andet angivet at være ernæringsmæssige tilskud i dyrefoder. Til en sådan anvendelse er det imidlertid væsentligt at reaktionsprodukterne hurtigt hydrolyseres i legemet under gendannelse af den oprindelige cephalosporin. I forhold til disse kendte 35 reaktionsprodukter besidder kondensationsprodukterne ifølge opfindelsen som nedenfor angivet en overraskende fordel.

Fjernere beslægtede forbindelser er mellemprodukterne, som fremstilles, når en cephalosporinkerne, f.eks. 7-ACA eller 7-ADCA, acyleres

DK 164225 B

2 med et reaktivt derivat af en α-aminosyre, hvori α-aminogruppen er blevet beskyttet ved forudgående omsætning med en /?-diketoforbindelse, såsom methyl-acetoacetat, methyl-acetoacetamid eller acetyl acetone, eksempler herpå findes i Farmdoc 22850W og 60669 V.

5 På penici11 inområdet blev penicillinerne, som indeholder en a- aminogruppe i 7-acylamidosubstituenten, f.eks. amnicillin, og er omsat med ketoner og aldehyder, tilsyneladende først omtalt i USA patentskrifterne nr. 3.198.804 og nr. 3.198.788. Lignende reaktionsprodukter, som er fremstillet ud fra forskellige sådanne penicilliner ved omsætning 10 med de samme eller forskellige aldehyder og ketoner, blev senere beskrevet i USA patentskrifterne nr. 3.230.214, 3.316.247 (diketoner), nr. 3.325.479 (diketoner), 3.489.746, 3.549.746, 3.558.602, 3.635.953, 3.641.000, 3.647.781 (som omfatter nogle cephalosporiner), 3.725.389, 3.780.028, 3.784.562 (diketon), 3.886.140, 3.888.848, 3.905.955 og 15 3.904.604 samt britisk patentskrift nr. 1.267.936.

Den foreliggende opfindelse angår således kondensationsprodukter med den almene formel 20 a^7=\ " i H0-\_/1 I /S i - HN H—i-f ] ®2-S-*3 25 COOR1 hvori A er hydrogen, hydroxy, methyl eller methoxy, 30 R* er hydrogen, natrium eller kalium, 2 R er 2-furyl, 2-furan-5-sulfonyl, phenyl-2-sulfonsyre, 4-methoxyphenyl- 3-sulfonsyre, 4-hydroxyphenyl-3-sulfonsyre, 2-carboxymethoxyphenyl, 4-carboxymethoxyphenyl, 3-hydroxy-4-carboxyphenyl, 4-(2'-carboxy)vinyl-phenyl, carboxyl, 2-carboxyphenyl, 3-carboxyphenyl, methansulfonsyre 35 eller methandi sul fonsyre, og R er l,2,3-triazol-5-yl, tetrazol-5-yl, l,2,4-thiadiazol-5-yl, 1,3,4-thiadiazol-2-yl, l,3,4-oxadiazol-2-yl eller l,2,4-triazol-5-yl, hvor enhver af disse grupper er usubstitueret eller substitueret med 1 eller 3

DK 164225 B

2 alkylgrupper med 1 til 4 carbonatomer.

I de foretrukne udførelsesformer har det til benzenringen (para-sti 11 et i forhold til hydroxyl gruppen) forbundne carbonatom D-konfigura-tion.

5 Natrium* eller kaliumsaltet af omhandlede kondensationsprodukter med formel I er således det ækvimolære kondensationsprodukt af a) et 2 2 aldehyd med den almene formel R -CHO, hvori R har den ovenfor angivne betydning, med b) en amfoter 3-thioleret cephalosporin, som indeholder en a-substitueret α-aminoacetatamidogruppe i 7-sti 11 i ngen og i sin 10 zwitterionform har en vandopløselighed på mindre end 125 mg/ml.

Cephalosporinforbindelserne ifølge opfindelsen giver ved hydrolyse amfotere cephalosporiner med formlen II

A O

15 ^=\ II ^s\ Η0Λ_/f Π—i Ί

Ah, II

COOR1 20 1 3 hvori A, R og R har de ovennævnte betydninger.

Forbindelserne ifølge den foreliggende opfindelse udviser ønskværdig opløselighed, stabilitet og absorption. De foretrukne arter 25 hydrolyserer hurtigt og fuldstændigt i legemet under gendannelse af den oprindelige amfotere cephalosporin med formlen II; dette er ikke tilfældet med tilsvarende derivater, som er fremstillet ud fra formaldehyd, acetaldehyd eller acetone, som f.eks. de fra USA patentskrifterne nr.

3.489.751 og 3.489.752 nærmestliggende kendte reaktionsprodukter, idet 30 de hydrolyserer fuldstændigt, men med en uønskværdig lavere hastighed. Forbindelserne ifølge den foreliggende opfindelse løser således problemerne, som skyldes ustabiliteten ved høj pH-værdi og den hyppige relative uopløselighed i zwitterionformen af de amfotere cephalosporiner med formlen II.

35 I de foretrukne udførelsesformer af den foreliggende opfindelse er aldehydet med en syrefunktion i form af

DK 164225 B

4

O

II /0 H-C j ' S03 Na 5 5-formyl-2-furansulfonsyrenatri umsalt,

CKO

so3h 10 Kff o-benzaldehydsulfonsyre,

CHO

15 (TS

[IUo3h OCH 3 4-methoxybenzaldehyd-3-sul fonsyre,

20 CHO

\^-so3h

CH

25 4-hydroxybenzaldehyd-3-sulfonsyre,

CHO

» (y** O

0CH2c00H

35 o- og p-formylphenoxyeddikesyre,

DK 164225 B

5

COOH

/V-CH

CHO

5 5-formyl-salicylsyre,

CHO

A.

V

,n r , , , CH=CHCOCH

10 p-formyl-kanelsyre, OCH - COOH 15 giyoxylsyre,

<jHO

acoæ phthalaldehydsyre,

CHO

“ ό Ύ

COOH

30 p-formyl -benzoesyre, OHC - CH2S03Na acetaldehydsulfonsyrenatriumsalt eller OHC - CH(S03Na)2 35 acetaldehyddi sulfonsyrenatri umsalt.

DK 164225 B

6

Yderligere foretrukne udførelsesformer af den foreliggende opfin-del se er de former med formlen I, hvori A er hydrogen, R er afledt fra et af de ovennævnte aldehyder og fortrinsvis især er 5

N-N -N

—/°\ —i^0vv-SO,Na s3 er I lira, I !i I l| eller \\ |Γ 3 , og RJ er As/ffl3 eller'~\ J1

10 H

Amfotere 3-thiolerede cephalosporiner, som i deres zwitterionform 15 har en vandopløselighed på mindre end omkring 125 mg/ml, er tydeligvis ikke velegnede som ernæringsmæssige tilskud til dyrefoder og kan tillige sædvanligvis ikke omdannes til almindelige, opløselige natriumsalte (ulig deres ikke-amfotere modparter, såsom cephalothin etc.), fordi den krævede pH-værdi er så høj, at den forårsager dekomponering, og end-20 videre formodes den ved den pH-værdi eksisterende frie aminogruppe at katalysere dekomponering.

Cephalosporinerne ifølge opfindelsen med formlen I H O

25 V=\ I II

I j S 1 HN —-S > "V-H ' J—CH2-S-R3 i h—

Rs 0 COOR1 30 hvori 12 3 A, R , R og R har de ovenfor angivne betydninger, kan fremstilles ved a) behandling af en vandholdig suspension af en amfoter cephalo-35 sporin med den ovenfor angivne formel II, eller et sol vat eller hydrat deraf med et aldehyd med formlen R -CH0, hvori R har den ovenfor anførte betydning, og en tilstrækkelig mængde vandopløselig natrium-eller kaliumbase til at hæve reaktionsblandingens pH-værdi til mellem

DK 164225 B

7 5,5 og 8, til dannelse af den ønskede forbindelse I som salt i opløsning, og derpå b) udvinding af forbindelsen I som salt fra opløsningen.

Forbindelserne med formlen I har et asymmetri center ved carbon-5 atomet, som er forbundet til 2 nitrogenatomer. Således kan forbindelser med formel I eksistere i form af DL-blandingen eller som de enkelte D-eller L-i somere.

Det i trin a) i den ovennævnte fremgangsmåde anvendte cephalo-sporin-udgangsmateriale kan være en hvilken som helst form af den 10 amfotere cephalosporin med formel II, indbefattet den frie sure zwitter-ion eller et hydrat eller sol vat af denne zwitterion.

Koncentrationen af amfoter cephalosporin-udgangsmateriale er ikke kritisk, og gode resultater er blevet opnået med koncentrationer mellem omkring 25 og 300 mg cephalosporin-udgangsmateriale pr. ml opløsnings-15 middel. Udgangsmaterialet formales og sigtes fortrinsvis til en findelt tilstand, formales fortrinsvis især til en partikelstørrelse på mindre end 0,127 mm (200 mesh) til forøgelse af overfladearealet og omsætningshastigheden.

Det amfotere cephalosporin-udgangsmateriale opslæmmes i vand til 20 dannelse af en vandig opslæmning. Et alternativ til anvendelse af en vandig opslæmning i trin a) ville være at opslæmme cephalosporin-udgangsmaterialet i et organisk opløsningsmiddel, som er 1) et opløsningsmiddel for al kalimetal salt-slutproduktet, 2) blandbart med aldehydet, 3) kemisk inert overfor cephalosporin-udgangsmaterialet og slut-25 produktet og 4) let fjerneligt fra slutproduktet såsom ved mild tørring. Eksempler på organiske opløsningsmidler, som kunne anvendes, er dimethyl sul foxid og dimethyl formamid. På grund af vanskeligheden med fjernelse af resterende organisk opløsningsmiddel fra alkalimetalsaltsi utproduktet tilvejebringes udgangsmaterialet imidlertid fortrinsvis 30 som en vandig opslæmning.

Efter opnåelse af cephalosporin-udgangsmaterialet i opslæmning dannes det ønskede alkalimetalsalt med formel I i opløsning ved tilsætning af aldehydet og en mængde vandopløselig al kalimetal base, fortrinsvis en natrium- eller kaliumbase, tilstrækkelig til forøgelse af reak-35 ti onsblandingens pH-værdi til mellem omkring 5,5 og 8. Efterhånden som pH-værdien forøges, indtil den ligger inden for dette område, dannes alkalimetalsaltet af reaktionsproduktet af den amfotere cephalosporin og aldehydet og går i opløsning.

DK 164225 B

8

Temperaturen, ved hvilken trin a) udføres, er ikke kritisk. Omsætningen- kan udføres ved stuetemperatur; men højere eller lavere temperaturer kan anvendes, og temperaturer i området mellem 50 og 60°C foretrækkes .

5 Omkring 1 mol aldehyd kræves pr. mol cephalosporin-udgangsmate- riale, men aldehydet tilsættes fortrinsvis i noget overskud i forhold til den nødvendige teoretiske mængde til sikring af fuldstændig omsætning, dvs. et lille molært overskud. Det mest foretrukne forhold mellem aldehyd og cephalosporin-udgangsmateriale er omkring 1,3 til 1,4:1, og 10 ofte foretrækkes 1:1.

Natrium- eller kaliumbasen kan være en hvilken som helst vandopløselig base, som er i stand til 1) tilvejebringelse af natrium- eller kaliumioner, og 2) forøgelse af reaktionsblandingens pH-værdi til mellem omkring 5,5 og 8, fortrinsvis især omkring 6,2 til 7,2. Foretrukne baser 15 er natriumeller kaliumhydroxid, på grund af deres ønskværdige opløselig-hedsegenskaber. R3-S-delen af forbindelse I kan spalte fra ved høj pH-værdi. Af denne grund sættes basen til reaktionsblandingen på en sådan måde, at pH-værdien ikke får lov til at stige over omkring 8. Fortrinsvis anvendes basen i form af en vandig opløsning og tilsættes langsomt 20 til reaktionsblandingen under omrøring, indtil omsætningen viser sig at være fuldstændig ved pH-værdimåling og ved dannelse af en opløsning eller næsten en opløsning. Mængden af anvendt base er ikke kritisk, men fortrinsvis anvendes omkring 1 mol base pr. mol cephalosporinudgangsmateriale.

25 Til opnåelse af de bedste resultater filtreres den ved afslutnin gen af trin a) opnåede opløsning til fjernelse af faste urenheder før udvindingstrinet b). Før filtrering kan opløsningen eventuelt carbon-behandles med aktiveret carbon til hjælp for fjernelse af alle farvede urenheder.

30 Det ønskede produkt med formel I udvindes derpå fra vandig eller ikke-vandig opløsning, såsom ved udfældning eller lyofili sering. Udfældning af alkalimetalsaltet kan udføres ved tilsætning af et organisk opløsningsmiddel, hvori det ønskede salt er uopløseligt, dvs. et anti-opløsningsmiddel. Eksempler på sådanne anti-opløsningsmidier er iso-35 propanol, n-propanol, t-butanol og acetonitril.

Opløsningsmidlet til anvendelse i udfældningstrinet bør være et, som let kan fjernes fra slutproduktet under betingelser, som ikke vil resultere i nogen nævneværdig dekomponering af alkalimetalsaltet. Det

DK 164225 B

9 mest foretrukne anti-opløsningsmiddel er isopropanol. Anti-opløsningsmidlet-kan sættes til den fra trin a) resulterende opløsning, eller, alternativt og fortrinsvis, opløsningen, som indeholder det ønskede alkalimetalsalt, sættes under omrøring til et stort overskud af anti-5 opløsningsmidlet. Al kalimetal saltet med formel I udvindes derpå ved filtrering, udvaskes med et passende organisk opløsningsmiddel, f.eks. isopropanol, og tørres ved koventionelle fremgangsmåder, f.eks. vakuumtørring ved 50 til 56°C i 24 til 48 timer eller luft-tørring ved 60°C i 48 timer. Som en alternativ fremgangsmåde til udvinding af slutproduktet 10 ved udfældning kan saltet med formel I også udvindes ved lyofilisering af den i trin a) fremstillede opløsning.

En alternativ fremgangsmåde til fremstilling af forbindelserne med formel I omfatter: a) dannelse af en opslæmning af den amfotere cephalosporin eller et 15 solvat eller hydrat deraf i et velegnet inert organisk opløsningsmiddel, hvor dette opløsningsmiddel er et opløsningsmiddel for triethylamin-saltet af aldehydreaktionsproduktet af den amfotere cephalosporin og et ikke-opløsningsmiddel for alkalimetalsaltet med formel I, b) behandling af opslæmningen med aldehydet og tilstrækkeligt 20 triethylamin til dannelse af triethyl aminsaltet af aldehydreaktionsproduktet af den amfotere cephalosporin i opløsning, og c) udfældning af det ønskede al kalimetal salt med formel I fra opløsningen ved tilsætning af en opløsningsmiddel-opløselig natriumeller kaliumbase.

25 Udgangsmaterialet opslæmmes i et inert organisk opløsningsmiddel, som er et opløsningsmiddel for triethylaminsaltet eller aldehydreaktionsproduktet af den amfotere cephalosporin, men som er et ikke-opløs-ningsmiddel for det ønskede alkalimetalsalt med formel I. Det for trin a) valgte opløsningsmiddel bør fortrinsvis være let fjerneligt fra slut-30 produktet under betingelser, som ikke vil resultere i nogen nævneværdig dekomponering af slutproduktet. Passende opløsningsmidler for trin a) kan bestemmes ved simple forsøg.

Den i trin a) dannede opslæmning behandles derpå med et aldehyd, fortrinsvis med et molært overskud og især fortrinsvis med fra omkring 35 1,3 til 1,4 mol aldehyd pr. mol cephalosporinudgangsmateriale, og tilstrækkelig triethylamin til dannelse af triethylaminsaltet af det cycliske reaktionsprodukt af aldehydet og den amfotere cephalosporin i opløsning. Reaktionsblandingen omrøres fortrinsvis i mindst omkring 30

DK 164225 B

10 minutter til sikring af fuldstændig omsætning. Mængden af anvendt tri-ethylamin er ikke kritisk, men fortrinsvis anvendes omkring 1 mol pr. mol cephalosporin-udgangsmateriale. Omsætningen i trin b) udføres bekvemt ved stuetemperatur, men temperaturer, som er højere eller lavere 5 end denne, kan vælges med den forventede henholdsvis formindskelse eller forøgelse i omsætningstid.

Efter dannelse af en opløsning eller næsten en opløsning i trin b) carbon-behandles og filtreres reaktionsblandingen fortrinsvis, som i den ovenfor beskrevne førstnævnte fremgangsmåde.

10 Det ønskede al kalimetal salt med formel I kan dernæst udvindes fra opløsningen i trin ) ved tilsætning af et opløsningsmiddel-opløseligt natrium- eller kaliumsalt. De foretrukne salte er natrium- eller kaliumsalte af organiske syrer med mellem omkring 2 og 18 carbonatomer, f.eks. opløsningsmiddel-opløselige salte af sådanne syrer som 2-ethyl-15 hexansyre, capronsyre, oliesyre, glycol syre, propionsyre, eddikesyre etc.

Foretrukne salte for methanol-opløsningsmiddelsystemet er natrium-eller kalium-2-ethylhexanoat, fortrinsvis især opløsninger af disse salte i et methanol-blandbart organisk opløsningsmiddel, såsom isopro-20 panol. De mest foretrukne alkalimetalsalte er opløsninger af natriumeller kalium-2-ethylhexanoat i isopropanol. Alkalimetalsaltet tilsættes, fortrinsvis langsomt og under omrøring, i tilstrækkelig mængde til opnåelse af den maksimale mængde bundfald fra opløsningen. Efter at fuldstændig udfældning har fundet sted, omrøres reaktionsblandingen, 25 fortrinsvis i mindst omkring 1 time, og filtreres derpå. Bundfaldet udvaskes med et passende organisk opløsningsmiddel, f.eks. methanol, og tørres ved konventionelle fremgangsmåder, f.eks. vakuum-tørring ved 50 til 56°C i 24 til 48 timer eller lufttørring ved 60°C i 48 timer.

Den anden fremgangsmåde kan også følges uden brug af triethyl-30 aminen i trin b). Ved denne modificerede fremgangsmåde opslæmmes opslæmningen af den amfotere cephalosporin eller solvat eller hydrat deraf, fortrinsvis methanol- eller propylenglycol-sol vatformen eller hydratformen og især fortrinsvis methanol solvatet, i et inert organisk opløsningsmiddel, som er et ikke-opløsningsmiddel for produktet med 35 formel I, fortrinsvis methanol, og opslæmningen behandles dernæst med aldehydet, fortrinsvis i et molært overskud, og en opløsningsmiddel -opløselig natrium- eller kaliumbase, hvor denne base tilsættes i en mængde som er tilstrækkelig til forøgelse af reaktionsblandingens pH-

DK 164225 B

11 værdi til mellem omkring 5,5 og 8. Det fbretrækkes at anvende som baser natrium- eller kaliumsaltene, der er nævnt ovenfor som værende de foretrukne ved den anden fremgangsmåde. Ved den modificerede fremgangsmåde går cephalosporin-udgangsmaterialet i opløsning, og det uopløselige 5 alkalimetalsalt udfældes derpå næsten øjeblikkeligt. Eftersom en opløsning ikke opnås ved fuldførelse af denne omsætning, udføres fortrinsvis omrøring af reaktionsblandingen og opvarmning til omkring 45 til 50°C i en tidsperiode på op til adskillige timer til sikring af maksimale udbytter af slutprodukt. Det faste produkt fjernes ved filtrering, udvas-10 kes og tørres til opnåelse af det ønskede salt med formel I.

Alkalimetalsaltene ifølge den foreliggende opfindelse kan anvendes som ernæringsmæssige tilskud, som har acceptabel termisk stabilitet i den faste tilstand, stor opløselighed i vand, tilfredsstillende vandstabilitet og udmærket in vivo og in vitro antibakteriel aktivitet mod 15 mange forskellige Gram-positive og Gram-negative bakterier.

Natrium- og kaliumsaltene med formel I kan opløses i vand til dannelse af forholdsvis koncentrerede opløsninger med mindst 250 mg/ml aktivitet. Koncentrationer med 250 mg/ml aktivitet (pH-værdi 5,7 - 6,8) af disse salte har acceptable vandstabil iteter.

20 Aktiviteter af forbindelserne med formel I er i det væsentlige ækvivalente med aktiviteterne af den oprindelige amfotere cephalosporin med formel II.

Forbindelserne med formel I er værdifulde ernæringsmæssige tilskud til dyrefoder som følge af kombinationen af høj stabilitet, god oral 25 absorption og hurtig biologisk hydrolyse i dyr samt lav middel præventiv dosis PDgg. Disse virkninger og det overraskende herved i forhold til den nærmest!iggende kendte teknik fremgår nedenfor.

I det følgende beskrives fremgangsmåder til fremstilling af udgangsmaterialer.

30

Fremgangsmåde til fremstilling af 7-[D-a-amino-a(p-h,ydroxyphenyl)acet-amidol-3-(1,2,3-triazol-5-ylthi omethyl)-3-cephem-4-carboxylsyre,-methanol sol vat I en trehal set kolbe, forsynet med en tilbagesvalingskondensator, 35 en ovenfor anbragt omrører og et termometer, anbragtes en grundigt blandet blanding af 8,36 g (0,05 mol) D-(-)-p-hydroxyphenylglycin og 3,02 g (0,075 mol) magnesiumoxid i 120 ml 50% vandig dioxan. Blandingen omrørtes i 1 time og behandledes derpå med 10,74 g (0,075 mol) t-but-

DK 164225 B

12 oxycarbonylazid. Blandingen omrørtes og opvarmedes derefter til 45-50°C i 17 timer under N2. Opløsningen fortyndedes med 400 ml HgO og ekstra-heredes 2 gange med 300 ml ethyl acetat. Den vandige fase gjordes sur med 10% citronsyreopløsning indtil pH-værdi 4 og mættedes med NaCl. Den 5 vandige blanding ekstraheredes med 3 x 400 ml ethylacetat. Opløsningen tørredes over Na2S04, og opløsningsmidlet afdampedes. Remanensen tritureredes med "Skellysolve B" til opnåelse af D-a-t-butoxycarbonylamino-a-(p-hydroxyphenyl)eddikesyre som et faststof, der vejede 10,4 g (78,5%).

Til en opslæmning af 7-amino-3-(l,2,3-triazol-5-ylthiomethyl)-3-10 cephem-4-carboxylsyre (6,0 g, 19,0 mmol) i 100 ml tør methylenchlorid sattes 8,5 ml l,l,l,3,3,3-hexamethyl-(disilazan (40,9 mmol). Blandingen omrørtes og opvarmedes under tilbagesvaling i 4 timer, på hvilket tidspunkt en klar opløsning opnåedes. Opløsningsmidlet afdampedes, og remanens-olien udsattes for høj-vakuum natten over ved stuetemperatur.

15 Den skumagtige remanens opløstes i 85 ml tør THF (tetrahydrofuran) og afkøledes til omkring -15°C før indføring i den efterfølgende reaktionsblanding.

D-a-t-butoxycarbonylamino-a-(4-hydroxyphenyl)eddikesyre (4,4 g, 16,5 mmol) opløstes i 145 ml tør THF. Opløsningen omrørtes og afkøledes 20 til -20°C. N-methylmorpholin (1,6 g, 16 mmol) og isobutylchlorformiat (2,3 g, 16,8 mmol) tilsattes i rækkefølge med en sådan hastighed, at blandingens temperatur ikke oversteg omkring -10°C. Den resulterende’ blanding omrørtes derpå i 20 minutter ved -12 til -15°C. Den afkøledes derefter til -20°C, og THF-opløsningen af silyleret 7-amino-3-(l,2,3-25 triazol-5-ylthiomethyl)-3-cephem-4-carboxylsyre tilsattes på én gang. Temperaturen steg til omkring -12°C. Ydre afkøling afbrødes indtil temperaturen steg til 0°C. På dette tidspunkt anbragtes et isbad, og blandingen omrørtes i 3 timer ved 2 til 3°C. Dette efterfulgtes af en periode på 1 time uden ydre afkøling, hvor temperaturen steg til 20° C.

30 En total mængde på 30 ml methanol tilsattes, og omrøringen fortsattes i 15 minutter ved stuetemperatur. Efter afdampning af opløsningsmidlerne under reduceret tryk opslæmmedes remanensen i 300 ml ethylscetat. Det opslæmmede faststof frafiltreredes, (11,8 g). Ethyl acetatopløsningen ekstraheredes 3 gange med NaHC03 (5%) opløsning. De kombinerede natrium-35 hydrogencarbonatekstrakter afkøledes i et isbad, fase-adskiltes med ethylacetat og gjordes sure til en pH-værdi på 2,5 med 42,5% HgPO^.

Faserne omrystedes og adskiltes derefter. Ethyl acetatopløsningen tørredes derpå ved at lade den passere gennem natriumsulfat og inddam-

DK 164225 B

13 pedes derpå til omkring 15 til 20 ml. Denne opløsning sattes dernæst dråbevts til ororørt, i en Erlenmeyer kolbe indeholdt, cyclohexan (svarende til 400 ml). Efter omrøring i en halv time samledes det udfældede faststof ved filtrering. Den samlede faste 7-[D-a-t-but-5 oxycarbonylamino-a-(p-hydroxyphenyl)acetamido]-3-(l,2,3-triazol-5-ylthiomethyl)-3-cephem-4-carboxylsyre luft-tørredes. Den vejede 1,75 g.

7-[D-a-t-butoxycarbony1amino-tt-(p-hydroxyphenyl)-acetamido]-3-(l,2,3-triazol-5-ylthiomethyl)-3-cephem-4-carboxylsyre, 3,5 g, opløstes i 80 ml HCOOH, 98-100%, og omrørtes i 2 timer ved stuetemperatur. HC00H 10 afdampedes under reduceret tryk (aspiratorbad-temperatur ikke over 40°C) og azeotroperedes til sidst 3 gange med 30 ml toluen. Faststoffet tørredes natten over under højvakuum over P20g. En total mængde på 3,5 g skum opnåedes. Skummet, 2 g, omrørtes med 300 ml 1^0: CHgOH (8:2). Opløsningsmidlet filtreredes fra noget faststof (0,3 g), trækul-behandledes 15 med 700 mg "Darko KB", filtreredes gennem diatome-jord ("Celite") og frysetørredes til opnåelse af 0,9 g rå 7-[D-<*-amino-a-(phydroxyphenyl)-acetamido]-3-(1,2,3-triazol-5-ylthiomethyl)-3-cephem-4-carboxylsyre. Ti 1 udkrystallisering anvendtes den følgende fremgangsmåde. En opslæmning af 0,2 g af det rå materiale i 6 ml 99% methanol opvarmedes i et forsøgsrør 20 til kogning. Opvarmningen afbrødes øjeblikkeligt, og smelten triture-redes med korn. Smelten størknede til en krystallinsk masse. På denne måde opnåedes en totalmængde på 0,211 g 7-[D-a-amino-a-(phydroxyphenyl)-acetamido]-3-(1,2,3-triazol-5-ylthiomethyl)-3-cephem-4-carboxylsyre fra 0,400 g råt materiale. Materialet tørredes ved 56°C/0,1 mm over P20g i 25 20 timer, smeltepunkt >200°C, dekomponering. IR og NMR er konsistente med strukturen. NMR viste tilstedeværelsen af 1/3 mol CHgOH.

Analyse for C18H18Ng05S2,H20,l/3CH30H:

Beregnet: C 44,83; H 4,38; N 17,10; S 13,09 Fundet: C 43,97; H 4,36; N 15,84; S 6,18.

30 En total mængde på 6,5 g (11,55 mmol) 7-[D-a-t-butoxycarbonylamino-θ'- (p-hydroxyphenyl)acetamidoj -3-(1, 2,3-tri azol -5-yl thiomethyl )-3-cephem- 4-carboxylsyre opløstes i 175 ml 98-100% myresyre under vandfri betingelser. Blandingen omrørtes ved stuetemperatur i 2,5 timer. En del af opløsningen, 125 ml, inddampedes under reduceret tryk til en ravgul 35 olie. Olien azeotroperedes derpå 3 gange med 70 ml toluen under reduceret tryk. Remanensen opslæmmedes i en 80:20 H^-CHgOH-opløsning (700 ml) og omrørtes i 0,5 time, indtil det mest faststof opløstes, filtreredes derefter. Filtratet behandledes med 1,5 g ("Darko") trækul i omkring 20 14

DK 164225 B

minutter. Trækullet frafiltreredes gennem et "Celite"-lag. Opløsningen frysetørredes dernæst i 9 adskilte 100 ml rundkolber. Det frysetørrede materiale vejede 2,415 g. Det omkrystalli seredes i portioner på 0,200 g som beskrevet ovenfor til opnåelse af en total mængde på 0,923 g 7-[D-a-5 amino-α-(p-hydroxyphenyl)acetamido]-3-(1,2,3-tri azol-5-ylthi omethyl)-3- cephem-4-carboxylsyre. NMR var konsistent og viste tilstedeværelsen af 1/3 mol CH3OH.

Analyse for C^gN^S^O, I/3CH3OH:

Beregnet: C 44,83; H 4,38; N 17,10; S 13,09 10 Fundet: C 45,77; 44,36; H 4,44, 4,34; N 16,61, 16,52; S 13,01, 13,01.

Fremgangsmåde til fremstilling af krystallinsk methanol sol vat af 7-ΓΡ-ami no-cr- (p-hydroxyphenyl) acetamido! -3-(1,2,3-tri azol -5-yl thi omethyl) -3 -15 cephem-4-carboxylsyre 1. 50 g 7-[D-a-amino-a-(p-hydroxyphenyl)-acetamido]-3-(l,2,3-tri azol-5-ylthiomethyl)-3-cephem-4-carboxylsyre opslæmmes i 250 ml 95% volumen/volumen methanol/vand -(95% methanol)-opløsning ved 22 til 25°C.

2. Koncentreret saltsyre tilsættes under hurtig omrøring indtil en 20 pH-værdi på 1,3 til 1,5. En opløsning eller næsten en opløsning opnås.

3. pH-værdien indstilles til 1,7 med tri ethylamin.

4. 7,5 g aktiveret trækul ("Darco G-60") tilsættes, og der opslæmmes i 0,5 time.

5. Trækullet fjernes ved filtrering og udvaskes med 75 ml 25 methanol, som sættes til filtratet. Trin 2, 3 og 4 bør fuldføres inden for 5 timer.

6. Det kombinerede udvaskningsmiddel og filtrat fra trin 5 omrøres hurtigt. Triethylamin tilsættes over en 5 minutters periode, indtil pH-værdi 4,5. Udkrystallisering begynder efter omkring 1 til 3 minutter.

30 Blandingen opslæmmes i 1 time.

7. Krystallerne samles ved filtrering, udvaskes med 100 ml methanol og vakuum-tørres ved 56 oC i 24 timer. Bio-udbytte 75 - 90%; bio-prøve = 850-900 /ig/mg; NMR-IR = konsistent for 1 mol methanol; % vand, KF = 2-4,0.

35

DK 164225B

15

Fremgangsmåde til fremstilling af krystallinsk 1,2-propylenglycolsolvat af 7-ΓΒ-tt-amino-a-(p-hydroxyphenyllacetamidol-3-(1,2,3-triazol-5-yl-thi omethyl) -3-cephem-4-carbox.yl syre 1. 25 g af det ovenfor fremstillede methanol sol vat af 7-[D-a- 5 amino-a-(p-hydroxyphenyl)acetamido]-3-(l,2,3-triazol-5-ylthiomethyl)-3-cephem-4-carboxylsyre opslæmmes i 150-200 ml 75% volumen/volumen propylcnglycol-vandopløsning ved 20-25°C.

2. Koncentreret saltsyre tilsættes indtil en pH-værdi på 1 til 1,2 til opnåelse af en opløsning eller næsten en opløsning.

10 3. Tri ethyl amin (TEA) tilsættes langsomt under hurtig omrøring til opnåelse af en pH-værdi på 1,7 til 1,8.

4. 5 g "Darco G-60" tilsættes, og blandingen opslæmmes i 0,5 time. Trækullet fjernes ved filtrering (filtrering udføres langsomt, et 18,5 cm SS nr. 576 papir foreslås). Trækulfilterkagen udvaskes med 40 ml 75% 15 volumen/volumen propylenglycol-vandopløsning. Udvaskningsmidlet sættes til filtratet.

Trin 2, 3 og 4 ovenfor bør fuldføres inden for 5 timer.

5. Triethylamin sættes til den hurtigt omrørte filtratudvaskningsmiddel -blanding fra trin 4, indtil pH-værdien = 4,5 over en 10 minutters 20 periode. Krystaller dannes efter omkring 1 til 3 minutter. Blandingen opslæmmes i 1 time.

6. Propylenglycolsol vat-krystallerne af 7-[D-a-amino-α-(p-hydroxyphenyl )acetami do]-3-(1,2,3-tri azol-5-ylth i omethyl)-3-cephem-4-carboxyl-syre samles ved filtrering. Filtrering udføres langsomt (et 12,5-15,0 cm 25 SS nr. 604 papir foreslås). Krystallerne udvaskes i rækkefølge med 50 ml 75% propylenglycol, 50 ml methanol og 50 ml acetone og vakuum-tørres ved 56°C i 24 timer. Biologisk udbytte: 80-95%.

Egenskaber af 7-ΓΡ-ft-amino-e-(p-hydroxyphenyl)acetamidol-3-(l,2,3- 30 tri azol-5-ylthiomethyl)-3-cephem-4-carboxylsyre, propylenglycolsol vat a. Bio-prøve = 850-900 £g/mg.

b. IR-NMR = konsistent for en struktur, som indeholder 1,0 - 1,5 mol propylenglycol (14-19% propylenglycol). Øjensynligt intet tab af 3-triazolsidekæden.

35 c. % vand, K.F. = 1-3,0.

d. Krystalmorfologi = 100% krystallinsk (mikrokrystaller, trekantformede).

e. Smeltepunkt = 182-184°C (Dekomponering, varmbord).

DK 164225 B

16 f- [α]β5(0 = 1%; 1N-HC1) = +53°.

gr Vandopløselighed = omkring 10 mg/ml i vand ved 23°C.

h. Tab af bioaktivitet ved henstand ved forhøjede temperaturer: 100°C, 24 timer = <6%; 48 timer = <12%; 56°C, 1 måned = <10%.

5

Fremgangsmåde til fremstilling af krystallinsk methanol sol vat ud fra krystallinsk propylenglycolsol vat

Propylenglycolsolvatet af 7-[D-a-amino-a-(p-hydroxyphenyl)acet-amido]-3-(1,2,3-triazol-5-ylthiomethyl)-3-cephem-4-carboxylsyre (50 g) 10 fremstillet som ovenfor opslammes i 250 ml 95% (volumen/volumen) methanol-vandopløsning ved 22-25°C. Koncentreret HC1 tilsættes under hurtig omrøring indtil en pH-værdi på 1,1-1,5, hvorpå en opløsning eller næsten en opløsning opnås. pH-værdien indstilles til 1,7 med triethyl-amin, og 7,5 g aktiveret trækul tilsættes under opslæmning i 0,5 time.

15 Trækullet fjernes ved filtrering og udvaskes med 75 ml methanol. Udvaskningsopløsningen sættes derefter til filtratet. (Trinnene fra tilsætning af HC1 indtil dette tidspunkt bør fuldføres inden for 5 timer). Det kombinerede udvaskningsmiddel og filtrat omrøres hurtigt, og triethyl-amin tilsættes over en 5 minutters periode indtil en pH-værdi på 4,5 20 nås. Udkrystallisation begynder efter omkring 1-3 minutter. Blandingen opslæmmes i 1 time, og krystallerne fjernes ved filtrering, udvaskes med 100 ml methanol og vakuum-tørres ved 56°C i 24 timer. Bio-udbytte 75 -90%; bio-prøve = 850-900 øg/mg. NMR-IR = konsistent for 1 mol methanol; % H20, K.F. = 2-4,0.

25

Fremgangsmåde til fremstilling af krystallinsk 7-rD-a-amino-a-(p-hydroxyphenyl)acetamidol-3-(1,2,3-triazol-5-ylthiomethyl)-3-cephem-4-carboxylsyre,sesgui hydrat 7-[D-a-ami no-a-(p-hydroxyphenyl)acetamido]-3-(1,2,3-tri azol-5-30 ylthiomethyl)-3-cephem-4-carboxylsyre,methanol sol vat (15 g) opslæmmedes i 60 ml vand. pH-værdien hævedes til 6,5 ved tilsætning af 4N NaOH, og blandingen sendtes gennem en sigte med maskevidde på 0,127 mm (200 mesh). Reaktionsblandingen opslæmmedes ved stuetemperatur i 2 timer, i hvilken periode pH-værdien opretholdtes ved 6,5. Krystallerne fjernedes 35 ved filtrering, udvaskedes med 20 ml vand og luft-tørredes ved 37 oC i 24 timer til dannelse af 11,5 g af det i titlen nævnte krystallinske produkt. Bio-prøve = 924 øg/mg (middel % HgO, K.F. = 5,26). NMR og IR var konsistente for den foreslåede struktur og viste, at produktet

DK 164225 B

17 indeholdt intet methanol, men faktisk indeholdt et spor propylenglycol.

Fremgangsmåde til fremstilling af krystallinsk 7-rD-tt-amino-a-(p-hydroxyphenyl)acetamidol-3-(1,2,3-tri azol-5-ylthiomethyl)-3-cephem-4-5 carboxyl syre,sesquihydrat og dannelse af andre krystallinske hydrater 7-[D-a-amino-α-(p-hydroxyphenyl)acetamido]-3-(1,2,3-triazol-5-ylthiomethyl)-3-cephem-carboxylsyre,methanol sol vat (0,127 mm (200 mesh), 10,0 g), som i det væsentlige er fri for propylenglycol, opslæmmes i 30-40 ml deioniseret vand ved den omgivende stuetemperatur (20-25°C) til 10 dannelse af en vandig opslæmning med pH-værdi 3-4. NaOH (40¾) tilsættes langsomt under hurtig omrøring til hævning af pH-værdien til 6,3-6,7. Blandingen opslæmmes ved pH-værdi 6,3-6,7 i 2 timer. Krystallerne fjernes ved filtrering, udvaskes med vand og luft-tørres ved stuetemperatur i 24 timer til dannelse af 75-80 vægtprocent udbytte på 15 950-1000 Mg/mg krystaller af 7-[D-a-amino-a-(phydroxyphenyl)acetamido]- 3- (1,2,3-tri azol-5-ylthiomethyl)-3-cephem-4-carboxylsyre,di hydrat. IR-og NMR-analyser var konsistente for den foreslåede struktur og viste, at produktet indeholdt intet methanol, men faktisk indeholdt et spor af propylenglycol. HgO, K.F. - 6,56.

20 En prøve af det krystallinske dihydrat luft-tørredes ved 37°C i 24 timer til dannelse af det krystallinske sesquihydrat af 7-[D-a-amino-a-(p-hydroxyphenyl)acetamido]-3-(1,2,3-tri azol-5-ylthiomethyl)-3-cephem-4-carboxylsyre. HgO, K.F. * 4,26.

En anden prøve af dihydratet luft-tørredes ved 45°C i 24 timer til 25 dannelse af det krystallinske sesquihydrat. HgO, K.F. = 5,5.

En prøve af dihydratet luft-tørredes ved 56°C i 24 timer til dannelse af det krystallinske monohydrat af 7-[D-a-amino-α-(p-hydroxyphenyl )acetamido]-3-(1,2,3-tri azol-5-ylthiomethyl)-3-cephem-4-carboxyl-syre. HgO, K.F. = 4,38 (teoretisk % HgO for monohydrat = 3,75).

30 En prøve af dihydratet vakuum-tørredes over P20g ved stuetemperatur i 24 timer til dannelse af det krystallinske hemihydrat af 7-[D-a-amino-a-(p-hydroxyphenyl)acetamido]-3-(1,2,3-tri azol -5-ylthiomethyl)-3-cephem- 4- carboxylsyre. HgO, K.F. = 2,63 (teoretisk % HgO for hemihydrat -1,91).

35 En prøve af dihydratet vakuum-tørredes ved 56°C i 24 timer til dannelse af det krystallinske hemihydrat. HgO, K.F. = 1,6 - 2,0.

DK 164225 B

18 D-(-)-2-(3'-methyl-4'-hydroxyphenyl)giycylchlori d,hydrochlori d fremsttlles i en høj grad af renhed og højt udbytte ved den følgende fremgangsmåde:

Omkring 0,06 mol D-(-)-2-(3,-methyl-4/-hydroxyphenyl)glycin 5 opslæmmes i 100 ml dioxan. Opslæmningen omrøres, og C0C12 (phosgen) sendes ind, medens opslæmningstemperaturen holdes ved 50-58°C. C0C12 sendes ind i en totaltid på 3,5 timer. En gul opløsning opnås. Opløsningen renses med nitrogen til uddrivning af det overskydende C0C12. HC1-gas bobles gennem opløsningen i 2,5 timer. Opløsningen omrøres, og en 10 lille mængde fortyndes med noget ether til opnåelse af nogle krystaller, som sættes til hele portionen som korn. Opløsningen omrøres ved 20-25°C i 16 timer. Den resulterende opslæmning af krystallinsk D-(-)-2-(3'-methyl-4,-hydroxyphenyl)glycylchlorid,hydrochlorid filtreres til samling af produktet. Filterkagen udvaskes med dioxan og methylenchlorid og 15 tørres derefter i en vakuum-ekssikkator over P^Og til opnåelse af omkring 7 g D-(-)-2-(3/-methyl-4,-hydroxyphenyl)glycylchlorid,hydrochl orid.

2- (3'-methyl-4'-hydroxyphenyl)glyci n 20 En opløsning af 59,02 g (0,6 mol) 75% glyoxylsyre i 100 ml vand sattes til en opslæmning af 54,6 g (0,5 mol) 2-methyl phenol og 140 ml koncentreret ammoniumhydroxid i 400 ml vand ved stuetemperatur. Blandingens temperatur steg til 37°C. Blandingen omrørtes ved stuetemperatur i 65 timer. Opløsningen, som i begyndelsen havde en pH-værdi 10,1, ind-25 stilledes til pH-værdi 6,8 med 6N saltsyre, hvad der forårsagede, at produktet udkrystalliserede. Produktet samledes ved filtrering, udvaskedes med vand og tørredes i vakuum over phosphorpentoxid til dannelse af 31,5 g (34,8%) 2-(3'-methyl-4'-hydroxyphenyl)glycin; dekomponering 196-199°C. Det infrarøde og det kernemagnetiske resonans-spektrum var 30 konsistent for det ønskede produkt. Reference: Belgisk patentskrift nr. 774.029 (Farmdoc 27, 122T), som angiver smeltepunkt 205-207°C.

Analyse for CgHjjNOg:

Beregnet: C 59,66; H 6,13; N 7,73.

Fundet: C 57,68; H 6,23; N 7,47, H20, 2,34 35 Fundet, korrigeret for 2,34% vand: C 59,06; H 6,12; N 7,67.

DK 164225B

19 D, L-N-chloracetyl-2-(3'-methyl -4'-hydroxyphenyl)q1vein

En opslæmning af 20,2 g (0,112 mol) D,L-2-(3'-methyl-4'hydroxy-phenyl)glycin i 175 ml vand indstilledes til pH-værdi 10,3 med 20% natriumhydroxid, hvad der resulterede i en opløsning. Opløsningen af-5 køledes i et isbad. Chloreddikesyreanhydrid (38,2 g, 0,224 mol) tilsattes på én gang, og pH-værdien af reaktionsblandingen opretholdtes ved pH-værdi 10 ved tilsætning af 20% natriumhydroxid, indtil ingen yderligere pH-værdi ændring registreredes. Reaktionsblandingen omrørtes i yderligere 10 minutter i kulden. Reaktionsblandingen gjordes derpå sur 10 indtil pH-værdi 2,0 med 6N saltsyre, hvad der forårsagede, at produktet udkrystalli serede. Produktet samledes ved filtrering, udvaskedes med vand og luft-tørredes. Omkrystallisation fra 200 ml varmt vand gav 13,7 g (47,4%) D,L-N-chloracetyl-2-(3'-methyl-4'-hydroxyphenyl)glycin. Det infrarøde og det kernemagnetiske resonansspektrum var konsistente for 15 det ønskede produkt.

Analyse for CjjH12N04C1,H20:

Beregnet: C 47,92; H 5,118; N 5,081.

Fundet: C 48,11; H 5,16; N 5,15.

20 D-(-)-N-chloracetyl-2-(3'-methyl-4'-hydroxyphenyl)glycin D,L-N-chloracetyl-2-(3'-methyl-4'-hydroxyphenyl)glycin (5,0 g 0,0194 mol) og L-ephenaminacetat (6,1 g, 0,0213 mol) opløstes i 50 ml isopropyl alcohol ved opvarmning på et dampbad. Vand (50 ml) tilsattes, og ved afkøling udkrystalli seres L-ephenaminsaltet. Saltet samledes ved 25 filtrering og luft-tørredes.

Saltet opslæmmedes i 30 ml vand og 50 ml methylenchlorid, og blandingen indstilledes til pH-værdi 10,0 med 20% natriumhydroxid. Faserne adskiltes, og den vandige fase ekstraheredes to gange mere med methylen-chlorid.

30 Den vandige opløsning indstilledes derpå til pH-værdi 2,0 med 6N saltsyre, hvad der forårsagede, at produktet udkrystalli serede. Produktet samledes ved filtrering og tørredes i vakuum over phosphorpentoxid, hvad der medførte 0,9 g (36,1%) D-(-)-N-chloracetyl-2-(3-methyl-4/-hydroxyphenyl)glycin; smeltepunkt 170 - 172°C, [ar] jj s 185,9° (Ol, 35 95% EtOH). Det infrarøde og det kernemagnetiske resonansspektrum var konsistente for det ønskede produkt.

DK 164225 B

20

Analyse for CjjH^NO^CI:

Beregnet: C 51,27; H 4,696; N 5,436.

Fundet: C 51,21; H 4,77; N 5,29.

1,2-diphenyl-2-methylaminoethanol, sædvanligvis kaldt ephenamin 5 (ifølge Federal Register, 7. juni 1951) har strukturen

/ V-ch - CH—(\ A

\ //\ i \_J

io 0H “ CH3

Forbindelsen kaldes også N-methyl-l,2-diphenyl-2-hydroxyethylamin eller α,/ί-diphenyl-/?-hydroxy-N-methylethylamin eller l,2-diphenyl-2-15 methylamino-l-ethanol.

Denne fremgangsmåde udnytter kun den levo-erythrose isomere. Fremgangsmåder til dens fremstilling og omsætning med penicillin G er beskrevet i USA patentskrifterne nr. 2.645.638 (V.V. Young) og 2.768.081 (F.H. Buckwalter). I det sidste patentskrift gennemgås tidligere 20 litteratur, ligesom det gøres i W.B. Wheatley et al., J. Org. Chem., 18(11), 1564-1571 (1953). Denne forbindelse anvendtes til opspaltning af racemisk phenoxymethylpenicillin af Sheehan et al., J. Am. Chem. Soc., 81, 3089-3094 (1959); se især p. 3091.

25 D-(-)-2-(3-methyl -4'-h.ydroxyphenyl)giyci η D-(-)-N-chloracetyl-2-(3'-methyl-4'-hydroxyphenyl)glycin (11,1 g, 0,0431 mol) kombineredes med 100 ml 2N saltsyre, og blandingen opvarmedes under tilbagesvaling i 1,5 time. Opløsningen afkølede, og pH-værdien indstilledes til 5,0 med 20% natriumhydroxid, hvad der forårsagede, at 30 produktet udkrystalli serede. Produktet samledes ved filtrering, udvaskedes med vand og tørredes i vakuum over phosphorpentoxid til dannelse af 7,4 g (94,7%) D-(-)-2-(3'-methyl-4'-hydroxyphenyl)glycin, dekomponering 205-209°C, [a]^= 152,6° (C=l, 1 N HC1). Det infrarøde og det kernemagnetiske resonansspektrum var konsistente for det ønskede produkt.

35 Analyse for CgHjjN03:

Beregnet: C 59,66; H 6,13; N 7,73.

Fundet: C 58,62; H 5,49; N 7,78; H20, 1,46.

Fundet, korrigeret for 1,46% vand: C 59,48; H 5,41; N 7,84.

DK 164225B

21 D-(-)-N-t-butoxycarbonyl-2-(3'-methyl-4'-hydroxyphenyl)glycin

Til en opslæmning i 200 ml HgO-dioxan (1:1) af 7,2 g (0,0397 mol) D-(-)-2-(3'-methyl-4'-hydroxyphenyl)glycin og 3,2 g (0,08 mol) pulveriseret magnesiumoxid, som blev omrørt ved stuetemperatur, sattes dråbevis 5 9,7 g (0,068 mol) t-butoxycarbonylazid. Reaktionsblandingen opvarmedes derpå til 42-45°C under nitrogenatmosfære i 19 timer. Blandingen fortyndedes derefter med 100 ml isvand. Opløsningen fase-adskiltes med ethyl-acetat og filtreredes til fjernelse af noget uopløseligt materiale, som var udskilt. Filtratets vandige fase skiltes fra og ekstraheredes 2 10 gange mere med ethylacetat. Den vandige opløsning indstilledes derefter til pH-værdi 5,0 med 42% phosphorsyre og ekstraheredes 5 gange med ethylacetat. De kombinerede organiske ekstrakter udvaskedes 3 gange med vand, tørredes over natriumsulfat, og opløsningsmidlet fjernedes ved reduceret tryk efterladende en olie. Olien tørredes i vakuum over 15 phosphorpentoxid resulterende i 10,6 g (95%) D-(-)-N-t-butoxycarbonyl-2-(3'-methyl-4'-hydroxyphenyl)glycin. Det infrarøde spektrum var konsistent for den ønskede struktur.

7-ΓΡ-2-t-butoxycarbonylami no-(3'-methyl-4'-hydroxyphenyl)acetamidol-3-20 (1,2,3-tri azol -5-ylthiomethvl) -3-cephem-4-carbox.y1 syre A. Blandet anhydrid

En opløsning af 2,8 g (0,01 mol) D-(-)-N-t-butoxycarbonyl-2-(3'-methyl-4'-hydroxyphenyl)glycin i 100 ml tetrahydrofuran afkøledes til 25 -15°C i et is-salt-acetone-bad. N-methylmorpholin (1,01 g, 0,01 mol) tilsattes efterfulgt af 1,37 g (0,01 mol) isobutylchlorformiat, og reaktionsblandingen omrørtes ved -15 til -20°C i 8 minutter. Et bundfald af N-methylmorpholin,hydrochlorid udskiltes øjeblikkeligt.

30 B. Kobling 7-ami no-3-(1,2,3-tri azol-5-ylthi omethyl)-3-cephem-4-carboxylsyre (3,1 g, 0,01 mol) opslæmmedes i 100 ml vand, og 1,01 g (0,01 mol) N-methylmorpholin tilsattes. En fuldstændig opløsning opnåedes ikke. Derpå tilsattes 1,1,3,3-tetramethylguanidin dråbevis til denne omrørte opslæm-35 ning, indtil en klar opløsning opnåedes. Opløsningen afkøledes derefter til 4°C i et isbad og sattes til blandet anhydrid-opløsningen ved -15°C. Kølebadet fjernedes, og blandingen omrørtes i 1,5 time. Tetrahydro-furanen fjernedes deroå ved reduceret tryk, og det vandige koncentrat

DK 164225 B

22 fase-adskiltes med ethylacetat. Den vandige fase indstilledes til pH-værdi 2-,O med 42% phosphorsyre, hvad der forårsagede, at uopløseligt materiale udskiltes. Faststoffet fjernedes ved filtrering. Filtratets vandige fase fraskiltes og ekstraheredes 2 gange mere med ethylacetat.

5 De kombinerede organiske ekstrakter udvaskedes 2 gange med vand, tørredes over natriumsulfat, og opløsningsmidlet fjernedes ved reduceret tryk efterladende en viskos olie-remanens. Olien tritureredes med "Skelly-solve B", som indeholdt en lille mængde diethylether, under frembringelse af et faststof. Dette faste produkt samledes ved filtrering, 10 udvaskedes med "Skellysolve B" og luft-tørredes. En TLC (silica-gel; opløsningsmiddel, 97:3 acetone-eddikesyre) af produktet viste, at materialet var en blanding af det ønskede produkt og af sidekædesyren.

Dette materiale omrørtes derefter med 100 ml vandfri diethylether i 1 time. Det uopløselige faststof samledes ved filtrering og luft-tørredes 15 til dannelse af 0,95 g (16,4%) 7-[D-2-t-butoxycarbonylamino-(3'-methyl-4'-hydroxyphenyl)acetami do]-3-(1,2,3-tri azol-5-ylthi omethyl)-3-cephem-4-carboxylsyre. En TLC (silieagel; opløsningsmiddel 97:3 acetone-eddikesyre) viste, at denne prøve kun indeholdt en spormængde af sidekædesyren. Det infrarøde spektrum var konsistent for det ønskede produkt.

20 7-rD-2-t-butoc.ycarbon,yl amino-(3/-meth.yl-4/-h.ydroxyphen,yl)acetamido1-3-(1,2,3-tri azol -5-yl thi ometh.yl) -3-cephem-4-carboxyl syre A. Blandet anhydrid 25 En opløsning af 14,06 g (0,05 mol) D-(-)-N-t-butoxycarbonyl-2-(3'-methyl-4'-hydroxyphenyl)glycin i 500 ml tetrahydrofuran afkøledes til -15°C i et is-salt-acetone-bad. Nmethylmorpholin (5,06 g, 0,05 mol) tilsattes efterfulgt af 6,83 g (0,05 mol) isobutylchlorformiat, og reaktionsblandingen omrørtes ved -13 til -17°C i 10 minutter. Et bundfald af 30 N-methylmorpholin,hydrochlorid udskiltes øjeblikkeligt.

B. Si lylester

En blanding af 8,0 g (0,025 mol) 7-amino-3-(l,2,3-triazol-5-ylthio-methyl)-3-cephem-4-carboxylsyre, 7,0 ml (0,05 mol) triethylamin, 6,9 ml 35 (0,0545 mol) Ν,Ν-dimethylanilin, 9,5 ml (0,075 mol) chlortrimethylsilan og 650 ml methylenchlorid opvarmedes under tilbagesvaling i 3 timer. Yderligere 1,6 ml chlortrimethylsilan tilsattes efter den første times tilbagesvaling. Den uklare opløsning afkøledes, og methylenchloridet

DK 164225 B

23 fjernedes ved reduceret tryk. Remanensen optoges i 500 ml tetrahydro-furan. ~ C. Kobling 5 Silylesteropløsningen afkøledes til 10-15°C i et isbad og sattes på én gang til blandet anhydrid-opløsningen, som holdtes ved -15°C.

Kølebadet fjernedes, og reaktionsblandingen omrørtes i 2 timer. Derpå tilsattes 500 ml vand, og tetrahydrofuranen fjernedes ved reduceret tryk, hvad der forårsagede, at en gummiagtig olie udskiltes. Olien 10 ekstraheredes i ethyl acetat, og faserne adskiltes. Den vandige fase (pH-værdi= 3,8) faseadskiltes med ethylacetat, hvad der forårsagede, at noget faststof udskiltes. Dette bundfald fjernedes ved filtrering, og filtratets vandige fase fraskiltes. Den vandige opløsning indstilledes til pH-værdi 2,3 med 42% phosphorsyre og ekstraheredes igen med ethyl -15 acetat. De kombinerede ethyl acetatekstrakter udvaskedes 3 gange med vand, tørredes over natriumsulfat, og opløsningsmidlet fjernedes ved reduceret tryk efterladende en viskos olie. Olien omrørtes med 100 ml vandfri diethylether i 1,5 time til frembringelse af et faststof. Produktet filtreredes, udvaskedes sparsomt med vandfri diethylether og 20 luft-tørredes. En TIC (silicagel; opløsningsmiddel, 99:1 acetoneeddikesyre) af produktet viste, at materialet var en blanding af det ønskede produkt, sidekæde-syren og en tredje uidentificeret bestanddel.

Materialet omrørtes igen i 100 ml vandfri diethylether i 1,5 time.

Det uopløselige faststof samledes ved filtrering og luft-tørredes til 25 opnåelse af 10,7 g (74,4%) 7-[D-2-t-butoxycarbonylamino-(3/-methyl-4/-hydroxyphenyl)acetamido]-3-(1,2,3-tri azol-5-ylthi omethyl)-3-cephem-4-carboxylsyre. En TLC (silicagel; opløsningsmiddel 99:1 acetone-eddikesyre) viste, at denne prøve kun indeholdt en spormængde af sidekæde-syren og en tredje uidentificeret bestanddel. Det infrarøde spektrum var 30 konsistent for det ønskede produkt, 7-rD-2-t-butoxycarbonylamino-(3'-methyl-4/-hydrox.yphenyPacetamido1-3-(1,2,3 - tri azol -5-yl thi omethyl) -3-cephem-4-carbox.yl syre 35 A. Blandet anhydrid

En opløsning af 12,2 g (0,0434 mol) D~(~)-N-t-butoxycarbonyl-2-(3'-methyl-4,-hydroxyphenyl)glycin i 425 ml tetrahydrofuran afkøledes til -15°C i i et is-salt-acotone-bad. Nmethylmorpholin (4,35 g, 0,0434 mol)

DK 164225B

24 tilsattes efterfulgt af 5,87 g (0,0434 mol) isobutylchlorformiat, og reaktionsblandingen omrørtes ved -15°C i 10 minutter. Et bundfald af N-methylmorpholin,hydrochlorid udskiltes øjeblikkeligt.

5 B. Si lylester

En blanding af 6,8 g (0,0217 mol) 7-amino-3-(l,2,3-triazol-5-ylthiomethyl)-3-cephem-4-carboxylsyre, 6,02 ml (0,043 mol) triethylamin, 6,0 ml (0,0473 mol) N,N-dimethylanilin, 8,26 ml (0,0651 mol) chlortri-methylsilan og 550 ml methylenchlorid holdtes opvarmet under tilbage-10 svaling i 2 timer. Den uklare opløsning afkøledes, og methylenchloridet fjernedes ved reduceret tryk. Remanensen optoges i 425 ml tetrahydro-furan.

C. Kobling 15 Silylesteropløsningen afkøledes til 10°C i et isbad og sattes på én gang til blandet anhydrid-opløsningen, som holdtes ved -15°C. Kølebadet fjernedes, og reaktionsblandingen omrørtes i 2 timer. Derpå tilsattes 425 ml vand, og blandingen omrørtes i 5 minutter. Tetrahydrofuranen fjernedes ved reduceret tryk, hvad der forårsagede, at en gummi agtig 20 olie udskiltes. Olien ekstraheredes i ethyl acetat, og noget uopløseligt faststof, som udskiltes, fjernedes ved filtrering. Filtratets vandige fase fraskiltes, indstilledes til pH-værdi 2,0 med 42% phosphorsyre og ekstraheredes 2 gange mere med ethyl acetat. De kombinerede ethyl acetatekstrakter udvaskedes 3 gange med vand, tørredes over natriumsulfat, og 25 opløsningsmidlet fjernedes ved reduceret tryk efterladende en viskos olie. Olien ooløstes i 30 ml acetone, og denne opløsning sattes dråbevis til et grundigt omrørt 300 ml volumen vandfri diethyl ether. Blandingen omrørtes ved stuetemperatur i 2,5 timer. Det uopløselige faststof, som udskiltes, samledes ved filtrering og luft-tørredes. En TLC (silicagel, 30 opløsningsmiddel 99:1 acetone-eddikesyre) af produktet viste, at materialet var en blanding af det ønskede produkt, sidekædesyren og en tredje uidentificeret bestanddel. Faststoffet omrørtes igen i 80 ml vandfri diethylether i 1 time. Det uopløselige materiale samledes ved filtrering, udvaskedes sparsomt med vandfri diethylether og luft-35 tørredes til dannelse af 5,8 g (46,5%) 7-[D-2-t-butoxycarbonylamino-(3'-methyl-4'-hydroxyphenyl)acetami do]-3-(1,23-tri azol-5-ylthi omethyl)-3-cephem-4carboxylsyre. En TLC (silicagel; opløsningsmiddel 99:1 acetoneeddikesyre) viste, at denne prøve kun indeholdt et soor af sidekæde-

DK 164225 B

25 syren og en tredje uidentificeret bestanddel. Det infrarøde spektrum var konsistent for det ønskede produkt.

7-rD-2-amino-(3/-methyl-4/-hydroxyphenyl)acetamidol-3-(l,2,3-triazol-5-5 ylthi omethyl)-3-cephem-4-carboxylsyre 7-[D-2-t-butoxycarbony1 ami no-(3'-methyl - 4' -hydroxypheny1)acet-amido]-3-(1,2,3-triazol-5-ylthiomethyl)-3-cephem-4-carboxylsyre (0,95 g, 0,002 mol) sattes til 15 ml kold tri fluoreddikesyre, og opløsningen omrørtes i 15 minutter. Trifluoreddikesyreopløsningen hældtes derpå i 10 200 ml 2:1 "Skel lysol ve B"vandfri diethylether, og blandingen afkøledes.

Det udfældede tri fluoreddikesyresalt af produktet, 7-[D-2-amino-(3'-methyl-4'-hydroxyphenyl)acetamido]-3-(1,2,3-triazol-5-ylthiomethyl)-3-cephem-4-carboxylsyre, samledes ved filtrering, udvaskedes med 2:1 "Skellysolve B"-vandfri diethylether og tørredes i vakuum over 15 phosphorpentoxid resulterende i 0,75 g stof.

Saltet (0,75 g) opslæmmedes i 50 ml vand, 25 ml "Amberiite LA-1"-harpiks-acetatform (25% i methyl isobutylketon) og 25 ml methyl isobutyl-keton og omrørtes ved stuetemperatur i 2 timer.

Faserne adskiltes, og methyl isobutylketonlaget ekstraheredes én 20 gang med vand. De vandige faser kombineredes og ekstraheredes derefter 8 gange med diethylether. Den vandige fase filtreredes, og opløsningsmidlet fjernedes ved reduceret tryk. Remanensen tritureredes med methyl isobutylketon til dannelse af et faststof. Stoffet samledes ved j filtrering, udvaskedes med methyl isobutylketon og acetone og tørredes 25 ved 65°C i vakuum over phosphorpentoxid til dannelse af 0,36 g (59,0%) 7-[D-2-amino-(3'-methyl-4'-hydroxyphenyl)acetamido]-3-(1,2,3-tri azol-5-ylthiomethyl)-3-cephem-4-carboxylsyre; dekomponering >150°C. Det infrarøde og det kernemagnetiske resonansspektrum var konsistente for det ønskede produkt.

30 "LA-r-harpiks er en blanding af sekundære aminer, hvori hver enkelt sekundær amin har den almene formel R1 CH3(CH2)lOCH2NHC " r2 35 R3 hvori enhver af R1, R2 og R3 er et monovalent aliphatisk carbonhydrid-radikal, hvori R1, R2 og R3 tilsammen indeholder fra 11 til 14 carbon-

DK 164225B

26 atomer. Denne særlige blanding af sekundære aminer, som der undertiden heri henvises til som "Flydende aminblanding nr. II", er en klar ravgul væske med de følgende fysiske egenskaber: Viskocitet ved 25°C på 70 3 centipoise; massefylde ved 20°C på 0,826 g/cm ; brydningsindeks ved 25°C 5 på 1,4554; desti 11ationsinterval ved 10 mm Hg, op til 170°C - 0,5%, 170-220°C - 3%, 220-230°C - 90% og over 230°C - 6,5%.

7-[D-2-ami no-(3'-methyl-4'-hydroxyphenyl)acetami do]-3-(1,2,3-triazol-5-ylthiomethyl)-3-cephem-4-carboxylsyre kaldes også BL-S638.

10 2-(3'-methoxy-4'-hydroxyphenyl)qlvein

En opløsning af 59,2 g (0,6 mol) 75% glyoxylsyre i 100 ml vand sattes til en opslæmning af 62,07 g (0,5 mol) 2-methoxyphenol og 140 ml koncentreret ammoniumhydroxid i 400 ml vand ved stuetemperatur. Blandingens temperatur steg til 35°C. Blandingen omrørtes ved stuetemperatur i 15 65 timer. Produktet, som udkrystalliserede, samledes ved filtrering, udvaskedes med vand, derpå acetone og tørredes i vakuum over phosphor-pentoxid til dannelse af 57,4 g (58,2%) 2-(3'-methoxy-4'-hydroxyphenyl)-glycin; dekomponering 218-220°C (litteratur 240°C). Det infrarøde og det kernemagnetiske resonansspektrum var konsistente for det ønskede 20 produkt.

Analyse for CgHjjNO^:

Beregnet: C 54,82; H 5,62; N 7,10

Fundet: C 53,77; H 5,91; N 6,97; H20, 1,13

Fundet, korrigeret for 1,13% HgO: C 54,38; H 5,85; N 7,05.

25 Reference: B. Block, Z. Physiol. Chem., 98, 226 (1917).

Opspaltning af 2-(3/-methox.v-4/-hydroxyphenyl)ql.ycin A. Methyl-2-(3'-methoxy-4'-hydroxyphenyl)glycinat 30 En afkølet opslæmning af 94 g (0,476 mol) 2-(3'-methoxy-4'- hydroxyphenyl)glycin i 500 ml absolut methanol gennemstrømmedes med stor hastighed med HCl-damp i 20 minutter. Først opnåedes en klar opløsning, og derpå udskiltes krystallinsk produkt i større mængde. Efter 20 timers forløb filtreredes methylester-hydrochloridet, hvorpå det udvaskedes 35 sparsomt med methanol; 99,6 g efter luft-tørring. En afkølet opløsning af hydrochloridet i 800 ml vand indstilledes til pH-værdi 8 (NaOH) resulterende i et krystallinsk bundfald af esteren som fri base; 81,3 g.

IR- og NMR-spektrene var konsistente.

27

DK 164225 B

Analyse for Cjø^NO^:

Beregnet: C 56,86; H 6,20; N 6,63.

Fundet: C 56,46; H 6,28; N 6,55; Wfl 0,59.

5 B. D- (-) -2- (37 -methox.y-4' -hydroxyphenyl )glycin

En blanding af 50 g (0,237 mol) methyl-2-(3'-methoxy-4,-(hydroxy-phenyl)glycinat, 19 ml (0,333 mol) eddikesyre og 1 liter i-PrOH (isopropyl alcohol) opvarmedes til kogning resulterende i en delvis opløsning. Dibenzoyl-d-vinsyre,monohydrat (89,2 g, 0,237 mol) tilsattes under 10 god omrøring, og derpå opvarmedes blandingen under tilbagesvaling. Snart begyndte saltet at udkrystallisere. Varmen afbrødes, og kolben henstod til langsom afkøling til stuetemperatur. Efter afkøling i et isbad samledes bundfaldet ved filtrering. Filtratet koncentreredes til omkring 1/3 af dets oprindelige volumen, resulterende i en lille anden portion 15 salt; total udbytte af begge portioner 54,1 g efter luft-tørring (fast A, se herunder).

Filtratet koncentreredes til fjernelse af opløsningsmiddel. Den viskose remanens kombineredes med 300 ml IN HC1, og blandingen ekstra-heredes med 400 ml CHClg. CHClg-fasen ekstraheredes 2 gange med 100 ml 20 portioner af IN HC1. De kombinerede HClekstrakter koncentreredes kortvarigt til fjernelse af rest-CHClg og opvarmedes under tilbagesvaling i 1 time. Opløsningen koncentreredes til et lille volumen, hvad der forårsagede, at aminosyre-HCl-saltet udkrystalliserede. Produktet samledes ved filtrering og omkrystalli seredes fra 50 ml IN HC1. En opløsning af 25 produktet i 200 ml vand indstilledes til pH-værdi 4,5 (NaOH). Blandingen opvarmedes omtrent til kogning og henstod til afkøling til udfældning af D-(-)-2-(3,-methoxy-4'-hydroxyphenyl)glycin som fnugagtige nålelignende krystaller. Efter afkøling natten over samledes produktet ved filtrering, udvaskedes sparsomt med vand og methanol og tørredes ved 30 40°C; 8,7 g, [a]p4-136,5° (C=l, IN HC1). IR- og NMR-spektrene var fuldt konsistente.

Analyse for CgHjjNO^jHgO:

Beregnet; C 50,23; H 6,09; N 6,51; i^O, 8,37.

Fundet: C 50,43; H 6,23; N 6,51; f^O, 8,95.

C. L-(+)-2-(3'-methox.y-4'-hydroxyphenyl )glycin

Fast A (se ovenfor) (54,1 g) opstemmedes i 300 ml IN HC1 og 500 ml CHC13 under god omrystning. Saltet opløstes ikke straks i dette system, 35

DK 164225 B

28 derfor fraskiltes CHC13 så godt som muligt, og 300 ml MIBK tilsattes under god omrystning. MIBK-fasen ekstraheredes med yderligere 200 ml IN HC1 i 3 portioner. De kombinerede og filtrerede HC1-ekstrakter koncentreredes kortvarigt til fjernelse af rest-opløsningsmidler og opvarmedes 5 under tilbagesvaling i 1 time til hydrolysering af esteren. Reaktionsblandingen koncentreredes til et lille volumen. Efter afkøling i et isbad samledes det krystallinske aminosyre-HCl-salt ved filtrering.

Saltet omkrystalli seredes fra 75 ml IN HC1 og opløstes i 500 ml vand under opvarmning, opløsningen blankfil treredes og indstilledes til pH-10 værdi 4,5 (NaOH), hvad der forårsagede, at zwitterionen udkrystalliserede. Blandingen opvarmedes til kogning, filtreredes og henstod i kulden til udfældning af det krystallinske produkt, L-(+)-2-(3'-methoxy- 4'-hydroxyphenyl)glycin. Produktet samledes ved filtrering, udvaskedes 24 sparsomt med vand og methanol og tørredes ved 40°C; 9,6 g, [a]j-j = 15 +127,2° (C=l, IN HC1). IR- og NMR-spektrene var konsistente.

Analyse for CgHjjNO^HgO:

Beregnet: C 50,23; H 6,09; N 6,51; H20, 8,37.

Fundet: C 50,53; H 6,06; N 6,62; H20, 7,46.

20 Natri um-D-N-(2-methoxycarbonyl-1-methylvinyl-α-amino-a-(3'-methoxy-4'-hydroxyphenyl)acetat

Til en omrørt opløsning af 3,02 g (0,078 mol) NaOH i 320 ml methanol sættes 0,08 mol D-(-)-2-(3'-methoxy-4/-hydroxyphenyl)glycin, og den resulterende blanding opvarmes under tilbagesvaling, medens en 25 opløsning af 9,6 ml (0,088 mol) methyl-acetoacetat i 80 ml methanol tilsættes i løbet af en 30 minutters periode. Efter yderligere 30 minutters tilbagesvaling afdestilleres methanolen, medens toluen tilsættes med samme hastighed, således at næsten det samme indholdsvolumen opretholdes. Når indholdstemperaturen når 100°C afkøles opslæmningen i 30 isvand i 4 timer, filtreres, udvaskes godt med toluen, luft-tørres og vakuum-tørres over P205 til konstant vægt til dannelse af fast natrium-D-N- (2-methoxycarbonyl -1-methyl vinyl ) -a-ami no-a- (3' -methoxy-4' -hydroxyphenyl) acetat.

35 D-(-)-2-(3'-methoxy-4'-hydroxyphenyl)g1.ycylchlorid,hydrochlorid fremstilles i en høj grad af renhed og højt udbytte ved den følgende fremgangsmåde:

Omkring 0,06 mol D-(-)-2-(3'-methoxy-4'-hydroxyphenyl)glycin

DK 164225B

29 opslæmmes i 100 ml dioxan. Opslæmningen omrøres, og C0C12 (phosgen) sendesind, medens opslæmningstemperaturen holdes ved 50 - 58°C. C0C12 sendes ind i en totaltid på 3,5 timer. En gul opløsning opnås. Opløsningen renses med nitrogen til uddrivning af det overskydende COClg, 5 HCl-gas bobles gennem opløsningen i 2,5 timer. Opløsningen omrøres, og en lille mængde fortyndes med noget ether til opnåelse af nogle krystaller, som sættes til hele portionen som korn. Opløsningen omrøres ved 20-25°C i 16 timer. Den resulterende opslæmning af krystallinsk D-(-)-2-(3'-methoxy-4'-hydroxyphenyl)glycylchlorid,hydrochlorid filtreres til 10 samling af produktet. Filterkagen udvaskes med dioxan og methylen-chlorid, og tørres derefter i en vakuum-exsiccator over P205 til dannelse af omkring 7 g D-(-)-2-(3'-methoxy-4'hydroxyphenyl)glycyl-chlorid,hydrochlorid.

15 D-(-)-N-(t-butoxycarbonyl)-2-(3/-methoxy-4'-hydroxyphenylIglycin

En blanding af 8,6 g (0,04 mol) D-(-)-2-(3'-methoxy-4'-hydroxy-phenyl)glycin, 3,2 g (0,08 mol) magnesiumoxid, 9,7 g (0,068 mol) t-butoxycarbonylazid og 240 ml 1:1 dioxan-vand omrørtes og holdtes opvarmet ved 45-50°C i 20 timer under en nitrogenatmosfære. Den afkølede 20 reaktionsblanding fortyndedes med 240 ml isvand, filtreredes og ekstra-heredes én gang med ethyl acetat. Den surgjorte (pH-værdi 2) vandige fase ekstraheredes 5 gange med ethyl acetat. De kombinerede og tørrede (Na2S04) ethyl acetatekstrakter koncentreredes til fjernelse af opløsningsmiddel ved reduceret tryk resulterende i produktet som en viskos 25 olie; 6,3 g.

Opspaltning af 2-(3-methoxy-4-h.ydrox.yphen,yl Iglycin A. (-)-2-(3-methoxy-4-hydrox.yphen.ylIglycin,d-10-camphorsulfonat 30 En blanding af 5,0 g 2-(3-methoxy-4-hydroxyphenyl)glycin, 50 ml iseddikesyre og 2,5 ml H20 opvarmedes til dannelse af en opløsning. Den varme opløsning blankfil treredes og henstod ved stuetemperatur i 18 timer til udkrystallisering resulterende i 1,78 g af saltet. Omkrystallisation fra 15 ml eddikesyre efterfulgt af tørring ved 40°C gav 35 1,54 g (-)-2-(3-methoxy-4-hydroxyphenyl)-glycin,d-10-camphorsulfonat; delvis dekomponering 164-170°CC, derpå dekomponering 175-180°C, M[j4- -35,3" (C-l, H20).

De kombinerede eddikesyrefiltrater koncentreredes til et lille

DK 164225 B

30 volumen ved reduceret tryk. Det krystallinske faststof frafiltreredes og omkrystalli seredes fra 15 ml eddikesyre resulterende i, efter tørring ved 40°C,en anden portion produkt; 2,48 g, dekomponering 164-170°C, [«]“- -32,2» (C=l, H20).

5 B. (-)-2-(3-methoxy-4-hydroxyphen.yl)glycin

En 1,2 g portion af den første portion (-)-2-(3-methoxy-4-hydroxy-phenyl)glycin,d-10-camphorsulfonat opløstes i 12 ml vand, og opløsningen indstilledes til pH-værdi 4,5 med fortyndet vandig NH^OH. Blandingen 10 opvarmedes til dannelse af en opløsning. Opløsningen henstod til afkøling først ved stuetemperatur, derpå ved 5°C til udkrystallisering af aminosyren. Produktet frafiltreredes, udvaskedes sparsomt med nogle få dråber vand og methanol og tørredes ved 40°C resulterende i 0,37 g (-)- 2-(3-methoxy-4-hydroxyphenyl)glycin; dekomponering 210-212°C, 15 [a]p4= -137,6° (C=l, IN HC1).

Analyse for Cg HnN04:

Beregnet: C 54,82; H 5,62; N 7,10.

Fundet: C 54,37; H 5,90; N 7,21; HgO, 0,71.

20 C. (-)-2-(3-methoxy-4-h,ydrox.yphenyl)gl.ycin

En blanding af 200 g 2-(3-methoxy-4-hydroxyphenyl)-glycin,hydrat, 260 g d-10-camphorsulfonsyre, 2 1 iseddikesyre og 100 ml vand opvarmedes til dannelse af en opløsning og blankfiltreredes. Opløsningen podedes med krystal korn og henstod ved stuetemperatur i 3 dage til udkrystalli-25 sering af saltet; 76 g. Saltet omkrystalliseredes fra 400 ml eddikesyre; 71,0 g.

Filtratet fra den første portion salt koncentreredes til omkring halvdelen af dets oprindelige volumen, og produktet henstod til udkrystallisering; 118,5 g. Produktet omkrystalliseredes fra 500 ml eddike-30 syre resulterende i, efter luft-tørring, 105,2 g (-)-2-(3-methoxy-4-hydroxyph enyl)glycin,d-10-camphorsulfonat.

Koncentreret NH^OH sattes dråbevis under god omrøring til en opløsning af 71,0 g af camphorsulfonatsaltet i 150 ml vand plus 150 ml methanol. Blandingen, som snart blev meget tyktflydende, opvarmedes til 35 50°C, og den dråbevise tilsætning af NH^OH fortsattes til pH-værdi 4,5.

Efter isafkøling frafiltreredes produktet, udvaskedes sparsomt med kold 1:1 MeOH-vand og kold methanol resulterende i, efter tørring i en vakuumovn ved 40°C,34,5 g (-)-2-(3-methoxy-4-hydroxyphenyl)glycin;

DK 164225 B

31 dekomponer!ng 204-206°C, [a]jp= -132,4° (Ol, IN HC1).

Analyse for CgHjjNO^.HgO:

Beregnet: C 50,23; H 6,09; N 6,51.

Fundet: C 49,96; H 6,12; N 6,61.

5 (-)-2-(3,4-dihydroxyphenyl )gl.ycin

En blanding af 9,2 g (-)-2-(3-methoxy-4-hydroxyphenyl)glycin og 50 ml 48% hydrogenbromidsyre opvarmedes under tilbagesvaling i 4 timer. Opløsningen afkøledes i is resulterende i et krystallinsk bundfald, som 10 samledes ved filtrering og tørredes ved 40°C; udbytte 1,8 g, smeltepunkt 248-250°C dekomponering med forudgående mørkfarvning over ca. 200°C,

Wf- -42,1· (Ol, H20).

Analyse for CgHgN04,HBr,l/2 H20:

Beregnet: C 35,18; H 4,06; N 5,13; HgO, 3,30 15 Fundet: C 35,26; H 4,01, N 5,32; HgO, 3,20.

Det konkluderedes, at dette stof var en 3:1 sammensætning af (-)-og (+)-isomere af 2-(3,4-dihydroxyphenyl)glycin,HBr.

Filtratet koncentreredes til et lille volumen. Den krystallinske masse, som udskiltes, samledes ved filtrering (filtratet tilbage-20 holdtes). Råproduktet omkrystal1 i seredes fra 20 ml eddikesyre. Produktet udvaskedes på filteret med methyl isobutylketon og vandfri ether til dannelse af 3,0 g hvidt krystallinsk (-}-2-(3,4-dihydroxyphenyl)-glycin,hydrobromid; smeltepunkt 106-109°C, [α]^= -85,0° (Ol, H^O).

Analyse for CgHgN04,HBr,H20: 25 Beregnet: C 34,06; H 4,29; N 4,97; HgO, 6,37.

Fundet: C 43,07; H 4,17; N 4,99; HgO, 6,80.

Eddikesyre-filtratet koncentreredes til fjernelse af opløsningsmiddel. Til den olieagtige remanens sattes 75 ml methyl isobutylketon, og produktet henstod til udkrystallisering først ved stuetemperatur og 30 derpå i et isbad. Produktet frafiltreredes, udvaskedes med methyl isobutyl keton og vandfri ether til dannelse af yderligere 1,5 g hvidt krystallinsk (-)-2-(3,4-dihydroxyphenylJglycin,hydrobromid; smeltepunkt 106-108°C, [<*3p2= -84,5° (Ol, HgO).

Analyse for CgHgN04,HBr,H20: 35 Beregnet: C 34,06; G 4,29; N 4,97; H20, 6,39.

Fundet: C 33,79; H 4,31; N 4,94; H20, 7,08.

Filtratet fra det rå HBr-salt koncentreredes til fjernelse af opløsningsmiddel. Den krystallinske remanens opløstes i 8 ml vand, og

DK 164225 B

32 opløsningen indstilledes til pH-værdi 4,5 med koncentreret vandig NH^OH, hvad der forårsagede, at zwitterionen udkrystalli serede. Blandin-gen fortyndedes med en lige mængde methanol og afkøledes i is i 1 1/2 time. Produktet, (-)-2-(3,4-dihydrophenyl)glycin, frafiltreredes, udvaskedes 5 sparsomt med 1:1 Me0H-H20 og MeOH, og tørredes i 2 timer ved 40°C; udbytte 0,536 g, utydelig dekomponering 234-238°C med forudgående mørkfarvning over ca. 220°C, [a]p2= -158,2° (C=l, IN HC1).

Analyse for CgHgNO^:

Beregnet: C 52,46; H 4,95; N 7,65.

10 Fundet: C 51,82; H 5,03; N 7,75.

7-rD-tt-amino-(3/-methox.y-4/-h.ydroxyphenyl)acetamidol-3-(l,2 3-triazol-4-ylthi omethyl)-3-cephem-4-carboxylsyre

En blanding af 4,27 g (0,01365 mol) 7-amino-3-(l,2,3-triazol-4-15 ylthiomethyl)-3-cephem-4-carboxylsyre, 6,64 g (0,041 mol) 1,1,1,3,3,3-hexamethyldisilazan og 200 ml methylenchlorid opvarmedes under tilbagesvaling i 4 timer til dannelse af en klar opløsning. Efter henstand natten over ved stuetemperatur fjernedes opløsningsmidlet ved reduceret tryk. Remanensen opløstes i 150 ml tetrahydrofuran, opløsningen afkøle-20 des til 0 til 5°C før anvendelse.

N-methylmorpholin (3,06 ml, 0,0273 mol) og 3,48 ml (0,0273 mol) isobutylchlorformiat sattes til en opløsning af 8,1 g (0,0273 mol) D-(-)-N-(t-butoxycarbonyl)-2-(3,-methoxy-4'-hydroxyphenyl)glycin i 300 ml tetrahydrofuran ved -15°C. Blandingen omrørtes ved -15°C i 6 minutter 25 til dannelse af det blandede anhydrid.

Tetrahydrofuranopløsningen af silylesteren ved 0 til 5°C sattes til det blandede anhydrid ved -15°C. Efter 10 minutters forløb fjernedes kølebadet, og blandingen omrørtes endnu 2,5 timer. Vand (250 ml) sattes til reaktionsblandingen, og blandingen koncentreredes ved reduceret tryk 30 til fjernelse af det meste af tetrahydrofuranen. Det vandige koncentrat gjordes sur med 42% phosphorsyre og ekstraheredes 3 gange med ethyl-acetat. Blandingen filtreredes i løbet af den første ekstraktion til fjernelse af en lille mængde uopløselig stof. De kombinerede ethyl-acetatekstrakter udvaskedes én gang med vand, tørredes (Na2S04) og 35 koncentreredes til tørhed. Remanensen tritureredes med vandfri ether til dannelse af 2,8 g faststof.

En opløsning af faststoffet (2,8 g) og 50 ml 97% myresyre omrørtes ved stuetemperatur i 2 timer. Myresyren afdestilieredes ved reduceret

DK 164225 B

33 tryk. Remanensen azeotroperedes med toluen til fuldstændig fjernelse af myresyre. Remanensen triturededes med vådt ethyl acetat resulterende i (efter tørring i 2 timer i vakuum ved 65°C over phosphorpentoxid) 1,42 g 7-[D-a-amino-(3'-methoxy-4'-hydroxyphenyl)acetamido]-3-(l,2,3-triazol-4-5 ylthiomethyl)-3-cephem-4-carboxylsyre; dekomponering gradvist over omkring 165°C. IR- og NMR-spektrene var konsistente. 7-[D-a-amino-(3'-methoxy-4'-hydroxyphenyl)acetamido]-3-(l,2,3-triazol-4-ylthiomethyl)-3-cephem-4-carboxylsyre kaldes også BL-S689.

10 Forbindelserne ifølge den foreliggende opfindelse fremstilles ved 2 2 omsætning af et aldehyd, som har strukturen R -CHO (hvori R har den tidligere anførte betydning) med en cephalosporin, som har den almene formel HO~Z VcH-C-NH—1-

W IW2 β-n\J-ch2-s-e3 II

0 COOR1 20 1 3 hvori A, R og R har de tidligere anførte betydninger. I de foretrukne udførelsesformer har carbonatomet, som er forbundet til a-aminogruppen, D-konfiguration. De sidstnævnte forbindelser med formel II fremstilles ved de sædvanlige, og ofte specifikke, fremgangsmåder, som er anført i 25 de følgende patentskrifter USA patentskrifter nr. 3.641.021, 3.899.394, 3.855.213 og 3.867.380, sydafrikansk patentskrift nr. 73/4055, belgiske patentskrifter nr. 776.222 (Farmdoc 38983T) og 810.477 (Farmdoc 57268V), vesttyske patentskrifter nr. 2.364.192 (Farmdoc 49048V) og 2.500.386 (Farmdoc 49692W), belgisk patentskrift nr. 814.727 (Farmdoc 82562V) og 30 vesttysk patentskrift nr. 2.404.592 (Farmdoc 57268V).

En alternativ fremgangsmåde til fremstilling af de som udgangsmaterialer heri anvendte amfotere cephalosporiner består i anvendelse af den passende p-hydroxy-2-phenylglycin (som kan indeholde en yderligere substituent, og hvori α-aminogruppen er passende beskyttet gennem acylering 35 på en konventionel måde) i stedet for sidekæde-syren, f.eks. 2-phenyl-glycin eller tetrazol-eddikesyre, som hidtil er blevet anvendt som i USA patentskrifterne nr. 3.813.388, 3.759.904 og 3.850.916 til fremstilling af enten 3-thiolerede cephalosporiner eller 7-substituerede cephalo-

DK 164225 B

34 sporansyrer, i hvilke 3-acetoxygruppen derpå erstattes af den ønskede thiol.~Se f.eks. USA patentskrifterne nr. 3.757.012 og 3.757.015.

Reference herunder til BL-S640 henviser til 7-[D-a-amino-a-(p-hydroxyphenyl)acetamido]-3-(1,2,3-triazol-5-ylthiomethyl)3-cephem-4-5 carboxylsyre, som også kaldes cefatrizin. Reference til propylen- glycolatet deraf henviser til det ovenfor beskrevne 1,2-propylenglycol-solvat. Reference til BL-S643 henviser til 7-[D-ft-amino-a-(p,-hydroxy-phenyl)acetamido]-3-(2-methyl-1,3,4-thi adi azol-5-yl-thi omethyl)-3-cephem-4-carboxylsyre, som også kendes som cefaparol.

10 De følgende eksempler er anført til belysning af, men ikke til begrænsning af den foreliggende opfindelse, idet de foretrukne udføre!sesformer er beskrevet.

35

DK 164225 B

Eksempel 1 —0-4—f 5 '- rt-1 N--i D, L ->XC^-H j * i ch2-s-v / H 0 iogNa f 10

Til 0,34 ml furfural (2-furfuraldehyd), opløst i 10 ml vand, sattes under omrøring 2 g (1 ækvivalent) af methanol solvatet af 7-[D-a-amino-a-(p-hydroxyphenyl)acetamido]-3-(l,2,3triazol-5-ylthiomethyl)-3-cephem-4-carboxylsyre. 4N natriumhydroxid tilsattes under hurtig omrøring til 15 opretholdelse af pH-værdien på 6,2 til 6,5. Den dannede opløsning hen-stod ved stuetemperatur i 1 time og lyofiliseredes til dannelse af pro-duktetsnatriumsalt som et faststof.

Stoffets egenskaber: IR-NMR konsistent for produkt.

20 β-lactam intakt.

Triazol intakt.

Eksempel 2

Fremgangsmåden i eksempel 1 gentages med den undtagelse, at det 25 deri anvendte methanol sol vat-udgangsmateriale erstattes med en ækvimolær mængde 7-[D-a-amino-a-(p-hydroxyphenyl)acetamido]-3-cephem-4-carboxyl-syre,sesquihydrat. Der fremstilles natriumsalt, som er identisk med det i eksempel 1 opnåede. ' ·. 1 35

DK 164225 B

36

Eksempel 3

Fremstilling af BL-S1052, natriumsaltet af reaktionsproduktet af 2-furfuraldehyd og BL-S640 Formel, BL-SI052 5

f /S. I-K

H\ κΝ-1 I . h2°

10 /C X-N^^i-CHgS-L N

HX (Γ T

zrr^ COONa

_O

15

Fremgangsmåde 1) 2 7/10 ml (3,13 g, 1,1 ækvivalent) 2-furfuraldehyd opløses i 50 ml vand ved 20 til 30°C under hurtig omrøring.

2) 15 g BL-S640-methanoladdukt tilsættes over et 10 minutters 20 interval med samtidig tilsætning af 40% natriumhydroxid indtil pH-værdi 5,5-6,0 (pH-værdien må ikke stige over 6,5). En lysorange farvet opløsning eller næsten opløsning opnås.

3) Opløsningen filtreres gennem passende filtre til fjernelse af partikler, pyrogener og bakterier. Trinnene 1 og 2 tilsammen bør fuld- 25 føres inden for 2 timer.

4) Der lyofiliseres i 48 timer, hvorpå faststofferne henstår under vakuum ved 50-56°C i 24 timer. Det resulterende faststof er BL-S1052 (BL-S-1052 kan også opnås fra opløsningen i trin 3 ved udfældning fra 15 til 20 vol umi na steril isopropanol).

30

Egenskaber af BL-S1052 1) Bio-prøve * 775-800 β$/π\9.

2) IR-NMR = a) Veldefineret, konsistent.

b) Ved omtrent 60 mg/ml i D20 fremtræder 2 35 produkter, 40% cyclisk addukt, 60% ikke-cyclisk addukt.

c) Ø-lactam og 3-triazol er intakte.

3) Opløselighed = større end 400 mg/ml.

DK 164225 B

37 4) ' Papirstrimmel-chromatografi = en enkelt zone ved for BL-S640.

(Koncentration = 0,2 mg/ml).

5) Væske-chromatografi (koncentration = 1 mg/ml).

5 Tid i % fri BL-S640 timer tilstede 0 69,2 1 74,2 10 2 94,5 6) Analytiske data

Fundet På tør basis Teoretisk % H20 KF 5,35 15 % C 47,45 50,2 49,2 % H 3,72 3,4 3,39 % N 14,45 15,29 14,95 % S 10,34 10,92 11,4 % Aske som Nn 2,18 2,51 4,1 20 —i 38

DK 164225 B

— VD (Λ ΙΛ LTi tn CUOOHOJ H ΙΛ LA in i' *- ·>. r »\ O O O O OJOCJ^OHCJOHOCJlTNlPiinOCM Η tA OJ CM OJ tn CO i—i H r-i I A A Λ pq <—i O' P- ___;_

4J I (0 I

U 1 Γ5

+j t H

m i S

Λ I O I W I in i

c ! O VO t n m LTV LA

.¾ i -=f o o h cm oj la in in tn 3 coooocMO^-oooowoHOCJinininoaj c i m oj <M cm tn

i ιό Η Η H

-Hl pq A A A

£ I

o i

U 1 4J I Ai i <D I CU I

m i-- i .* I U) I •Η I •P I O 1 ri l λ i t>- σ\ o tn < θ',

•Hl ^J-NNtOVOC^HHIAS^OinAHtONON

u 1 coommoootnHt-C'-HOH.d-oininin into iniAvovo mininvo cntncninco ovowto cr\nnc^<jiCnHO\HwnHC?iHO\ain(j>cr\ * * * * rn tn -=f tn oj ίη·=ΐ'·=ι-·ρ··=ί-.=}--=ί-·Ρ--=3··=ί·-:3--=2··=ί"

I 1 I 1 I I I I I I I I I I I I I I I

ooooooooooooooooooo

HHHi—IHHHHHHHr-iiHiHiHr—IHHH

£ to •H £ i ρω d Jh Φ wi ω tn tn o; ω

Pi .c ti) r< \ Ι<Λ i ·. i tu 0 1 + 1' 3(1 \(l Λ* Ί J i'l l,‘ id w -.1 V, >-l Η -p ·ι-ι Φ a> m to ω cd Q) £ o )< X <u p H d d \ i o o ω a> ω -ri t: to in pq pq “S -ri .c; -h -ri r-ι -ri c to cd d d p ω + Up C il -.-i c. -ri <u o o o O no to to to to to a> ι-i O o .o ut W) o d d d POPPPPP-P fi £ d t)0 P u O O o P>3<U OJ a)(U(UC-H-HPPP<P-iPi d iH Η .H (UCCP^P·ιPιί-ιP^Φr^HQ)ω·r^OQJ£OOa c ppppp O O G C £ £ < ii.ddddd*ooCLiPi ....

P r-| » i * C -P -P -P

• +3 · · · · · cd · · · · P^ Ph to tu c C C

tocococococococoMM-^ ^ΡΟΟϋΟ-,εοωωω 39

DK 164225 B

* 45% AAB + 5% serum + 50% substrat, anført ovenfor.

** Fortynding af substratkulturen efter henstand natten over.

1) Justeret for 79,5% indhold af BL-S640. Med andre ord er de numeriske værdier sænkede, dvs. forbedrede. Denne justering 5 gjordes også i de nedenfor anførte testforsøg, eller som alter nativ anvendtes en større vægtmængde til tilvejebringelse af ækvivalent dosering.

Musebi od-koncentrationer efter IM-administrering af 10 mg/kq legemsvægt 10 Blod-koncentrationer /ig/ml)

Antal timer efter administrering

Forbindelse mus 0,25 0,5 1 1,5 BL-S1052 16 15,1 15,1 11,5 7,8 15 BL-S640 32 15,7 13,2 9,5 6,8

Forbindelserne fremstilledes i 0,01% phosphatpuffer. BL-S640 anvendtes som standard for alle forbindelser.

20

Musebi od-koncentrationer efter PQ-administrering af 100 mq/kq legemsvægt

Blod-koncentrationer (/ig/ml)

Antal timer efter administrering

Forbindelse mus 0,5 1 2 3,5 25 -.........................

BL-S1052 16 45,2 48,1 31,9 14,4 BL-S640 32 53,4 45,4 27,2 10,7 1 35

Forbindelserne fremstilledes i Tween®-CMC. BL-S640 anvendtes som standard for alle forbindelser.

DK 164225 B

40

Urinær udvinding efter IM-administrering af 50 og 10 mg/kg til rotter

Procentdel af administreret dosis udvundet timer efter Dosis Antal administrering 5 Forbindelse (mg/kg) rotter 0-6 6-24 0-24 BL-S1052 50 4 40,3 2,1 42,4 10 3 21,7 2,4 24,1 10 BL-S640 50 7 44,5 2,7 47,2 10 7 24,3 1,4 25,7

Forbindelserne fremstilledes i 0,01% phosphatpuffer. BL-S640 15 anvendtes som standard for alle forbindelser.

Papirchromatogrammer opnåedes ved chromatografering på rotteurin, som var samlet mellem 0 og 2 og mellem 2 og 4 timer efter IM-administrering af BL-S1052 og BL-S640, til påvisning abtibiotisk aktive meta-20 boliter, idet der anvendtes "faldende" chromatografi med "system nr. 9" (butylacetat:n-butanol:iseddikesyre:vand = 80:15:40:24). 2 identisk beliggende pletter observeredes i alle tilfælde, undtagen i tilfældet med standarden (som ikke var blevet administreret til rotten og gav en enkelt identisk plet for hver af BL-S640 og BL-S1052). Dette indicerede 25 fuldstændig hydrolyse af derivatet til den oprindelige forbindelse BL-S640 og dens formodede metabolit.

41

DK 164225 B

Eksempel 4

Forbindelserne med formlerne HO^ h O

5 ΗΟ-^Λ-έ-c s \=ΛΑ. J-r-f X [j—? C-H JJ J_CH -S-il χΝ Μ· X COONa 10

_ H O

15 H0/>i-C S

Wi. X if

pJ 0 T H

' COOKa 20 1=/ ? 8 H0/y\v_i—c s

25 V=/,HN^^N-pi I II

C-H CH2-S-kN^N

i 0 I H

q COOIla 1 35 fremstilles ved udskiftning af cefatrizinen i fremgangsmåden i eksempel 3 med en ækvimolær vægtmængde af den tilsvarende amfotere cephalosporin.

42

DK 164225 B

Eksempel 5

Forbindelserne med formlerne H 0 Η<Ηθ^ ^Ν-τ-γΝ r— n-ch, o COONa

H°\ H O

/=\ I II

HCK\ /M—c s 15 li ”"CH? _O COONa CH,

20 \3 H O

/=\ I II

H°\v // C\-C

^ιΓηΊ *f,—r°“5 T“ “^Η ' og 25 O COONa CH,0

3 \_ H O

30 Η0-Οϊ^_Γ/Ί =]-r-3

|"H 0j-N-^LcH2-S-lU?H

COONa

O

fremstilles ved udskiftning af cefatrizinen i fremgangsmåden i eksempel 3 med en ækvimolær vægtmængde af den tilsvarende amfotere cephalosporin.

35

DK 164225B

43

Eksempel 6

Forbindelserne med formlerne

5 H O

hohT>c c c

Jpf

_ i Ch2"s"\n^N

io F\ i I

o COONa CH, 1==/ ^

H0V_ H O

“Oii^ n

f /-Nv^J-CHg-S

F=\ 0 T I

O COONa ΟΚ Ο H- “/

H O

20 RO-/ \-C--C ς

"χι^Ί p-jH

f 0^Nx^L-CHa-s"^N''N og 0 COONa CH- 25 CH-0

_ H O

^JcL-Λ jn?

30 ?-H i-N^jJ-CH -S-k„/N

1 0 T I

—\ COONa CH,

O J

1—/ 35 fremstilles ved udskiftning af cefatrizinen i fremgangsmåden i eksempel 3 med en ækvimolær vægtmængde af den tilsvarende amfotere cephalosporin.

DK 164225 B

44

Eksempel 7

Reaktionsprodukt af BL-S640 og 5-formyl-2-furansu1fonsyre-natriumsalt (BL-S1027)

Formel, BL-S1027 5 ~rv? · / · „

H-N N--r i-N

\ / I J il 10 / o /—1

H i M'SQ^Na COONa H

Fremgangsmåde til fremstilling 15 1) 9,0 g 5-formyl-2-furansulfonsyre-natriumsalt .o (EC-S \- SO,Na)

y T

20 opslæmmes i 75 ml vand ved 60°C.

2) 20 g (1 ækvivalent) BL-S640-l,2-propylenglycoladdukt drysses i under hurtig omrøring over en 10 minutters periode med samtidig justering af pH-værdien til 6-7,0. En opløsning eller næsten opløsning dannes.

25 3) Opløsningen omrøres ved 55-50°C, pH-værdi 5-7,0 i 10 minutter og afkøles derefter til 4-8°C. En lille mængde bundfald dannes.

4) Blandingen omrøres i 15 minutter ved 4-8°C og filtreres derefter.

5) Filtratet sættes over et 5 minutters interval til 1 liter iso-30 propanol under hurtig omrøring. Et tungt bundfald dannes. Blandingen opslæmmes i 5 minutter.

5) Faststofferne fjernes ved filtrering, udvaskes med 200 ml iso-propanol og vakuum-tørres ved 56°C i 24 timer.

7) Faststofferne opløses i 60 ml 4-6°C vand (en lille mængde 35 uopløselige stoffer fjernes ved filtrering). Filtratet lyofiliseres i 24 timer.

Udbytte: 23 g, bio-udbytte = 89%.

DK 164225 B

45

Egenskaber af BL-S1Q27 1) - Bio-prøve som BL-S640 = 724 /ig/mg (teoretisk = 750 Mg/ml).

2) Opløsel ighed = >500 mg/ml.

3) IR-NMR: Konsistent for struktur. Ved 70 mg/ml eksisterer 5 forbindelsen som 80% cyclisk, 20% ikke-cyclisk derivat.

4) Papirstrimmel- og væske-chromatografi indicerer, at produktet ved 0,2 og 1,0 mg/ml vandopløsning eksisterer som fri BL-S640.

5) MIC-bakterielt spektrum er lig med spektret af BL-S640.

6) Orale og intramuskulære rotteblod-koncentrationer er lig med 10 koncentrationen af BL-S640.

7) En opløsning af dette produkt i vand ved en koncentration på 25.000 Mg/ml var stabil (opretholdt fuld bioaktivitet) i mindst 3 dage ved stuetemperatur og i 14 dage ved 6°C (køleskab), hvilket således tilvejebragte en opløsning, som er velegnet for oral brug.

15

Analytiske data

Fundet På tør basis Teoretisk 20 % H20 5,14 C 40,15 42,1 43,0 H 3,10 2,9 2,96 N 12,39 13,05 13,1 S 13,6 14,35 14,95 25 Aske som Na 5,86 6,16 6,8 for di-Na

DK 164225 B

46

Antibiotisk aktivitet i næringssubstrat MIC (/ig/ml)

Natriumsalt* Cepha- 5 Organisme forb. f. eks. 7 BL-S6402 lotin _3

Str. pneumoniae* (10 )** A9585 0,03 0,13 0,03 10 Str. pyogenes (10~3)** A9604 0,03 0,06 0,03 -4 S. aureus Smith (10 ) A9537 0,27 0,5 0,13 15 -4 S. aureus (10 ) + 50% serum A9537 2 4 0,5 S. aureus (10-3) 20 BX1633 A9606 0,5 0,5 0,13 S. aureus (10“2) BX1633 A9606 4 4 0,25 25 S. aureus (10~3)

Meth-Res A15097 4-8 8-16 1-16

Sal. enteritidis (10~4) A9531 0,25 0,25 0,25 30 E. coli Ouhl (10"4) A15119 1 1 16 E. coli (10“4) 35 A9675 4 4 32 47

DK 164225 B

Antibiotisk aktivitet i næringssubstrat MIC (/ig/ml)

Natriumsalt1 Cepha- 5 Organisme forb. f. eks.7 BL-S640^ lotin -4 K. pneumoni ae (10 ) A9977 0,5 0,5 1 -4 10 K. pneumoniae (10 ) A15130 1 2 32

Pr. mirabilis (10~^) A9900 0,5 0,5 1 15 -4

Pr. morganii (10 ) A15153 32 63 >125 -4

Ps. aeruginosa (10 ) 20 A9843A >125 >125 >125 -4

Ser. marcescens (10 ) A20019 >125 >125 >125 25 Ent. cloacae (10~^) A9656 >125 >125 >125

Ent. cloacae (10~^) A9657 1 1 8 30 -4

Ent. cloacae (10 ) A9659 32 63 >125 35

DK 164225 B

48 * 45% AAB + 5% serum + 50% substrat, anført ovenfor.

** Fortynding af substratkulturen efter henstand natten over.

* Disse angivelser omregnedes på basis af, at der kun var 65% BL-S640 i prøven; med andre ord sænkedes de numeriske værdier, dvs. forbedrede.

2 5 BL-S640 = 7-[D-a-amino-a-(p-hydroxyphenyl)acetamido]-3-(l,2,3- triazol-5-ylthiomethyl)-3-cephem-4-carboxylsyre.

Musebi od-koncentrationer efter oral administrering af 100 mg/kq 10 legemsvægt

Bl od-koncentrat i on (/zg/ml) timer efter administrering Forbindelse 0,5 1 2 3,5 15 Forbindelse fra eks. 7 45 36,6 20,4 10,4 BL-S6401 50,5 39 24,5 9,6

Forbindelse 20 fra eks. 7 54,6 53,5 27,6 8,2 BL-S6401 57,4 47 29,5 10,9

Forbindelserne fremstilledes Tween® - carboxymethylcellulose, og 8 mus 25 anvendtes til hver forbindelse.

* BL-S640, 7-[D-ot-amino-a-(p-hydroxyphenyl)acetamido]-3-(1,2,3-tri azol- 5-ylthiomethyl)-3-cephem-4-carboxylsyre anvendtes som en standard. 1 2 3 4 5 6 BL-S1027 er det vandopløselige derivat, som dannes når BL-S640 2 omsættes med furfural-natriumsulfonat. Bio-styrken er 724 /zg/mg af BL- 3 S640-aktivitet.

4

Vandige opløsninger, som indeholder 250, 25 og 10 mg BL-S640- 5 aktivitet/ml som BL-S1027 kan opbevares under afkøling (4°C) eller ved 6 stuetemperatur i mindst 24 timer uden noget betydningsfuldt tab i aktivitet.

DK 164225 B

49

Museblod-koncentrationer efter intramuskulær administrering af 10 mg/kg 1 egernsvægt

Timer efter administrering Forbindelse 0,25 0,5 1 1,5 5 ----......-.............-.......-..................-..........

Forbindelse fra eks. 7 15,1 14,8 11,9 8 14,6 15,4 11,7 8,3 10 BL-S64Q1 16,3 13,5 9,4 6,3 * BL-S640, 7-[D-a-amino-ft-(p-hydroxyphenyl)acetaminodo]-3-(1,2,3-triazol-5-ylthiomethyl)-3-cephem-4-carboxylsyre anvendtes som en 15 standard.

Forbindelserne opløstes i 0,01% phosphatpuffer.

Eksempel 8 20 Reaktionsprodukt af BL-S640 og o-formylphenoxyeddikesyre (BL-S1048)

H O

/Π\ I N

ΗΟ-γ · C

25 Htl N-,-I-H

JL "^COON.t, ' f, ^VOCH COONil 2 30

Fremgangsmåde til fremstilling 1) 375 mg o-formylphenoxyeddikesyre

CHO

35 i

—OCH-COOH

DK 164225 B

50 opslæmmes i 10 ml vand og 4N NaOH tilsættes under hurtig omrøring indtil pH-værtfi 7,0. En opløsning opnås.

2) 2 g (1 ækvivalent) BL-S640, methanoladdukt tilsættes under hurtig omrøring over et 10 minutters interval med samtidig tilsætning af 5 4N NaOH indtil en pH-værdi på 6-6,5. En opløsning eller næsten opløsning opnås.

3) Opløsningen filtreres og henstilles ved omgivende stuetemperatur i 0,5 time.

4) Opløsningen lyofiliseres i 24 timer til dannelse af produktet 10 som et faststof.

Egenskaber af faststof-produkt 1) IR-NMR (70 mg/ml) konsistent for struktur, triazol og j3-lactam intakt.

15 2) Papirstrimmel- og væske-chromatografi ved 0,2 og 1 mg/ml viser, at BL-S640 er fuldstændig fri for aldehydet.

Analytiske data

Fundet På tør basis Teoretisk 20 % vand 4,06 C 47,15 49,2 50,1 H 3,79 3,5 3,86 N 11,44 11,93 13,0 S 8,87 9,27 9,91 25 Aske som Na 5,55 5,78 6,47 3) Opløselighed i vand = >400 mg/ml.

30

DK 164225 B

51 Λ)

CO ΙΟ ΙΛ ΙΛ Lf\ [A

-=f O O Η OJ HLHinm LT\ H OOOCUOAJ.=rOOOJOHOOJUOir\iriOCCJ CO (Λ W W W ΙΛ

i >H t—I H

•J A A Λ

CQ

-Μ d k .-v 4J k w ·—· J3 ^ n ιλ ro in tn 3 Hojooojin oo in in w ^ ·- *. » W 'S. H OOOCMO-=i-^rOH^COHOCJLntAinrHC0

Cn c3 CO m OJ CCJ OJ K\ C 3 I rk rk rk •k .> vJ A Λ iij m c s g 2--— 3 k 4-1 a; <u O CO A A in cn w O O H CO OJlALncn Lf\ ·* to oooojo-d-coooojoHoojintninooj

“ I ΓΑ OJ OJ OJ iA

Tj t-3 Η H . H

q CQ A A A

•Η Λ •Η -Ρ c__;_ <

C'- CP\ O rA < CA

in λ· n mo co σ\ rk rk in c·-- γα o in m h co n oc COOfAlAOOOrAikt'-n-rkOrk-.-Otninin in co in in \o co in in in co OiinocLnoDOvococo cn oc cn (n cn cn η ση h cn tn h cn h ca oj cn on cn <<<;<<<<;’<<<!<«<<<<<<<<< * * * *

ΙΛ ΙΛ 4T 4Γ Λ W fA43-43-.si-.=r.sf.sj-.=*-.=r.=r.3-.=r.=r I I 1 I l I i 1 1 I l I I I 1 1 I I I

OOOOOOOOOOOOOOOOOOO

iH i—Ir—I rk rk i—Irkrkrkrkrkrkrkr—I rk rk rk rk rk -Ί Π —i \ d i. μ

rt) U> <D

i.n ίο (Λ ia ro n k · Xj fA tA I -H w o i- ·» 45 no co co xi o o r: CD 3 v( O Ή rk +5 -H <D C) '0 <1 O) d οι G m ;< x <d -p i-4 λ ej- -ri -ri o o a> <d cd •k c co + pq ro s ή r, ·η ·η η ·η c η ο3 d a C ω k 3 c c -π r. -π <d a o υ O bD w w co co co cu h) O O A d >i) o d d d

£03:3333+5 GSdbOdkOOO

3>>0<D0a><D£-k-k33kkkdiHHr-l QJDakkkkkCDHrkCUCD-kOOGooO C 3 3 3 3 3 O O C "C £ G d

Cu*ddddd*ooQ.Q< ....

k rk . . . S-, 4-5 4J 4->

*4J . · · . · d · * · .kktOOCCC

ro :n ro ro to c,o ro ro fri ro v o, ex c_. co ro m rk

DK 164225 B

52 * 45% MB + 5% serum + 50% substrat, anført ovenfor.

** Fortynding af substratkul turen efter henstand natten over.

1) Justeret for 68% indhold af BL-S640.

2) Justeret for 67% indhold af BL-S640. Hed andre ord er de numeriske 5 værdier sænkede, dvs. forbedrede. Denne justering gjordes også i de nedenfor anførte testforsøg, eller som alternativ anvendtes en større vægtmængde til tilvejebringelse af ækvivalent dosering.

Museblod-koncentrationer efter IM-administrering af 10 mq/kg legemsvægt 10 Bl od-koncentrat! oner /zg/ml)

Antal timer efter administrering

Forbindelse mus 0,25 0,5 1 1,5 BL-S1027 16 15,4 15,1 11,8 8,2 15 BL-S1048 16 14,8 14,1 10,3 7 BL-S640 32 15,7 13,2 9,5 6,8

Forbindelserne fremstilledes i 0,01% phosphatpuffer. BL-S640 20 anvendtes som standard for alle forbindelser.

Museblod-koncentrationer efter IM-administrering af 10 mq/kg legemsvægt

Blod-koncentrationer pg/ml)

Antal timer efter administrering 25 Forbindelse mus 0,5 1 2 3,5 BL-S1027 16 49,8 45,1 24 9,3 BL-S1048 16 46,5 44,6 28,1 12,8 BL-S640 32 53,4 45,4 27,2 10,7 30 ..........................-.........................----------------

Forbindelserne fremstilledes i Tween®-CMC. BL-S640 anvendtes som standard for alle forbindelser.

DK 164225B

53

Urinær udvinding efter IM-administrering af 50 og 10 mg/kg til rotter

Procentdel af administreret dosis udvundet timer efter Dosis Antal administrering 5 Forbindelse (mg/kg) rotter 0-6 6-24 0-24 BL-S1027 50 4 39,6 2,6 42,2 10 4 30,1 1,7 31,8 10 BL-S1048 50 4 32,3 2,4 34,7 10 4 21,7 2 23,7 BL-S640 50 7 44,5 2,7 47,2 10 7 24,3 1,4 25,7 15 --------------------------------------------.........—............

Forbindelserne fremstilledes i 0,01% phosphatpuffer. BL-S640 anvendtes som standard for alle forbindelser.

20 Papirchromatogrammer opnåedes efter chromatografering på rotteurin, som var samlet mellem 0 og 2 og mellem 2 og 4 timer efter IM administrering (ved 10 mg/kg og ved 50 mg/kg) af BL-S1027, 1048 og 640 til påvisningen af antibiotisk aktive metaboliter, idet der anvendtes "faldende" chromatografi med system nr. 9 (butyl acetat:n-25 butanol riseddikesyre:^0=80:15:40:24). To identiske pletter observeredes i alle tilfælde undtagen tilfældet med standarden(ikke fra dyret), som viste en enkelt identisk plet. Dette indicerer fuldstændig hydrolyse af de 2 derivater til den oprindelige forbindelse (BL-S640).

DK 164225 B

54

Eksempel 9

Reaktionsprodukt af BL-S640 og o-benzaldehydsulfonsyre H 0 5 HO-V V-C-C Η K w W < T μκ/κ .-?

CH Λ I

j^^J~S0-Na coONa ^

Fremgangsmåde til fremstilling 1) 870 mg o-benzaldehyd-sulfonsyre-natriumsalt opløstes i 10 ml vand.

15 2) 2 g BL-S640-methanoladdukt (1 ækvivalent) tilsattes under hurtig omrøring over et 10 minutters interval med den samtidige tilsætning af 4N NaOH indtil en pH-værdi på 6,5. En opløsning opnåedes.

3) Opløsningen filtreredes, henstod ved stuetemperatur i 1 time og lyofiliseredes i 24 timer til dannelse af det ønskede produkt som et 20 faststof.

Egenskaber af produkt 1) IR-NMR = veldefineret, konsistent for struktur.

2) Opløselighed Ί vand = >400 mg/ml.

25 3) Analytiske data

Fundet På tør basis Teoretisk % vand 3,49 C 41,88 43,4 43,3 30 H 3,41 3,3 3,25 N 11,53 12,1 12,35 S 13,74 14,25 14,24 aske som Na 5,45 5,63 6,77 35 ----------------------------------------------------------------

DK 164225 B

55 4) Bio-prøve = 700 μg/mg.

5> IR - NMR = a) Intakt Ø-lactam- og triazol-del.

b) Forbindelse fremtræder ikke som om det er et cyclisk addukt.

5 6) Papirstrimmel-chromatografi: Der forekommer at være en dobbeltzone ved R^ for BL-S640.

7) Væske-chromatografi

Tid i timer %fri BL-S640 10 0 64,0 1 70,5 2 88,0 8) Opløselighed i vand = større end 400 mg/ml.

15 9) Nummer, dette produkt kaldes BL-S1055.

DK 164225 B

56

O ΙΛ K\ ΙΛ rO rO

^ΟΟΉ r—T ri lil LO LO LO

VØ Η ** V K K ·. ft\

COOOOOJOOJOJOOCUOHOVOLOrOrOOfO I H C\J LQ LO VO

(-¾ iH

^ W A

Γ1 ε \ &> 3

-P A

(0 SH . ---—-—- 4-1 Vj

W H

Λ S.

3

W

tn tn —.

5 H LO

7* — LO H fO IO

gj .LOOOHlO ro IOLO LO

• w |_p\ ·. *» *»

c OOOOCJOCVJJ-Or-l^f-OHOaJLOlOLOOfO

. i [ ro C\J CVJ CM LO

W Η Η H

ε ά Λ ? m

S4 W

-P

Λί (1) α to Μ ~~ ' ~ " to -Η 4-1 Ο η IS- (Ο Ο ΓΟ <d ΟΛ 1ζ in^J- Nb-LOLO CTiH r4 inisioo lAlOHLO S-CTi

4J COOrOIOOOOrOHiS-C'-HOrH-=i-OlOLOLO

c lololololovol.oiololooniog\locoovovo\.o

ss CTiOtACTiOOiHOrlOi^HOr-I^WOOO

* * * * ιο ιο 4· -ϊ ro cm ro.=}-^--3*^i-.=i-^i-.=j-.=r.=i--=j--=r-3-

I I I I I 1 I I I I I I I I I I I I I

ooooooooooooooooooo ^ r—( i—I i—1 i—( i—I i—t i—I <—I i—1 i—I i—I i—t I—{ i—I i—ί i—ί itT i—r i i to ε •H 3 C d to CO 0 0) bO w ro ro PS to d .3 rO ro i -H to

O * $ 44 IS. LO VO -d Ό d O

0 to -rj O i—l r-r 1-1 -f—I f,J 0 1/) ') U) r.t (!) i! io :-: :-: <n c <· i «ι ·.« ·. i ·. t π o <n o ø ·. i i: ω (ij iu ;·; ·, i jl\ -,1 -i i ,-ι ·, i o m ø ut d dø d 3 d c ·,) d ·,! 0 o o o O bD to to w to to 0 *3 o O jo ci hø o ej d d

E02333344 EEdbD3dOOO

3 >5 0 0 0 0 0 d -d -H 3 3 d d d 3 H r-t r-t ØQ,dddddØHrHØø-r4 0øE000 d 3 3 3 3 3 o o d d E E d

Di.ddddd*000,Cl< ....

d i—I · . · d 44 44 -P

• 44 . · · · · d . . . . d d ω 0 d d d.

æcowcococooocowpjbd^PiCL.PitoutJU

DK 164225 B

57 * 45% AAB + 5% serum + 50% substrat, anført ovenfor.

** Fortynding af substratkulturen efter henstand natten over.

1) Justeret for 65% indhold af BL-640.

Med andre ord er de numeriske værdier sænkede, dvs. forbedrede.

5 Denne justering gjordes også i de nedenfor anførte testforsøg, eller som alternativ anvendtes en større vægtmængde til tilvejebringelse af ækvivalent dosering.

Musebi od-koncentrationer efter IM-administrering af 10 mg/kg legemsvægt 10 Bl od-koncentrati oner Mg/ml) timer efter administrering Forbindelse 0,25 0,5 1 1,5 BL-S10551 10,3 9,9 7,6 6,5 15 BL-S640 12,7 11,5 8 5,7

Forbindelserne fremstilledes i 0,01% phosphatpuffer. Værdier er middel tal let af 3 eksperimenter.

20 1BL-S640 anvendtes som standard.

Museblod-koncentrationer efter PO-administrering af 100 mg/kg legemsvægt

Blod-koncentrationer /jg/ml) 25 timer efter administrering

Forbindelse 0,5 1 2 3,5 BL-S10551 38,2 35,7 22,0 11,3 BL-S640 48,7 42,4 24,0 10,1 30 ............-.........--------------------------------

Forbindelserne fremstilledes i Tween®-CMC. Værdier er middel tallet af 2 eksperimenter.

35 *BL-S640 anvendtes som standard.

DK 164225 B

58

Urinar udvinding efter IM-administrering af 50 og 10 mq/kq til rotter

Procentdel af administreret dosis udvundet timer efter Antal administrering 5 Forbindelse rotter 0-6 6-24 0-24 BL-S10551 3 36,6 2,4 39 BL-S640 4 44,2 3,3 47,5 10

Forbindelserne fremstilledes i 0,01% phosphatpuffer.

*BL-S640 anvendtes som standard.

Papirchromatogrammer opnåedes ved chromatografering på rotteurin, som samledes mellem 0 og 2 og mellem 2 og 4 timer efter IM 15 administrering af BL-S1055 og 640 til påvisningen af antibiotisk aktive metaboliter, idet der anvendtes "faldende" chromatografi med system nr.

9 (butyl acetat:n-butanol:iseddikesyre:H20 * 80:15:40:24). En enkelt identisk plet observeredes i alle tilfælde. Dette indicerer fuldstændig hydrolyse af derivatet til den oprindelige forbindelse (BL-S64Q).

20

DK 164225 B

59

Komparative orale PD^-værdier af BL-S640-derivater i mus PD50 (mg/kg/behandling)* BL-S BL-S BL-S BL-S cepha-5 Organisme 640 1027 1048 1055 lexin E. coli 1,4 -- 3,1 1,8 13 A15119 4,1 -- 1,6 1,6 13 10 P. mirabilis 7,2 6,3 4,7 8,2 66 A9900 9,6 2,7 3,6 8,2 55 15 P. mirabilis 2,4 1,8 2,4 1 50 A9707 K. pneumoniae 1,6 -- 0,7 1,6 43 A9977 20 S. pyogenes 0,4 -- 0,2 0,4 11 A9604 *Mus behandledes ved 1 og 3,5 timer efter påvirkning.

25

Komparative IH PD5Q-værdier af BL-S640-derivater i mus PD50 (mg/kg/behandling)* BL-S BL-S BL-S BL-S cepha-30 Organisme 640 1027 1048 1055 lexin P. mirabilis -- ......

A9900 1,6 1,6 1,6 1,6 50 35 -------------------------------------------------..............

DK 164225 B

60

Eksempel 10 BL-S1027, reaktionsproduktet af BL-S640 og 5-formyl-2-furansulfonms.yre Struktur BL-S1027

O

5 ho/AJ-J

>—pA Ί jn” (D,L·)—---^K^^J-CHgS-Λ^Η , H20

10 ^J> C00Ha H

SO,Na $

Fremstilling af BL-S1027 15 1) 9 g 5-formyl-2-furansulfonsyre-natriumsa1t f0HC-lo^-SO3Na_) 20 omrøres hurtigt i 75 ml vand ved 60-65°C. Det meste af faststofferne opløses.

2} 20 g BL-S640-propylenglycoladdukt drysses i under hurtig omrøring over et 10 minutters interval med samtidig justering af pH-25 værdien til 6,5-7,0 med 40% NaOH (pH-værdien må ikke stige over 7,2). En opløsning eller næsten opløsning dannes.

3) Opløsningen med pH-værdi 6,5-7,0 omrøres ved 55-60°C i 15 minutter og afkøles til 4-8°C. Der omrøres ved 4-8°C i 10 minutter.

4) Der filtreres til fjernelse af en lille mængde uopløselige 30 stoffer.

5) Filtratet + (se note 1) sættes under hurtig omrøring til 1 liter isopropanol. Et amorft bundfald dannes. Der omrøres i 5 minutter.

6) Faststofferne fjernes ved filtrering, udvaskes med 100 ml isopropanol og vakuum-tørres ved 50-56°o C i 18 timer.

35 7) Faststofferne opløses i 60 ml vand og afkøles til 4-6°C. En meget lille mængde bundfald kan dannes og fjernes ved grovfiltrering.

8) Filtratet filtreres ved omgivelsestemperatur gennem passende filtre til fjernelse af partikler, pyrogener og bakterier.

DK 164225B

61

Trinnene 7 og 8 bør fuldføres inden for 4 timer.

9/ Der lyofiliseres sterilt i 48 timer og derpå opvarmes ved 50-56°C under vakuum i 18-24 timer. Udbytte af BL-S1027 er omtrent 22-44 g.

5 + Note 1, trin 5: Hvis 18,7 g BL-S640-methanoladdukt anvendes i stedet for de 20 g BL-S640-propylenglycol-addukt, kan filtratet afkøles til 4-6°C, grovfiltreres og lyofiliseres direkte som beskrevet i trin 8 til 9.

10

Egenskaber af BL-S1027 1) Bio-prøve = 724 /ig/mg.

2) Bio-udbytte = 85 - 95% 3) IR - NMR = a) konsistent for struktur, 15 b) omtrent 80% cyclisk, 20% i kke-cycli sk i D20 ved 70 mg/ml, c) omtrent 0,05 mol isopropanol.

4) Papirstrimmelchromatografi (0,2 mg/ml) = 100% BL-S640, intet tegn på derivat.

20 5) Væske-chromatografi (1 mg/ml i phosphatpuffer med pH-værdi=* 7) 0 time = 85% fri BL-S640 0,5 time = 94% fri BL-S640 1,0 time = 100% fri BL-S640.

6) Vandopløselighed = >400 mg/ml.

25 7) Analytiske data

Fundet På tør basis Teoretisk % H20 KF 5,14 %C 40,15 42,1 43,0 % H 3,10 2,9 2,96 30 % N 12,39 13,05 13,1 % S 13,6 14,33 14,95 % aske som Na 5,86 6,16 6,5 8) Musebiod-koncentrationer = orale og intramuskulære koncentra-35 tioner omtrent lig med koncentrationerne for BL-S640propylenglycol- addukt. BL-S640 fremkom i urin med intet tegn på derivatet.

9) a) Stabilitet af faststoffer: mindre end 10% tab i 1 måned ved 56°C.

~ b) Stabilitet af opløsninger: mindre end 10% tab ved 250, 25 og 10 mg/ml af BL-S640-aktivitet i mindst 24 timer ved stuetemperatur.

62

DK 164225 B

Eksempel 11 5

O

Ηο-(δνίΗ"α"ΗΗ \ f Ί H n ii!+ 2 tea+ l ch*s —vw

10 2 o · I I

C°2H H

cl8Hi8N6°5S2' molvæst = 462'50 15 [j Π + KEH -—-> OHC —0SO^Na 20

O

II

H0-<JO)— H~1 ir '-[ H-N--Jjr-~Kyy~CE 2~S~-

25 (H C02K

Γ SO,Na ;>

30 C25H17N608S3NaK

35

DK 164225 B

63

Materialer 1~g (0,00217 mol) BL-S640 429 mg (0,00217 mol) 5-furfural-sulfonsyre-Na-salt 217 mg (0,00434 mol) triethylamin 5 1,2 g (0,00659 mol) kalium-2-ethylhexanoat (KEH).

Fremgangsmåde

Til en opslæmning af 1 g BL-S640 i 8 ml methanol sattes 217 mg triethylamin (TEA) og 429 mg 5-furfural-sulfonsyre. Blandingen 10 opvarmedes til tilbagesvaling og snart opløstes alle faststoffer.

Opløsningen opvarmedes i 3 minutter, og 1,2 g KEH tilsattes. Et gult salt udskiltes og samledes og vaskedes med methanol. Saltet tørredes over PgOjj i en exsiccator. Udbytte 800 mg.

Analyse for C23Hi7N6°8S3Na^’ 4H20: 15 Beregnet: C 37,54; H 3,41; N 11,42 Fundet: C 37,30; H 3,31: N 10,18

Smeltepunkt >140 og dekomponering.

Den samme omsætning udførtes som ovenfor med undtagelse af, at natrium-2-ethylhexanoat anvendtes i stedet for KEH. Saltet udfældedes 20 ikke af methanol, hvorfor ooløsningen filtreredes, og filtratet fortyndedes med isopropylal kohol. Det faste bundfald samledes og udvaskedes med isopropylalcohol. Saltet var hygroskopisk, hvorfor det tørredes i vakuum over P20g. Udbytte: 800 mg, smeltepunkt >140°C dekomponering.

25 Analyse for C^Hj^NgOgSjNa,,:

Beregnet: C 42,65; H 2,78; N 13,65 Fundet: C 41,03; H 3,94; N 10,54.

Prøven var opløselig i vand. Opløsningen viste en pH-værdi på 6,5.

Papirstrimmelprøve i puffer og menneskeserum udførtes. Prøven viste 30 sig at udvise kun én plet svarende til BL-S640. Begge prøver udviste en opløselighed på >100 mg/ml ved pH-værdi på 6,5.

Papirstrimmel-chromatografi viste, at ovennævnte forbindelse hydrolyseredes fuldstændigt til BL-S640 i blandet menneskeserum ved pH-værdi 7 og 0,1 M phosphatpuffer ved pH-værdi 7. Papirstrimmel-35 bioautografer opnåedes på følgende måde. Prøver opløstes i en koncentration på 500 γ/ml i 0,1 M phosphatpuffer med pH-værdi 7 og i en koncentration på 500 γ/ml i blandet menneskeserum ved pH-værdi 7. En 10 /il prøve af BL-S640 og af det ovennævnte produkt påførtes pletvis på en

DK 164225 B

64 12,7 mm (1/2 inch) strimmel "What nr. 1"-papir og udvikledes ved 27°C i 16 timer i et system af butvlacetat:N-butanol:eddikesyre:vand (80:15:40:24). Strimlerne lufttørredes og anbragtes på en agarplade, som var podet med B. .subtilis A.T.C.C. 6633. Med intervaller på 30 minutter, 5 1 time, 3 timer og 6 timer påvistes en enkelt zone med Rf-værdi 0,3 for alle prøver.

Højtryks-væskechromatografi ved en koncentration på 1 mg/ml viste fuldstændig hydrolyse til det oprindelige BL-S640 efter 1/2 time. Prøver chromatograferedes på en μ Bondapak C18 (Waters Associates)"-søjle, idet 10 der anvendtes en 0,01 M natriumacetat pH-værdi 4/methanol 8/2 bevægelig fase ved en strømningshastighed på 0,52 ml/minut. Påvisning foregik ved hjælp af UV ved 354 μ. Prøver opløstes i koncentration på 1 mg/ml i den bevægelige fase, 2 μΐ indsprøjtedes, og BL-S640 elueredes ved 18 minutter og aldehydet ved 6 minutter. Mængdebestemmelsen af BL-S640 og 15 5-formylfuransulfonsyre udførtes under anvendelse af p-toluensulfonsyre som en indre standard.

Eksempel 12

Forbindelser med den almene formel 20 .o-fyLJ , *aTX XcH sjp£

25 L/γ ^ T

R1 i H

COONa hvori R er henholdsvis phenyl-2-sul fonsyre, 4-methoxyphenyl-3-30 sulfonsyre, 4-hydroxyphenyl-3-sulfonsyre, 2-carboxymethoxyphenyl, 4-carboxymethoxyphenyl, 3-hydroxy-4-carboxyphenyl, 4-(2'-carboxy)vinyl-phenyl, carboxyl, 2-carboxyphenyl, 3-carboxyphenyl, methansulfonsyre eller methandisul fonsyre fremstilles ved erstatning af 5-formyl-2-furansulfonsyren i fremgangsmåden i eksempel 7 med en ækvimolær vægt-35 mængde af det tilsvarende aldehyd, som har den almene formel R -CH0.

65

DK 164225 B

Eksempel 13

Forbindelserne med de almene formler

110 i, O

w»Vha t< 1 η— I J-N. ^J-CIU-S—i. /Ά H2 0 I 11 ]0 COONa .

i c H3C\ h 0 15 ν-λ1 11 HO-/' C-— c s w; J-rf ί jf ?'20^''y cvs'1" 20 COONa

CH3O H O

Ho/\c—C s \=/h1v "Ί Π |!|'

25 C-H I 11 J- CH2-S-k.KN

R2 ° I H

COOUa .0.

2 —Γ |J—SO^Ka 2Q hvori R er: J_l_ ^ fremstilles ved udskiftning af cefatrizinen i fremgangsmåden i eksempel 7 med en ækvimolær vægtmængde af den tilsvarende amfotere cephalosporin.

35

Eksempel 14

Forbindelserne med de almene formler H 0 66

DK 164225 B

’ "^O-JcS-τΛ 5-1'-»; igH 0ΛΝΧ^-0Η2-3 Ύ " COONa 10 “S-'/Ti Ί Ti—?-ch3

15 C

COONa

CH

ν’ H O

20 /=\ I II

Η0Λ\ // ’l ? YY

®υην“π 1 ri,-~rcH5 I CH0-S og R8 ° COONa 25 CH-,0

^ \_ H O

/=\ I II

HO—v Λ— c c q 3o jv”~CH3 Ί;“ o^y-'-v5-^8 C O O?: a 35 hvori R2 er: "jfjp fremstilles ved udskiftningafcefatrizinen i fremgangsmåden i eksempel 7 med en ækvimolær vægtmængde af den tilsvarende amfotere cephalosporin.

DK 164225B

Eksempel 15

Forbindelserne med de almene formler

H O

67 "^irj-τ-Λ η- 9 ^ J—n—CHp-s ,

i2 0 1 I

COONa CH^

10 HOv H O

>=\ i II

HO—L· Λ-C C g ''røv. J'-j-f' ^ I i

l‘H /-Mv^-ch -s N^N ' r2 0 I I

15 COONa CH3 CH-, Ϋ Η o π og 20 J-ν' J~CH?-S-ArKH og Η2 ° I 1 COONa CH3 CH,0

or 5 \ H O

}=\ 1 11

K0-\\ // 'ΐ f Λ'') π—;H

HN^ /n i \ I J 1' C-H \.lk Λ— CH2-S-ktK‘!

R2 ° i I

30 COONa CH3

O

hvori er —jj^ ^ ' SO^He 35 fremstilles ved udskiftning af cefatrizinen i fremgangsmåden i eksempel 7 med en ækvimolær vægtmængde af den tilsvarende amfotere cephalosporin.

DK 164225B

68

Eksempel 16

Forbindelserne med formlerne HO h O

5 Ho>y}-c s

R loo*a H

10

Vx ? il HO-^Vc-C g 15 wjk j-ri ί m? 15 C-H U j-CI^-SV og

<K I H

COONa CH3°\ h i! 20 I 11 \=/^k J-rY Ί jpf

l'H CH2~S

la 0 i h COONa 25 o hvori R er henholdsvis phenyl-2-sulfonsyre, 4-methoxyphenyl-3-sulfonsyre, 4-hydroxyphenyl-3-sulfonsyre, 2-carboxymethoxyphenyl, 4-carboxy-methoxyphenyl, 3-hydroxy-4-carboxyphenyl, 4-(2'-carboxy)vinylphenyl, carboxyl, 2-carboxyphenyl, 3-carboxyphenyl, methansulfonsyre og methan-30 di sul fonsyre, fremstilles ved erstatning af 5-formyl-2-furansul fonsyren i fremgangsmåden i eksempel 7 med en ækvimolær vægtmæmgde af det til- 0 svarende aldehyd, som har formlen R -CHO.

Eksempel 17

Forbindelserne med formlerne

H O

69

DK 164225 B

H0Oi Jn-r/iS n n-ch3 f/ ο^Νγί-ΟΗ2-3_Ι^Ν R COONa

H0\ H O

)=\ i li H0_(\ //-<r-c s HN^ /N-r-I 'Ί ’ll- ?"Η J-IU CH.-S—

Å8 o T

COONa CH,

\3 H O

?_H CH -s·—Il />N og 0X Y 2 ^ COONa

CH^O

V-Λ H ° ί"11

* 2 Ox T

R I

COONa 2 70

DK 164225 B

hvori R er henholdsvis phenyl-2-sulfonsyre, 4-methoxyphenyl-3-sulfon-syre, 4-hydroxyphenyl-3-sulfonsyre, 2-carboxymethoxyphenyl, 4-carboxy-methoxyphenyl, 3-hydroxy-4-carboxyphenyl, 4-(2'-carboxy)vinyl phenyl, carboxyl, 2-carboxyphenyl, 3-carboxyphenyl, methansulfonsyre og methan-5 di sul fonsyre, fremstilles ved erstatning af 5-formyl-2-furansulfonsyren i fremgangsmåden i eksempel 7 med en ækvimolær vægtmængde af det ti1 -svarende aldehyd, som har formlen R -CHO.

Eksempel 18

Forbindelserne med formlerne

H O

71

DK 164225 B

jr'? 9 ^ J—CHp-S ,

R2 ° I

COONa CH-

H0X H O

l'H VN .

R2 1 I

COONa CH^ CH, V—λ H ‘ ° ’^ti-r-Λ jnr ?"H CH °g R2 0 1 i COONa CII5 CH-2.0 )=\ ”__n

Η°Λ_JC' £ /S -[N

hn^ /t'-rn I I !{, if R 1 ΓΗ COONa Ltl3

DK 164225 B

72 o hvori R er henholdsvis phenyl-2-sulfonsyre, 4-methoxyphenyl-3-sulfonsyre, 4-hydroxyphenyl-3-sulfonsyre, 2-carboxymethoxyphenyl, 4-carboxy-methoxyphenyl, 3-hydroxy-4-carboxyphenyl, 4-(2'-carboxy)vinylphenyl, carboxyl, 2-carbøxyphenyl, 3-carboxyphenyl, methansulfonsyre og methan-5 di sul fonsyre, fremstilles ved erstatning af 5-formyl-2-furansulfonsyren i fremgangsmåden i eksempel 7 med en ækvimolær vægtmængde af det ti 1 - 2 svarende aldehyd, som har formlen R -CHO.

Eksempel 19 10 Fremstilling af BL-S1057, natriumsaltet af reaktionsproduktet BL-S643 og 2-furaldehyd Formel, BL-S1057

J\H II

15 H0\==/ f Ί S N-

lf/\ 0^-NN^CII2S—\s/~aS

)—O COONa

O

Fremgangsmåde 1) 1 g BL-S643,3H20 opslæmmes i 10 ml vand ved 40-45°C.

2) 0,25 g (1,25 ækvivalenter) 2-furaldehyd tilsættes.

25 3) IN natriumhydroxid tilsættes under hurtig omrøring indtil pH- værdi 7-7,5. En opløsning eller næsten opløsning opnås i løbet af mindre end 5 minutter.

4) Opløsningen afkøles til 22-24°C og filtreres på passende måde til fjernelse af partikler, bakterier og pyrogener.

30 5) Der lyofiliseres under sterile betingelser i 48 timer til opnåelse af BL-S1057-pulver (BL-S1057 kan også opnås ved udfældning fra den sterile opløsning i trin 4 med 15 til 20 volumina steril isopropanol).

35 Egenskaber af BL-S1057 1) Bio-prøve (anvendelse af cefatrizin som standarden) = 759 Mg/mg.

2) IR = intakt Ø-lactam; veldefineret.

3) NMR = a) veldefineret; konsistent

DK 164225 B

73 b) omtrent 75% cyclisk addukt (60 mg/ml i D20).

4) · Opløselighed = >400 mg/ml i vand.

5) Papirstrimmel-chromatografi = hovedsageligt 1 zone ved R^-værdi for BL-S643 ved 37°C ved 0 og 1 time (koncentration =0,2 mg/ml).

5 6) Væske-chromatografi = 100% hydrolyseret i puffer med pH-værdi 6,1 inden for 1 time ved stuetemperatur (koncentration = 1 mg/ml).

7) Smeltepunkt = 180°C (indskrumpning) - 200°C dekomponering.

Analytiske data 10 Fundet På tør basis Teoretisk % H20 KF 5,18 % C 45,91 48,4 48,4 % H 4,05 3,7 3,37 % N 10,81 11,4 11,8 15 % S 14,92 15,73 16,48 % aske som

Na 3,84 4,03 3,88

Eksempel 20 20 BL-S1058, reaktionsproduktet af BL-S643 og natrium-5-formyl-2-furansulfonsyre Formel, BL-S1058

'—f HN .N—i—r η N-N

A oJ— \\^Λ— CH S JLcH3 , 5H2° C00Na SO,I'Ia 5

Fremstilling af BL-S1058 1) 0,45 g 5-formyl-2-furansulfonsyre-natriumsalt 35 / ji-SO Na) . O o

DK 164225 B

74 opslæmmes i 10 ml vand ved 40-45°C. En opløsning eller næsten opløsning opnås.- 2) 1 g BL-S643,3H20 drysses i over en 10 minutters oeriode under hurtig omrøring og samtidig tilsætning af IN natriumhydroxid indtil en 5 pH-værdi 7-7,5. En opløsning eller næsten opløsning opnås inden for 5 minutter.

3) Der afkøles til 20-23°C, og opløsningen filtreres gennem passende filtre til fjernelse af partikler, bakterier og pyrogener.

4) Der lyofili seres i 48 timer. Det resulterende pulver er 10 BL-S1058 (steril BL-S-1058 kan også opnås fra opløsningen i trin 3 ved udfældning fra 15-20 volumina steril isopropanol).

Egenskaber af BL-S1058 1) Bio-prøve (anvendelse af cefatrizin som standarden) = 585 /jg/mg.

15 2) IR - NMR = a) veldefineret; konsistent b) ^-lactam og 3-sidekæde intakt c) 90% cyclisk addukt (ved omtrent 60 mg/ml i D20).

3) Papirstrimmel-chromatografi = hovedsageligt 1 zone ved R^-værdi for BL-S643 ved 0 og 1 time ved 37°C (koncentration er 0,2 20 mg/ml). Der er tegn på en anden zone.

4) Væske-chromatografi (1 mg/ml i puffer med pH-værdi 6.

Tid i timer % hydrolyseret 0 25,4 25 1 46,5 2 59,0

Analytiske data

Fundet På tør basis Teoretisk 30 % H20 KF 10,17 % C 36,5 40,5 41,6 % H 2,89 2,4 2,74 % N 8,52 9,49 10,01 % S 17,09 18,98 18,6 35 % Aske som

Na 7,04 7,93 6,63

DK 164225 B

75 V ' C£> rfl fA m Ή lp ΙΓΝ U V O O \S\ W ^ ^

to 'wOOOOOH^f^rOfH^O-^OvOLA

X) I H ^

in PQ A

w σ c ___—- •H --—- -----------—- u fy c

-H A~N

(M

C —- <U ^ OD VD 00 •U ,-,ΙΠγΗΟΙΛ m Λ ._ je gooocxj in η inin •H ti WOOOOOO-=fCMOHC\JOCMOVpin

U X. I H CM

0 ~ lJ Ή

•O cq A

ΓΊ U

™ H

'T »r V£) in J ____——-- CQ ----—-—-

ni zL

c x vo oo 2 o o o in cm inin ^ WOOO00H^3-CMOH^-O-=rOVDcn ω Λ η a ^ a

to Q A

J* to -----------—--—— v o

•H

^ t— od o m < 4j in^rN-f'-vovoODr-iiHinr—-noinfn c co ommooo κ\ h c- t- r-t o < in \o in m co co in in in ό σ\ in σ\ in co ODotcnCAC^CArH (AH OC C70 ι-1 CT\ r-j C\ * * * * ^ ^ (Λ K\ ~ ~ (OvCMrn-=J-~-=r~~·^ p" l l I I I 1 I l l I 1 1 1 1 ooooooooooooooo i-Hr-|r-lrHr—li—lr-lr—Ir-tr-Hi—I r—r— ) : •rl 3 c; ^

rj (DO

hfi co n rn K to U .C fA tA I ---( .

O'* *- A Vi. VO CO -C Ό ™

O to T-l o rH IH -»-> -Η Ο o to W

rj a> t: in X X Ο η m r «3 ·η ·η O

•η γ; ω -+- cq cq 2 -H jo a ·η h -h c

CO C 3 C C -H C

ouDtotf>«wwa)t':> 22-9 3,« S.0 3 3 3 3 3A - 3 >, (D (D <D O o C-H-H 3 3 H 3 " <d a c cccc <u —ι h oo-HO o 333352 o o c c 6 ε * a.rtrjrtnJrt - oocun, C r—1 ...

......·'··£* jr g __re in m to co in co co Μ ΙΟ X o. a. a.

DK 164225 B

76 0 te ---- jj,

ø C

ΤΓ tu ftj S ΓΑ u * 2 - O tn

r VO -Π B

" K ΐΛ ΙΛ 4- W tn > i oj co tn tn J rH H S Cn 0

PQ Λ O CM

s *4 * £

2 —\ tu 4J

5 _ / " c 3 d ;s- -n tu S ^ ^ΓΛ tu 0 σ» W o M C <u c —- ^ co i c jj -S te 03 , CM CJ te μ E m K Q c B \ o m pzA o ω C tn H - \ I ra nl ^ pi co in in o pq o s ® ^ -ι-l I CM CM te / /-\ o m 10 n pq A f co \\— o £ ® " 1 \ r Si > ______I o s

M —V ^ S

CU °\ ° · te 5 s T V* * § cn in cc--S te m ' o in p=v te o n .

ra co in tn cT vo o ^ m c o, l CM ΓΟ Η / I C te te ^ ^ τί l=/ .I « tu n ^ PQ a I XN^ 0 0 p 1 ΊΓ - w £ 1 5-1 cn o u 2 (U «L Ό ,, te -π w 7, Ό M +i S II *· fij te ø m ^ te te > 4J te 1 (j\ K cn ø ., ' -H to N σ\ tete ø ø :> te o in in un co ω o; u ·η •H O vo CO vo 2 'i tn > Π cm ον σν σ\ 2 a a ·η ø λ:

o < < < < ^ ffipQ Pi te f-J

2 te C (U Pi te LO 0) te te £ Ό te •Η teM raraamnj 2 tn -u s-ι tete ra ω ef I I I I Ζί 2 >—1 —t 0 tn ^ o o o o 0X0 3 > o o te P h h2Sh°^o tete ( o ® qj , ,____ >_, ___ in -O tete Pi te tn .p tac C C ø c c S + Pi 0 te -H Øte C 4J -p) te te P|

Γο G tn J-J ..v> „v Pi ø .Q

,,1 n .O m o ,i\ o c ø ti li Ml! (il id -i—i ‘/' tu tn øøø te “ 0 Pi te Pi Pi Pite> ^V, ocwc o o te .h

0 o\o «-Ι 0 ø IW IH c -Η -H

O V V <u in C 4-> 0 +J

w l? til ø Cn ø v jo »ία 22 2 2 +>cc øø teør-i

pririrt O -HØ Pi Pi øCn-H

ca.tete 00 S04J

Oi-lrHrHriJUc 4J4J

ε o O O <P|>,P| 0 0 ·& -P 0 o o • ’ · · # ti P U t—) i—» p(44>.4J4JinCO«-l 0 c c c ί m ikø co w w ω „ „ -- * * iH ro % 77

Papirchromatogrammer opnåedes efter chromatografering på rotteurin, som var samlet mellem 0 og 2 og mellem 2 og 4 timer efter IM administrering af BL-S1057, 1058 og 643 til påvisningen af antibiotisk aktive metaboliter, idet der anvendtes "faldende" chromatografi med systym nr.

5 9 (butylacetat:n-butanolliseddikesyrerHgO^O: 15:40:24). En enkelt iden tisk plet observeredes i alle tilfælde. Dette indicerer fuldstændig hydrolyse af de 2 derivater til den oprindelige forbindelse (BL-S643).

Eksempel 21 10 Forbindelser med formlen -C S _ 15 v===/hN^ ^ N| i [2Η0·^Τ 'CH2'S_kS/L ^ COONa 20 hvori R er henholdsvis phenyl-2-sulfonsyre, 4-methoxyphenyl-3-sulfonsyre, 4-hydroxyphenyl-3-sulfonsyre, 2-carboxymethoxyphenyl, 4-carboxy-methoxyphenyl, 3-hydroxy-4-carboxyphenyl, 4-(2'-carboxy)vinyl phenyl, carboxyl, 2-carboxyphenyl, 3-carboxyphenyl, methansulfonsyre og methan-25 di sul fonsyre, fremstilles ved erstatning af 5-formyl-2-furansul fonsyren i fremgangsmåden i eksempel 20 med en ækvimolær vægtmængde af det ti 1 - 2 svarende aldehyd, som har formlen R -CHO.

78

DK 164225 B

Eksempel 22

Ferbi ndelserne med formlerne

5 HO^_ h O

no^~\- c— c s

\=/hN^ ^ ^ N-II

f"1 ^N^-CTg-e-lL JLcHj

10 R2 ° I

10 COONa

15 H3Cv H O

y\ * 11

\=/ HNX ^N—-f N-N

|ZH0CH2-S A CH5 09

R2 ° I

20 COONa

CHJ°V H O

ΗοΌ-ί—! .S

'-' HNX ^N—-f > N-N

25 |"H CH2-S -A J~Ch O' J * S ^ COONa 2 /0. O.

30 hvori R er~|| |j eller ~j^ |J— SO^Na fremstilles ved udskiftning af cefaparolen i fremgangsmåderne i eksemplerne 19 og 20 med en ækvimolær vægtmængde af den tilsvarende amfotere cephalosporin.

35 79

Eksempel 23

Forbindelserne med formlerne

H O

/=\ i II

Η0Λ\ //' f /Y

r~i? h <f Y 2 n

K I I

COONa ' CHj

HO

ηο^Ϊ)-Η /s.

VhnxA_ Tr-jT

COONa I

ch3

CH

- Ηΐγ /N-|—Y \ „-n C-H J II i 'a σ^-Νγ^ν8-%>

COONa I

CH- CH,0

\_ H O

H0HO~i—f γγ

N-' HN^ XN—j-f > N-N

C-H 1 H li

I-, N

π I I

COONa ' .

O i i “7 ) hvori R2 er ~~f\ 1] eller ~|f ^ S°3Wa

DK 164225 B

80 fremstilles ved udskiftning af cefaparolen i fremgangsmåderne i eksemplerne 19 og 20 med en ækvimolær vægtmængde af den tilsvarende amfotere cephalosporin.

5 Eksempel 24

Forbindelserne med formlerne Η0Ό-Ή /s ντπ. jnr COONa

HO

\_ H O

HO·\-c—c

^N-|—r'N H-W

|’H 0J_n-^-ch2-s -A J- ch ,

R2 U T 0 D

COONa CH,

Yi_ H O

a

-' HN^ /N—-N-N

|'H 07^γίθΗ2-3-^0ΑθΗ3 og COONa CH,0

_ H O

Η0-Ο-ί-""

X-' ilN^ /N—-f ] Π-N

li11 /-»vJ-CI^-S

R^ I

COONa 81 o O · hvori R2 er —\ ^ eller|- SO^Na 5 fremstilles ved udskiftning af cefaparolen i fremgangsmåderne i eksemplerne 19 og 20 med en ækvimolær vægtmængde af den tilsvarende amfotere cephalosporin.

10 Eksempel 25

Forbindelserne med formlerne

H O

—\ I II ch m-l Ve-c « 3 ' ^~v~C _J~h” ^2 (r 2 n COOIfa

HO

\_ H O

HO-^Vc-C CH

\jy i i /S. i 3

- HNV ^N—i-f N K-H

'C oV, J - ir T ri COONa CH,

\p, H O

r>

'-' HN^ /N—i-p V N-N

?"H J-N. />LciI0-S-L jJ oq

^2 0X

COONa

DK 164225 B

82 CH,0

3 \_ H O

_>k

'-' HN^ /N—-p j N-N

5 ?"Η J-N^^^l-CHp-S—k Jj j,2 <r Y 2 COONa

/°N

,Λ -1 fl —Π I-SO,Na 10 hvori R er | eller J_ j fremstilles ved erstatning af cefaparolen i fremgangsmåderne i eksemplerne 19 og 20 med en ækvimolær vægtmængde af den tilsvarende amfotere 15 cephalosporin.

Eksempel 26

Forbindelserne med formlerne

H O

'-^HlL, /N—i-N-C-CR' ?‘H ^-n^y^L-ch -s—Jn ^2 cr y d s ^ COONa

K0V H O

)=\ i II

HO—\\ Λ” C ~ C q /K—r—f'O \ ,?"CH3 1;"

R I

COONa

DK 164225 B

83 CH,

\ 5 H O

/=\ i II

HO-/v / C C c

^ B»v /i-I-f 'l N-C-CH

’ jf " COONa CH-,0

3 \ H O

10 M i ii HO—u Λ-C--C ς ’irT0"3 I /7—^—CH„-S—>

*2 Y * S

η I

^ COONa ^ 2 —Π Π ,, “Il i SO, Na hvori R er ) J eller ||^_ 3 20 fremstilles ved udskiftning af cefaparolen i fremgangsmåderne i eksemplerne 19 og 20 med en ækvimolær vægtmængde af den tilsvarende amfotere cephalosporin.

DK 164225 B

84

Eksempel 27

Forbindelserne med formlerne H O

* "^OJ-S-tVS ;=r ^C-H^ i_CH2-S-4H-N-UI3 ,

'2 O T

R I

COONa

HO

10 )=\j il ?"H J-nLxI—CH,-S ^ ^Ν·°Η3 o' γ * “ 15 COONa CE,

· H O

/=\ I II

HO—(\ //~Q " C C

20 CH2-S-^n^N"CH5 °9

R2 ° T

COONa CH,0 25 )=\J »

v //Λ λ__N--N

N-' HN. XN I i i ?“H /~nL^-CH2-S-

i20 T

30 COONa “Tf"0''!'-SO,Na hvori R2 er [|_|] eller [j_|J ? fremstilles ved udskiftning af cefaparolen i fremgangsmåderne i eksemplerne 19 og 20 med en ækvimolær vægtmængde af den tilsvarende amfotere cephalosporin.

35

Claims (115)

1. 85 UIV 104^9 D
2. 1. Cephalosporinforbindelser til anvendelse som ernæringsmæssige tilskud i dyrefoder, KENDETEGNET ved, at de har den almene formel 5 A X_ H O '—y \=·/ I I I
3. 10 HN N—1-r ^ \ / I o C-H L-Nn^CH2-S-r3 <y T r2 COOIT 15 hvori A er hydrogen, hydroxy, methyl eller methoxy, R* er hydrogen, natrium eller kalium,
4. 20 R2 er 2-furyl, 2-furan-5-sulfonsyre, phenyl-2-sulfonsyre, 4-methoxy-phenyl-3-sulfonsyre, 4-hydroxyphenyl-3-sulfonsyre, 2-carboxymethoxy-phenyl, 4-carboxymethoxyphenyl, 3-hydroxy-4-carboxyphenyl, 4-(2'-carb-oxy)vinyl phenyl, carboxyl, 2-carboxyphenyl, 3-carboxyphenyl, methan-sulfonsyre eller methandi sul fonsyre, og 25 R^ er l,2,3-triazol-5-yl, tetrazol-5-yl, 1,2,4-thiadiazol-5-yl, 1,3,4-thiadiazol-2-yl, l,3,4-oxadiazol-2-yl eller l,2,4-triazol-5-yl, hvor enhver af disse grupper er usubstitueret eller substitueret med 1 eller 2 al kyl grupper med 1 til 4 carbonatomer.
5. 2. Forbindelse ifølge krav 1, KENDETEGNET ved, at R2 er 2-furyl.
6. 3. Forbindelse ifølge krav 1, KENDETEGNET ved, at R2 er 2-furan-5- sulfonsyre.
7. 4. Forbindelse ifølge et eller flere af kravene 1-3, KENDETEGNET ved, at R* er natrium.
8. 5. Forbindelse ifølge et eller flere af kravene 1-3, KENDETEGNET 35 ved, at R* er kalium.
9. 6. Forbindelse ifølge krav 1, KENDETEGNET ved, at den har den almene formel DK 164225 B 86 AX_ H O „o^U—S 5 \=y | I S |—H HK K-f I L-NxJ-CH2-S-i M O7 I , N P COOH1 R2 H 10 hvori 1 2 A, R og R har de i krav 1 angivne betydninger.
10. 7. Forbindelse ifølge krav 6, KENDETEGNET ved, at R2 er 2-furyl.
11. 8. Forbindelse ifølge krav 6, KENDETEGNET ved, at R2 er 2-fiiran-5-sulfonsyre.
12. 9. Forbindelse ifølge et eller flere af kravene 6-8, KENDETEGNET ved, at R* er natrium.
13. 10. Forbindelse ifølge et eller flere af kravene 6-8, KENDETEGNET ved, at R* er kalium.
14. 11. Forbindelse ifølge krav 6, KENDETEGNET ved, at den har den almene formel 25 .__ H O HO-^^Vc-i W I I 3 -N Nc4i I 1 30 «2 h-Nv^-CHa-S-^ N R O ' -i Ψ COOR1 I H 35 hvori 1 2 R og R har de i krav 1 angivne betydninger.
15. 12. Forbindelse ifølge krav 11, KENDETEGNET ved, at R2 er 2-furyl. 87
16. 13. Forbindelse ifølge krav 11, KENDETEGNET ved, at R2 er 2-furan- 5-sulfonsyre.
17. 14. Forbindelse ifølge krav 12 eller 13, KENDETEGNET ved, at den har D-konfiguration, og at R* er natrium.
18. 15. Forbindelse ifølge krav 12 eller 13, KENDETEGNET ved, at den har D-konfiguration, og at R1 er kalium.
19. 15. Forbindelse ifølge krav 12 eller 13, KENDETEGNET ved, at den har D-konfiguration, og at R* er hydrogen.
20. 17. Forbindelse ifølge krav 1, KENDETEGNET ved, at den har den 10 almene formel A \_ H O 15 // \ I II HO-<^ J>-C-C N-N-CH3 HN N-r-j/S^| Y //lY7s'V” 20 cooir hvori 1 2 A, R og R har de i krav 1 angivne betydninger.
21. 18. Forbindelse ifølge krav 17, KENDETEGNET ved, at R2 er 2-furyl.
22. 19. Forbindelse ifølge krav 17, KENDETEGNET ved, at R2 er 2-furan- 5-sulfonsyre.
23. 20. Forbindelse ifølge et eller flere af kravene 17-19, KENDETEGNET ved, at R1 er natrium.
24. 21. Forbindelse ifølge et eller flere af kravene 17-19, KENDETEGNET ved, at R* er kalium.
25. 22. Forbindelse ifølge krav 17, KENDETEGNET ved, at den har den almene formel 35 88 DK 164225 B » | W I I /S N-N-CH, H„v /N-s ^ il COOR1 10 hvori 1 2 R og R har de i krav 1 angivne betydninger.
26. 23. Forbindelse ifølge krav 22, KENDETEGNET ved, at R2 er 2-furyl.
27. 24. Forbindelse ifølge krav 22, KENDETEGNET ved, at R2 er 2-furan- 5-sulfonsyre.
28. 25. Forbindelse ifølge krav 22, KENDETEGNET ved, at den har D-konfiguration, og at R1 er natrium.
29. 26. Forbindelse ifølge krav 22, KENDETEGNET ved, at den har D-kon-20 figuration, og at R1 er kalium.
30. 27. Forbindelse ifølge krav 22, KENDETEGNET ved, at den har D-konfiguration, og at R1 er hydrogen.
31. 28. Forbindelse ifølge krav 1, KENDETEGNET ved, at den har den almene formel 25 \ H O \=z/ I I /S. N-N ao —i—i i i' i i2 c°o.,i l„3 35 89 hvori 1 2 A, R og R har de i krav 1 angivne betydninger.
32. 29. Forbindelse ifølge krav 28, KENDETEGNET ved, at R2 er 2-furyl.
33. 30. Forbindelse ifølge krav 28, KENDETEGNET ved, at R2 er 2-furan-5 5-sulfonsyre.
34. 31. Forbindelse ifølge et eller flere af kravene 28-30, KENDETEGNET ved, at R1 er natrium.
35. 32. Forbindelse ifølge et eller flere af kravene 28-30, KENDETEGNET ved, at R1 er kalium.
36. 33. Forbindelse ifølge krav 28, KENDETEGNET ved, at den har den almene formel HtVKTY L Γ"« i „ COOR1 I 20 ch3 hvori 1 2 R og R har de i krav 1 angivne betydninger.
37. 34. Forbindelse ifølge krav 33, KENDETEGNET ved, at R2 er 2-furyl.
38. 35. Forbindelse ifølge krav 33, KENDETEGNET ved, at R2 er 2-furan- 5-sulfonsyre.
39. 36. Forbindelse ifølge krav 34 eller 35, KENDETEGNET ved, at den har D-konfiguration, og R1 er natrium.
40. 37. Forbindelse ifølge krav 34 eller 35, KENDETEGNET ved, at den har D-konfiguration, og at R1 er kalium.
41. 38. Forbindelse ifølge krav 34 eller 35, KENDETEGNET ved, at den har D-konfiguration, og at R* er hydrogen.
42. 39. Forbindelse ifølge krav 1, KENDETEGNET ved, at den har den 35 almene formel DK 164225 B 90 \_ H O
43. 5 HO-/ \-C-C _ —Π j-L | -xr>-· αίο-ΰ-Λ )-CIU lv o' I COORl 10 hvori 1 2 A, R og R har de i krav 1 angivne betydninger.
44. 40. Forbindelse ifølge krav 39, KENDETEGNET ved, at R^ er 2-furyl.
45. 41. Forbindelse ifølge krav 39, KENDETEGNET ved, at R^ er 2-furan-15 5-sulfonsyre.
46. 42. Forbindelse ifølge et eller flere af kravene 39-41, KENDETEGNET ved, at R* er natrium.
47. 43. Forbindelse ifølge et eller flere af kravene 39-41, KENDETEGNET ved, at R^ er kalium.
48. 44. Forbindelse ifølge krav 39, KENDETEGNET ved, at den har den almene formel 25 „Ο^Λ-Ϊ-1 W I I .s N-N hn\ /M—r~f Ί li 1 c-π y-'ch3
49. 30 R2 0 T ! 0
50. 30 COOIr· hvori R og R har de i krav 1 angivne betydninger.
51. 45. Forbindelse ifølge krav 44, KENDETEGNET ved, at R^ er 2-furyl.
52. 46. Forbindelse ifølge krav 44,. KENDETEGNET ved, at R^ er 2-furan- 5-sulfonsyre.
53. 47. Forbindelse ifølge krav 45 eller 46, KENDETEGNET ved, at den DK 164225B 91 har D-konfiguration, og R* er natrium.
54. 48. Forbindelse ifølge krav 45 eller 46, KENDETEGNET ved, at den har D-konfiguration, og at R1 er kalium.
55. 49. Forbindelse ifølge krav 45 eller 46, KENDETEGNET ved, at den 5 har D-konfiguration, og at R1 er hydrogen.
56. 50. Forbindelse ifølge krav 1, KENDETEGNET ved, at den har den almene formel A 10 \_ H O ho—-c! f13 i i .s L_f, HN N-1-S N 1 |"H J 15 la (f T C O OR1 hvori 1 2 A, R og R har de i krav 1 angivne betydninger.
57. 51. Forbindelse ifølge krav 50, KENDETEGNET ved, at R2 er 2-furyl.
58. 52. Forbindelse ifølge krav 50, KENDETEGNET ved, at R2 er 2-furan- 5-sulfonsyre.
59. 53. Forbindelse ifølge et eller flere af kravene 50-52, KENDETEGNET ved, at R* er natrium.
60. 54. Forbindelse ifølge et eller flere af kravene 50-52, KENDETEGNET ved, at R* er kalium.
61. 55. Forbindelse ifølge krav 50, KENDETEGNET ved, at den har den almene formel
62. 30 Ho-fyLj W/ II s i I IN N--N f-N ^C-M I I 35 ^2 j COOR1 DK 164225 B 92 hvori 1 2 R og R har de i krav 1 angivne betydninger.
63. 56. Forbindelse ifølge krav 55, KENDETEGNET ved, at R2 er 2-furyl.
64. 57. Forbindelse ifølge krav 55, KENDETEGNET ved, at R2 er 2-furan-5 5-sulfonsyre.
65. 58. Forbindelse ifølge krav 56 eller 57, KENDETEGNET ved, at den har D-konfifuration, og at R er natrium.
66. 59. Forbindelse ifølge krav 56 eller 57, KENDETEGNET ved, at den har D-konfiguration, og at R* er kalium.
67. 60. Forbindelse ifølge krav 56 eller 57, KENDETEGNET ved, at den har D-konfiguration, og at R* er hydrogen.
68. 61. Forbindelse ifølge krav 1, KENDETEGNET ved, at den har den almene formel 15 \ H O -c Jr i N-C-CH-3 ao r j ii 3 ? H _CHp-S-A N L· s J‘ ν' COOR1 25 hvori 1 2 A, R og R har de i krav 1 angivne betydninger.
69. 62. Forbindelse ifølge krav 61, KENDETEGNET ved, at R2 er 2-furyl.
70. 63. Forbindelse ifølge krav 61, KENDETEGNET ved, at R2 er 2-furan-30 5-sulfonsyre.
71. 64. Forbindelse ifølge et eller flere af kravene 61-63, KENDETEGNET ved, at R* natrium.
72. 65. Forbindelse ifølge et eller flere af kravene 61-63, KENDETEGNET ved, at R* er kalium.
73. 66. Forbindelse ifølge krav 61, KENDETEGNET ved, at den har den almene formel 93 HO -f\-l_I 5 \=y I I s. N-Q-CHq IIN N--j I I ° R2 ° T , S COOH1 10 hvori 1 2 R og R har de i krav 1 angivne betydninger.
74. 67. Forbindelse ifølge krav 66, KENDETEGNET ved, at R^ er 2-furyl.
75. 68. Forbindelse ifølge krav 66, KENDETEGNET ved, at R^ er 2-furan-15 5-sulfonsyre.
76. 69. Forbindelse ifølge krav 67 eller 68, KENDETEGNET ved, at den har D-konfiguration, og at R1 er natrium.
77. 70. Forbindelse ifølge krav 67 eller 68, KENDETEGNET ved, at den har D-konfiguration, og at R* er kalium.
78. 71. Forbindelse ifølge krav 67 eller 68, KENDETEGNET ved, at den har D-konfiguration, og at R1 er hydrogen.
79. 72. Forbindelse ifølge krav 1, KENDETEGNET ved, at den har den almene formel 25 A\ H O \=zJ I I 3. Γ1--N 30 /N—1—( Ί I I 9_H -CT-^-S N-CH- l T1 " COOH1 hvori 1 2 A, R og R har de i krav 1 angivne betydninger. 35 DK 164225 B 94
80. 73. Forbindelse ifølge krav 72, KENDETEGNET ved, at R2 er 2-furyl.
81. 74. Forbindelse ifølge krav 72, KENDETEGNET ved, at R2 er 2-furan- 5-sul fonsyre.
82. 75. Forbindelse ifølge et eller flere af kravene 72-74, KENDETEGNET 5 ved, at R* er natrium.
83. 76. Forbindelse ifølge et eller flere af kravene 72-74, KENDETEGNET ved, at R* er kalium.
84. 77. Forbindelse ifølge krav 72, KENDETEGNET ved, at den har den almene formel 10 HO-fVi_I 15 w 11 v J*—^—|Λ N-i |'H 1— r2 0 I COOR1 20 hvori 1 2 R og R har de i krav 1 angivne betydninger.
85. 78. Forbindelse ifølge krav 77, KENDETEGNET ved, at R2 er 2-furyl.
86. 79. Forbindelse ifølge krav 77, KENDETEGNET ved, at R2 er 2-furan- 5-sul fonsyre.
87. 80. Forbindelse ifølge krav 78 eller 79, KENDETEGNET ved, at den har D-konfiguration, og at R* er natrium.
88. 81. Forbindelse ifølge krav 78 eller 79, KENDETEGNET ved, at den har D-konfiguration, og at R^ er kalium.
89. 82. Forbindelse ifølge krav 78 eller 79, KENDETEGNET ved, at den har D-konfiguration, og at R* er hydrogen.
90. 83. Forbindelse ifølge krav 1, KENDETEGNET ved, at den har den 35 almene formel 95 A\_ Η Ο ηο>Λ4—ϋ ^H|x ^ η
91. 9. I_N. ^ch2-s-1 J L· f f Y COOR1 CH, 10 ^ hvori 1 2 A, R og R har de i krav 1 angivne betydningr.
92. 84. Forbindelse ifølge krav 83, KENDETEGNET ved, at R2 er 2-furyl.
93. 85. Forbindelse ifølge krav 83, KENDETEGNET ved, at R2 er 2-furan- 5-sulfonsyre.
94. 85. Forbindelse ifølge et eller flere af kravene 83-85, KENDETEGNET ved, at R1 er natrium.
95. 87. Forbindelse ifølge et eller flere af kravene 83-85, KENDETEGNET 20 ved, at R* er kalium.
96. 88. Forbindelse ifølge krav 83, KENDETEGNET ved, at den har den almene formel !! „YyLY \=y i i /S —n HN Ά-—r I r y*T{^
97. 30 R2 ° I Ί I COOR1 CH3 35 hvori 1 2 R og R har de i krav 1 angivne betydninger.
98. 89. Forbindelse ifølge krav 88, KENDETEGNET ved, at R2 er 2-furyl.
99. 90. Forbindelse ifølge krav 88, KENDETEGNET ved, at R2 er 2-furan- 96 DK 164225 B 5-sulfonsyre. 9l·. Forbindelse ifølge krav 89 eller 90, KENDETEGNET ved, at den har D-konfiguration, og at R* er natrium.
100. 92. Forbindelse ifølge krav 89 eller 90, KENDETEGNET ved, at den 5 har D-konfiguration, og at R1 er kalium.
101. 93. Forbindelse ifølge krav 89 eller 90, KENDETEGNET ved, at den har D-konfiguration, og at R1 er hydrogen.
102. 94. Forbindelse ifølge krav 1, KENDETEGNET ved, at den har den almene formel 10 A \ H O ho>va_j 15 r-f Svi S IL fH LLL-ch2-s4I JJ- CH3 R2 ° T ! s COOR-1· 20 hvori 1 2 A, R og R har de i krav 1 angivne betydninger.
103. 95. Forbindelse ifølge krav 94, KENDETEGNET ved, at R2 er 2-furyl.
104. 96. Forbindelse ifølge krav 94, KENDETEGNET ved, at R2 er 2-furan-25 5-sulfonsyre.
105. 97. Forbindelse ifølge et eller flere af kravene 94-96, KENDETEGNET ved, at R* er natrium.
106. 98. Forbindelse ifølge et eller flere af kravene 94-96, KENDETEGNET ved, at R* er kalium.
107. 99. Forbindelse ifølge krav 94, KENDETEGNET ved, at den har den almene formel 35 UI\ D 97 '-' I I ^3. N_u η%4ν~Π' \ J i I i—N\i^^ch2”s-\ JJ—CH3 R2 0X j COOR1 10 hvori R og R har de i krav 1 angivne betydninger.
108. 100. Forbindelse ifølge krav 99, KENDETEGNET ved, at R2 er 2-furyl.
109. 101. Forbindelse ifølge krav 99, KENDETEGNET ved, at R2 er 2-furan- 5-sulfonsyre.
110. 102. Forbindelse ifølge krav 100 el er 101, KENDETEGNET ved, at den har D-konfiguration, og at R1 er natrium.
111. 103. Forbindelse ifølge krav 100 eller 101, KENDETEGNET ved, at den har D-konfiguration, og at R1 er kalium.
112. 104. Forbindelse ifølge krav 100 eller 101, KENDETEGNET ved, at den 20 har D-konfiguration, og at R1 er hydrogen.
113. 105. Natrium- eller kaliumsalt af forbindelsen ifølge krav 1, KENDETEGNET ved, at det er saltet af det ækvimolære kondensationsprodukt af a) et aldehyd, som er forskel 1 igtfra formaldehyd eller acetaldehyd, med b) en amfoter 3-thioleret cephalosporin, som i 3-sti 11 i ngen har 3 3 25 gruppen -CHg-S-R , hvori R er 1,2,3-triazol-5-yl, der er usubstitueret eller substitueret med 1 eller 2 al kyl grupper med 1-4 carbonatomer, og hvilken 3-thiolcret cephalosporin indeholder en α-substitueret a-amino-acetamidogruppe i 7-stillingen og i sin zwitterionform har en vandop-løselighed på mindre end 125 mg/ml.
114. 106. Natrium- eller kaliumsalt af forbindelsen ifølge krav 1, KENDETEGNET ved, at det er saltet af det ækvimolære kondensationsprodukt 2 2 af a) et aldehyd, som har den almene formel R -CHO, hvori R har den i krav 1 angivne betydning, med b) en amfoter 3-thioleret cephalosporin, 3 3 som i 3-stillingen har gruppen -CH2-S-R , hvori R er 1,2,3-triazol-5-35 yl, der er usubstitueret eller substitueret med 1 eller 2 alkylgrupper med 1-4 carbonatomer, og hvilken 3-thioleret cephalosporin indeholder en α-substitueret a-aminoacetamidogruppe i 7-stillingen og i sin zwitterionform har en vandopløselighed på mindre end 125 mg/ml. DK 164225 B 98
115. 107. Forbindelse ifølge krav 106, KENDETEGNET ved, at er 2-furarr-5-sul fonsyre. 5 10 15 20