DK165703B - Fremgangsmaade til selektivt at foroege maengdeandelen af en eller flere af hovedkomponenterne af teicoplanin a2-komplekset - Google Patents
Fremgangsmaade til selektivt at foroege maengdeandelen af en eller flere af hovedkomponenterne af teicoplanin a2-komplekset Download PDFInfo
- Publication number
- DK165703B DK165703B DK233086A DK233086A DK165703B DK 165703 B DK165703 B DK 165703B DK 233086 A DK233086 A DK 233086A DK 233086 A DK233086 A DK 233086A DK 165703 B DK165703 B DK 165703B
- Authority
- DK
- Denmark
- Prior art keywords
- acid
- toxic
- microorganism
- effective amount
- precursor
- Prior art date
Links
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P17/00—Preparation of heterocyclic carbon compounds with only O, N, S, Se or Te as ring hetero atoms
- C12P17/18—Preparation of heterocyclic carbon compounds with only O, N, S, Se or Te as ring hetero atoms containing at least two hetero rings condensed among themselves or condensed with a common carbocyclic ring system, e.g. rifamycin
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K9/00—Peptides having up to 20 amino acids, containing saccharide radicals and having a fully defined sequence; Derivatives thereof
- C07K9/006—Peptides having up to 20 amino acids, containing saccharide radicals and having a fully defined sequence; Derivatives thereof the peptide sequence being part of a ring structure
- C07K9/008—Peptides having up to 20 amino acids, containing saccharide radicals and having a fully defined sequence; Derivatives thereof the peptide sequence being part of a ring structure directly attached to a hetero atom of the saccharide radical, e.g. actaplanin, avoparcin, ristomycin, vancomycin
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N1/00—Microorganisms; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
- C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
- C12N1/205—Bacterial isolates
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12R—INDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBCLASSES C12C - C12Q, RELATING TO MICROORGANISMS
- C12R2001/00—Microorganisms ; Processes using microorganisms
- C12R2001/01—Bacteria or Actinomycetales ; using bacteria or Actinomycetales
- C12R2001/045—Actinoplanes
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S435/00—Chemistry: molecular biology and microbiology
- Y10S435/8215—Microorganisms
- Y10S435/822—Microorganisms using bacteria or actinomycetales
- Y10S435/827—Actinoplanes
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Zoology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Microbiology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Virology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- General Preparation And Processing Of Foods (AREA)
- Seasonings (AREA)
Description
' 1
DK 165703 B
Opfindelsen angår en fremgangsmåde til fremstilling af teicoplanin A2 (T—A2) selektivt beriget med hensyn til hvilke som helst af dets hovedkomponenter T-A2-1, Τ-Δ2-2, T-A2-3, T-A2-4 eller T-A2-5, idet fremstillingen 5 sker ved dyrkning af Actincplanes teichomyceticus nov. sp. ATCC 31121 eller en mutant deraf med væsentligt samme egenskaber, fortrinsvis ved en temperatur på 25-35°C, ‘navnlig 27-35°C, i et dyrkningsmedium derfor.
Teicoplanin (tidligere benævnt teichomycin) er et 10 glykopeptid-antibiotikum som fremstilles ved at man dyrker Actinoplanes teichomyceticus nov. sp. ATCC 31121. Dette antibiotikum er aktivt i hovedsagen mod infektioner af grampositive bakterier.
Ifølge den fremgangsmåde der er beskrevet i US pa-15 tentskrift nr. 4.239.751 isoleres teicoplanin fra gæringssuppen fra den producerende stamme som et kompleks der indeholder tre faktorer benævnt A^, A2 og A^. Faktor A2 er tilstede i overvejende mængde i det antibiotiske kompleks som vindes ved gæring af nævnte stamme og er den mest be-20 tydningsfulde for kompleksets biologiske virkninger. Faktorerne A^ og A^ er tilstede i mindre mængder.
Ifølge US 4.239.751 isoleres teicoplanin A2 (T-A2) fra de andre faktorer af teicoplaninkomplekset ved søjle-kromatografering på "Sephadex LH-20, et hydroxypropyl-25 derivat af en tværbundet polydextrangel med en eksklusionsgrænse ved molekylvægt ca. 4000.
Ved fremstillings- og rensningsprocesser i stor målestok (eksempler på disse behandlinger er givet i europæisk patentansøgningspublikation nr. 0122969) vindes 30 der som regel et teichomycinprodukt som i det væsentlige består af teicoplanin A2, ledsaget af en lille mængde teicoplanin A^. Dette produkt er egnet til praktisk anvendelse i terapien, se Drugs of the Future, bind 9, nr. 6, 1984, side 429-430, redigeret af J.R. Prous Publishers, Barce-35 lona, Spanien.
En afhandling offentliggjort af A. Borghi, C. Coro-nelli et al. i Journal of Antibiotics bind 37, nr. 6, side 615-620, juni 1984, angiver at teicoplanin faktor A2 (T- 2
DK 165703B
A2) for sit vedkommende er en blanding af 5 nært beslægtede hovedkomponenter med meget ensartede polaritet.
Disse komponenter, der betegnes T-A2-1, T-A2-2, T-A2-3, T-A2-4 og T-A2-5, blev isoleret ved at man i et 5 første trin anvendte reversfase fordelingskromatografering ved normalt tryk på en silaniseret silikagelkolonne. Rensningen af komponenterne T-A2-3, T-A2-4 og T-A2-5 fordrede et yderligere trin med anvendelse af halvpræparativ HPLC på en Whatman "Partisil" ODS M-9-kolonne under eluering 10 med en 0,2%s vandig ammoniumformiat/acetonitrilblanding 76:24. Alle disse komponenter er blevet kemisk og biologisk karakteriseret. Se også offentliggjort britisk patentansøgning nr. 2.121.401.
Strukturelle undersøgelser offentliggjort af J.C.J.
15 Barna, D.M. Williams et al. i J. Am. Chem. Soc. 1984, 106, 4895-4902, viser at hovedkomponenterne af teicoplanin A2 kan gengives ved følgende strukturformel: ψ C3L.CH OR cl α3-ο- Cl i r Κ0\ϊΓΓ \θ
20 y uL
CH, 0 1 U 1 3 O IHA I® n Vn'7h " H |n n 1 ? JL 0 Jk. 0
hct^ * 0H
l Hl 30
X
hvor:
35 R / --T^OH
if ° Η I 2
H
3
DK 165703B
T-A2-1: R' = -CO-(CH2)2-CH=CH-(CH2)4-CH3 ((Z)-4-decenoyl) T-A2-2: R' = -CO-(CH2)6-CH(CH3)2 (8-metylnonanoyl) T-A2-3: R' = -CO-(CH2)g-CH3 (n-decanoyl) 5 CH~ T-A2-4: R' = -CO- (CH~) J (8-metyldecanoyl) 'C2«5 T-A2-5: R' = -CO-(CH2)^-CH(CH3)2 (9-metyldecanoyl)
Forsøg in vitro og in vivo anført i ovennævnte offentliggjorte britiske patentansøgning nr. 2.121.401 viser at enhver af komponenterne.T-A2-2, T-A2-3, T-A2-4 og T-A2-5 er mere aktive end teicoplanin A2-komplekset son helhed.
Det er derfor åbenbart at en fremgangsmåde til se-lektivt at forøge produktionen af hver af hovedkomponenterne af teicoplanin A2 er et væsentligt formål ved den industrielle gæring til fremstilling af teicoplanin. Den væsentlige tekniske fordel den kan frembyde angår både det formål at isolere de enkelte hovedkomponenter af T-A2 20 i ren form og muligheden for at vinde et T-A2-kompleks beriget med de mere aktive komponenter. Desuden frembyder muligheden for at modulere mængdeandelen af enkelte T-A2 hovedkomponenter i T-A2-komplekset i industriel gæring i stor målestok et nyttigt værktøj til at holde sammensætnin-25 gen konstant af gæringsproduktet som må svare til standard-specificationer. Med andre ord, når den procentuelle sammensætning af de enkelte komponenter af en hvilken son helst grund (fx en modificering af det industrielle dyrkningsmedium til anvendelse af mindre kostbare materialer) får tendens til at afvige fra standarden, frembyder muligheden for selektivt at forøge enhver af T-A2 hovedkomponenterne et nyttigt værktøj til at korrigere en sådan defekt.
Det er opfindelsens formål at tilvejebringe en fremgangsmåde til selektivt at forøge andelen af de enkelte ^ T-A2 hovedkomponenter i T-A2-komplekset. Nærmere betegnet er det opfindelsen formål at tilveje en fremgangsmåde til at vinde teicoplanin A2 selektivt beriget med hensyn til en 4
DK 165703B
hvilken som helst af dets hovedkomponenter T-A2-1, T-A2-2, T-A2-3, T-A2-4 og T-A2-5, idet fremstillingen sker ved dyrkning af Actinoplanes teichomyceticus nov. sp.
ATCC 31121 eller en mutant deraf med væsentligt samme 5 egenskaber, fortrinsvis ved en temperatur på 25-35°C, navnlig 27-35°C, i et dyrkningsmedium derfor, hvilken fremgangsmåde er ejendommelig ved at der til dyrkningsmediet, fortrinsvis 24-48 timer efter gæringens påbegyndelse, sættes en selektivt effektiv mængde af en eller 10 flere passende prækursorer for vedkommende acylgruppe i glukosamindelen i T-A2 (se de ovenfor viste betydninger af R'), i det følgende betegnet "passende prækursor" nemlig således at: a) den passende prækursor til forøgelse af andelen 15af T-A2-1 i T-A2-komplekset er udvalgt blandt linolsyre, salte deraf med baser som er ugiftige for mikroorganismen og estere deraf med lavere mono- og polyhydroxyalkanoler, b) den passende prækursor til forøgelse af andelen af T-A2-2 i T-A2-komplekset er udvalgt blandt valin, salte 20 deraf med syrer og baser som er ugiftige for mikroorganismen, α-keto-isovalerianesyre, salte deraf med baser som er ugiftige for mikroorganismen, estere deraf med lavere mono-og polyhydroxyalkanoler, isosmørsyre, salte deraf med baser som er ugiftige for mikroorganismen, estere deraf med 25 lavere mono- og polyhydroxyalkanoler og isobutanol og estere deraf med syrer som er ugiftige for mikroorganismen, c) den passende prækursor til forøgelse af andelen af T-A2-3 i T-A2-komplekset er udvalgt blandt oliesyre, salte deraf med baser som er ugiftige for mikroorganismen 30 og estere deraf med lavere mono- og polyhydroxyalkanoler, d) den passende prækursor til forøgelsen af andelen af T-A2-4 i T-A2-komplekset er udvalgt blandt isoleucin, salte deraf med syrer og baser som er ugiftige for mikroorganismen, α-keto-S-metylvalerianesyre, salte deraf med 35 baser som er ugiftige for mikroorganismen, estere deraf med lavere mono- og polyhydroxyalkanoler, 2-metylsmørsyre, salte deraf med baser som er ugiftige for mikroorganis
DK 165703 B
5 men, estere deraf med laveré mono- og polyhydroxyalkano-ler og 2-metylbutanol og estere deraf med syrer som er u-giftige for mikroorganismen, og e) den passende prækurs or til forøgelse af andelen 5 af T-A2-5 i T-A2-komplekset er udvalgt blandt leucin, salte deraf med syrer og baser som er ugiftige for mikroorganismen, isovalerianesyre, salte deraf med baser som er ugiftige for mikroorganismen, estere deraf med lavere mono- og polyhydroxyalkanoler, a-keto-isokapronsyre, salte 10 deraf med baser som er ugiftige for mikroorganismen, estere deraf med lavere mono- og polyhydroxyalkanoler, iso-amylalkohol og estere deraf med syrer som er ugiftige for mikroorganismen.
Salte med baser som er ugiftige for mikroorganismen er salte hvor typen og koncentrationen af den givne kation er en sådan at den ikke forringer væksten af mikroorganismekulturen eller produktionen af det ønskede antibiotiske stof i væsentlig grad. Eksempler på sådanne kationer er natrium, kalium og ammonium.
Estere med lavere mono- og polyhydroxyalkanoler er estere med C^-C^-alkanoler med 1, 2, 3, 4, 5 eller 6 hy-droxyfunktioner pr. molekyle.
Når der bruges C^-Cg-alkanoler må de være forskellige fra dem der virker som prækursorer for andre hoved- 25 komponenter af T-A2 (fx isobutanol, isoamylalkohol og 2-metylbutanol) med mindre der ønskes samtidig forøgelse af en eller flere af disse komponenter.
Foretrukne eksempler på polyhydroxyalkanoler er glycerol og propylenglykol.
30 Når den lavere alkanol eksisterer i forskellige enantiomere og epimere former, sigtes der i nærværende beskrivelse med tilhørende krav både til hver enkelt form for sig og til blandinger af de enkelte former i et hvilket som helst mængdeforhold.
35 Estere som er ugiftige for mikroorganismen er C^-
C22~a^^an°ylestere hvor typen og koncentrationen af al-kanoyldelen i gæringsmediet er en sådan at den ikke forringer væksten af mikroorganismekulturen eller produktionen af det ønskede antibiotiske stof i væsentlig grad. I
DK 165703 B
6 almindelighed foretrækkes der ligekædede C2“C4~alkanoler.
Fremgangsm-åden ifølge opfindélsen indebærer at man dyrker ovennævnte mikroorganismestamme i et dyrkningsmedium, sædvanligvis et vandigt nærings-dyrkningsmedium indeholdende en assimilerbar kilde til kulstof, en assimilerbar kilde til nitrogen og uor-5 ganiske salte under de sædvanlige betingelser der er beskrevet i teknikken til fremstilling af teicoplanin, med den forbedring at der sættes en selektivt effektiv mængde af en passende prækursor til gæringsmediet før podning af stammen eller under gæringsprocessen for selektivt at 10 forøge produktionen af en eller flere af teicoplanin A^-komponenterne T-A2-1, T-A2-2, T-A2-3, T-A2-4 og T-A2-5.
I nærværende beskrivelse og i kravene sigtes der med udtrykket "selektivt effektiv mængde" til en sådan mængde af den selektive prækursor, at den ved tilsætning ^ til dyrkningsmediet giver en koncentration af selektiv prækursor som er tilstrækkelig til at frembringe den selektive forøgelse af en specifik komponent af T-A2-kom-plekset uden at fremkalde virkninger som er toxiske for mikroorganismen.
20 De nærings-gæringsmedier som er egnede til gæring af den T-A2 producerende stamme og som kan bruges ved fremgangsmåden ifølge opfindelsen indeholder sædvanligvis: en passende kulstofkilde som fx kan være udvalgt blandt sukkerarter (fx glukose, sakkarose, maltose), po-25 lysakkarider (fx stivelse eller dextran) og polyalkoholer.
(fx glycerol eller propylenglykol); en passende nitrogenkilde som fx kan være udvalgt blandt ammoniumsalte, as-paragin, jordnøddemel, soyamel, kødekstrakt, trypton, pepton, gærhydrolysat, gærekstrakt og majsstøbevand; og 30 mineralske salte såsom natriumklorid, kaliumkarbonat og magnesiumsulfat.
DK 165703 B
7 Gæringen udføres i en periode som f.eks. varierer fra 50 til 200 timer under aerobe betingelser ved en temperatur på 25-35°C, fortrinsvis på 27-33°C. Tilsætning af en selektivt effektiv mængde af passende prækur-5 sorer kan ske til gæringsmedierne før podningen af den producerende stamme, men den sker fortrinsvis 24-48 timer efter at gæringen er gået i gang. Tilsætningen kan foregå i en eller flere portioner eller på kontinuerlig måde.
10 Ved et typisk eksperiment med fremgangsmåden iføl ge opfindelsen podes Actinoplanes teichomyceticus-stammen fra havremelsagar-skråkulturer i en kolbe indeholdende 100 ml vegetativt medium. Efter 36 timer bruges der prøver af kulturen (5 ml) til podning af en række gæringskolber in-15 deholdende 100 ml gæringsmedium. Efter 24-48 timers gæring tilsættes der den selektivt effektive mængde af vedkommende prækursor. Hvis der ønskes samtidig forøgelse af to eller flere hovedkomponenter af T-A2-komplekset, kan der sættes to eller flere prækursorer til samme gæ-20 ringskolbe. Gæringen fortsættes i yderligere 60-150 timer hvorpå mediet fracentrifugeres og prøver af suppen analyseres for koncentrationerne af hovedkomponenterne af T-A2 ved højtydende væskekromatografering (HPLC).
Tilsætningen af prækursor foretages i almindelig-25 hed på en sådan måde at man ikke ændrer gæringsmediets forudbestemte pH-værdi. Når der således fx sættes prækursorer i form af fri syre direkte til mediet, holdes pH-værdien under kontrol ved pufring af mediet eller ved øjeblikkelig neutralisation med baser som er ugiftige for 30 mikroorganismen.
Når den prækursor der skal tilsættes er en aminosyre kan den føres til gæringsmediet i form af en vandig opløsning af salte deraf med syrer og baser som ikke er giftige for den producerende mikroorganisme, fx hy-35 droklorider eller natriumsalte. Der kan bruges både ra-cemiske blandinger og optisk aktive isomerer som prækursorer.
DK 165703 B
8 I det mindste i nogle tilfælde giver tilsætning af L-formen imidlertid højere udbytte end tilsætning af den tilsvarende D-form.
En foretrukken udførelsesform for fremgangsmåden 5 ifølge opfindelsen består derfor i at bruge en L-amino-syreprækursor til forøgelse af koncentrationen af T-A2-2 (valin eller et salt eller en ester deraf), T-A2-4 (L-isoleucin eller et salt eller en ester deraf) og/eller T-A2-5 (L-leucin eller et salt eller en ester deraf) i 10 teicoplanin A2~komplekset. Ifølge den foretrukne udførelsesform er det muligt at forøge procentdelen af T-A2-2, T-A2-4 eller T-A2-5 i gæringsproduktet op til 90-95% af komplekset.
Med lavere alkansyreprækursorer (fx isosmørsyre, 15 2-metylsmørsyre, isovalerianesyre, a-keto-iscvalerianesyre, a-keto-B-metylvalerianesyre og α-keto-isokapronsyre) kan tilsætningen ske i form af en vandig opløsning af salte deraf med ugiftige baser; som regel foretrækkes aromoniura-og natriumsalte.
20 Når der bruges salte af umættede fedtsyrer såsom linolsyre og oliesyre som prækursor, foretrækkes i almindelighed natrium- og ammoniumsalte. Imidlertid kan man bruge et hvilket som helst salt med en base som ikke er giftig for den producerende stamme.
25 Når der bruges estere af de ovennævnte lavere alkansyrer og umættede fedtsyrer med lavere monohydroxy-alkanoler som prækursorer, er det som regel estere med metanol, ætanol eller propanol, selv om der også kan bruges estere med C^-C^-alkanoler. I dette tilfælde må C^-r 30 Cg-alkanolen være forskellig fra de alkanole'r der kån virke som prækursorer for andre hovedkomponenter af T-A2 (fx isobutanol, isoamylalkohol og 2-metylbutanol) med mindre der ønskes samtidig forøgelse af en eller flere af disse komponenter.
35 Foretrukne estere af de nævnte lavere alkansyrer og umættede fedtsyrer med lavere polyhydroxyalkanoler er estrene med ætylenglykol og glycerol, fx triisobutyrin, triolein og trilinolein.
9
DK 165703B
Tilsætningen af umættede fedtsyrer kan også udføres ved at man anvender naturlige råmaterialer der indeholder disse syrer som sådanne eller deres glycerider.
Fx indeholder handelsvaren soyaolie som regel fra ca. 20 5 til ca. 35% oliesyre og omkring 50-60% linolsyrer som tri-glycerider; svinefedt indeholder omkring 40-55% oliesyre; bomuldsfrøolie indeholder omkring 20-45% oliesyre og omkring 30-55% linolsyre; solsikkefrøolie indeholder omkring 15-25% oliesyre og omkring 65-75% linolsyre.
10 Alkanolprækursorer såsom isobutanol, isoamylalko- hol og 2-metylbutanol tilsættes som regel som sådanne til gæringsmediet. De kan imidlertid også anvendes som estere med syrer som er ugiftige for mikroorganismen. Disse syrer må være anderledes end dem der virker som prækur-15 sorer for andre hovedkomponenter af T-A2 (fx isosmørsyre, isovalerianesyre, 2-metylsmørsyre og linolsyre) med mindre der ønskes samtidig forøgelse af en eller flere af disse komponenter. Sædvanligvis foretrækkes der estere med li-gekædede lavere alkansyrer såsom eddikesyre, propionsyre 20 eller smørsyre.
Den "selektivt effektive mængde" som skal sættes til gæringsmediet i henhold til opfindelsen afhænger af prækursorens type. Ved anvendelse af estrene af de lavere alkansyrer (isosmørsyre, 2-metylsmørsyre og isova-25 lerianesyre) og estrene af umættede fedtsyrer (linolsyre, oliesyre) anvendes der mængder til frembringelse af en koncentration i gæringsmediet mellem 0,5 g/1 og 15 g/1, idet området 1-5 g/1 foretrækkes. Ved anvendelse af de lavere alkanoler (isobutanol, 2-metylbutanol, isoamylalko-' 30 hol) eller estere med syrer som er ugiftige for mikroor ganismen, anvendes der som regel mængder som frembringer en koncentration mellem 0,5 g/1 og 5 g/1, hvorved området 1-2 g/1 foretrækkes.
Ved anvendelse af aminosyrer (fx valin, leucin, 35 isoleucin) og keto-syrerne (a-keto-isovalerianesyre, a-keto-B-metylvalerianesyre, α-keto-isokapronsyre) eller salte deraf med syrer og baser, ligger den selektivt effektive mængde, der sættes til gæringsmediet, som regel
DK 165703B
ίο mellem 0,5 g/1 og 5 g/1, idet området 1-3 g/1 foretrækkes.
I tilfælde hvor de lavere alkansyrer (fx isosmør-syre, 2-metylsmørsyre, isovalerianesyre), de umættede fedt-5 syrer (fx linolsyre, oliesyre) eller deres salte sættes direkte til gæringsmediet, ligger den selektivt effektive mængde som regel 'mellem 0,1 g/1 og 2,5 g/1, idet området fra 0,3 g/1 til 1,5 g/1 foretrækkes.
Højere koncentrationer er stadig effektive til 10 fremme af den selektive forøgelse af hovedkomponenterne af T-A2, men det samlede udbytte af T-A2-kompleks går ned p.g.a. giftvirningerne på mikroorganismen.
De følgende eksempler beskriver udførligt forskellige særlige udførelsesformer for fremgangsmåden ifølge 15 opfindelsen.
Eksempel 1 20 Én havremelsagar-skråkultur af Actinoplanes teicho- myceticus nov. sp. ATCC 31121 podedes i en 500 ml stor kolbe indeholdende 100 ml af følgende dyrkningsmedium:
Glukose 10 g/1
Pepton (fra Difc.o) 4 g/1 ^ Gærekstrakt 4 g/1
MgS04 0,5 g/1
CaCO^ 5 g/1
Standard oligokom- ponenter 1 ml af hver af opløsnin gerne A, B og C 30 vand 1000 ml (pH reguleret til 6,7 efter sterilisation)
Opløsning A: 10% v/r natriumklorid Opløsning B: 10% v/r kalciumklorid 35 Opløsning C: 50 mg H^BO^; 4 mg CuSO^ ; 10 mg Kl; 20 mg
FeCl^; 40 mg MgSO^; 40 mg FeS04; 20 mg (NH4)2M°o4 i 100 ml destilleret vand.
DK 165703 B
11 (v/r: vægt/rumfang, dvs. forhold mellem enheder af fast stof og væske som mg og ml).
Efter 36 timers dyrkning på en roterende ryster brugtes der 5 ml af kulturen til podning af prøvekol-5 berne og standardkolber indeholdende hver 100 ml gæringsmedium med følgende sammensætning: Gærlysat 5 g/1
Asparagin 1,5 g/1
Glukose 20 g/1 10
MgS04 0,5 g/1
CaC03 5 g/1
Standard oligoelementer 1 ml af hver af opløsningerne A, B og C
vand 1000 ml 15 (pH reguleret til 6,9 efter sterilisation) Opløsningerne A, B og C som foran.
Gæringen udførtes ved 28-30°C på en roterende ryster. Efter 24 timer tilsattes den ønskede prækursor.
20 Kulturen centrifugeredes efter 72 timer og prøver på 50 mikroliter af suppen analyseredes for koncentrationen af hovedkomponenterne af T-A2.
Analysen udførtes ved følgende HPLC-metode: ^2. _Ad.sk i Ile Ise__ved_gradient-revers fasefor deling 2 5
Instrument: pumpe-"Varian"® 5000 A; detektor "Varian"^' ved 254 n.m; 'S' injektor "Rheodyne"'-' model 7125; integrator: "Spectra"^ Physics model 4000; 30 Kolonne: "Zorbax" ODS 5 pm, 4,6 x 150 mm (Du Pont);
Mobil fase: A) CH3CN/0,025 M NaH2P04 1:9, pH 6,0 B) CH3CN/0,025 M NaH2P04 7:3, pH 6,0
Gradient- 35 profil: lineær fra 0% B til 50% B i 30 min.; strømningshastighed 2 ml/min.
DK 165703 B
12
Insprøjtning: 50 μΐ gæringssuppe, retentionstider (min.): T-A2-1 * 16,9 T-A2-2 =18,0 T-A2-3 =18,6 5 T-A2-4 = 20,5 T-A2-5 = 20,9
Intern standard: 3,5-dihydroxytoluen (retentionstid 6,3 min.).
10
Komponenterne adskiltes på den ovenfor beskrevne måde og deres relative fordeling blev bestemt som procent af summen af de fem toppe ved arealprocentmeto-15 den.
DK 165703 B
13 ΙΟ JO M O f ro i- o f isjt-'or 5
Ui Ulf UI H ^ < 43 42 ΐ! Μ ™ m tfl Dj (D (D (D tp
C O 1--3 3 3 fiJ
O Η H· rr Η· Φ 3 3 3 C £* — Ρ· 3 ώ 3 3 0)
Dj γ+ rt Λ ** l-s 3 Η· η· O1 £ C r+ 3 3 Μ 05
c2 C H iCW
t-> ίΟ Λ U> t-> Η» Η» (- 3 Ό Cl tO (+ WWW iØ&3 oo ui -o n· m u h a ίο λ uj ^ 'jo·^ , l? Ψ.
^ 1J lo u — ID ti ΟΙ [tt UI OD UI 13U10 H*
j—i ft IW
rt £ ί* w fl> O M tO tO Μ M tO OOM (—1 tO tO *3
, -. ' ' ' ' ' I
00 vj O I—1 -O 00 O U5 OD Ul OOH-O dO >
M
η ω iu <u κ w w oo ό u> ujujuj H3
(O yi yi vi Ui ti ίΰ U> O to tO tO O I
' ' - « >· ' ' ' - ' \ ^ K , a\ & o uimuj o*iH> VOO^ ^ tu * i—* to I—* tO fUPOt—' *"3
fo v£> —j i_n rf^UJO 05 to o O O 00 I
........ -'i- ' ' ' <#> 3> OUlOtO fi U1 A tOÆ»Ul ·* OS M ^
OJ
t-> oi'f'U) i-1 to to to i-3
I—1 CO V3 U1 CS O tO U ID i» O os J
•Γ .Γ . . > ' ' c» >
UI O UI M Ul tO I—1 O 00 O 1—* t—’ «—' tO
Λ· vJJiUJtO (-< to H1 t-1 to to to 1-3
Ul (Π in 10 Ul O Cl ωσΐΜ OUlUJ I
. , .. - - - - ~ - ' ' c» >
UlJiOOO v£5 45. tO UI Ό 1X> OOU) tO
ui 14
DK 165703B
ui to 1-3 ib μ ή ίο «υ*-3 l-s Γ( I \ Η· Η- Μ U1 < Μ Η-1 Η* Ο fU 01 Η· Μ Μ Rj 3 CD Η· ΓΙΟ Μ 3 3 M3 Η- Π) 3 Η* ~ 35 ιΩ 3 Η· Π 3 Μ Οι --- (5 3* Ο Μ Οι . ro -jr c ω ω ω to ίο ι-j -ο uQOjOj ui b υι w in \ er 3
in M 00 O Η O M*< M
o rt ro π- rf < ro
K
iQ
rt i-3
ΙΟ ΙΟ Μ Μ I
M 10 toiorto (*p> ' ' ' ' l-( ' to
to O lo o i-·· to I
Μ M
M 3 to to Μ M O 00 >3
to o σι ό Μ σι I
·»* · ·> ro ' (*p> V£> ΙΟ M to M to to
3 I
w to MM ife Jb 1-3
—J >fc> 00 M 00 I
» ' * * » ύΡ J>
Æ* O 00 O -0 tO
(O
M tO Μ M 1-3 σι σ σι oo to i % · - -* ·« (Jj> 10 Μ 10 10 00 to .fc.
Μ Μ Μ M 1-3
Μ Ό O O tO I
' ·· * · » λ0 5>
U1 Μ ΙΟ ΙΟ M tO
in
DK 165703 B
15 ΙΟ rt tO M H H MlQ 1-3 i cn 3 \ h· O 5
S o iQ rt rt it CL
Φ cr (D cn tn rr c 3 flj S fl) *< r+ rt cQ rt i-. 3 3 tn
rr 3 H· H UQ
c O 3 ffi to
rt- I—I ιΟ X
3 X ti 3 0>
O O
rt 0 3 Ό 3 Ό 3» to- tsj toji it& ΐ c cn φ ej·i fo mon (Ti iQ Qj to QjQj tn u> 00 O o\CT3 0Φ h tn 3
X fD
rt r+ Mim
fD SO
H* tt v£J 3 (_>(0 rt to to t-3 fD 3 ·» > > - * 13
>j w ι^σ\ w dP & CT
to (D fD
i tn
H CL X
3 l-S
(+ fD
o\ in ·£» i-3 to < crsfo oto ·£* I “2
„ ·. ·.*>> fD
U) h1 ~J w 1-1 t° „ I 3 to to* O.
fD
)— I— rt rt N5 1-3 O tn tn CTi o I t-'· » > > dP > (J1 to to CD CO to rø I 3 u> ·<
CL
W to rt1 rt* t- ^2 o (Τ' u cn tn i “ - « dP > t—* |_I rt CO to to ^H·
** fD
tt
(D
rt rt rt rt1 »-3 rt .&· cd to ~4 · , „ » tiP > ,c* rt 01 »fe -0 to tn
DK 165703 B
16
Eksempel 2 éi5§D_i£§iD2§!?2§ii)å^§
Actinoplanes teichomyceticus nov. sp. ATCC 31121 for-dyrkedes i en 500 ml stor rystekolbe indeholdende 100 5 ml af følgende medium: Kødekstrakt 3 g/1
Trypton 5 g/1 Gærekstrakt 5 g/1
Glukose 1 g/1 ^ Opløselig stivelse 24 g/1
Kalciumkarbonat 5 g/1
Vand 1000 ml (pH reguleret til 6,7 efter sterilisation).
15 Kolberne rystedes i 24 timer ved 28-30°C hvorpå forkulturen brugtes til podning af krukkefermentorer hver indeholdende 10 1 af følgende næringsmedium: Kødekstrakt 4 g/1
Pepton 4 g/1 ^ Gærekstrakt 1 g/1
Natriumklorid 2,5 g/1
Soyabønnemel 10 g/1
Glukose 50 g/1
Kalciumkarbonat 5 g/1 ^ Postevand indtil 1000 ml (pH reguleret til 6,9 efter sterilisation).
Fermentorerne blev inkuberet aerobt under omrøring i 24 timer og derpå tilsattes vedkommende prækursor.
30 Gæringen fortsattes i yderligere 90 timer hvorpå der ind-høstedes. Prøver af suppen (100 ml) blev filtreret ved pH 11 (pH reguleredes ved tilsætning af 20% v/r natriumhydroxid) og analyseredes ved den i eksempel 1 beskrevne metode ved indsprøjtning af 40 μΐ af hver filtreret prøve-35 opløsning, hvis pH var reguleret til 7,38 med 0,1 M fosfatpuffer.
17
DK 165703B
tsj 3; m t-3 m *-3 hhiQ*-3 ^ W h- i tD ° ° ^ £ 5 5 > £ ro£ o h 5 » g *< ro ro 5 ΓΓ h-j 0) H· O 3 to f+ 3 t1 ~ 3 ro © 5
Q 1-5 M UJ
m tu >< m i-t ro
ui 05 vj sj » U1*J C^Oj-nCW
u ^ m io o vucn oo-o^aa o CTi O tO tO O' fe ΛΟΟ \Cf 3
M*< M
rt ro rt rt ro m m i-3 ui fe w υΐΛ. n yi w æ* i N N ^ «* «. * 09 ^ si to cd o o com unm (o
M
i, ^ fe M fe M fe U1 U1 >3
i—i O O VO >£> Μ Ut O O I
s % > - ~ c» 5> U> VO U> OJ O MM OVD *0 ro I—' i—i Λ ro MM MM H3 VO M m VO (Ti O M u> O' * s , , s » *-(#>> u\ i£i ro rovo m o mo to w WWW Μ M MM >3 sj (Jl H VOU) U1N) ^ * ^ ^ ^ «· *» ^ ^ 0*P >P^ to si o oo oo mat o oo to M MM MM >3
5\ sj O σ\ M o to Ja-to I
^ ·* *· * dP
(o u si -J W to >J rfaCO to u> 18
DK 165703B
(O tO M F Μ O H tn lo Η 2 Μ O KJ cQ t-3 i ' - ω ro - « i x η-
< tn tn o r+ tn tn 3 Η M
DJ co ·< Φ cn H 3 H (+ ffi η· Q (-*· >< rt 3 t-s W H 3 cn o cn η· ~ σ 3 d
Ό I-! P S tQ
C (D rt M
f-n c< cn h -- ii n> 3 ro tt r+ ro (+ ro rt o tf ^ m u ιϋ Ό to tn h· ro *> σ co Ln 3 r c cn ui'JuiH' H* to p kj o æ yi up tQ p, ro o -o oo S * w g o to to -j nit \ cr 3 cn cn h μ*< m 3 ro h· rt ro η· c-1 p rt rt 3 rt 3 ro iQ — cn ro
H
r+ I—1 (O tO ΙΟ tO U W Cl U1 CO'-' 1-3
^ ·» S ^ ^ s > *» ^ ^ J
CD KJ CO tO 00 H 5\ ti O 00 <Sf> > to
H
co oo -o -J σ cd oo σ> toto H3
tn to CD CD CD OO^J t n -co I
-»·- - -· ·» -s -- -· ςρρ
W CD W -OH* 00 00 CO CDCTl KJ
to H h-1 i—1 Η Μ Μ H f—1 f-3
CD CD O tO 00 KJ KJ (_Π O *» I
^ ^ ' s -**-- -i -· dp σ *» ro tn *» to in cd σ σ to t to *» to t-3
I-1 Η *» t-· *» Η Μ σι MtO I
> -« ' -· -- - « > -i ή ctp^y to σ to oo*» σ oo *» co to *» •3 tO M l*J (->*» tO tO tn -J CD I.
^ -· ** ^ dp O cd cd Όΐο co to cn H-J to tn 19
DK 165703B
t—' co h ra p di p- to iQ p3 O O O O O < O O \ P1· h-ι i< p*· g p-1 p-1 cn QJ 3 e m p·· σ (D H* ft! * 8 Ph & r+ ?r 3 ro ro 3 ro 3 O, Ph ζ pti 2 (* ^ .5 P! O S 10 S ^ 0
o !:· M
p^ ro p*· p*> ro ro σ\ "J cn c c w i U) O Ό iQ Dj Bl tO -O CO P-1 \ CT 3 P-“< P-1 r+ ro rt r+ ro u> oo w p3 p-> vd oo i
·* ^ dP [P
ID P-> 00 Nj P-1 ω to od to p3
P-> Od σ CPi I
·* ·» % · dP
00 00 P-> .&> to p-ι tO 00 tO p3
00 P^ O tO I
, - dP > cn σ od vo N->
Od
C0 -O M O I
·« > *· *· cpp D> 00 Λ Od O to
O ~J OT Ό ’"S
JL
pj Od IO Js· dP > to cn 20
DK 165703B
Til sammenligningsformål sattes der myristinsyre, tripalmitin og tristearin til tre . krukkefermentorer i koncentrationer på henholdsvis 1 g/1, 5 g/1 og 10 g/1 under samme betingelser som foran. Der konstateredes ikke 5 nogen forøgende virkning på nogen af hovedkomponenterne af T-A2.
Eksempel 3 jLQ Actinoplanes teichomyceticus nov. sp. ATCC 31121 for-dyrkedes som beskrevet i eksempel 2. Kolberne med forkulturen blev brugt til podning af en krukkefermentor indeholdende 10 1 af det i eksempel 2 beskrevne nærings-medium.
2^5 Ferment or en inkuberedes aerobt under omrøring ved 25°C i 24 timer hvorpå der tilsattes 2 g/1 L-valin. L-valinet var i forvejen blevet opløst i vand (2 g/15 ml) ved tilsætning af svovlsyre til en pH-værdi på 3 og den vundne opløsning var blevet omrørt ved 120°C i 10 minut- 20 ter' Gæringen fortsattes ved 25°C i yderligere 50 timer hvorpå der indhøstedes.
Suppen filtreredes ved pH 11 og analyseredes på den i eksempel 1 beskrevne måde? den indeholdt 220 yg/1 25 T-A2 med følgende sammensætning: 2% T-A2-1, 95% T-A2-2, 3% T-A2-3.
Claims (8)
1. Fremgangsmåde til fremstilling af teicoplanin A2 (T-A2) selektivt beriget med hensyn til hvilke som helst af dets hovedkomponenter T-A2-1, T-A2-2, T-A2-3, T-A2-4 5 eller T-A2-5, idet fremstillingen sker ved dyrkning af Actinoplanes teichomyceticus nov. sp. ATCC 31121 eller en mutant deraf med væsentligt samme egenskaber, fortrinsvis ved en temperatur på 25-35°C, navnlig 27-33°C, i et dyrkningsmedium derfor, kende-10 tegnet ved at der til dyrkningsmediet, fortrinsvis 24-48 timer efter gæringens påbegyndelse, sættes en selektivt effektiv-mængde af en eller flere passende praekursorer for ved-kårmende acylgruppe i glukosamindelen af T-A2, nemlig således at 15 a) prækursoren til forøgelse af andelen af T-A2-1 i T-A2-komplekset er udvalgt blandt linolsyre, salte deraf med baser som er ugiftige for mikroorganismen og estere deraf med lavere mono- og polyhydroxyalkanoler; b) prækursoren til forøgelse af andelen af T-A2-2 i 20 T-A2-komplekset er udvalgt blandt valin, salte deraf med syrer og baser som er ugiftige for mikroorganismen, a-keto-isovalerianesyre, salte deraf med baser som er ugiftige for mikroorganismen, estere deraf med lavere mono-og polyhydroxyalkanoler, isosmørsyre, salte deraf med ba-25 ser som er ugifte for mikroorganismen, estere deraf med lavere mono- og polyhydroxyalkanoler, isobutanol og estere deraf med syrer som er ugiftige for mikroorganismen; c) prækursoren til forøgelse af andelen af T-A2-3 i T-A2-komplekset er udvalgt blandt oliesyre > salte deraf 30 med baser som er ugifte for mikroorganismen og estere deraf med lavere mono- og polyhydroxyalkanoler; d) prækursoren til forøgelse af andelen af T-A2-4 i T-A2-komplekset er udvalgt blandt isoleucin, salte deraf med syrer og baser som er ugiftige for mikroorganismen, ot- 35 keto-S-metylvalerianesyre, salte deraf med baser som er ugiftige for mikroorganismen, estere deraf med lavere mono-og polyhydroxyalkanoler, 2-metylsmørsyre, salte deraf med DK 165703B baser som er ugiftige for mikroorganismen, estere deraf med lavere mono- og polyhydroxyalkanoler, 2-metylbutanol og estere deraf med syrer som er ugiftige for mikroorganismen ; og i . / 5 e) prækursoren til forøgelse af andelen af T-A2-5 i / i T-A2-komplekset er udvalgt blandt leucin, salte deraf med / syrer og baser som er ugiftige for mikroorganismen, iso- / valerianesyre, salte deraf med baser som er ugiftige for j mikroorganismen, estere deraf med lavere mono- og poly- / 10 hydroxyalkanoler, α-keto-isokapronsyre, salte deraf med j baser som er ugiftige for mikroorganismer, estere deraf j med lavere mono- og hydroxyalkanoler, isoamylalkohol og j estere deraf med syrer som er ugiftige for mikroorganis- | « men. I
2. Fremgangsmåde ifølge krav 1 (a), kendete g- \ net ved at der som prækursor tilsættes linolsyre eller \ et salt deraf med en base som er ugiftig for mikroorganis- \ men, hvorved den selektivt effektive mængde er 0,1-2,5 \ g/1, fortrinsvis 0,3-1,5 g/1, eller \ 20 en ester af linolsyre med en lavere mono- eller polyhydr- \ oxyalkanol, hvorved den selektivt effektive mængde er 0,5- ^ 15 g/1, fortrinsvis 1-5 g/1. "J
3. Fremgangsmåde ifølge krav 1 (b), kendetegnet ved at der som prækursor tilsættes valin eller et 25 salt deraf med en for mikroorganismen ugiftig syre eller base, hvorved den selektivt effektive mængde er 0,5-5 g/1, fortrinsvis 1-3 g/1, isosmørsyre eller et salt deraf med en for mikroorganismen ugiftig base, hvorved den selektivt effektive mængde er 30 0,1-2,5 g/1, fortrinsvis 0,3-1,5 g/1, eller en ester af isosmørsyre med en lavere mono- eller poly-hydroxyalkanol, hvorved den selektivt effektive mængde er 0,5-15 g/1, fortrinsvis 1-5 g/1, eller isobutanol eller en ester deraf med en for mikroorganis-35 men ugiftig syre, hvorved den selektivt effektive mængde er 0,5-5 g/1, fortrinsvis 1-2 g/1, eller a-keto-isovale-rianesyre eller et salt deraf med en for mikroorganismen ugiftig base eller en ester deraf med en lavere mono- el- DK 165703B ler polyhydroxyalkanol, hvorved den selektivt effektive mængde er 0,5-5 g/1, fortrinsvis 1-3 g/1.
4. Fremgangsmåde ifølge krav 1 (c), kendetegnet ved at der som prækurs or tilsættes oliesyre eller 5 et salt deraf med en for mikroorganismen ugiftig base, hvorved den selektivt effektive mængde er 0,1-2,5 g/1, fortrinsvis 0,3-1,5 g/1, eller en ester af oliesyre med en lavere mono- eler polyhydroxyalkanol, hvorved den selektivt effektive mængde er 0,5-15 10 g/1, fortrinsvis 1-5 g/1.
5. Fremgangsmåde ifølge krav 1 (d), kendetegnet ved at der som prækurs°r tilsættes isoleucin eller et salt deraf med en for mikroorganismen ugiftig syre eller base, hvorved den selektivt effektive mængde er 0,5- 15. g/1, fortrinvis 1-3 g/1, eller 2-metylsmørsyre eller et salt deraf med en for mikroorganismen ugiftig base, hvorved den selektivt effektive mængde er 0,1-2,5 g/1, fortrinsvis 0,3-1,5 g/1, eller en ester af 2-metylsmørsyre med en lavere mono- eller po-20 lyhydroxyalkanol, hvorved den selektivt effektive mængde er 0,5-15 g/1, fortrinsvis 1-5 g/1, eller 2-metylbutanol eller en ester deraf med en for mikroorganismen ugiftig syre, hvorved den selektivt effektive mængde er 0,5-5 g/1, fortrinsvis 1-2 g/1, eller 25 α-keto-Ø-metylvalerianesyre, et salt deraf med en for mikroorganismen ugiftig base eller en ester deraf med en lavere mono- eller polyhydroxyalkanol, hvorved den selektivt effektive mængde er 0,5-5 g/1, fortrinsvis 1-3 g/1.
6. Fremgangsmåde ifølge krav 1 (e), kendete g-30 net ved at der som prækursor tilsættes leucin eller et salt deraf med en for mikroorganismen ugiftig syre eller base, hvorved den selektivt effektive mængde er 0,5-5 g/1, fortrinsvis 1-3 g/1, eller isovalerianesyre eller et salt deraf med en for mikroorga-35 nismen ugiftig base, hvorved den selektivt effektive mængde er 0,1-2,5 g/1, fortrinsvis 0,3-1,5 g/1, eller en ester af isovalerianesyre med en lavere mono- eller DK 165703B polyhydroxyalkanol, hvorved den selektivt effektive mængde er 0,5-15 g/1, fortrinsvis 1-5 g/1, eller isoamylalkohol eller en ester deraf med en for mikroorganismen ugiftig syre, hvorved den selektivt effektive mæng-5 de er 0,5-5 g/1, fortrinsvis 1-2 g/1, eller α-keto-isokapronsyre, et salt deraf med en for mikroorganismen ugiftig base eller en ester deraf med en lavere mono- eller polyhydroxyalkanol, hvorved den selektivt effektive mængde er 0,5-5 g/1, fortrinsvis 1-3 g/1. 10 1· Fremgangsmåde ifølge krav 1, kendetegnet ved at et som prækursor anvendt salt med en for mikroorganismen ugiftig base er et natrium- eller ammoniumsalt, en som prækursor anvendt ester med en alkanol er en ester med metanol, ætanol, propanol, ætylenglykol eller glyce- 15 rol, et som prækursor anvendt salt med en for mikroorganismen ugiftig syre er et hydroklorid eller sulfat og en som prækursor anvendt ester med en for mikroorganismen u-giftig syre er en ester med eddikesyre, propionsyre eller smørsyre. 20 8* Fremgangsmåde ifølge krav 1, kendetegnet ved at en som prækursor anvendt aminosyre er i L-form.
9. Fremgangsmåde ifølge krav 1, 2 eller 4, kendetegnet ved at en som prækursor anvendt fedtsyre eller ester deraf tilsættes i form af et naturligt råmateri- 25 ale indeholdende vedkommende syre eller glycerider deraf.
10. Fremgangsmåde ifølge krav 1 til berigelse af tei-coplanin med hensyn til komponenterne 2, 4 eller 5 til en andel på indtil 95%, kendetegnet ved at man sætter en selektivt effektiv mængde af henholdsvis valin, 30 isoleucin eller leucin til gæringsmediet.
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| GB858512795A GB8512795D0 (en) | 1985-05-21 | 1985-05-21 | Increasing ratio of components of teicoplanin a2 complex |
| GB8512795 | 1985-05-21 |
Publications (4)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| DK233086D0 DK233086D0 (da) | 1986-05-20 |
| DK233086A DK233086A (da) | 1986-11-22 |
| DK165703B true DK165703B (da) | 1993-01-04 |
| DK165703C DK165703C (da) | 1993-06-07 |
Family
ID=10579438
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| DK233086A DK165703C (da) | 1985-05-21 | 1986-05-20 | Fremgangsmaade til selektivt at foroege maengdeandelen af en eller flere af hovedkomponenterne af teicoplanin a2-komplekset |
Country Status (23)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US4927754A (da) |
| EP (1) | EP0204179B1 (da) |
| JP (1) | JP2506082B2 (da) |
| KR (1) | KR940005656B1 (da) |
| CN (1) | CN1029321C (da) |
| AR (1) | AR243238A1 (da) |
| AT (1) | ATE47883T1 (da) |
| AU (1) | AU597251B2 (da) |
| CA (1) | CA1249785A (da) |
| DE (1) | DE3666839D1 (da) |
| DK (1) | DK165703C (da) |
| ES (1) | ES8708017A1 (da) |
| FI (1) | FI87234C (da) |
| GB (1) | GB8512795D0 (da) |
| GR (1) | GR861226B (da) |
| HU (1) | HU195858B (da) |
| IE (1) | IE58961B1 (da) |
| IL (1) | IL78832A (da) |
| NO (1) | NO167402C (da) |
| NZ (1) | NZ216231A (da) |
| PH (1) | PH23805A (da) |
| PT (1) | PT82612B (da) |
| ZA (1) | ZA863400B (da) |
Families Citing this family (18)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| GB8512795D0 (en) * | 1985-05-21 | 1985-06-26 | Lepetit Spa | Increasing ratio of components of teicoplanin a2 complex |
| GB8621912D0 (en) * | 1986-09-11 | 1986-10-15 | Lepetit Spa | Increasing ratio of components of anti-biotic complex |
| GB8621911D0 (en) * | 1986-09-11 | 1986-10-15 | Lepetit Spa | Increasing ratio of components of anti-biotic complex |
| US5135857A (en) * | 1987-07-03 | 1992-08-04 | Gruppo Lepetit S.P.A. | Process for the preparation of de-mannosyl teicoplanin derivatives |
| GB8715735D0 (en) * | 1987-07-03 | 1987-08-12 | Lepetit Spa | De-mannosyl teicoplanin derivatives |
| GB8720980D0 (en) * | 1987-09-07 | 1987-10-14 | Lepetit Spa | Derivatives |
| DE69127645T2 (de) | 1990-03-28 | 1998-02-12 | Lepetit Spa | Verfahren zur Herstellung von Mannosylteicoplaninderivaten und Mannosylteicoplaninaglykon |
| EP0912604B1 (en) | 1996-04-23 | 2001-11-14 | Biosearch Italia S.p.A. | Improved chemical process for preparing amide derivatives of antibiotic A 40926 |
| US5916873A (en) * | 1997-04-17 | 1999-06-29 | Eli Lilly And Company | Teicoplanin derivatives |
| KR100321305B1 (ko) * | 1999-04-17 | 2002-03-18 | 박호군 | 변이주 액티노플라네스 테이코마이세티커스 ｍｓｌ 2211 및 그로부터 생산되는 테이코플라닌 |
| KR100515186B1 (ko) * | 2002-04-23 | 2005-09-16 | 주식회사 바이오앤진 | 테이코플라닌 고생산 변이주 에티노플레네스 테이코마이세티쿠스를 이용한 테이코플라닌의 발효 제조방법 |
| US7119061B2 (en) | 2002-11-18 | 2006-10-10 | Vicuron Pharmaceuticals, Inc. | Dalbavancin compositions for treatment of bacterial infections |
| US20060074014A1 (en) | 2002-11-18 | 2006-04-06 | Vicuron Pharmaceuticals Inc. | Dalbavancin compositions for treatment of bacterial infections |
| US20050090433A1 (en) | 2002-11-18 | 2005-04-28 | Vicuron Pharmaceuticals, Inc | Dalbavancin compositions for treatment of bacterial infections |
| ES2278101T3 (es) * | 2003-09-17 | 2007-08-01 | Alpharma Aps | Composicion de teicoplanina con actividad antibiotica mejorada. |
| EP1671640A1 (en) * | 2004-12-17 | 2006-06-21 | Biongene Co. Ltd. | Mutant strain of Actinoplanes teichomyceticus for the production of teicoplanin |
| KR100965652B1 (ko) * | 2008-02-21 | 2010-06-23 | 일동제약주식회사 | 테이코플라닌을 생산하는 신규한 미생물 |
| CN106854670B (zh) * | 2017-01-10 | 2020-03-10 | 鲁南制药集团股份有限公司 | 一种发酵法生产替考拉宁并调控其组分含量的方法 |
Family Cites Families (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| GB1496386A (en) * | 1975-03-05 | 1977-12-30 | Lepetit Spa | Antibiotics |
| FI73697C (fi) * | 1982-06-08 | 1987-11-09 | Lepetit Spa | Foerfarande foer framstaellning av individuella faktorer 1, 2, 3, 4 och 5 av teikomysin a2. |
| US4696817A (en) * | 1983-10-11 | 1987-09-29 | The Dow Chemical Company | Extraction of teichomycin A2 from whole culture fermentation broth |
| GB8512795D0 (en) * | 1985-05-21 | 1985-06-26 | Lepetit Spa | Increasing ratio of components of teicoplanin a2 complex |
-
1985
- 1985-05-21 GB GB858512795A patent/GB8512795D0/en active Pending
-
1986
- 1986-04-30 FI FI861834A patent/FI87234C/fi not_active IP Right Cessation
- 1986-05-05 AU AU57101/86A patent/AU597251B2/en not_active Expired
- 1986-05-07 ZA ZA863400A patent/ZA863400B/xx unknown
- 1986-05-12 GR GR861226A patent/GR861226B/el unknown
- 1986-05-13 AT AT86106456T patent/ATE47883T1/de not_active IP Right Cessation
- 1986-05-13 DE DE8686106456T patent/DE3666839D1/de not_active Expired
- 1986-05-13 EP EP86106456A patent/EP0204179B1/en not_active Expired
- 1986-05-14 AR AR86303953A patent/AR243238A1/es active
- 1986-05-19 US US06/864,675 patent/US4927754A/en not_active Expired - Lifetime
- 1986-05-19 IL IL78832A patent/IL78832A/xx not_active IP Right Cessation
- 1986-05-19 PH PH33786A patent/PH23805A/en unknown
- 1986-05-19 PT PT82612A patent/PT82612B/pt unknown
- 1986-05-20 NZ NZ216231A patent/NZ216231A/xx unknown
- 1986-05-20 CA CA000509462A patent/CA1249785A/en not_active Expired
- 1986-05-20 KR KR1019860003905A patent/KR940005656B1/ko not_active Expired - Lifetime
- 1986-05-20 JP JP61113866A patent/JP2506082B2/ja not_active Expired - Lifetime
- 1986-05-20 DK DK233086A patent/DK165703C/da not_active IP Right Cessation
- 1986-05-20 ES ES555133A patent/ES8708017A1/es not_active Expired
- 1986-05-20 IE IE133486A patent/IE58961B1/en not_active IP Right Cessation
- 1986-05-20 HU HU862133A patent/HU195858B/hu unknown
- 1986-05-20 NO NO861986A patent/NO167402C/no not_active IP Right Cessation
- 1986-05-21 CN CN86103528A patent/CN1029321C/zh not_active Expired - Lifetime
Also Published As
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| DK165703B (da) | Fremgangsmaade til selektivt at foroege maengdeandelen af en eller flere af hovedkomponenterne af teicoplanin a2-komplekset | |
| KR960016135B1 (ko) | L-이소로이신(l-isoleucine)의 제조법 | |
| SU1694643A1 (ru) | Штамм бактерий ЕSснеRIснIа coLI - продуцент L-треонина | |
| RU2209248C2 (ru) | Способ получения l-метионина, штамм бактерии escherichia coli вкпм в-8125 - продуцент l-метионина | |
| EP0259780B1 (en) | Method for selectively increasing the ratio of single major components of antibiotic a/16686 complex | |
| JP2520139B2 (ja) | 抗性物質ａ／４０９２６複合体の製造方法 | |
| JPH07505288A (ja) | 微生物，調製法，および，用途 | |
| EP0343330A2 (en) | Biotransformation of L-tyrosine and L-phenylalanine to 2,5-dihydroxyphenylacetic acid | |
| Kraus et al. | UDP-N-acetylmuramylpentapeptide as acceptor in murein biosynthesis in Escherichia coli membranes and ether-permeabilized cells | |
| NO136204B (da) | ||
| US20020058645A1 (en) | Cyclipostins, process for their preparation and use thereof | |
| KR100253424B1 (ko) | 코리네박테리움 글루타미컴 cj88 및 이 균주를 이용한l-라이신의 제조방법 | |
| RU2081169C1 (ru) | Штамм бактерий alcaligenes species - продуцент нитрилазы | |
| KR100442036B1 (ko) | 인공변이 처리된 엘-라이신 생산균주의 배양방법 및 엘-라이신의 제조방법 | |
| CA2144331C (en) | Process for the selective increase of production of antibiotic ge 2270 factor a | |
| NIMI et al. | Effect of arginine on gramicidin S biosynthesis by Bacillus brevis | |
| KR100200516B1 (ko) | 신규한l-루이신생산미생물인코리네박테리움글루타미컴(corynebacteriumglutamicum)ch35 | |
| AU675076C (en) | Process for the selective increase of production of antibiotic GE 2270 factor A | |
| KR101982236B1 (ko) | 반코마이신을 생산하는 미생물 및 이를 이용한 반코마이신 제조 방법 | |
| EP0137365A2 (en) | Cephalosporins and their production | |
| JPH06327487A (ja) | 発酵法によるｌ−スレオニンの製造法 | |
| RU94043353A (ru) | Способ получения антибиотика канамицина | |
| JPWO1999041265A1 (ja) | 新規ｋｆ−１０４０物質およびその製造法 | |
| JPWO2000058491A1 (ja) | 新規ｋｆ−１０４０ｔ４ａ物質、ｋｆ−１０４０ｔ４ｂ物質、ｋｆ−１０４０ｔ５ａ物質及びｋｆ−１０４０ｔ５ｂ物質並びにそれらの製造法 | |
| HU195252B (en) | Process for producing fermentation broth containing apramycin, 6-two commas above-o-carbamoyl-tobramycin and 6-two commas above-canamycin-b with microbiological method |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PUP | Patent expired |