DK172896B1

DK172896B1 - 4(3H)-oxo-5,6,7,8-tetrahydropyrido-(2,3-d)pyrimidinderivater, farmaceutiske præparater indeholdende dem samt fremgangsmåder

Info

Publication number: DK172896B1
Application number: DK198703073A
Authority: DK
Inventors: Chuan Shih; Edward C Taylor; George Peter Beardsley; James M Hamby
Original assignee: Univ Princeton
Priority date: 1986-06-30
Filing date: 1987-06-17
Publication date: 1999-09-20
Also published as: HU198482B; EP0255228B1; HUT44548A; JPH07116189B2; AU7426287A; IE60038B1; IL82896A; EG18301A; JPS6333379A; IL82896A0; CN87104596A; PT85090B; DK307387A; KR950001017B1; AU594163B2; ES2007064A6; KR880000432A; CA1301156C; DE3769721D1; IE871586L

Description

i DK 172896 B1

Teknisk område

Opfindelsen angår derivater af (3H)-oxo-5,6,7,8-tetrahydro-pyrido[2,3-d]pyrimidiner, farmaceutiske præparater indehol-5 dende dem samt fremgangsmåder og mellemprodukter til deres s, fremstilling.

Teknikkens stade 10 Folsyreantimetabolitterne aminopterin og amethopterin (også kendt som 10-methylaminopterin eller methotrexat) er anti-neoplastiske stoffer. Disse stoffer inhiberer enzymatiske omsætninger, der involverer metaboliske derivater af fol-syre. F.eks. inhiberer amethopterin dlhydrofolatreductase, 15 et enzym, der er nødvendigt for regenereringen af tetra-hydrofolat fra dihydrofolat, som opstår ved omsætningen af 2-deoxyuridylat til thymidylat ved hjælp af enzymet thymi-dylatsynthetase.

20 Andre derivater af folsyre og aminopterin er syntetiseret og testet som antimetabolitter. Blandt disse er forbindelser, i hvilke en methylen- eller méthylidengruppe optager en plads i molekylet, der normalt er besat med en imino-eller nitrilogruppe henholdsvis. Disse derivater har en 25 varierende grad af antimetabolisk aktivitet. 10-deazaaminopterin er stærkt aktiv (Sirotak et al., Cancer Treat. Rep., 1978, 62, 1047) og 5-deazaaminopterin har en aktivitet, der svarer til amethopterin (Taylor et al., J.

Org. Chem.. 1983, 48, 4852). 8,10-dideazaaminopterin er 30 beskrevet at være aktiv (US patent nr. 4.460.591) og 5.8.10- trideazaaminopterin udviser aktivitet mod L1210 leukemi hos mus (Yan et al., J. Heterocycl. Chem., 1979, 16, 541). På den anden side udviser 10-deazafolsyre ikke nogen signifikant aktivitet (Struck et al., J. Med. Chem., 35 1971, ^4, 693) og 5-deazafolsyre er kun svagt cytotoxisk.

8.10- dideazafolsyre er kun ganske lidt virksomt som 2 DK 172896 B1 dihydrofolatreductaseinhibitor (De Graw et al., "Chemistry and Biology of Pteridines", Elsevier, 1979, 229) og 5,8,10-trideazafolsyre viser også kun svag aktivitet mod L1210 leukemi hos mus (Oatis et al-, J. Med. Chem., 1977, 20.

5 1393). 5,10-dideazaaminopterin og 5,10-dideaza-5,6,7,8- tetrahydroaminopterin og de tilsvarende 5,10-dideazafolsyrederivater er beskrevet af Taylor er al., J.

Med. Chem., 28:7, 914 (1985).

10 Beskrivelsen af opfindelsen

Opfindelsen angår (i) 4(3H)-oxo-5,6,7,8-tetrahydro- pyrido[2,3-d]pyrimidiner med formlen: 15 JJ V ** fr Λ

'‘“CH-CH.-N Μ 'VcOWH-CH-CH,CH,COOH

H-K ^ N ^

H

20 hvori: R1 er hydrogen, methyl, ethyl eller RsC0-, hvor R5 er hydrogen eller alkyl med 1 til 6 carbonatomer, og konfigurationen omkring det carbonatom, der er mærket med *, er L; 25 (ii) de tautomere former deraf; og (iii) de farmaceutisk acceptable salte deraf.

De farmaceutiske præparater til bekæmpelse af neoplastisk vækst i et pattedyr Ifølge opfindelsen er ejendommelige 30 ved, at de omfatter en mængde af en forbindelse ifølge opfindelsen, der ved indgivelse i pattedyret i en enkelt- eller multidosisbehandling er effektiv til at bekæmpe væksten, i forbindelse med en farmaceutisk acceptabel bærer.

35 Fremgangsmåderne til fremstilling af forbindelserne ifølge opfindelsen er ejendommelige ved, at man til fremstilling 3 DK 172896 B1 af en forbindelse, i hvilken R1 er RsCO-, behandler en forbindelse med formlen: o 11 K Η H / —\ 1 ‘ 3·

HH Tf CH-Cn,-N<' ' >-CONH-CH-CH,CH,COOR

5 I 11 1 \—/ 1 ,· , . U JL CH, '-y coos'

H

VI

10 hvori:

Ra' og R3' er hydrogen eller den samme eller forskellige carboxylsyrebeskyttelsesgrupper; og 15 R4' er hydrogen eller en aminobeskyttelsesgruppe; og konfigurationen omkring det carbonatom, der er mærket *, er L, med en syre med formlen R5COOH, i hvilken R5 er hydrogen eller alkyl med 1 til 6 carbonatomer, eller et reaktivt, 20 acylerende derivat deraf, hvorefter eventuelt tilstedeværende beskyttelsesgrupper fjernes; 25 eller man katalytisk hydrogenerer en forbindelse med formlen: 0 i 30 A , /—v \\cOHH-CH-CK ,CH ,COOS3 * l '1 J \=/ i

' * HH

35 VII

4 DK 172896 B1 hvori R1, R2', R3' og R4' er som ovenfor defineret, hvorefter eventuelt tilstedeværende beskyttelsesgrupper fraspaltes, 5

Mellemprodukterne til anvendelse ved fremstilling af forbindelser ifølge krav 1 ifølge opfindelsen er ejendommelige ved, at de er udvalgt fra gruppen bestående af: (i) 4(3H)-oxo-5,6,7,8-tetrahydropyrido[2,3-d]pyrimidiner 10 med formlen: 0 „i η V * HII^Y ^ch-ch2-wY/ \\-cohb-ch-cm2ch2coo«3' <- ^ i-L J*2 ^°°r2’ R HH K $

H

15

VIII

hvori: R1 er hydrogen, methyl, ethyl eller R5C0-; 20 R2’ og R3' er hydrogen eller alkylgrupper med fra 1 til 6 carbonatomer, inklusive dem, der er forgrenede I 1-stillingen, og dem, der er substituerede med en eller flere aromatiske grupper, såsom phenyl, eller 'substituerede med 25 halogen eller alkoxy, f.eks. methyl, ethyl, t-butyl, benzyl, diphenylmethyl eller methoxymethy1, eller trimethylsilyl eller 4-nitrobenzyl; R4' er hydrogen eller en acylgruppe, navnlig alkanoyl med 2 30 til 6 carbonatomer, eller alkoxycarbonyl, der hver eventuelt er substitueret med halogen, alkoxy eller phenyl, f.eks. acetyl, pivaloyl, 2,2,2-trichloracetyl, benzoyl, t-butoxycarbonyl, eller R4 betyder 4-nitrobenzyloxycarbonyl; og 35 konfigurationen omkring det carbonatom, der er mærket *, er 5 DK 172896 B1 L, idet grupperne R3 , R3 og R4’ ikke alle er hydrogen; (ii) de tautomere former deraf; og (iii) salte deraf.

5 Fremgangsmåder til udøvelse af opfindelsen

Forbindelserne ifølge opfindelsen er derivater af den hete-rocycliske ring 5,6,7,8-tetrahydropyrido[2,3-d]pyrimidin, der nummereres således: 10 < s 'fry 1 8

Forbindelserne med formlen I eksisterer i tautomer ligevægt 15 med de tilsvarende 4-hydroxyforbindelser: or o

20 H H

I denne beskrivelse afbildes for nemheds skyld 4(3H)-oxo-formen overalt og den tilsvarende nomenclatur benyttes, idet man forstår, at den tautomere 3,4-dehydro-4-hydroxy-25 form er indbefattet i hvert eneste tilfælde.

Den absolutte konfiguration omkring det carbonatom, i glu-taminsyrekæden, der er mærket *, er L, hvilket er det samme som den absolutte konfiguration omkring det tilsvarende a-30 carbonatom i alanin. Carbonatomet i 6-stillingen af 5,5,7,8-tetrahydropyrido[2,3-d]pyrimidin ringsystemet er også et chiralt center, hvilket fører til d,L- og l,L-dia-stereoisomere. Begge former, der kan adskilles mekanisk, f.eks. ved chromatografi, falder inden for opfindelsens 35 rammer.

6 DK 172896 B1

Opfindelsen omfatter de farmaceutisk acceptable salte. Salte kan dannes enten med syre (hvilket involverer nitrogenatomet i 8-stillingen) eller med base (hvilket involverer carboxylsyregrupperne i glutaminsyredelen). De, der dannes 5 med base, omfatter alkalimetal, jordalkalimetal, ikke- toxisk metal, ammonium, og substitueret ammoniumsalte, såsom f.eks. natrium, kalium, lithium, calcium, magnesium, aluminium, zink, ammonium, trimethylammonium, triethyl-ammonium, triethanolammonium, pyridinium, substitueret py-10 ridinium og lignende. De, der dannes med syre, omfatter farmaceutisk acceptable, ikke-toxiske syreadditionssalte, som de dannes med (i) uorganiske syrer, som f.eks. saltsyre, brombrintesyre, salpetersyre, svovlsyre, fosforsyre og lignende (ii) organiske carboxylsyrer, som f.eks. eddi-15 kesyre, propionsyre, glycolsyre, ravsyre, raaleinsyre, hydroxymaleinsyre, raethylmaleinsyre, fumarsyre, æblesyre, vinsyre, citronsyre, benzoesyre, kanelsyre, mandelsyre, salicylsyre, 4-aminosalicylsyre, 4-phenoxybenzoesyre, 2-acetoxybenzoesyre, embonsyre, nicotinsyre eller isonicotin-20 syre og (iii) organiske sulfonsyrer, som f.eks. methansul- fonsyre, ethansulfonsyre, 2-hydroxyethansulfonsyre, ethan- 1,2-disulfonsyre, benzensulfonsyre, p-toluensulfonsyre eller naphthalen-2-sulfonsyre.

25 Forbindelserne ifølge denne opfindelse har virkning på et eller flere enzymer, der benytter folsyre, og navnlig metaboliske derivater af folsyre, som substrat.

Forbindelserne kan fremstilles i ét trin ved hydrolyse el-30 ler hydrogenolyse af et 2-amino-4(3H)-oxo-5,6,7,8-tetra- hydropyrido[2,3-d]pyrimidinyl-L-glutaminsyre-derivat med formlen: 7 DK 172896 B1 ° i il ® P * /—\ ΒΗ^ΤΥ^ · CH-CH,-»-/' 'V-C°HH-c8-CH,CH,COOR3 i il 'CR \=/ <w2 2 5 *

II

10 hvori: R1 er som tidligere defineret; R2 og R3 er ens eller forskellige estre, afledt af alkanoler med fra 1 til 6 carbonatomer, inklusive dem, der 15 er forgrenet 1-stillingen, og dem, der er substituerede med en eller flere aromatiske grupper, såsom phenyl, eller substituerede med halogen eller alkoxy, f.eks. methyl, ethyl, t-butyl, benzyl, diphenylmethyl eller methoxymethy1, eller trimethylsilyl eller 4-nitrobenzyl; 20 R4 er hydrogen eller en acylgruppe, navnlig alkanoyl med 2 til 6 carbonatomer, eller alkoxycarbonyl, der hver kan være substituerede med halogen, alkoxy eller phenyl, f.eks. acetyl, pivaloyl, 2,2,2-trichloracetyl, benzoyl, t-butoxycar-25 bonyl, eller R4 betyder 4-nitrobenzyloxycarbonyl; og konfigurationen omkring det carbonatom, der er mærket *, er L.

Beskyttelsesgrupper, der er omfattet af R2, R3 og R4, og reaktioner til fjernelse af dem, er f.eks. beskrevet i 30 "Protective Groups in Organic Chemistry", Plenum Press,

London og New York (1973); Greene, "Protective Groups in Organic Synthesis", Wiley, New York (1981); "The Peptides",

Vol. I, Schrdder og Lubke, Academic Press, London og New York (1965); i "Methoden der organischen Chemie", Houben-35 Weyl, 4. udgave, Vol. 15/1, Georg Thieme Verlag, Stuttgart (1974).

8 DK 172896 B1

Carboxylsyrebeskyttelsesgrupper kan f.eks. være estre, der formelt er afledt af lavere alkanoler med fra 1 til 6 car-bonatomer, inklusive dem, der er forgrenet 1-stillingen, og 5 dem, der er substituerede med en eller flere aromatiske grupper, såsom phenyl, eller med halogen eller alkoxy, f.eks. methyl, ethyl, t-butyl, benzyl, 4-nitrobenzyl, di-phenylmethyl eller methoxymethyl. Silylestre, såsom tri-methylsilyl, kan også anvendes.

10

Aminobeskyttelsesgrupper omfatter eksempelvis alkanoyl med 2 til 6 carbonatomer eller alkoxycarbonyl, der hver kan være substituerede med halogen, alkoxy eller phenyl, f.eks. acetyl, pivaloyl, 2,2,2-trichloracetyl, benzoyl eller t-15 butoxycarbony1, eller 4-nitrobenzyloxycarbonyl.

Hydrolysen udføres ved normale temperaturer, idet der benyttes fortyndet vandig base, som f.eks. 0,1 til 0,3 N vandig alkalimetalhydroxid, eventuelt under tilstedeværelse af 20 et organisk opløsningsmiddel, der er blandbart med vand, såsom methanol, ethanol, tetrahydrofuran, dimethylformamid og lignende eller en syre, som f.eks. trifluoreddikesyre.

Brug af syre eller stærk base vil føre til hydrolyse, hvis -NT-COR5-gruppen er til stede. Nogen racemisering af glut-25 aminsyredelen af molekylet kan eventuelt iagttages.

Hydrolyseproduktet dannes først som det dikationiske glut-amatsalt og kan let fældes som den fri syre ved justering af pH ved tilsætning af syre, f.eks. eddikesyre eller 0,5 N 30 saltsyre. De resulterende produkter er sædvanligvis højt-smeltende, krystallinske eller mikrokrystallinske, faste stoffer.

Forbindelserne med formlen I såvel som glutaminsyre-mellem-35 produktet med formlen XI kan alternativt fremstilles ved at hydrogenere en pyrido[2,3-d]pyrimidinforbindelse med form- 9 DK 172896 B1 len: 5 ^ i-·

R UH

III

10 1 hvilken R1 er som tidligere defineret, R2' og R3' hver er hydrogen eller en carboxylsyrebeskyttelsesgruppe som tidligere beskrevet for R2 og R3, og R4' er hydrogen eller en aminobeskyttelsesgruppe som tidligere defineret for R4.

15 Hydrogeneringen udføres i surt medium i nærværelse af en ædelmetalkatalysator såsom platin, ruthenium eller rhodium, inklusive oxiderne deraf og de former, der bæres af et bærestof. Den foretrukne katalysator er platinoxid. Betingelserne med hensyn til tid, temperatur og tryk vælges 20 sådan, at reduktion af pyridinringen opnås uden at pyrimi-dinringen bliver involveret. Med platinoxid f.eks. fås det ønskede produkt på omkring 15 minutter ved benyttelse af stuetemperatur og et hydrogentryk på 3,4 til 4,1 atmosfærer (50 til 60 psi).

25 Når R2', R3' og R*' er hydrogen, vil produktet af denne reduktion være en forbindelse med formlen I. Hvis både R2', R3' og R41 er andet en hydrogen, vil produktet være en forbindelse med formlen II.

30

Forbindelser med formlen III er kendte eller kan fremstilles ved konventionelle fremgangsmåder. F.eks. kan 2-amino-4(3H)-oxo-6-formylpyrido[2,3-d]pyrimidin behandles med et r passende reagens, såsom eddikesyreanhydrid, til indførelse 35 af beskyttelsesgruppen R4, og det resulterende produkt kan man lade reagere med et beskyttet N-(4-aminobenzoyl)-L- 10 DK 172896 B1 giutaminsyrederivat til dannelse af forbindelsen med formlen III, i hvilken R3=H (se f.eks. Taylor et al., J- Org.

Chem., 48, 4852 (1983)). Ved at benytte den tilsvarende N-(4-methylaminobenzoyl)-L-glutaminsyre eller N-(4-ethylami-5 nobenzoyl)-L-glutaminsyre fås den tilsvarende forbindelse med formlen III, i hvilken R’ er henholdsvis methyl eller ethyl.

Forbindelser med formlen III, i hvilke R1 er RsC0-, kan fås 10 ved acylering af en forbindelse med formlen III, i hvilken R1 er hydrogen.

Når R5 er hydrogen, kan acyleringen udføres ved at benytte et overskud af myresyre (se f.eks. Haynes et al., J. Med.

15 Chem. 20, 588-591, (1977) eller et reaktivt, acylerende derivat af myresyre, såsom et blandet myresyreanhydrid, som f.eks. dannes af myresyre og eddikesyreanhydrid.

Når R5 er alkyl, kan der anvendes et reaktivt derivat af en 20 carboxylsyre, f.eks. et syrehalogenid, såsom acetylchlorid-

Forbindelseme med formlerne II og III, i hvilke R1 er RsC0- er værdifulde mellemprodukter, navnlig til fremstilling af det slutprodukt med formlen I, i hvilket R1 er 25 hydrogen, nemlig N-[4-(N'-[2-amino-4(3H)-oxo-5,6,7,8-tetra-hydropyrido[2,3-d]pyrimidin-6-yl-methyl]amino Jbenzoyl]-L-glutarainsyre. Denne forbindelse har antineoplastisk virkning og kan fremstilles ved direkte hydrogenering af en forbindelse med formlen IV, om ønsket fulgt af fjernelse af 30 eventuelle beskyttelsesgrupper R2', R3' og R4'. Indførelse af en Ν'-acylgruppe, såsom formylgruppen, før reduktionen, giver imidlertid øget beskyttelse af aminogruppen, der, idet den har karakter af en benzylamin, kan hydrogenolyse-res. Ved først at danne Ν’-formylderivatet med formlen III, 35 hydrogenere dette til Ν’-formyltetrahydro-mellemproduktet med formlen II og underkaste dette en hydrolyse.

11 DK 172896 B1 fortrinsvis sur og basisk hydrolyse udført efter hinanden, fås således N-[4-(N’-[2-amino-4(3H)-oxopyrido[2,3-d]pyrinii-dIn-6-ylmethyl]amino)benzoyl]-L-glutaminsyre.

5 I det endelige molekyle er der to chirale centre: carbon- atoraet i tetrahydropyrido[2,3-d]pyrimidinringens 6-stilling , og α-carbonatomet i glutaminsyregruppen. Af de teoretiske fire former af forbindelsen reducerer brugen af beskyttet N-(4-aminobenzoyl)-L-glutaminsyrereagens ved fremstillingen 10 af en forbindelse med formlen III mulighederne til to. Begge disse dannes imidlertid under den følgende hydrogenering til en forbindelse med formlen II, og følgelig dannes den ønskede forbindelse ved fjernelse af beskyttelsesgrupperne som en blanding af (S,S) og (R,S) diastereoisomerene. Disse 15 kan for den forbindelse, i hvilken R1', R3' og R4' alle er hydrogen, illustreres som følger: tS.S)»

0 R1 --- CH,CHC00H

?n μ h a i // Λ : 2 2 ..ch2-h-/' 'Vcohh*-^—coob 7 ?>* \=/ i 8

IV

25 (R.S):

O

30 3^ .·" R1 /-V CH,CH,COOH

T i

H

35 V

12 DK 172896 B1

Disse diastereoisomere lean adskilles mekanisk, f.eks. ved chromatografi, således at hver af dem er i hovedsagen fri for den anden, dvs. har en optisk renhed på >95%. Alternativt behandles en blanding af diastereoisomere forbindelser 5 med formlen I med en chiral syre, der er i stand til at danne salt dermed. De resulterende diastereoisomere salte adskilles så med en eller flere fraktionerede krystallisationer, og derefter frigøres den frie base af den kation!-ske del af i det mindste et af de adskilte salte ved be-10 handling med en base og fjernelse af beskyttelsesgrupperne. Frigørelsen af saltets kation kan udføres som et separat trin før eller efter fjernelsen af beskyttelsesgrupperne, eller samtidig med fjernelsen, når disse grupper kan fjernes under basiske betingelser, dvs. ved basisk hydrolyse.

15

Egnede chirale syrer omfatter de enkelte enantiomere af 10-camphersulfonsyre, camphersyre, α-bromcamphersyre, menth-oxyeddikesyre, vinsyre, diaeetylvinsyre, æblesyre, pyrroli-don-5-carboxylsyre og lignende.

20

Forbindelserne med formlen 1 kan benyttes, alene eller i kombination, til at behandle neoplasmer, der tidligere er blevet behandlet med methotrexat, inklusive choriocarcino-mer, leukæmi, adenocarcinoma mammae, hudcancer (eng: epi-25 dermid cancers) på hoved og hals, cancer i lungernes pladeepitel eller "small-cell" lungecancer og foreskellige lymphosarcomer. I repræsentative modeller udviste f.eks. N-[4 - ( N ’ - [2-amino-4(3H)-oxo-5,6,7, 8-tetrahydropyrido[2,3- d]pyrimidin-6-ylmethyl]amino)benzoyl]-L-glutaminsyre en 30 IC50 på 0,0052-0,0079 mcg/ml (2,2 x 10'7 molær) i en 72 timers undersøgelse overfor CCRF-CEM celleliner (en leukæmi afledt af humane T-celler). De diastereoisomere deraf udviste IC50'er på henholdsvis 0,0026 og 0,0027 mcg/ml. N-[4-(N'-[2-amino-4(3H)-oxo-5,6,7,8-tetrahydropyrido[2,3-d]pyri-35 midin-6-ylmethyl] -N' -formylamino ) benzoyl] -L-glutaroinsyre havde en ICS0 på 0,011 i den samme test. 5-deazafolsyre er 13 DK 172896 B1 på den anden side relativt Inaktiv i denne test. Forbindelserne kan også benyttes til at behandle mycosis fungoides og psoriasis.

5 Forbindelserne kan Indgives enten oralt eller bedre parenteral t, alene eller i kombination med andre antineopla-- stiske stoffer, steroider etc. til et pattedyr, der lider af neoplasmer og behøver behandling. Parenterale indgivelsesveje omfatter intramuskulær, intrathecal, intravenøs el-10 ler intraarteriel vej. I almindelighed indgives forbindelserne stort set på samme måde som methotrexat, men på grund af en anden virkningsmekanisme kan der indgives højere doser end de, der normalt anvendes af methotrexat. Leucovorin som antidot er ikke nødvendigt. Dosisniveauet må titreres 15 til den enkelte neoplasme, til patientens tilstand og til responset, men i almindelighed vil dosis være på fra omkring 10 til omkring 100 mg/dag i 5 til 10 dage, eller en enkelt daglig indgivelse af 250 til 500 mg gentaget periodisk, f.eks. hver 14. dag. Orale doseringsformer omfatter 20 tabletter og kapsler, der indeholder fra 1 til 10 mg lægemiddel pr. doseringsenhed. Opløsninger 1 isotonisk saltvand indeholdende 20 til 100 mg/ml kan bruges til parenteral indgift.

25 De følgende eksempler vil tjene til yderligere at illustrere opfindelsen.

Eksempel 1 30 Diethyl-N-[4-(N'-[2-acetamido-4(3H}-oxopyrido[2,3-d]-pyri- midin-6-ylmethy1]amino)benzoyl]glutamat.

En blanding af 800 mg 2-acetamido-6-formyl-4(3H)-oxo-r pyrido[2,3-d]pyrimidin (Taylor et al., J, Org. Chem. 48, 35 4852 (1983)) i 55 ral iseddikesyre og 1,2 g diethyl-p-amino- benzoyl-L-glutamat får lov at stå ved stuetemperatur i 5 14 DK 172896 B1 timer. Til blandingen sættes 0,19 ml borhydrid:triethyl-aminkompleks. Denne blanding omrøres i 40 minutter ved stuetemperatur og opvarmes så til 60"C i 10 minutter. Reaktionsblandingen afkøles og koncentreres in vacuo. Den re-5 suiterende remanens opløses i 90 ml methanol, og opløsningen filtreres. Det faste stof, der isoleres, vaskes med 20 ml methanol og 360 ml ether. Filtraterne slås sammen og inddampes til tørhed. Remanensen flashchromatograferes (se Still et al., J. Org. Chem.. 43, 2923 (1978)) på kiselgel 10 (97:3 chloroform:methanol), hvilket giver 1,08 g diethyl-N- [4-(N'-[2-acetylamino-4(3H)-oxopyrido[2,3-d]pyrimidin-6-yl-methyl]amino)benzoyl]-L-glutamat.

Eksempel 2 15

Diethyl-N- [4-(N1-[2-acetamido-4(3H)-oxo-5,6,7,8-tetra-hydropyrido[2,3-d]pyrimidin-6-ylmethyl]amino)-benzoyl]- L-glutamat.

20 En blanding af 340 mg diethyl-N-[4-(Ν'-[2-acetylamino-4 (3H ) -oxopyrido[ 2,3-d] pyrimidin-6-ylmethyl] amino ) benzoyl] -L-glutamat i 80 ml methanol og 40 ml iseddikesyre anbringes i beholderen til et hydrogeneringsapparat (Adams). 55 mg platinoxidkatalysator tilsættes, og blandingen hydrogeneres 25 ved 4,1 atm. (60 psi) ved stuetemperatur i 15 minutter. Katalysatoren fjernes ved filtrering, og filtratet koncentreres in vacuo. Remanensen flashchromatograferes på kiselgel raéd chloroform: methanol-gradienter (97:3 til 95,5:5), idet der opsamles fraktioner å 20 ml. Fraktionerne 62 til 30 73 indeholder et biprodukt, 2-acetylamino-6-methyl-4(3H)- oxopyrido[2,3-d]pyrimidin. Fraktionerne 74 til 88 indeholder 15,4 mg af det ønskede produkt, diethyl-N-[4-(N’-[2-acetylamino-4(3H)-oxo-5,6,7,8-tetrahydropyrido[2,3-d]pyri-midin-6-ylmethyl]amino)benzoyl]-L-glutamat.

35 15 DK 172896 B1

Eksempel 3 N-[4-(N'-[2-acetamido-4(3H)-oxo-5,6,7,8-tetrahydro-pyrldo[2,3-d]pyrimidin-6-ylmethyl]amino)benzoyl]-L-glut-5 aminsyre.

20 mg diethyl-N-[4-(N*-[2-acetamido-4(3H)-oxo-5,6,7,8-tetrahydropyrldo[2,3-d]pyrimidin-6-ylmethyl]amino)benzoylJ-L-glutamat opløses i 8 ml methanol og 0,4 ml 1,0 N vandig 10 natriumhydroxid tilsættes. Blandingen omrøres ved stuetemperatur i 96 timer, og 0,1 ml Iseddikesyre tilsættes så. Methanolen fjernes in vacuo, og den resulterende remanens opløses i 5 ml vand. Denne blanding gøres sur med 0,16 ml iseddikesyre, og det bundfald, der dannes, isoleres ved 15 filtrering, hvilket giver 6,0 rag produkt; N-[4-(N'-[2-acet- amido-4(3H)-oxo-5,6,7,8-tetrahydropyrido[2,3-d]pyrimidin-6-ylmethyl]amino)benzoyl]-L-glutaminsyre, massespektrum ved 444.

20

Eksempel 4

Diethyl-N-[4-(N’-[2-acetamido-4(3H)-oxopyrido[2,3-d]pyrimidin-6 -ylme thyl] -N’-formylamino)benzoyl]glutamat.

25

En blanding af 98% myresyre (25 ml) og eddikesyre- anhydrid (4,9 ml, 5,25 g, 51,5 mmol) omrøres ved 25eC i to timer.

Til denne opløsning sættes 2,43 g (4,5 mmol) diethyl-N-[4-(N' - [2-acetamido-4(3H)-oxopyrido[2,3-d]pyrimidin-6-yl-30 methyl] amino )benzoyl]-L-glutamat (Taylor et al. J. Orq.

Chem. 48, 4852 (1983)). Denne blanding omrøres ved 55°C i 15 min, og ved 25eC i en time. Opløsningsmidlet fjernes under reduceret tryk, og remanensen tritureres med ether. Det faste stof filtreres fra og omkrystalliseres af 2-propanol, 35 hvilket giver 2,0 g (78%) diethyl-N-[4-(N'-[2-acetamido-4(3H)-oxopyrido[2,3-d]pyrimidin-6-ylmethyl]-N’- 16 DK 172896 B1

formylamino)benzoyl]glutamat: snip. 180-182°C; ^-NMR

(Me2S0-d6) δ 1,05-1,23 (ni, 6 H), 1,95-2,10 (m, 2H), 2,16 (s, 3 H), 2,49 (t, IH, J = 7,36 Hz), 3,97-4,10 (m, 4H), 4,36-4,39 (m, IH), 5,24 (m, 2H), 7,51-7,54 (m, 2H, AA'BB'), 5 7,84-7,87 (m, 2H, AA'BB'), 8,21 (m, IH), 8,69-8,75 (ro, 2H), 8,82 (s, IH).

Anal., beregnet for C27H3ON60a: C, 57,24; H, 5,34; N, 14,83.

10

Fundet; C, 56,94; H, 5,11; N, 14,57.

Eksempel 5 15 Diethyl-N-[4-(N'-[2-pivaloylamino-4(3H)-oxopyrido-[2,3- d]pyrlmidin-6-ylmethyl]-Ν'-fonnylamino)benzoyl]-glutamat.

Titelforbindelsen fremstilles analogt med fremgangsmåden ifølge eksempel 4, idet der bruges diethyl-N-[4-(N’-[2-20 pivaloylamino-4(3H)-oxopyrido[2,3-d]pyrimidin-6-ylmethyl]- amino)benzoyl[-L-glutamat; ^-NMR (Me2S0-d4) 6 1,09-1,16 (m, 6 H), 1,21 (s, 9H), 1,90-2,10 (m, 2H), 2,39 (t, 2H, J - 7,37 Hz), 3,96-4,09 (m, 4H), 4,31-4,43 (m, IH), 5,22 (s, 2H), 7,50-7,53 (AA'BB', 2H), 7,83-7,86 (AA'BB'), 8,21 (m, 25 IH), 8,71 (d, IH, J - 5,87 Hz), 8,72 (m, IH), 8,80 (s, IH).

Eksempel 6

Diethyl-N-[4-(N'-[2-pivaloylamino-4( 3H)-oxopyrido-[2,3-30 d]pyrimidin-6-ylmethyl]-N'-acetylamino)benzoyl]-glutamat.

Til en omrørt opslemning af 0,65 g diethyl-N-[4-(N'-[2-pivaloylamino-4(3H)-oxopyrido[2,3-d]pyrimidin-6-yl-methyl]amino)benzoyl]glutamat (1,1 mmol) og 0,22 g (2,2 35 mmol) kaliumbicarbonat i 10 ml raethylenchlorid afkølet til 0-5°C sættes 0,097 g (1,2 mmol) acetylchlorid. Reaktions- 17 DK 172896 B1 blandingen omrøres ved 0-5°C i 10 minutter og får så lov til at antage stuetemperatur. Efter omrøring ved stuetemperatur i 45 minutter tilsættes 50 ml methylenchlorid. Blandingen ekstraheres med 25 ml vand, 25 ml mættet opløsning 5 af natriumbicarbonat og igen med 25 ml vand. De vandige ekstrakter slås sammen og ekstraheres tilbage med 50 ml T methylenchlorid. De organiske ekstrakter tørres med vand frit magnesiumsulfat og filtreres, og opløsningsmidlet fjernes under reduceret tryk, hvilket giver 0,7 g diethyl-10 N-[4-(N'-[2-pivaloylamino-4(3H Joxopyrido-[2,3-d]pyrimidin-

6-ylmethyl]-N’-acetylamino)benzoyl]-glutamat; XH-NMR

(Me2S0-dJ 6 1,10-1,17 (m, 6 H), 1,22 (s, 9H), 1,88 (s, 3H), 1,88-2,13 (m, 2H), 2,40 (t, 2H, J = 7,46 Hz), 3,97- 4,08 {m, 4H), 4,30-4,42 (ra, IH), 5,02 (s, 2H), 7,34-7,36 15 (AA’BB’, 2H), 7,83-7,86 {AA ’ BB1 , 2H), 8,19 (m, IH), 8,64 (m, IH), 8,75 (d, IH, J - 7,39 Hz).

Eksempel 7 20 Diethyl-Ν' -[4-(N-[2-acetamido-4(3H)-oxo-5,6,7,8-tetra- hydropyrido[2,3-d]pyrimidin-6-ylmethyl]-N'-formyl-amino)benzoyl]-L-glutamat.

En blanding af 0,743 g (0,36 mmol) diethyl-N-[4-(N*-[2-25 acetamido-4(3H)-oxopyrido[2,3-d]pyrimidin-6-ylmethyl]-N’ - formylamino)benzoyl]-L-glutamat og 230 mg platinoxid i 75 ml af en 2:1 ethanol: isedikkesyreopløsning rystes 1 en atmosfære af hydrogen (2,7 atm., 40 psi) i 1,5 timer. Reaktionsblandingen filtreres gennem Celite, og filtratet ind-30 dampes, først i vandstrålevakuum og så i højvakuum, idet temperaturen holdes så lav som muligt. Remanensen opløses i methylenchlorid og chromatograferes (Chromatotron), idet der elueres med 5% methanol i methylenchlorid, hvilket giver 0,684 g (93%) diethyl-N-[4-(N’-[2-acetamido-4(3H)-oxo-35 5,6,7,8-tetrahydΓopyrido[2,3-d]pyrimidin-6-ylmethyl]-N,-

formylamino)benzoyl]-L-glutamat; smp. 188-190°C; XH-NMR

18 DK 172896 B1 (Me2SO-d6) δ 1,12-1,19 (in, 6 H, ester CH3'ef), 1,89-2,11 (m, 4H), 2,08 (s, 3H), 2,42 (t, 2H, J - 7,26 Hz), 2,78-2,91 (m, IH), 3,09-3,19 (ra, IH), 3,89 (d, 2H, J = 5,98 Hz), 3,99-4,12 (ro, 4H), 4,42 (in, IH), 6,64 (ro, IH), 7,51-7,54 5 (ro, 2H, AA'BB'), 7,91-7,94 (m, 2H, AA’BB’), 8,61 (s, IH), 8,74 (d, IH, J - 7,32 Hz).

En analytisk prøve fremstilles ved at chromatografere en del af den ovennævnte prøve, idet der udtages en midter-10 fraktion. Efter fjernelse af opløsningsmidlet blev prøven tritureret med æter og det faste stof isoleret.

Anal., beregnet for C27H34NeOe: C, 56,83; H, 6,01; N, 14,73.

15

Fundet; C, 56,60; H, 5,90; N, 14,43.

Eksempel 8 20

Diethyl-N-[4-(N’ -[2-pivaloylamino-4(3H)-oxo-5,6,7,8-tetra-hydropyrido[2,3-d] pyrimidin-6-ylmethyl ] -Ν’ -ormylaroino )ben-zoyl[-L-glutamat.

25 Diethyl-N-[4-(N'-[2-pivaloylamino-4(3H)-oxo-5,6,7,8-tetra-hydropyrido[2,3-d]pyrimidin-6-ylmethyl]-Ν' -formylami-no)benzoyl]-L-glutamat fås på lignende måde ved reduktion af diethyl-N- [4-(N’-[ 2-pivaloylamino-4 (3H) -oxopyrido [2,3- d ] pyr iroidin- 6 -ylmethy 1 ] -N ’ -formylamino) benzoyl ] glutamat; 30 srop. 152-153°C; IR (KBr) V„„ 3369 og 3250 - (NH), 1732, 1637, og 1605 (C=0) cm'1; 1H-NMR (Me2SO-d6) 6 1,12-1,2 (m, 6 H), 1,17 (s, 9H), 1,90-2,18 (m, 4H) 2,43 (t, 2H, J - 7,4 Hz), 2,80-2,94 (m, IH), 3,12-3,20 (ro, 1 H), 3,89 (d, 2H, J =* 5,59 Hz), 4,00-4,11 (ro, 4H), 3,90-4,47 (m, IH), 6,40 (m, 35 IH), 7,52-7,55 (AA’BB', 2H), 7,92-7,94 (AA'BB’, 2H), 8,62 (S, IH), 8,75 (d, IH, J = 7,33 Hz).

19 DK 172896 B1

Anal., beregnet for C3OH4ON606: C, 58,81; H, 6,58; N, 13,72.

5 Fundet: C, 58,53; H, 6,60; N, 13,61.

’ Eksempel 9

Diethyl-N-[4-(Ν' -[2-pivaloylamino-4(3H)-oxo-5,6,7,8-tetra-10 hydropyrido[2,3-d]pyrimidin-6-ylmethyl]-Ν'-acetylamino)-benzoyl]-L-glutamat.

Til en oplosning af 0,64 g (1,03 mmol) diethyl-N-[4-(N'-[2-pivaloylamino-4(3H)-oxopyrido[2,3-d]pyrimidin-6-ylmethyl]-15 Ν' -acetylamino)benzoyl]-L-glutamat i 40 ml isedikkesyre sættes 96 mg platinoxid. Suspensionen rystes i en hydrogenatmosfære (3,1 atm., 45 psi) i 2,5 timer, hvorefter blandingen fortyndes med 100 ml methylenchlorid og filtreres gennem Celite for at fjerne katalysatoren. Filtratet ind-20 dampes under reduceret tryk, og remanensen opløses i 100 ml methylenchlorid og ekstraheres med to gange 75 ml mættet opløsning af natriumbicarbonat. De vandige lag ekstraheres tilbage med 75 ml methylenchlorid, og de organiske lag slås sammen og tørres med vandfrit magnesiumsulfat. Efter fjer-25 nelse af tørremidlet ved filtrering fjernes opløsningsmidlet fra filtratet under reduceret tryk, hvilket giver 0,54 g (84% udbytte) af diethyl-N-[4-(N'-[2-pivaloylamino-4(3H)-oxo-5,6,7,8-tetrahydropyrido[2,3-d]pyrimidin-6-ylmethyl]-N'-acetylamino)benzoyl]-L-glutamat, som kan oprenses yder-30 ligere ved omkrystallisation af ethylacetat; smp. 120-123eC ‘H-NMR (MeaS0-de) δ 1,06-1,19 (m, 6 H), 1,16 (s, 9H), 1,82 (s, 3H) 1,84-2,17 (m, 6H), 2,42 (t, 2H, J - 7,40 Hz), 2,80- 2,94 (m, IH), 3,17-3,23 (m, 1 H), 3,68 (d, 2H, J - 5,59 Hz), 3,98-4,10 (m, 4H), 4,39-4,45 (m, IH), 6,38 (s, IH), 35 7,43-7,46 (AA'BB1, 2H), 7,90-7,93 (AA'BBτ, 2H), 8,79 (d, IH, J = 7,33 Hz).

20 DK 172896 B1

Eksempel 10 N-[4-(N’-[2-amino-4(3H)-oxo-5,6,7,8-1etrahydro-pyri do[2,3-5 d]pyrimidin-6-ylmethyl]-N'-formylamino)benzoyl]-L-glutamin- syre.

En blanding af 0,092 g (0,16 mmol) diethyl-N-[4-(N'- [2-acetamido-4(3H)-oxo-5,6,7,8-tetrahydropyrido[2,3-d]pyrirai-10 din-6-ylmethyl]-N'-formylamino)benzoyl]-L-glutamat i 10 ml af en 0,25 N vandig natriumhydroxid opløsning omrøres ved 25°C i 72 timer, og derefter afdampes vandet under reduceret tryk. Remanensen opløses i 15 ml vand, og opløsningen køles til 0°C og gøres sur med eddikesyre. Det faste stof 15 isoleres efter 30 minutter, hvilket giver 0,046 g (60,5%) N-[4-(N'-[2-amino-4(3H)-oxo-5,6,7,8-tetrahydropyrido-[2,3- d]pyrimidin-6-ylmethyl]-N'-formylamino)benzoyl]-L-glutamin-syre, 1H-NMR (Me^O-d*, δ 1,81-2,2 (m, 4H), 2,33 (m, 3H), 2,73 (m, IH), 3,1 (m, IH), 3,85 (m, 2H), 4,39 (m, IH), 6,2 20 (ra, IH), 7,49-7,51 (m, 2H, AATBB’), 7,90-7,93 (m, 2H, AA'BB'), 8,59-8,62 (m, 2H).

På tilsvarende måde omrøres 200 mg diethyl-N'-[4-(N-[2-pi-valoylamino-4(3H)-oxo-5,6,7,8-tetrahydropyrido[2,3-d] -25 pyrimidin-6-ylmethyl]-N'-acetylamino)benzoyl]-L-glutamat i 72 timer i 5 ml 0,2 N natriumhydroxid. Reaktionsblandingen neutraliseres med 0,5 N saltsyre, køles til 0"C, og det faste stof, der dannes, isoleres ved filtrering, hvilket giver N-[4-(N'-[2-amino-4(3H)-oxo-5,6,7,8-tetrahydropyri- 30 do[2,3-d]pyrimidin-6-ylmethyl]-Ν'-acetylamino)benzoyl]-L- glutaminsyre.

Eksempel 11 35 N-[4-(N'-[2-amino-4(3H)-oxo-5,6,7,8-tetrahydropyrido[2,3- 21 DK 172896 B1 d]pyrlmldin-6-ylmethyl]-N'-formylamlno)benzoyl]-L-glutamin-syre.

En opløsning af 20 mg N-[4-(N'-[2-amino-4(3H)-oxo-5,6,7,8-5 tetrahydropyrido[2,3-d]pyrlmldin-6-ylmethyl]-amino)benzo yl] -L-glutaminsyre i 0,5 ml 97% myresyre opvarmes til 90°C i en time. Opløsningsmidlet fjernes under reduceret tryk, og remanensen tritureres med ether. Det uopløselige faste stof isoleres, hvilket giver 17 mg produkt, N-[4-(N'-[2-10 amino-4(3H)-oxo-5,6,7,8-tetrahydropyrido[2,3-d]pyrimidin- 6- ylmethyl]-Nf-formylamino)benzoyl]-L-glutaminsyre, der oprenses yderligere ved opløsning i 0,1 N natriumhydroxid og udfældning ved tilsætning af iseddikesyre.

15 Eksempel 12 N-[4-(N’-[2-amino-4(3H)-oxo-5,6,7,8-tetrahydro-pyrido [ 2,3-d] pyrimidin-6-ylmethyl ] amino) benzoyl ] -L-glutaminsyre.

20 Til 32 ml af en 5% saltsyre i methanolisk opløsning (fremstillet ved at fortynde 2 ml koncentreret saltsyre til 60 ml med methanol) sættes 0,717 g ( 1,3 mmol) diethyl-N-[4-(N'-[2-acetamido-4(3H)-oxo-5,6,7,8-tetrahydropyrido[2,3- d]pyrimidin-6-ylmethyl] -Ν' -formylamino)benzoyl]-L-glutamat 25 (fremstillet som i eksempel 2). Reaktionsblandingen omrøres ved 45°C i 18 timer. Efter at reaktionsblandingen har fået lov til at køle til 25eC, tilsættes 4 ml natriumhydroxid (6 N), og blandingen omrøres i yderligere 72 timer ved 25eC. Opløsningen koncentreres under reduceret tryk. 20 ml vand 30 tilsættes, og blandingen gøres sur ved dråbevis tilsætning af iseddikesyre. Efter henstand i to timer ved 0BC isoleres det faste stof, hvilket giver 0,485 g (88% udbytte) N-[4-(N'-[2-amino-4(3H)-oxo-5,6,7,8-tetrahydropyrido)2,3-d[pyri-, midin-6-ylmethyl]amino)benzoyl]-L-glutaminsyre; smp.: de- 35 komposition, begyndende ved 198“C; ^-NMR (Me2S0-d6) δ 1,86-2,1 (m, 6H), 2,31 (t, 2H, J - 7,2), 2,8-2,86 (ra, IH), 22 DK 172896 B1 3,24-3,28 (m, 2H), 4,2-4,4 (m, IH), 5,94 (s, 2H), 6,29 (s, IH), 6,34 (t, IH, J - 5,24), 6,56-6,58 (AA' BB' , 2H), 7,62- 7,65 (AA * BB', 2H), 8,06 (d, J = 5,15), 9,7 (br, s, IH).

5 Det samme produkt kan fås ved hydrolyse af diethyl-N-[4-(N'-[2-pivåloylamino-4(3H)-oxopyrido[2,3-d]-pyrimidin- 6-yl -methyl]-Ν'-formylamino)benzoyl]-glutamat.

Alternativt opløses 1,44 g (2,4 mmol) diethyl-N’-[4-(N-[2-10 pivaloylamino-4(3H)-oxo-5,6,7,8-tetrahydropyrido[2,3-d]py rimidin- 6-ylmethyl]-NT-formylamino)benzoyl]-L-glutamat i 1 N natriumhydroxid og opløsningen omrøres ved 25°C i 72 timer. Trækul tilsættes, og suspensionen omrøres og filtreres. Filtratet gøres surt med iseddikesyre, og det hvide 15 faste stof isoleres efter 30 minutters afkøling til 0°C, hvilket giver 0,87 g (84% udbytte) af det samme produkt; snip. : langsom dekomposition over 198°C; IR (KBr) 3460-2500 (NH og C00H), 1695, 1655, og 1600 (C-0) cm*1; lH-NMR (Me3S0-d6) 6 1,85-2,02 (m, 6 H), 2,3 (t, 2H, J - 7,4 Hz), 20 2,81-2,88 (m, IH) 3,23-3,32 (m, 2H), 4,2-4,4 (m, IH), 5,92 (s, 2H), 6,34 (t, IH, J = 5,28 Hz), 6,55-6,57 (m, 2H, AA'BB’), 7,61-7,64 (AA’BB', 2H), 8,08 (d, IH, J - 7,64 Hz), 9,7 (br, s, IH).

25 Eksempel 13

Der fremstilles en opløsning af 1 mg/ml af N-[4-(N,-[2-ami-no-4(3H)-oxo-5,6,7,8-tetrahydropyrido[2,3-d]-pyrimidin-6-ylmethyl]amino)benzoyl]-L-glutaminsyre i 15% acetonitril og 30 85% af en 0,1 procentig opløsning af triethylamin i eddike syre (pufferet til pH 7,0). Denne opløsning indføres på en 10 mm x 50 cm Cyclobond I omvendt fase HPLC kolonne, idet der benyttes det samme opløsningsmiddelsystem. Der anvendes et flow på 1,10 ml/min med UV-detektion ved 154 nm.

35

En første diastereoisomer, her betegnet isomer "A", som er 23 DK 172896 B1 hovedsagelig fri for den anden, fås ved en retentionstid på 45,58 minutter. Den anden diastereoisomer, her betegnet isomer "B", der er hovedsagelig fri for den første, fås ved en retentionstid på 48,32 minutter.

5

Eksempel 14

Grupper å 10 C3H hunmus blev podet intraperitonealt i axil-lærregionen med C3H bryst adenocarcinomceller. Testforbin-10 delsen indgives så i Emulphor IP (0,5 ml) I ti dage. Kontrollerne fik samme behandling uden testforbindelse.

N-[4-(N'-[2-amino-4(3H)-oxo-5,6,7,8-tetrahydro-pyrido[2,3- d]pyrimidin-6-ylmethyl]amino)benzoyl]-L-glutaminsyre gav 15 96% hæmning i 7 ud af 10 overlevende ved en dosis på 6,25 mg/kg.

Mod 6C3HED lymphosarcom med en behandlingsperiode på 8 dage blev .følgende resultater fundet for den samme forbindelse: 20

Dosis Hæmning Overlevende (mg/kg) 25 6,0 77 10/10 12,5 100 9/10 25.0 100 7/10 50.0 100 4/10 100,0 100 1/10 30

Claims

1. Forbindelse, kendetegnet ved, at den er udvalgt fra gruppen bestående af : 5 (i) 4(3H)-oxo-5,6,7,8-tetrahydropyridor2,3-d]pyriraidiner med formlen: ° i ij Η Η m > m hh^Svnv/ ''ch-ch,-n // v OHH-CH-CH,CH,COOH HH ^ N ^ H 15 hvori: R1 er hydrogen, methyl, ethyl eller r5C0-, hvor R5 er hydrogen eller alkyl med 1 til 6 carbonatomer; og konfigurationen omkring det carbonatom, der er mærket *, er L; 20 (ii) de tautomere former deraf; og (iii) de farmaceutisk acceptable salte deraf.

2. R,S-diastereoisomeren af forbindelsen ifølge krav 1. 25

3. S,S-diastereoisomeren af forbindelsen ifølge krav 1.

4. Forbindelse ifølge krav 1, kendetegnet ved, at R1 er formyl.

5. Forbindelse ifølge krav 1, kendetegnet ved, at R1 er acetyl.

6. Farmaceutiske præparater til bekæmpelse af neoplastisk vækst i et pattedyr, kendetegnet ved, at de om-35 fatter en mængde af en forbindelse ifølge et hvilket som helst af kravene 1-4, der ved indgivelse i pattedyret i en DK 172896 B1 enkelt- eller multidosisbehandling er effektiv til at bekæmpe væksten, i forbindelse med en farmaceutisk acceptabel bærer.

7. Fremgangsmåde til fremstilling af en forbindelse ifølge krav 1, i hvilken R1 er R5CO-, kendetegnet ved, T at man behandler en forbindelse med formlen:

10 A ΛΙ ” \ HN Tf CH-CH,-n// XVc0NH-CH-<:h,CH,C0OR3 .· Λ x A λ=-Λ R HN N N 2 H VI 15 hvori: R2' og R3' er hydrogen eller den samme eller forskellige carboxylsyrebeskyttelsesgrupper; og 20 R4' er hydrogen eller en aminobeskyttelsesgruppe; og konfigurationen omkring det carbonatom, der er mærket *, er L, med en syre med formlen RsC00H, i hvilken Rs er hydrogen 25 eller alkyl med 1 til 6 carbonatomer, eller et reaktivt, acylerende derivat deraf, hvorefter eventuelt tilstedeværende beskyttelsesgrupper fjernes. 30

8. Fremgangsmåde ifølge krav 7, kendetegnet ved, at både R2 ’, R3 *, R4 ’ og Rs er hydrogen.

9. Fremgangsmåde ifølge krav 7, kendetegnet ved, ) 35 at både R2' og R3' er alkyl med 1 til 6 carbonatomer, R4' er alkanoyl med 2 til 6 carbonatomer, og Rs er hydrogen. DK 172896 B1 5

10. Fremgangsmåde til fremstilling af en forbindelse ifølge krav 1, kendetegnet ved, at man katalytisk hydrogenerer en forbindelse med formlen: o „1 'Vcora-CH-CH ch coor1* i li J 2 \=/ I 2.

10 COOR k HH VII 15 hvori R1, R2’, R3’ og R** er som ovenfor defineret, hvorefter eventuelt tilstedeværende beskyttelsesgrupper fraspaltes.

11. Mellemprodukt til anvendelse ved fremstilling af for bindelser ifølge krav 1, kendetegnet ved, at det er udvalgt fra gruppen bestående af : (i) 4(3H)-oxo-5,6,7,8-tetrahydropyrido[2,3-d]pyrimidiner med formlen: 25 ° . i il Ί .H * / v ^ 'nCH-CH.-H-V 'S-CONB-CH-CH CH.COOR3 i I i 2 \_/ i 2: OO „« —' COOR

30. HH N 5 H VIII hvori: 35 R1 er hydrogen, methyl, ethyl eller R5CO-; DK 172896 B1 R2' og R3' er hydrogen eller alkylgrupper med fra 1 til 6 carbonatomer, inklusive dem, der er forgrenede i 1-stil-lingen, og dem, der er substituerede med en eller flere 5 aromatiske grupper, såsom phenyl, eller substituerede med halogen eller alkoxy, f.eks. methyl, ethyl, t-butyl, benzyl, diphenylmethyl eller methoxymethy1, eller trimethyl-silyl eller 4-nitrobenzyl;

10 R4' er hydrogen eller en acylgruppe, navnlig alkanoyl med 2 til 6 carbonatoraer, eller alkoxycarbonyl, der hver eventuelt er substitueret med halogen, alkoxy eller phenyl, f.eks. acetyl, pivaloyl, 2,2,2-trichloracetyl, benzoyl, t-butoxycarbonyl, eller R4 betyder 4-nitrobenzyloxycarbonyl; 15 og konfigurationen omkring det carbonatom, der er mærket *, er L, idet grupperne R2 , R3 og R4 ikke alle er hydrogen; (ii) de tautomere former deraf; og 20 (iii) salte deraf.