DK173712B1 - Biokatalysatorer samt fremgangsmåde til fremstilling deraf og fremgangsmåde til fremstilling af alfa-hydroxycarboxylsyrer - Google Patents
Biokatalysatorer samt fremgangsmåde til fremstilling deraf og fremgangsmåde til fremstilling af alfa-hydroxycarboxylsyrer Download PDFInfo
- Publication number
- DK173712B1 DK173712B1 DK198905965A DK596589A DK173712B1 DK 173712 B1 DK173712 B1 DK 173712B1 DK 198905965 A DK198905965 A DK 198905965A DK 596589 A DK596589 A DK 596589A DK 173712 B1 DK173712 B1 DK 173712B1
- Authority
- DK
- Denmark
- Prior art keywords
- bead
- biocatalyst
- shaped
- active material
- biocatalysts
- Prior art date
Links
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 title claims abstract description 96
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 title claims abstract description 96
- 239000011942 biocatalyst Substances 0.000 title claims abstract description 81
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 34
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 title claims abstract description 26
- 230000008569 process Effects 0.000 title claims abstract description 26
- 239000002253 acid Substances 0.000 title claims description 13
- 150000007513 acids Chemical class 0.000 title claims description 10
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 title description 4
- 239000011324 bead Substances 0.000 claims abstract description 54
- 239000011149 active material Substances 0.000 claims abstract description 29
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 18
- 229920001661 Chitosan Polymers 0.000 claims abstract description 17
- 229920000867 polyelectrolyte Polymers 0.000 claims abstract description 14
- 125000002091 cationic group Chemical group 0.000 claims abstract description 13
- 150000001450 anions Chemical class 0.000 claims abstract description 11
- PPKAIMDMNWBOKN-UHFFFAOYSA-N 2-Oxo-4-phenylbutyric acid Chemical compound OC(=O)C(=O)CCC1=CC=CC=C1 PPKAIMDMNWBOKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 9
- 239000000377 silicon dioxide Substances 0.000 claims abstract description 9
- 239000000243 solution Substances 0.000 claims description 37
- RMAQACBXLXPBSY-UHFFFAOYSA-N silicic acid Chemical compound O[Si](O)(O)O RMAQACBXLXPBSY-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 32
- 235000012239 silicon dioxide Nutrition 0.000 claims description 31
- 239000000725 suspension Substances 0.000 claims description 21
- 108090000854 Oxidoreductases Proteins 0.000 claims description 17
- 102000004316 Oxidoreductases Human genes 0.000 claims description 17
- 238000004132 cross linking Methods 0.000 claims description 14
- 241000588767 Proteus vulgaris Species 0.000 claims description 13
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 claims description 13
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 claims description 11
- 235000019832 sodium triphosphate Nutrition 0.000 claims description 11
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 claims description 10
- 239000007787 solid Substances 0.000 claims description 8
- 239000000758 substrate Substances 0.000 claims description 7
- 241000588770 Proteus mirabilis Species 0.000 claims description 5
- 239000012062 aqueous buffer Substances 0.000 claims description 5
- FERIUCNNQQJTOY-UHFFFAOYSA-N Butyric acid Chemical compound CCCC(O)=O FERIUCNNQQJTOY-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 claims description 4
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 claims description 3
- UNXRWKVEANCORM-UHFFFAOYSA-I triphosphate(5-) Chemical compound [O-]P([O-])(=O)OP([O-])(=O)OP([O-])([O-])=O UNXRWKVEANCORM-UHFFFAOYSA-I 0.000 claims description 3
- BDAGIHXWWSANSR-UHFFFAOYSA-M Formate Chemical compound [O-]C=O BDAGIHXWWSANSR-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 2
- 239000012141 concentrate Substances 0.000 claims 1
- 239000006260 foam Substances 0.000 claims 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract description 14
- JNJCEALGCZSIGB-SECBINFHSA-N (2r)-2-hydroxy-4-phenylbutanoic acid Chemical compound OC(=O)[C@H](O)CCC1=CC=CC=C1 JNJCEALGCZSIGB-SECBINFHSA-N 0.000 abstract description 13
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 32
- XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N Ethyl acetate Chemical compound CCOC(C)=O XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 18
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 description 17
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 16
- -1 ag-i Polymers 0.000 description 14
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 10
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 9
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 9
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 9
- 239000000463 material Substances 0.000 description 9
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 8
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 8
- 239000000047 product Substances 0.000 description 8
- 229940007042 proteus vulgaris Drugs 0.000 description 8
- DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M Ilexoside XXIX Chemical compound C[C@@H]1CC[C@@]2(CC[C@@]3(C(=CC[C@H]4[C@]3(CC[C@@H]5[C@@]4(CC[C@@H](C5(C)C)OS(=O)(=O)[O-])C)C)[C@@H]2[C@]1(C)O)C)C(=O)O[C@H]6[C@@H]([C@H]([C@@H]([C@H](O6)CO)O)O)O.[Na+] DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M 0.000 description 7
- 241000588769 Proteus <enterobacteria> Species 0.000 description 7
- 238000001035 drying Methods 0.000 description 7
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K phosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 7
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 7
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 7
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 6
- KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N citric acid Chemical compound OC(=O)CC(O)(C(O)=O)CC(O)=O KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 6
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 6
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 description 6
- 229910052708 sodium Inorganic materials 0.000 description 6
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 description 5
- 229940072056 alginate Drugs 0.000 description 5
- 235000010443 alginic acid Nutrition 0.000 description 5
- 229920000615 alginic acid Polymers 0.000 description 5
- 239000003054 catalyst Substances 0.000 description 5
- 238000001723 curing Methods 0.000 description 5
- 238000005187 foaming Methods 0.000 description 5
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 5
- 230000001057 ionotropic effect Effects 0.000 description 5
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 5
- 210000003463 organelle Anatomy 0.000 description 5
- 235000021317 phosphate Nutrition 0.000 description 5
- 230000007306 turnover Effects 0.000 description 5
- FHVDTGUDJYJELY-UHFFFAOYSA-N 6-{[2-carboxy-4,5-dihydroxy-6-(phosphanyloxy)oxan-3-yl]oxy}-4,5-dihydroxy-3-phosphanyloxane-2-carboxylic acid Chemical compound O1C(C(O)=O)C(P)C(O)C(O)C1OC1C(C(O)=O)OC(OP)C(O)C1O FHVDTGUDJYJELY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-N Phosphoric acid Chemical compound OP(O)(O)=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 4
- 229920005615 natural polymer Polymers 0.000 description 4
- WFIZEGIEIOHZCP-UHFFFAOYSA-M potassium formate Chemical compound [K+].[O-]C=O WFIZEGIEIOHZCP-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 4
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 4
- BJEPYKJPYRNKOW-REOHCLBHSA-N (S)-malic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](O)CC(O)=O BJEPYKJPYRNKOW-REOHCLBHSA-N 0.000 description 3
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-M Acetate Chemical compound CC([O-])=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N Acetonitrile Chemical compound CC#N WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 102100030988 Angiotensin-converting enzyme Human genes 0.000 description 3
- 229920002101 Chitin Polymers 0.000 description 3
- 241000238557 Decapoda Species 0.000 description 3
- 230000003213 activating effect Effects 0.000 description 3
- 230000002210 biocatalytic effect Effects 0.000 description 3
- 235000010410 calcium alginate Nutrition 0.000 description 3
- 239000000648 calcium alginate Substances 0.000 description 3
- 229960002681 calcium alginate Drugs 0.000 description 3
- OKHHGHGGPDJQHR-YMOPUZKJSA-L calcium;(2s,3s,4s,5s,6r)-6-[(2r,3s,4r,5s,6r)-2-carboxy-6-[(2r,3s,4r,5s,6r)-2-carboxylato-4,5,6-trihydroxyoxan-3-yl]oxy-4,5-dihydroxyoxan-3-yl]oxy-3,4,5-trihydroxyoxane-2-carboxylate Chemical compound [Ca+2].O[C@@H]1[C@H](O)[C@H](O)O[C@@H](C([O-])=O)[C@H]1O[C@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O[C@H]2[C@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O2)C([O-])=O)O)[C@H](C(O)=O)O1 OKHHGHGGPDJQHR-YMOPUZKJSA-L 0.000 description 3
- 239000003431 cross linking reagent Substances 0.000 description 3
- 238000004090 dissolution Methods 0.000 description 3
- VLKZOEOYAKHREP-UHFFFAOYSA-N n-Hexane Chemical compound CCCCCC VLKZOEOYAKHREP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 229930027945 nicotinamide-adenine dinucleotide Natural products 0.000 description 3
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 3
- 239000010452 phosphate Substances 0.000 description 3
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 3
- 239000013049 sediment Substances 0.000 description 3
- 241000894007 species Species 0.000 description 3
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 3
- 229920001059 synthetic polymer Polymers 0.000 description 3
- UUUHXMGGBIUAPW-UHFFFAOYSA-N 1-[1-[2-[[5-amino-2-[[1-[5-(diaminomethylideneamino)-2-[[1-[3-(1h-indol-3-yl)-2-[(5-oxopyrrolidine-2-carbonyl)amino]propanoyl]pyrrolidine-2-carbonyl]amino]pentanoyl]pyrrolidine-2-carbonyl]amino]-5-oxopentanoyl]amino]-3-methylpentanoyl]pyrrolidine-2-carbon Chemical compound C1CCC(C(=O)N2C(CCC2)C(O)=O)N1C(=O)C(C(C)CC)NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C1CCCN1C(=O)C(CCCN=C(N)N)NC(=O)C1CCCN1C(=O)C(CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)NC(=O)C1CCC(=O)N1 UUUHXMGGBIUAPW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- MWVTWFVJZLCBMC-UHFFFAOYSA-N 4,4'-bipyridine Chemical class C1=NC=CC(C=2C=CN=CC=2)=C1 MWVTWFVJZLCBMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000228245 Aspergillus niger Species 0.000 description 2
- ROFVEXUMMXZLPA-UHFFFAOYSA-N Bipyridyl Chemical class N1=CC=CC=C1C1=CC=CC=N1 ROFVEXUMMXZLPA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- BHPQYMZQTOCNFJ-UHFFFAOYSA-N Calcium cation Chemical compound [Ca+2] BHPQYMZQTOCNFJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108010036781 Fumarate Hydratase Proteins 0.000 description 2
- 102100036160 Fumarate hydratase, mitochondrial Human genes 0.000 description 2
- 241000233866 Fungi Species 0.000 description 2
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N Isopropanol Chemical compound CC(C)O KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229930182555 Penicillin Natural products 0.000 description 2
- 108090000882 Peptidyl-Dipeptidase A Proteins 0.000 description 2
- 229920000388 Polyphosphate Polymers 0.000 description 2
- ZLMJMSJWJFRBEC-UHFFFAOYSA-N Potassium Chemical compound [K] ZLMJMSJWJFRBEC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- JUJWROOIHBZHMG-UHFFFAOYSA-N Pyridine Chemical compound C1=CC=NC=C1 JUJWROOIHBZHMG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- LCTONWCANYUPML-UHFFFAOYSA-N Pyruvic acid Chemical compound CC(=O)C(O)=O LCTONWCANYUPML-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- VMHLLURERBWHNL-UHFFFAOYSA-M Sodium acetate Chemical compound [Na+].CC([O-])=O VMHLLURERBWHNL-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 229910052783 alkali metal Inorganic materials 0.000 description 2
- BJEPYKJPYRNKOW-UHFFFAOYSA-N alpha-hydroxysuccinic acid Natural products OC(=O)C(O)CC(O)=O BJEPYKJPYRNKOW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000000889 atomisation Methods 0.000 description 2
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 2
- 229910001424 calcium ion Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000000919 ceramic Substances 0.000 description 2
- 238000000576 coating method Methods 0.000 description 2
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 2
- 239000000470 constituent Substances 0.000 description 2
- 238000007872 degassing Methods 0.000 description 2
- 239000003792 electrolyte Substances 0.000 description 2
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 2
- 238000011049 filling Methods 0.000 description 2
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 2
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 2
- 150000002500 ions Chemical class 0.000 description 2
- JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-N lactic acid Chemical compound CC(O)C(O)=O JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 235000011090 malic acid Nutrition 0.000 description 2
- BDAGIHXWWSANSR-UHFFFAOYSA-N methanoic acid Natural products OC=O BDAGIHXWWSANSR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 150000002891 organic anions Chemical class 0.000 description 2
- 239000012071 phase Substances 0.000 description 2
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 2
- 235000011007 phosphoric acid Nutrition 0.000 description 2
- 229920000447 polyanionic polymer Polymers 0.000 description 2
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 2
- 239000001205 polyphosphate Substances 0.000 description 2
- 235000011176 polyphosphates Nutrition 0.000 description 2
- 229910052700 potassium Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000011591 potassium Substances 0.000 description 2
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 2
- 239000001632 sodium acetate Substances 0.000 description 2
- 235000017281 sodium acetate Nutrition 0.000 description 2
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 2
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 2
- UDPGUMQDCGORJQ-UHFFFAOYSA-N (2-chloroethyl)phosphonic acid Chemical compound OP(O)(=O)CCCl UDPGUMQDCGORJQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- LCTORNIWLGOBPB-GASJEMHNSA-N (3r,4s,5s,6r)-2-amino-6-(hydroxymethyl)oxane-2,3,4,5-tetrol Chemical compound NC1(O)O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H]1O LCTORNIWLGOBPB-GASJEMHNSA-N 0.000 description 1
- IXPNQXFRVYWDDI-UHFFFAOYSA-N 1-methyl-2,4-dioxo-1,3-diazinane-5-carboximidamide Chemical compound CN1CC(C(N)=N)C(=O)NC1=O IXPNQXFRVYWDDI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- JNJCEALGCZSIGB-UHFFFAOYSA-N 2-hydroxy-4-phenylbutanoic acid Chemical compound OC(=O)C(O)CCC1=CC=CC=C1 JNJCEALGCZSIGB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OSWFIVFLDKOXQC-UHFFFAOYSA-N 4-(3-methoxyphenyl)aniline Chemical compound COC1=CC=CC(C=2C=CC(N)=CC=2)=C1 OSWFIVFLDKOXQC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- SKYNPRKUXHXZFJ-UHFFFAOYSA-L 6,7-dihydrodipyrido[1,2-b:1',2'-e]pyrazine-5,8-diium;dichloride Chemical compound [Cl-].[Cl-].C1=CC=[N+]2CC[N+]3=CC=CC=C3C2=C1 SKYNPRKUXHXZFJ-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 239000005541 ACE inhibitor Substances 0.000 description 1
- 102000007698 Alcohol dehydrogenase Human genes 0.000 description 1
- 108010021809 Alcohol dehydrogenase Proteins 0.000 description 1
- 102000013142 Amylases Human genes 0.000 description 1
- 108010065511 Amylases Proteins 0.000 description 1
- 108700016171 Aspartate ammonia-lyases Proteins 0.000 description 1
- 241000228212 Aspergillus Species 0.000 description 1
- 241000193830 Bacillus <bacterium> Species 0.000 description 1
- XPCFTKFZXHTYIP-PMACEKPBSA-N Benazepril Chemical compound C([C@@H](C(=O)OCC)N[C@@H]1C(N(CC(O)=O)C2=CC=CC=C2CC1)=O)CC1=CC=CC=C1 XPCFTKFZXHTYIP-PMACEKPBSA-N 0.000 description 1
- LUAZZOXZPVVGSO-UHFFFAOYSA-N Benzyl viologen Chemical compound C=1C=C(C=2C=C[N+](CC=3C=CC=CC=3)=CC=2)C=C[N+]=1CC1=CC=CC=C1 LUAZZOXZPVVGSO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N Calcium Chemical compound [Ca] OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000222120 Candida <Saccharomycetales> Species 0.000 description 1
- 240000001829 Catharanthus roseus Species 0.000 description 1
- 241000195649 Chlorella <Chlorellales> Species 0.000 description 1
- KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-K Citrate Chemical compound [O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 241000193403 Clostridium Species 0.000 description 1
- 241000186216 Corynebacterium Species 0.000 description 1
- 241000195493 Cryptophyta Species 0.000 description 1
- 241000223208 Curvularia Species 0.000 description 1
- XDTMQSROBMDMFD-UHFFFAOYSA-N Cyclohexane Chemical compound C1CCCCC1 XDTMQSROBMDMFD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- CKLJMWTZIZZHCS-UHFFFAOYSA-N D-OH-Asp Natural products OC(=O)C(N)CC(O)=O CKLJMWTZIZZHCS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 244000000626 Daucus carota Species 0.000 description 1
- 235000002767 Daucus carota Nutrition 0.000 description 1
- 101710088194 Dehydrogenase Proteins 0.000 description 1
- 240000001879 Digitalis lutea Species 0.000 description 1
- 239000005630 Diquat Substances 0.000 description 1
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 1
- 241000588722 Escherichia Species 0.000 description 1
- YTNIXZGTHTVJBW-SCRDCRAPSA-N FMNH2 Chemical compound OP(=O)(O)OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)CN1C=2C=C(C)C(C)=CC=2NC2=C1NC(=O)NC2=O YTNIXZGTHTVJBW-SCRDCRAPSA-N 0.000 description 1
- 108010074122 Ferredoxins Proteins 0.000 description 1
- 108090000698 Formate Dehydrogenases Proteins 0.000 description 1
- 230000005526 G1 to G0 transition Effects 0.000 description 1
- 108010010803 Gelatin Proteins 0.000 description 1
- 239000004366 Glucose oxidase Substances 0.000 description 1
- 108010015776 Glucose oxidase Proteins 0.000 description 1
- 108010036164 Glutathione synthase Proteins 0.000 description 1
- 102100034294 Glutathione synthetase Human genes 0.000 description 1
- 102000003886 Glycoproteins Human genes 0.000 description 1
- 108090000288 Glycoproteins Proteins 0.000 description 1
- 241000579664 Grateloupia proteus Species 0.000 description 1
- 239000005057 Hexamethylene diisocyanate Substances 0.000 description 1
- 241000238631 Hexapoda Species 0.000 description 1
- 102000005548 Hexokinase Human genes 0.000 description 1
- 108700040460 Hexokinases Proteins 0.000 description 1
- 206010020772 Hypertension Diseases 0.000 description 1
- 108090000769 Isomerases Proteins 0.000 description 1
- 102000004195 Isomerases Human genes 0.000 description 1
- CKLJMWTZIZZHCS-UWTATZPHSA-N L-Aspartic acid Natural products OC(=O)[C@H](N)CC(O)=O CKLJMWTZIZZHCS-UWTATZPHSA-N 0.000 description 1
- CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N L-aspartic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(O)=O CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- 102000003855 L-lactate dehydrogenase Human genes 0.000 description 1
- 108700023483 L-lactate dehydrogenases Proteins 0.000 description 1
- 241000186660 Lactobacillus Species 0.000 description 1
- 241000192132 Leuconostoc Species 0.000 description 1
- 108090000364 Ligases Proteins 0.000 description 1
- 102000003960 Ligases Human genes 0.000 description 1
- 108090000856 Lyases Proteins 0.000 description 1
- 102000004317 Lyases Human genes 0.000 description 1
- 244000131360 Morinda citrifolia Species 0.000 description 1
- 235000008898 Morinda citrifolia Nutrition 0.000 description 1
- 241000235395 Mucor Species 0.000 description 1
- BAWFJGJZGIEFAR-NNYOXOHSSA-N NAD zwitterion Chemical compound NC(=O)C1=CC=C[N+]([C@H]2[C@@H]([C@H](O)[C@@H](COP([O-])(=O)OP(O)(=O)OC[C@@H]3[C@H]([C@@H](O)[C@@H](O3)N3C4=NC=NC(N)=C4N=C3)O)O2)O)=C1 BAWFJGJZGIEFAR-NNYOXOHSSA-N 0.000 description 1
- 108030003379 NAD(+) synthases Proteins 0.000 description 1
- 241000192001 Pediococcus Species 0.000 description 1
- JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N Penicillin G Chemical compound N([C@H]1[C@H]2SC([C@@H](N2C1=O)C(O)=O)(C)C)C(=O)CC1=CC=CC=C1 JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N 0.000 description 1
- 241000228143 Penicillium Species 0.000 description 1
- 239000001888 Peptone Substances 0.000 description 1
- 108010080698 Peptones Proteins 0.000 description 1
- 241001603151 Philus Species 0.000 description 1
- 229920001744 Polyaldehyde Polymers 0.000 description 1
- 241000589516 Pseudomonas Species 0.000 description 1
- 108091007187 Reductases Proteins 0.000 description 1
- 241000235070 Saccharomyces Species 0.000 description 1
- 239000004280 Sodium formate Substances 0.000 description 1
- 241000194017 Streptococcus Species 0.000 description 1
- 241000187747 Streptomyces Species 0.000 description 1
- FEWJPZIEWOKRBE-UHFFFAOYSA-N Tartaric acid Natural products [H+].[H+].[O-]C(=O)C(O)C(O)C([O-])=O FEWJPZIEWOKRBE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108090000992 Transferases Proteins 0.000 description 1
- 102000004357 Transferases Human genes 0.000 description 1
- 239000007983 Tris buffer Substances 0.000 description 1
- 241000251539 Vertebrata <Metazoa> Species 0.000 description 1
- 241000589634 Xanthomonas Species 0.000 description 1
- 108700040099 Xylose isomerases Proteins 0.000 description 1
- 241000588902 Zymomonas mobilis Species 0.000 description 1
- XJLXINKUBYWONI-DQQFMEOOSA-N [[(2r,3r,4r,5r)-5-(6-aminopurin-9-yl)-3-hydroxy-4-phosphonooxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl] [(2s,3r,4s,5s)-5-(3-carbamoylpyridin-1-ium-1-yl)-3,4-dihydroxyoxolan-2-yl]methyl phosphate Chemical compound NC(=O)C1=CC=C[N+]([C@@H]2[C@H]([C@@H](O)[C@H](COP([O-])(=O)OP(O)(=O)OC[C@@H]3[C@H]([C@@H](OP(O)(O)=O)[C@@H](O3)N3C4=NC=NC(N)=C4N=C3)O)O2)O)=C1 XJLXINKUBYWONI-DQQFMEOOSA-N 0.000 description 1
- 239000008351 acetate buffer Substances 0.000 description 1
- 229960000583 acetic acid Drugs 0.000 description 1
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 1
- 239000013543 active substance Substances 0.000 description 1
- 239000000654 additive Substances 0.000 description 1
- 230000000996 additive effect Effects 0.000 description 1
- 238000013019 agitation Methods 0.000 description 1
- 229910000147 aluminium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 229940024606 amino acid Drugs 0.000 description 1
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 1
- 125000003277 amino group Chemical group 0.000 description 1
- 150000003863 ammonium salts Chemical class 0.000 description 1
- 235000019418 amylase Nutrition 0.000 description 1
- 229940025131 amylases Drugs 0.000 description 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 1
- 229940044094 angiotensin-converting-enzyme inhibitor Drugs 0.000 description 1
- 150000001449 anionic compounds Chemical class 0.000 description 1
- 239000002518 antifoaming agent Substances 0.000 description 1
- 239000002220 antihypertensive agent Substances 0.000 description 1
- 229940127088 antihypertensive drug Drugs 0.000 description 1
- 239000008346 aqueous phase Substances 0.000 description 1
- 229960005261 aspartic acid Drugs 0.000 description 1
- 239000002585 base Substances 0.000 description 1
- 229960004530 benazepril Drugs 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 description 1
- 238000005842 biochemical reaction Methods 0.000 description 1
- 239000006177 biological buffer Substances 0.000 description 1
- 239000011575 calcium Substances 0.000 description 1
- 229910052791 calcium Inorganic materials 0.000 description 1
- 229940041514 candida albicans extract Drugs 0.000 description 1
- 239000002775 capsule Substances 0.000 description 1
- 150000007942 carboxylates Chemical class 0.000 description 1
- 235000010418 carrageenan Nutrition 0.000 description 1
- 239000000679 carrageenan Substances 0.000 description 1
- 229920001525 carrageenan Polymers 0.000 description 1
- 229940113118 carrageenan Drugs 0.000 description 1
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 1
- 230000001925 catabolic effect Effects 0.000 description 1
- 238000006555 catalytic reaction Methods 0.000 description 1
- 150000001768 cations Chemical class 0.000 description 1
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 1
- 230000019522 cellular metabolic process Effects 0.000 description 1
- 239000001913 cellulose Substances 0.000 description 1
- 229920002678 cellulose Polymers 0.000 description 1
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 1
- 230000009920 chelation Effects 0.000 description 1
- MXZACTZQSGYANA-UHFFFAOYSA-N chembl545463 Chemical compound Cl.C1=CC(OC)=CC=C1C(N=C1)=CN2C1=NC(C)=C2O MXZACTZQSGYANA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000007385 chemical modification Methods 0.000 description 1
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 1
- 210000003763 chloroplast Anatomy 0.000 description 1
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 1
- 239000007979 citrate buffer Substances 0.000 description 1
- 229960004106 citric acid Drugs 0.000 description 1
- 239000011248 coating agent Substances 0.000 description 1
- 239000005515 coenzyme Substances 0.000 description 1
- 230000006835 compression Effects 0.000 description 1
- 238000007906 compression Methods 0.000 description 1
- 238000004690 coupled electron pair approximation Methods 0.000 description 1
- 230000006196 deacetylation Effects 0.000 description 1
- 238000003381 deacetylation reaction Methods 0.000 description 1
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 1
- 230000000881 depressing effect Effects 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 1
- HPNMFZURTQLUMO-UHFFFAOYSA-N diethylamine Chemical compound CCNCC HPNMFZURTQLUMO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 description 1
- 239000000539 dimer Substances 0.000 description 1
- 235000011180 diphosphates Nutrition 0.000 description 1
- ZPWVASYFFYYZEW-UHFFFAOYSA-L dipotassium hydrogen phosphate Chemical compound [K+].[K+].OP([O-])([O-])=O ZPWVASYFFYYZEW-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 235000019797 dipotassium phosphate Nutrition 0.000 description 1
- 229910000396 dipotassium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 1
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 1
- 230000009977 dual effect Effects 0.000 description 1
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 1
- 239000008151 electrolyte solution Substances 0.000 description 1
- 229940021013 electrolyte solution Drugs 0.000 description 1
- 239000003623 enhancer Substances 0.000 description 1
- 238000006911 enzymatic reaction Methods 0.000 description 1
- 239000003822 epoxy resin Substances 0.000 description 1
- 238000000855 fermentation Methods 0.000 description 1
- 230000004151 fermentation Effects 0.000 description 1
- 239000000835 fiber Substances 0.000 description 1
- 239000000945 filler Substances 0.000 description 1
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 description 1
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 1
- VWWQXMAJTJZDQX-UYBVJOGSSA-N flavin adenine dinucleotide Chemical compound C1=NC2=C(N)N=CN=C2N1[C@@H]([C@H](O)[C@@H]1O)O[C@@H]1CO[P@](O)(=O)O[P@@](O)(=O)OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)CN1C2=NC(=O)NC(=O)C2=NC2=C1C=C(C)C(C)=C2 VWWQXMAJTJZDQX-UYBVJOGSSA-N 0.000 description 1
- 235000019162 flavin adenine dinucleotide Nutrition 0.000 description 1
- 239000011714 flavin adenine dinucleotide Substances 0.000 description 1
- FVTCRASFADXXNN-SCRDCRAPSA-N flavin mononucleotide Chemical compound OP(=O)(O)OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)CN1C=2C=C(C)C(C)=CC=2N=C2C1=NC(=O)NC2=O FVTCRASFADXXNN-SCRDCRAPSA-N 0.000 description 1
- 239000011768 flavin mononucleotide Substances 0.000 description 1
- 229940013640 flavin mononucleotide Drugs 0.000 description 1
- FVTCRASFADXXNN-UHFFFAOYSA-N flavin mononucleotide Natural products OP(=O)(O)OCC(O)C(O)C(O)CN1C=2C=C(C)C(C)=CC=2N=C2C1=NC(=O)NC2=O FVTCRASFADXXNN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940093632 flavin-adenine dinucleotide Drugs 0.000 description 1
- 150000002211 flavins Chemical class 0.000 description 1
- 235000019253 formic acid Nutrition 0.000 description 1
- 229940013688 formic acid Drugs 0.000 description 1
- 238000013467 fragmentation Methods 0.000 description 1
- 238000006062 fragmentation reaction Methods 0.000 description 1
- 239000007789 gas Substances 0.000 description 1
- 238000002309 gasification Methods 0.000 description 1
- 239000008273 gelatin Substances 0.000 description 1
- 229920000159 gelatin Polymers 0.000 description 1
- 235000019322 gelatine Nutrition 0.000 description 1
- 235000011852 gelatine desserts Nutrition 0.000 description 1
- 238000001879 gelation Methods 0.000 description 1
- 239000003349 gelling agent Substances 0.000 description 1
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 1
- 229960001031 glucose Drugs 0.000 description 1
- 229940116332 glucose oxidase Drugs 0.000 description 1
- 235000019420 glucose oxidase Nutrition 0.000 description 1
- 108010010779 glutamine-pyruvate aminotransferase Proteins 0.000 description 1
- LNEPOXFFQSENCJ-UHFFFAOYSA-N haloperidol Chemical compound C1CC(O)(C=2C=CC(Cl)=CC=2)CCN1CCCC(=O)C1=CC=C(F)C=C1 LNEPOXFFQSENCJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940005740 hexametaphosphate Drugs 0.000 description 1
- RRAMGCGOFNQTLD-UHFFFAOYSA-N hexamethylene diisocyanate Chemical compound O=C=NCCCCCCN=C=O RRAMGCGOFNQTLD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- IXCSERBJSXMMFS-UHFFFAOYSA-N hydrogen chloride Substances Cl.Cl IXCSERBJSXMMFS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910000041 hydrogen chloride Inorganic materials 0.000 description 1
- 150000002440 hydroxy compounds Chemical class 0.000 description 1
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 description 1
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 description 1
- 229910001412 inorganic anion Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000002262 irrigation Effects 0.000 description 1
- 238000003973 irrigation Methods 0.000 description 1
- 239000012948 isocyanate Substances 0.000 description 1
- 150000002513 isocyanates Chemical class 0.000 description 1
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 1
- 229940116298 l- malic acid Drugs 0.000 description 1
- 239000004310 lactic acid Substances 0.000 description 1
- 235000014655 lactic acid Nutrition 0.000 description 1
- 229940039696 lactobacillus Drugs 0.000 description 1
- 239000007791 liquid phase Substances 0.000 description 1
- 239000001630 malic acid Substances 0.000 description 1
- 229940099690 malic acid Drugs 0.000 description 1
- 108010003007 mannose isomerase Proteins 0.000 description 1
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 1
- 235000013372 meat Nutrition 0.000 description 1
- 230000002503 metabolic effect Effects 0.000 description 1
- 125000005341 metaphosphate group Chemical group 0.000 description 1
- 230000000813 microbial effect Effects 0.000 description 1
- 210000003470 mitochondria Anatomy 0.000 description 1
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 1
- 229950006238 nadide Drugs 0.000 description 1
- BOPGDPNILDQYTO-NNYOXOHSSA-N nicotinamide-adenine dinucleotide Chemical compound C1=CCC(C(=O)N)=CN1[C@H]1[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](COP(O)(=O)OP(O)(=O)OC[C@@H]2[C@H]([C@@H](O)[C@@H](O2)N2C3=NC=NC(N)=C3N=C2)O)O1 BOPGDPNILDQYTO-NNYOXOHSSA-N 0.000 description 1
- 235000017524 noni Nutrition 0.000 description 1
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 description 1
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 description 1
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 description 1
- 229920000620 organic polymer Polymers 0.000 description 1
- 238000012856 packing Methods 0.000 description 1
- FIKAKWIAUPDISJ-UHFFFAOYSA-L paraquat dichloride Chemical compound [Cl-].[Cl-].C1=C[N+](C)=CC=C1C1=CC=[N+](C)C=C1 FIKAKWIAUPDISJ-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 239000001814 pectin Substances 0.000 description 1
- 235000010987 pectin Nutrition 0.000 description 1
- 229920001277 pectin Polymers 0.000 description 1
- 229960000292 pectin Drugs 0.000 description 1
- 229940049954 penicillin Drugs 0.000 description 1
- 150000002960 penicillins Chemical class 0.000 description 1
- 235000019319 peptone Nutrition 0.000 description 1
- 230000035699 permeability Effects 0.000 description 1
- 150000003013 phosphoric acid derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 238000011020 pilot scale process Methods 0.000 description 1
- 229920000647 polyepoxide Polymers 0.000 description 1
- 239000004814 polyurethane Substances 0.000 description 1
- 229920002635 polyurethane Polymers 0.000 description 1
- 229910001414 potassium ion Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000008057 potassium phosphate buffer Substances 0.000 description 1
- 159000000001 potassium salts Chemical class 0.000 description 1
- 239000002243 precursor Substances 0.000 description 1
- 238000004321 preservation Methods 0.000 description 1
- 238000002203 pretreatment Methods 0.000 description 1
- 125000002924 primary amino group Chemical group [H]N([H])* 0.000 description 1
- 230000019525 primary metabolic process Effects 0.000 description 1
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 1
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 1
- UMJSCPRVCHMLSP-UHFFFAOYSA-N pyridine Natural products COC1=CC=CN=C1 UMJSCPRVCHMLSP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 150000003222 pyridines Chemical class 0.000 description 1
- JUJWROOIHBZHMG-UHFFFAOYSA-O pyridinium Chemical compound C1=CC=[NH+]C=C1 JUJWROOIHBZHMG-UHFFFAOYSA-O 0.000 description 1
- 229940107700 pyruvic acid Drugs 0.000 description 1
- 239000012429 reaction media Substances 0.000 description 1
- 230000008929 regeneration Effects 0.000 description 1
- 238000011069 regeneration method Methods 0.000 description 1
- 230000027756 respiratory electron transport chain Effects 0.000 description 1
- 235000019231 riboflavin-5'-phosphate Nutrition 0.000 description 1
- 239000002002 slurry Substances 0.000 description 1
- 235000010413 sodium alginate Nutrition 0.000 description 1
- 239000000661 sodium alginate Substances 0.000 description 1
- 229940005550 sodium alginate Drugs 0.000 description 1
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 1
- HLBBKKJFGFRGMU-UHFFFAOYSA-M sodium formate Chemical compound [Na+].[O-]C=O HLBBKKJFGFRGMU-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 235000019254 sodium formate Nutrition 0.000 description 1
- 229910001415 sodium ion Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000007790 solid phase Substances 0.000 description 1
- 238000001179 sorption measurement Methods 0.000 description 1
- 235000013555 soy sauce Nutrition 0.000 description 1
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 1
- 238000005728 strengthening Methods 0.000 description 1
- 150000003871 sulfonates Chemical class 0.000 description 1
- 230000002459 sustained effect Effects 0.000 description 1
- 239000011975 tartaric acid Substances 0.000 description 1
- 235000002906 tartaric acid Nutrition 0.000 description 1
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 1
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 1
- 230000000930 thermomechanical effect Effects 0.000 description 1
- 210000002377 thylakoid Anatomy 0.000 description 1
- 235000013619 trace mineral Nutrition 0.000 description 1
- 239000011573 trace mineral Substances 0.000 description 1
- 230000009466 transformation Effects 0.000 description 1
- UNXRWKVEANCORM-UHFFFAOYSA-N triphosphoric acid Chemical compound OP(O)(=O)OP(O)(=O)OP(O)(O)=O UNXRWKVEANCORM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N tris Chemical compound OCC(N)(CO)CO LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000000108 ultra-filtration Methods 0.000 description 1
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 1
- 238000009736 wetting Methods 0.000 description 1
- 239000012138 yeast extract Substances 0.000 description 1
- UHVMMEOXYDMDKI-JKYCWFKZSA-L zinc;1-(5-cyanopyridin-2-yl)-3-[(1s,2s)-2-(6-fluoro-2-hydroxy-3-propanoylphenyl)cyclopropyl]urea;diacetate Chemical compound [Zn+2].CC([O-])=O.CC([O-])=O.CCC(=O)C1=CC=C(F)C([C@H]2[C@H](C2)NC(=O)NC=2N=CC(=CC=2)C#N)=C1O UHVMMEOXYDMDKI-JKYCWFKZSA-L 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P7/00—Preparation of oxygen-containing organic compounds
- C12P7/40—Preparation of oxygen-containing organic compounds containing a carboxyl group including Peroxycarboxylic acids
- C12P7/42—Hydroxy-carboxylic acids
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N11/00—Carrier-bound or immobilised enzymes; Carrier-bound or immobilised microbial cells; Preparation thereof
- C12N11/14—Enzymes or microbial cells immobilised on or in an inorganic carrier
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Zoology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Microbiology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Inorganic Chemistry (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Immobilizing And Processing Of Enzymes And Microorganisms (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Catalysts (AREA)
- Steroid Compounds (AREA)
- Polysaccharides And Polysaccharide Derivatives (AREA)
- Silicon Polymers (AREA)
- Compositions Of Macromolecular Compounds (AREA)
Description
i DK 173712 B1
Opfindelsen angår perleformede biokatalysatorer med høj mekanisk styrke, en fremgangsmåde til fremstilling deraf samt fremgangsmåde til fremstilling af tx-hydroxycarboxylsyrer 5 ved hjælp af biokatalysatorerne ifølge opfindelsen.
Begrebet biokatalyse omfatter i bredeste betydning alle former for katalyse, ved hvilke det aktiverende stof er et biologisk system, f.eks. hele celler, cellefragmenter eller celleorganeller, eller stammer fra et biologisk 10 system, f.eks. enzymer. Enzymer er forbindelser, sædvanligvis proteiner eller glycoproteiner, der specifikt accelererer biokemiske reaktioner, idet de nedsætter aktiveringsenergien. I det følgende betegner udtrykket biokatalysator ikke blot det aktiverende stof selv, men 15 kan eventuelt også omfatte komponenter, der anvendes til immobilisering, holdbarhed, regenerering osv. af det aktiverende stof.
Immobiliserede, dvs. i deres bevægelighed indskrænkede biokatalysatorer er især egnede til industrielle formål.
20 Ved immobiliseringen bliver det muligt at udføre de katalyserede processer kontinuerligt og gentaget, at skabe og opretholde høje biokatalysatortætheder, at opnå høje tids-rum-udbytter og at sænke omkostningerne for udvinding af produktet fra reaktionsopløsningen.
25 Det biokatalytiske materiale kan til immobilisering eksempelvis indesluttes i polymere overtræksstoffer (matrix), i kapsler eller fibre af semipermeable membraner eller bag ultrafiltreringsmembraner, tværbindes med bi- eller multifunktionelle reagenser eller ved adsorption eller 30 ionisk eller covalent binding fikseres på bærere af uorganisk materiale eller naturlige eller syntetiske polymere. Også en kombination af disse metoder er mulig.
Ved immobiliseringen må på den ene side den størst mulige bevaring af den biokatalytiske aktivitet og på den anden 2 DK 1:7 571 2 B1 side høj mekanisk styrke og kemisk: stabilitet, men s-rr-tidig også god permeabilitet for biokatalysatoren sikre s.
En gængs immobiliseringsmetode er eksempelvis indeslutnirg 5 ("entrapment”) af det biologisk aktive materiale i en matrix af naturlige polymere, såsom cellulose, ag-i, gelatine og andre, eller af syntetiske polymere, såscm polyaerylamid, po lyurethaner, epoxyharpikser og andre.
Særlig skånende er immobiliseringen ved ionotrop geldcΓΙΟ nelse (ionisk tværbinding af matricestofferne), hvori il der som overtræksmateriale eksempelvis egner sig naturl i ce polyanioner, såsom alginat, pektin, carrageenan og andt e.
Ved inddrypning eller indsprøjtning af en suspension af enzymatisk aktivt materiale og en vandig opløsning af 15 matricestoffet i en vandig tværbindingsopløsning, c er indeholder polyvalente modioner, f.eks. Ca2+, Co2+, Zn:<+,
Fe2 + , Fe^ + , Al-3+ og andre, opnås chelatisering og dan nelse af perleformede biokatalysatorer.
Ved den ionotrope geldannelse af organiske polymere :iås 20 som regel kun relativt bløde, mekanisk ustabile immobil i -sater, der har tendens til kvældning og deformation, således at f.eks. deres anvendelse i fyldlegemereaktorar, således som de hyppigt anvendes industrielt til enzymatiske reaktioner, giver vanskeligheder, Hærdningsmetoder ve3 25 efterbehandling af immobilisaterne eller ved forbehandling af det biologisk aktive materiale før tilsætninga i til geleringsmidlet, i hvert tilfælde med multi -funktionelle tværbindingsreagenser, såsom polyaldehyder, f.eks. glutaraldebyd, eller isocyanater, f.eks. hexama-30 thylendiisocyanat, kan på grund af deres celle- og/ellar enzymbeskadigende virkning kun anvendes meget begrænset.
Et alternativ er anvendelsen af uorganiske stoffer, f.eks. den i tysk offentliggørelsesskrift nr. 3.520.001 beskrevne fremgangsmåde, der afslører immobiliseringen af enzymatisk 35 materiale ved hjælp af silikasol og alginat. Også tørrinj og skrumpning af biokatalysatorperlerne anvendes tit hærdning, da perlerne efter genbefugtning ikke atter kai DK 173712 B1 3 indtage deres oprindelige fugtige rumfang og forbliver hårdere. Tysk offentliggørelsesskrift nr. 2.835.875 beskriver en fremgangsmåde til ionotrop geldannelse under 5 anvendelse af polyanioner, f.eks. natriumalginat, og eksempelvis calciumioner som tværbindingsmiddel, ved hvilken de med enzymatisk stof ladede biokatalysatorperler tørres ved en temperatur indtil 80°C. Sådanne tørringstrin kan dog ikke altid gennemføres, når højfølsomme enzymer 10 eller enzymsystemer, især levende celler, skal immobili-seres, da de høje temperaturer ved tørringen eller den tørre tilstand inaktiverer cellerne eller enzymerne.
Endnu en ulempe ved de ved ionotrop geldannelse fremstillede calciumalginat-immobilisater er foruden de dårlige 15 mekaniske egenskaber også indskrænkningen i mulige reaktionsmedier ved den videre forarbejdning. Sådanne immobi-lisater er f.eks. kemisk ustabile i nærvær af ioner, som de gængse pufferopløsninger indeholder, såsom natrium eller kalium. I sådanne elektrolytopløsninger, især når de 20 er højkoncentreret, fortrænges f.eks. de gelstyrkende calciumioner i calciumalginat-geler, fordi natrium- og kaliumioner konkurrerer om alginatanionen. Også phosphat-ioner fører efterhånden til opløsning af calciumalginat-biokatalysatorperler, da phosphater reagerer med calcium 25 og unddrager alginatet det strukturstyrkende middel. Opløsningen kan hindres, når der som matricestoffer anvendes polykationer, f.eks. chitosan, der tværbindes med polyvalente anioner, såsom [Fe(CN)g]3-, [Fe(CN)g]4-, polyphosphater og lignende. De tyske patentskrifter nr.
30 3.005.632 og 3.005.633 beskriver fremstillingen af biokatalysatorperler under anvendelse af chitosan og K3[Fe(CN)g ]. Fremgangsmåden ifølge tysk patentskrift nr. 3.005.632 indeholder til hærdning af perlerne et tørringstrin ved en temperatur indtil 80°C. For at muliggøre 35 immobiliseringen af høj følsomt enzymatisk stof, indeholder fremgangsmåden ifølge tysk patentskrift nr. 3.005.633 ikke dette tørringstrin, hvilket dog fører til en ringere 4 DK 1 73712 B1 mekanisk styrke af biokatalysatorperlerne.
Det er den foreliggende opfindelses opgave af stills 5 perleformede biokatalysatorer til råd.:kjhed, der har høj mekanisk styrke, hvis stabilitet også er sikret ved anvendelse af da gængse biologiske opløsninger og puffersystemer, og som endvidere sikrer høj følsomt enzymatisk aktivt 10 materiales enzymatiske aktivitet.
Endvidere er det opfindelsens opgave at påpege egneda fremgangsmåder til fremstilling af sådanne biokatalysatorer.
15
Som særlig egnede til løsning af disse opgaver viser sig perleformede biokatalysatorer, der indeholder enzymatisk aktivt materiale, ©n kationisk polyelektrolyt, fortrinsvis chitosan, polyvalente anioner og kiselsyre. Sådanne bioka-20 talysatorperler fremstilles i fast form ved en skånende immobiliseringsfremgangsmåde ved ionotrop geldannelse og ved anvendelse af kiselsyre og fremstilles ud fra en suspension af det enzymatisk aktive materiale, kiselsyren, pufferopløsning og polyelektrolytten, hvori slutkon-25 centrationen af kiselsyre ligger i et interval mellem 2 og 15 vægt-%.
Opfindelsen angår perleformede biokatalysatorer med høj mekanisk styrke omfattende enzymatisk aktivt materiale, ei 30 kationisk polyelektrolyt og polyvalente anioner, som er ejendommelige ved, at biokatalysatorerne ifølge opfindelsen indeholder kiselsyre og fremstilles ud fra en suspensior af det enzymatisk aktive materiale, kiselsyren, pufferopløsning og polyelektrolytten, hvori slutkoncentrationen cif 35 kiselsyre ligger i et interval mellem 2 og 15 vægt-%.
DK 173712 B1 5
De perleformede biokatalysatorer ifølge opfindelsen er karakteristiske ved høj mekanisk styrke, hvilket kan føres tilbage til udviklingen af en Dual-gelmatrice-struktur. De har derfor gode pakningsegenskaber, eksempelvis ved fyld-5 ning af en reaktionsbeholder, og kan anvendes som fyldmateriale til fastiejereaktorer. På grund af de milde , immobiliseringsbetingelser, der ikke omfatter noget tørringstrin eller en behandling med skadelige stoffer, er biokatalysatorerne ifølge opfindelsen navnlig egnede til 10 højfølsomt materiale, især til levende celler. Fremstillingen af de perleformede biokatalysatorer ifølge opfin- . delsen ved anvendelse af kiselsyre i fast form har i forhold til de fra teknikkens standpunkt kendte fremgangsmåder de fordele, at tids- og omkostningskrævende frem- 15 gangsmåder til forberedelse af de ved hærdningstrinnet anvendte tværbindingsmidler undgås. Endvidere kan biokatalysatorerne anvendes i puffersystemer, der indeholder ioner, der fører til opløsning af alginat-geler. Således kan biokatalysatorerne ifølge opfindelsen 20 eksempelvis anvendes i opløsninger, der indeholder, phosphationer, f.eks. i den meget billige og derfor til | industrielle formål fordelagtige tripolyphosphatpuffer. De perleformede biokatalysatorer ifølge opfindelsen egner sig til omsætning af organiske stoffer. Da de kan anvendes til 25 reaktioner, der kræver høje elektrolytkoncentrationer, egner biokatalysatorperler ifølge opfindelsen, der indeholder en bakterie af slægten Proteus eller en oxidoreduktase som enzymatisk aktivt materiale, sig eksempelvis til fremstilling af α-hydroxycarboxylsyrer ud 30 fra α-ketocarboxylsyrer, f.eks. af 2-(R)-hydroxy-4-phenyl-smørsyre ud fra 2-oxo-4-phenylsmørsyre.
De perleformede biokatalysatorer ifølge opfindelsen har 35 høj mekanisk styrke. Ved høj mekanisk styrke forstås eksempelvis høj trykstyrke, dvs. at biokatalysatorperler DK 173712 B1 6 ifølge opfindelsen med en gennemsnitlig størrelse på ca. 3 mm ved en belastning på 0,01 til 0,03 N, isser 0,02 N, efter et til fem minutter har en maksimal deformation på 30 til 50 μπι, især 40 μτη, og efter 10 til 20 minutter, ' ^ især 15 minutter ikke udviser yderligere deformations- tilvækst.
Arten af det enzymatisk aktive materiale, som biokataly-, satorerne ifølge opfindelsen omfatter, er bestemt af den reaktion, hvortil biokatalysatorerne skal anvendes. Det består fortrinsvis af hele celler, cellefragmenter eller celleorganeller af en mikroorganisme, af enzymer eller af en vilkårlig kombination af disse arter enzymatisk aktivt 15 materiale.
Mikroorganismen kan være af prokaryot eller eukaryot natur. Egnede mikroorganismer er eksempelvis - en bakterie, f.eks. en mælkesyrebakterie (Leuconostoc, 2Q Streptococcus, Lactobacillus), Corynebacterium,
Streptomyces, Pseudomonas, Xanthomonas, Bacillus, Clostridium, Escherichia, Proteus osv., p en svamp, f.eks. Mucor, Aspergillus, Penicillium, især gærarter, såsom Saccharomyces, Candida osv., __ - en alge, f.eks. Chlorella, Curvularia osv., eller Z o - en plantecelle, f.eks. Catharanthus roseus, Daucus carota, Digitalis lanata, Morinda citrifolia osv. .
Anvendelsen af hele celler, cellefragmenter eller celle-30 organeller, dvs. med membraner overtrukne eller af membransystemer bestående celleunderenheder (chloroplaster, thylakoider, mitochondrier osv.), som enzymatisk aktivt materiale er fordelagtig, når den reaktion, der skal katalyseres, kræver et multienzymsystem, f.eks. når 35 cof aktorer (pyridin- eller f lavinnukleotider osv.) er nødvendige, eller når der i stedet for et katabolsk 7 DK 173712 B1 produkt af en biosyntese f.eks. skal fremstilles et sekundært produkt, hvortil komplicerede stofskiftekæder er nødvendige.
5
Som enzymatisk aktivt materiale er også isolerede enzymer egnede. Typiske eksempler på sådanne enzymer er oxidore-duktaser (laktatdehydrogenase, alkoholdehydrogenase, glu-coseoxidase og andre), transferaser (hexokinase, glutamin- 10 transaminase og andre), lyaser (fumarase, aspartase og. andre), isomeraser (glucoseisomerase, mannoseisomerase og andre), ligaser (glutathionsyntetase, NAD-syntetase og andre) osv.
15 Som enzymatisk aktivt materiale kan biokatalysatorerne ifølge opfindelsen også omfatte en vilkårlig kombination af de beskrevne arter enzymatisk materiale, eksempelvis en kombination af hele celler af to eller flere arter eller stammer af mikroorganismer eller en kombination af hele 2 0 celler og enzymer. Grundtanken er kompletteringen af en celles biokatalytiske egenskaber med yderligere enzymer, der ikke eller kun i ringe mængde er til rådighed i cellen.
25 Som enzymatisk materiale foretrækkes især hele celler af en bakterie eller en gærart, fortrinsvis en bakterie af slægten Proteus, især en bakterie af arten Proteus vulga-: ris og/eller arten Proteus mirabilis. Især foretrækkes arten Proteus vulgaris, f.eks. Proteus vulgaris ATCC 9484.
30 Ligeledes foretrækkes især et enzymatisk aktivt materiale, der indeholder en oxidoreduktase eller er en oxidoreduk-tase.
35 8 DK17J712B1
Den kationiske polyelektrolyt er en naturlig eller syntetisk polymer eller en naturlig polymer efter kemisk modifikation, eksempelvis en polymer med protoniserede aminogrupper, fortrinsvis chitosan ([ 2-amino-2-deoxy- 5 1-+4 )-(?-D-glucopyranan; poly-( 1,4-0-D-glucopyranosainin ]).
Chitosan er en lines;r polymer med høj nolvægt af glucos-amin-underenheder, der fås ud fra chitin ved delvis deacetylering ved hjælp af koncentreret base og varme.
Chitin er vidt udbredt i naturen, f.eks. i marine! 10 invertebrater, insekter og svampe. Til produktion af! chitosan anvendes sædvanligvis chitin fra krabber, rejer, 1 hummere osv.. De perleformede biokatalysatorer ifølge opfindelsen omfatter fortrinsvis chitosan med en molvægt fra ca. 50.000 til ca. 3.000.000.
15
Som polyvalente anioner er polyvalente uorganiske eller polyvalente organiske anioner egnede. De uorganiske anioner er fortrinsvis orthophosphat, metaphosphater, f.eks. hexametaphosphat, pyrophosphater, polyphosphater, 20 f.eks. tri-, tet'ra- eller octapolyphosphat, eller cyano-ferrater, f.eks. [Fe(CN)gJ4- eller [Fe(CN)g]^“· Især foretrækkes tripolyphosphat. De organiske anioner er fortrinsvis polymere organiske carboxylater, sulfonater eller, hydroxyforbindelser„ 25
Sotn kiselsyre egner sig fortrinsvis en fældet kiselsyre, især en fældet kiselsyre med en gennemsnitlig kornstørrelse i området fra. 5 til 50 μπι og en gennemsnitlig rumvægt i området fra 5 til 100 g pr. 100 ml, især fra ca. 20 30 til 50 g pr. 100 ml.
Endvidere angår opfindelsen en fremgangsmåde til fremstilling af de perleformede biokatalysatorer ifølge opfindelsen med 35 høj mekanisk styrke, som er ejendommelig ved, at enzymatisk aktivt materiale biar.des til en suspension med fældet kisel- DK 173712 B1 9 syre i fast form, en vandig pufferopløsning og en vandig opløsning af en kationisk polyelektrolyt, idet skumdannelse undgås, suspensionen dråbevis indføres i et vandigt tværbindingsbad, indeholdende polyvalente anioner, og de fremkomne 5 biokatalysatorperler bringes til at skrumpe ind og stivne ved at forblive i tværbindingsbadet i mindst ca. 1 time, hvorpå de eventuelt skilles fra tværbindingsbadet.
Undgåelse af skumdannelse ved fremstilling af suspensionen 10 af enzymatisk aktivt materiale, fældet kiselsyre i fast form, vandig pufferopløsning og en vandig opløsning af en kationisk polyelektrolyt er af afgørende betydning, da der ellers sotn følge opstår katalysatorperler med dårligere^ mekanisk® egenskaber. Fortrinsvis undgås skumdannelse ved, 15 at blandingen af de forskellige komponenter sker i nærværelse af kiselsyren. Ellers er den rækkefølge, i hvil-; ken stofferne bringes sammen, ligegyldig. Fortrinsvis' blandes det enzymatiske materiale først med kiselsyren i fast form, først derpå optages i vandig pufferopløsning, 20 og derefter blandes med opløsningen af den kationiske polyelektrolyt.
Ved fremstillingen ifølge opfindelsen af biokatalysator-25 perler anvendes enzymatisk materiale som beskrevet ovenfor, dvs. hele celler, cellefragmenter eller celleorga-neller af en mikroorganisme eller enzymer eller en kombination deraf. Hele celler kan derved foreligge levende, døde eller eksempelvis lyofiliserede eller dehydrerede.
30 Dyrkningen af celler i et næringsmedium, der indeholder alle til opretholdelse af cellestofskiftet og til formeringen nødvendige organiske og uorganiske bestanddele (C-kilde, N-kilde, sporelementer, vækststoffer osv.), og' cellefragmenteringen til fremstilling af cellefragmenter 35 eller isolering af celleorganellerne sker ved i og for sig kendte metoder. Enzymer, der skal immobiliseres, forelig- DK 173712 B1 10 ger eksempelvis opløst, dispergeret, suspenderet, emulgeret eller tørret. Det nævnte og i det foregående nærmere definerede enzymatisk aktive materiale anvendes eksempelvis til fremgangsmåden ifølge opfindelsen scrr 5 celle-, cellefragment- eller celleorcfanelsediment, -filtrat eller -suspension eller som enzym i vandig opløsning. I sammenhæng med den foreliggende beskrivelse betyder udtrykket "i vandig opløsning", at opløsningen yderligere kan indeholde uorganiske eller organiske salte i 10 og lignende. Det kan eksempelvis dreje sig om en gænc ε biologisk puffer, såsom acetat-, phosphat-, tris-puffer cg lignende.
Som vandig pufferopløsning egner sig eksempelvis biole -15 giska puffere i et pH-interval fra pH 3 til 7, fortrins -vis ca. 5, f.eks. phosphat-, citrat- eller acetatpuffer.
De kationiske polyelektrolytter, der kan anvendes v=c fremgangsmåden ifølge opfindelsen, er beskrevet i dsi 20 foregående. Chitosan foretrækkes. Chitosan må til arvendelse til fremstilling af biokatalysatorperlerne før:= t bringes i vandig opløsning for at udgøre integrerende bestanddel af immobilisatet. Dertil optages chitosan, der i ikke-protoniseret: form er vanduopløselig, i fortyndere 25 vandige, især organiske, syrer, eksempelvis i myresyre, eddikesyre, pyrodruesyre, æblesyre, citronsyre eg lignende, fortrinsvis i eddikesyre, ved en pH-værdi i , fortrinsvis pH 4 til 5,5, og opvarmes eventuelt til ce .
60°C for at støtte opløsningsprocessen. Chitosanopløs-30 ningen filtreres derefter til fjernelse af uopløselice bestanddele. Til fremstilling af biokatalysatorperlerne; ifølge opfindelsen anvendes fortrinsvis en vandig oplø;-. ning af chitosan med en viskositet i området fra 1000 20.000 cP i en koncentration i området fra 0,5 til 5 vægtprocent. Især foretrækkes anvendelsen af en vandig opløsning af højviskøst chitosan med en viskositet på ca.
10.000 cP i en koncentration på ca. 1,4 vægtprocent.
DK 173712 B1 11
De anvendte stoffer anvendes fortrinsvis således, at vægtforholdt mellem kiselsyre og kationisk polyelektrolyt ligger i et område fra 1,5-50:1, især ved ca. 15:1. Slut-koncentrationen af kiselsyre i den ovenfor beskrevne 5 suspension ligger i et område fra 2 til 15 vægtprocent, f.eks. 10%. Foretrukne slutkoncentrationer af kationisk polyelektrolyt i den ovenfor beskevne suspen- sion er 0,3 til 1,5 vægtprocent, især ca. 0,7%.
10 Den kiselsyre, der anvendes til fremstilling af biokatalysatorperlerne ifølge opfindelsen, er beskevet ovenfor.
Den anvendes i fast form.
Ved tværbindingsbadet drejer det sig om en vandig opløs-15 ning af en polyvalent anion. De mulige anioner er beskrevet i det foregående. Dé^anvendes til tværbindingsbadet" i form af syrer eller som salte, f.eks. som alkalimetalsalte, eksempelvis natrium- eller kaliumsalte, endvidere også som ammoniumsalte. En vandig opløsning fore- 20 trækkes, til hvilken tripolyphosphorsyre eller et salt deraf, f.eks. natrium- eller kaliumtripolyphosphat, anvendes. I tværbindingsbadet foreligger de nævnte forbindelser eksempelvis i en koncentration i området fra 0,5 til 10% (v/r), fortrinsvis fra 1,5 til 3% (v/r).
25 Tværbindingsopløsningens pH-værdi ligger i et område fra pH 5 til 10, fortrinsvis på ca. pH 8.
Suspensionen af enzymatisk aktivt materiale, kiselsyre, pufferopløsning og polykation dryppes under omrøring til 30 tværbindingsopløsningen, hensigtsmæssigt således, at tværbindingsbadets rumfang udgør mindst det tredobbelte af suspensionens rumfang. Den dråbevise tilsætning sker under anvendelse af en dyse med en lille åbning, eksempelvis en injektionssprøjte, en sprøjtelignende injek-35 tionsindretning, en porøs plade eller et lignende egnet middel. Dråberne blæses eventuelt af dysens spids under DK 17:ϊ712 B1 anvendelse af komprimeret luft, komprimeret nitrogen eller lignende. Suspensionen kan også indsprøjtes i tværbindingsopløsningen, eksempelvis under anvendelse af ni; atomiseringsappetrat, fortrinsvis et trykatomisering: s-apparat.
De ved den ovenfor beskrevne fremgangsmåde fremstilletU 5 biokatalysatorperler forbliver mindst ca. en time, f.eks. ! natten over i tværbindingsbadet til indskrumpning og hærd- ! ning. Eventuelt skilles de fra tværbindingsbadet vue. gængse, til adskillelse af faste og flydende faser egneik metoder, såsom dekantering, filtrering osv., og underkas- 10 tes før den yderligere anvendelse en fysiologisk vaskeproces, eksempelvis med fysiologisk natriumchloridopløsning.
Perleformede biokatalysatorer med høj mekanisk styrke, dei fremstilles ved fremgangsmåden ifølge opfindelsen, ei 15 ligeledes genstand for opfindelsen. : 2o Opfindelsen angår desuden fremgangsmåder til fremstilling af a-hydroxy carboxyl syrer ud fra α-ketocarboxylsyrer, son er ejendommelige ved, at der til omsætningen anvendes perle-formede biokatalysatorer ifølge den foreliggende opfindelse, 25 Alt efter arten af det immobiliserede enzymatisk aktiva materiale er produktionen af et bredt spektrum af produkter mulig, der opstår ved fermenteringsprocesser, i primærstofskiftet, ved mikrobiel transformation osv., eksempelvis af 30 - kemikalier, f.eks. citronsyre ved Aspergillus niger, ethanol ved Zymomonas mobilis, L-æblesyre ved fuma-rase, H2 ved Chlorella-Clostridie-coimmobilisater, næringsmidler, f.eks. sojasauce ved Pediococcus hale-: philus, 35 - enzymer, f.eks. amylaser ved Aspergillus niger, medikamenter, f.eks. penicilliner ved Penicillin ir. chrosogenum, eller aminosyrer, f.eks. L-asparaginsyre ved L-aspartase.
DK 173712 B1 13
Fremgangsmåder til fremstilling af a-hydroxycarboxylsyrer ud fra cx-ketocarboxylsyrer ved hjælp af biokatalysatorer ifølge opfindelsen, hvis enzymatisk aktive materiale indeholder en oxidoreduktase, er en oxidoreduktase eller 5 består af hele celler af en bakterie af slægten Proteus, især arterne Proteus vulgaris og/eller Proteus mirabilis, fortrinsvis Proteus vulgaris, foretrækkes. Reduktionen af substratet sker derved med den såkaldte finale reduktase, f.eks. en substratspecifik dehydrogenase. Sædvanligvis 10 leveres de reduktionsækvivalenter, som den finale reduktase behøver, af et coenzym, f.eks. af pyridinnukleoti-der, såsom nikotinamidadenindinukleotid(phosphat) (NADH, NADPH) eller af flavinnukleotider, såsom flavinmononukleo-tid (FMNH) eller flavinadenindinukleotid (FADH). De redu-15 cerede nukleotider opstår atter f.eks. ved elektronoverførsel over naturlige eller syntetiske elektronmediatorer med egnet redoxpotentiale, såsom ferredoxin eller bipyri-dyliumderivater, f.eks. 4,4'-bipyridyliumderivater (Violo-gen) eller 2,2'-bipyridyliumderivater (eksempelvis diquat-20 kationer, såsom diquat-dibromid eller diquat-dichlorid).
Der kendes også finale reduktaser, der kan optage elektronerne direkte fra mediatorerne.
25 Især foretrækkes en fremgangsmåde til fremstilling af 2-hydroxy-4-phenylsmørsyre, fortrinsvis af 2-(R)-hydroxy- 4-phenylsmørsyre, ud fra 2-oxo-4-phenylsmørsyre ved hjælp af biokatalysatorerne ifølge opfindelsen, hvis enzymatisk aktive materiale indeholder en oxidoreduktase eller er en 30 oxidoreduktase eller består af hele celler af en bakterie af slægten Proteus, især af arterne Proteus vulgaris og/-eller Proteus mirabilis, fortrinsvis Proteus vulgaris.
2-(R)-hydroxy-4-phenylsmørsyre er et værdifuldt mellemprodukt ved fremstillingen af ACE, angiotensinomdannende 35 enzym-("angiotensin converting enzyme")-inhibitorer eller deres forstadier. Dennes klasse aktive stoffer har i de 14 DK 1 7 Ϊ712 B1 forløbne år fundet voksende interesse:. Den udvider de t:.l rådighed stående antihypertensivas potentiale og dermed de terapeutiske muligheder ved bekæmpelsen af højt blodtryk.
Af særlig interesse er derved fremstillingen af ACE-ha;n-5 meren 3-{[ l-ethoxycarbonyl-3-phenyl-(lS)-propyl ]amino'>- 2,3,4,5-tetrahydro-2-oxo-lH-l-(3S)-ben:iazepin-l-eddike-syre-monohydrochlorid (= Benazepril).
Opfindelsen angår især en fremgangsmåde til fremstilliiu'j 10 af 2-(R)-hydroxy-4-phenylsmørsyre ud fra 2-oxo-4-pheny L··' smørsyre, som er ejendommelig ved, at perleforme· kil biokatalysatorer ifølge opfindelsen, hvis enzymati sk: aktive materiale består af hele celler af en bakterie r.:\ slægten Proteus, især af arterne Proteus vulgaris og/eller.· 15 Proteus mirabilis, fortrinsvis Proteus vulgaris, anvend i en fastleje- eller hvirvellagsreaktor, fortrinsvis i sn! fastlejereaktor, gennem hvilken der kontinuerligt ledes en vandig opløsning af substratet 2-oxo-4-phenylsmørsyrϊ eksempelvis i en koncentration i området fra 50 til 2)0 20 mM, af formiat, eksempelvis et alkalimetalformiat, såson kalium- eller natriumformiat, eksempelvis i en koncentration i området fra 100 til 500 mM, og en elektronirid-diator, f.eks. et 4,4'-bipyridyliumderivat, såson methylviologen, carbamoylmethylviologen eller benzylvio-25 logen, eller et 2,2'-bipyridyliumderivat, såsom diquatd:-kation, eksempelvis i en koncentration i området fra 0, ϊ til 10 mM. Reduktionen af substratet katalyseres eksempelvis af den i Proteus vulgaris indeholdte 2-oxocarboxy:-syrereduktase (2-hydroxycarboxylat-viologen-oxidoreduk-30 tase). Da dette enzym har en høj enantiomerselektivite:, og produktet opstår med et enantiomeroverskud på mere ene 99,8% ligger der en særlig fordel ved anvendelse af d<d ved fremgangsmåden ifølge opfindelsen fremstillede produki i, at der ved syntesen af ACE-hæmmere, som forløber ovci 35 talrige trin, allerede i et relativt tidligt stadium ni DK 173712 B1 15 syntesen kan anvendes en enantiomerren syntese. Den oven-' for beskrevne fremgangsmåde muliggør høje omsætninger på mere end 99%.
5 De følgende eksempler skal forklare opfindelsen.
Forkortelser 10 ee enantiomeroverskud ("enantiomeric excess") HPLC high pressure liquid chromatography rpm omdrejninger ("revolutions") pr. minut 15 Eksempler
Eksempel l
Fremstilling af perleformede biokatalysatorer med Proteus 20 vulgaris.
Proteus vulgaris (ATCC 9484) dyrkes i et fuldstændigt medium (gærekstrakt 5 g/1, glucose-monohydrat 5 g/1, K2HPO4 5 g/1, pepton fra kød 20 g/1, pH 7,0) i 24 timer ved 37eC 25 under let gasning med nitrogen. De således fremkomne celler høstes ved 12°C i en CEPA-centrifuge type Z 41 G (gennemløb 300 1/time) under skyldning med nitrogen ved et omdrejningstal på 20.000 rpm (16.950 g). Ud fra 400 1 kulturvæske fås 580 g bakteriesediment med et fugtigheds-30 indhold på ca. 80%. 1 Vægtdel fugtig bakteriemasse op- slæmmes sammen med 1 vægtdel kiselsyre (Baker produkt nr.
254, kornstørrelse ca. 20 μια, 95% >3 ^m, 95% <60 μιη, rumvægt ca. 50 g/100 ml) i 3 vægtdele 50 mM natriumacetat-; puffer med pH 5,0 og blandes derefter under kraftig omrø-35 ring med 5 vægtdele af en 1,4 vægtprocents højviskøs vandig chitosan-acetat-opløsning (viskositet ca. 10.000 cP
DK 1713712 B1 16
ved 20‘C og 10 rpm; pH 4,5 indstillet med eddikesyre; uop- I løselige bestanddele siet fra). Denne suspension (visko- I
sitet ca. 2000 cP) dryppes under let omrøring til en I
1,5%'s (v/r) natriumtripolyphosphatopløsning (mindst tre- I 5 dobbelt suspensionsrumfang; pH 8,1 indstillet med phos- I phorsyre). Dertil anvendes en sprøjte med en kanyleåb-'
ning med diameter 1,4 mm og med et gennemløb på 1 ml/min. I
Dråberne blæses af kanylen med komprimeret nitrogen (fald-. I
længde 10-15 cm). Der opstår perleformede partikler med. I
10 en diameter på 2-3 mm, der forbliver i natriumtripoly-; I phosphat-tværbindingsbadet i 2 timer til indskrumpning og' I hærdning. Ud fra 100 g suspension fås ca. 40 g perler; (rysterumfang ca. 80 ml) med en cellekoncentration på; 0,25 g fugtig bakteriemasse, henholdsvis 0,05 g tørre1 15 celler pr. g perler, som i det følgende med henvisning til:
kiselsyrekoncentrationen i den sprøjtede suspension I
betegnes "10%'s kiselsyre-biokatalysatorperler". I
Til sammenligning fremstilles "kontrol-biokatalysator- I
20 perler" uden tilsætning af kiselsyre. Dertil opslæmmes 1 I vægtdel fugtig bakteriemasse i 4 vægtdele natriumacetat-, I puffer med pH 5,0 og blandes derpå med 5 vægtdele af den· I ovenfor beskrevne chitosan-acetat-opløsning. Suspensionen; I dryppes til en natriumtripolyphosphatopløsning som angivet.
25 ovenfor til fremstilling af perleformede partikler.
Ved fremstillingen af "kontrol-biokatalysatorperlerne”. I
sker der ved opslæmningen en væsentlig skumdannelse, der I udebliver ved fremstillingen af de "10%’s kiselsyre-bio- I 30 katalysatorperler", da kiselsyren virker som antiskummid-del. Ved skumdannelsen bliver "kontrol-biokatalysatorperlerne " lettere end perlerne med kiselsyretilsætning og har I
tendens til at stige til overfladen i tværbindingsbadet. I
35 17 DK 173712 B1
Eksempel 2
Bestemmelse af blokatalysatorperlernes trykstyrke 5 Biokatalysatorperlernes trykstyrke bestemmes med et målesystem til termomekaniske analyser (TA 3000-system med målecelle TMA 40, Mettler Instrumente AG, Greifensee,
Schweiz) efter en dags lagring ved 4°C i natriumtripoly-phosphatop løsning med pH 8,1. Hver tre biokatalysator-*
10 perler (diameter 3 mm) i fugtig tilstand lægges på prøve-! bordet grænsende op til hinanden i trekantorden og dækkes, centralt med en med natriumtripolyphospha topløsning! gennemvædet keramikskive (diameter 6 mm, tykkelse 0,7 mm,| tørvægt 70 mg), på hvilken måleføleren er anbragt. PrøvensJ
15 deformation (perlernes nedgang i tykkelse i /im) måles ved nedtrykning af keramikskiven under en belastning på 0,02| N isotermt ved 30°C som funktion af tiden. Resultaterne er sammenfattet i tabel 1. ' ^ Tabel 1
Bestemmelse af biokatalysatorperlernes trykstyrke
Deformation af 3 mm-biokatalysator-perlerne [ /im ]
Kontrol-bio- 10%'s kiselsyre-
Tid [min. ] katalysator- biokatalysatorperler perler 30 ___ 0,5 40 10 1 80 20 2 130 30 4 200 40 i 35 DK 173712 B1 18
Tabel 1 viser klart, at de "10%' s kiselsyre-biokataly!· a~ torperler" har en væsentlig højere trykstyrke end ”k<:n-trol-biokatalysatorperlerne”. Efter 15 minutter udviser de "10%’s kiselsyre-biokatalysatorperler" næsten incen ^ yderligere deformationstilvækst.
Eksempel 3
Fremstilling af_2-(R)-hydroxy-4-phenylsmørsyre ved hja1p 10 af perleformede biokatalysatorer i 1aboratoriem&lestok 48 ml (rysterumfang) ,,10%'s kiselsyre-biokatalysatoi-perler”, der fremstilles ifølge eksempel 1 af 60 g suspension, skilles fra natriumtripolyphosphat-tværbindinys - .
15 badet og sættes til 200 ml af en med nitrogen forud g;s-behandlet opløsning af 50 mM (1,84% v/r) natriumtripcty -phosphatpuffer med pH 7,0, 100 mM kaliumformiat og 1 nM
carbamoylmethylviologen (1,1' -dicarbamoylmethyl-4,4' - <l: -pyridiniumdikation). I denne reduktionsopløsning f <>i -20 bliver perlerne under vakuum til afgasning indtil fuldstændig violetfarvning, der beror på reduktion af cart-amoylmethylviologenet ved den i Proteus vulgaris indeholdte formiatdehydrogenase. Derefter anbringes perlerne i en enzymfastlejereaktor, dvs. i en med kappe forsynet 25 glassøjle (indvendig diameter 1,6 cm, lejehøjde 24 mi, 250Ο, Den med nitrogen forud gasbehandlede substratopløsning (50 mM natriumtripolyphosphatpuffer pH 6,7, 1C0
mM 2-oxo-4-phenyls;mørsyre, 300 mM kaliumf ormiat, 3 nM
carbamoylmethylviologen) ledes kontinuerligt gennem s<;r -3 0 len ved hjælp af en doseringspumpe med overtryk 2,0-3,0 bar med et gennemløb på først 120 ml/time, derpå med 2 4 ml/time. Forløbet af reduktionen af 2-oxo-4-phenylsmørsyie til 2-(R)-hydroxy-4-phenylsmørsyre, der katalyseres af (Un i Proteus vulgaris indeholdte 2-oxocarboxylsyrereduktaie 35 (2-hydroxycarboxylat-viologén-oxidoreduktase), måles '^d HPLC-analyse (søjle: Nucleosil C18, partikkelstørrels« 5 19 DK 173712 B1 μΐη, længde 12,5 cm, indvendig diameter 4,6 mm; gennemløb 1,0 ml/min.; løbemiddel: 3 rumfangsdele acetonitril/8 rumfangsdele 100 mM kaliumphosphatpuffer pH 3,0).
5 På tilsvarende måde anvendes "kontrol-biokatalysator-perlerne" (rysterumfang 49 ml ud fra 60 g suspension ifølge eksempel 1) til reduktion af 2-oxo-4-phenylsmør-syre. Derved er det nødvendigt at indskrænke perlelejet ' 10 med søjleadapteren, fordi perlerne overvejende svømmer j ovenpå, og der derfor dannes tomme zoner i søjlen.
Resultaterne af produktivitetsbestemmelsen er sammenfattet i tabel 2.
15
Tabel 2
Fremstilling af 2-(R)-hydroxy-4-phenylsmørsyre 1 fastleje-20 reaktor ved hjælp af perleformede biokatalysatorer i labo-rietoriemålestok (omsætning)
Omsætning i fastlejereaktor ved 25°C
25 Gennemløb Kontrol-bio- 10%'s kiselsyre-bio- [ml/time] katalysatorperler katalysatorperler 120 60% 70% 24 96% >99,5% 30 ——--
Af tabel 2 fremgår, at "kontrol-biokatalysatorperlen" har en klart ringere produktivitet end de "10%'s kiselsyre-biokatalysatorperler".
35 20 DK 1173712 B i På grund af den tiltagende komprimering af perlerne er j.r varig drift af kontrol-enzymreaktoren ikke mulig, da sø; -len allerede er tilstoppet efter en dag ved et gennemlpt på 24 ml/time. Med "10%'s kiselsyre-biokatalysatorpei -5 lerne" er varig drift under de samme betingelser derimod problemløs.
Eksempel 4 10 Fremstilling af 2-(R)-hydroxy-4-phen.vlsmørsyre ved hjæ!^ af perleformede biokatalysatorer 1 pilotmålestok og isolt-ring af produktet
Fremstillingen af de "10%’s kiselsyre-biokatalysator- .
15 perler" sker ud fra 573 g bakteriesediment ifølge eksesi-pel 1, idet der dog i stedet for sprøjten anvendes ir-indretning bestående af en tandhjulspumpe (gennemløb 1,4 l/time; tryk ca. 0,5 bar) og en 7-strålet douche med 0,6 mm kapillærer til dråbedannelsen. Til forøgelse af afdryp-20 ningsfrekvensen eller til påvirkning af dråbestørrelser har hvert kapillær en separat luftudstrømningskanal. Efter indskrumpning og hærdning i en 3%'s (v/r) natriumtripoly-phosphatopløsning fås ud fra 573 g bakteriesedikent c; .
4 1 (rysterumfang) perler.
25 2-(R)-hydroxy~4~phenylsmørsyre fremstilles på tilsvarerne t måde som angivet i eksempel 3. De 4 1 (rysterumf ane) "10%'s kiselsyre-biokatalysatorperler" skilles fra natr:-umtripolyphosphat-tværbindingsbadet og sættes til 6 1 i i 30 en med nitrogen forud gasbehandlet opløsning af 100 irN ! (3,68% v/r) natriumtripolyphosphat pH 7,0, 100 mM kalium - formiat og 1 mM carbamoylmethylviologen. I denne redur -tionsopløsning forbliver perlerne unciter vakuum til afgasning indtil fuldstændig violet farvning. Derefter anbrir-25 ges perlerne i en kromatografisøjle (indvendig diameter
11,3 cm, grundareal 100 cm2, længde 60 cm, lejehøjde <C
DK 173712 B1 21 cm). Den med nitrogen forud gasbehandlede substratopløsning (100 mM natriumtripolyphosphatpuffer pH 6,7, 112,2 mM 2-oxo-4-phenylsmørsyre, 300 mM kaliumf ormiat, 1 mM carbamoylmethylviologen) sterilfiltreres og ledes kontinu-5 erligt gennem søjlen ved hjælp af en doseringspumpe med overtryk 2,0-3,0 bar med et gennemløb på først 2,5 1/time.
Den ved HPLC målte omsætning er >99,5%. Søjlen drives dag og nat uden afbrydelse ved stuetemperatur, dvs. ved ca. 23‘ til 26,5°C.
10
Omsætningen kontrolleres ved daglige HPLC-analyser og holdes ved omsætningsværdier >99,5% ved regulering af pumpehastigheden. Efter 25 dage er i alt ca. 800 l reak-; tionsopløsning omsat (gennemsnitlig omsætning 99,6%), og' 15 gennemløbet udgør endnu 1 1/time.
1160 1 omsat reaktionsopløsning blandes med 250 1 ethyl-acetat og indstilles på pH 2,6 med 114 1 42,5%'s ortho-phosphorsyre. 2-(R)-hydroxy-4-phenylsmørsyren ekstraheres 2^ i ethylacetat med et udbytte på 94%. Den i vandfasen resterende 2-(R)-hydroxy-4-phenylsmørsyre ekstraheres endnu to gange med hver 120 1 ethylacetat. Efter de tre ekstraktionstrin er ekstraktionen af 2-(R)-hydroxy-4-phenylsmør-syre fuldstændig (99,8%). Efter samling af de tre ethyl-25 acetatfaser (samlet rumfang 450 1), tilsætning af 250 1 ethylacetat og afdestillering af 470 1 af opløsningsmidlet klarfiltreres opløsningen gennem et enpladefilter. 50 1 ethylacetat anvendes til skyldning af filteret og sættes til den klare opløsning. Efter afdestillering af 200 1 af 30 opløsningsmidlet udgør opløsningens slutrumfang 80 1. Til! denne opløsning sættes 400 1 cyclohexan, og 200 1 af opløsningsmidlet afdestilleres. Efter centrifugering af det udkrystalliserede produkt og tørring i vakuum ved 20-25*0 indtil konstant vægt fås 23,4 kg krystallinsk
*> C
2-(R)-hydroxy-4-phenylsmørsyre.
22
DK H'^1712 B1I
Til kontrol af enantiomerrenheden opløses en prøve af den krystallinske syre i absolut ethanol og bringes til omsætning med hydrogenchloridgas i 24 timer ved stuetemperatur. Efter afdestillering af alkoholen og kort afgasning 1 5 højvakuum resterer en lysegul olie, der analyseres ve i HPLC ved 25*C/32 bar på en chiral søjle (250 x 4,6 tom i.d., gennemløb 1 ml/min., stationær fase chiralcel OD [Stehelin, Basel] type OD-5-15-2092,5, mobil fase: 90fr hexan/10% isopropanol/0,1% diethylamln). De stoffer, der; 1° skal analyseres, foreligger i en koncentration på 1 mg/ml i løbemidlet (indsprøjtet mængde 10 //1). Scanningen sker ved en bølgelængde på 210 nm, bedømmelsen ved areaisam-menligning med ekstern standard. Den bestemte ee-værdi er >99,8%.
15 20 25 30 35
Claims (10)
1. Perleformet biokatalysator med høj mekanisk styrke omfattende enzymatisk aktivt materiale, en kationisk 5 polyelektrolyt og polyvalente anioner, kendetegnet ved, at biokatalysatoren indeholder kiselsyre og fremstilles ud fra en suspension af det enzymatisk aktive materiale, kiselsyren, pufferopløsning og polyelektrolytten, hvori slutkoncentrationen af kiselsyre ligger i et interval 10 mellem 2 og 15 vaegt-%.
2. Perleformet biokatalysator ifølge krav 1, kendetegnet ved, at det enzymatisk aktive materiale består af . hele celler af en bakterie eller af en gærart. 15
3. Perleformet biokatalysator ifølge krav 2, kende- tegnet ved, at bakterien hører til arten Proteus vulgaris · og/eller til arten Proteus mirabilis. -
4. Perleformet biokatalysator ifølge krav 1, kende- ; tegnet ved, at det enzymatisk aktive materiale indeholder en oxidoreduktase eller er en oxidoreduktase.
5. Perleformet biokatalysator ifølge et af kravene 1 2^ til 4, kendetegnet ved, at den kationiske polyelektrolyt er chitosan.
6. Perleformet biokatalysator ifølge et af kravene 1 til 5, kendetegnet ved, at de polyvalente anioner er tri- 30 polyphosphat.
7. Perleformet biokatalysator ifølge et af kravene 1 til 6, kendetegnet ved, at kiselsyren er en fældet kiselsyre . 35
8. Fremgangsmåde til fremstilling af perleformede biokatalysatorer ifølge et af kravene 1 til 7, kende- DKIH712B1 tegnet ved, at enzymatisk aktiv-t materiale blandes med fældet kiselsyre i fast form, an vandig pufferoplosning og en vandig oplosning af en kationisk palyelektrolyt, under undgåelse af skumdannelse, til en suspension, som dråbevis 5 indføres i et vandigt tværbindingsbad Indeholdende polyvalente anioner, og de fremkomne biokatalysatorperler bringes til at skrumpe ind og stivne ved at forblive i tværbin- dingsbadet i mindst: ca. 1 time, hvorpå de eventuelt skille; fra tværbindingsbadet. 10
9. Fremgancrsmåde til fremstilling af a-hydroxy-carboxylsyrer ud fra α-ketocarboxylsyrer, kendetegnet ved, at der til omsætningen anvendes en perleformet biokatalysator ifølge krav 3 eller 4. 15
10. Fremgangsmåde ifølge krav 9 til fremstilling af 2-(R)-hydroxy-4-pher:,ylsmørsyre ud fra 2-oxo-4-phenylsmør~ syre, kendetegnet ved, at de perleformede biokatalysatorer anvendes i en fastiejereaktor, gennem hvilken der kontinuerligt ledes en vandig opløsning af substratet 2-oxo-4-phenylsmørsyre, af formiat og en elektronmedia-tor. 25 30 35
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CH440388 | 1988-11-28 | ||
| CH440388 | 1988-11-28 |
Publications (3)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| DK596589D0 DK596589D0 (da) | 1989-11-27 |
| DK596589A DK596589A (da) | 1990-05-29 |
| DK173712B1 true DK173712B1 (da) | 2001-07-16 |
Family
ID=4275485
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| DK198905965A DK173712B1 (da) | 1988-11-28 | 1989-11-27 | Biokatalysatorer samt fremgangsmåde til fremstilling deraf og fremgangsmåde til fremstilling af alfa-hydroxycarboxylsyrer |
Country Status (10)
| Country | Link |
|---|---|
| EP (1) | EP0371408B1 (da) |
| JP (1) | JP3042691B2 (da) |
| AT (1) | ATE107691T1 (da) |
| CA (1) | CA2003767A1 (da) |
| DE (1) | DE58907947D1 (da) |
| DK (1) | DK173712B1 (da) |
| ES (1) | ES2055779T3 (da) |
| FI (1) | FI94257C (da) |
| IE (1) | IE63088B1 (da) |
| PT (1) | PT92400B (da) |
Families Citing this family (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| IL100096A (en) * | 1991-11-20 | 1996-03-31 | Univ Ramot | Method for entrapment of active materials in chitosan |
| CA2117340C (en) * | 1991-12-23 | 2003-06-10 | Genzyme Limited | Synthesis of homochiral 2-hydroxy acids |
| US6852904B2 (en) | 2001-12-18 | 2005-02-08 | Kimberly-Clark Worldwide, Inc. | Cellulose fibers treated with acidic odor control agents |
| US6767553B2 (en) | 2001-12-18 | 2004-07-27 | Kimberly-Clark Worldwide, Inc. | Natural fibers treated with acidic odor control/binder systems |
| CN105879913B (zh) * | 2016-04-28 | 2018-07-17 | 东华大学 | 一种负载金属离子的壳聚糖膜催化材料及其制备方法 |
Family Cites Families (9)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| GB1586364A (en) * | 1976-06-17 | 1981-03-18 | Atomic Energy Authority Uk | Porous inorganic materials |
| DE2835875C2 (de) * | 1978-08-16 | 1981-11-26 | Joachim Prof. Dr. Klein | Verfahren zur Herstellung von Biokatalysatoren mit hoher mechanischer Festigkeit und hoher Beladung an enzymatisch aktiver Substanz und perlförmiger Biokatalysator |
| DE3005633C2 (de) * | 1980-02-15 | 1985-11-07 | Joachim Prof. Dr. Klein | Verfahren zur Herstellung von perlförmigen Biokatalysatoren mit extrem empfindlicher enzymatisch aktiver Substanz |
| DE3005632C2 (de) * | 1980-02-15 | 1985-06-05 | Joachim Prof. Dr. Klein | Verfahren zur Herstellung von Biokatalysatoren mit hoher mechanischer Festigkeit und hoher Beladung an enzymatisch aktiver Substanz |
| ZA827728B (en) * | 1981-11-17 | 1983-08-31 | Nestle Sa | A process for the production of enzymatically active biocatalysts and the products obtained |
| GB2129809B (en) * | 1982-10-06 | 1986-06-04 | Novo Industri As | Method for production of an immobilized enzyme preparation by means of a crosslinking agent |
| JPS60120987A (ja) * | 1983-12-05 | 1985-06-28 | Kikkoman Corp | 固定化された微生物菌体もしくは酵素の製法 |
| DE3417899A1 (de) * | 1984-05-15 | 1985-11-28 | Wagner, Fritz, Prof. Dr., 3300 Braunschweig | Verfahren zur herstellung perlfoermiger biokatalysatoren und zur steigerung der durchsatzkapazitaet und vorrichtung zu seiner durchfuehrung |
| DE3704478C1 (de) * | 1987-02-13 | 1988-07-28 | Metallgesellschaft Ag | Kugelfoermiger Biokatalysator und Verfahren zu seiner Herstellung |
-
1989
- 1989-11-24 FI FI895635A patent/FI94257C/fi not_active IP Right Cessation
- 1989-11-24 EP EP89121754A patent/EP0371408B1/de not_active Expired - Lifetime
- 1989-11-24 DE DE58907947T patent/DE58907947D1/de not_active Expired - Fee Related
- 1989-11-24 AT AT89121754T patent/ATE107691T1/de not_active IP Right Cessation
- 1989-11-24 ES ES89121754T patent/ES2055779T3/es not_active Expired - Lifetime
- 1989-11-24 CA CA002003767A patent/CA2003767A1/en not_active Abandoned
- 1989-11-24 PT PT92400A patent/PT92400B/pt not_active IP Right Cessation
- 1989-11-27 DK DK198905965A patent/DK173712B1/da not_active IP Right Cessation
- 1989-11-27 JP JP1304938A patent/JP3042691B2/ja not_active Expired - Fee Related
- 1989-11-27 IE IE377389A patent/IE63088B1/en not_active IP Right Cessation
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| DK596589A (da) | 1990-05-29 |
| EP0371408A3 (de) | 1991-01-16 |
| FI94257C (fi) | 1995-08-10 |
| JPH02190187A (ja) | 1990-07-26 |
| JP3042691B2 (ja) | 2000-05-15 |
| EP0371408A2 (de) | 1990-06-06 |
| FI94257B (fi) | 1995-04-28 |
| PT92400B (pt) | 1996-06-28 |
| IE893773L (en) | 1990-05-28 |
| FI895635A0 (fi) | 1989-11-24 |
| IE63088B1 (en) | 1995-03-22 |
| DK596589D0 (da) | 1989-11-27 |
| ATE107691T1 (de) | 1994-07-15 |
| CA2003767A1 (en) | 1990-05-28 |
| ES2055779T3 (es) | 1994-09-01 |
| EP0371408B1 (de) | 1994-06-22 |
| PT92400A (pt) | 1990-05-31 |
| DE58907947D1 (de) | 1994-07-28 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Wilson et al. | Encapsulation of crosslinked penicillin G acylase aggregates in lentikats: evaluation of a novel biocatalyst in organic media | |
| IE59798B1 (en) | Novel immobilized biocatalysts and their preparation and use | |
| Vandamme | Peptide antibiotic production through immobilized biocatalyst technology | |
| JP2018196382A (ja) | 生分解性固定化酵素及びその製造方法 | |
| JP2001037475A (ja) | 固定化リパーゼの製造方法、かかるリパーゼ、基質の酵素触媒的またはエナンチオ選択的な変換方法、光学活性化合物の製造方法、ならびに固定化リパーゼの使用 | |
| Zhang et al. | Significant enhancement of (R)-mandelic acid production by relieving substrate inhibition of recombinant nitrilase in toluene–water biphasic system | |
| Vikartovská et al. | Improvement of the stability of glucose oxidase via encapsulation in sodium alginate–cellulose sulfate–poly (methylene-co-guanidine) capsules | |
| Wang et al. | Chiral diol t-butyl 6-cyano-(3R, 5R)-dihydroxylhexanoate synthesis catalyzed by immobilized cells of carbonyl reductase and glucose dehydrogenase co-expression E. coli | |
| FI95047C (fi) | Menetelmä 2-hydroksi-4-fenyylivoihapon R- tai S-enantiomeerin valmistamiseksi | |
| JP6745513B2 (ja) | ユーグレナを用いた有機酸の生産方法 | |
| Li et al. | Production of (R)-mandelic acid by immobilized cells of Saccharomyces cerevisiae on chitosan carrier | |
| JP3891522B2 (ja) | 光学活性３−キヌクリジノールの製法 | |
| FR2609723A1 (fr) | Procede de preparation d'une enzyme ou d'un micro-organisme immobilise | |
| NL8103838A (nl) | De bereiding van microbiologische polysacchariden. | |
| FI94257B (fi) | Menetelmä biokatalysaattorien valmistamiseksi | |
| FI103806B (fi) | Menetelmä kefalosporiinijohdannaisten saattamiseksi jatkuvatoimisesti reagoimaan glutaryyli-7-aminokefalosporiinihappojohdannaisiksi | |
| Dobreva et al. | Immobilization of Bacillus licheniformis cells, producers of thermostable α-amylase, on polymer membranes | |
| Wang et al. | Immobilization of (S)-mandelate dehydrogenase and its catalytic performance on stereoselective transformation of mandelic acid | |
| IL92451A (en) | Accelerators and processes for their preparation | |
| JP2005117905A (ja) | 光学活性１−ベンジル−３−ピロリジノールの製造方法 | |
| CN111647591A (zh) | 利用固定化酶制备他汀中间体的方法 | |
| RU2420581C1 (ru) | Способ получения биокатализатора, обладающего активностью в отношении синтеза цефалоспоринов-кислот | |
| CN100406557C (zh) | 固定化细胞色素p450 bm－3的制备方法 | |
| CN104313074A (zh) | 一种青霉催化生产吡啶基乙醇方法 | |
| Holtheuer et al. | Effect of enzyme inactivation on kinetic parameters of immobilized penicillin G acylase in the hydrolysis of penicillin G |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| AHB | Application shelved due to non-payment | ||
| B1 | Patent granted (law 1993) | ||
| PBP | Patent lapsed |
Country of ref document: DK |