DK200301392A - Generel metode til opformering og påvisning af patogene bakterier - Google Patents

Description

PATENTKRAV 1. Horisontal fremgangsmåde til opformering og påvisning af patogene bakterier i en prøve herunder Salmonella, Listeria, E. coli, Campylobacter, Yersinia mfl. fra fæces, levnedsmidler, foder og øvrige produkter mennesker eller hus- og kæledyr kan indtage eller kan komme i kontakt med, hvor øvrige produkter indbefatter, men er ikke afgrænset til fjer, støv, dun, spildevand og HACCP- prøver. hvilken fremgangsmåde som minimum indbefatter: - en opformering af patogene target-bakterier i en præ-opformeringsbuffer og - en overførsel af et transfervolume (et delvolume af præ-opformeringsbufferen) til en for target-bakterieme selektiv opformeringsbuffer, hvilken selektiv opformeringsbuffer som minimum indeholder en 'agent' der ikke tåles eller tåles dårligere af 'non-target' bakterierne (følge floraen) eller andre selektive pres på 'non-target' bakterierne fx pH og osmose,

KENDETEGNET VED - at præ-opformeringsmedie er opvarmet til over stuetemperatur, fortrinsvis over28°C, - at transfervolumet fra præopformeringen til den selektive opformering foretages efter mindre end 14 timer og - at transfervolumet er på fortrinsvis mindst 1 ml resp. mindst 1/200 af det selektive vækstmedie. 2. Fremgangsmåde iflg. krav 1 KENDETEGNET VED at koncentrationen af vækstmediet i den modtagne selektive opformeringsbuffer har en vækstmediekoncentration, der er lig med eller væsentlig højere end anbefalet af vækstmedieproducenten eller godkendte fremgangsmåder for den patogene target-bakterie efter at transfervolumet er blevet tilført det selektive vækstmedie. 3. Fremgangsmåde iflg. ethvert af de forgående krav KENDETEGNET VED at præopformeringsmediet er forvarmet til en temperatur fortrinsvis over 30DC, mere fortrinsvis over 32°C, mest fortrinsvis over 34°C. 4. Fremgangsmåde iflg. krav 1 KENDETEGNET VED at præ-opformeringsmediet er forvarmet til 37°C +/- 3°C, fortrinsvis til 37°C . 5. Fremgangsmåde iflg. ethvert af de forgående krav KENDETEGNET VED at overførslen af et transfervolume fra præopformeringen til den selektive opformering fortrinsvis foretages efter mindre end 12 timer, mere fortrinsvis efter 6 +/- 4, mere fortrinsvis efter 6 +/- 2 timer, mest fortrinsvis efter 6 timer. 6. Fremgangsmåde iflg. ethvert af de forgående krav KENDETEGNET VED at overførslen af et transfervolume fra præopformeringen til den selektive opformering fortrinsvis foretages efter mindre end 2 timer. 7. Fremgangsmåde iflg. ethvert af de forgående krav KENDETEGNET VED at transfervolume fra præopformeringen til den selektive opformering fortrinsvis er på mindst 2 ml, fortrinsvis er på mindst 5 ml, fortrinsvis er på mindst 10 ml, fortrinsvis er på mindst 20 ml, fortrinsvis er på mindst 50 ml, resp. fortrinsvis mindst 1/100, fortrinsvis mindst 1/40, fortrinsvis mindst 1/20, fortrinsvis mindst 1/10, fortrinsvis mindst 1/4 af det selektive vækstmedie. 8. Fremgangsmåde iflg. ethvert af de forgående krav KENDETEGNET VED at fremgangsmåden anvendes til afklaring af tilstedeværelsen af en enkelt patogen bakterie i et undersøgt produkt. 9. Fremgangsmåde iflg. ethvert af de forgående krav KENDETEGNET VED at den patogene bakterie er salmonella. 10. Fremgangsmåde iflg. krav KENDETEGNET VED at der anvendes SELECTA BIOLINE substrat ved den selektive opformering. 11. Fremgangsmåde til opformering og påvisning af patogene bakterieri en prøve iflg. ethvert af de forgående krav KENDETEGNET VED at der anvendes en præopformeringsbuffer og mindst 2 selektive vækstmedier. 12. Fremgangsmåde iflg. ethvert af de forgående krav KENDETEGNET VED at det initielle opformeringsmedie tilsættes vækstfremmere, resuscitationsfremmere eller selektive eller delvis selektive stoffer såsom selenit, tetrathionat, Novobiocin, antibiotika, Brilliantgrønt eller Malakitgrønt. 13. Fremgangsmåde iflg. ethvert af de forgående krav KENDETEGNET VED at den selektive opformering forkortes til 1,2, 4, 6, 8 eller 17 timer. 14. Fremgangsmåde iflg. ethvert af de forgående krav KENDETEGNET VED at den anden buffer anvendt ved opformeringen af targetorganismer indeholder tetrathionat, Brilliantgrønt eller Malakitgrønt. 15. Fremgangsmåde til opformering og påvisning af (eventuelle) patogene bakterier i en prøve iflg. ethvert af de forgående krav KENDETEGNET VED at der ved detektionstrinet anvendes en analysemetode, der er indbefattet af, men ikke afgrænset til: affinitets bindings teknikker såsom enzyme immunoassays (ELISA) baseret på antigenantistof reaktioner, antigen-antistof reaktioner der involverer fluorescens, luminescens, evanescent waves, plasmon resonance, latex agglutination, electrokemisk immune detektion, teknikker med immunmagnetisk indfangning, teknikker med lateral flow, DNA hybridisering baseret på specifikke sekvenser af salmonella DNA molekylet, RNA-DNA, RNA-RNA, Polymerase Chain Reaction (PCR) baseret på multiplikation ved hjælp af specifikke DNA primere, ledningsevnemålemetode baseret på ændring i elektrisk modstand i særlige vækstmedier, mikroskopi, teknikker med micro arrays, CCD kamera teknik, enzym immuno teknik baseret på chromogen, fluorescens, luminescens, radioaktiv signal genererende respons, halvflydende agarer og faste agarer eller kombination med yderligere opformeringsprocedurer. 16. Fremgangsmåde til opformering og påvisning af (eventuelle) patogene bakterier i en prøve iflg. ethvert af de forgående krav KENDETEGNET VED at der ved detektionstrinet anvendes ELISA test kit fra Bioline ApS. 17. Fremgangsmåde iflg, ethvert af de forgående krav KENDETEGNET VED at overførslen af transfervolumet fra præopformeringen til den selektive opformering foretages automatisk eller semiautomatisk.