DK200401109A - Kit til multiplicering og påvisning af nukleinsyresekvenser - Google Patents

Description

PATENTKRAV 1. Eksponentielt multiplicerings- og påvisningskit til multiplicering og påvisning af en specifik template-nukleinsyresekvens eller specifikke template-nukleinsyresekvenser, der er indeholdt i en enkelt- eller dobbeltstrenget nukleinsyre eller i en blanding af sådanne nukleinsyrer i en prøve, hvilket kit i samlet form omfatter: (a) i det mindste en første og en anden oligonukleotidprimer, der er indbyrdes forskellige, hvori (aa) den ene af primerne er i det væsentlige komplementær til den enkeltstrengede nukleinsyre eller til en streng i den dobbeltstrengede nukleinsyre, (ab) den anden af primerne er i det væsentlige komplementær til et komplement af den enkeltstrengede nukleinsyre eller til den anden streng i den dobbeltstrengede nukleinsyre, og hvori (ac) primerne afgrænser enderne af den specifikke nukleinsyresekvens, der skal multipliceres og detekteres; (b) et polymeriseringsmiddel; og (c) midler til detektering af den multiplicerede specifikke nukleinsyresekvens. 2. Kit ifølge krav 1, hvori den specifikke template-nukleinsyresekvens er indeholdt i en større sekvens. 3. Kit ifølge krav 1 eller 2, hvori nukleinsyren er DNA eller RNA, herunder mRNA, hvilket DNA eller RNA kan være enkelt- eller dobbeltstrenget eller er en DNA-RNA-hybrid. 4. Kit ifølge et hvilket som helst af kravene 1 til 3, hvori nukleinsyren er genomisk DNA. 5. Kit ifølge et hvilket som helst af kravene 1 til 4, hvori primerne indeholder ca. 15 til 25 nukleotider. 6. Kit ifølge et hvilket som helst af kravene 1 til 5, hvori mindst den ene af primerne har en nukleotidsekvens bundet til sin S'-ende, hvilken sekvens er ikke-kom-plementær til nukleinsyren. 7. Kit ifølge krav 6, hvori nukleotidsekvensen, der er bundet til 5'-enden af primeren, er en promotorsekvens. 8. Kit ifølge krav 7, hvori promotoren er T7-promotoren. 9. Kit ifølge et hvilket som helst af kravene 1-5, hvori der spredt i det mindste i den ene af primerne er anbragt baser eller en nukleotidsekvens, hvilke baser eller hvilken nukleotidsekvens er ikke-komplementære til den specifikke nukleinsyresekvens, der skal multipliceres og detekteres. 10. Kit ifølge et hvilket som helst af kravene 1 til 5, hvori den ene primer indeholder et restriktionssted. 11. Kit ifølge et hvilket som helst af kravene 1 til 10, hvori polymeriseringsmidlet er et enzym valgt blandt E. coli polymerase 1, Klenow-fragmentet fra E. coli polymerase J, T4-DNA-polymerase, andre DNA-polymeraser, revers transkriptase og varmestabile enzymer. 12. Kit ifølge et hvilket som helst af kravene 1 til 11, hvori midlet til detektering af den multiplicerede specifikke template-nukleinsyresekvens eller de multiplicerede specifikke template-nukleinsyresekvenser omfatter en mærket oligonukleotidprobe. 13. Anvendelse af et kit ifølge et hvilket som helst af kravene 1 til 12 til multiplikation, detektering og/eller karakterisering afen specifik template-nukleinsyresekvens eller specifikke template-nukieinsyresekvenser indeholdt i en enkelt- eller dobbeltstrenget nukleinsyre eller i en blanding af sådanne nukleinsyrer. 14. Anvendelse ifølge krav 13, hvori den specifikke template-nukleinsyresekvens eller de specifikke template-nukleinsyresekvenser er associeret med infektiøse sygdomme såsom dem, der er forårsaget af bakterier, vira og protozoparasitter, genetiske lidelser såsom dem, der er forårsaget af specifikke deletioner og/eller mutationer i genomisk DNA, eller cellulære lidelser såsom cancer.