DK2327985T3 - Heterooligomere T1R-smagsreceptorer og cellelinjer, der udtrykker receptorerne, samt anvendelse deraf til identificering af smagsforbindelser - Google Patents

Claims (15)

1. In vitro-fremgangsmåde til identificering af en celle, der er potentielt følsom for søde smagsstimuli, hvilken fremgangsmåde omfatter: (a) påvisning af ekspression af et TlR2-polypeptid og/eller en nukleinsyre, der koder for T1R2-polypeptidet af cellen, hvor TlR2-polypeptidet (i) kodes af en nukleinsyresekvens, der omfatter SEQ ID NO: 10, eller en sekvens, der har mindst 90 % sekvensidentitet med SEQ ID NO: 10; eller (ii) har mindst 90 % sekvensidentitet med TlR2-polypeptidet ifølge SEQ ID NO: 6; og (b) påvisning af ekspression af et TlR3-polypeptid og/eller en nukleinsyre, der koder for TlR3-polypeptidet af cellen, hvilket TlR3-polypeptid (i) kodes af en nukleinsyresekvens, der omfatter SEQ ID NO: 9 eller en sekvens, der har mindst 90 % sekvensidentitet med SEQ ID NO: 9; eller (ii) har mindst 90 % sekvensidentitet med TlR3-polypeptidet ifølge SEQ ID NO: 7.

2. Fremgangsmåde ifølge krav 1, hvor trin (a) omfatter etablering af kontakt mellem cellen og mindst én probe, der påviser ekspression af T1R2-polypeptidet og/eller nukleinsyren, der koder for T1R2-polypeptidet af cellen, og hvor trin (b) omfatter etablering af kontakt mellem cellen og mindst én probe, der påviser ekspression af TlR3-polypeptidet og/eller nukleinsyren, der koder for TlR3-polypeptidet af cellen.

3. Fremgangsmåde ifølge krav 1 eller krav 2, der yderligere omfatter et trin (c) til bekræftelse af, at cellen, der i trin (a) og trin (b) er identificeret at udtrykke T1R2 og T1R3, er følsom for søde smagsstimuli.

4. Fremgangsmåde ifølge et hvilket som helst af kravene 1 til 3, der yderligere omfatter anvendelse af den identificerede celle i en screeningsanalyse med højt gennemløb, der påviser forbindelser, der specifikt binder, aktiverer eller modulerer aktiveringen af en receptor, der omfatter T1R2- og TlR3-polypeptiderne, eller der modulerer bindingen eller aktiveringen af en receptor, der omfatter T1R2- og TlR3-polypeptiderne, ved hjælp af en anden forbindelse.

5. Fremgangsmåde ifølge et hvilket som helst af ovennævnte krav, hvor cellen er en mammaliacelle.

6. Fremgangsmåde ifølge krav 5, hvor cellen er en abecelle eller en human celle.

7. In vitro-fremgangsmåde til screening for en forbindelse, der formodes at blokere eller aktivere sød smagssignalering, hvilken fremgangsmåde omfatter trinene: (a) etablering af kontakt mellem celler og en eller flere forbindelser, hvor cellerne udtrykker en heterooligomer TlR2/TlR3-smagsreceptor; og (b) påvisning af, om den ene eller de flere forbindelser specifikt binder til den heterooligomere T1R2/T1R3-smagsreceptor og/eller specifikt aktiverer den heterooligomere TlR2/TlR3-smagsreceptor og på baggrund deraf identificering af den ene eller de flere forbindelser som forbindelser, der formodes at blokere eller aktivere sød smagssignalering, hvor den heterooligomere TlR2/TlR3-smagsreceptor, der udtrykkes af cellerne, omfatter mindst ét TlR2-polypeptid, der (i) kodes af en nukleinsyresekvens, der omfatter SEQ ID NO: 10 eller en sekvens, der har mindst 90 % sekvensidentitet med SEQ ID NO: 10; eller (ii) har mindst 90 % sekvensidentitet med TlR2-polypeptidet ifølge SEQ ID NO: 6, og hvor den heterooligomere TlR2/TlR3-smagsreceptor, der udtrykkes af cellerne, omfatter mindst ét TlR3-polypeptid, der (i) kodes af en nukleinsyresekvens, der omfatter SEQ ID NO: 9 eller en sekvens, der har mindst 90 % sekvensidentitet med SEQ ID NO: 9; eller (ii) har mindst 90 % sekvensidentitet med TlR3-polypeptidet ifølge SEQ ID NO: 7.

8. In vitro-fremgangsmåde til screening for en forbindelse, der formodes at modulere sød smagssignalering, hvilken fremgangsmåde omfatter trinene: (a) etablering af kontakt mellem celler og en eller flere forbindelser, hvor cellerne udtrykker en heterooligomer TlR2/TlR3-smagsreceptor; og (b) påvisning af, om den ene eller de flere forbindelser påvirker bindingen af en anden forbindelse til den heterooligomere TlR2/TlR3-smagsreceptor og/eller modulerer aktiveringen af den heterooligomere TlR2/TlR3-smagsreceptor ved hjælp af en anden forbindelse og på baggrund deraf identificering af den ene eller de flere forbindelser som forbindelser, der formodes at modulere sød smagssignalering, hvor den heterooligomere TlR2/TlR3-smagsreceptor, der udtrykkes af cellerne, omfatter mindst ét TlR2-polypeptid, der (i) kodes af en nukleinsyresekvens, der omfatter SEQ ID NO: 10 eller en sekvens, der har mindst 90 % sekvensidentitet med SEQ ID NO: 10; eller (ii) har mindst 90 % sekvensidentitet med TlR2-polypeptidet ifølge SEQ ID NO: 6, og hvor den heterooligomere TlR2/TlR3-smagsreceptor, der udtrykkes af cellerne, omfatter mindst ét TlR3-polypeptid, der (i) kodes af en nukleinsyresekvens, der omfatter SEQ ID NO: 9 eller en sekvens, der har mindst 90 % sekvensidentitet med SEQ ID NO: 9; eller (ii) har mindst 90 % sekvensidentitet med TlR3-polypeptidet ifølge SEQ ID NO: 7.

9. Fremgangsmåde ifølge krav 7 eller krav 8, hvor cellerne omfatter isolerede eller dyrkede mammaliaceller.

10. Fremgangsmåde ifølge et hvilket som helst af kravene 7 til 9, hvor den heterooligomere TlR2/TlR3-smagsreceptor, der udtrykkes af cellerne, binder specifikt til en ligand, der binder specifikt til en endogen (vildtype) human heterooligomer T1R2/TlR3-receptor, der omfatter mindst ét endogent TlR2-polypeptid og mindst ét endogent T1R3- polypeptid, og hvor mindst det ene af det udtrykte T1R2-polypeptid eller det udtrykte TlR3-polypeptid udtrykkes fra et gen, der er endogent for cellerne.

11. Fremgangsmåde ifølge et hvilket som helst af kravene 7 til 10, der yderligere indbefatter en smagstest til bestemmelse af virkningen af den identificerede forbindelse på sød smag og på baggrund af resultatet af smagstesten identificering af forbindelsen som en forbindelse, der blokerer, aktiverer eller modulerer sød smagssignalering.

12. Fremgangsmåde ifølge krav 7 eller krav 8, hvor det udtrykte TlR2-polypeptid udtrykkes fra et gen, der er endogent for cellerne.

13. Fremgangsmåde ifølge krav 7 eller krav 8, hvor det udtrykte TlR3-polypeptid udtrykkes fra et gen, der er endogent for cellerne.

14. Fremgangsmåde ifølge et hvilket som helst af kravene 7 til 13, hvor cellerne er humane celler eller abeceller.

15. Fremgangsmåde ifølge et hvilket som helst af kravene 7 til 14, der omfatter en scenningsmetode med højt gennemløb.