DK2478005T3 - Protein a-krystaller og tværbundne krystaller samt fremgangsmåder til anvendelse deraf - Google Patents

Claims (17)

1. Sammensætning, der omfatter tværbundet krystalform af Protein A.

2. Fremgangsmåde til oprensning af et immunoglobulin, der omfatter etablering af kontakt mellem en opløsning, der omfatter immunoglobulinet, og sammensætningen ifølge krav 1, således at immunoglobulinet adsorberes på det krystallinske Protein A.

3. Fremgangsmåde ifølge krav 2, hvor immunoglobulinet er et antistof, der er mindst det ene af et terapeutisk antistof, et monoklonalt antistof, et enkeltkædet antistof, et Fab-fragment og et Fc-fragment.

4. Fremgangsmåde ifølge krav 2, hvor immunoglobulinet er mindst det ene af et kimært antistof, et fuldt humant antistof og et humaniseret antistof.

5. Fremgangsmåde ifølge krav 2, hvor immunoglobulinet tilhører klassen IgG.

6. Sammensætning ifølge krav 1, hvor den tværbundne krystalform af Protein A er tværbundet med glutaraldehyd.

7. Kit, der omfatter sammensætningen ifølge krav 1 og skriftlige instruktioner, der beskriver anvendelsen deraf.

8. Sammensætning ifølge krav 1, hvor den tværbundne krystalform af Protein A fremviser en højere bindingsevne for et immunoglobulin sammenlignet med en sammensætning, der omfatter en tilsvarende mængde af en immobiliseret form af Protein A, som ikke er en tværbundet krystalform.

9. Sammensætning ifølge krav 1, hvor koncentrationen af tværbindingsmiddel er tilstrækkelig til at resultere i ca. 0,0 % udvaskning af Protein A sammenlignet med en sammensætning, der omfatter en tilsvarende mængde af et immobiliseret Protein A, som ikke er en krystalform, der er tværbundet med mindst den samme koncentration af tværbindingsmiddel.

10. Sammensætning ifølge krav 1, hvor sammensætningen anvendes i mindst den ene af en forpakket søjle, en membran og en ekstrakorporal anordning.

11. Fremgangsmåde til oprensning af immunoglobuliner, der omfatter: (a) blanding af et medium, der indeholder immunoglobuliner, med en bufferopløsning, der omfatter en kombination af kationer og anioner, ved et pH i intervallet fra ca. pH 7,0 til pH 10, hvilket resulterer i et bufret immunoglobulinmedium; (b) etablering af kontakt mellem det bufrede immunoglobulinmedium og et adsorberingsmiddel, der omfatter en sammensætning ifølge krav 1, således at adsorberingsmidlet i tilstrækkelig grad adsorberer immunoglobulinerne, der er til stede i det bufrede immunoglobulinmedium; (c) vask af adsorberingsmidlet, der har immunoglobuliner adsorberet derpå, med bufferopløsningen; (d) etablering af kontakt mellem adsorberingsmidlet, der har immunoglobuliner adsorberet derpå, og en bufferopløsning, der har et pH i intervallet fra ca. pH 2 til pH 6, til fjernelse af de adsorberede immunoglobuliner fra adsorberingsmidlet; og (e) genindvinding af de fjernede immunoglobuliner i i det væsentlige ren form.

12. Fremgangsmåde ifølge krav 11, hvor etableringen af kontakt mellem det bufrede immunoglobulinmedium og adsorberingsmidlet udføres i en søjle, der omfatter adsorberingsmidlet.

13. Fremgangsmåde ifølge krav 11, hvor mediet, der indeholder immunoglobuliner, opnås fra mindst den ene af et hybridom, normalt mammaliaserum, immunt mammaliaserum, mammaliaplasma, mammalia-ascitesvæske, væske fra vævskultur, væske fra mammaliacellekultur, væske fra bakteriecellekultur, væske fra gærkultur, væske fra transgen kilde og planteekstrakt, der indeholder immunoglobuliner.

14. Fremgangsmåde til fremstilling af krystalform af Protein A ved anvendelse af krystallisationsmetoden med hængende dråbe-dampdiffusion eller batchkrystallisationsmetoden, der omfatter trinene: (a) anbringelse af Protein A i deioniseret vand ved et 1:1 protein/reagens-forhold, hvor reagenset er udvalgt fra gruppen, der består af en sammensætning, der indeholder 2 M ammoniumsulfat, 0,1 M cacodylatbuffer pH 6,5 og 0,2 M NaCl; 2 M ammoniumsulfat i citratbuffer pH 5,5; 1 M natriumcitrat, 0,1 M Tris-HCl-buffer pH 7 og 0,2 M NaCl; 0,8 M NaH2P04/l,2 M K2PO4 i 0,1 M acetatbuffer pH 4,5; og 2 M ammoniumsulfat, Tris-HCl-buffer pH 7 og 0,2 M lithiumsulfat; og (b) inkubering, indtil der forekommer krystaldannelse.

15. Fremgangsmåde ifølge krav 14, hvor Protein A i trin (a) er ved en koncentration på ca. 50,6 mg/ml eller ca. 120 mg/ml Protein A i deioniseret vand.

16. Fremgangsmåde til fremstilling af en tværbundet krystalform af Protein A, der omfatter blanding af krystalform af Protein A med glutaraldehyd, hvor glutaraldehyden eventuelt er ved en slutkoncentration på ca. 1 %.

17. Fremgangsmåde til oprensning af et immunoglobulin fra en sammensætning, der omfatter immunoglobulinet, hvilken fremgangsmåde omfatter etablering af kontakt mellem sammensætningen, der omfatter immunoglobulinet, der skal oprenses, og sammensætningen ifølge krav 1.