DK2859104T3 - Konstrukt og fremgangsmåde til at udtrykke transgener ved anvendelse af en brassica-tovejskonstitutiv promoter - Google Patents

Claims (14)

1. Nucleinsyrekonstrukt til at udtrykke multiple gener i planteceller og/eller væv, hvilket konstrukt omfatter (a) en tovejspromotor, der omfatter en nucleotidsekvens, som er valgt fra SEQ ID NO: 2 eller 3; og (b) to genekspressionskassetter på modsatte ender af tovejspromotoren.

2. Nucleinsyrekonstruktet ifølge krav 1, hvor tovej s pro motoren omfatter mindst en forstærker, eller hvor nucleinsyrekonstruktet omfatter en binær vektor til Agrobacterium-medieret transformation, eller hvor tovej s pro motoren omfatter mindst en intran, eller hvor tovejspromotoren omfatter mindst et 5'-ikke-translateret område.

3. Nucleinsyrekonstruktet ifølge krav 1, hvor mindst en af genekspressionskassetterne omfatter to eller flere gener, der er forbundet via en translationsomskifter.

4. Nucleinsyrekonstruktet ifølge krav 1, hvor begge genekspressionskassetterne omfatter to eller flere gener, der er forbundet via en translationsomskifter, eller hvor begge genekspressionskassette ikke omfatter et EPSPS-gen eller en paralog.

5. Nucleinsyrekonstruktet ifølge krav 3, hvor translationsomskifteren er valgt fra gruppen, der består af et indre ribosomindgangssted (IRES), et alternativt splejsningssted, en polynukleotidsekvens, der koder for et 2A-peptid, en polynukleotidsekvens, der koder for et 2A-lignende peptid, en polynukleotidsekvens, som koder for en intein, en polynukleotidsekvens, som koder for et proteasespaltningssted og kombinationer deraf, eller hvor et gen opstrøms for translationsomskifteren ikke omfatter et translationsstopkodon.

6. Nucleinsyrekonstrukt ifølge krav 1, hvilket nucleinsyrekonstrukt tillader ekspression af mindst fire gener, eller hvilket nucleinsyrekonstrukt muliggør ekspression af mellem tre og tyve gener, og især hvor nucleinsyrekonstruktet muliggør ekspression af mellem fire og otte gener.

7. Fremgangsmåde til at generere en transgen plante, hvilken fremgangsmåde omfatter at omdanne en plantecelle med nucleinsyrekonstruktet ifølge krav 1.

8. Fremgangsmåde til at generere en transgen celle, hvilken fremgangsmåde omfatter at omdanne cellen med nucleinsyrekonstruktet ifølge krav 1.

9. Plantecelle, der omfatter nucleinsyrekonstruktet ifølge krav 1, og især hvor nucleinsyrekonstruktet er stabilt transformeret ind i plantecellen.

10. Transgen plante eller frø, der omfatter nucleinsyrekonstruktet ifølge krav 1.

11. Transgen plante eller frø ifølge krav 10, hvor nucleinsyrekonstruktet er stabilt transformeret ind i celler af den transgene plante eller frø, eller hvor den transgene plante er en tokimbladet plante, eller hvor den transgene plante er en enkimbladet plante.

12. Fremgangsmåde til at udtrykke multiple gener i planteceller og/eller væv, hvilken fremgangsmåde omfatter at indføre i plantecellen og/eller vævet nucleinsyrekonstruktet ifølge krav 1, og i sær hvor plantencellerne og/eller vævene er stabilt transformeret med nucleinsyrekonstruktet ifølge krav 1.

13. Binær vektor til Agrobacterium-medieret transformation, hvilken vektor omfatter nucleinsyrekonstruktet ifølge krav 1.

14. Anvendelse af en tovejspromotor til fremstilling af transgene planter eller frø, hvilken tovejspromotor omfatter en nucleotidsekvens, der er valgt fra SEQ ID NO: 2 eller 3.