EA009604B1 - ПРИМЕНЕНИЕ МУТАНТНОГО ПОЛИПЕПТИДА β-ЦЕПИ РЕЦЕПТОРА ИНТЕРФЕРОНА ТИПА I ДЛЯ ПРИГОТОВЛЕНИЯ ЛЕКАРСТВЕННОГО СРЕДСТВА, МОДУЛИРУЮЩЕГО ЭФФЕКТЫ ИНТЕРФЕРОНА-β, И ФАРМАЦЕВТИЧЕСКАЯ КОМПОЗИЦИЯ, СОДЕРЖАЩАЯ УКАЗАННЫЙ ПОЛИПЕПТИД - Google Patents
ПРИМЕНЕНИЕ МУТАНТНОГО ПОЛИПЕПТИДА β-ЦЕПИ РЕЦЕПТОРА ИНТЕРФЕРОНА ТИПА I ДЛЯ ПРИГОТОВЛЕНИЯ ЛЕКАРСТВЕННОГО СРЕДСТВА, МОДУЛИРУЮЩЕГО ЭФФЕКТЫ ИНТЕРФЕРОНА-β, И ФАРМАЦЕВТИЧЕСКАЯ КОМПОЗИЦИЯ, СОДЕРЖАЩАЯ УКАЗАННЫЙ ПОЛИПЕПТИД Download PDFInfo
- Publication number
- EA009604B1 EA009604B1 EA200400894A EA200400894A EA009604B1 EA 009604 B1 EA009604 B1 EA 009604B1 EA 200400894 A EA200400894 A EA 200400894A EA 200400894 A EA200400894 A EA 200400894A EA 009604 B1 EA009604 B1 EA 009604B1
- Authority
- EA
- Eurasian Patent Office
- Prior art keywords
- ιρν
- use according
- mutant
- polypeptide
- pharmaceutical composition
- Prior art date
Links
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 title claims abstract description 46
- 230000000694 effects Effects 0.000 title claims abstract description 43
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 title claims abstract description 41
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 title claims abstract description 40
- 239000003814 drug Substances 0.000 title claims abstract description 32
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 title claims abstract description 23
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 title claims description 4
- 238000000034 method Methods 0.000 title description 17
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 claims abstract description 30
- 150000001413 amino acids Chemical group 0.000 claims abstract description 29
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 claims abstract description 22
- 108090000467 Interferon-beta Proteins 0.000 claims abstract description 11
- HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N histidine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 11
- 229960001388 interferon-beta Drugs 0.000 claims abstract description 8
- DCXYFEDJOCDNAF-UHFFFAOYSA-N Asparagine Natural products OC(=O)C(N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 6
- 235000009582 asparagine Nutrition 0.000 claims abstract description 6
- 229960001230 asparagine Drugs 0.000 claims abstract description 6
- 229940079593 drug Drugs 0.000 claims description 24
- 230000000840 anti-viral effect Effects 0.000 claims description 19
- 230000001965 increasing effect Effects 0.000 claims description 18
- 235000004279 alanine Nutrition 0.000 claims description 13
- 201000010099 disease Diseases 0.000 claims description 13
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 claims description 13
- 230000000259 anti-tumor effect Effects 0.000 claims description 12
- 230000002519 immonomodulatory effect Effects 0.000 claims description 12
- 102000001617 Interferon Receptors Human genes 0.000 claims description 11
- 108010054267 Interferon Receptors Proteins 0.000 claims description 11
- 208000023275 Autoimmune disease Diseases 0.000 claims description 10
- 239000005557 antagonist Substances 0.000 claims description 10
- 235000014304 histidine Nutrition 0.000 claims description 10
- 201000006417 multiple sclerosis Diseases 0.000 claims description 10
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 claims description 10
- 102000003996 Interferon-beta Human genes 0.000 claims description 9
- 230000035772 mutation Effects 0.000 claims description 9
- 206010009900 Colitis ulcerative Diseases 0.000 claims description 8
- 201000006704 Ulcerative Colitis Diseases 0.000 claims description 8
- 125000003295 alanine group Chemical group N[C@@H](C)C(=O)* 0.000 claims description 8
- 125000000613 asparagine group Chemical group N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)* 0.000 claims description 8
- 206010012601 diabetes mellitus Diseases 0.000 claims description 8
- 125000000487 histidyl group Chemical group [H]N([H])C(C(=O)O*)C([H])([H])C1=C([H])N([H])C([H])=N1 0.000 claims description 8
- 206010039073 rheumatoid arthritis Diseases 0.000 claims description 8
- 208000032839 leukemia Diseases 0.000 claims description 7
- 206010028417 myasthenia gravis Diseases 0.000 claims description 7
- 206010059313 Anogenital warts Diseases 0.000 claims description 6
- 208000000907 Condylomata Acuminata Diseases 0.000 claims description 6
- 208000007766 Kaposi sarcoma Diseases 0.000 claims description 6
- QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N L-alanine Chemical compound C[C@H](N)C(O)=O QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N 0.000 claims description 6
- 208000034578 Multiple myelomas Diseases 0.000 claims description 6
- 208000037581 Persistent Infection Diseases 0.000 claims description 6
- 206010035226 Plasma cell myeloma Diseases 0.000 claims description 6
- 241000700605 Viruses Species 0.000 claims description 6
- 208000025009 anogenital human papillomavirus infection Diseases 0.000 claims description 6
- 201000004201 anogenital venereal wart Diseases 0.000 claims description 6
- 208000005252 hepatitis A Diseases 0.000 claims description 6
- 230000000366 juvenile effect Effects 0.000 claims description 6
- 230000003211 malignant effect Effects 0.000 claims description 6
- 201000001441 melanoma Diseases 0.000 claims description 6
- 201000000596 systemic lupus erythematosus Diseases 0.000 claims description 6
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 claims description 6
- 208000032791 BCR-ABL1 positive chronic myelogenous leukemia Diseases 0.000 claims description 5
- 208000010833 Chronic myeloid leukaemia Diseases 0.000 claims description 5
- 102100025621 Cytochrome b-245 heavy chain Human genes 0.000 claims description 5
- CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N L-aspartic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(O)=O CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N 0.000 claims description 5
- HNDVDQJCIGZPNO-YFKPBYRVSA-N L-histidine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-YFKPBYRVSA-N 0.000 claims description 5
- 206010023849 Laryngeal papilloma Diseases 0.000 claims description 5
- 208000033761 Myelogenous Chronic BCR-ABL Positive Leukemia Diseases 0.000 claims description 5
- 235000003704 aspartic acid Nutrition 0.000 claims description 5
- OQFSQFPPLPISGP-UHFFFAOYSA-N beta-carboxyaspartic acid Natural products OC(=O)C(N)C(C(O)=O)C(O)=O OQFSQFPPLPISGP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 5
- 208000016532 chronic granulomatous disease Diseases 0.000 claims description 5
- 208000002672 hepatitis B Diseases 0.000 claims description 5
- 208000009000 laryngeal papillomatosis Diseases 0.000 claims description 5
- 208000005176 Hepatitis C Diseases 0.000 claims description 4
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 claims description 4
- 208000015914 Non-Hodgkin lymphomas Diseases 0.000 claims description 4
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 claims description 4
- 230000002708 enhancing effect Effects 0.000 claims description 3
- 238000006384 oligomerization reaction Methods 0.000 claims description 3
- 241000700721 Hepatitis B virus Species 0.000 claims description 2
- 206010025323 Lymphomas Diseases 0.000 claims description 2
- 239000002876 beta blocker Substances 0.000 claims description 2
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 claims description 2
- 102100026720 Interferon beta Human genes 0.000 abstract 2
- 101000852865 Homo sapiens Interferon alpha/beta receptor 2 Proteins 0.000 abstract 1
- 102100036718 Interferon alpha/beta receptor 2 Human genes 0.000 abstract 1
- DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N L-asparagine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N 0.000 abstract 1
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 64
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 52
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 52
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 35
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 description 32
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 description 32
- 230000027455 binding Effects 0.000 description 31
- 102000014150 Interferons Human genes 0.000 description 29
- 108010050904 Interferons Proteins 0.000 description 29
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 29
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 28
- 229940024606 amino acid Drugs 0.000 description 26
- 229940079322 interferon Drugs 0.000 description 26
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 18
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 15
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 description 11
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 description 8
- 238000010494 dissociation reaction Methods 0.000 description 8
- 230000005593 dissociations Effects 0.000 description 8
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 description 8
- 102000002227 Interferon Type I Human genes 0.000 description 7
- 108010014726 Interferon Type I Proteins 0.000 description 7
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 7
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 7
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 6
- -1 DNA or RNA Chemical class 0.000 description 6
- 210000004978 chinese hamster ovary cell Anatomy 0.000 description 6
- 102000037865 fusion proteins Human genes 0.000 description 6
- 108020001507 fusion proteins Proteins 0.000 description 6
- TWXDDNPPQUTEOV-FVGYRXGTSA-N methamphetamine hydrochloride Chemical compound Cl.CN[C@@H](C)CC1=CC=CC=C1 TWXDDNPPQUTEOV-FVGYRXGTSA-N 0.000 description 6
- 230000003285 pharmacodynamic effect Effects 0.000 description 6
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 6
- 102220465494 Lymphocyte activation gene 3 protein_H78A_mutation Human genes 0.000 description 5
- 230000009471 action Effects 0.000 description 5
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 5
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 5
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 5
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 description 4
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 description 4
- 238000007792 addition Methods 0.000 description 4
- 230000007423 decrease Effects 0.000 description 4
- 238000012217 deletion Methods 0.000 description 4
- 230000037430 deletion Effects 0.000 description 4
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 4
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 description 4
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 description 4
- 238000004611 spectroscopical analysis Methods 0.000 description 4
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical class CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 3
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 3
- MUBZPKHOEPUJKR-UHFFFAOYSA-N Oxalic acid Chemical class OC(=O)C(O)=O MUBZPKHOEPUJKR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 102000007056 Recombinant Fusion Proteins Human genes 0.000 description 3
- 108010008281 Recombinant Fusion Proteins Proteins 0.000 description 3
- 230000002378 acidificating effect Effects 0.000 description 3
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 3
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 3
- 125000003178 carboxy group Chemical group [H]OC(*)=O 0.000 description 3
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 3
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 3
- 230000005713 exacerbation Effects 0.000 description 3
- 230000006870 function Effects 0.000 description 3
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 3
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 3
- 238000003780 insertion Methods 0.000 description 3
- 230000037431 insertion Effects 0.000 description 3
- 229940047124 interferons Drugs 0.000 description 3
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 description 3
- 239000012071 phase Substances 0.000 description 3
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 3
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 3
- 102000007445 2',5'-Oligoadenylate Synthetase Human genes 0.000 description 2
- 108010086241 2',5'-Oligoadenylate Synthetase Proteins 0.000 description 2
- QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-N Ammonia Chemical compound N QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108020004705 Codon Proteins 0.000 description 2
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 2
- 241000206602 Eukaryota Species 0.000 description 2
- 241000238631 Hexapoda Species 0.000 description 2
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical class Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108010047761 Interferon-alpha Proteins 0.000 description 2
- 102000006992 Interferon-alpha Human genes 0.000 description 2
- 102000008070 Interferon-gamma Human genes 0.000 description 2
- 108010074328 Interferon-gamma Proteins 0.000 description 2
- XEEYBQQBJWHFJM-UHFFFAOYSA-N Iron Chemical class [Fe] XEEYBQQBJWHFJM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241001529936 Murinae Species 0.000 description 2
- OKIZCWYLBDKLSU-UHFFFAOYSA-M N,N,N-Trimethylmethanaminium chloride Chemical compound [Cl-].C[N+](C)(C)C OKIZCWYLBDKLSU-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 108020005187 Oligonucleotide Probes Proteins 0.000 description 2
- NQRYJNQNLNOLGT-UHFFFAOYSA-N Piperidine Chemical compound C1CCNCC1 NQRYJNQNLNOLGT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108010076504 Protein Sorting Signals Proteins 0.000 description 2
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N Sulfuric acid Chemical class OS(O)(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- DSGIVWSDDRDJIO-ZXXMMSQZSA-N Thr-Thr Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O DSGIVWSDDRDJIO-ZXXMMSQZSA-N 0.000 description 2
- BMQYVXCPAOLZOK-UHFFFAOYSA-N Trihydroxypropylpterisin Natural products OCC(O)C(O)C1=CN=C2NC(N)=NC(=O)C2=N1 BMQYVXCPAOLZOK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 2
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 2
- 125000002252 acyl group Chemical group 0.000 description 2
- 239000000556 agonist Substances 0.000 description 2
- 125000003277 amino group Chemical group 0.000 description 2
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 2
- 238000002832 anti-viral assay Methods 0.000 description 2
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 2
- 210000001124 body fluid Anatomy 0.000 description 2
- 239000010839 body fluid Substances 0.000 description 2
- 230000037396 body weight Effects 0.000 description 2
- 210000000349 chromosome Anatomy 0.000 description 2
- 230000009918 complex formation Effects 0.000 description 2
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 2
- 238000011161 development Methods 0.000 description 2
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 2
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 description 2
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 2
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 2
- 210000002950 fibroblast Anatomy 0.000 description 2
- 238000002523 gelfiltration Methods 0.000 description 2
- 210000005260 human cell Anatomy 0.000 description 2
- 210000000987 immune system Anatomy 0.000 description 2
- 239000002955 immunomodulating agent Substances 0.000 description 2
- 229940121354 immunomodulator Drugs 0.000 description 2
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 2
- 238000001802 infusion Methods 0.000 description 2
- 230000003834 intracellular effect Effects 0.000 description 2
- 238000007918 intramuscular administration Methods 0.000 description 2
- 210000000265 leukocyte Anatomy 0.000 description 2
- 206010025135 lupus erythematosus Diseases 0.000 description 2
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 description 2
- BMQYVXCPAOLZOK-XINAWCOVSA-N neopterin Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)C1=CN=C2NC(N)=NC(=O)C2=N1 BMQYVXCPAOLZOK-XINAWCOVSA-N 0.000 description 2
- 239000002751 oligonucleotide probe Substances 0.000 description 2
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 description 2
- 125000002467 phosphate group Chemical group [H]OP(=O)(O[H])O[*] 0.000 description 2
- 230000026731 phosphorylation Effects 0.000 description 2
- 238000006366 phosphorylation reaction Methods 0.000 description 2
- 239000000902 placebo Substances 0.000 description 2
- 229940068196 placebo Drugs 0.000 description 2
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 2
- 230000008054 signal transmission Effects 0.000 description 2
- 238000002741 site-directed mutagenesis Methods 0.000 description 2
- 241000894007 species Species 0.000 description 2
- 239000003381 stabilizer Substances 0.000 description 2
- 230000000638 stimulation Effects 0.000 description 2
- 208000003265 stomatitis Diseases 0.000 description 2
- 238000007920 subcutaneous administration Methods 0.000 description 2
- 230000001629 suppression Effects 0.000 description 2
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 description 2
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 2
- 238000013518 transcription Methods 0.000 description 2
- 230000035897 transcription Effects 0.000 description 2
- 238000001890 transfection Methods 0.000 description 2
- 210000002700 urine Anatomy 0.000 description 2
- 239000013598 vector Substances 0.000 description 2
- 208000005925 vesicular stomatitis Diseases 0.000 description 2
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 2
- 108091032973 (ribonucleotides)n+m Proteins 0.000 description 1
- QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-O Ammonium Chemical class [NH4+] QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-O 0.000 description 1
- 239000004475 Arginine Substances 0.000 description 1
- 101100456566 Caenorhabditis elegans dpy-22 gene Proteins 0.000 description 1
- OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N Calcium Chemical class [Ca] OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000014914 Carrier Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010078791 Carrier Proteins Proteins 0.000 description 1
- 102000000844 Cell Surface Receptors Human genes 0.000 description 1
- 108010001857 Cell Surface Receptors Proteins 0.000 description 1
- 241000724565 Chorella virus Species 0.000 description 1
- 108020004635 Complementary DNA Proteins 0.000 description 1
- JOJYUFGTMHSFEE-YONYXQDTSA-M Cytarabine ocfosphate Chemical compound [Na+].O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](COP([O-])(=O)OCCCCCCCCCCCCCCCCCC)O[C@H]1N1C(=O)N=C(N)C=C1 JOJYUFGTMHSFEE-YONYXQDTSA-M 0.000 description 1
- 238000001712 DNA sequencing Methods 0.000 description 1
- 101100344297 Drosophila melanogaster Tak1 gene Proteins 0.000 description 1
- 244000068988 Glycine max Species 0.000 description 1
- 235000010469 Glycine max Nutrition 0.000 description 1
- 206010018691 Granuloma Diseases 0.000 description 1
- 102000002265 Human Growth Hormone Human genes 0.000 description 1
- 108010000521 Human Growth Hormone Proteins 0.000 description 1
- 239000000854 Human Growth Hormone Substances 0.000 description 1
- DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M Ilexoside XXIX Chemical class C[C@@H]1CC[C@@]2(CC[C@@]3(C(=CC[C@H]4[C@]3(CC[C@@H]5[C@@]4(CC[C@@H](C5(C)C)OS(=O)(=O)[O-])C)C)[C@@H]2[C@]1(C)O)C)C(=O)O[C@H]6[C@@H]([C@H]([C@@H]([C@H](O6)CO)O)O)O.[Na+] DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M 0.000 description 1
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 description 1
- 108010078049 Interferon alpha-2 Proteins 0.000 description 1
- 102100039350 Interferon alpha-7 Human genes 0.000 description 1
- 102000015617 Janus Kinases Human genes 0.000 description 1
- 108010024121 Janus Kinases Proteins 0.000 description 1
- ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-P L-argininium(2+) Chemical compound NC(=[NH2+])NCCC[C@H]([NH3+])C(O)=O ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-P 0.000 description 1
- KDXKERNSBIXSRK-YFKPBYRVSA-N L-lysine Chemical compound NCCCC[C@H](N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 1
- 239000004472 Lysine Substances 0.000 description 1
- KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N Lysine Natural products NCCCCC(N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000043129 MHC class I family Human genes 0.000 description 1
- 108091054437 MHC class I family Proteins 0.000 description 1
- 102000043131 MHC class II family Human genes 0.000 description 1
- 108091054438 MHC class II family Proteins 0.000 description 1
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 1
- 101100241859 Mus musculus Oacyl gene Proteins 0.000 description 1
- 206010028372 Muscular weakness Diseases 0.000 description 1
- 241000204031 Mycoplasma Species 0.000 description 1
- 208000030852 Parasitic disease Diseases 0.000 description 1
- 102000035195 Peptidases Human genes 0.000 description 1
- 108091005804 Peptidases Proteins 0.000 description 1
- 108091000080 Phosphotransferase Proteins 0.000 description 1
- 239000002202 Polyethylene glycol Substances 0.000 description 1
- 239000004365 Protease Substances 0.000 description 1
- 101150083487 SIK1 gene Proteins 0.000 description 1
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 description 1
- MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N Serine Natural products OCC(N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108091023040 Transcription factor Proteins 0.000 description 1
- 102000040945 Transcription factor Human genes 0.000 description 1
- GSEJCLTVZPLZKY-UHFFFAOYSA-N Triethanolamine Chemical compound OCCN(CCO)CCO GSEJCLTVZPLZKY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000036142 Viral infection Diseases 0.000 description 1
- HCHKCACWOHOZIP-UHFFFAOYSA-N Zinc Chemical class [Zn] HCHKCACWOHOZIP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 1
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 description 1
- 239000013543 active substance Substances 0.000 description 1
- 125000001931 aliphatic group Chemical group 0.000 description 1
- 150000001408 amides Chemical class 0.000 description 1
- 150000001412 amines Chemical class 0.000 description 1
- 229910021529 ammonia Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000003042 antagnostic effect Effects 0.000 description 1
- 230000001028 anti-proliverative effect Effects 0.000 description 1
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 1
- 230000000890 antigenic effect Effects 0.000 description 1
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 1
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 1
- ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N arginine Natural products OC(=O)C(N)CCCNC(N)=N ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000003435 aroyl group Chemical group 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 1
- 102000015736 beta 2-Microglobulin Human genes 0.000 description 1
- 108010081355 beta 2-Microglobulin Proteins 0.000 description 1
- 230000008827 biological function Effects 0.000 description 1
- 210000002798 bone marrow cell Anatomy 0.000 description 1
- 210000004899 c-terminal region Anatomy 0.000 description 1
- 238000010804 cDNA synthesis Methods 0.000 description 1
- 239000011575 calcium Chemical class 0.000 description 1
- 229910052791 calcium Inorganic materials 0.000 description 1
- 125000001589 carboacyl group Chemical group 0.000 description 1
- 125000002837 carbocyclic group Chemical group 0.000 description 1
- 150000001720 carbohydrates Chemical class 0.000 description 1
- 235000014633 carbohydrates Nutrition 0.000 description 1
- 230000020411 cell activation Effects 0.000 description 1
- 230000024245 cell differentiation Effects 0.000 description 1
- 230000008859 change Effects 0.000 description 1
- 238000012512 characterization method Methods 0.000 description 1
- 238000010382 chemical cross-linking Methods 0.000 description 1
- 125000003636 chemical group Chemical group 0.000 description 1
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 1
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 1
- 230000001684 chronic effect Effects 0.000 description 1
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 description 1
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 1
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 1
- 125000000151 cysteine group Chemical group N[C@@H](CS)C(=O)* 0.000 description 1
- 102000003675 cytokine receptors Human genes 0.000 description 1
- 108010057085 cytokine receptors Proteins 0.000 description 1
- 230000000120 cytopathologic effect Effects 0.000 description 1
- 230000001086 cytosolic effect Effects 0.000 description 1
- 210000001151 cytotoxic T lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 230000001472 cytotoxic effect Effects 0.000 description 1
- 230000007123 defense Effects 0.000 description 1
- 230000005860 defense response to virus Effects 0.000 description 1
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 description 1
- 238000006471 dimerization reaction Methods 0.000 description 1
- 238000009826 distribution Methods 0.000 description 1
- 239000002552 dosage form Substances 0.000 description 1
- 230000003090 exacerbative effect Effects 0.000 description 1
- 239000013604 expression vector Substances 0.000 description 1
- 239000000945 filler Substances 0.000 description 1
- 238000001506 fluorescence spectroscopy Methods 0.000 description 1
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 description 1
- 235000011389 fruit/vegetable juice Nutrition 0.000 description 1
- 230000005714 functional activity Effects 0.000 description 1
- 125000000524 functional group Chemical group 0.000 description 1
- 238000005227 gel permeation chromatography Methods 0.000 description 1
- 238000001415 gene therapy Methods 0.000 description 1
- 125000003827 glycol group Chemical group 0.000 description 1
- 230000013595 glycosylation Effects 0.000 description 1
- 238000006206 glycosylation reaction Methods 0.000 description 1
- 230000003862 health status Effects 0.000 description 1
- 238000009396 hybridization Methods 0.000 description 1
- 125000002887 hydroxy group Chemical group [H]O* 0.000 description 1
- 230000003100 immobilizing effect Effects 0.000 description 1
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 description 1
- 230000006872 improvement Effects 0.000 description 1
- 239000000411 inducer Substances 0.000 description 1
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 1
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 description 1
- 239000012678 infectious agent Substances 0.000 description 1
- 208000027866 inflammatory disease Diseases 0.000 description 1
- 229960003130 interferon gamma Drugs 0.000 description 1
- 108010045648 interferon omega 1 Proteins 0.000 description 1
- 229940028894 interferon type ii Drugs 0.000 description 1
- 238000004255 ion exchange chromatography Methods 0.000 description 1
- 229910052742 iron Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000007794 irritation Effects 0.000 description 1
- 238000012933 kinetic analysis Methods 0.000 description 1
- 230000033001 locomotion Effects 0.000 description 1
- 210000004698 lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 230000014759 maintenance of location Effects 0.000 description 1
- 210000004962 mammalian cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000013507 mapping Methods 0.000 description 1
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 1
- 108020004999 messenger RNA Proteins 0.000 description 1
- 150000007522 mineralic acids Chemical class 0.000 description 1
- 239000003226 mitogen Substances 0.000 description 1
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 238000002703 mutagenesis Methods 0.000 description 1
- 231100000350 mutagenesis Toxicity 0.000 description 1
- 230000036473 myasthenia Effects 0.000 description 1
- 210000000822 natural killer cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000004770 neurodegeneration Effects 0.000 description 1
- 208000015122 neurodegenerative disease Diseases 0.000 description 1
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 1
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 1
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 description 1
- 210000004940 nucleus Anatomy 0.000 description 1
- 230000000771 oncological effect Effects 0.000 description 1
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 1
- 150000007524 organic acids Chemical class 0.000 description 1
- 235000005985 organic acids Nutrition 0.000 description 1
- 150000007530 organic bases Chemical class 0.000 description 1
- 230000002018 overexpression Effects 0.000 description 1
- 235000006408 oxalic acid Nutrition 0.000 description 1
- 208000003154 papilloma Diseases 0.000 description 1
- 208000029211 papillomatosis Diseases 0.000 description 1
- 210000003819 peripheral blood mononuclear cell Anatomy 0.000 description 1
- 210000001539 phagocyte Anatomy 0.000 description 1
- 102000020233 phosphotransferase Human genes 0.000 description 1
- 230000004962 physiological condition Effects 0.000 description 1
- 230000006461 physiological response Effects 0.000 description 1
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 1
- 230000004983 pleiotropic effect Effects 0.000 description 1
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 description 1
- 102000040430 polynucleotide Human genes 0.000 description 1
- 108091033319 polynucleotide Proteins 0.000 description 1
- 239000002157 polynucleotide Substances 0.000 description 1
- 230000008092 positive effect Effects 0.000 description 1
- 239000002243 precursor Substances 0.000 description 1
- 230000002265 prevention Effects 0.000 description 1
- 150000003141 primary amines Chemical class 0.000 description 1
- MFDFERRIHVXMIY-UHFFFAOYSA-N procaine Chemical compound CCN(CC)CCOC(=O)C1=CC=C(N)C=C1 MFDFERRIHVXMIY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960004919 procaine Drugs 0.000 description 1
- 230000002035 prolonged effect Effects 0.000 description 1
- 230000001681 protective effect Effects 0.000 description 1
- 238000000159 protein binding assay Methods 0.000 description 1
- 230000005588 protonation Effects 0.000 description 1
- 230000004044 response Effects 0.000 description 1
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 1
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 1
- 150000003335 secondary amines Chemical class 0.000 description 1
- 230000011664 signaling Effects 0.000 description 1
- 102000035025 signaling receptors Human genes 0.000 description 1
- 108091005475 signaling receptors Proteins 0.000 description 1
- 238000004088 simulation Methods 0.000 description 1
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 1
- 229910052708 sodium Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000007790 solid phase Substances 0.000 description 1
- 230000000087 stabilizing effect Effects 0.000 description 1
- 239000012899 standard injection Substances 0.000 description 1
- 230000002195 synergetic effect Effects 0.000 description 1
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 230000009885 systemic effect Effects 0.000 description 1
- 229940124597 therapeutic agent Drugs 0.000 description 1
- 238000012932 thermodynamic analysis Methods 0.000 description 1
- 125000000341 threoninyl group Chemical group [H]OC([H])(C([H])([H])[H])C([H])(N([H])[H])C(*)=O 0.000 description 1
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 1
- 230000000699 topical effect Effects 0.000 description 1
- 230000002588 toxic effect Effects 0.000 description 1
- 231100000563 toxic property Toxicity 0.000 description 1
- 230000002103 transcriptional effect Effects 0.000 description 1
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 1
- 238000013519 translation Methods 0.000 description 1
- 125000001493 tyrosinyl group Chemical group [H]OC1=C([H])C([H])=C(C([H])=C1[H])C([H])([H])C([H])(N([H])[H])C(*)=O 0.000 description 1
- 229940088594 vitamin Drugs 0.000 description 1
- 229930003231 vitamin Natural products 0.000 description 1
- 230000003313 weakening effect Effects 0.000 description 1
- 239000011701 zinc Chemical class 0.000 description 1
- 229910052725 zinc Chemical class 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/705—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants
- C07K14/715—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants for cytokines; for lymphokines; for interferons
- C07K14/7156—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants for cytokines; for lymphokines; for interferons for interferons [IFN]
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/705—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants
- C07K14/715—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants for cytokines; for lymphokines; for interferons
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
- A61P1/04—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for ulcers, gastritis or reflux esophagitis, e.g. antacids, inhibitors of acid secretion, mucosal protectants
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
- A61P1/16—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for liver or gallbladder disorders, e.g. hepatoprotective agents, cholagogues, litholytics
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
- A61P17/02—Drugs for dermatological disorders for treating wounds, ulcers, burns, scars, keloids, or the like
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
- A61P19/02—Drugs for skeletal disorders for joint disorders, e.g. arthritis, arthrosis
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P21/00—Drugs for disorders of the muscular or neuromuscular system
- A61P21/04—Drugs for disorders of the muscular or neuromuscular system for myasthenia gravis
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
- A61P3/08—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis
- A61P3/10—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis for hyperglycaemia, e.g. antidiabetics
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/12—Antivirals
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/12—Antivirals
- A61P31/14—Antivirals for RNA viruses
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/12—Antivirals
- A61P31/20—Antivirals for DNA viruses
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
- A61P35/02—Antineoplastic agents specific for leukemia
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
- A61P37/02—Immunomodulators
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
- A61P37/02—Immunomodulators
- A61P37/06—Immunosuppressants, e.g. drugs for graft rejection
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
- Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
- Y02A50/00—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE in human health protection, e.g. against extreme weather
- Y02A50/30—Against vector-borne diseases, e.g. mosquito-borne, fly-borne, tick-borne or waterborne diseases whose impact is exacerbated by climate change
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Immunology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Virology (AREA)
- Oncology (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Diabetes (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Zoology (AREA)
- Toxicology (AREA)
- Communicable Diseases (AREA)
- Hematology (AREA)
- Neurology (AREA)
- Physical Education & Sports Medicine (AREA)
- Orthopedic Medicine & Surgery (AREA)
- Rheumatology (AREA)
- Emergency Medicine (AREA)
- Transplantation (AREA)
- Obesity (AREA)
- Pain & Pain Management (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Endocrinology (AREA)
Abstract
Настоящее изобретение относится к применению мутантного полипептида β-цепи рецептора интерферона типа I (IFNAR2) (MIFNAR2), имеющего аминокислотную последовательность SEQ ID NO:1, мутированного по аминокислотным остаткам гистидина в положении 78 и аспарагина в положении 100, обладающего повышенной аффинностью к интерферону-β (IFN-β) по сравнению с полипептидом дикого типа, или аналога указанного мутантного полипептида, обладающего, по существу, такой же активностью, у которого до 30 аминокислотных остатков может быть удалено, добавлено или замещено, при условии, что эти остатки не являются остатками 78 и 100, или его соли, для производства лекарственного средства, модулирующего эффекты IFN-β. Также изобретение относится к фармацевтической композиции, содержащей указанный полипептид.
Description
Область изобретения
Настоящее изобретение относится к мутантным полипептидам β-цепи рецептора ΙΡΝ типа I (ΜΙΡΝΆΚ2) с увеличенной аффинностью к интерферону-β по сравнению с белком дикого типа для продления действия ΙΡΝ-β ίη νίνο.
Предпосылки изобретения
Интерфероны классифицируют или как происходящие из лейкоцитов или фибробластов интерфероны типа I, или как индуцируемые митогеном или иммунные интерфероны типа II (Рейка е! а1., 1987). Посредством анализа идентичности последовательностей и общих видов биологической активности интерфероны типа I включают интерферон-α (ΛΝ-α), интерферон-β (ΛΝ-β) и интерферон-ω (ΛΝ-ο), тогда как интерферон типа II включает интерферон-γ (ΓΡΝ-γ).
Гены ΓΡΝ-α, ΓΡΝ-β и ΓΡΝ-ω расположены группой в 25 полосе на коротком плече хромосомы 9 (Ьепдук 1982). Существует по меньшей мере 25 неаллельных генов ΓΡΝ-α, 6 неаллельных генов ΓΡΝ-ω и единственный ген βΡΝ-β. Как полагают, все они произошли из единственного общего предкового гена. В пределах вида гены βΡΝ-α обладают по меньшей мере 80% идентичности последовательности друг с другом. Ген βΡΝ-β обладает приблизительно 50% идентичности последовательности с ΛΝ-α, а ген ΙΡΝ-е обладает 70% гомологии с ΛΝ-α (ХУеЬйпап е! а1., 1986; Ότοη е! а1., 1992). ΛΝ-α обладает молекулярной массой в диапазоне 17-23 кДа (165-166 аминокислот), βΡΝ-β - приблизительно 23 кДа (166 аминокислот), а ΛΝ -ω - приблизительно 24 кДа (172 аминокислоты).
Интерфероны типа I представляют собой плейотропные цитокины, обладающие активностью, такой как защита хозяина против вирусных и паразитарных инфекций, противоопухолевыми свойствами и активностью как иммуномодуляторы (Вагоп е! а1., 1994; Вагоп е! а1., 1991). Физиологические ответы на интерфероны типа I включают антипролиферативное действие на нормальные и трансформированные клетки, стимуляцию цитотоксической активности в лимфоцитах, природных киллерных клетках и фагоцитарных клетках, модуляцию клеточной дифференцировки, стимуляцию экспрессии антигенов МНС класса I, ингибирование МНС класса II и модуляцию разнообразия рецепторов на клеточной поверхности. В нормальных физиологических условиях βΡΝ-α и βΡΝ-β (βΡΝ-α/β) в низких уровнях конститутивно секретируются большинством клеток человека, с экспрессией, стимулируемой добавлением ряда индукторов, включающих инфекционные агенты (вирусы, бактерии, микоплазму и простейшие одноклеточные), дцРНИ и цитокины (Μ-ί.'8Ρ. кШа, кЬ-2, ΤΝΡα). Действия интерферона типа I ίη νίνο можно контролировать с применением суррогатных маркеров, неоптерина, 2',5'-олигоаденилатсинтетазы и β2микроглобулина (А1ат е! а1., 1997; Ρ^е^1Ьеск е! а1., 1996; 3а1шоп е! а1., 1996).
Интерфероны типа I (βΡΝ-α/β/ω) действуют через рецепторный комплекс на клеточной поверхности, индуцируя специфические биологические эффекты, такие как противовирусные, противоопухолевые и иммуномодуляторы. Рецептор ΛΝ типа I (ШЛАК.) представляет собой гетеромультимерный рецепторный комплекс, состоящий по меньшей мере из двух различных полипептидных цепей (Со1ашоше1 е! а1., 1992; Со1ашоше1 е! а1., 1993; Р1а1аша§ е! а1., 1993). Кодирующие данные цепи гены расположены на хромосоме 21, а кодируемые ими белки экспрессируются на поверхности большинства клеток (Тап е! а1., 1973). Цепи рецептора, первоначально обозначенные как α и β, затем переименовали в ШИАВ! для асубъединицы и ΛΝΑΡΖ для β-субъединицы. В большинстве клеток ΛΝΑ^! (α-цепь, субъединица Ьхе) (Ше е! а1., 1990) обладает молекулярной массой 100-130 кДа, тогда как ΛΝΑΚΣ (β-цепь, [ь, ΛΝ-ο/βΗ) обладает молекулярной массой 100 кДа. В некоторых типах клеток (линии моноцитарных клеток и нормальные клетки костного мозга) идентифицирован альтернативный рецепторный комплекс, где субъединица ΛΝΑΚΤ (β3) экспрессируется как укороченный рецептор с молекулярной массой 51 кДа. Субъединицы ШНАК.1 и ΛΝΑΚΣ [β. и β3 клонированы (№у1ск е! а1., 1994; Оошап^к! е! а1., 1995). Субъединицы ΛΝΑΚΣ [β, и β3 обладают идентичными внеклеточными и трансмембранными доменами, однако в цитоплазматическом домене идентичными у них являются только первые 15 аминокислот. Субъединица ШNΑΚ2 способна связывать βΡΝ-α/β самостоятельно, тогда как субъединица ШНАК.1 не способна связывать βΡΝ-α/β. Когда одну рецепторную субъединицу ШНАК.1 человека трансфицируют в мышиные фибробласты Ь-929, человеческие ΛΝ-α, за исключением ШН-а8/ШН-аВ, не способны связываться с клетками (ихе е! а1., 1990). Субъединица ЛКАЮ человека, трансфицированная в Ь-клетки в отсутствие субъединицы ΓΡNΑΚ.1 человека, связывает человеческий βΡΝ-α, связываясь с Кб, приблизительно равной 0,45 нМ. Когда субъединицы ШНАК.2 человека трансфицируют в присутствии субъединицы человеческого ШНАК.1, можно продемонстрировать связывание с высокой аффинностью с Кб, равной 0,026-0,114 нМ (комск е! а1., 1994; Пошап§к1 е! а1., 1995). Рассчитано, что на большинстве клеток присутствуют от 500 до 20000 участков связывания ΓΡN с высокой аффинностью и от 2000 до 100000 участков связывания βΡΝ с низкой аффинностью. Хотя субъединицы комплекса ШМАК.1/2 (α/β3 или о/[ь) связывают βΡΝ-α с высокой аффинностью, оказывается, что только пара α/ββ, представляет собой функциональный сигнальный рецептор.
Трансфекция субъединиц ШПАК! и ШМАК.2 ββ, в мышиные клетки Ь-929 с последующей инкубацией с βΡΝ-α2 индуцировала противовирусное состояние, инициировала фосфорилирование внутрикле
- 1 009604 точных белков и вызывала активацию внутриклеточных киназ (Так1 и Тук2) и транскрипционных факторов (8ТЛТ 1, 2 и 3) (ΝονίοΚ е! а1., 1994; Иотап^к! е! а1., 1995). В соответствующем эксперименте трансфекция субъединицы ΙΡΝΑΚ2 β8 являлась неспособной инициировать подобный ответ. Таким образом, субъединица βι. необходима для функциональной активности (противовирусный ответ) с максимальной индукцией, происходящей при ассоциации с субъединицей ΙΡΝΑΚ1.
В дополнение к связанным с мембраной формам ΙΡΝΑΚ на клеточной поверхности, в моче и сыворотке человека идентифицировали растворимый ΙΡΝΑΚ (Νονίο1< е! а1., 1994; Νονίο1< е! а1., 1995; Νονίο1< е! а1., 1992; РыГа11а е! а1., 1995). Растворимый ΙΡΝΑΚ, выделенный из сыворотки, обладает средней молекулярной массой 55 кДа при 8Ό8-ΡΑΟΕ, тогда как растворимый ΙΡΝΑΚ из мочи обладает средней молекулярной массой 40-45 кДа (р40). Транскрипты для растворимого р40 ΙΡΝΑΚ2 присутствуют на уровне мРНК и заключают в себе почти полный внеклеточный домен субъединицы ΙΡΝΑΚ2 с двумя дополнительными аминокислотами на С-конце. На растворимом рецепторе ΙΡΝΑΚ2 присутствуют пять потенциальных участков гликозилирования. Показано, что растворимый р40 ΙΡΝΑΚ2 связывает ΙΡΝ-α2 и ΙΡΝ-β и ингибирует ίη νίΙΐΌ противовирусную активность смеси разновидностей ΙΡΝ-α (лейкоцитарный ΙΡΝ) и индивидуальных ΙΡΝ типа I (Νονίο1< е! а1., 1995). Показано, что рекомбинантный гибридный белок субъединицы ΙΡΝΑΚ2 и 1д ингибирует связывание множества видов ΙΡΝ типа 1 (ΙΡΝ-αΑ, ΙΡΝ-αΒ, ΙΡΝ-αΌ, ΙΡΝ-β, ΙΡΝ-α Соп1 и ΙΡΝ-ω) с клетками Дауди и дважды трансфицированными субъединицами α/β8 клетками СО8.
Идентифицированы пути передачи сигнала с участием ΙΡΝ типа I (Р1а1аша8 е! а1., 1996; Уап е! а1., 1996; ЦигезЫ е! а1., 1996; Эппсам е! а1., 1996; 811агГ е! а1., 1995; Уапд е! а1., 1996). Полагают, что начальные события, ведущие к передаче сигнала, происходят при связывании ΙΡΝ-α/β/ω с субъединицей ΙΡΝΑΚ2, с последующей ассоциацией с субъединицей ΙΡΝΑΚ1 с формированием комплекса ΙΡΝΑΚ1/2 (Р1а1ашаз е! а1., 1994). Связывание ΙΡΝ-α/β/ω с комплексом ΙΡΝΑΚ1/2 приводит к активации двух Янус-киназ (1ак1 апб Тук2), которые, как предполагают, фосфорилируют специфические остатки тирозина на субъединицах ΙΡΝΑΚ1 и ΙΡΝΑΚ2. Когда данные субъединицы фосфорилируются, фосфорилируются молекулы 8ТΑТ (8ТΑТ 1, 2 и 3), что приводит к димеризации транскрипционных комплексов 8ТΑТ с последующим перемещением транскрипционного комплекса в ядро и активацией специфически индуцируемых ΙΡΝ генов.
Рандомизированное, двойное слепое клиническое многоцентровое исследование с контролем плацебо на протяжении двух лет показало, что природный интерферон фибробластов человека (интерферонβ), введенный подоболочно ЦТ), эффективен для уменьшения обострений обостряющегосяремиттирующего рассеянного склероза (М8). В течение исследования среднее уменьшение уровня обострения 34 пациентов с М8, получавших интерферон-β, вводимого ГТ, являлось значимо большим, чем уменьшение уровня обострения у 35 контрольных пациентов, получавших плацебо ПасоЪз е! а1., 1987).
У людей оценивали фармакокинетику и фармакодинамику ΙΡΝ типа Ι (Л1ап е! а1., 1997; НебЬеск е! а1., 1996; 8а1топ е! а1., 1996). Клиренс ΙΡΝ-β является достаточно быстрым с биодоступностью ΙΡΝ-β ниже, чем ожидаемая, для большинства цитокинов. Хотя у людей оценивали фармакодинамику ΙΡΝ-β четкой корреляции между биодоступностью ΙΡΝ-β и клинической эффективностью не установили. У нормальных здоровых добровольцев введение единичной внутривенной (ίν) болюсной дозы (6 мМЕ) рекомбинантного ΙΡΝ-β, полученного из клеток СНО, приводило к быстрой фазе распределения в течение 5 мин и заключительному периоду полувыведения в течение приблизительно 5 ч АПт е! а1., 1997). После подкожного (зс) или внутримышечного (1т) введения ΙΡΝ-β, уровни в сыворотке являются ровными с системной доступностью приблизительно только 15% дозы. Фармакодинамика ΙΡΝ-β после ίν, 1т или зс введений (как измеряли посредством изменений активности 2',5'-олигоаденилатсинтетазы (2',5'-Α8) в РВМС) увеличивалась в течение первых 24 ч и медленно уменьшалась до исходного уровня в течение следующих 4 суток. Величина и длительность биологического эффекта являлись одинаковыми вне зависимости от способа введения.
Фармакодинамическое исследование множественных доз ΙΡΝ-β провели у пациентов с меланомой (Е1ег1Ъеск е! а1., 1996) с применением ΙΡΝ-β, вводимого способом зс три раза в неделю при 3 мМЕ/дозу в течение шестимесячного периода. Фармакодинамические маркеры, 2',5'-Α8, β2-микроглобулин, неоптерин и активация клеток ΝΚ достигали максимума при второй инъекции (сутки 4) и уменьшалась через 28 суток, оставаясь только немного увеличенными к шести месяцам.
Сообщалось об очистке и рефолдинге внеклеточной части ΙΡΝΑΚ2 человека (IΡNΑΚ2-ΕС), экспрессированной в ЕзсйепсЫа сой, и ее характеристике, по отношению к ее взаимодействию с интерферономα2 (ΙΡΝ-α2) (Р1ей1ег апб 8сйге1Ъег, 1999Α). Показано, что негликозилированный ЕС ΙΡΝΑΚ2 массой 25 кДа является стабильным, полностью активным белком, ингибирующим противовирусную активность ΙΡΝ-α2. Стехиометрия связывания ΙΡΝ-α2 представляет собой 1:1, как определили посредством гельфильтрации, химического сшивания и детекции в твердой фазе. Найдено, что аффинность такого взаимодействия представляет собой приблизительно 3 нМ (Р1ей1ег апб 8сйге1Ъег, 2001). Скорость формирования комплекса по сравнению с другими взаимодействиями цитокин-рецептор является относительно вы
- 2 009604 сокой. Зависимость кинетики ассоциации от соли позволяет предположить ограниченный, но значимый вклад электростатических сил в скорость формирования комплекса. Константа диссоциации увеличивается с рН, снижающимся согласно протонированию основания с рКа, равным 6,7. Аффинность ΙΡΝ-β к ΙΡΝΑΚ2 приблизительно в два раза выше, чем аффинность ΙΡΝ-α2 к ΙΡΝΑΚ2 (Р1ей1ег апб 8сйге1Ьег, 1999В).
Единичные мутации в связывающем участке ΙΡΝΑΚ2 позволили провести картирование отличий в связывании ΙΡΝ-α2 и ΙΡΝ-β (Р1еЫег апб 8сйге1Ьег, 1999В). Например, обнаружено, что мутация Н78А делает комплекс с ΙΡΝ-β приблизительно в два раза более стабильным, тогда как комплекс с ΙΡΝ-α2 она делает менее стабильным более чем в два раза. Обнаружено, что мутация Ν100Α почти не влияет на скорости связывания ΙΡΝ-α2, тогда как константу скорости диссоциации для ΙΡΝ-β она уменьшает почти в четыре раза.
В ЕР 1037658 описано, что эффекты интерферона типа 1 (ΙΡΝ) ίη νίνο можно продлить посредством введения интерферона в форме комплекса со связывающей ΙΡΝ цепью человеческого рецептора интерферона-α/β (ΙΡΝΑΒ), т.е. ΙΡΝΑΚ. служит в качестве белка-носителя для ΙΡΝ. Такой комплекс также увеличивает стабильность ΙΡΝ и повышает эффективность ΙΡΝ. Комплекс может представлять собой нековалентный комплекс или комплекс, в котором ΙΡΝ и ΙΡΝΑΚ связаны ковалентной связью или пептидом. В ЕР 1037658 также описано, что хранение ΙΡΝ в форме такого комплекса увеличивает время хранения ΙΡΝ и позволяет хранение в более мягких условиях, чем те, которые могли бы являться возможными в противном случае.
Существует необходимость в ΙΡΝΑΚ2 с повышенной аффинностью к ΙΡΝ-β, но не к ΙΡΝ-α2, что делает ΙΡΝΑΚ2 лучшим и специфическим носителем для ΙΡΝ-β.
Сущность изобретения
Настоящее изобретение относится к применению мутантного полипептида β-цепи рецептора интерферона типа Ι (ΙΡΝΑΚ.2) (ΜΙΡΝΑΚ2), имеющего аминокислотную последовательность 8ЕО ΙΌ ΝΟ:1, мутированного по аминокислотным остаткам гистидина в положении 78 и аспарагина в положении 100, обладающего повышенной аффинностью к интерферону-β (ΙΡΝ-β) по сравнению с полипептидом дикого типа, или аналога указанного мутантного полипептида, обладающего, по существу, такой же активностью, у которого до 30 аминокислотных остатков может быть удалено, добавлено или замещено, при условии, что эти остатки не являются остатками 78 и 100, или его соли, для производства лекарственного средства, модулирующего эффекты ΙΡΝ-β. В частности, к применению мутантного полипептида, где мутации представляют собой замены. Конкретно, где замены являются неконсервативными. В одном из вариантов осуществления остаток гистидина в положении 78 заменен на аланин. В еще одном варианте осуществления остаток аспарагина в положении 100 заменен на аланин, аспарагиновую кислоту или гистидин. В другом варианте осуществления оба остатка в положениях 78 и 100 заменены на аланин. Указанный мутантный полипептид также может включать последовательности 8ЕО ΙΌ ΝΟ:2, 8ЕО ΙΌ ΝΟ:3 или 8ЕО ΙΌ ΝΟ:4. В еще одном варианте осуществления аффинность мутантного полипептида к ΙΡΝ-β составляет приблизительно 30 пМ. В другом варианте аффинность мутантного пептида к ΙΡΝ-β приблизительно в 25, предпочтительно в 50 и более предпочтительно в 100 раз выше, чем аффинность полипептида ΙΡΝΑΚ2 дикого типа. В конкретном случае аналог ΜΙΡΝΑΚ 2 содержит экстрацеллюлярный домен. Также указанный мутантный полипептид может быть ковалентно связан с ΙΡΝ-β. В другом случае указанный мутантный полипептид является ПЭГилированным. В одном из вариантов осуществления лекарственное средство дополнительно включает ΙΡΝ-β. В другом варианте осуществления лекарственное средство дополнительно включает антагонист ΙΡΝ-β. В частном случае, указанное лекарственное средство усиливает активность ΙΡΝ-β. В другом частном случае указанное лекарственное средство усиливает противоопухолевую активность ΙΡΝ-β. Также указанное лекарственное средство может усиливать иммуномодулирующую активность ΙΡΝ-β, что необходимо, в частности, при аутоиммунных заболеваниях, выбранных из рассеянного склероза, ревматоидного артрита, миастении гравис, диабета, системной красной волчанки и язвенного колита. Также указанное лекарственное средство может ингибировать активность ΙΡΝ-β. Лекарственное средство может быть предназначено для лечения аутоиммунного заболевания, вирусного заболевания или рака, в частности, заболевание выбрано из рассеянного склероза, ревматоидного артрита, злокачественной миастении, диабета, язвенного колита, системной красной волчанки, хронического гранулематозного заболевания, остроконечной кондиломы, ювенильного ларингеального папилломатоза, гепатита А, хронической инфекции вирусами гепатита В и С, лейкоза ворсистых клеток, саркомы Капоши, множественной миеломы, хронического миелоидного лейкоза, неходжкинской лимфомы и меланомы. Кроме того, лекарственное средство может дополнительно содержать терапевтически активное количество ΙΡΝ-β. Лекарственное средство может быть предназначено для лечения заболевания, вызванного или осложненного ΙΡΝ-β. Лекарственное средство также дополнительно может содержать антагонист ΙΡΝ-β. В одном из вариантов осуществления лекарственное средство предотвращает олигомеризацию ΙΡΝ-β.
- 3 009604
Настоящее изобретение также относится к фармацевтической композиции, включающей терапевтически эффективное количество мутантного полипептида β-цепи рецептора интерферона типа I (ΙΡΝΑΚ2) (ΜΙΡΝΑΚ2), имеющего аминокислотную последовательность 8ЕО ΙΌ N0:1, мутированного по аминокислотным остаткам гистидина в положении 78 и аспарагина в положении 100 или его аналога, обладающего, по существу, такой же активностью, у которого до 30 аминокислотных остатков может быть удалено, добавлено или замещено, при условии, что эти остатки не являются остатками 78 и 100. В частности, указанное терапевтически эффективное количество ΜΙΡΝΑΚ2 по меньшей мере в 30 раз меньше терапевтически эффективного количество ΙΡΝΑΚ2 дикого типа. В другом случае фармацевтическая композиция дополнительно включает ΙΡΝ-β или антагонист ΙΡΝ-β. В одном из вариантов осуществления мутантный полипептид ΙΡΝΑΚ2 ковалентно связан с ΙΡΝ-β. В еще одном варианте осуществления указанный аналог ΙΡΝΑΚ2 содержит экстрацеллюлярный домен. В частности, фармацевтическая композиция по любому может использоваться для усиления противоопухолевых и противовирусных свойств, а также иммуномодулирующих свойств ΙΡΝ-β. Так, фармацевтическая композиция может использоваться для лечения хронического гранулематозного заболевания, остроконечной кондиломы, ювенильного ларингеального папилломатоза, гепатита А, хронической инфекции, вызванной вирусами гепатита В и С, лейкоза ворсистых клеток, саркомы Капоши, множественной миеломы, хронического миелоидного лейкоза, неходжкинской лимфомы, меланомы, рассеянного склероза, ревматоидного артрита, злокачественной миастении, диабета, язвенного колита и системной красной волчанки. Также фармацевтическая композиция может использоваться для ингибирования иммуномодулирующих свойств ΙΡΝ-β.
Краткое описание фигур
На фиг. 1 (слева) изображена имитация концентрации связанного и свободного ΙΡΝ-β, с применением постоянной концентрации ΙΡΝ (50 пМ) и увеличивающихся концентраций ЕС ΙΡΝΑΚ2 дикого типа (слева) и мутантного ЕС ΙΡΝΑΚ2 (справа) с Кб 3 нМ и 50 пМ, соответственно, рассчитанной в соответствии с законом действующих масс.
На фиг. 2 представлена аминокислотная последовательность внеклеточного домена белка ΙΡΝΑΚ2 (за исключением лидирующей последовательности) и модифицированные аминокислотные остатки (отмечены звездочкой).
На фиг. 3 представлено связывание ΙΡΝ-β и ΙΡΝ-α2 с мутантным Η78Α/Ν100Α ЕС ΙΡΝΑΚ2. Ассоциацию и диссоциацию ΙΡΝ-β и ΙΡΝ-α2 с ЕС ΙΡΝΑΚ2 дикого типа (верхняя диаграмма), с мутантным Η78Α/Ν100Α ЕС ΙΡΝΑΚ2 (средняя диаграмма) и связывание ЕС ΙΡΝΑΚ2 дикого типа и мутантного Η78Α/Ν100Α с ΙΡΝ-β (нижняя диаграмма) измеряли с применением отражательной интерференционной спектроскопии (КИБ) с иммобилизованным на поверхности ΙΡΝΑΚ2 (описано у йеЫег апб 8сйге1Ьег, 2001). Ось У=сигнал (нанометры), а ось Х=время (секунды).
На фиг. 4 изображено поглощение ΙΡΝ β посредством ΙΡΝΑΚ2 дикого типа и мутантами. Постоянное количество ΙΡΝ-β (10 пМ) смешивали с различными концентрациями ΙΡΝΑΚ2 (К2) дикого типа и мутантами (одиночные мутанты К2 Ν100Α и К2 Н78А, двойные мутанты К2 Η78Α/Ν100Α, К2 Η78Α/Ν100Η и К2 Η78Α/Ν100Ό) и при равновесии в клетках ΑΙ8Η определяли остаточную противовирусную активность. В верхнем прямоугольнике показана диаграмма противовирусной активности ΙΡΝ-β как функция от концентрации в отсутствии ΙΡΝΑΚ2 (ось У=индекс выживаемости). Данную диаграмму применяют как стандарт для определения того, как много присутствует свободного (активного) ΙΡΝ-β при противовирусном анализе.
Подробное описание изобретения
Изобретение относится к мутанту β-цепи рецептора ΙΡΝ типа Ι (ΙΡΝΑΚ2), измененному по аминокислотным остаткам Н78 и Ν100 (см. последовательность ДНК ΙΡΝΑΚ2 дикого типа на фиг. 2, 8ЕО ΙΌ Ν0:1), обладающему увеличенной аффинностью к ΙΡΝ-β, но не к ΙΡΝ-α2 (ΜΙΡΝΑΚ2). Также изобретение относится к системе носителя лекарственного средства для усиления активности ΙΡΝ, включающей внеклеточный домен (ЕС) ΜΙΡΝΑΚ2. Изобретение относится к ΜΙΡΝΑΚ2 или его аналогу, функциональному производному, гибридному белку, его фрагменту или его солям.
Носители обычно вводят для продления внутрисосудистого времени удержания белков с молекулярной массой ниже 50000 дальтон (например, интерферон). Особенно выгодными являются такие носители, которые связываются нековалентно и обеспечивают постоянное высвобождение лекарственного средства. Применение такого носителя является желательным для того, чтобы в любой момент времени иметь дозу свободного лекарственного средства, доступного для терапевтического действия (приблизительно 20%) и некоторое количество лекарственного средства, связанного с носителем и защищенного (приблизительно 80%).
На фиг. 1 (левая диаграмма) изображена имитация концентрации связанного и свободного ΙΡΝ-β, в присутствии различных концентраций ΙΡΝΑΚ2, основанная на законе действующих масс и Кб, составляющей 3 нМ (определяемой отражательной интерференционной спектроскопией [ΚΙίδ]). Данная имитация демонстрирует, что для того, чтобы достигнуть 20% свободного ΙΡΝ-β (10 пМ, что эквивалентно
- 4 009604 приблизительно 100 единицам) и 80% связанного ΙΡΝ-β, необходима очень высокая концентрация белка ΙΡΝΑΚ2, такая как 12,5 нМ (что эквивалентно 300 мкг/кг негликозилированного ΙΡΝΑΚ2).
Таким образом, применение в качестве носителя (см. имитацию на фиг. 1, правая диаграмма) мутантного ΙΡΝΑΚ2 с аффинностью к ΙΡΝ-β, большей в 50 раз, может являться предпочтительным, так как с применением такого мутанта для получения 20% свободного ΙΡΝ-β теоретически потребуется, только приблизительно 0,24 нМ (что эквивалентно 6 мкг/кг).
Получали мутантный ΙΡΝΑΚ2 с увеличенной аффинностью к ΙΡΝ (ΜΙΡΝΑΚ2). Для получения ЕС ΜΙΡΝΑΚ2 ЕС ΙΡΝΑΚ2 дикого типа (фиг. 1, 8ЕО ΙΌ ΝΟ:1) модифицировали по двум аминокислотным остаткам, остатку гистидина в положении 78 и остатку аспарагина в положении 100 (см. фиг. 2, 3 и 4, 8ЕО ΙΌ ΝΟ:2, 3 и 4). Данный мутантный белок ЕС ΙΡΝΑΚ2 оказался лучшим носителем конкретно для ΙΡΝ-β, т.е. обладающим увеличенной аффинностью к ΙΡΝ-β, тогда как его активность к ΙΡΝ-α2 остается неизмененной. Обнаружено, что аффинность мутантов к ΙΡΝ-β в 26, 40 и приблизительно в 50 раз выше, чем аффинность белка дикого типа (табл. 4). Полученные результаты демонстрируют, что несмотря на увеличенную аффинность данного мутантного растворимого рецептора (Кб мутантного Η78Α/Ν100Α ΙΡΝΑΚ2 »30 пМ против Кб белка АТ=3 нМ), несвязанным и терапевтически активным остается достаточное количество ΙΡΝ-β, как доказано противовирусной защитной активностью клеток ΑΙ8Η, подвергнутых воздействию У8У (фиг. 4). Результаты также демонстрируют, что уровней поглощения ΙΡΝ (связывание ΙΡΝ при равновесных условиях), полученных с ЕС ΙΡΝΑΚ2 дикого типа, можно достичь с применением меньших концентраций мутантных ЕС ΙΡΝΑΚ. Наилучшие результаты получают с мутантами, модифицированными по обоим остаткам, особенно когда обе аминокислоты заменяют на аланин, Η78Α/Ν100Α ΙΡΝΑΚ2, например, для получения 80% связанного ΙΡΝ-β (8 пМ поглощенного и 2 пМ свободного ΙΡΝ-β) необходимо приблизительно в 30 раз меньше мутантного Η78Α/Ν100Α ΙΡΝΑΚ, чем белка ΙΡΝΑΚ2 дикого типа.
Данные результаты демонстрируют, что дважды мутантный ΙΡΝΑΚ2 поглощает ΙΡΝ-β более эффективно и для осуществления его действия в качестве носителя ΙΡΝ-β требуется введение значительно меньших количеств.
Преимущества применения ЕС ΜΙΡΝΑΚ2 состоят в том, что:
(Ι) в качестве носителя возможно введение меньших количеств (таким образом, технически выполнимо) рецептора, (ΙΙ) по причине стабилизирующей активности мутанта возможно уменьшить количество вводимого ΙΡΝ-β и, следовательно, уменьшить некоторые нежелательные побочные эффекты лечения интерфероном, (ΙΙΙ) увеличение мутантом активности специфично для ΙΡΝ-β и (Ιν) при некоторых воспалительных заболеваниях, где может являться необходимым уменьшить концентрации ΙΡΝ, при некоторых условиях возможно применение данного мутанта в качестве эффективного антагониста, специфичного для ΙΡΝ-β, но не для ΙΡΝ-α2.
ЕС ΜΙΡΝΑΚ2 можно вводить самостоятельно для стабилизации и увеличения активности эндогенного ΙΡΝ-β, что особенно применимо для лечения пациентов с заболеванием или состоянием, которое по природе вызывает увеличение собственного ΙΡΝ так, что ΙΡΝ уже будет циркулировать в организме для присущего ему от природы действия по борьбе с таким заболеванием или состоянием. ЕС ΜΙΡΝΑΚ2 специфично действует на эндогенный ΙΡΝ-β, но менее - на ΙΡΝ-α2. Альтернативно, ЕС ΜΙΡΝΑΚ2 можно совместно вводить с ΙΡΝ, предпочтительно ΙΡΝ-β, или можно вводить ковалентно связанным с ΙΡΝ-β для модуляции активности ΙΡΝ-β. Предпочтительно ΜΙΡΝΑΚ2 и ΙΡΝ-β, применяемые для получения комплекса, представляют собой рекомбинантные молекулы.
Необходимая для получения гибридного белка мутантного ЕС ΙΡΝΑΚ2 и ΙΡΝ технология подобна технологии, описанной для получения комплекса ΙΡΝΑΚ дикого типа/ΙΡΝ, подробно описанной в АО 9932141, где вместо варианта дикого типа применяют мутантный по Н78 и Ν100 ΙΡΝΑΚ2 (ΜΙΡΝΑΚ2).
Следствием применения нековалентно связанного комплекса по изобретению ΜΙΡΝΑΚ2/ΙΡΝ-β является то, что для множества терапевтических показаний, при которых ΙΡΝ терапевтически активен сам по себе, необходимы и можно применять меньшие концентрации ЕС ΙΡΝΑΚ2.
Данные показания включают показания, при которых свободные ΙΡΝ продемонстрировали какуюлибо терапевтическую активность, такую как противовирусную, противоопухолевую и иммуномодулирующую активность. Ожидается, что комплекс мутантный ΙΡΝΑΚ2/ΙΡΝ вследствие его большей эффективности, увеличенной активности и/или улучшенной фармакокинетики (т.е. периода полувыведения) будет более эффективен при лечении вирусных, онкологических и аутоиммунных расстройств.
Когда комплекс рецептора интерферона вводят ίη νίνο, он увеличивает биодоступность, улучшает фармакокинетику и/или фармакодинамику ΙΡΝ, таким образом, усиливая противовирусные, противоопухолевые и иммуномодулирующие свойства ΙΡΝ.
- 5 009604
Предпочтительные молекулы для применения в комплексах по настоящему изобретению включают аминокислотные последовательности природного ΙΕΝ-β и ΜΙΕΝΑΚ2 (8ЕО ГО N0:2, 3 и 4). Природная последовательность представляет собой последовательность встречающегося в природе ΙΕΝ-β человека. Такие последовательности известны и их можно легко найти в литературе. Природные аллельные варианты также считаются природными последовательностями.
Настоящее изобретение также относится к аналогам указанного выше ЕС ΜΙΕΝΆΚ2. Такие аналоги могут представлять собой аналоги, в которых в белках приблизительно до 30, предпочтительно до 20 и наиболее предпочтительно 10 аминокислотных остатков могут являться удаленными, добавленными или замещенными другими аминокислотными остатками, за исключением мутаций по остаткам в положениях 78 и 100, что приводит к уменьшению аффинности ΜΙΕΝΑΚ2 к ΙΕΝ-β по сравнению с аффинностью ΙΕΝΑΚ2 дикого типа к ΙΕΝ-β. Данные аналоги получают посредством известных способов синтеза и/или сайт-специфического мутагенеза или любого другого известного подходящего способа.
Любой такой аналог предпочтительно обладает последовательностью аминокислот в достаточной степени повторяющей последовательность основного ΜΙΕΝΆΚ2 так, чтобы обладать, по существу, сходной с ним активностью. Таким образом, посредством типового экспериментирования, включающего в себя применение к каждому такому аналогу тестирования связывания и биологической активности, можно определить, обладает ли любой данный аналог, по существу, одинаковой активностью и/или стабильностью с белком и комплексом по изобретению. Аналоги ЕС ΜΙΕΝΑΚ2 могут связывать ΙΕΝβ с аффинностью, которая по меньшей мере в 15 раз и приблизительно от 50 до 100 раз выше, чем аффинность белка дикого типа, тогда как аффинность к ΙΕΝ-α2 изменяется незначимо. Аналоги ЕС ΜΙΕΝΑΚ2 в отношении к ΙΕΝ-β могут демонстрировать Кб в размере приблизительно 30 пМ и ниже. Тесты связывания для взаимодействия ΜΙΕΝΑΚ2 и ΙΕΝ могут включать аналитическую гель-фильтрацию, оптическую детекцию в гетерогенной фазе (такую как поверхностный плазменный резонанс [8РК] или отражательную интерференционную спектроскопию (КП8), которая обладает сходством с широко применяемым способом ЫАСОКЕ) и флуоресцентную спектроскопию (Р1еЫег апб 8с11гаЬсг. 1999А, РюЫсг апб 8сйте1Ьег, 2001).
Аналоги комплекса, которые можно применять по настоящему изобретению, или кодирующая их нуклеотидная последовательность, включают ограниченное множество, по существу, совпадающих последовательностей пептидов или полинуклеотидов с заменами, которые специалист в данной области может стандартным способом получить без чрезмерного экспериментирования, базируясь на указаниях и руководствах, представленных здесь. Для подробного описания химии и структуры белков см. 8с1ш1х е! а1., Рппар1с5 о£ Рго1ет 81тис1иге, Зрппдег Уег1ад, Νο\ν Уогк (1978) и Сге1дЫоп, Т. Е., рго1еш8: 81тис1иге апб ΜοΕ^Ιατ РгорегПек, ^. Н. Егеетап & Со, 8ап ЕгапсЕсо (1983), включенные сюда в качестве ссылки.
Для представления о заменах нуклеотидной последовательности, таких как кодонные предпочтения, см. Аи8иЬе1 е! а1. (1987, 1992), А.1. Ι-Α. 1.24 и ЗатЬгоок е! а1. (1987, 1992), 6.3 и 6.4 в Приложениях С и Ό.
Предпочтительные изменения для аналогов по настоящему изобретению представляют собой то, что известно как консервативные замены. Консервативные замены аминокислот в последовательностях белков по изобретению могут включать синонимические аминокислоты из группы, которые обладают достаточно сходными физико-химическими свойствами так, что замена представителей группы сохраняет биологическую функцию молекулы (ОгаиНат, 1974). Ясно, что в определенных выше последовательностях также можно провести инсерции и делеции аминокислот без изменения их функции, особенно если инсерции или делеции включают только небольшое количество аминокислот, например, менее тридцати, а предпочтительно - менее десяти, и не приводят к удалению или перемещению аминокислот, важных для функциональной конформации, например, цистеиновых остатков (ΑпΓ^п5еп. 1973). Полученные посредством таких делеций или инсерций аналоги находятся в объеме настоящего изобретения. Предпочтительно синонимические группы аминокислот представляют собой группы, определенные в табл. 1. Более предпочтительно синонимические группы аминокислот представляют собой группы, определенные в табл. 2; и наиболее предпочтительно, синонимические группы аминокислот представляют собой группы, определенные в табл. 3.
- 6 009604
Таблица 1
Предпочтительные группы синонимических аминокислот
Аминокислота
| Зег | Зег, |
| Агд | Агд, |
| Ъеи | Не, |
| Рго | О1у, |
| ТЬг | Рго, |
| А1а | 61у, |
| Уа1 | МеЪ, |
| С1у | А1а, |
| Не | МеЬ, |
| РЬе | Тгр, |
| Туг | Тгр, |
| Суз | Зег, |
| ΗΪ3 | 61и, |
| С1п | О1и, |
| Азп | С1п, |
| Ъуз | 61и, |
| Азр | С1и, |
| С1и | Азр, |
| МеБ | РЬе, |
| Тгр | Тгр |
| Синонимическая группа | ||||
| ТЬг, | С1у, Азп | |||
| О1п, | Ъуз, С1и, | ΗΪ3 | ||
| РЬе, | Туг, МеЬ, | Уа1, | Ъеи | |
| А1а, | ТЬг, Рго | |||
| Зег, | А1а, С1у, | Н1з, | О1п, | ТЬг |
| ТЬг, | Рго, А1а | |||
| Туг, | РЬе, 11е, | Ъеи, | Уа1 | |
| ТЬг, | Рго, Зег, | С1у | ||
| туг, | РЬе, Уа1, | Беи, | Не | |
| МеЬ, | Туг, Не, | Уа1, | Беи, | РЬе |
| МеЪ, | РЬе, Не, | Уа1, | Беи, | Туг |
| ТЬг, | Суз | |||
| Ъуз, | С1п, ТЬе, | Агд, | НЪз | |
| Ъуз, | Азп, ΗΪ5, | ТЬе, | Агд, | С1п |
| Азр, | Зег, Азп | |||
| {□1П, | Н1з, Агд, | Ъуз | ||
| Азп, | Азр | |||
| Ъуз, | Азп, С1п, | НЪз, | Агд, | С1и |
| 11е, | Уа1, Ъеи, | МеЬ |
Таблица 2 Более предпочтительные группы синонимических аминокислот
| Амино кисло т а | Синонимическая группа |
| Зег | Зег |
| Агд | ΗΪ5, Ъуз, Агд |
| Ъеи | Беи, Не, РЬе, МеЬ |
| Рго | А1а, Рго |
| ТЬг | ТЬг |
| А1а | Рго, А1а |
| Уа1 | Уа1, МеЕ, Не |
| С1 у | 01 у |
| Не | Не, МеЕ, РЬе, Уа1, Ъеи |
| РЬе | МеЕ, Туг, Не, Ъеи, РЬе |
| Туг | РЬе, Туг |
| Суз | Суз, Зег |
| Н18 | НБз, С1п, Агд |
| С1п | С1и, О1п, Н1з |
| Азп | Азр, Азп |
| Буз | Ъуз, Агд |
| Азр | Азр, Азп |
| О1и | О1и, С1п |
| МеЕ | МеЕ, РЬе, Не, Уа1, Ъеи |
| Тгр | Тгр |
- 7 009604
Таблица 3
Наиболее предпочтительные группы синонимических аминокислот
| Аминокислота | Синонимическая группа |
| Зег | Зег |
| Агд | Агд |
| Ъец | Ьеи, 11е, МеС |
| Рго | Рго |
| ТЬг | ТЪг |
| А1а | А1а |
| Уа1 | Уа1 |
| С1у | С1у |
| Не | 11е, МеЪ, Ьеи |
| РЬе | РИе |
| Туг | Туг |
| Суз | Суз, Зег |
| Ηίδ | Н1з |
| С1п | С1п |
| Азп. | Азп |
| Ьуз | Ъуз |
| Азр | Азр |
| С1и | С1и |
| Мер | МеЬ, 11е, Ьеи |
| Тгр | Мек |
Примеры получения замен аминокислот в белках, которые можно применять для получения аналогов ΜΙΡΝΑΕ2 или ЕС ΜΙΡΝΑΕ2 для применения по настоящему изобретению, включают любые известные стадии способов, такие как представлены в патентах США ЕЕ 33653; 4959314; 4588585 и 4737462, выданных Магк е! а1.; 5116943, выданном Ко1Й8 е! а1.; 4965195, выданном Nатеη е! а1.; и 5017691, выданном Ьее е! а1., и замещенные лизином белки, представленные в патенте США 4904584 (8йает е! а1.).
Термин по существу, соответствующий предназначен для включения в него аналогов с незначительными изменениями последовательности основных ΜΙΡΝΑΕ2 или ЕС ΜΙΡΝΑΕ2, которые не влияют на их основные характеристики, например, их специфические улучшенные связывание и активность в отношении ΙΡΝ-β. Тип изменений, которые обычно рассматривают как относящиеся к языку по существу, соответствующий, представляет собой изменения, которые являются результатом общепринятых способов мутагенеза ДНК, кодирующей комплекс по изобретению, приводящих к немногочисленным незначительным модификациям, и скрининга на предмет наличия желательной активности обсуждаемым выше способом.
Предпочтительно часть комплекса, представляющая собой ΜΙΡΝΑΕ2, обладает основной последовательностью, одинаковой с основной последовательностью природной последовательности или ее биологически активного фрагмента, или ее вариантом, обладающим аминокислотной последовательностью, идентичной с природной аминокислотной последовательностью по меньшей мере на 70%, и сохраняющим ее биологическую активность. Более предпочтительно такая последовательность идентична с природной последовательностью по меньшей мере на 85%, по меньшей мере на 90% или наиболее предпочтительно по меньшей мере на 95%.
Что касается части комплекса, представляющей собой ΙΡΝ, то основная последовательность, которую можно применять, представляет собой природную последовательность, или ее биологически активный фрагмент, или их вариант, обладающий аминокислотной последовательностью, идентичной с ними, по меньшей мере на 70%, более предпочтительно по меньшей мере на 85% или по меньшей мере на 90%, и наиболее предпочтительно по меньшей мере на 95%. Такие аналоги должны сохранять биологическую активность природной последовательности ΙΡΝ или его фрагмента или обладать антагонистической активностью, как обсуждалось здесь выше.
Термин идентичность последовательностей, применяемый здесь, означает, что последовательности сравнивали, как изложено ниже. Последовательности выравнивали с применением СепеОс СошриБпд Сгоир'к САР (программа общего выравнивания) версии 9, применяя матрицу (значения от -4 до +11) по умолчанию (ΒΕΘ§υΜ62) со штрафом в размере -12 за внесение промежутка (для первого пропуска промежутка) и штрафом в размере -4 за продолжение промежутка (для каждого дополнительного последова
- 8 009604 тельного пропуска в промежутке). После выравнивания рассчитывали процент идентичности, выражая количество совпадений как процент от количества аминокислот в заявленной последовательности.
Аналоги по настоящему изобретению также можно определить в соответствии со следующей процедурой. В отношении части комплекса, представляющей собой ΜΙΡΝΑΚ2, или части комплекса, представляющей собой ΙΡΝ, ДНК последовательностей ΙΡΝΑΚ. и ΙΡΝ известна из предшествующих исследований в данной области и ее или можно найти в цитируемой в предпосылках настоящего описания литературе, или можно легко найти при помощи специалиста в данной области. Полипептиды, кодируемые любой нуклеиновой кислотой, такой как ДНК или РНК, которые гибридизуются с ДНК, комплементарной природной, в очень жестких или умеренно жестких условиях, пока полипептид сохраняет биологическую активность природной последовательности или, в случае ΙΡΝ, или сохраняет биологическую активность ΜΙΡΝΑΚ2 или ЕС ΜΙΡΝΑΚ2, или обладает активностью в качестве антагониста, также рассматривают как находящиеся в объеме настоящего изобретения. Жесткие условия относятся к гибридизации и последующим условиям отмывки, которые специалисты в данной области условно обозначают как жесткие. См. Лн5иЬс1 с! а1., Сштсп! Рго1осок ίη Мо1еси1аг Βίοίομν. зирга, !п1сг5с1спсс. Ν.Υ., 6.3 и 6.4 (1987, 1992) и 8атЬгоок с! а1. (8атЬгоок, 1. С., РгйзсЬ, Е. Ρ., апй Машайз, Т. (1989) Мо1сси1аг С1ошпд: Α ЬаЬога1огу Мапиа1, Со1й 8рппд НагЬог ЬаЬога1огу Ргсзз, Со1й 8рппд НагЬог, ΝΥ).
Без ограничений, примеры жестких условий включают условия отмывки при температуре на 1220°С ниже рассчитанной Тт исследуемого гибрида, например, в течение 5 мин в 2х88С и 0,5% 8Ό8, 15 мин в 2х88С и 0,1% 8Ό8; 30-60 мин при 37°С в 0,1х88С и 0,5% 8Ό8, а затем 30-60 мин при 68°С в 0,1х88С и 0,5 8Ό8. Специалистам в данной области ясно, что жесткие условия также зависят от длины последовательностей ДНК, олигонуклеотидных зондов (например, 10-40 оснований) или смешанных олигонуклеотидных зондов. Если применяют смешанные зонды вместо 88С, предпочтительно применять хлорид тетраметиламмония (ТМАС). См. Ли5иЬс1 вьше.
Как применяют здесь, термин функциональные производные охватывает производные, которые можно получить из функциональных групп, находящихся в виде боковых цепей на остатках или на Νили С-концевых группах, посредством известных в данной области способов, и которые включены в данное изобретение до тех пор, пока они остаются фармацевтически приемлемыми, т. е. они не нарушают биологическую активность соответствующего белка комплекса, описанного здесь, и не придают токсических свойств содержащим их композициям или составленному с ними комплексу. Производные могут обладать химическими группами, такими как углеводные или фосфатные остатки, при условии, что такая фракция обладает такой же биологической активностью и остается фармацевтически приемлемой.
Например, производные могут включать алифатические сложные эфиры карбоксила карбоксильных групп, амиды карбоксильных групп посредством реакции с аммиаком или с первичными или вторичными аминами, Ν-ацильные производные или свободные аминогруппы аминокислотных остатков, образуемые ацильными группами (например, алканоильные или карбоциклические ароильные группы) или Оацильные производные свободных гидроксильных групп (например, О-ацильные производные сериновых или треониновых остатков), образуемые ацильными группами. Такие производные могут также включать, например, боковые цепи из полиэтиленгликоля, которые могут маскировать антигенные участки и удлинять время присутствия комплекса или его частей в жидкостях организма.
Термин гибридный белок относится к полипептиду, включающему ΜΙΡΝΑΚ.2 или ЕС ΜΙΡΝΑΚ.2 или их аналог или фрагмент, слитый с другим белком, который, например, обладает увеличенным временем присутствия в жидкостях организма. Таким образом, ΜΙΡΝΑΚ2 или ЕС ΜΙΡΝΑΚ2 можно сливать с другим белком, полипептидом или т.п., например, с иммуноглобулином или его фрагментом.
Фрагмент по настоящему изобретению может, например, представлять собой фрагмент ΜΙΡΝΑΚ2 или ЕС ΜΙΡΝΑΚ.2. Термин фрагмент относится к любой части молекулы, т.е. более короткому пептиду, сохраняющему желательную биологическую активность. Фрагменты можно легко получить посредством удаления аминокислот с любого из двух концов молекулы ΜΙΡΝΑΚ2 и тестирования полученного фрагмента на способность связываться с ΙΡΝ-β. Известны протеазы, которые можно применять для удаления одной аминокислоты за один раз или с Ν-конца, или с С-конца полипептида, и такое определение фрагментов, сохраняющих желательную биологическую активность, включает в себя только типовое экспериментирование.
В качестве активного фрагмента ΜΙΡΝΑΚ2, его аналогов и гибридных белков, настоящее изобретение дополнительно охватывает любой фрагмент или предшественники полипептидной цепи белковой молекулы, отдельно или вместе с ассоциированными молекулами или остатками, связанными с ними, например, остатками сахаров или фосфатными остатками, или агрегатами белковых молекул или самих остатков сахаров, при условии, что указанный фрагмент обладает в значительной степени сходной активностью.
Термин соли здесь относится и к солям карбоксильных групп, и к кислотно-аддитивным солям аминогрупп комплекса по изобретению или его аналогов. Соли карбоксильной группы можно образовывать известными в данной области способами, и они включают неорганические соли, например, соли натрия, кальция, аммония, железа или цинка и т. п. и соли с органическими основаниями, такие как соли,
- 9 009604 образованные, например, с аминами, такими как триэтаноламин, аргинин или лизин, пиперидин, прокаин и т.п. Кислотно-аддитивные соли включают, например, соли неорганических кислот, таких как, например, соляная кислота или серная кислота, и соли органических кислот, таких как, например, уксусная кислота или щавелевая кислота. Конечно, любые такие соли должны обладать в значительной степени сходной биологической активностью с комплексом по изобретению или его аналогами.
Как используют в данном описании термин биологическая активность понимают, как изложено ниже. В той мере, как это касается ΜΙΡΝΆΚ2, важной биологической активностью является его способность связываться с ΙΡΝ-β с увеличенной аффинностью. Таким образом, аналоги или варианты, соли и функциональные производные необходимо выбирать так, чтобы они сохраняли данную способность связывать интерферон. Это можно протестировать стандартными экспериментами анализа связывания. Кроме того, фрагменты ΜΙΡΝΆΚ2 или их аналоги также можно использовать до тех пор, пока они сохраняют повышенную активность в отношении связывания интерферона. Фрагменты можно легко получить посредством удаления аминокислот с любого из двух концов связывающего интерферон полипептида и тестирования продукта на наличие способности связывать интерферон.
Кроме того, полипептид с такой интерферон-связывающей активностью, будь это ΜΙΡΝΛΚ.2. ЕС ΜΙΡΝΆΚ2, аналог, функциональное производное, фрагмент, может также содержать дополнительные аминокислотные остатки, фланкирующие связывающий интерферон полипептид. Пока полученная в результате молекула сохраняет увеличенную интерферон-связывающую способность основного полипептида, можно определить, действуют ли любые такие фланкирующие остатки на основные и новые характеристики основного пептида, т. е. его характеристики в отношении связывания интерферона, посредством типового экспериментирования. Термин по существу, состоящий из, когда относится к указанной последовательности, означает, что могут присутствовать дополнительные фланкирующие остатки, не влияющие на основные и новые характеристики указанной последовательности. Данный термин не включает замены, делеции или добавления в указанной последовательности.
Хотя в данном описании в примерах применяли ΜΙΡΝΆΚ2 или ЕС ΜΙΡΝΆΚ2, должно быть понятно, что это представляет собой только предпочтительный пример, и что вместе с ΜΙΡΝΆΚ2 или ЕС ΜΙΡΝΆΚ2 можно применять субъединицу ΙΡΝΆΚ1, и, в частности, ее внеклеточный домен.
Относительно части комплекса по настоящему изобретению, представляющей собой интерферон, биологическая активность, которая должна быть сохранена в любом аналоге, функциональном производном, гибридном белке или фрагменте, представляет собой активность интерферона, зависящую от подразумеваемого применения. В большинстве случаев это должно представлять собой способность связываться с природным рецептором на клеточной поверхности и таким образом опосредовать образование сигнала рецептором. Таким образом, любой такой аналог, производное или фрагмент в отношении рецептора должны сохранять такую активность в качестве агониста, чтобы по настоящему изобретению являться пригодными для такого применения. С другой стороны, иногда полезно иметь молекулу с активностью в отношении рецептора в качестве антагониста для того, чтобы предотвратить биологическое действие природного интерферона. Такой антагонист также можно применять для продленного положительного действия с помощью комплекса по настоящему изобретению. Для таких применений, в которых желательно устранить нежелательные эффекты интерферона, аналоги, которые все еще связываются рецептором и частью комплекса, представляющей собой ΙΡΝΆΚ, но которые не опосредуют сигнал и блокируют образование сигнала природным интерфероном на данном рецепторе (т.е. антагонист интерферона), можно также рассматривать как биологически активное средство для цели данного изобретения и как охватываемые термином интерферон, когда применяют по отношению к комплексам по настоящему изобретению. Прямыми анализами можно определить, сохраняет ли такой аналог в отношении рецептора такую активность в качестве агониста или обладает в отношении рецептора активностью в качестве антагониста и, таким образом, может являться пригодным для одного из применений по настоящему изобретению.
Настоящее изобретение также относится к последовательностям ДНК, кодирующим ЕС ΜΙΡΝΆΚ2, например, ДНК, кодирующим аминокислотные последовательности 8ΕΟ ΙΌ ΝΟ:2, 3 и 4 или их аналоги и фрагменты, а также ДНК-векторам, несущим такие последовательности ДНК, для экспрессии в подходящих прокариотических или эукариотических клетках-хозяевах.
Способность образовывать большие количества гетерологичных белков с применением системы экспрессии рекомбинантных белков привела к разработке различных терапевтических средств, например, 1-ΡΆ и ЕРО (Εάίη^ίοη, 1995). Различные экспрессирующие хозяева, из которых можно получить рекомбинантные белки, выстраиваются в ряд от прокариот в начале (например, бактерии) (Οΐίηκ, 1993), через низших эукариот (например, дрожжи) (Ва1пег, 1989) до видов высших эукариот (например, клетки насекомых или млекопитающих) (Кеиуепу, 1993; РеГЕ 1993). Все данные системы основываются на одинаковом принципе, представляющем собой введение последовательности ДНК интересующего белка в выбранный тип клеток (временно или стабильно, как интегрированный или эписомный элемент) с применением систем транскрипции, трансляции и транспортировки хозяина для избыточной экспрессии введенной последовательности ДНК как гетерологичного белка (Кеота, 1990).
- 10 009604
Для получения рекомбинантных гетерологичных белков описано множество протоколов (Ли8иЬе1 е! а1.. Сиггеи! РгоФсок ίη Мо1еси1аг Вю1о§у. Сгееие РиЬНсабоик аиб АПеу 1п1ег5С1епсе. Иете Уогк, ΝΥ. 19871995; 8ашЬгоок е! а1.. Мо1еси1аг С1ошид: А ЬаЬога1огу Маииа1. Со1б 8ргшд НагЬог ЬаЬога1огу. Со1б 8ргшд НагЬог. ΝΥ. 1989).
В дополнение к экспрессии природных генных последовательностей. возможность манипулировать ДНК на уровне нуклеотидов ускорила разработку новых сконструированных последовательностей. которые хотя и основаны на природных белках. обладают новыми видами активности как результат изменения первичной структуры белка (Сга/1а. 1997).
Кроме того. выбранные последовательности ДНК можно физически соединить для получения транскриптов. которые преобразуются в новые гибридные белки. где изначально независимые белки теперь экспрессируются как одна полипептидная единица (Фаиех. 1991). Действие таких гибридных белков может являться различным. например. более эффективным. чем любой из двух отдельных белков (Сигбк. 1991).
Для совместного введения ЕС ΜΙΕΝΑΒ2 с ΙΕΝ. ΙΕΝβ человека можно получить посредством способа получения. в котором применяют клетку млекопитающего. представляющую собой клетку яичника китайского хомячка (СНО). как описано в ЕР220574. Интерфероны типа I можно экспрессировать во множестве клеток-хозяев. включающих клетки бактерий (ΌΐΜΐιηί. 1987). насекомых (8тб11. 1983) и человека (Сйпйойшк. 1981). Человеческий ΜΙΕΝΑΡ2 или его фрагмент также можно экспрессировать с применением клетки-хозяина СНО. Для выделения ЕС ΜΙΕΝΑΚ2 из клеток СНО последовательность ДНК ЕС ΜΙΕΝΑΚ2 можно лигировать с последовательностью сигнального пептида гормона роста человека. как описано в патентной заявке АО 0022146. Альтернативно. в бактериальных экспрессирующих системах можно успешно экспрессировать растворимые рецепторы. такие как ЕС ΜΙΕΝΑΚ2 (ТегКххехе. 1996).
Изобретение также относится к фармацевтической композиции. содержащей в качестве активного ингредиента ΜΙΕΝΑΚ2. ЕС ΜΙΕΝΑΚ2. комплекс ЕС ΜΙΕΝΑΒ2/ΙΕΝ или их аналоги. гибридные белки. функциональные производные. фрагменты. или их смеси. или их соли и фармацевтически приемлемый носитель. разбавитель или наполнитель. Осуществление фармацевтической композиции по данному изобретению включает фармацевтическую композицию для усиленного действия типа ΙΕΝ при лечении вирусных заболеваний. в противоопухолевой терапии. в иммуномодулирующей терапии. например. при аутоиммунных заболеваниях и при других применениях интерферонов и связанных с ними цитокинов.
Фармацевтические композиции по изобретению для введения получают посредством смешивания ΜΙΕΝΑΚ2. ЕС ΜΙΕΝΑΚ2. комплекса ЕС ΜΙΕΝΑΒ2/ΙΕΝ или их аналогов. гибридных белков. функциональных производных. фрагментов. или их смесей или их солей с физиологически приемлемыми стабилизаторами и/или наполнителями и получают в дозированной форме. например. путем лиофильной сушки в ампулах для дозирования. Способ введения может представлять собой любой из общепринятых способов введения для подобных средств и зависит от состояния подлежащего лечению. например. внутривенный. внутримышечный и подкожный. посредством местной инъекции или топического применения. или непрерывно. посредством инфузии. и т.п. Количество активного соединения для введения зависит от способа введения. подлежащего лечению заболевания и состояния пациента.
Изобретение относится к способу лечения аутоиммунных заболеваний. таких как рассеянный склероз. ревматоидный артрит. злокачественная миастения. диабет. волчанка и язвенный колит. включающему введение терапевтически эффективного количества ΜΙΕΝΑΒ2. ЕС ΜΙΕΝΑΚ2. комплекса ЕС ΜΙΕΝΑΚ2/ΙΕΝ или их аналогов. гибридных белков. функциональных производных. их фрагментов. или их смесей. или их солей.
Изобретение относится к способу лечения вирусного заболевания. такого как гранулематозное заболевание. остроконечная кондилома. ювенильный ларингеальный папилломатоз. гепатит А или хроническая инфекция вирусами гепатита В и С. включающему введение терапевтически эффективного количества ΜΙΕΝΑΒ2. ЕС ΜΙΕΝΑΒ2. комплекса ЕС ΜΙΕΝΑΒ2/ΙΕΝ или их аналогов. гибридных белков. функциональных производных. их фрагментов. или их смесей. или их солей.
Изобретение относится к способу лечения различных типов злокачественной опухоли. например. таких как лейкоз ворсинчатых клеток. саркома Капоши. множественная миелома. хронический миелоидный лейкоз. неходжкинская лимфома или меланома. включающему введение терапевтически эффективного количества ΜΙΕΝΑΒ2. ЕС ΜΙΕΝΑΒ2. комплекса ЕС ΜΙΕΝΑΡ2/ΙΕΝ или их аналогов. гибридных белков. функциональных производных. их фрагментов. или их смесей. или их солей.
В указанных выше способах ΜΙΕΝΑΡ2. ЕС ΜΙΕΝΑΒ2. комплекс ЕС ΜΙΕΝΑΒ2/ΙΕΝ или их аналоги. гибридные белки. функциональные производные. их фрагменты. или их смеси. или их соли можно вводить совместно с ΙΕΝ. предпочтительно ΙΕΝ-β.
Терапевтически эффективное количество представляет собой такое количество. которое при введении ΜΙΕΝΑΒ2. ЕС ΜΙΕΝΑΒ2. комплекса ЕС ΜΙΕΝΑΒ2/ΙΕΝ или их аналогов. гибридных белков. функциональных производных. их фрагментов. или их смесей. или их солей приводит к модуляции биологической активности ΙΕΝ-β. Вводимые индивидууму дозы. в качестве единичной или многократных доз. могут варьировать в зависимости от множества факторов. включающих способ введения. состояния и
- 11 009604 характеристики (пол, возраст, вес тела, состояние здоровья, размер) пациентов, степень симптомов, сопутствующих способов лечения, частоты лечения и желательного эффекта. Корректировка установленных диапазонов доз и манипулирование ими находятся полностью в компетенции специалистов в данной области, также как и способы определения активности ΜΙΕΝΑΚ2, ЕС ΜΙΕΝΑΚ2, комплекса ЕС ΜΙΕΝΑΚ2/ΙΕΝ или их аналогов, гибридных белков, функциональных производных, их фрагментов, или их смесей, или их солей ίη νίΐτο и ίη νίνο.
Например, местная инъекция требует меньшего количества белка на вес тела, чем внутривенная инфузия.
Свободный ΙΕΝ-β обладает тенденцией к олигомеризации. Чтобы подавить данную тенденцию, современные препараты ΙΕΝ-β обладают кислым рН, который при введении может вызывать некоторое локальное раздражение. Поскольку ΜΙΕΝΑΚ2, ЕС ΜΙΕΝΑΚ2 или их аналоги, гибридные белки, функциональные производные, их фрагменты, или их смеси, или их соли могут служить в качестве превосходных стабилизаторов по сравнению с вариантом фактора дикого типа для ΙΕΝ-β и, таким образом, предотвращать олигомеризацию, их применение в препаратах ΙΕΝ-β может служить для стабилизации ΙΕΝ-β и, таким образом, устранить необходимость кислых препаратов. Таким образом, некислая фармацевтическая композиция, содержащая ΜΙΕΝΆΚ2, ЕС ΜΙΕΝΆΚ2 или их аналоги, гибридные белки, функциональные производные, их фрагменты, или их смеси, или их соли, совместно с другими традиционными фармацевтически приемлемыми наполнителями также представляет собой часть настоящего изобретения.
Настоящее изобретение также относится к применениям ΜΙΕΝΆΚ2, ЕС ΜΙΕΝΆΚ2, комплекса ЕС ΜΙΕΝΑΚ2/ΙΕΝ или их аналогов, гибридных белков, функциональных производных, их фрагментов, или их смесей, или их солей в противовирусной, противоопухолевой и иммуномодулирующей терапии. Конкретно, мутантный рецептор интерферона и комплексы мутантного рецептора интерферона и интерферона по данному изобретению пригодны для противовирусной терапии при таких терапевтических показаниях, как хроническое гранулематозное заболевание, остроконечная кондилома, ювенильный ларингеальный папилломатоз, гепатит А или хроническая инфекция вирусами гепатита В и С.
В частности, мутантный рецептор интерферона и комплексы мутантного рецептора интерферона и интерферона по данному изобретению пригодны для противоопухолевой терапии при таких терапевтических показаниях, как лейкоз ворсинчатых клеток, саркома Капоши, множественная миелома, хронический миелоидный лейкоз, неходжкинская лимфома или меланома.
Мутантный рецептор интерферона и комплексы мутантного рецептора интерферона и интерферона по данному изобретению также пригодны для иммуномодулирующей терапии при аутоиммунных заболеваниях, например, рассеянном склерозе, ревматоидном артрите, злокачественной миастении, диабете, волчанке, язвенном колите и т. д.
Аутоиммунное расстройство представляет собой заболевание, в котором иммунная система индивидуума начинает поражать его или ее собственный организм. Иммунная система образует антитела против своих собственных тканей. К аутоиммунному расстройству чувствительна фактически каждая часть организма.
Мутантный рецептор интерферона и комплексы мутантного рецептора интерферона и интерферона по данному изобретению также пригодны для лечения нейродегенеративных заболеваний, предпочтительно рассеянного склероза.
Данное изобретение, кроме того, относится к фармацевтической композиции, содержащей ΜΙΕΝΑΚ2, ЕС ΜΙΕΝΑΚ2, комплекс ЕС ΜΙΕΝΑΚ2/ΙΕΝ или их аналоги, гибридные белки, функциональные производные, фрагменты, или их смеси, или их соли, к фармацевтической композиции, содержащей экспрессирующий вектор, в частности лентивирусный вектор для генной терапии, экспрессирующий ΜΙΕΝΑΚ2, ЕС ΜΙΕΝΑΚ2, комплекс ЕС ΜΙΕΝΑΚ2/ΙΕΝ или их аналоги, гибридные белки, функциональные производные, фрагменты.
Как используют в данном описании термин лечение необходимо понимать как профилактику, подавление, ослабление, улучшение или обращение любых или всех симптомов или причин(ы) заболевания.
Теперь, после описания данного изобретения, его можно будет легче понять посредством обращения к следующим примерам, которые предоставлены в целях иллюстрации и не предназначены для ограничения настоящего изобретения.
Примеры
Пример 1. Экспрессия и очистка белка.
ЕС ΙΕΝΑΚ2 (внеклеточный домен) и ΙΕΝ-α экспрессировали в Е. сой и очищали ионообменной и гель-проникающей хроматографией как описано (Р1ей1ег & 8сйге1Ьег, 1999Α). Уровни экспрессии мутантных ЕС ΙΕΝΑΚ.2 являлись такими же высокими, как и у дикого типа. Гликозилированный ΙΕΝ-β дикого типа получали в СНО (описано в ЕР220574). Концентрации белка определяли на основании поглощения при 280 нм (ИеЫег & 8сйге1Ьег, 1999Α) с 1:280=18070 М-1 для ΙΕΝ-α2, 1:280=30050 М-1 для ΙΕΝ-β и 1:280=26500 М-1 для ЕС ΙΕΝΑΚ.2 (скорректированным до 1:280=21100 М-1 для мутантных по триптофа
- 12 009604 ну ЕС ΙΕΝΑΒ2 \У102Л и \У74Р). Чистоту белка анализировали посредством 8Ό8-ΡΆ6Ε в невосстанавливающих условиях.
Пример 2. Получение мутантных ЕС ΙΕΝΆΚ.
Проводили сайт-специфический мутагенез посредством ПЦР с матрицей рТ72СК2 (Р1еЫег апб 8с11гс|Ьсг. 1999) и праймерами длиной 18-21 нуклеотид, содержащими мутантный кодон, с применением высокоточных полимераз р\го (Воейппдег Маппйе1т) и РГи (8!га!адепе), как подробно описано (Л1Ьеск & 8с11гс|Ьсг. 1999). После фосфорилирования и лигирования, мутантные плазмиды применяли для трансформации клеток ТС1 Е. сой. Последовательность целого экспрессированного гена, содержащего мутацию, контролировали секвенированием ДНК (Ли8иЬе1 е! а1., Сштеп! Рго!осо1§ ш Мо1еси1аг Вю1оду, Сгеепе РиЬИсабопк апб ^беу 1п1ег8с1епсе, Νον Уогк, ΝΥ, 1987-1995; 8атЬгоок е! а1., Мо1еси1аг С1ошпд: А ЬаЬога!огу Мапиа1, Со1б 8рппд НагЬог ЬаЬога!огу, Со1б 8рппд НагЬог, ΝΥ, 1989).
Получали мутантов, у которых два аминокислотных остатка, гистидин в положении 78 (Н78) и аспарагин в положении 100 (N100) являлись замененными: А - оба на остаток аланина (мутант Η78Α/Ν100Α), В - на остатки аланина и аспарагиновой кислоты, соответственно (Η78Α/Ν100Ό) и С - на остатки аланина и гистидина, соответственно (Η78Α/Ν100Η).
Пример 3. Термодинамический и кинетический анализ.
Все термодинамические и кинетические данные получали посредством детекции в гетерогенной фазе без метки. Взаимодействия между ΙΕΝ-β2 и ЕС ΙΕΝΑΚ2 контролировали посредством отражательной интерференционной спектроскопии (ΚΙΓ8) в проточных условиях, как описано (Р1еЫег & 8сйге1Ьег, 1999Α). Данный способ сходен с В1асоге и применим для точного измерения аффинности связывания двух белков. ЕС ΙΕΝΑΚ2 (дикого типа или мутантный) иммобилизовали специфическими иммобилизующими антителами (как описано у Р1еЫег и 8сйге1Ьег, 2001). Все измерения с ΙΕΝ-β, ΙΕΝ-α2 и ЕС ΙΕΝΑΚ.2 проводили в 50 мМ Нерек с 500 мМ №1С1 и 0,01% Тгйоп Х100 при рН 7,4. Взаимодействия измеряли с 500 мМ №1С1 для исключения неспецифических взаимодействий с поверхностью, которые для ΙΕΝ-β наблюдали при 150 мМ №С1.
Кинетику ассоциации и диссоциации измеряли посредством стандартных протоколов инъекций и корректировали посредством серий с контролем. Константы скорости диссоциации измеряли при концентрации ΙΕΝ в диапазоне от 1 до 1000 нМ для насыщения поверхности. Для соответствия кинетической модели 1:1 использовали весь диапазон диссоциации (Р1еЫег & 8сйге1Ьег, 2001).
Пример 4. Анализ противовирусной активности.
Противовирусную активность ΙΕΝ-β оценивали как подавление цитопатического действия вируса везикулярного стоматита (У8У) на человеческие клетки (ВиЬтйет е! а1., 1981).
Пример 5. Измерение связывания ΙΕΝ с мутантным ΙΕΝΑΒ2.
Измеряли связывание ΙΕΝ-β и ΙΕΝ-α2 с мутантом №8Α/Ν100Α (пример 2) и сравнивали посредством Κ.ΙΓ8 с ЕС рецептора дикого типа (пример 3). Хотя нашли, что скорость ассоциации ΙΕΝ-β с мутантом Β78Α/Ν100Α являлась сходной со скоростью ассоциации дикого типа (фиг. 3), обнаружили, что скорость диссоциации являлась значительно меньшей. Рассчитанная аффинность ΙΕΝ-β к мутанту Η78Α/N100Α является приблизительно 30 пМ против аффинности к белку \УТ величиной приблизительно 3 нМ. В отличие от ΙΕΝ-β, обнаружили, что и скорость ассоциации, и скорость диссоциации ΙΕΝ-α2 с мутантом Η78Α/N100Α являлись сходными со скоростями, полученными для белка дикого типа (фиг. 3). Данные результаты демонстрируют, как обнаружено, что аффинность мутантного ΙΕΝΑΚ2 к ΙΕΝ-β является приблизительно в 100 раз выше, чем аффинность ΙΕΝΑΚ2 дикого типа и не изменена для ΙΕΝ-α2.
Пример 6. Относительные аффинности интерферона к мутантному ΙΕΝΑΚ2.
Связывание и аффинности ЕС рецептора ΙΕΝΑΚ. и ЕС мутантного рецептора (пример 2) с ΙΕΝ-β и ΙΕΝ-α2 измеряли с применением ΚΙΓ8 и ΙΕΝΑΚ2 дикого типа или мутантного ΙΕΝΑΚ2, иммобилизованных на поверхности посредством специфических антител (пример 3). После измерения аффинностей получали относительные аффинности посредством сравнения Кб мутантного рецептора с Кб рецептора дикого типа (табл. 4).
Кб связывания интерферона с внеклеточным доменом (ЕС) ΙΕΝΑΚ2 измеряли посредством ΚΙΓ8 и нашли ее приблизительно равной 3 нМ (пример 5). Кб связывания ΙΕΝ-β с ЕС мутанта №8Α/Ν100Α составляла приблизительно 30 пМ. Точное измерение Кб для данного мутанта являлось невозможным, так как связывание происходило слишком быстро, чтобы получить хорошие данные посредством ΚΙΓ8. Обнаружили, что Кб связывания для ΙΕΝ-α2 и ЕС мутанта Β78Α/Ν100Α являлась сходной с рецептором дикого типа. Результаты в табл. 4 демонстрируют относительные аффинности мутантных ЕС ΙΕΝΑΚ в сравнении с ЕС рецептора ΙΕΝΑΚ2 дикого типа. Мутанты являлись следующими: мутантные по одному аминокислотному остатку, Н78А или Ν100Α, и мутантные по двум аминокислотам Η78Α/N100Α, Β78Α/Ν1000 и Η78Α/N100Η, где аминокислоту Ν100 заменяли на аланин, аспарагиновую кислоту и гистидин, соответственно (пример 2). Результаты демонстрируют, что одиночные мутации в ΙΕΝΑΚ2 увеличивают аффинность комплекса от 4,6 до 7,3 раз, тогда как двойная мутация вызывает синергический эффект, увеличивая аффинность комплекса в размере от 26 до приблизительно 50 раз. Обнаружено, что лучшим мутантом в терминах с точки зрения аффинности является двойной мутант, с Ν100, замененной
- 13 009604 на аланин, демонстрирующий более чем в 50 раз увеличенную аффинность по сравнению с вариантом дикого типа.
Таблица 4
| Ипаг2 | 1ЕЫа2 | ИПЬ |
| 1,0 | 1,0 | |
| Н78А | 0,4 | 4,6 |
| N10 0А | 2,0 | 7,3 |
| Η78Α/Ν100Α | 0,7 | >50 |
| Η78Α/Ν100ϋ | 1,0 | 40, 0 |
| Η78Α/Ν100Η | 0, 9 | 26, 0 |
Пример 7. Поглощение интерферона-β мутантом ΙΡΝΑΚ2.
Сравнивали способность ЕС ΙΡΝΑΚ2 дикого типа и мутантных ЕС служить в качестве носителей ΙΡΝ-β. Для данной цели контролировали противовирусную активность оставшегося (свободного) ΙΡΝ-β в образцах, содержащих постоянную концентрацию ΙΡΝ-β (10 пМ) смешанного с различными концентрациями рекомбинантных растворимых ЕС ΙΡΝΑΚ2 или мутантных ЕС ΙΡΝΑΚ2 (пример 6). При противовирусном анализе смесь (комплекс ΙΡΝΑΚ2/ΙΡΝ) добавляли к клеткам №Ι8Η (человеческие амниотические клетки). Данные клетки №Ι8Η затем подвергали обработке вирусом везикулярного стоматита (У8У) и контролировали противовирусную активность остаточного (свободного) ΙΡΝ-β как степень выживания клеток после 24 ч инкубации (пример 4). Свободный ΙΡΝ-β, присутствующий в образцах с различной концентрацией №Т или мутантного ЕС ΙΡΝΑΚ2 (К2), определяли на основании кривой дозавыживание, соответствующей противовирусной активности, как функции от концентрации ΙΡΝ-β, полученной в отсутствие ΙΡΝΑΚ2 (верхняя диаграмма фиг. 2).
Тестируемые мутанты представляли собой следующее: ЕС ΙΡΝΑΚ2, измененный по одному аминокислотному остатку, Н78А или Ν100Α, и измененный по двум аминокислотам Η78Α/Ν100Α, Η78Α/Ν100Ό и Η78Α/Ν100Η, где аминокислоту Ν100 заменяли на аланин, аспарагиновую кислоту и гистидин, соответственно (пример 2). Двойной мутант ΙΡΝΑΚ2 Η78Α/Ν100Α (пример 2) продемонстрировал наивысшую аффинность из всех полученных мутантов (Кб составляла приблизительно 30 пМ и ниже, см. примеры 5 и 6).
На фиг. 4 представлено то, что в присутствии 2,5 нМ ЕС ΙΡΝΑΚ2 дикого типа приблизительно 20% ΙΡΝ-β связано с растворимым рецептором (поглощено), тогда как в присутствии только 0,2 нМ двойного мутанта ЕС Η78Α/Ν100Α связанным является 50% ΙΡΝ-β, а с применением только 0,4 нМ мутанта ЕС Η78Α/Ν100Α связанным является 80% ΙΡΝ-β. Биологический анализ также продемонстрировал, что таких же степеней поглощенного ΙΡΝ-β (связанный ΙΡΝ-β в условиях равновесия) и остаточной противовирусной активности (свободный ΙΡΝ-β), которые получают с ΙΡΝΑΚ2 дикого типа, можно достичь с применением приблизительно в 30 раз меньшей концентрации мутантного Η78Α/Ν100Α ЕС ΙΡΝΑΚ2. Данные результаты также демонстрируют, что дважды измененный мутант дает лучшие результаты, особенно один, в котором обе аминокислоты заменены на аланин, Η78Α/Ν100Α ΙΡΝΑΚ2.
Данные результаты демонстрируют, что дважды мутантный ΙΡΝΑΚ2 поглощает ΙΡΝ-β более эффективно и, следовательно, необходимо введение значительно меньших количеств для достижения его активности в качестве носителя.
Ссылки
Л1аш е! а1. Рйагтасеи!1са1 Кекеагсй 14:546-549 (1997).
Αηίϊη^η, 8с1епсе 181:223-230 (1973).
ΑνίΜ^Ι е! а1., Сиггеп! Рго!осо1к ίη Мо1еси1аг Βίοίοςν, Сгеепе РиЬНса!юпк апб №беу Шегкаепсе (Уд Уогк, 1987-1992).
Вагоп е! а1., Лη!^ν^^а1 Кек. 24:97-110 (1994).
Вагоп е! а1., 1. Лт. Меб. Ακ^. 266:1375-1383 (1991)
Сйпк!ойшк, С.1. 1оита1 оГ Сепега1 У1го1оду. 52:169-171 (1981)
Со1атошс1 е! а1., 1. Iттиηο1_148:2126-2132 (1992).
Со1атошс1 е! а1., 1. ВюкСкет. 268:10895-10899 (1993).
СигБк, В.М., Ргос. ЫаЙ. Лсаб. 8ск 88:5809-5813 (1991).
Эотапкк! е! а1., Т11е 1оита1 о£ Вю1оСюа1 СкетЩгу. 270:6 (1995).
Эппсам е! а1., 1. Ехр. Меб. 184:2043-2048 (1996).
Эгоп е! а1., БИегГегоп а/Г3 депе 81гис1иге апб гедикЮоп т БиегГегоп: рппсЮкк апб Мебюа1 Α^^1^са!юпк, Вагоп е! а1., Ебкогк, (ИпгуегШу оГ Техак Мебюа1 Вгапск: Сакек!оп, ТХ, 1992) рр. 33-45.
Ебтд!оп, 8.М., Вю!еск Ргобис!к ак Эгид Ьеабк В1оТесЬпо1оцу 13:649 (1995).
Ρ^е^1Ьеск е! а1. 1опгпа1 оГ БиегГегоп апб Су!окте Кекеагск 16:777 (1996).
СгапШат, 8аепсе 185:Х62-Х64 (1974).
Сга/1а Сик1, Мо, Iттиηο!есйηο1ο^у 3:61-69 (1997).
- 14 009604
1Ьапе/, С.Е.. ЕМВО 1оита1 10:2105-2110 (1991).
1асоЬ§ ^.. е! а1. Агск №иго1 1987 1ип; 44 (6):589-95.
Кео\уп. \ν.Λ.. Ме1йоб§ ш Εηζνιηοίον 185:527-537 (1990).
Ьепду1. Р. Апп. Веу. Вюскет._51:251-282 (1982).
Ьи1Га11а е! а1.. ЕМВО 1оита1_14:5100-5108 (1995).
Хомск е! а1.. ЕЕВ8 Ш!._314:445-448 (1992).
Хомск е! а1. Се11 77:391-400 (1994).
Хомск е! а1.. 1. кейк. Вю. 57:712-718 (1995).
Р1еЫег апб 8скге1Ьег 1.о1. Вю1. 1999А 289. 57-67.
Р1еЫег апб 8скге1Ьег 1. о1. Вю1. 1999В 294. 223-237.
Р1еЫег апб 8скге1Ьег Апа1убса1 ВюскетШгу 289. 173-186.
Р1а!ата8 е! а1.. 1993 1. 1ттипо1оду 150: 3382-3388.
Р1а!ата8 е! а1.. 1996 1. Вю1. Скет. 271: 23630-3.
8а1топ е! а1.. 1996 1оита1 о£ 1п!ег£егоп апб Су!окте Везеагск 16:759.
8каг£ е! а1.. 1995 1. Вю1. Скет. 270: 13063-9.
Тап е! а1.. 1973. 1. Ехр. Меб. 137: 317-330.
Ше е! а1.. 1990 Се11 60: 225-34.
Уапд е! а1.. 1996 1. Вю1. Скет. 271: 8057-61.
Уап е! а1.. 1996 Мо1. Се11 Вю. 16: 2074-82.
- 15 009604
| Список последовательностей | |||
| <110> | ¥ЕОА ЙЕ5АЕКСН ΑΝΟ ΟΕνΕίΟΡΜΕΝΤ СО. | ΙΤϋ | |
| 5СНКЕ1ВЕК, сюеоы | |||
| <120> | ΙΡΝΑΚ2 ΜΙΙΤΑΝΤ5, | тнЕХк ρκοουσποΝ | ΑΝϋ изе |
| <130> | 527 | ||
| <150> | 147414 | ||
| <151> | 2001-12-31 | ||
| <160> | 4 | ||
| <170> | рлепттл уегБТОл | 3.1 | |
| <210> | 1 | ||
| <211> | 215 | ||
| <212> | РКТ | ||
| <213> | нолю 5артеп5 |
<400> 1
| мех А1а 1 | зег | туг | А5Р 5 | 5ег | РГО | А$р | Туг тЬг Азр С1и 10 | Зег | СУ5 | ТЬг 15 | рйе | ||||
| ЬУ5 | 11е | зег | ьеи | Агд | АЗЛ | рЬе | Агд | Зег | Не | 1_еи | Зег | тгр | 01 и | сеи | ьуз |
| 20 | 25 | 30 | |||||||||||||
| А5Л | Н15 | Зег | 11е | Уа1 | РГО | тНг | ΗΊ5 | туг | ТЬг | Ьеи | сей | Туг | ТКг | 11е | мет |
| 35 | 40 | 45 | |||||||||||||
| Зег | (-У5 | РГО | 61и | А5р | ьеи | ьуз | иа! | Уа1 | 1-У5 | А5П | Су5 | А1а | А5Л | тЬг | ТЬг |
| 50 | 55 | 60 | |||||||||||||
| Агд 65 | Зег | рье | Суз | А5р | ьеи 70 | ТЬг | А5Р | 61 и | тгр | Агд 75 | Зег | ТНг | НТ 5 | 61 и | А1а 80 |
| туг | Уа1 | тЬг | уа! | ьеи | б1и | 61У | рНе | Зег | 61 у | А5П | тНг | тЬг | |_еи | рЬе | зег |
| 85 | 90 | 95 |
- 16 009604
| Су 5 | Зег Н15 А5П 100 | РЬе тгр | 1_еи | А1а | 11е А5р мег Зег РЬе 61и | Рго | Рго | ||||||||
| 105 | 110 | ||||||||||||||
| 61 и | РЬе | 01 и | 11е | Уа1 | б!у | РЬе | тЬг | АЗП | Н15 | Не | АЗП | уа! | мет | Уа1 | суз |
| 115 | 120 | 125 | |||||||||||||
| РЬе | Рго | зег | Не | уа1 | 61 и | С1и | б!и | 1.еи | 61л | РЬе | А5р | (.ей | Зег | ьеи | Уа1 |
| 130 | 135 | 140 | |||||||||||||
| 11 е | 61 и | С1и | 61 η | Зег | 61 и | 61 у | 11 е | Уа1 | (.уз | СУЗ | Н15 | суз | Рго | 61ч | Не |
| 145 | 150 | 155 | 160 | ||||||||||||
| Суз | 61 у | А5П | мег | Зег | С1у | АЗП | РЬе | тЬг | Туг | Не | Не | А5р | Суз | сей | Не |
| 165 | 170 | 175 | |||||||||||||
| РГО | АЗП | ТЬг | А5П | Туг | СУ5 | уа1 | зег | уа! | ТУГ | (.ей | б1и | Н1 5 | Зег | А5р | 61 и |
| 180 | 185 | 190 | |||||||||||||
| 61 η | А1а | Уа1 195 | 11е | 1-У5 | Зег | Рго | 1еи 200 | суз | Суз | тЬг | ьеи | 1_еи 205 | Рго | РГО | 61 у |
| 61 п | 61 и | Зег | 61 и | РЬе | зег | 61 х |
210 215 <210:- 2 <211> 215 <212> Ркт
| <213> | нолю | зартепз | |||||||||||||
| <400> | 2 | ||||||||||||||
| мег 1 | д!а | Зег | Туг | А5₽ 5 | 5ег | Рго | АЗр | туг | ТЬг 10 | Азр | 61 и | Зег | Суз | тЬг 15 | РЬе |
| Суз | Не | Зег | 1_еи 20 | Агд | АЗП | РЬе | дгд | зег 25 | Не | (.ей | Зег | тгр | б1и 30 | ьеи | иуз |
| А5П | Ηίί | 5ег 35 | Не | Уа1 | РГО | тЬг | ΗΪ5 40 | Туг | ТЬг | сей | ьеи | Туг 45 | тЬг | Не | мет |
| 5ег | суз 50 | РГО | 61и | А5р | |_еи | суз 55 | уа! | Уа1 | суз | АЗП | Суз 60 | А1а | А5П | тЬг | ТЬг |
| Агд 65 | Зег | РЬе | суз | А5р | ьеи 70 | ТЬг | А$р | 61 и | тгр | Агд 75 | зег | тЬг | А1а | 61« | А1а 80 |
| Туг | уа! | ТЬг | Уа! | сей | 61 и | 61 у | РЬе | Зег | 61 у | АЗП | ТЬг | ТЬг | ьеи | РЬе | 5ег |
90 95
- 17 009604
| Суз Зег | ΗΪ5 | А1а 100 | РЬе | Тгр сеи А1а Не Дар мег 105 | бег | рЬе | 61 и 110 | Рго | РГО | ||||||
| 61 и | рЬе | 61 и | 11е | Уа! | 61 у | РЬе | ТЬг | АЗП | ΗΪ5 | 11 е | А5П | νβΐ | мет | Уа1 | суз |
| 115 | 120 | 125 | |||||||||||||
| РЬе | РГО | зег | 11е | Уа1 | 61 и | 61и | б!и | 1_еи | 61 η | РЬе | АЗР | сеи | Зег | сеи | Уа1 |
| 130 | 135 | 140 | |||||||||||||
| Не | 61и | С1и | 61 η | Зег | 61 и | 61у | Не | Уа1 | Суз | СуЗ | ΗΪ 3 | 1уз | РГО | С1и | 11е |
| 145 | 150 | 155 | 160 |
| Суз С1у АЗП | Мег | 5ег 165 | 61у | Азп РЬе ТЬг Туг 170 | Не 11е | АЗр Су5 | Сеи 175 | 11е | |||||||
| рго | А5П | ТЬг | АЗП | Туг | Суз | Уа1 | Зег | Уа1 | Туг | с ей | 61 и | Н1 5 | Зег | А$р | 61 и |
180 185 190
61π д!а уа! Не суэ 5ег рго сей суз суз тЬг сеи Сеи Рго Рго С1у 195 200 205 б!п 61и зег 61 и РЬе Зег 61 х
210 215
| <210> 3 <211> 215 | |
| <212> <213> | РКТ ноте |
| <400> | 3 |
| мет | А1а | Зег | туг | АЗр | 5ег | Рго | АЗр | Туг | тЬг | АЗр | 61 и | Зег | суз | ТЬг | РЬе |
| 1 | 5 | 10 | 15 | ||||||||||||
| Суз | Не | Зег | йен 20 | Агд | АЗП | РЬе | лгд | Зег 25 | Не | сеи | зег | тгр | 61 и 30 | сеи | суз |
| А5П | НТВ | Зег | Не | уа! | Рго | ты | НТ5 | Туг | ТЬг | 1еи | сеи | Туг | ТЬг | Не | мет |
| 35 | 40 | 45 | |||||||||||||
| Зег | суз | РГО | 61 и | АЗр | Сеи | Ιζϊ® | Уа! | Уа1 | Суз | АЗП | Суз | А1а | АЗП | тЬг | тЬг |
55 60
| Агд | Зег | РЬе | суз | АЗр | сеи | ТЫ | Азр | 61 и | Тгр | Агд | Зег | тЬг | А1а | 61и | А1а |
| 65 | 70 | 75 | 80 | ||||||||||||
| туг | уа1 | тЬг | Уа! | се и | 61 и | 61У | РЬе | Зег | б1у | А5П | тЬг | тЬг | Сеи | РЬе | зег |
90 95
- 18 009604
| суз Зег | Н15 | Азр | РЬе | Тгр | Хеи | А1а | Не | Азр | мех | зег | РЬе | 61 и | Рго | Рго |
| 100 | 105 | 110 | ||||||||||||
| 61 и РЬе | 61 и | 11е | Уа1 | б1у | РЬе | ТЬг | АЗЛ | Н1 5 | Не | АЗП | Уа1 | мех | Уа1 | Суз |
| 115 | 120 | 125 | ||||||||||||
| РЬе Рго | Зег | Не | Уа1 | 61 и | 61 и | С1и | Хеи | 61 η | РЬе | АЗр | Ьеи | Зег | хеи | Уа1 |
| 130 | 135 | 140 | ||||||||||||
| 11е С1и | б!и | 61 л | Зег | С1и | б!у | 11 е | Уа1 | Суз | хуз | Н1 5 | ьуз | Рго | б!и | Не |
| 145 | 150 | 155 | 160 | |||||||||||
| суз 61у | А5П | мех | Зег 165 | б)у | А5П | РЬе | ТЬг | »5 | Не | 11е | А$р | Хуз | хеи 175 | Не |
| РГО А5П | ТЬг | АЗЛ | Туг | Суз | Уа1 | 5ег | уа1 | Туг | сеи | 61 и | ΗΊ3 | Зег | АЗр | 61 и |
| 180 | 185 | 190 | ||||||||||||
| 61л А1а | Уа1 | Не | (.уз | Зег | Рго | Хеи | хуз | Суз | тЬг | хеи | хеи | Рго | Рго | 61 у |
| 195 | 200 | 205 | ||||||||||||
| 61 η 61 и | 5ег | 61 и | РЬе | Зег | 61 х | |||||||||
| 210 | 215 | |||||||||||||
| <210> | 4 | |||||||||||||
| <211> | 215 | |||||||||||||
| <212> | РЙТ | |||||||||||||
| <213* 1 | НОЛЮ | зартепз | ||||||||||||
| <400> | 4 | |||||||||||||
| Мех А1а 1 | Зег | Туг | АЗр 5 | Зег | РГО | АЗр | Туг | ТЬг 10 | Азр | 61 и | Зег | Суз | ТЬг 15 | РЬе |
| суз Не | 5ег | (.ей | Агд | АЗЛ | РЬе | Агд | Зег | 11е | хеи | Зег | тгр | 61 и | хеи | суз |
| 20 | 25 | 30 | ||||||||||||
| АЗП ΗΪ5 | 5ег | Не | Уа1 | Рго | ТЬг | Ηί 5 | Туг | ТЬг | Хеи | хеи | Туг | тЬг | Не | мех |
| 35 | 40 | 45 | ||||||||||||
| Зег (.уз 50 | РГО | 61 и | Азр | Хеи | К5 | Уа1 | Уа1 | 1У5 | АЗП | Суз 60 | А1а | АЗП | ТЬг | ТЬг |
| Агд Зег | рЬе | Суз | Азр | хеи | ТЬг | А$р | 61 и | тгр | Агд | зег | ТЬг | А1а | 61 и | А1а |
| 65 | 70 | 75 | 80 | |||||||||||
| туг Уа1 | тЬг | Уа1 | Хеи | 61 и | 61 у | РЬе | зег | 61 у | АЗЛ | тЬг | ТЬг | Хеи | РЬе | Зег |
| 85 | 90 | 95 |
- 19 009604
| Су5 | 5ег | НТ5 | Н1$ 100 | РЬе | Тгр | 1_еи | А1а 11е А5р 105 | Мех 5ег | рЬе | 61и Рго 110 | РГО | ||||
| С1и | рЬе | б1и | 11 е | Уа1 | 61 у | РЬе | ТЬг | А5П | Н1 5 | 11е | А5П | Уа1 | мех | Уа1 | ЬУ5 |
| 115 | 120 | 125 | |||||||||||||
| РЬе | Рго | 5ег | 11е | Уа1 | 61 и | 61 и | 61 и | хеи | 61 п | рЬе | А5О | Хеи | 5ег | хеи | уа! |
| 130 | 135 | 140 | |||||||||||||
| 11е | С1и | с1и | 61η | Зег | «31 и | С1 у | 11 е | Уа1 | иу$ | Ьу5 | НТ 5 | ХУ5 | РГО | б!и | Не |
| 145 | 150 | 155 | 160 | ||||||||||||
| ЬУ5 | с1у | А5П | мех | 5ег 165 | 61 у | А£П | РЬе | ТЬг | Туг 170 | Не | 11е | А5р | ХУ5 | хеи 175 | Не |
| Рго | А5П | тЬг | А5Л 180 | Туг | СУ5 | уа! | Зег | Уа1 185 | Туг | Ьеи | 61 и | НТ 5 | 5ег 190 | А5р | 61 и |
| С1п | А1а | Уа1 | 11е | 1.У5 | 5ег | РГО | Хеи | ьу5 | СУ5 | ТЬг | (_еи | хеи | Рго | Рго | 61 у |
| 195 | 200 | 205 |
С1п 61и 5ег 61м РЬе 5ег 31х
210 215
Claims (34)
- ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ1. Применение мутантного полипептида β-цепи рецептора интерферона типа Ι (ΙΡΝΑΚ2) (ΜΙΡΝΑΚ2), имеющего аминокислотную последовательность 8ЕЦ ΙΌ ΝΟ:1, мутированного по аминокислотным остаткам гистидина в положении 78 и аспарагина в положении 100, обладающего повышенной аффинностью к интерферону-β (ΙΡΝ-β) по сравнению с полипептидом дикого типа, или аналога указанного мутантного полипептида, обладающего, по существу, такой же активностью, у которого до 30 аминокислотных остатков может быть удалено, добавлено или замещено, при условии, что эти остатки не являются остатками 78 и 100, или его соли, для производства лекарственного средства, модулирующего эффекты ΙΡΝ-β.
- 2. Применение по п.1, где мутации представляют собой замены.
- 3. Применение по п.2, где замены являются неконсервативными.
- 4. Применение по любому из пп.1-3, где остаток гистидина в положении 78 заменен на аланин.
- 5. Применение по любому из пп.1-4, где остаток аспарагина в положении 100 заменен на аланин, аспарагиновую кислоту или гистидин.
- 6. Применение по п.4 или 5, где оба остатка в положениях 78 и 100 заменены на аланин.
- 7. Применение по п.1, где указанный мутантный полипептид включает последовательности 8ЕЦ ΙΌ ΝΟ:2, 8ЕО ΙΌ ΝΟ:3 или 8ЕО ΙΌ ΝΟ:4.
- 8. Применение по любому из пп.1-7, где аффинность мутантного полипептида к ΙΡΝ-β составляет приблизительно 30 пМ.
- 9. Применение по любому из пп.1-7, где аффинность мутантного пептида к ΙΡΝ-β приблизительно в 25, предпочтительно в 50 и более предпочтительно в 100 раз выше, чем аффинность полипептида ΙΡΝΑΚ2 дикого типа.
- 10. Применение по любому из пп.1-7, где аналог ΜΙΡΝΑΚ 2 содержит экстрацеллюлярный домен.
- 11. Применение по любому из пп.1-10, где указанный мутантный полипептид ковалентно связан с ΙΡΝ-β.
- 12. Применение по любому из пп.1-11, где указанный мутантный полипептид является ПЭГилированным.
- 13. Применение по любому из пп.1-12, где лекарственное средство дополнительно включает ΙΡΝ-β.
- 14. Применение по п.13, где лекарственное средство дополнительно включает антагонист ΙΡΝ-β.
- 15. Применение по любому из пп.1-12, где указанное лекарственное средство усиливает активность ΙΡΝ-β.
- 16. Применение по п.15, где указанное лекарственное средство усиливает противоопухолевую активность ΙΡΝ-β.
- 17. Применение по п.15, где указанное лекарственное средство усиливает иммуномодулирующую активность ΙΡΝ-β.- 20 009604
- 18. Применение по п.17, где указанное лекарственное средство усиливает иммуномодулирующую активность ΙΡΝ-β при аутоиммунных заболеваниях, выбранных из рассеянного склероза, ревматоидного артрита, миастении гравис, диабета, системной красной волчанки и язвенного колита.
- 19. Применение по любому из пп.1-12, где указанное лекарственное средство ингибирует активность ΙΡΝ-β.
- 20. Применение по любому из пп.1-13, где лекарственное средство предназначено для лечения аутоиммунного заболевания, вирусного заболевания или рака.
- 21. Применение по п.20, где заболевание выбрано из рассеянного склероза, ревматоидного артрита, злокачественной миастении, диабета, язвенного колита, системной красной волчанки, хронического гранулематозного заболевания, остроконечной кондиломы, ювенильного ларингеального папилломатоза, гепатита А, хронической инфекции вирусами гепатита В и С, лейкоза ворсистых клеток, саркомы Капоши, множественной миеломы, хронического миелоидного лейкоза, неходжкинской лимфомы и меланомы.
- 22. Применение по любому из пп.20 или 21, где лекарственное средство дополнительно содержит терапевтически активное количество ΙΡΝ-β.
- 23. Применение по любому из пп.1-12, где лекарственное средство предназначено для лечения заболевания, вызванного или осложненного ΙΡΝ-β.
- 24. Применение по п.23, где лекарственное средство дополнительно содержит антагонист ΙΡΝ-β.
- 25. Применение по любому из пп.1-12, где лекарственное средство предотвращает олигомеризацию ΙΡΝ-β.
- 26. Фармацевтическая композиция, включающая терапевтически эффективное количество мутантного полипептида β-цепи рецептора интерферона типа Ι (ΙΡΝΑΡ2) (ΜΙΡΝΑΡ2), имеющего аминокислотную последовательность 8ΕΟ ΙΌ ΝΟ:1, мутированного по аминокислотным остаткам гистидина в положении 78 и аспарагина в положении 100, или его аналога, обладающего, по существу, такой же активностью, у которого до 30 аминокислотных остатков может быть удалено, добавлено или замещено, при условии, что эти остатки не являются остатками 78 и 100.
- 27. Фармацевтическая композиция по п.26, где указанное терапевтически эффективное количество ΜΙΡΝΑΚ2 по меньшей мере в 30 раз меньше терапевтически эффективного количество ΙΡΝΑΚ2 дикого типа.
- 28. Фармацевтическая композиция по п.26 или 27, дополнительно включающая ΙΡΝ-β.
- 29. Фармацевтическая композиция по п.26 или 27, дополнительно содержащая антагонист ΙΡΝ-β.
- 30. Фармацевтическая композиция по п.28, где мутантный полипептид ΙΡΝΑΚ2 ковалентно связан с ΙΡΝ-β.
- 31. Фармацевтическая композиция по любому из пп.26 или 30, где указанный аналог ΙΡΝΑΚ2 содержит экстрацеллюлярный домен.
- 32. Фармацевтическая композиция по любому из пп.26-31 для усиления противоопухолевых и противовирусных свойств, а также иммуномодулирующих свойств ΙΡΝ-β.
- 33. Фармацевтическая композиция по п.32 для лечения хронического гранулематозного заболевания, остроконечной кондиломы, ювенильного ларингеального папилломатоза, гепатита А, хронической инфекции, вызванной вирусами гепатита В и С, лейкоза ворсистых клеток, саркомы Капоши, множественной миеломы, хронического миелоидного лейкоза, неходжкинской лимфомы, меланомы, рассеянного склероза, ревматоидного артрита, злокачественной миастении, диабета, язвенного колита и системной красной волчанки.
- 34. Фармацевтическая композиция по п.29 для ингибирования иммуномодулирующих свойств ΙΡΝ-β.
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| IL14741401A IL147414A0 (en) | 2001-12-31 | 2001-12-31 | Ifnar2 mutants, their production and use |
| PCT/IL2002/001059 WO2003059950A1 (en) | 2001-12-31 | 2002-12-31 | Ifnar2 mutants, their production and use |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| EA200400894A1 EA200400894A1 (ru) | 2004-12-30 |
| EA009604B1 true EA009604B1 (ru) | 2008-02-28 |
Family
ID=11075916
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| EA200400894A EA009604B1 (ru) | 2001-12-31 | 2002-12-31 | ПРИМЕНЕНИЕ МУТАНТНОГО ПОЛИПЕПТИДА β-ЦЕПИ РЕЦЕПТОРА ИНТЕРФЕРОНА ТИПА I ДЛЯ ПРИГОТОВЛЕНИЯ ЛЕКАРСТВЕННОГО СРЕДСТВА, МОДУЛИРУЮЩЕГО ЭФФЕКТЫ ИНТЕРФЕРОНА-β, И ФАРМАЦЕВТИЧЕСКАЯ КОМПОЗИЦИЯ, СОДЕРЖАЩАЯ УКАЗАННЫЙ ПОЛИПЕПТИД |
Country Status (15)
| Country | Link |
|---|---|
| US (2) | US7749735B2 (ru) |
| EP (2) | EP2174955B1 (ru) |
| JP (2) | JP2005527195A (ru) |
| KR (1) | KR100891918B1 (ru) |
| CN (1) | CN100506845C (ru) |
| BR (1) | BR0215414A (ru) |
| CA (1) | CA2470245C (ru) |
| EA (1) | EA009604B1 (ru) |
| IL (2) | IL147414A0 (ru) |
| MX (1) | MXPA04006383A (ru) |
| NO (1) | NO333821B1 (ru) |
| NZ (1) | NZ533539A (ru) |
| UA (1) | UA87958C2 (ru) |
| WO (1) | WO2003059950A1 (ru) |
| ZA (1) | ZA200404731B (ru) |
Families Citing this family (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| KR101293363B1 (ko) * | 2011-02-28 | 2013-08-05 | 성균관대학교산학협력단 | 인터페론 수용체 유전자를 포함하는 조류독감 예방용 조성물 |
| CN103952413B (zh) * | 2014-05-14 | 2016-08-17 | 广东省农业科学院动物卫生研究所 | 靶向ifnar2基因的rna干扰表达载体构建及应用 |
| CN104762325B (zh) * | 2015-03-30 | 2018-04-17 | 山东省农业科学院家禽研究所 | 一种沉默df‑1细胞系中ifnar2基因的方法 |
| CN105396123A (zh) * | 2015-11-20 | 2016-03-16 | 深圳市南山区人民医院 | ovR2E蛋白在HBV感染治疗中疗效的应用 |
| CA3029627A1 (en) | 2016-07-01 | 2018-01-04 | Resolve Therapeutics, Llc | Optimized binuclease fusions and methods |
| CA3073537A1 (en) | 2017-08-22 | 2019-02-28 | Sanabio, Llc | Soluble interferon receptors and uses thereof |
Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP0679717A2 (en) * | 1993-10-24 | 1995-11-02 | Yeda Research And Development Company Limited | Soluble interferon -receptor, its preparation and use |
Family Cites Families (13)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4737462A (en) | 1982-10-19 | 1988-04-12 | Cetus Corporation | Structural genes, plasmids and transformed cells for producing cysteine depleted muteins of interferon-β |
| US4588585A (en) | 1982-10-19 | 1986-05-13 | Cetus Corporation | Human recombinant cysteine depleted interferon-β muteins |
| US4518584A (en) | 1983-04-15 | 1985-05-21 | Cetus Corporation | Human recombinant interleukin-2 muteins |
| US4959314A (en) | 1984-11-09 | 1990-09-25 | Cetus Corporation | Cysteine-depleted muteins of biologically active proteins |
| US5116943A (en) | 1985-01-18 | 1992-05-26 | Cetus Corporation | Oxidation-resistant muteins of Il-2 and other protein |
| EP0835661B1 (en) | 1985-10-14 | 2007-08-29 | Yeda Research And Development Co. Ltd. | Human interferon-Beta2A for use as a medicament |
| US5017691A (en) | 1986-07-03 | 1991-05-21 | Schering Corporation | Mammalian interleukin-4 |
| US4965195A (en) | 1987-10-26 | 1990-10-23 | Immunex Corp. | Interleukin-7 |
| US4904584A (en) | 1987-12-23 | 1990-02-27 | Genetics Institute, Inc. | Site-specific homogeneous modification of polypeptides |
| BR9707589A (pt) * | 1996-02-20 | 2000-01-04 | Applied Research Systems | Proteìna hìbrida, molécula de dna, vetor de expressão, célula hospedeira, composição farmacêutica e processos para produzir proteìna hìbrida e para induzir maturação folicular. |
| NZ504771A (en) | 1997-12-19 | 2002-09-27 | Applied Research Systems | IFNAR2/ INFcomplex for prolonging the in vivo effects of type I interferon (INF) |
| IL126562A0 (en) | 1998-10-14 | 1999-08-17 | Interpharm Lab Ltd | Expression and secretion of icil-1 receptor antagonist type ii |
| AUPP670698A0 (en) * | 1998-10-23 | 1998-11-19 | Monash University | A method of regulation |
-
2001
- 2001-12-31 IL IL14741401A patent/IL147414A0/xx unknown
-
2002
- 2002-12-31 EP EP09012863.8A patent/EP2174955B1/en not_active Expired - Lifetime
- 2002-12-31 NZ NZ533539A patent/NZ533539A/en not_active IP Right Cessation
- 2002-12-31 BR BR0215414-5A patent/BR0215414A/pt not_active IP Right Cessation
- 2002-12-31 KR KR1020047010258A patent/KR100891918B1/ko not_active Expired - Fee Related
- 2002-12-31 EP EP02806387A patent/EP1461358A1/en not_active Withdrawn
- 2002-12-31 EA EA200400894A patent/EA009604B1/ru not_active IP Right Cessation
- 2002-12-31 MX MXPA04006383A patent/MXPA04006383A/es active IP Right Grant
- 2002-12-31 JP JP2003560052A patent/JP2005527195A/ja not_active Withdrawn
- 2002-12-31 CN CNB028284224A patent/CN100506845C/zh not_active Expired - Fee Related
- 2002-12-31 WO PCT/IL2002/001059 patent/WO2003059950A1/en not_active Ceased
- 2002-12-31 CA CA2470245A patent/CA2470245C/en not_active Expired - Fee Related
- 2002-12-31 US US10/500,521 patent/US7749735B2/en not_active Expired - Fee Related
- 2002-12-31 UA UA20040605186A patent/UA87958C2/ru unknown
-
2004
- 2004-06-14 IL IL162507A patent/IL162507A/en not_active IP Right Cessation
- 2004-06-15 ZA ZA2004/04731A patent/ZA200404731B/en unknown
- 2004-06-30 NO NO20042768A patent/NO333821B1/no not_active IP Right Cessation
-
2009
- 2009-03-16 JP JP2009063653A patent/JP2009165483A/ja active Pending
-
2010
- 2010-05-26 US US12/788,211 patent/US20100239530A1/en not_active Abandoned
Patent Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP0679717A2 (en) * | 1993-10-24 | 1995-11-02 | Yeda Research And Development Company Limited | Soluble interferon -receptor, its preparation and use |
Non-Patent Citations (4)
| Title |
|---|
| LEWERENZ MALTE ET AL.: "Shared receptor components but distinct complexes for alpha and beta interferons." JOURNAL OF MOLECULAR BIOLOGY, vol. 282, no. 3, pages 585-599, XP002242613, ISSN: 0022-2836, the whole document * |
| PIEHLER JACOB ET AL.: "Biophysical analysis of the interaction of human ifnar2 expressed in E. coli with IFNalpha2." JOURNAL OF MOLECULAR BIOLOGY, vol. 289, no. 1, 28 May 1999 (1999-05-28), pages 57-67, XP002242614, ISSN: 0022-2836, the whole document * |
| PIEHLER JACOB ET AL.: "Mutational and structural analysis of the binding interface between type I interferons and their receptor ifnar2." JOURNAL OF MOLECULAR BIOLOGY, vol. 294, no. 1, 19 November 1999 (1999-11-19), pages 223-237, XP002242612, ISSN: 0022-2836, cited in the application, page 228 - page 229; table 2, page 230, left-hand column, line 9 - line 15; figures 7, 8, page 234, left-hand column, paragraph 2 * |
| ROISMAN LAILA C. ET AL.: "Structure of the interferon-receptor complex determined by distance constraints from double-mutant cycles and flexible docking." PROCEEDINGS OF THE NATIONAL ACADEMY OF SCIENCES OF THE UNITED STATES, vol. 98, no. 23, pages 13231-13236, XP002242615, Nobember 6, 2001, ISSN: 0027-8424, the whole document * |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| WO2003059950A1 (en) | 2003-07-24 |
| NZ533539A (en) | 2008-05-30 |
| ZA200404731B (en) | 2005-08-31 |
| BR0215414A (pt) | 2004-12-14 |
| AU2002366976A1 (en) | 2003-07-30 |
| KR20040086255A (ko) | 2004-10-08 |
| MXPA04006383A (es) | 2004-10-04 |
| IL147414A0 (en) | 2002-08-14 |
| EP1461358A1 (en) | 2004-09-29 |
| CN1622957A (zh) | 2005-06-01 |
| CN100506845C (zh) | 2009-07-01 |
| EP2174955B1 (en) | 2014-04-16 |
| US7749735B2 (en) | 2010-07-06 |
| KR100891918B1 (ko) | 2009-04-08 |
| HK1072948A1 (zh) | 2005-09-16 |
| CA2470245A1 (en) | 2003-07-24 |
| NO20042768L (no) | 2004-09-22 |
| JP2005527195A (ja) | 2005-09-15 |
| EA200400894A1 (ru) | 2004-12-30 |
| IL162507A (en) | 2011-01-31 |
| JP2009165483A (ja) | 2009-07-30 |
| US20100239530A1 (en) | 2010-09-23 |
| UA87958C2 (ru) | 2009-09-10 |
| EP2174955A1 (en) | 2010-04-14 |
| CA2470245C (en) | 2012-03-27 |
| NO333821B1 (no) | 2013-09-23 |
| US20050164185A1 (en) | 2005-07-28 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| US12297248B2 (en) | Methods of treating graft versus host disease using IL-2 muteins | |
| US8187584B2 (en) | Human tumor necrosis factor-α mutants | |
| ES2939112T3 (es) | Composiciones y métodos de uso de interleucina-10 en combinación con inhibidores de vías de puntos de control inmunitario | |
| KR20170030646A (ko) | 인터류킨-2/인터류킨-2 수용체 알파 융합 단백질 및 사용 방법 | |
| CN118451096A (zh) | 异二聚体fc细胞因子及其用途 | |
| EP1037658B1 (en) | Ifnar/ifn complex | |
| US20100239530A1 (en) | Ifnar2 mutants, their production and use | |
| KR20230056706A (ko) | 재조합 형질전환 성장 인자(tgf)-베타 단량체를 암호화하는 종양용해 바이러스 및 이의 용도 | |
| KR102682118B1 (ko) | Ccl3 변이체를 포함하는 융합 단백질 및 이의 용도 | |
| US5684129A (en) | Interferon receptor binding peptides | |
| AU2002366976B2 (en) | IFNAR2 mutants, their production and use | |
| HK1072948B (zh) | Ifnar2突变体，其制造和应用 | |
| AU2007202312A1 (en) | IFNAR2 mutants, their production and use | |
| WO2024086739A1 (en) | Methods and compositions of il12 muteins and il2 muteins | |
| MXPA00005886A (en) | Ifnar2/ifn complex |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MM4A | Lapse of a eurasian patent due to non-payment of renewal fees within the time limit in the following designated state(s) |
Designated state(s): AM AZ BY KZ KG MD TJ TM |
|
| MM4A | Lapse of a eurasian patent due to non-payment of renewal fees within the time limit in the following designated state(s) |
Designated state(s): RU |