EA024083B1 - Новые соединения, связывающие фарнезоидный х-рецептор (fxr) (nr1h4) и модулирующие его активность - Google Patents

Новые соединения, связывающие фарнезоидный х-рецептор (fxr) (nr1h4) и модулирующие его активность Download PDF

Info

Publication number
EA024083B1
EA024083B1 EA201290047A EA201290047A EA024083B1 EA 024083 B1 EA024083 B1 EA 024083B1 EA 201290047 A EA201290047 A EA 201290047A EA 201290047 A EA201290047 A EA 201290047A EA 024083 B1 EA024083 B1 EA 024083B1
Authority
EA
Eurasian Patent Office
Prior art keywords
cyclopropyl
compound
phenyl
mmol
solution
Prior art date
Application number
EA201290047A
Other languages
English (en)
Other versions
EA201290047A1 (ru
Inventor
Клаус Кремозер
Ульрих Абель
Кристоф Штеенек
Олаф Кинцель
Original Assignee
Фенекс Фармасьютикалз Аг
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Фенекс Фармасьютикалз Аг filed Critical Фенекс Фармасьютикалз Аг
Publication of EA201290047A1 publication Critical patent/EA201290047A1/ru
Publication of EA024083B1 publication Critical patent/EA024083B1/ru

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D261/00—Heterocyclic compounds containing 1,2-oxazole or hydrogenated 1,2-oxazole rings
    • C07D261/02—Heterocyclic compounds containing 1,2-oxazole or hydrogenated 1,2-oxazole rings not condensed with other rings
    • C07D261/06—Heterocyclic compounds containing 1,2-oxazole or hydrogenated 1,2-oxazole rings not condensed with other rings having two or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members
    • C07D261/08—Heterocyclic compounds containing 1,2-oxazole or hydrogenated 1,2-oxazole rings not condensed with other rings having two or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members with only hydrogen atoms, hydrocarbon or substituted hydrocarbon radicals, directly attached to ring carbon atoms
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/41—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having five-membered rings with two or more ring hetero atoms, at least one of which being nitrogen, e.g. tetrazole
    • A61K31/4192—1,2,3-Triazoles
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/41—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having five-membered rings with two or more ring hetero atoms, at least one of which being nitrogen, e.g. tetrazole
    • A61K31/42—Oxazoles
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/41—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having five-membered rings with two or more ring hetero atoms, at least one of which being nitrogen, e.g. tetrazole
    • A61K31/42—Oxazoles
    • A61K31/422—Oxazoles not condensed and containing further heterocyclic rings
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/41—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having five-membered rings with two or more ring hetero atoms, at least one of which being nitrogen, e.g. tetrazole
    • A61K31/42—Oxazoles
    • A61K31/423—Oxazoles condensed with carbocyclic rings
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/435—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom
    • A61K31/44—Non condensed pyridines; Hydrogenated derivatives thereof
    • A61K31/4427—Non condensed pyridines; Hydrogenated derivatives thereof containing further heterocyclic ring systems
    • A61K31/4439—Non condensed pyridines; Hydrogenated derivatives thereof containing further heterocyclic ring systems containing a five-membered ring with nitrogen as a ring hetero atom, e.g. omeprazole
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A61P1/16—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for liver or gallbladder disorders, e.g. hepatoprotective agents, cholagogues, litholytics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P13/00—Drugs for disorders of the urinary system
    • A61P13/12—Drugs for disorders of the urinary system of the kidneys
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/02—Drugs for disorders of the nervous system for peripheral neuropathies
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/28—Drugs for disorders of the nervous system for treating neurodegenerative disorders of the central nervous system, e.g. nootropic agents, cognition enhancers, drugs for treating Alzheimer's disease or other forms of dementia
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P27/00—Drugs for disorders of the senses
    • A61P27/02—Ophthalmic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A61P3/04—Anorexiants; Antiobesity agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A61P3/06—Antihyperlipidemics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A61P3/08—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis
    • A61P3/10—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis for hyperglycaemia, e.g. antidiabetics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/04—Antibacterial agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P33/00—Antiparasitic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
    • A61P7/02—Antithrombotic agents; Anticoagulants; Platelet aggregation inhibitors
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A61P9/10—Drugs for disorders of the cardiovascular system for treating ischaemic or atherosclerotic diseases, e.g. antianginal drugs, coronary vasodilators, drugs for myocardial infarction, retinopathy, cerebrovascula insufficiency, renal arteriosclerosis
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D249/00—Heterocyclic compounds containing five-membered rings having three nitrogen atoms as the only ring hetero atoms
    • C07D249/02—Heterocyclic compounds containing five-membered rings having three nitrogen atoms as the only ring hetero atoms not condensed with other rings
    • C07D249/04—1,2,3-Triazoles; Hydrogenated 1,2,3-triazoles
    • C07D249/06—1,2,3-Triazoles; Hydrogenated 1,2,3-triazoles with aryl radicals directly attached to ring atoms
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D413/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having nitrogen and oxygen atoms as the only ring hetero atoms
    • C07D413/02—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having nitrogen and oxygen atoms as the only ring hetero atoms containing two hetero rings
    • C07D413/04—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having nitrogen and oxygen atoms as the only ring hetero atoms containing two hetero rings directly linked by a ring-member-to-ring-member bond
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D413/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having nitrogen and oxygen atoms as the only ring hetero atoms
    • C07D413/02—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having nitrogen and oxygen atoms as the only ring hetero atoms containing two hetero rings
    • C07D413/12—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having nitrogen and oxygen atoms as the only ring hetero atoms containing two hetero rings linked by a chain containing hetero atoms as chain links
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D413/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having nitrogen and oxygen atoms as the only ring hetero atoms
    • C07D413/14—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having nitrogen and oxygen atoms as the only ring hetero atoms containing three or more hetero rings
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
    • Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
    • Y02A50/00—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE in human health protection, e.g. against extreme weather
    • Y02A50/30—Against vector-borne diseases, e.g. mosquito-borne, fly-borne, tick-borne or waterborne diseases whose impact is exacerbated by climate change

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Diabetes (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Neurosurgery (AREA)
  • Neurology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Obesity (AREA)
  • Communicable Diseases (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Endocrinology (AREA)
  • Child & Adolescent Psychology (AREA)
  • Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
  • Ophthalmology & Optometry (AREA)
  • Emergency Medicine (AREA)
  • Hospice & Palliative Care (AREA)
  • Heart & Thoracic Surgery (AREA)
  • Cardiology (AREA)
  • Psychiatry (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Vascular Medicine (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Heterocyclic Carbon Compounds Containing A Hetero Ring Having Nitrogen And Oxygen As The Only Ring Hetero Atoms (AREA)
  • Plural Heterocyclic Compounds (AREA)

Abstract

Изобретение относится к соединениям, которые связываются с рецептором NR1H4 (FRX) и действуют в качестве агонистов рецептора NR1H4 (FRX). Изобретение также относится к применению соединений для получения лекарственного средства для лечения заболеваний и/или состояний за счет связывания указанного ядерного рецептора указанными соединениями, а также к способу синтеза указанных соединений.

Description

Настоящее изобретение относится к соединениям, которые связываются с рецептором ΝΚ1Η4 (фарнезоидный Х-рецептор, РХК) и действуют как агонисты или модуляторы рецептора ΝΚ1Η4 (РХК). Изобретение также относится к применению указанных соединений для лечения и/или профилактики заболеваний и/или состояний за счет связывания указанного ядерного рецептора указанными соединениями.
Многоклеточные организмы находятся в зависимости от сложных механизмов передачи информации между клетками и частями тела. Передаваемая информация может быть весьма сложной, и результатом ее передачи может являться изменение генетических программ, вовлеченных в дифференцировку, пролиферацию или репродукцию клеток. Сигналы, или гормоны, часто представляют собой низкомолекулярные соединения, такие как пептиды, жирные кислоты или производные холестерина.
Многие из данных сигналов оказывают свое действие за счет изменения в конечном счете транскрипции конкретных генов. Одной хорошо изученной группой белков, которые опосредуют ответ клетки на множество сигналов, является семейство транскрипционных факторов, известных как ядерные рецепторы, в дальнейшем часто обозначаемые ЯР. Члены данной группы включают рецепторы стероидных гормонов, витамина И, экдизона, цис- и трансретиноевой кислоты, тиреоидного гормона, желчных кислот, производных холестерина, жирных кислот (и других пролифераторов пероксисом), так же как и так называемые сиротские рецепторы, представляющие собой белки, которые структурно сходны с другими членами данной группы, но лиганды для которых неизвестны. Сиротские рецепторы могут указывать на неизвестные сигнальные пути в клетке или могут представлять собой ядерные рецепторы, функционирующие без активации лигандом. Активация транскрипции некоторыми из данных сиротских рецепторов может происходить в отсутствие экзогенного лиганда и/или через пути сигнальной трансдукции, начинающиеся от поверхности клетки (Ό. МапдсРбогГ с1 а1. ТЬе пис1еаг гесерЮг виретТатЛу: 1Пс весоиЛ ЛесаЛе, Се11, 1995, 83(6), 835-839, К. Еуаив ТЬе иис1еаг гесерЮг виретТатЛу: а товейа вЮие Тог рЬу8ю1оду, Мо1. ЕиЛосгто1. 2005, 19(6), 1429-1438).
В общем случае, в ЯР выделяют три функциональных домена. Аминоконцевой домен, как полагают, обладает некоторой регуляторной функцией. За ним следует ДНК-связывающий домен, в дальнейшем называемый ДСД, который обычно содержит два цинковых пальца и распознает специфический элемент гормонального ответа, в дальнейшем называемый ЭГО, в промоторах генов, отвечающих за указанный ответ. Конкретные аминокислотные остатки в ДСД, как было показано, обеспечивают специфичность связывания с последовательностью ДНК (М. ЗсЬеиа МаттаИаи д1исосогйсо1Л гесерЮг ЛепуаОуев еиЬаисе йаивсЛрйои ίη уеавГ, Заепсе, 1988, 241(4868), 965-967). Лигандсвязывающий домен, в дальнейшем называемый ЛСД, расположен в карбоксиконцевом участке известных ЯР.
В отсутствие гормона ЛСД, по-видимому, препятствует взаимодействию ДСД с ЭГО. Связывание гормона, по-видимому, приводит к конформационному изменению в ЯР и, таким образом, обусловливает это препятствование (А. Вг/о/о\ув1Л е1 а1. Мо1еси1аг Ьав1в оТ адотвт аиЛ айадотвт ш 1Ье оевйодеи гесерЮг, Шине, 1997, 389(6652), 753-758). ЯР без ЛСД конститутивно активирует транскрипцию, но на низком уровне.
Коактиваторы или транскрипционные активаторы, как полагают, выступают связующим звеном между специфичными к последовательности факторами транскрипции, основным аппаратом транскрипции, и, кроме того, влияют на структуру хроматина целевой клетки. Несколько белков, таких как ЗКС-1, АСТК и Опр1, взаимодействуют с ЯР способом, при котором взаимодействие усиливается за счет лиганда (Ό. Неегу е1 а1. А в1диаЮге тоЛТ ш 1гаивст1рЛоиа1 со-асйуаЮтв теЛ1а1ев ЬшЛшд Ю иис1еаг гесерЮгв, №йиге, 1997, 387(6634), 733-736; Т. Неш/е1 е1 а1. А сотр1ех сойаштд Ν-СоК, т§ш3 аиЛ ЫвЮие Леасе1у1аве теЛ1а1ев 1гаивст1рЛоиа1 гергеввюи, Мише, 1997, 387(6628), 16-17; К. №й1ев, О. Отееие МдаиЛ сойто1 оТ согеди1аЮг гесгийтет Ю иис1еаг гесерЮгв, Аиии. Кеу. РЬу8ю1. 2005, 67, 309-333).
Модуляторы ядерных рецепторов, такие как стероидные гормоны, влияют на рост и функционирование конкретных клеток за счет связывания с внутриклеточными рецепторами и образования комплексов ядерных рецепторов с лигандами. Комплексы ядерных рецепторов с гормонами затем взаимодействуют с элементом гормонального ответа (ЭГО) в контрольной области конкретных генов и изменяют экспрессию конкретных генов (А. АгаиЛа, А. Равсиа1 №.1с1еаг Ьогтоие гесерЮгв аиЛ деие ехртеввюи, РЬу8ю1. Кеу. 2001, 81(3), 1269-1304).
Фарнезоидный Х-рецептор альфа (в дальнейшем также часто называемый ΝΚ1Η4, когда речь идет о рецепторе человека) представляет собой прототипный ядерный рецептор типа 2, который активирует гены при связывании с промоторным участком целевых генов гетеродимерным образом с ретиноидным Х-рецептором (В. Роттаи е1 а1. МеиЛйсаЛои оТ а иис1еаг гесерЮг 1Ьа1 ίδ асйуаЮЛ Ьу Татево1 теШЬоШев, Се11, 1995, 81(5), 687-693). Соответствующими физиологичискими лигандами ΝΚ1Η4 являются желчные кислоты (Ό. Рагкв е1 а1. ВЛе ашЛв: иаЮта1 ЬдаиЛв Тот аи огрЬаи иис1еаг гесерЮг, Заеисе, 1999, 284(5418), 1365-1368; М. Ма1Лв1ита е1 а1. 'ТЛеиййсаЛои оТ а иис1еаг гесерЮг Тот ЬЛе ааЛв, Заеисе, 1999, 284(5418), 1362-1365). Наиболее сильным лигандом является хенодезоксихолевая кислота (ХДХК), которая регулирует экспрессию нескольких генов, участвующих в гомеостазе желчных кислот. Фарнезол и его производные, вместе называемые фарнезоидами, как сообщалось первоначально, активируют крысиный ортолог в высокой концентрации, но они не активируют рецептор человека или мыши. РХК экспрессируется в печени, во всем желудчно-кишечном тракте, включая пищевод, желудок, двенадцатиперстную кишку,
- 1 024083 тонкий кишечник, толстую кишку, в яичниках, надпочечниках и почках. Помимо контролирования внутриклеточной экспрессии генов, РХК, по-видимому, также вовлечен в паракринную и эндокринную передачу сигналов посредством повышающей регуляции экспрессии цитокина - фактора роста фибробластов 15 (грызуны) или 19 (обезьяны, люди) 1. Но1! е! а1. ЭейиШоп оГ а поус1 §ιό\\11ι Гайог-йереийеи! з1диа1 сазсайе Гог !йе зирртеззюи оГ Ы1е ас1й Ъюзуи!йез1з, Сеиез Эсу. 2003, 17(13), 1581-1591; Т. 1иадак1 е! а1. Р1ЪтоЪ1аз! дтоМй Гас!ог 15 Гиисйоиз аз ап ейетойерайс з1диа1 !о геди1а!е Ы1е ашй йотеоз!аз1з, Се11 Ме1аЬ. 2005, 2(4), 217-225).
Существует одна публикация, в которой высказано предположение о прямом влиянии активации РХК на выживаемость возбудителей инфекции, таких как бактерии или протозойные паразиты, посредством активирования лизосомального фактора гибели/выживания Тасо-2 в макрофагах (Р. Аиаийе! а1. ПотешедиЦпои оГ ТАСО деие йаизсйрйои тез1лс!з тусоЪас1ет1а1 еи!гу/зигу1уа1 γίΐΗίπ йитаи тасторйадез, РЕМ8 МютоЪюк Ьей. 2005, 250(1), 137-144). Это могло бы проложить путь для дальнейших исследований, направленных на оценку способности РХК выступать в качестве мишени для лекарственного средства для лечения внутриклеточных бактериальных или паразитарных инфекций, таких как туберкулез, проказа, лейшманиоз или трипаносомоз, например болезнь Чагаса.
Низкомолекулярные соединения, которые действуют как модуляторы РХК, были предложены в следующих публикациях: νθ 2000/037077, νθ 2003/015771, νθ 2004/048349, νθ 2007/076260, νθ 2007/092751, νθ 2007/140174, νθ 2007/140183, νθ 2008/051942, νθ 2008/157270, νθ 2009/005998, νθ 2009/012125, νθ 2008/025539 и νθ 2008/025540. Недавно вышел обзор дополнительных низкомолекулярных модуляторов РХК (К.С. Виузтаи е! а1. №и-8!его1йа1 8!ето1й Кесер!ог Мойи1а!огз, Сигг. Мей. Сйет. 2005, 12, 1017-1075).
В публикации νθ 2000/037077 предложены соединения, имеющие следующую общую формулу
где Х1 представляет собой СН, Ν;
Х2 представляет собой О или ΝΗ;
К и К1 независимо представляют собой Н, низший алкил, галоген или СР3;
К2 представляет собой низший алкил;
К3 и К4 независимо представляют собой Н, низший алкил, галоген, СР3, ОН, О-алкил или О-полигалоалкил.
В более предпочтительном варианте реализации в публикации νθ 2000/037077 предложено соединение СV4064
которое было также впервые опубликовано в источнике Ма1оиеу е! а1. Иеиййсайои оГ а сйетюа1 !оо1 Гог !йе отрйаи иис1еаг гесер!ог РХК, 1. Мей. Сйет. 2000, 43(16), 2971-2974.
Лк\таЫ-Атеуа\т е! а1. Сои£огта!юиа11у соизйатей РатезоМ Х Кесер!ог Адотз!з: №рй!ою ашй-Ъазей аиа1одз оГ СV4064, Вюогд. Мей. Сйет. Ье!!. 2008, 18(15), 4339-4343 упоминает возможные недостатки данного агониста РХК. Согласно этой публикации С\У4064 показывает плохую фармакокинетику с низкой пероральной биодоступностью и низким содержанием вещества в плазме, а также короткий период полувыведения из плазмы.
Кроме того, трансстильбеновый фрагмент этой молекулы и родственные агонисты РХК из публи- 2 024083 кации νθ 2000/037077 ставят вопрос о возможном токсикофоре, обсуждаемый в Кио е! а1. Ыбисбоп оГ бгид-те1аЬоЬ/1пд еп/утек апб ΙοχίοίΙν оГ !гапк-кЫЬепе ох1бе ίη га1 Пусг апб Ыбпеу. Тохюо1оду 1981, 22(2), 149-160 и в §ид1Ьага е! а1. Ме!аЬоИс асбуабоп оГ 1Не ртоекбодепк !тапк-кб1Ьепе апб бапк-кЫЬепе ох1бе Ьу та! Иует т1стокотек, Тох1со1. Арр1. РНагтасо1. 2000, 167(1), 46-54. Наконец, авторы Лк\уаЫ-Лтеуа\у е! а1. упоминают, что трансстильбеновый фрагмент Ον4064 ответственен за нестабильность последнего в ультрафиолетовом свете. Фотонестабильность может превратиться в фототоксичность, если соединение при введении его людям подвержено воздействию УФ-света, например, за счет отложения или накопления в коже (см. Со1егапд1е кВ. Кеди1а!огу поп-с1шюа1 рНоЮкаГеб еуа1иабоп - Ап а!!етр! !о тегде 1Не ΡΌΑ апб ЕМЕА рНоЮкаГеб !екбпд к1га1ед1С5. Кеди1. Тохюо1. РНагтасо1. 2009, би1 16 [электронная публикация перед печатью] и Непгу е! а1. Сап ЬдЫ аЬкотрбоп апб рбо!ок!аЫ1бу ба!а Ье икеб !о аккекк 1Не рНоЮкаГеб пккк ш рабеп!к Гог а пе\у бгид то1еси1е? 1. РЬо!осЬет. РЬо!оЬю1. В. 2009, 96(1), 57-62).
С другой стороны, данный конъюгированный трансстильбен является основой для активности Ον4064, так как авторы упоминают, что простое восстановление двойной связи до этиленовой группы приводит к уменьшению лигандсвязывающих свойств РХК.
Соответственно, задачей настоящего изобретения является обеспечение технического решения позволяющего преодолеть недостатки агонистов РХК, содержащих трансстильбеновый фрагмент, предложенных в публикации νθ 2000/037077, при сохранении или даже улучшении силы связывания с РХК в противоположность снижению РХК-связывающей активности, наблюдаемому у аналогов Ον4064 на основе нафтойной кислоты, описанных в АкуаЫ-Атеуау е! а1.
Эта задача была решена путем обеспечения соединений по п. 1 формулы изобретения. Предпочтительные варианты реализации предложены в формуле изобретения, а также в приведенном далее описании. Согласно настоящему изобретению применяют превращение трансстильбеновой двойной связи в циклопропильную группу, которое может быть достигнуто путем добавления карбена, с получением соединений, демонстрирующих неожиданное полное устранение вызываемой УФ фотолабильности и в то же время преодоление потенциально токсичных свойств трансстильбена. Получаемые рацемические смеси проявляют свойства агонистов РХК, сходные со значениями, получаемыми для соответствующих молекул, содержащих трансстильбен. Кроме того, хиральное разделение рацемических смесей позволило получить индивидуальные энантиомеры, которые демонстрировали даже лучшие РХК-связывающие и трансактивационные свойства по сравнению с соответствующими молекулами, содержащими трансстильбен, или родственными аналогами на основе нафтойной кислоты, сведения о которых опубликованы в АкуаЫ-Атеуау е! а1. Следовательно, согласно настоящему изобретению предложено более совершенное решение проблемы, связанной с РХК-соединениями, содержащими трансстильбен, в противоположность другим техническим решениям, опубликованным АкуаЫ-Атеуау е! а1.
Соединения согласно настоящему изобретению имеют общую химическую структуру в соответствии с формулой (1)
где К выбран из группы, состоящей из СООК6, СОЫК7К8, тетразолила или Н, где Кб независимо выбран из группы, состоящей из Н или низшего алкила, и К7 и К8 независимо друг от друга выбраны из группы, состоящей из Н, низшего алкила, С1-С6-галоалкила, С1-С6-алкилена-К9, §О2-С1-С6-алкила, где К9 выбран из группы, состоящей из СООН, ОН или §О3Н;
А выбран из группы, состоящей из фенила, пиридила, пиразолила, индолила, тиенила, бензотиенила, индазолила, бензизоксазолила, бензофуранила, бензотриазолила, фуранила, бензотиазолила, тиазолила, каждый из которых возможно замещен одной или двумя группами, независимо выбранными из группы, состоящей из ОН, низшего алкила, низшего циклоалкила или галогена;
выбран из группы, состоящей из фенила, пиридила, тиазолила, тиофенила, пиримидила, каждый из которых возможно замещен одной или двумя группами, независимо выбранными из группы, состоящей из низшего алкила, галогена или СР3;
где Х = СН, Ν, ЫО;
К| выбран из группы, состоящей из водорода, С1-С3-алкила, С3-С6-циклоалкила, С4-С5-алкилциклоалкила, где С1-С3-алкил возможно замещен 1-3 заместителями, независимо выбранными из галогена, гидрокси или С1-С6-алкокси;
К2 и К3 независимо выбраны из группы, состоящей из водорода, С1-С3-алкила, С1-С3-галоалкила, С1-С3-алкокси, С1-С3-галоалкокси и галогена.
- 3 024083
В настоящем изобретении термин низший алкил обозначает алкильную группу, которая может быть неразветвленной или разветвленной, предпочтительно неразветвленной, и содержит от 1 до 6, предпочтительно от 1 до 4 атомов углерода. Предпочтительные примеры представляют собой метил и этил, изопропил и т-бутил. Термин низший циклоалкил обозначает циклоалкильную группу, содержащую от 3 до 6 атомов углерода. Циклопропил является особенно предпочтительным. Примеры атомов галогена, применяемых в настоящем изобретении в качестве заместителей, как перечислено выше, представляют собой Р, С1 и Вг, причем С1 является предпочтительным.
В предпочтительном варианте реализации в комбинации с любыми выше- и нижеприведенными вариантами реализации соединения согласно настоящему изобретению представлены структурой в соот-
в которой К выбран из группы, состоящей из СООК6, СОЫК7К8, тетразолила или Н, где К6, К7 и К8 независимо выбраны из группы, состоящей из Н, низшего алкила;
А выбран из группы, состоящей из фенила, пиридила, индолила, тиенила, бензотиенила, индазолила, бензизоксазолила, бензофуранила, бензотриазолила, фуранила, бензотиазолила, тиазолила, каждый из которых возможно замещен одной или двумя группами, независимо выбранными из группы, состоящей из ОН, низшего алкила, низшего циклоалкила;
О выбран из группы, состоящей из фенила, пиридила, тиазолила, тиофенила, пиримидила, каждый из которых возможно замещен одной или двумя группами, независимо выбранными из группы, состоящей из низшего алкила, галогена или СР3;
где Х = СН, Ν, ЫО;
К1 выбран из группы, состоящей из водорода, С1-С3-алкила, С1-С3-галоалкила, С3-С6-циклоалкила, С4-С5-алкилциклоалкила;
К2 и К3 независимо выбраны из группы, состоящей из водорода, С1-С3-алкила, С1-С3-галоалкила, С1-С3-алкокси, С1-С3-галоалкокси и галогена.
Предпочтительно К выбран среди СООК6 и СОЫК7К8, где Кб, К7 и К8 имеют значения, определенные выше, более предпочтительно К представляет собой СООК6, где К6 имеет значения, определенные выше, предпочтительно К6 выбран среди Н и низшего алкила.
В равной степени в более предпочтительном варианте реализации К представляет собой СОЫК7К8, где К7 и К8 имеют значения, определенные выше, более предпочтительно К7 и К8 независимо друг от друга выбраны из Н, низшего алкила, С1-С6-алкилена-К9 и §О2-С1-С6-алкила, где К9 выбран из группы, состоящей из СООН и §О3Н.
А предпочтительно выбран из тех групп, определенных выше, которые не замещены. Более предпочтительно А представляет собой фенил.
В альтернативном предпочтительном варианте реализации в комбинации с любыми выше- и нижеприведенными вариантами реализации А предпочтительно выбран из гетероциклических групп пиридила, пиразолила, бензизоксазолила и индазолила, при этом А является незамещенным или замещенным одной или двумя группами, независимо выбранными из ОН, низшего алкила, низшего циклоалкила и галогена.
предпочтительно выбран из тех групп, которые определены выше, замещенных одним заместителем. Предпочтительно заместитель представляет собой галоген, более предпочтительно С1. В частности, 0 представляет собой фенил, замещенный одним атомом галогена, предпочтительно С1.
В альтернативном предпочтительном варианте реализации в комбинации с любыми выше- и нижеприведенными вариантами реализации О представляет собой пиридильную группу, которая является незамещенной или замещенной одной или двумя группами, предпочтительно одной группой, независимо выбранной из группы, состоящей из низшего алкила, галогена и СР3.
- 4 024083
В предпочтительном варианте реализации в комбинации с любыми выше- и нижеприведенными вариантами реализации Ζ выбран из следующих групп:
Кроме того, Ζ предпочтительно выбран из структур, определенных выше, где X представляет собой СН. Более предпочтительно Ζ выбран из структур, определенных выше, где X представляет собой СН и Κι представляет собой циклоалкильную группу, предпочтительно циклопропил. Еще более предпочтительно Ζ выбран из структур, определенных выше, где X представляет собой СН и Κι представляет собой циклоалкильную группу, предпочтительно циклопропил, и К2 и Κ3, каждый, представляют собой галоген, наиболее предпочтительно С1. Наиболее предпочтительным вариантом реализации для Ζ является определенный выше, где главный гетероциклический скелет представляет собой третью структуру, определенную выше, содержащую 5-членное кольцо с фрагментом Ο-Ν.
В равной степени предпочтительном варианте реализации в комбинации с любыми выше- и нижеприведенными вариантами реализации Ζ предпочтительно выбран из структур, определенных выше, где X представляет собой N или ΝΟ, более предпочтительно X представляет собой Ν.
В предпочтительном варианте реализации в комбинации с любыми выше- и нижеприведенными вариантами реализации Κι выбран из группы, состоящей из водорода, С1-С3-алкила, С3-С6-циклоалкила и С4-С5-алкилциклоалкила, где С1-С3-алкил не замещен или замещен 1-3 заместителями, предпочтительно 1 или 2 заместителями, независимо выбранными из галогена или гидроксигруппы.
Предпочтительные комбинации Κ, А, О и Ζ имеют значения, определенные выше, и настоящее изобретение включает все комбинации предпочтительных вариантов реализации, перечисленных выше. В конкретном предпочтительном варианте реализации Κ представляет собой СООК6, где Кб имеет значения, определенные выше, предпочтительно К6 выбран из Н и низшего алкила; А представляет собой фенил; О выбран из тех групп, которые определены выше, замещенных одним заместителем, предпочтительно заместитель представляет собой галоген, более предпочтительно С1, и, в частности, О представляет собой фенил, замещенный одним атомом галогена, предпочтительно С1; и Ζ выбран среди структур, определенных выше, где X представляет собой СН и К1 представляет собой циклоалкильную группу, предпочтительно циклопропил, и Κ2 и Κ3, каждый, представляют собой галоген, наиболее предпочтительно С1.
В более предпочтительном варианте реализации настоящего изобретения соединения имеют общую структуру в соответствии с формулой (2)
где X! выбран из СН и Ν, предпочтительно СН;
К4 и К5 независимо выбраны из группы, состоящей из Н, низшего алкила, галогена или СР3, предпочтительно галогена, более предпочтительно С1.
- 5 024083 ще более предпочтительными являются соединения формул (1) или (2), которые имеют структуру, где К-А выбран из
К-Л= ноос.
Χί или где в формуле (1) или (2) К1 выбран из группы, состоящей из изопропила, т-бутила и циклопропила; К2 и К3 независимо выбраны из группы, состоящей из галогена, С1-С3-алкила, метокси и трифторметокси, предпочтительно представляют собой галоген и наиболее предпочтительно С1.
Наиболее предпочтительные соединения согласно изобретению представляют собой следующие:
3-(2-(2-хлор-4-((5-циклопропил-3-(2,6-дихлорфенил)изоксазол-4-ил)метокси)фенил) циклопропил)бензойная кислота, (-)-3-(2-(2-хлор-4-((5-циклопропил-3-(2,6-дихлорфенил)изоксазол-4-ил)метокси)фенил) циклопропил)бензойная кислота, (+)-3-(2-(2-хпор-4-((5-циклопропил-3-(2,6-дихлорфенил)изоксазол-4-ил)метокси)фенил) циклопропил)бензойная кислота,
3-(2-(2-хлор-4-((3-(2,6-дихлорфенил)-5-изоп рол илизоксазол-4-ил)метокси)фенил) циклопропил)бензойная кислота,
3- (2-(2-хлор-4-((5-циклопропил-3-(3,5-дихлорпиридин-4-ил)изоксазол-4-ил)метокси) фенил)циклопропил)бензойная кислота,
4- (4-((4-(2-(3- карбоксифенил)циклопропил )-3-хлорфенокси)метил)-5циклопропилизоксазол-3-ил)-3,5-дихлорпиридин-1 -оксид,
3- (2-(2-хл ор-4-((1 -(2,6-дихлорфенил)-4-изопропил-1 Н-1,2,3-триазол-5-ил)метокси)фенил) циклопропил)бензойная кислота,
4- ((4-(2-(6-(1 /-/-тетразол-5-и л) пириди н-3-ил)циклоп ропил )-3-хлорфенокси) метил)-5циклопропил-3-(2,6-дихлорфенил)изоксазол или
5- (2-(2-хлор-4-((5-циклопропил-3-(2,6-дихлорфенил)изоксазол-4-ил)метокси)фенил) циклопропил)пиколиновая кислота.
- 6 024083
В равной степени наиболее предпочтительные соединения согласно изобретению представляют собой следующие:
3- (2-(6-((5-циклолропил-3-(2,6-дихлорфенил)изоксазол-4-ил)метокси)-2-(трифторметил) пиридин-3-ил)циклопропил)бензойная кислота,
4- (2-(2-хлор-4-((5-циклопропил-3-(2,6-дихлорфенил)изоксазол-4-ил)метокси)фон ил) циклопролил)бензойная кислота,
1,3-дигидрокси-2-(гидроксиметил)пропан-2-аминия 4-(2-(2-хлор-4-((5-циклопролил-3-(2,6дихлорфенил)изоксазол-4-ил)метокси)фенил)циклопролил)бензоат, (+)-4-(2-(2-хлор-4-((5-циклоп рол ил-3-(2,6-дихлорфеиил)изоксазол-4-ил)метокси)фен ил) циклопролил)бензойная кислота, (-)-4-(2-(2-хлор-4-((5-циклопропил-3-(2,6-дихлорфенил)изоксазол-4-ил)метокси)феиил) циклопролил)бензойная кислота,
6-(2-(2-хлор-4-((5-циклолропил-3-(2,6-дихлорфенил)изоксазол-4-ил)метокси)фонил) циклопролил)-1-метил-1 Н-индазол-З-карбоновая кислота, (+)-6-(2-(2-хлор-4-((5- циклоп рол ил-3-(2,6-дихлорфеиил)изоксазол-4-ил)метокси)фен ил) циклопролил)-1-метил-1 Н-индазол-З-карбоновая кислота, (-)-6-(2-(2-хлор-4-((5-циклопропил-3-(2,6-дихлорфанил)изоксазол-4-ил)метокси)фенил) циклопролил)-1-метил-1 Н-индазол-З-карбоновая кислота,
4-(2-(2-хлор-4-((5-циклолропил-3-(2,6-дихлорфенил)изоксазол-4-ил)метокси)фон ил) циклопролил)-Ы-(метилсульфонил)бензамид,
2- (4-(2-(2-хлор-4-((5-циклопропил-3-(2,6-дихлорфенил)изоксазол-4-ил)метокси)фенил) циклопролил)бензамидо)этансульфоновая кислота,
4-((4-(2-(4-(1 Н-тетразоп-5-ил)фенил)циклопропип)-3-хлорфенокси)метил)-5-циклопропил3- (2,б-дихлорфенил)изоксазол,
4- (2-(2-хлор-4-((3-(2,6-дихлорфенил)-5-(2тццроксипролан-2-ил)изоксазол-4-ил)метокси) фенил)циклопропил)бензойная кислота,
5- (2-(2-хлор-4-((5-циклопропил-3-(2,6-дихлорфенил)изоксазол-4-ил)метокси)фенил) циклопролил)-1-изопропил-1 Н-лиразол-З-карбоновая кислота,
6- (2-(2-хлор-4-((5-циклопропил-3-(2,6-дихлорфенил)изоксазол-4-ил)метокси)фенил) циклопролил)-1-изопропил-1 Н-индазол-З-карбоновая кислота, 4-(2-(2-хлор-4-((5-циклолропил-3-(2,6-дихлорфенил)изоксазол-4-ил)метокси)фенил) циклопролил)-2,6-диметилбензойная кислота,
4-(2-(2-хлор-4-((5-циклопропил-3-(2-(трифторметокси)фенил)изоксазол-4-ил)метокси) фенил)циклопропил)бензойная кислота, (+)-2-(4-(2-(2-хлор-4-((5-циклопропил-3-(2,6-дихлорфенил)изоксазол-4-ил)метокси) фенил)циклопропил)бензамидо)этансульфоновая кислота, (-)-2-(4-(2-(2-хлор-4-((5-циклопропил-3-(2,6-дихпорфенип)изоксазол-4-ил)метокси)фенил) циклопролил)бензамидо)этансульфоновая кислота,
2-(4-(2-(2-хлор-4-((5-циклопропил-3-(2,6-дихлорфенил)изоксазол-4-ил)мотокси)фенил) циклопролил)бензамидо)уксусная кислота или
4-(2-(2-хлор-4-((4-(2,6-дихлорфен ил )-1-изопропил-1 Н-1,2,3-триазол-5-ил)метокси)фенил) циклопропил)бензойная кислота.
Соединения согласно настоящему изобретению могут быть в форме пролекарств. Пролекарство означает производное, которое превращается в соединение согласно настоящему изобретению посредством реакции с ферментом, желудочным соком и т.п. при физиологических условиях в живом организме, например посредством реакций окисления, восстановления, гидролиза и т.п., каждая из которых осуществляется ферментативным путем. Примерами пролекарств являются соединения, у которых аминогруппа в соединении согласно настоящему изобретению ацилирована, алкилирована или фосфорилирована с образованием, например, эйкозаноиламиногруппы, аланиламиногруппы, пивалоилоксиметиламиногруппы, или у которых гидроксильная группа ацилирована, алкилирована, фосфорилирована или превращена в борат, например ацетилоксигруппа, пальмитоилоксигруппа, пивалоилоксигруппа, сукцинилоксигруппа, фумарилоксигруппа, аланилоксигруппа, или у которых карбоксильная группа этерифицирована или амидирована. Данные соединения могут быть получены из соединений согласно настоящему изобретению в соответствии с хорошо известными способами. Другие примеры пролекарств представляют собой соединения, где карбоксилат в соединении согласно настоящему изобретению превращен, например, в
- 7 024083 алкиловый, ариловый, холиновый сложный эфир, сложный эфир, содержащий аминогруппу, ацилоксиметиловый сложный эфир, линоленоиловый сложный эфир.
Метаболиты соединений согласно настоящему изобретению также находятся в рамках настоящего изобретения.
Там, где возможна таутомерия, такая как, например, кетоенольная таутомерия, соединений согласно настоящему изобретению или их пролекарств, индивидуальные формы, такие как, например, кето- и енольная форма, каждая, находятся в рамках изобретения, так же как и их смеси в любом соотношении. То же справедливо для стереоизомеров, таких как, например, энантиомеры, цис/транс-изомеры, конформеры и т.п.
При необходимости изомеры могут быть разделены с помощью способов, хорошо известных в данной области, например с помощью жидкостной хроматографии. Разделение также выполнимо для энантиомеров путем применения, например, хиральных неподвижных фаз. Кроме того, энантиомеры могут быть выделены путем превращения их в диастереомеры, т.е. соединения с энантиомерно чистым вспомогательным соединением, последующим разделением получающихся диастереомеров и отщеплением вспомогательного остатка. Альтернативно, любой энантиомер соединения согласно настоящему изобретению может быть получен в результате стереоселективного синтеза с применением оптически чистых исходных веществ. Другой путь получения чистых энантиомеров из рацемических смесей заключался бы в применении энантиоселективной кристаллизации с хиральными противоионами.
Соединения согласно настоящему изобретению могут находиться в форме фармацевтически приемлемой соли или сольвата. Термин фармацевтически приемлемые соли относится к солям, полученным из фармацевтически приемлемых нетоксичных оснований или кислот, включая неорганические основания или кислоты и органические основания или кислоты. В случае, если соединения согласно настоящему изобретению содержат одну или более кислотных или основных групп, изобретение также включает их соответствующие фармацевтически или токсикологически приемлемые соли, в частности их соли, применяемые в фармации. Таким образом, соединения согласно настоящему изобретению, которые содержат кислотные группы, могут быть представлены данными группами и могут быть применены согласно изобретению, например, в виде солей щелочных металлов, солей щелочно-земельных металлов или аммониевых солей. Более точные примеры таких солей включают натриевые соли, калиевые соли, кальциевые соли, магниевые соли или соли с аммиаком или органическими аминами, такими как, например, этиламин, этаноламин, триэтаноламин или аминокислоты. Соединения согласно настоящему изобретению, которые содержат одну или более основных групп, т.е. групп, которые могут быть протонированы, могут быть представлены и могут быть применены согласно изобретению в форме их аддитивных солей с неорганическими или органическими кислотами. Примеры подходящих кислот включают хлороводород, бромоводород, фосфорную кислоту, серную кислоту, азотную кислоту, метансульфоновую кислоту, п-толуолсульфоновую кислоту, нафталиндисульфоновые кислоты, щавелевую кислоту, уксусную кислоту, винную кислоту, молочную кислоту, салициловую кислоту, бензойную кислоту, муравьиную кислоту, пропионовую кислоту, триметилуксусную кислоту, диэтилуксусную кислоту, малоновую кислоту, янтарную кислоту, пимелиновую кислоту, фумаровую кислоту, малеиновую кислоту, яблочную кислоту, сульфаминовую кислоту, фенилпропионовую кислоту, глюконовую кислоту, аскорбиновую кислоту, изоникотиновую кислоту, лимонную кислоту, адипиновую кислоту и другие кислоты, известные специалисту в данной области техники. Если соединения согласно настоящему изобретению одновременно содержат кислотные и основные группы в молекуле, изобретение также включает, наряду с упомянутыми формами солей, внутренние соли или бетаины (цвиттер-ионы). Соответствующие соли могут быть получены с помощью обычных способов, которые известны специалисту в данной области техники, таких как, например, взаимодействие соединений согласно изобретению с органической или неорганической кислотой или основанием в растворителе или диспергирующем агенте или анионный обмен или катионный обмен с другими солями. Настоящее изобретение также включает все соли соединений согласно настоящему изобретению, которые вследствие низкой физиологической совместимости непосредственно не подходят для применения в фармацевтических препаратах, но которые могут быть применены, например, в качестве промежуточных продуктов для химических реакций или для получения фармацевтически приемлемых солей.
Кроме того, соединения согласно настоящему изобретению могут присутствовать в форме сольватов, таких как те, которые включают в качестве сольвата воду или фармацевтически приемлемые сольваты, такие как спирты, в частности этанол.
К тому же, согласно настоящему изобретению предложены фармацевтические композиции, содержащие по меньшей мере одно соединение согласно настоящему изобретению, или его пролекарство, или его фармацевтически приемлемую соль или сольват в качестве активного ингредиента совместно с фармацевтически приемлемым носителем.
Фармацевтическая композиция означает один или более активных ингредиентов и один или более инертных ингредиентов, которые составляют носитель, также как и любой продукт, который получается, прямо или опосредованно, в результате объединения, комплексообразования или агрегации любых двух или более ингредиентов, или в результате диссоциации одного или более ингредиентов, или в результате
- 8 024083 других типов реакций или взаимодействий одного или более ингредиентов. Соответственно, фармацевтические композиции согласно настоящему изобретению включают любую композицию, полученную путем смешивания по меньшей мере одного соединения согласно настоящему изобретению и фармацевтически приемлемого носителя.
Фармацевтическая композиция согласно настоящему изобретению может дополнительно содержать одно или более других соединений в качестве активных ингредиентов, таких как пролекарство или другие модуляторы ядерных рецепторов.
Композиции подходят для перорального, ректального, местного, парентерального (включая подкожное, внутримышечное и внутривенное), офтальмологического (глазного), легочного (назальная или буккальная ингаляция) или назального введения, хотя наиболее подходящий путь введения в любом данном случае будет зависеть от природы и тяжести состояний, подлежащих лечению, и от природы активного ингредиента. Они могут быть удобно представлены в дозированной форме для однократного введения и получены любым из способов, хорошо известных в области фармацевтики.
Соединения согласно изобретению могут быть получены с помощью комбинации способов, известных в области техники, включая методики, описанные ниже. Схема I изображает реакцию подходящего соединения формулы (I) с подходящим гетероциклическим соединением формулы II.
Схема I
Таким образом, подходящее соединение формулы II, в котором К1, К2 и К3 имеют значения, определенные в формуле (1), и Υ представляет собой уходящую группу, и подходящее соединение формулы I, в котором К, А и О имеют значения, определенные в формуле (1), или представляют собой группу, которая приводит к К, как определено в формуле (1), например, путем образования сложного эфира, амида, тетразола или кислоты, подвергают реакции с образованием соединения формулы (1) с подходящими постановками и/или снятиями защитных групп или другими стадиями, известными специалисту в данной области техники или описанными в настоящей заявке. Подходящие уходящие группы хорошо известны в данной области техники и включают галиды, в частности хлорид, бромид и йодид, эфиры сульфокислоты, такие как брозил, тозил, метансульфонил и трифторметансульфонил. Соединение формулы (I) подвергают реакции с соединением формулы (II) в подходящем растворителе, таком как ацетонитрил, диметилформамид, тетрагидрофуран и т.п. в присутствии избытка подходящего основания, такого как гидрид натрия, карбонат калия, карбонат натрия, триэтиламин, диизопропилэтиламин, трет-бутоксид калия и т.д. Такие реакции обычно проводят при температурах от комнатной до кипения выбранного растворителя.
Альтернативно, подходящее соединение формулы I, в котором К, А и О имеют значения, определенные в формуле (1), может быть сконденсировано с подходящим гетероциклическим соединением формулы II, в котором К1, К2 и К3 имеют значения, определенные в формуле (1), и Υ представляет собой гидроксил, с применением реакции Мицунобу.
Соединения, в которых К представляет собой сложный эфир, можно превратить в соединения формулы (1), в которых К представляет собой кислоту, посредством способов, хорошо известных специалисту в данной области техники. Гидролиз простых алкиловых сложных эфиров можно проводить в подходящих растворителях, таких как ацетонитрил, метанол, этанол, ТГФ и их смесей с водой при температурах примерно 25-100°С с подходящими основаниями, такими как гидроксид натрия, гидроксид калия и гидроксид лития. В случае, когда К представляет собой трет-бутиловый сложный эфир, соответствующая кислота может быть получена в кислых условиях, хорошо известных специалистам в данной области техники.
Соединения формулы (I) и (II) можно легко получить с помощью способов, которые хорошо известны и установлены в области техники, включая способы и методики, описанные в настоящем документе.
Соединения формулы (I) получают из олефиновых предшественников с помощью стандартных реакций циклопропанирования, хорошо известных специалистам в данной области техники (см. Н. ЬеЬе1, Т-Р. Магсоих, С. МоЬиато, А.В. СЬатейе, СЬет. Кеу. 2003, 103, 977-1050). Например, реакция возможно замещенного производного стильбена с реагентом Симмонса-Смита (КиСНД) в подходящих растворителях, таких как эфир, ТГФ, гексан, толуол, дихлорметан, при температурах от -20°С до примерно кипения выбранного растворителя дает соединения формулы I. Возможно замещенные стильбены могут быть
- 9 024083 получены путем сочетания Хорнера-Эммонса арилальдегида и арилметиленфосфонового эфира или путем сочетания Хека возможно замещенного стирола с возможно замещенным арилбромидом, йодидом или трифлатом в присутствии палладиевого катализатора. Как изображено на схеме I, циклопропанирование возможно замещенных стильбенов можно проводить после сочетания с возможно замещенным гетероциклом формулы II.
Соединения согласно изобретению имеют хиральные центры и могут существовать в оптически активных формах. Если требуется стереоизомер, его можно получить с помощью способов, хорошо известных в данной области техники. Например, рацемическая смесь соединений формулы (1) может быть разделена с помощью хроматографии на хиральной колонке. Альтернативно, рацемическая смесь соединений формулы (1), в которой К представляет собой кислоту, может быть разделена путем кристаллизации с подходящими хиральными аминами, такими как α-фенэтиламин, бруцин, цинхонин. Рацемат может также быть химически дериватизирован с другим энантиомерно чистым реагентом, таким как хиральный спирт, который может быть введен в реакцию с группой -СООН с превращением рацемических смесей в смеси диастереомерных эфиров, которые можно разделить с помощью традиционных хроматографических способов или других стандартных способов разделения. Разделение энантиомеров можно также выполнить на уровне рацемических соединений формулы I. Оптически активные соединения формулы (I) могут далее быть подвергнуты реакции с гетероциклическим соединением формулы II, как изложено вкратце на схеме I, с получением оптически активных соединений формулы (1).
Перечень фигур чертежей и иных материалов
На фиг. 1а представлена зависимость средней концентрации соединения согласно примеру 12 от времени после перорального введения обезьянам (12 мг/кг; п=3).
На фиг. 1Ь представлена зависимость средней концентрации соединения согласно примеру 4 от времени после перорального введения (12 мг/кг; п=3).
На фиг. 1с представлены уровни исходного соединения в плазме в [нМ] после введения через желудочный зонд одной дозы 5 мг/кг СА4064 и соединения согласно примеру 4 по отдельности мышам С57 ВЬК8 1ерг-/- 6Ь/6Ь. Данные отображают среднее из 3 индивидуальных измерений в плазме мыши.
На фиг. 2а представлены химическая структура соединения СА4064 и его УФ-спектр.
На фиг. 2Ь представлены химическая структура соединения РХ20535 и его УФ-спектр.
На фиг. 2с представлены химическая структура соединения согласно примеру 4 и его УФ-спектр.
На фиг. 3а представлен спектр 'Н ЯМР соединения СА4064 при 1=0, до УФ-облучения при 254 нм.
На фиг. 3Ь представлен спектр 1Н ЯМР соединения РХ20535 при 1=0, до УФ-облучения при 254 нм.
На фиг. 3с представлен спектр 1Н ЯМР соединения согласно примеру 4 при 1=0, до УФ-облучения при 254 нм.
На фиг. 36 представлен спектр 1Н ЯМР соединения СА4064 при времени УФ-облучения при 254 нм 1=44.
На фиг. 3е представлен спектр 1Н ЯМР соединения РХ20535 при времени УФ-облучения при 254 нм 1=44.
На фиг. 3£ представлен спектр 1Н ЯМР соединения согласно примеру 4 при времени УФ-облучения при 254 нм 1=44.
На фиг. 3§ представлен спектр 1Н ЯМР соединения СА4064 при времени УФ-облучения при 254 нм 1=154.
На фиг. 31ι представлен спектр 1Н ЯМР соединения РХ20535 при времени УФ-облучения при 254 нм 1=154.
На фиг. 3ί представлен спектр 1Н ЯМР соединения согласно примеру 4 при времени УФ-облучения при 254 нм 1=154.
На фиг. 3_) представлен спектр 1Н ЯМР соединения СА4064 при времени УФ-облучения при 254 нм 1=704.
На фиг. 3к представлен спектр 1Н ЯМР соединения РХ20535 при времени УФ-облучения при 254 нм 1=704.
На фиг. 31 представлен спектр 1Н ЯМР соединения согласно примеру 4 при времени УФ-облучения при 254 нм 1=704.
На фиг. 3 т приведено сравнение УФ-стабильности, влияния облучения при λ=366 нм на тонкую пленку с ДМСО.
Фиг. 4 иллюстрирует содержание холестерина и триглицеридов в плазме после 8 недель при рационе с высоким содержанием жира (РВСЖ) в присутствии или в отсутствие соединений.
Фиг. 5 иллюстрирует содержание холестерина и триглицеридов печени после 8 недель на рационе с высоким содержанием жира (РВСЖ) в присутствии или в отсутствие соединений.
Фиг. 6 иллюстрирует индукцию гена-мишени РХК в печени мыши.
- 10 024083
Способы синтеза
Соединения формулы (II) могут быть получены, как изображено на схемах 1а-1Д Изоксазоловые соединения формулы (II) получают путем реакции возможно замещенных бензальдегидов с гидроксиламином в присутствии подходящего основания, такого как триэтиламин, с последующим хлорированием с подходящим хлорирующим агентом, таким как Ν-хлорсукцинимид. Полученные хлороксимы подвергают реакции с подходящим β-кетоэфиром в основных условиях с подходящим основанием, таким как триэтиламин или метоксид натрия, с получением сложных эфиров изоксазола. Данные сложные эфиры могут быть восстановлены до спиртов формулы (II) с помощью хорошо известных способов, таких как применение литийалюминийгидрида (ЬАН) или диизобутилалюминийгидрида (□(ВАЕ), и превращены в уходящую группу. 1-Арил-4-алкилтриазоловые соединения формулы (II) могут быть получены путем добавления замещенных пропаргиловых спиртов к замещенным ароматическим азидам и последующего превращения гидроксигруппы в подходящую уходящую группу. 1-Арил-4-алкилтриазоловые соединения формулы (II) могут быть получены путем добавления возможно замещенного азида к ацетиленовому сложному эфиру с последующим восстановлением до спирта и превращением в уходящую группу. Пиразоловые соединения формулы (II) получают путем реакции возможно замещенного фенилгидразина с 1,3-дикетоэфиром с последующим восстановлением и превращением в уходящую группу.
Соединения согласно настоящему изобретению синтезировали по одной из схем 2-14, начиная с различных хлорметиларильных (С1-СН2-Аг) структурных блоков, которые синтезировали в соответствии со схемами 1а-Д Как изображено на схеме 2, в результате реакции одного из хлорметиларильных (С1-СН2-Аг) структурных блоков А6а-е с арилциклопропиларильным структурным блоком В13 и последующего омыления метилового эфира до свободной кислоты образовались соединения согласно примерам 1-6 (схема 2). Реакция хлорметиларила (С1-СН2-Аг) А6е с (гетеро)арилциклопропиларильным структурным блоком С6 (схема 3) привела к получению нитрильного предшественника С7, который или превращали в тетразол (пример 7) путем реакции с ΝαΝ3 и ЫН4С1, или омыляли до свободной кислоты (пример 8, см. схему 3). Соединение согласно примеру 9 получали в соответствии со схемой 4.
Пиридон Ό2 алкилировали с помощью структурного блока А6е до промежуточного продукта Ό3. За двухстадийной трансформацией сложноэфирной группы в альдегид Ό5 следовала реакция ХорнераВадсворта-Эммонса (Н\УЕ) с получением стильбеноподобного промежуточного продукта Ό6. Циклопропанирование и гидролиз сложного эфира позволили получить конечное соединение согласно примеру 9. Синтез соединения согласно примеру 10 показан на схеме 5. Фосфонат Е5 и 3-формилпиридин подвергали реакции с образованием стильбеноподобного промежуточного продукта Е12, который после снятия защиты и алкилирования с помощью А6е подвергали циклопропанированию. Конечный гидролиз сложного эфира позволил получить соединение согласно примеру 10. Соединение согласно примеру 11 синтезировали в соответствии со схемой 6. Бензизоксазолкарбальдегид Р5 подвергали реакции с фосфонатом Р9 с образованием промежуточного продукта Р10, содержащего стильбеновую структуру. Циклопропанирование и снятие защиты позволили получить соединение согласно примеру 11.
Соединения согласно примерам 12-14 получали в соответствии со схемой 7, аналогичной схеме 2, но в которой применяли 4-метоксикарбонилфосфонат 01. На схеме 8 показан синтез соединения согласно примеру 15. Стильбеноподобный предшественник Н6 получают по реакции Хека кросс-сочетания броминдазола Н4 и олефина Н5. Циклопропанирование и гидролиз сложного эфира привели к получению конечного соединения согласно примеру 15. Соединение согласно примеру 16 получают в соответствии со схемой 9. Трансстильбен с защитной О-метильной группой сначала циклопропанируют и далее сложноэфирную группу превращают в цианогруппу. О-деметилирование и алкилирование с помощью А6е привели к получению промежуточного продукта 17, содержащего цианогруппу, который подвергают реакции с азидом натрия с получением тетразола согласно примеру 16. Синтез соединения согласно примеру 17 показан на схеме 10. А5а ацетилировали с последующим бромированием в бензильное положение с применением Ν-бромсукцинимида (ΝΒ3). В результате обработки ЭВИ и К2СО3 образовался промежуточный продукт 13, гидроксигруппа которого была защищена с помощью ТВЗОТГ. За окислением с применением О§О4 и ЫаЮ4 последовало добавление метилмагнийхлорида (реактива Гриньяра) и снятие защиты с гидроксигруппы с помощью тетрабутиламмонийфторида (ТВАР) с получением 17. Реакция Мицунобу с 12а и омыление сложного эфира позволили получить конечное соединение согласно примеру 17. На схеме 11 показан синтез соединения согласно примеру 18. Реакция 16 с диазометаном и последующее снятие защиты ТВЗ позволили получить промежуточный продукт К2. Данный промежуточный продукт превращали в конечное соединение согласно примеру 18 способом, аналогичным тому, который описан для примера 17. На схеме 12 показан синтез соединения согласно примеру 19. Метил-3оксобутаноат вводили в реакцию с А3а с образованием изоксазола Ь1. Реакция с ДМФА-ДМА с последующей обработкой 8Ю2 и НС1 позволили получить альдегид Ь3, который восстановили до Ь4 с помощью ЫаВН4. За этим последовали защита ОН-группы с помощью 3,4-дигидропирана, восстановление сложного эфира с применением ЭШАТ-Н и реакция Мицунобу с 12а с получением промежуточного продукта Ь7. Омыление сложного эфира и снятие защиты с гидроксигруппы позволили получить конечное соединение согласно примеру 19.
- 11 024083
В итоге, настоящее изобретение относится к соединениям в соответствии с общей формулой (I), которые связывают рецептор ΝΚ1Η4 (РХК) и действуют как агонисты или модуляторы рецептора ΝΚ1Η4 (РХК).
Изобретение также относится к применению указанных соединений для лечения и/или профилактики заболеваний и/или состояний за счет связывания указанного ядерного рецептора указанными соединениями. Кроме того, настоящее изобретение относится к применению указанных соединений для получения лекарственного препарата для лечения и/или профилактики заболеваний и/или состояний за счет связывания указанного ядерного рецептора указанными соединениями. Конкретно, настоящее изобретение относится к применению соединений в соответствии с формулой (1) для получения лекарственного препарата для профилактики и/или лечения хронических внутрипеченочных или некоторых форм внепеченочных холестатических состояний, фиброза печени, возникающего в результате хронических холестатических состояний, острых внутрипеченочных холестатических состояний, обструктивных или хронических воспалительных расстройств, которые являются результатом неправильного состава желчи, желудочно-кишечных состояний со сниженным поглощением входящего в рацион жира и жирорастворимых входящих в рацион витаминов, воспалительных заболеваний кишечника, липидных и липопротеиновых расстройств, диабета II типа и клинических осложнений диабета I и II типов, состояний и заболеваний, возникающих в результате хронической жировой и фиброзной дегенерации органов из-за усиленного накопления липидов и конкретно триглицеридов и последующей активации профиброзных путей, ожирения и метаболического синдрома (общие состояния дислипидемии, диабета и аномально высокого индекса массы тела), острого инфаркта миокарда, острого инсульта, тромбоза, который случается в качестве конечной стадии хронического обструктивного атеросклероза, хронических инфекций, вызываемых внутриклеточными бактериями или простейшими паразитами, незлокачественных гиперпролиферативных расстройств, злокачественных гиперпролиферативных расстройств, аденокарциномы толстой кишки и гепатоцеллюлярной карциномы в частности, стеатоза печени и связанных синдромов, печеночной недостаточности или нарушения функции печени как результата хронических заболеваний печени или хирургической резекции печени, инфекции гепатита В, инфекции гепатита С и/или холестатических и фиброзных эффектов, которые связаны с вызванным алкоголем циррозом или с передаваемыми вирусами формами гепатита.
Лекарственные средства, упоминаемые в настоящем описании, могут быть получены традиционными способами, включая объединение соединения согласно настоящему изобретению и фармацевтически приемлемого носителя.
РХК, как предполагают, является ядерным рецептором желчных кислот. В результате, он модулирует как синтетическую выработку желчных кислот в печени, так и их циркуляцию в кишечнике (путем регулирования белков, связывающих желчные кислоты). Но, помимо участия в физиологии желчных кислот, РХК, по-видимому, вовлечен в регуляцию многих разнообразных физиологических процессов, которые соответствуют в этиологии и для лечения заболеваний, таких разнообразных как холестериновые желчные камни, метаболические расстройства, такие как диабет II типа, дислипидемии или ожирение, хронические воспалительные заболевания, такие как воспалительные заболевания кишечника или хронические внутрипеченочные формы холестаза и многие другие заболевания (Т. С1аибе1 е! а1. ТЬе Ратеко1б X гесерЮг: а то1еси1аг 1шк Ье1\уееп Ы1е ааб апб Ιίρίά апб д1исоке те!аЬоЬкт. Абегюкс1ег. ТЬготЬ. Уаке. Βίο1. 2005, 25(10), 2020-2030; Υ.Ό. \Уапд е! а1. РХК: а те!аЬоЬс геди1а!ог апб се11 рго!ес!ог. Се11 Кек. 2008, 18(11), 1087-1095.
РХК регулирует сложный набор генов ответа в печени и желудочно-кишечном тракте. Продукты генов оказывают влияние на разнообразные физиологические процессы. В ходе функционального анализа РХК первой проанализированной регуляторной сетью была регуляция синтеза желчных кислот. В то время как печеночные Х-рецепторы (ЬХК) индуцируют ключевой фермент превращения холестерина в желчные кислоты, цитохром Р450 7А1 (Сур7А1), посредством индукции регуляторного ядерного рецептора ЬКН-1, РХК репрессирует индукцию Сур7А1 посредством активирования синтеза мРНК, кодирующей малый гетеродимерный партнер (8НР), дополнительный ядерный рецептор, который доминантно репрессирует ЬКН-1. Так как РХК связывает конечные продукты данного пути, первичные желчные кислоты, такие как холевая кислота (ХК) или хенодезоксихолевая кислота (ХДХК), этот процесс можно рассматривать в качестве примера ингибирования по принципу обратной связи на уровне экспрессии генов (В. Сооб\уш е! а1. А геди1а!огу саксабе о£ !Ье пис1еаг гесерЮгк РХК, 8НР-1, апб ЬКН-1 гергеккек Ьбе ааб ЬюкуйЬек1к. Мо1. Се11, 2000, 6(3), 517-526; Т. Ьи е! а1. Мо1еси1аг Ьак1к £ог ГеебЬаск геди1аЬоп о£ Ьбе ааб куп!Ьек1к Ьу пис1еаг гесер!огк. Мо1. Се11, 2000, 6(3), 507-515). Параллельно репрессии синтеза желчных кислот посредством §НР, РХК индуцирует ряд так называемых АТФ-связывающих кассетных транспортеров (АВС-транспортеров), которые отвечают за экспорт токсичных желчных кислот из цитозоля гепатоцита в канальцы, маленькие ответвления желчного протока, где образуется желчь. Данная гепатопротекторная функция РХК стала впервые очевидной с помощью анализа мышей с выключенным геном РХК (С. δίπηί е! а1. Тагде!еб б1кгирбоп о£ !Ье пис1еаг гесер!ог РХК/ВАК шраКк Ьбе ааб апб бр1б Ьотеок!ак1к. Се11, 2000, 102(6), 731-744), где была показана пониженная или повышенная экспрессия нескольких АВС-транспортеров в печени. В результате дальнейшего детального анализа обнаружили,
- 12 024083 что главный экскреторный насос солей желчных кислот ΒδΕΡ или АВСВ11 (М. Апап!Ьапагауапап с! а1. Нитап Ы1е 8а1! схрой ритр ргото!сг 18 1гап8асйуа!сй Ьу 1Ьс ГагпсвоИ X гесерЮг/Ьйс аай гсссрЮг. I. ΒίοΙ. СЬет. 2001, 276(31), 28857-28865; I. Р1а88 с! а1. Ратс8о1Й X гссср!ог апй ЬПс 8аЬ8 агс шуокей ίη 1гап8спр0опа1 гсдикЧюп оГ 1Ьс депе епсоФпд 1Ьс Ьитап Ьйс 8аЬ схрой ритр. Нсра1о1оду. 2002, 35(3), 589596), так же как и ключевой фермент, который опосредует перенос липидов от липопротеинов к фосфолипидам, РЬТР (Ν. ип/аг с! а1. ТЬе Гагпс8оИ X-ас!^νа!сй гсссрЮг тсФа1с8 ЬПс асЮ асРуаРоп оГ рЬо8рЬоЬр1Й 1гап8Гсг рго!сш депе схргс88юп. I. Вю1. СЬет. 2000, 275(50), 39313-39317) и два ключевых канальцевых мембранных транспортера для фосфолипидов, МКР-2 (АВСС4) (Н. Ка8! с! а1. Ксди1айоп оГ тиШйгид гс8181апсс-а88ос1а1сй рго!ап 2 (АВСС2) Ьу !Ьс пис1саг гссср!ог8 ргсдпапс X гссср!ог, Гагпс8оИ X-ас!^νа!сй гссср!ог, апй соп8!йийус апйго8!апс гесерЮг. ί. Вю1. СЬет. 2002, 277(4), 2908-2915) и МИК-3 (АВСВ4); Ь. Ниапд с! а1. Рагпс8о1й X гссср!ог асРуаЮ8 РгпъспрРоп оГ !Ьс рЬо8рЬоЬр1й ритр МИК3. ί. Вю1. СЬет. 2003, 278(51), 51085-51090) являются прямыми мишенями для управляемой лигандом активации транскрипции посредством ΡXΚ (кратко изложено в М. М1уа!а Ко1с оГ Гагпс8о1й X гссср!ог ш !Ьс спЬапсстсп! оГ сапаЪси1аг Ьйс аий ои!ри! апй схсгсРоп оГ ипсофидаЮй Ьйс аай8: а тссЬат8т Гог рго!сс!юп адат8! сЬоЬс аай-шйиссй Ьусг 1ох1с11у, ί. РЬагтасо1. Ехр. ТЬсг. 2005, 312(2), 759-766; С. Κίζ/о с! а1. Ко1с оГ ΡXΚ ш гсди1а!тд Ьйс аай Ьотсо81а818 апй гс1суапсс Гог Ьитап й18са8с8 Сигг. Эгид Тагдс!8 1ттипс Епйосг. Мс!аЬо1. И18огй. 2005, 5(3), 289-303.)
Тот факт, что ΡXΚ, по-видимому, является главным рецептором метаболитов и регулятором синтеза, экспорта и рециркуляции желчных кислот, позволил предложить применение лигандов ΡXΚ для индукции выделения желчи и изменения состава желчных кислот в сторону более гидрофильного состава. С разработкой первого синтетического лиганда ΡXΚ СА4064 (Р. Ма1опсу с! а1. ЮспРЛсаРоп оГ а сЬстюа1 !оо1 Гог !Ьс огрЬап пис1саг гссср!ог ΡXΚ. I. Мей. СЬет. 2000, 43(16), 2971-2974; Т. Айкоп с! а1. СЬстюа1 дспотю8: Гипс!юпа1 апа1у818 оГ огрЬап пис1саг гссср!ог8 т !Ьс гсди1аРоп оГ Ьйс аай тс1аЬо1кт. Мей. Кс8. Кеу. 2001, 21(6) 513-522) в качестве модельного соединения и полусинтетического искусственного лиганда на основе желчной кислоты 6-альфа-этил-ХДХК могут быть проанализированы эффекты сверхстимуляции ΡXΚ мощными агонистами. Показано, что оба лиганда индуцируют выделение желчи у животных с перевязанными желчными протоками. Более того, кроме желчегонных эффектов, также могут быть показаны гепатопротекторные эффекты (К. РеШсаай с! а1. 6а1рЬа-с1Ьу1-сЬспойсохусЬоИс аай (6-ЕСИСА), а ро!сп! апй 8с1ссйус ΡXΚ адоп18! спйо\усй \\йЬ апРсЬо1с81аРс асНуПу. ί. Мей. СЬет. 2002, 45(17), 3569-3572; Υ. Ьш с! а1. Нсра!орго!ссйоп Ьу !Ьс Гатс8о1й X гссср!ог адопк! СА4064 т га! тойс18 оГ тйа- апй схйаЬсраРс сЬо1с8!а8к. ί. СЬп. 1пус8!. 2003, 112(11), 1678-1687). Данный гепатопротекторный эффект был далее сужен до противофиброзного эффекта, который является результатом репрессии тканевых ингибиторов матриксных металлопротеиназ, Т1МР-1 и 2, индукции матриксной металлопротеиназы 2 (ММР-2), расщепляющей отложения коллагена в звездчатых клетках печени и последующего снижения уровня мРНК альфа-коллагена и мРНК трансформирующего ростового фактора бета (ТСР-Ьс!а), которые оба являются профиброзными факторами, агонистами ΡXΚ (δ. РЮгиса с! а1. ТЬе пис1саг гссср!ог δ№ тсФа!с8 йййЬйюп оГ НераНс 8!с11а!с сс118 Ьу РXΚ апй рго!сс!8 адат8! Ьусг йЬго8к, Са8!госп!сго1оду, 2004, 127(5), 1497-1512; δ. Рюгиса с! а1. А Гагпс8о1й х гссср!ог-8та11 ЬсЮгоФтег райпег гсди1а!огу са8сайс тойи1а!с8 Й88ис тс!а11орго!апа8с 1пЬ1Ьйог-1 апй та!пх тс1а11орго1са8с схргс88юп ш ПераНс 8!с11а!с сс118 апй ргото!с8 гс8о1и!юп оГ Ьусг йЬго8к. I. РЬагтасо1. Ехр. ТЬсг. 2005, 314(2), 584-595). Кроме того, противохолестатическая активность была показана в моделях животных с перевязанными желчными протоками, так же как и в моделях животных с холестазом, индуцированным эстрогенами (δ. Рюгиса с! а1. РгоЮсРус сГГсс!8 оГ 6-с!Ьу1 сЬепойсохусЬойс аай, а Гагпс8о1й X гссср!ог Ьдапй, ш с8!годсп-тйиссй сЬо1с81а818. I. РЬагтасо1. Ехр. ТЬсг. 2005, 313(2), 604-612).
Генетические исследования показывают, что в наследственных формах холестаза (прогрессивный семейный внутрипеченочный холестаз = ПСВХ, тип Ι-ΐν) или понижена ядерная локализация самого РXΚ как следствие мутации в гене Р1С1 (в ПСВХ I типа, также называемой болезнью Байлера) (Р. СЬеп с! а1. Ргодгс881ус ГатШа1 тйаЬсраРс сЬо1с8!а818, !урс 1, 18 а88оаа!сй \\ЬЬ йссгса8сй Гагпс8о1й X гссср!ог асйуйу Са8йосп!сго1оду. 2004, 126(3), 756-764; Ь. А1уагс/ с! а1. Кейисей ЬсраНс схргс88юп оГ Гагпс8о1й X гссср!ог ш Ьсгсййагу сЬо1с8!а818 а88оаа!сй !о тЮаРоп ш АТР8В1. Нит. Мо1. Сепе!. 2004, 13(20), 24512460), или понижены уровни целевого гена РXΚ, кодирующего экспортный насос фосфолипидов МИК-3 (в ПСВХ III типа). В совокупности, существует увеличивающаяся доказательная база, что соединения, связывающие РXΚ, будут показывать важное клиническое применение в программе лечения хронических холестатических состояний, таких как первичный билиарный цирроз (ПБЦ) или первичный склерозирующий холангит (ПСХ) (рассмотрено в С. К1//о с! а1. Сигг. Эгид Тагдс!8 Iттиηс Епйосг. Мс!аЬо1. И|8огй. 2005, 5(3), 289-303; С. Ζο11пс^ Ко1с оГ пис1саг гссср!ог8 т !Ьс айаррус гс8роп8с !о ЬПс аай8 апй сЬо1с81а818: ра!Ьодспсйс апй (ЬсгарсиРс соп81йсгаРоп8. Мо1. РЬагт. 2006, 3(3), 231-251; δ. Са1 с! а1. РXΚ: а !агдс! Гог сЬо1с8!айс 8упйготс8? Ехрег! Орт. ТЬсг. Тагдс!8 2006, 10(3), 409-421).
Глубокое влияние, которое активация РXΚ имеет на метаболизм желчных кислот и экскрецию, значимо не только для холестатических синдромов, но даже больше для терапии против образования желчных камней. Холестериновые желчные камни образуются вследствие низкой растворимости холестерина, который активно выкачивается из клетки печени в просвет канальцев. Именно относительное про- 13 024083 центное содержание трех главных компонентов, желчных кислот, фосфолипидов и свободного холестерина определяет образование смешанных мицелл и, следовательно, условное насыщение раствора свободного холестерина в желчи. Полиморфизмы РХК локализуются как локусы количественных признаков как один фактор, вносящий вклад в возникновение желчекаменной болезни (Н. АНепЬигд РХК апй ЛВСС5/ЛВСС8 ак йе!егтНапк оГ сЛо1ек!его1 да11кЮпе ГогтаЛоп Ггот циайЛаЛуе ЛаД 1осик тарршд ίη т1се, Сак!гоеп!его1оду 2003, 125(3), 868-881). Применяя синтетическое модельное соединение СА4064 для РХК, можно показать, что активация РХК приводит к улучшению индекса насыщения желчи холестерином (= С81) и прямо - к отсутствию образования желчных камней у мышей С75Ь, подверженных образованию желчных камней, в то время как продемонстрировано, что лечение лекарственным средством мышей с выключенным геном РХК не оказывает действия на образование желчных камней (А. МоксЛе!!а е1 а1. РгеуепЛоп оГ сЛо1ек!его1 да11кЮпе йкеаке Ъу РХК адотк!к ш а тоизе тойе1. ЫаНге МеНсше, 2004, 10(12), 1352-1358).
Данные результаты определяют РХК как хорошую мишень для разработки низкомолекулярных агонистов, которые можно применить для предотвращения образования холестериновых желчных камней или предотвращения повторного образования желчных камней после хирургического удаления или ударно-волновой литотрипсии (обсуждается в 8. ЭоддгеП №\ν !агде!к ш апй ро!епЛа1 Леа!теп!к Гог сЛо1ек!его1 да11кЮпе йкеаке. Сигг. Орш. 1пуезЛд. Эгндк 2006, 7(4), 344-348).
Таким образом, в одном варианте реализации изобретения соединение согласно формуле (I) и фармацевтические композиции, содержащие указанное соединение, применяют для профилактики и/или лечения обструктивных или хронических воспалительных расстройств, которые возникают вследствие неправильного состава желчи, таких как холелитиаз, также известный как холестериновые желчные камни.
Помимо сильного гепатопротекторного и желчегонного, а также противофиброзного эффектов, которые демонстрирует РХК при стимулируемой низкомолекулярными соединениями активации в печени, РХК, вероятно, играет роль в защите кишечника от неопластической трансформации и от развития полипов и их перехода в аденокарциному в кишке (8. Мойка е1 а1. Ыис1еаг ЪЛе ас1й гесерЮг РХК рго!ес!к адаЛш ш!екЛпа1 НтоЛдепекк Сапсег Кек. 2008, 68(23), 9589 и К.К. Ма гап е1 а1. Рагпекок Х гесерЮг йейскпсу т тке 1еайк Ю шсгеакей ш!екЛпа1 ерЛЛеЛа1 се11 ргоЛГегаЛоп апй (итог йеуе1ортеп1 ί. РЛагтасо1. Ехр. ТЛег. 2009, 328(2), 469). Подобно ситуации с кишечником, отсутствие РХК приводит к высокому увеличению в образовании гепатоцеллюлярной карциномы (ГЦК), наиболее распространенной формы рака печени (I. Κίιη е( а1. 8роп1апеонк Лера!осагстодепекк ш Гагпекок Х гесер!ог-пи11 тке, Сагсшодепекк 2007, 28(5), 940 и Р. Уапд е( а1. 8роп1апеонк йеуе1ортеп1 оГ Луег 1итогк ш Не аЪкепсе оГ Не ЪЛе аск гесер(ог Гагпекок Х гесерЮг. Сапсег Кек. 2007, 67(3), 863). В то время как функциональный РХК препятствует образованию аденокарциномы толстой кишки и гепатоцеллюлярной карциномы, активация РХК индуцирует регенерацию печени после гепатэктомии (А. Ниапд е( а1. Ыис1еаг гесерЮг-йерепйеп! ЪЛе ас1й ЛдпаПпд к гесцйгей Гог погта1 Луег гедепегаЛоп. 8скпсе, 2006, 312 (5771), 233).
Объединенные гепатопротекторный эффект, антинеопластический эффект и эффект регенерации печени, связанные с активацией РХК, могут быть терапевтически задействованы для применения агонистов РХК в лечении тяжелых заболеваний печени. В одном варианте реализации соединения согласно изобретению и фармацевтические композиции, содержащие указанные соединения, применяют в лечении заболеваний печени, таких как гепатоцеллюлярный рак (ГЦК), стимулировании возобновления роста печени и уменьшения интенсивности побочных эффектов, связанных с обширной резекцией печени, циррозом печени, независимо от этиологии, и предотвращении или лечении ишемии печени при трансплантации печени или обширном оперативном вмешательстве на печени.
Со времени открытия первого синтетического агониста РХК и его введения грызунам стало очевидным, что РХК является ключевым регулятором триглицеридов сыворотки (Р. Ма1опеу е( а1. ί. Мей. СЛет. 2000, 43(16), 2971-2974; Т. АЛ1коп е1 а1. Мей. Кек. Кеу. 2001, 21(6), 513-522). В течение прошедших шести лет было опубликовано накапливающееся доказательство того, что активация РХК с помощью синтетических агонистов приводит к значительному снижению уровня триглицеридов сыворотки, главным образом в форме сниженных ЛПОНП, но также к сниженному общему холестерину сыворотки (Н. Как! е( а1. Рагпекок Х-асП'а1ей гесерЮг шйисек ароЛрорго!еш С-11 ЛапксЛрЛоп: а то1еси1аг шесЛапкш ЛикНд р1акта Ллд1усеЛйе 1еуе1к !о ЪЛе аскк. Мо1. ЕпйосЛпо1. 2001, 15(10), 1720-1728; Ν. υπ/аг е! а1. А паНга1 ргойис! На! 1о\уегк сЛо1ек!его1 ак ап аШадотк! Лдапй Гог РХК. 8скпсе, 2002, 296(5573), 1703-1706; С. ЬатЪеЛ е! а1. ТЛе Гагпекок Х-гесерЮг к ап еккепЛа1 геди1а!ог оГ сЛо1ек!его1 Лотеок!акк. ί. Вю1. СЛет. 2003, 278, 2563-2570; М. АаШпаЬе е! а1. ВЛе аскк 1о\уег !Лд1усеЛйе 1еуе1к \аа а раП\уау шуоМпд РХК, 8НР, апй 8КЕВР-1с. I. СЛп. 1пуек!. 2004, 113(10), 1408-1418; А. Р1дде е! а1. НераЛс оуегехргеккюп оГ тиЛпе АЪсЪ11 тсгеакек ЛераНЫЛагу Лрк кесгеЛоп апй гейисек ЛераЛс к!еа!окк. ί. Вю1. СЛет. 2004, 279(4), 2790-2799; 8. ВН/ е! а1. АсН'аОоп оГ !Ле Гагпекок Х гесер!ог йпргоуек Ирк те!аЪоЛкт ш сотЪшей ЛурегЛркетк Латк!егк. Ат. I. РЛукю1. ЕпйосЛпо1. Ме!аЪ. 2006, 290(4), Е716-722).
Однако снижение количества триглицеридов сыворотки не является единственным эффектом. Лечение мышей йЪ/йЪ или оЪ/оЪ синтетическим РХК агонистом СА4064 привело к отмеченному и совместному уменьшению триглицеридов сыворотки, общего холестерина, свободных жирных кислот, кето- 14 024083 новых тел, таких как 3-ОН бутират. Кроме того, активация РХК запускает внутриклеточный путь сигналинга инсулина в гепатоцитах, что приводит к снижению выхода глюкозы из глюконеогенеза в печени с сопутствующим увеличением гликогена в печени. Лечение РХК положительно влияло как на чувствительность к инсулину, так и на толерантность к глюкозе (К. §!аугоок е! а1. Кеди1а!юп оГ сагЬокубга!е тс1аЬо1кт Ьу 1ке Гагпе^оЛ X гесер!ог. Епбосйпо1о§у, 2005, 146(3), 984-991; Υ. 2кап§ е! а1. Ас!ка!юп оГ !ке иис1еаг гесерЮг РХК ипргсле курегд1усет1а апб курегкр1бет1а ίη б1аЬейс тке. Ргос. ЫаЙ. Асаб. δα. И8А, 2006, 103(4), 1006-1011; В. Сапой е! а1. Тке Гате8о1б X гесер!ог тоби1а!е8 аб1ро8ку апб рейркега1 Ш8и1ш БепвИкйу ίη тке. 1. Вю1. Скет. 2006, 281, 11039-11049; К. Ма е! а1. Рате8о1б X гесеркг 18 е88епйа1 Гог погта1 д1исо8е котео81а818. 1. СИп. 1пуе8к 2006, 116(4), 1102-1109; Ό. Оигап^апбоуа1 е! а1. Ро1епйа1 геди1а!огу го1е оГ !ке Гате8о1б X гесер!ог т 1ке те!аЬокс 8упбготе. ВюсЫтк, 2005, 87(1), 9398). Действие на уменьшения массы тела также недавно наблюдали у мышей, которым в избытке давали питание с высоким содержанием липидов. (С. Ь1копд е! а1. ТXК Адот8!, С\У4064. Кеуег8е8 Ме1аЬокс ОеГеск ш Шдк-Ра! Ю1е1 Реб Мке. Атегкап 01аЬе1е5 А88оаайоп (АЭА) 66'1' аппиа1 8скпкйс 8е88кп8, .Типе 2006, АЬ8йас! ЫитЬег 856-Р). Данный эффект потери массы может быть результатом индукции РXК на РСР-19, фактор роста фибробластов, что, как известно, приводит к снижению массы и атлетическому фенотипу (1. Но1! е! а1. Сепе8 Эсу. 2003, 17(13), 1581-1591; Е. Тоткпзоп е! а1. Тгашдетс тке ехрге88шд китап йЬгоЬ1а8! дгоМк Гас!ог-19 б18р1ау шсгеа8еб те!аЬокс га!е апб бесгеа8еб аб1ро8Йу. Епбосйпо1оду, 2002, 143(5), 1741-1747). В недавних заявках на патент было продемонстрировано действие агониста РXК на уменьшение массы тела (δΦίΜ е! а1. Ме!коб8 Гог ибйЫйпд Аб1родепе818 апб Гог йеайпд Туре 2 01аЬе1е5 1п!егпайопа1 Ра!еп! Аррксайоп \УО 2004/087076; δ. 1опе8 е! а1. Ме!коб8 оГ И8шд РXК Адот8!8. 1п1егпа11опа1 Ра!еп! Аррксайоп \УО 2003/080803).
При совместном рассмотрении указанные фармакологические эффекты агонистов РXК могут быть задействованы в различных терапевтических путях: компоненты, связывающие РXК, считаются подходящими для лечения диабета II типа благодаря их сенсибилизации инсулина, гликогеногенному и гиполипидемическому эффектам.
В одном варианте реализации соединения согласно изобретению и фармацевтические композиции, содержащие указанные соединения, применяют для профилактики и/или лечения диабета II типа, который может быть преодолен за счет РXК-опосредованной повышающей регуляции системной инсулиновой чувствительности и внутриклеточного инсулинового сигналинга в печени, увеличенного периферического потребления глюкозы и ее метаболизма, увеличенного запаса гликогена в печени, уменьшенного выхода глюкозы в сыворотку в ходе печеночного глюконеогенеза.
В другом варианте реализации указанные соединения и фармацевтические композиции применяют для профилактики и/или лечения хронических внутрипеченочных состояний, таких как первичный билиарный цирроз печени (ПБЦ), первичный склерозирующий холангит (ПСХ), прогрессирующий семейный холестаз (ПСХ), вызванный алкоголем цирроз и ассоциированный холестаз, и некоторые формы внепеченочных холестатических состояний, таких как холестазы, индуцированные эстрогеном или лекарственными средствами.
Настоящее изобретение также относится к соединению согласно формуле (I) или фармацевтической композиции, содержащей указанное соединение, для профилактики и/или лечения желудочно-кишечных заболеваний, характеризуемых уменьшенным поглощением жиров и жирорастворимых витаминов, которые могут преодолены за счет повышения уровней желчных кислот и фосфолипидов в кишечнике.
В другом варианте реализации указанные соединения и фармацевтические композиции применяют для предотвращения и/или лечения заболевания выбранного из группы, которая состоит из липидных и липопротеиновых расстройств, таких как гиперхолестеринемия, гипертриглицеридемия и атеросклероз, в качестве клинически проявляющегося состояния, которое может быть улучшено за счет благотворного действия РXК по снижению общего холестерина в плазме, снижению триглицеридов сыворотки, увеличению превращения холестерина печени в желчные кислоты и увеличению чистоты и метаболического превращения ЛПОНП и других липопротеинов в печени.
В другом варианте реализации указанные соединения и фармацевтические композиции применяют для профилактики и/или лечения заболеваний, где могут быть совместно использованы гиполипидемические, антихолестатические и антифибротические эффекты медикаментов, нацеленных на РXК, которые могут быть использованы для лечения стеатоза печени и ассоциированных синдромов, таких как неалкогольный стеатогепатит (НАСГ), или для лечения холестатических и фибротических эффектов, которые связаны с вызванным алкоголем циррозом, или с передаваемыми вирусами формами гепатита.
В сочетании с гиполипидемическими эффектами также было показано, что потеря функциональности РXК ведет к увеличению атеросклероза у мышей с выключенным белком АроЕ (Е. Напттаи е! а1. Ьо88 оГ Гипсйопа1 Гате8о1б X гесер!ог шсгеа8е8 а1кего8с1егойс 1е8юп8 т арокроргокт Е-бейскп! тке. I. Ь1р1б Ке8. 2005, 46(12), 2595-2604). Поэтому агонисты РXК могут иметь клиническое применение как антиатеросклеротические и кардиопротекторные лекарственные средства. Отрицательная регуляция эндотелина-1 в гладкомышечных клетках сосудов может также способствовать благоприятному терапевтическому эффекту (Р. Не е! а1. Оо\упге§и1акоп оГ епбо!кекп-1 Ьу Гате8о1б X гесер!ог т уа8си1аг епбо!кека1 се118. Скс. Ке8. 2006, 98(2), 192-199).
- 15 024083
Изобретение также относится к соединению согласно формуле (I) или фармацевтической композиции, содержащей указанное соединение, для предотвращения и посттравматического лечения сердечнососудистых расстройств, таких как острый инфаркт миокарда, острый инсульт, или тромбоз, который возникает как конечная точка хронического обструктивного атеросклероза.
Помимо контролирования образования кишечных полипов, РХК, вероятно экспрессируется в раковых тканях груди и клеточных линиях, а не в здоровых тканях груди и, вероятно, взаимодействует с рецептором эстрогена в клетках РЭ, положительных на рак груди (К. Е. §^а1ез е1 а1. ТЬе Гатезо1б X гесер1ог 18 ехргеззеб ίη Ьгеаз! сапсег апб тедиШез арор1оз1з апб агота1азе ехргеззюп. Сапсег Кез. 2006, 66(20), 10120 и Р. 1оигпе е1 а1. Аззоаабоп ЬеНуееп Гатезо1б X гесерЮг ехргеззюп апб се11 ргоЬГегаЬоп ш езйодеп гесерЮг-розЬке 1итта1-11ке Ьгеаз! сапсег Ггот розИпепораиза1 ра11еп1з. Вгеаз! Сапсег Кез. ТгеаЬ 2009, 115(3), 523).
Это должно позволить рассматривать РХК также как потенциальную мишень для лечения пролиферативных заболеваний, особенно метастазирующих раковых форм, которые дают метастазы, которые выделяют низкомолекулярную чувствительную форму РХК.
В другом варианте реализации указанные соединения и фармацевтические композиции применяют для профилактики и/или лечения злокачественных гиперпролиферативных расстройств, таких как разные формы рака, в частности конкретные формы рака груди, печени или рака толстой кишки, где взаимодействие с лигандом РХК будет иметь благотворное влияние.
Наконец, РХК, вероятно, также вовлечен в контроль антибактериальной защиты в кишечнике (Т. !падак1 е1 а1. Кеди1абоп оГ апИЬас1ег1а1 беГепзе ш 1Ье зта11 ЬИезЬпе Ьу 1Ье пис1еаг ЬПе ааб гесерЮг. Ргос. Ыаб. Асаб. 8ск И8А. 2006, 103(10), 3920-3905), хотя точный механизм не установлен. Из этих опубликованных данных, тем не менее, можно заключить, что лечение с помощью агонистов РХК может иметь благотворное влияние при терапии воспалительных расстройств кишечника (ВРК), в частности таких форм, где поражена верхняя (подвздошная) часть кишечника (например, болезнь Крона подвздошной кишки), поскольку это, по-видимому, место действия контроля РХК на бактериальный рост. При ВРК снижение чувствительности адаптивного иммунного ответа каким-то образом ослабляет в кишечнике иммунную систему. Бактериальное разрастание может затем стать причиной инициирования установления хронического воспалительного ответа. Таким образом, подавление бактериального роста механизмами, которые основаны на РХК, может быть ключевым механизмом для предотвращения острых воспалительных случаев.
Таким образом, настоящее изобретение также относится к соединению согласно формуле (I) или фармацевтической композиции, содержащей указанное соединение, для предотвращения и/или лечения заболевания, относящегося к воспалительным заболеваниям кишечника, такого как болезнь Крона или язвенный колит. РХК-опосредованное восстановление внешней барьерной функции кишечника или снижение несимбиотической бактериальной нагрузки, как полагают, способствует снижению воздействия бактериальных антигенов на иммунную систему кишечника и может, таким образом, снижать воспалительные реакции.
Кроме того, изобретение относится к соединению или фармацевтической композиции для профилактики и/или лечения ожирения и связанных с ним расстройств, таких как метаболический синдром (сочетание условий дислипидемии, диабета и аномально высокого индекса массы тела), которые могут быть преодолены за счет РХК-опосредованного снижения триглицеридов в сыворотке, глюкозы в крови и повышения чувствительности к инсулину и РХК-опосредованной потери массы тела.
В одном варианте реализации изобретения, указанное соединение или фармацевтическая композиция предназначена для лечения устойчивых инфекций, вызванных внутриклеточными бактериями или простейшими-паразитами, такими как МусоЬас1етшт зрес, (лечение туберкулеза или проказы), Ыз1епа топосуЮдепез (лечение листериоза), Ье1зЬтата зрес, (лейшманиоз), Тгурапозота зрес. (болезнь Чагаса, трипаносомоз, сонная болезнь).
В другом варианте реализации соединения или фармацевтическая композиция согласно настоящему изобретению подходят для предотвращения и/или лечения клинических осложнений диабета I типа и II типа. Примеры таких осложнений включают диабетическую нефропатию, диабетическую ретинопатию, диабетические нейропатии или периферический облитерирующий эндартериит (ПАОЭ). Другие клинические осложнения сахарного диабета также охвачены настоящим изобретением.
Кроме того, состояния и заболевания, возникающие в результате хронической жировой и фиброзной дегенерации органов вследствие усиленного накопления липидов и, в частности, триглицеридов и последующей активации профибротических путей, также могут быть предотвращены и/или подвергнуты лечению с применением соединений или фармацевтической композиции согласно настоящему изобретению. Такие состояния или заболевания включают неалкогольный стеатогепатит (НАСГ) и хронические холестатические состояния в печени, гломерулосклероз и диабетическую нефропатию в почках, вырождения макулы и диабетическую ретинопатию глаз, и нейродегенеративные заболевания, такие как болезнь Альцгеймера в мозге или диабетическую нейропатию в периферической нервной системе.
При практическом применении соединения согласно настоящему изобретению могут быть объединены в качестве активного ингредиента в однородную смесь с фармацевтическим носителем согласно
- 16 024083 традиционным методам приготовления фармацевтических композиций. Носитель может принимать различные формы в зависимости от формы препарата, предназначенного для введения, например перорального или парентерального (в том числе внутривенного). При приготовлении композиций для пероральной дозированной формы могут быть применены любые из обычных фармацевтических сред, такие как, например, вода, гликоли, масла, спирты, ароматизаторы, консерванты, красители и т.п., в случае жидких препаратов для перорального введения, такие как, например, суспензии, эликсиры и растворы, или носители, такие как крахмалы, сахара, микрокристаллическая целлюлоза, разбавители, гранулирующие агенты, смазывающие агенты, связующие, разрыхляющие агенты и т.п., и в случае твердых препаратов для перорального введения, таких как, например, порошки, твердые и мягкие капсулы и таблетки, при этом твердые препараты для перорального введения являются предпочтительными по отношению к жидким препаратам.
Благодаря легкости введения таблетки и капсулы представляют собой наиболее предпочтительные пероральные единичные дозированные формы, в случае которых, очевидным образом, используют твердые фармацевтические носители. При необходимости на таблетки может быть нанесено покрытие посредством стандартных водных или неводных методов. Такие композиции и препараты должны содержать по меньшей мере 0,1% активного соединения. Процент активного соединения в этих композициях может, конечно, меняться и может соответственно находиться в пределах от примерно 2 до примерно 60% от массы единицы. Количество активного соединения в таких терапевтически подходящих композициях таково, чтобы обеспечить эффективную дозу. Активные соединения можно также вводить интраназально, например в виде жидких капель или спрея.
Таблетки, пилюли, капсулы и т.п. могут содержать связующее, такое как трагакант, камедь, кукурузный крахмал или желатин; наполнители, такие как фосфат дикальция; разрыхляющий агент, такой как кукурузный крахмал, картофельный крахмал, альгиновая кислота; смазывающий агент, такой как стеарат магния; и подсластитель, такой как сахароза, лактоза или сахарин. Если единичная дозированная форма представляет собой капсулу, она может содержать, в дополнение к веществам указанного выше типа, жидкий носитель, такой как жирное масло.
Различные другие материалы могут присутствовать в качестве покрытия или для изменения физической формы дозированной единицы. Например, таблетки могут быть покрыты шеллаком, сахаром или и шеллаком, и сахаром. Сироп или эликсир может содержать, в дополнение к активному ингредиенту, сахарозу в качестве подсластителя, метил- и пропилпарабены в качестве консервантов, красителей и вкусовую добавку, такую как вишневую или апельсиновую добавку.
Поскольку соединения согласно настоящему изобретению в основном представляют собой карбоновые кислоты или аналогичные анионные изостеры и поскольку хорошо известно, что солевые формы ионных лекарственных соединений могут существенно повлиять на биодоступность лекарственных соединений, соединения согласно настоящему изобретению могут также быть применены в качестве солей в различных концентрациях, обеспечивая пероральную доступность состава. Такие фармацевтически приемлемые катионы могут быть выбраны из моно- или двухвалентных ионов, таких как аммоний, ионы щелочных металлов: натрия или калия, или щелочно-земельных металлов: магния или кальция, некоторых фармацевтически приемлемых аминов, таких как трис-(гидроксиметил)аминометан, этилендиамин, диэтиламин, пиперазин или других, или некоторых катионных аминокислот, таких как лизин или аргинин.
Соединения согласно настоящему изобретению могут быть также введены парентерально. Растворы или суспензии этих активных соединений могут быть приготовлены в воде, соответствующим образом смешанной с поверхностно-активным веществом, таким как гидроксипропилцеллюлоза. Дисперсии могут быть также приготовлены в глицерине, жидких полиэтиленгликолях и их смесях в маслах. В обычных условиях хранения и применения, полученные препараты содержат консервант для предотвращения роста микроорганизмов.
Фармацевтические формы, подходящие для применения для инъекций включают стерильные водные растворы или дисперсии и стерильные порошки для немедленного приготовления стерильных растворов или дисперсий для инъекций. Во всех случаях форма должна быть стерильной и должна быть жидкой в той степени, чтобы ее легко было набрать в шприц. Форма должна быть стабильной в условиях производства и хранения, а также должна быть защищена от загрязняющего действия микроорганизмов, таких как бактерии и грибы. Носитель может представлять собой растворитель или дисперсионную среду, содержащую, например, воду, этанол, полиол (например, глицерин, пропиленгликоль и жидкий полиэтиленгликоль), подходящие смеси и растительные масла.
Для обеспечения млекопитающих, особенно человека, эффективной дозой соединения согласно настоящему изобретению может быть использован любой подходящий способ введения. Например, могут быть использованы пероральные, ректальные, местные, парентеральные способы введения, введение в глаза, в легкие, в нос и т.п. Дозированные формы включают таблетки, пастилки, дисперсии, суспензии, растворы, капсулы, кремы, мази, аэрозоли и т.п. Предпочтительно соединения согласно настоящему изобретению вводят перорально
- 17 024083
Эффективная доза применяемого активного ингредиента может меняться в зависимости от конкретного используемого соединения, способа введения, состояния, подлежащего лечению, и тяжести состояния, подлежащего лечению. Такая доза может быть легко установлена специалистом в данной области.
При лечении или предотвращении РХК-опосредованных состояний, для которых показаны соединения согласно настоящему изобретению, как правило, достигают удовлетворительных результатов, когда соединения согласно настоящему изобретению вводят в суточной дозе от примерно 0,1 до примерно 100 мг на 1 кг массы тела животного, предпочтительно в виде однократной дневной дозы или разделенных доз на от двух до шести приемов в день или в форме с замедленным высвобождением. Для большинства крупных млекопитающих общая суточная доза составляет от примерно 1,0 до примерно 1000 мг, предпочтительно от примерно 1 до примерно 50 мг. В случае 70 кг взрослого человека, общая суточная доза обычно составляет от примерно 7 до примерно 350 мг. Указанный режим дозирования может быть скорректирован, чтобы обеспечить оптимальный терапевтический эффект.
Некоторые аббревиатуры, встречающиеся в настоящем описании: т-СРВА - метахлорбензойная кислота;
ДХМ - дихлорметан;
ΌΙΑΌ - диизопропил-азодикарбоксилат;
ДМФА - диметилформамид;
ДМСО - диметилсульфоксид;
Е!ОАс (ЕА) - этилацетат;
ЕЭТА - 2-[2-(бис-(карбоксиметил)амино)этил(карбоксиметил)амино]уксусная кислота;
ИЭР - ионизация электрораспылением;
РХК - фарсеноидный Х-рецептор;
С8Т - глутатион-8-трансфераза;
ВЭЖХ - высокоэффективная жидкостная хроматография;
1РТС - изопропил-в-О-1-тиогалактопиранозид;
ЬВЭ - лигандсвязывающий домен;
ЖХ/МС - жидкостная хроматомасс-спектрометрия;
ЯМР - ядерный магнитный резонанс;
РЕ - петролейный эфир; ро - перорально;
КГ - фактор удерживания;
СДС - додецилсульфат натрия;
ТГФ - тетрагидрофуран;
ТСХ - тонкослойная хроматография;
ТМ8 - триметилсилан;
ТВ8 - трет-бутилдиметилсилил.
Соединения согласно настоящему изобретению могут быть получены в соответствии с методиками, представленными на следующих схемах и в примерах, с применением соответствующих веществ и далее проиллюстрированы следующими конкретными примерами. Кроме того, используя методики, описанные в в данном документе, в сочетании со знаниями среднего специалиста в данной области могут быть легко получены дополнительные соединения, заявленные в настоящем изобретении. Однако соединения, проиллюстрированные в примерах, не следует рассматривать как единственные соединения, заявленные в изобретении. Примеры дополнительно иллюстрируют подробное описание получения соединений согласно изобретению. Специалисты в данной области могут легко понять, что можно использовать известные изменения условий или процессов следующих препаративных методик для получения указанных соединений. Настоящие соединения, как правило, выделяют в виде их фармацевтически приемлемых солей, таких, как описано выше.
Аминные свободные основания, соответствующие выделенным солям, могут быть получены путем нейтрализации с подходящим основанием, таким как водный гидрокарбонат натрия, карбонат натрия, гидроксид натрия и гидроксид калия и экстракцией выделенных аминных свободных оснований в органическом растворителе с последующим испарением. Аминное свободное основание, выделенное таким образом, может быть в дальнейшем превращено в другую фармацевтически приемлемую соль путем растворения в органическом растворителе с последующим добавлением соответствующей кислоты и последующим испарением, осаждением или кристаллизацией. Карбоновые свободные кислоты, соответствующие выделенным солям, могут быть получены путем нейтрализации с подходящей кислотой, такой как водная хлороводородная кислота, гидросульфат натрия, дигидрофосфат натрия, и экстракции выделенной карбоновой свободной кислоты, добычи освобожденных карбоксильных свободных кислот в органическом растворителе с последующим испарением. Карбоновые кислоты, выделенные таким образом, могут быть в дальнейшем превращены в другую фармацевтически приемлемую соль путем растворения в органическом растворителе с последующим добавлением соответствующего основания и последующим испарением, осаждением или кристаллизацией.
- 18 024083
Иллюстрация получения соединений согласно настоящему изобретению представлена ниже. Если иное не указано на схемах, переменные имеют те же значения, как описано выше. Примеры, представленные ниже, предназначены для иллюстрации конкретных вариантов реализации изобретения. Подходящие исходные вещества, строительные блоки и реагенты, применяемые в синтезе, как описано ниже, коммерчески доступны в 81дта-А16г1сЬ СНепие СтЬН, Мюнхен, Германия, Легок Огдапкк, Бельгия или в ИкНег 8с1еп1Шс СтЬН, 58239 Шверте, Германия, например, или могут быть в обычном порядке получены согласно методикам, описанным в литературе, например в МагсН'к Абуапсеб Огдапк СНеткНу: КеасНопк. МесНатктк, апб 81гис1иге, 5* Е6коп; 1оНп Абеу & 8опк или ТНеорНП ЕкНег, 8кд£пе6 Наир1тапп ТНе СНеткНу о£ Не1егосус1ек; 81гис1игек, Кеасйопк, 8уп1Некк апб АррНсаНоп, 2п6 Ебкоп, Абеу-УСН 2003; Рккег е1 а1. Рккегк' Кеадеп1к £ог огдапк 8уйНекк 1оНп Абеу & 8опк 2000.
Примеры
Синтез предшественников.
Схема 1а
Синтез соединения А2а:
Раствор 2,6-дихлорбензальдегида А1а (25 г, 0,14 моль) в 200 мл этанола добавляли к раствору гидрохлорида гидроксиламина (11 г, 0,16 моль) и гидроксида натрия (6,3 г, 0,16 моль) в 100 мл воды. Полученную смесь перемешивали при 90°С в течение 24 ч. Объем уменьшали в вакууме примерно на 30 мл, что вызывало осаждение. Далее колбу охлаждали до комнатной температуры, а твердое вещество собирали путем фильтрования и промывали водой (2x100 мл). Твердое вещество сушили под вакуумом с получением 25,9 г соединения А2а (белое твердое вещество, выход 96%).
Синтез соединения А3а:
В круглодонную колбу вместимостью 500 мл наливали раствор соединения А2а (25,9 г, 0,14 моль) в 300 мл ДМФА. Колбу помещали в водяную баню комнатной температуры. Далее в колбу помещали ЫС8 (18,4 г, 0,14 моль). Реакционную смесь перемешивали еще в течение 1 ч, далее содержимое колбы приливали к 400 мл воды и экстрагировали продукт 500 мл Е12О. Органический слой промывали водой (2x200 мл) и 100 мл солевого раствора, далее сушили над Мд8О4. После фильтрования растворитель удаляли при пониженном давлении с получением 29 г соединения А3а в виде желтого масла, которое использовали в следующей реакции без дополнительной очистки.
Синтез соединения А4а:
Перемешанный раствор изобутирилацетата (16 г, 124,8 ммоль) в 120 мл сухого ТГФ обрабатывали раствором метоксида натрия (252 мл, 0,5 М в МеОН), а далее раствором соединения А3а (28 г, 124,8 ммоль) в 40 мл сухого ТГФ. После перемешивания при комнатной температуре в течение 16 ч растворитель удаляли при пониженном давлении. Остаток распределяли между 800 мл Е12О и 800 мл воды. Органический слой промывали солевым раствором, сушили над Иа28О4, фильтровали, концентрировали и очищали посредством хроматографии на силикагеле (элюент: РЕ/Е1ОАс = 10/1) с получением 24,8 г соединения А4а в виде белого твердого вещества (выход 62%).
- 19 024083
Синтез соединения А5а:
Раствор соединения А4а (24,8 г, 79,7 ммоль) в 180 мл сухого ТГФ охлаждали до 0°С в атмосфере азота при добавлении по каплям ЬАН (3,1 г, 79,7 ммоль). Далее реакционной смеси медленно давали нагреться до комнатной температуры в течение 2 ч. Колбу снова охлаждали до 0°С и аккуратно добавляли 5 мл МеОН в течение 10 мин. Добавляли насыщенный раствор Ν;·ι2δϋ4 и полученное твердое вещество фильтровали через слой целита. Концентрировали с получением 21 г соединения А5а в виде желтого твердого вещества (выход 93%).
Синтез соединения А6а:
К раствору бензотриазола (6,77 г, 73,7 ммоль) в 100 мл сухого ДХМ добавляли §ОС12 (8,76 г, 73,7 ммоль) при 0°С и перемешивали при комнатной температуре в течение 1 ч. Полученную смесь добавляли к раствору соединения А5а (21 г, 73,7 ммоль) в 200 мл сухого ДХМ при комнатной температуре и перемешивали в течение 1,5 ч. К смеси добавляли 60 мл воды для того, чтобы погасить реакцию, и подвергали смесь экстракции с помощью ДХМ. Органический слой промывали 1н. водным раствором ΝαϋΗ, сушили над №28О4, фильтровали, концентрировали и очищали посредством хроматографии на силикагеле (элюент: РЕ/Е1ОАе = 10/1) с получением 21,7 г соединения А6а в виде белого твердого вещества (выход 97,2%).
Ή ЯМР (400 МГц, СЭС13): δ 1,47 (й, 1=6,8 Гц, 6Н), 3,35 (т, 1Н), 4,31 (8, 2Н), 7,38-7,48 (т, 3Н).
Синтез соединения А4е:
К раствору соединения А3а (105 г, 0,47 моль) в 400 мл ТЭА добавляли этил-3-циклопропил-3оксопропаноат (100 г, 0,70 моль). Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение ночи. Растворитель удаляли при пониженном давлении и проводили очистку посредством хроматографии на силикагеле (элюент: РЕ/ЕА = 10/1) с получением 87 г соединения А4е в виде белого твердого вещества (выход 57%).
Синтез соединения А5е:
К раствору соединения А4е (80 г, 0,26 моль) в 300 мл сухого ТГФ добавляли ΌΙΒΑΕ-Η (360 мл, 0,54 моль) при 0°С в атмосфере Ν2 и перемешивали при комнатной температуре в течение 4 ч. Реакцию гасили МеОН (80 мл) и НС1 (1 М), проводили экстракцию с помощью ЕА и органический слой промывали солевым раствором. Проводили концентрирование при пониженном давлении с получением 55 г неочищенного соединения А5е, которое использовали в следующей реакции без дополнительной очистки.
Синтез соединения А6е:
К раствору бензотриазола (17,85 г, 194,3 ммоль) в 100 мл сухого ДХМ добавляли §ОС12 (23,09 г, 73,7 ммоль) при 0°С и перемешивали при комнатной температуре в течение 1 ч. Полученную смесь добавляли к раствору соединения А5е (55 г, 194,3 ммоль) в 500 мл сухого ДХМ при комнатной температуре и перемешивали в течение 1,5 ч. К смеси добавляли 120 мл воды, чтобы погасить реакцию, и подвергали смесь экстракции с помощью ДМФА. Органический слой промывали 1н. водным раствором №ОН. сушили над №-ь8О+ фильтровали, концентрировали и очищали посредством хроматографии на силикагеле (элюент: РЕ/ЕА = 10/1) с получением 47,4 г соединения А6е в виде белого твердого вещества (выход 81%).
- 20 024083
Ή ЯМР (400 МГц, СЭС13): δ 1,23-1,33 (т, 4Н), 2,14 (т, 1Н), 4,40 (к, 2Н), 8,31 (к, 2Н).
Схема 1Ь
Синтез соединения А2Ь:
К раствору соединения А1Ь (5,00 г, 28,4 ммоль) в 40 мл Е!ОН добавляли смесь ЫаОН (1,37 г,
34,1 ммоль) и ЫН2ОН-НС1 (2,37 г, 34,1 ммоль) в 15 мл Н2О. Полученную смесь перемешивали при 90°С в течение 12 ч. Полученный объем концентрировали при пониженном давлении примерно на 10 мл и собирали твердое вещество путем фильтрования. Твердые вещества промывали водой и сушили под вакуумом с получением 5,0 г соединения А2Ь в виде белого твердого вещества (выход 92%).
Синтез соединения А3Ь:
В круглодонную колбу вместимостью 100 мл наливали раствор соединения А2Ь (5,0 г, 26,2 ммоль) в 50 мл ДМФА. Колбу помещали в водяную баню комнатной температуры. Далее в колбу помещали ЫСЗ (4,13 г, 31,4 ммоль). Реакционную смесь перемешивали еще в течение 12 ч, далее содержимое концентрировали при пониженном давлении. Остаток разбавляли Е!2О, промывали водой и солевым раствором, сушили над Ыа2ЗО4, фильтровали и концентрировали с получением 5,3 г соединения А3Ь в виде желтого масла, которое использовали в следующей реакции без дополнительной очистки.
Синтез соединения А4Ь:
Перемешанный раствор этил-3-циклопропил-3-оксопропаноата (3,88 г, 24,5 ммоль) в 40 мл сухого ТГФ обрабатывали 15 мл Ε!3Ν, а далее раствором соединения А3Ь (5 г, 22,25 ммоль) в 30 мл сухого ТГФ. После перемешивания при комнатной температуре в течение 18 ч растворитель удаляли при пониженном давлении. Полученный остаток распределяли между 100 мл Е!2О и 40 мл воды. Органический слой промывали солевым раствором, сушили над Ыа2ЗО4, фильтровали, концентрировали и очищали посредством хроматографии на силикагеле (элюент: РЕ/Е!ОАс = 10/1) с получением 3,25 г соединения А4Ь в виде белого твердого вещества (выход 45%).
Синтез соединения А5Ь:
- 21 024083
К раствору соединения А4Ь (2,0 г, 6,10 ммоль) в 30 мл безводного ТГФ по каплям добавляли ΌΙВАЬ-Н (25,6 мл, 25,60 ммоль) при -10°С в течение 15 мин в атмосфере Ν2. Полученную смесь перемешивали при той же температуре в течение 3 ч. Реакцию гасили водой, и проводили экстракцию с помощью ЕА, органический слой промывали солевым раствором, сушили над Ν;·ι2δϋ4. Растворитель испаряли, получая неочищенный продукт, который далее очищали посредством флэш-хроматографии на силикагеле (элюент: РЕ/ЕЮАс = 2/1) с получением 0,44 г соединения А5Ь в виде белого твердого вещества (выход 25%).
Синтез соединения А6Ь:
К раствору бензотриазола (0,84 г, 9,1 ммоль) в 20 мл сухого ДХМ по каплям добавляли §ОС12 (1,08 мг, 9,1 ммоль) при 0°С. Полученную смесь перемешивали в течение 30 мин при комнатной температуре в атмосфере Ν2. Полученный раствор переносили в капельную воронку и по каплям добавляли в течение 10 мин к перемешанному раствору соединения А5Ь (2,0 г, 7,0 ммоль) в 20 мл сухого ДХМ. После перемешивания в течение 1 ч, полученную суспензию фильтровали с удалением гидрохлорида бензотриазола. Фильтрат последовательно промывали 30 мл воды дважды, 30 мл 1н. раствора ΝαΟΗ и 30 мл солевого раствора, сушили над безводным №-ь8О4, фильтровали, концентрировали и очищали посредством хроматографии на силикагеле (элюент: РЕ/ЕЮАс = 10/1) с получением 0,91 г соединения А6Ь в виде белого твердого вещества (выход 42,3%).
Ή ЯМР (400 МГц, С1)С1;) δ: 1,21-1,35 (т, 4Н), 2,14-2,18 (т, 1Н), 4,38 (5, 2Н), 8,67 (5, 2Н).
Синтез соединения А6с:
К перемешанному раствору А6Ь (0,53 г, 1,75 ммоль) в 10 мл ДХМ добавляли т-СРВА (0,65 мг, 3,60 ммоль) при комнатной температуре. После перемешивания в течение 18 ч при комнатной температуре реакцию гасили насыщенным раствором NаНСΟ3, проводили экстракцию с помощью ДХМ, промывали водой и солевым раствором, сушили над безводным №28О4, фильтровали, концентрировали и очищали посредством флэш-хроматографии на силикагеле (элюент: РЕ/ЕЮАс = 5/1) с получением 318 мг соединения А6с в виде белого твердого вещества (выход 57%).
Ή ЯМР (400 МГц, СОСЪ) δ: 1,23-1,33 (т, 4Н), 2,14 (т, 1Н), 4,40 (5, 2Н), 8,31 (5, 2Н).
- 22 024083
Получение соединения Λ5ά:
Раствор 2,6-дихлорфенилазида (Р, 25 г, 0,13 моль) в толуоле (100 мл) и ацетиленовом спирте (0,
52,1 г, 0,53 моль) кипятили с обратным холодильником в атмосфере аргона в течение 35 ч. Толуол удаляли под вакуумом и полученные продукты очищали посредством тщательной колоночной хроматографии и выделяли два триазоловых продукта в виде твердых веществ, соединения А5Д (4,5 г, 23%) и соединения А5х (6,5 г, 34%).
К раствору соединения А5Д (2,00 г, 7,0 ммоль) в 20 мл ДХМ и 2 мл СС14 добавляли РРЬ3 (3,67 г, 14,0 ммоль). Далее раствор перемешивали при комнатной температуре в течение 4 ч, данные как ТСХ, так и ЖХ/МС показали, что реакция завершилась. Концентрировали при пониженном давлении и очищали посредством флэш-хроматографии на силикагеле (элюент: РЕ/ЕЮАс = 10/1) с получением 2,02 г соединения А6Д в виде белого твердого вещества (выход 95%).
Ή ЯМР (400 МГц, СОС13): δ 1,51-1,49 (ά, 6Н), 3,24-3,21 (т, 1Н), 4,48 (5, 2Н), 7,52-7,50 (ΐ, 1Н), 7,587,54 (Д,2Н).
Синтез соединения А1Г:
Раствор 2-бром-1,3-дихлорбензола (13 г, 58 ммоль), 2,2-диметил-2-силабут-3-ин (90 мл, 64 ммоль), Си (100 мг, 5,5 ммоль), РРЬ3 (200 мг, 0,75 ммоль) и Рй(РРЬ3)2С12 (235 мг, 0,335 ммоль) в 35 мл ΝΕΐ3 кипятили в запаянной трубке в атмосфере Ν2 в течение 24 ч. Данные как ТСХ, так и ЖХ/МС показали, что реакция завершилась. Реакционную смесь концентрировали и добавляли ЕЮАс. Раствор промывали водой и солевым раствором, сушили над Ыа2ЗО4, фильтровали, концентрировали и очищали посредством флэш-хроматографии на силикагеле (элюент: РЕ/ЕА = 100/0) с получением 13 г неочищенного соединения А1Г в виде масла (выход 40%, чистота 70%).
- 23 024083
Синтез соединения Л2£:
ТМ5
К раствору неочищенного соединения Л1£ (13 г, 48,4 ммоль) в 200 мл МеОН добавляли К2СО3 (13 г, 94,3 ммоль) и перемешивали смесь при комнатной температуре в течение ночи в атмосфере Ν2. Реакционную смесь фильтровали и концентрировали при пониженном давлении с получением 4,1 г соединения Л2£ в виде белого твердого вещества (выход 56,1%).
Синтез соединения Л3£:
К раствору соединения Л2£ (2 г, 12 ммоль) в 40 мл сухого ТГФ добавляли и-ВиЫ (5,6 мл, 2,5 М в гексане, 14 ммоль) при -78°С в атмосфере Ν2 и перемешивали раствор при указанной температуре в течение 30 мин. Далее добавляли раствор этил-хлорацетата (1,65 г, 15 ммоль) в 10 мл сухого ТГФ при -78°С. Смесь перемешивали в течение 4 ч. Полученный раствор приливали к насыщенному раствору ΝΗ.·|0 раствор и добавляли ЕЮАс для экстракции дважды. Объединенные органические слои сушили над №-ь5О4. фильтровали, концентрировали при пониженном давлении и очищали посредством флэшхроматографии на силикагеле (элюент: РЕ/ЕА = 50/1) с получением 1,25 г соединения А3£ в виде желтого твердого вещества (выход 44,5%).
Синтез соединения А4£:
Раствор соединения А3£ (3 г, 12,4 ммоль) и 2-азидопропан (20 мл) нагревали при 110°С в течение 24 ч в автоклаве. Концентрировали и очищали посредством флэш-хроматографии на силикагеле (элюент: РЕ/ЕА = 4/1) с получением 1 г соединения А4£ в виде желтого твердого вещества (выход 34,8%).
Синтез соединения А5£:
К ледяному холодному раствору соединения А4£ (1 г, 1,38 ммоль) в 10 мл безводного ТГФ по каплям добавляли ЬАН (2 М в ТГФ, 2,76 ммоль). После добавления реакционный раствор перемешивали при указанной температуре в течение 2 ч. Данные ТСХ показали, что реакция завершилась. Медленно добавляли 10 мл МеОН, чтобы погасить реакцию, с последующим добавлением насыщенного раствора №28О4. Полученное твердое вещество отфильтровывали, а раствор концентрировали при пониженном давлении и очищали посредством флэш-хроматографии на силикагеле (элюент: РЕ/ЕА = 1/4) с получением 180 мг соединения А5£ в виде желтого твердого вещества (выход 45,7%).
1Н ЯМР (400 МГц, СНСЕ) δ: 7,41-7,43 (т, 2Н), 7,30-7,32 (т, 1Н), 4,91-4,97 (т, 1Н), 4,58-4,59 (й, 1=5,6 Гц, 2Н), 2,70-2,73 (Ъг, 1Н), 1,72 (5, 3Н), 1,70 (5, 3Н).
Синтез соединения А6£:
Раствор соединения А5£ (200 мг, 0,70 ммоль), СС14 (1 мл, 10,4 ммоль) и РРЬ3 (368 мг, 1,40 ммоль) в 5 мл безводного ДХМ перемешивали при комнатной температуре в течение 2 ч. Реакционную смесь кон- 24 024083 центрировали при пониженном давлении и очищали посредством флэш-хроматографии на силикагеле (элюент: РЕ/ЕА = 3/1) с получением 100 мг соединения А6£ в виде желтого масла (выход 47,1%).
Ή ЯМР (400 МГц, СЭС13) δ: 7,45-7,47 (т, 2Н), 7,36-7,39 (т, 1Н), 4,81-4,85 (т, 1Н), 4,51 (8, 1Н), 1,78 (з, 3Н), 1,74 (з, 3Н).
Схема 2
Синтез соединения В2:
Примеры 1-6
8ОС12 (113,3 г, 0,96 моль) медленно добавляли к 700 мл сухого метанола при 0°С. После перемешивания в течение 1 ч при комнатной температуре, добавляли соединение В1 (80 г, 0,48 моль) и перемешивали в течение 1,5 ч. Смесь концентрировали и добавляли водный раствор NаΗСО3, чтобы погасить реакцию. Суспензию дважды подвергали экстракции с помощью ДХМ. Объединенные органические слои сушили над №28О4, фильтровали и концентрировали с получением 85 г соединения В2, которое использовали в следующей реакции без дополнительной очистки.
Синтез соединения В3:
К раствору соединения В2 (60 г, 0,31 моль) в 500 мл МеОН добавляли раствор №ЮН (12,4 г, 0,31 моль) в 200 мл МеОН. Смесь перемешивали в течение ночи при комнатной температуре. Смесь концентрировали, а остаток растворяли в 500 мл воды и экстрагировали с помощью Е12О. Водный раствор подкисляли концентрированным раствором НС1 до рН 2, образовавшийся белый осадок собирали и сушили под вакуумом с получением 46 г неочищенного соединения В3 в виде белого твердого вещества.
Синтез соединения В4:
- 25 024083
К раствору соединения В3 (46 г, 0,3 моль) в 700 мл сухого ТГФ добавляли раствор ВН3 в ТГФ (1 М, 600 мл, 0,60 моль) при 0°С в атмосфере Ν2 в течение 20 мин. Далее раствор перемешивали в течение ночи при комнатной температуре. Для гашения реакции медленно добавляли 50% водный раствор уксусной кислоты (400 мл). Реакционную смесь концентрировали и далее распределяли между Е!ОАс и водой. Органическую фазу последовательно промывали 10% водным раствором Ыа2СО3, Н2О и солевым раствором. Полученную смесь сушили над Ыа2ЗО4, фильтровали, концентрировали при пониженном давлении и очищали посредством хроматографии на силикагеле (элюент: РЕ/Е!ОАс = 10/1) с получением 28 г соединения В4 в виде белого твердого вещества (выход за 3 стадии: 54%).
Синтез соединения В5:
К раствору соединения В4 (28 г, 0,168 моль) в 700 мл Е!2О по каплям добавляли РВг3 (17,4 мл, 0,185 моль). Раствор перемешивали в течение 2 ч и далее реакционную смесь приливали к 500 мл ледяной воды. Водный слой экстрагировали с помощью Е!2О. Объединенные органические слои последовательно промывали насыщенным раствором ЫаНСО3, водой, и солевым раствором. Органическую фазу сушили над Ыа2ЗО4, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении с получением 34 г соединения В5 в виде масла (выход 70%).
Синтез соединения В6:
Смесь соединения В5 (34 г, 148 ммоль) в 34 мл триэтоксифосфина нагревали при 175°С в течение 4 ч. Смесь концентрировали при пониженном давлении с получением 40 г соединения В6, которое использовали в следующей реакции без дополнительной очистки.
Синтез соединения В8:
К раствору соединения В7 (150 г, 1,17 моль), гидроксида кальция (375 г, 5,07 моль) и карбоната натрия (420 г, 3,96 моль) в 1,5 л воды добавляли хлороформ (270 г, 2,29 моль) в течение 80 мин и кипятили реакционную смесь в атмосфере Ν2 в течение 3 ч. Реакционную смесь охлаждали в ледяной бане. Добавляли 1 л концентрированного водного раствора НС1 и 1 л хлороформа. Смесь перемешивали и после разделения фаз удаляли водный слой. Органический слой сушили над Ыа2ЗО4, концентрировали и очищали посредством хроматографии на силикагеле (элюент: РЕ/Е!ОАс = 10/1) с получением 28 г соединения В8 в виде белого твердого вещества (выход 15,3%).
Синтез соединения В9:
К раствору соединения В8 (11 г, 70,1 ммоль) в 300 мл сухого ДХМ добавляли ТВЭМЗСЛ (12,7 г,
84,2 ммоль), ТЭА (19,6 мл, 140,2 ммоль) и ДМАР (100 мг, кат.). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 1 ч. Смесь концентрировали при пониженном давлении с получением 18,5 г неочищенного соединения В9, которое использовали в следующей реакции без дополнительной очистки.
Синтез соединения В10:
К раствору соединения В9 (23 г, 80,6 ммоль) в 320 мл сухого ТГФ добавляли гидрид натрия (60% в минеральном масле, 5 г, 123 ммоль) при 0°С в течение 30 мин. К полученной смеси добавляли раствор соединения В6 (18,5 г, 61,5 ммоль) в 160 мл сухого ТГФ при 0°С, и перемешивали раствор при комнатной температуре в течение 3 ч. Реакцию гасили насыщенным раствором ЫН4С1 и проводили экстракцию с помощью Е!ОАс. Органический слой промывали солевым раствором, сушили над Ыа2ЗО4, фильтровали, концентрировали с получением 23 г соединения В10, которое использовали в следующей реакции без дополнительной очистки.
- 26 024083
Синтез соединения В11:
К раствору соединения В10 (23 г, 80,6 ммоль) в 450 мл сухого ДХМ добавляли ТВЭМЗС1 (12,7 г,
84,2 ммоль), ТЭА (19,6 мл, 161,2 ммоль) и ДМАР (0,5 г, кат.). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 1 ч. Смесь концентрировали при пониженном давлении и очищали посредством хроматографии на силикагеле (элюент: РЕ/ЕЮАс = 30/1) с получением 11,8 г соединения В11 в виде белого твердого вещества (выход за 3 стадии: 41,8%).
Синтез соединения В12:
К раствору диэтилцинка (290 мл, 1 М в гексане, 290 ммоль) в 600 мл сухого ДХМ добавляли дийодэтан (46 мл, 580 ммоль) при -78°С. Раствор перемешивали в течение 30 мин и далее смесь нагревали до -30°С. К смеси добавляли ТФУ (38 г, 290 ммоль) и перемешивали в течение 30 мин. К смеси добавляли раствор соединения В11 (11,8 г, 29 ммоль) в 200 мл ДХМ и смесь перемешивали в течение ночи при комнатной температуре. Реакционную смесь гасили 500 мл 1н. водного раствора НС1. Органический слой промывали солевым раствором, сушили над Ма2ЗО4, фильтровали, концентрировали досуха и очищали посредством флэш-хроматографии на силикагеле (элюент: РЕ/ЕЮАс = 20/1) с получением 4,5 г соединения В12 в виде масла (выход 36,9%).
Синтез соединения В13:
Раствор соединения В12 (4,5 г, 10,8 ммоль) и ТВАРН2О (11 г, 42,1 ммоль) в 300 мл сухого ТГФ перемешивали в течение 10 мин при комнатной температуре. Добавляли воду (100 мл) и проводили экстракцию с помощью 500 мл ЕЮАс. Органический слой промывали солевым раствором, сушили над №28О4, концентрировали при пониженном давлении и очищали посредством флэш-хроматографии на силикагеле (элюент: РЕ/ЕЮАс = 10/1) с получением 2,0 г неочищенного соединения В13 с чистотой 80% (УФ-ВЭЖХ) в виде желтого масла.
Синтез соединения В14а:
К раствору неочищенного соединения В13 (200 мг, 0,66 ммоль) и соединения А6а (200 мг, 0,66 ммоль) в 5 мл ДМФА добавляли К2СО3 (184 мг, 1,33 ммоль). Смесь нагревали в течение ночи при 60°С, далее охлаждали до комнатной температуры, разбавляли водой (10 мл) и экстрагировали 30 мл ЕЮАс. Органический слой дважды промывали солевым раствором, сушили над Ма2ЗО4, фильтровали, концентрировали и очищали посредством флэш-хроматографии на силикагеле (элюент: РЕ/ЕЮАс = 20/1) с получением 220 мг соединения В14а в виде белого твердого вещества (выход 59,8%).
Синтез соединения В14Ь:
К раствору неочищенного соединения В13 (200 мг, 0,66 ммоль) и соединения А6Ь (200 мг, 0,66 ммоль) в 5 мл ДМФА добавляли К2СО3 (184 мг, 1,33 ммоль). Смесь нагревали в течение ночи при 60°С, далее охлаждали до комнатной температуры, разбавляли водой (10 мл) и проводили экстракцию с помощью 30 мл ЕЮАс. Органический слой дважды промывали солевым раствором, сушили над №28О4, фильтровали, концентрировали и очищали посредством хроматографии на силикагеле (элюент: РЕ/ЕЮАс = 20/1) с получением 100 мг соединения В14Ь в виде белого твердого вещества (выход 27,2%).
- 27 024083
Синтез соединения В14с:
К раствору неочищенного соединения В13 (200 мг, 0,66 ммоль) и соединения А6с (211 мг, 0,66 ммоль) в 5 мл ДМФА добавляли К2СО3 (184 мг, 1,33 ммоль). Смесь нагревали в течение ночи при 60°С, далее охлаждали до комнатной температуры, разбавляли водой (10 мл) и проводили экстракцию с помощью 30 мл Е!ОАс. Органический слой дважды промывали солевым раствором, сушили над №28О4, фильтровали, концентрировали и очищали посредством флэш-хроматографии на силикагеле (элюент: РЕ/ЕА = 8/1) с получением 140 мг соединения В14с в виде белого твердого вещества (выход 38,1%).
Синтез соединения В14й:
К раствору неочищенного соединения В13 (200 мг, 0,66 ммоль) и соединения А6й (200 мг, 0,66 ммоль) в 5 мл ДМФА добавляли К2СО3 (184 мг, 1,33 ммоль). Смесь нагревали в течение ночи при 60°С, далее охлаждали до комнатной температуры, разбавляли водой (10 мл) и проводили экстракцию с помощью 30 мл Е!ОАс. Органический слой дважды промывали солевым раствором, сушили над №-ь8О4. фильтровали, концентрировали и очищали посредством флэш-хроматографии на силикагеле (элюент: РЕ/ЕА = 10/1) с получением 103 мг соединения В14й в виде белого твердого вещества (выход 28%).
К раствору неочищенного соединения В13 (1 г, 3,3 ммоль, 1,00 экв.) и А6е (1 г, 3,3 ммоль, 1 экв.) в 30 мл ДМФА добавляли К2СО3 (1,4 г, 9,9 ммоль, 3,00 экв.). Смесь нагревали в течение ночи при 60°С, далее охлаждали до комнатной температуры, разбавляли водой (50 мл) и проводили экстракцию с помощью Е!2О (200 мл). Органический слой промывали солевым раствором, сушили над №28О4, фильтровали, концентрировали и очищали посредством флэш-хроматографии на силикагеле (элюент: РЕ/Е!ОАс = 20/1) с получением 1,2 г соединения В14е, которое использовали в следующей реакции без дополнительной очистки.
Синтез соединения согласно примеру 1:
В14Ь Пример 1
К раствору соединения В14Ъ (100 мг, 0,18 ммоль) в 5 мл ТГФ и 2 мл Н2О добавляли ЫОН-Н2О (74 мг, 1,8 ммоль) и далее смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 24 ч. Смесь кон- 28 024083 центрировали и разбавляли 10 мл Н2О, добавляли 1н. водный раствор НС1 для подкисления смеси до рН 5. Смесь подвергали экстракции с помощью ЕЮАс и органический слой промывали солевым раствором, сушили над №28О4, фильтровали, концентрировали, а остаток очищали посредством хроматографии на силикагеле (элюент: РЕ/ЕЮАс= 3/1) с получением 30 мг соединения согласно примеру 1 (3-(2-(2-хлор-4((5-циклопропил-3-(3,5-дихлорпиридин-4-ил)изоксазол-4-ил)метокси)фенил)циклопропил)бензойной кислоты) в виде белого твердого вещества (выход 30,8%).
Ή ЯМР (400 МГц, СЭС13) δ: 1,23 (т, 2Н), 1,31 (т, 2Н), 1,47 (т, 2Н), 2,09 (т, 1Н), 2,17 (т, 1Н), 2,39 (т, 1Н), 4,84 (5, 2Н), 6,65 (άά, 1=1,6 Гц, 8,4 Гц, 1Н), 6,84 (ά, 1=1,6 Гц, 1Н), 6,99 (ά, 1=8,4 Гц, 1Н), 7,43-7,48 (т, 2Н), 7,97 (т, 2Н), 8,64 (5, 2Н).
ЖХ/МС (подвижная фаза: 60-95% ацетонитрил-вода-0,01% ТФУ): чистота >95%, Κΐ = 3,304 мин;
МС выч.: 554; МС найд.: 555 (М+Н)+.
Синтез соединения согласно примеру 2:
В14с Пример 2
К раствору соединения В14с (140 мг, 0,24 ммоль) в 5 мл ТГФ и 2 мл Н2О добавляли ЫОН Н2О (100 мг, 2,4 ммоль) и далее смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 24 ч. Смесь концентрировали и разбавляли 10 мл Н2О, добавляли 1н. водный раствор НС1 для подкисления смеси до рН 5. Смесь подвергали экстракции с помощью ЕЮАс и органический слой промывали солевым раствором, сушили над №-ь8О4. фильтровали, концентрировали и очищали посредством хроматографии на силикагеле (элюент: РЕ/ЕЮАс = 1/1) с получением 40 мг соединения согласно примеру 2 (4-(4-((4-(2-(3карбоксифенил)циклопропил)-3-хлорфенокси)метил)-5-циклопропилизоксазол-3-ил)-3,5дихлорпиридин-1-оксида) в виде белого твердого вещества (выход 29,3%).
Ή ЯМР (400 МГц, СЫСЬ) δ: 1,21-1,33 (т, 4Н), 1,44-1,50 (т, 2Н), 2,10-2,19 (т, 2Н), 2,39 (т, 1Н), 4,85 (5, 2Н), 6,67 (άά, 1=2,4 Гц, 8,4 Гц, 1Н), 6,88 (ά, 1=2,4 Гц, 1Н), 7,02 (ά, 1=8,4 Гц, 1Н), 7,40-7,48 (т, 2Н),
7,95 (т, 2Н), 8,31 (5, 2Н).
ЖХ/МС (подвижная фаза: 40-95% ацетонитрил-вода-0,01% ТФУ): чистота >95%, Κί = 3,421 мин;
МС выч.: 570; МС найд.: 571 (М+Н)+.
К раствору соединения Β14ά (103 мг, 0,18 ммоль) в 10 мл ТГФ и 5 мл Н2О добавляли ЫОН Н2О (76 мг, 1,8 ммоль) и далее смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 24 ч. Смесь концентрировали и разбавляли 10 мл Н2О, добавляли 1н. водного раствора НС1 для подкисления смеси до рН 5. Смесь подвергали экстракции с помощью ЕЮАс и органический слой промывали солевым раствором, сушили над №28О4, фильтровали, концентрировали и очищали посредством хроматографии на силикагеле (элюент: РЕ/ЕЮАс = 2/1) с получением 80 мг соединения согласно примеру 3 (3-(2-(2-хлор-4-((1-(2,6-дихлорфенил)-4-изопропил-1Н-1,2,3-триазол-5-ил)метокси)фенил)циклопропил)бензойной кислоты) в виде белого твердого вещества (выход 79,6%).
Ή ЯМР (400 МГц, СПС13) δ: 1,45 (т, 8Н), 2,08 (т, 1Н), 2,38 (т, 1Н), 3,24 (т, 1Н), 4,92 (5, 2Н), 6,67 (ά, 1=8,0 Гц, 1Н), 6,82 (5, 1Н), 7,00 (ά, 1=8,8 Гц, 1Н), 7,41-7,52 (т, 5Н), 7,94-7,98 (т, 2Н);
ЖХ/МС (подвижная фаза: 60-95% ацетонитрил-вода-0,01% ТФУ): чистота >95%, Κί = 3,082 мин;
МС выч.: 555; МС найд.: 556 (М+Н)+.
- 29 024083
Синтез соединения согласно примеру 4:
С1
В14е
.01
Пример 4
К раствору соединения В14е в 30 мл ТГФ и 15 мл Н2О добавляли ЫОН Н2О (3 г) и далее смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 24 ч. Смесь концентрировали и разбавляли 30 мл Н2О, добавляли 1н. водный раствор НС1 для подкисления смеси. Смесь подвергали экстракции с помощью ЕЮАс. Органический слой промывали солевым раствором, сушили над Ыа28О4, фильтровали, концентрировали и очищали посредством хроматографии на силикагеле (элюент: РЕ/ЕЮАс = 20/1) с получением 320 мг соединения согласно примеру 4 (рацемической 3-(2-(2-хлор-4-((5-циклопропил-3-(2,6дихлорфенил)изоксазол-4-ил)метокси)фенил)циклопропил)бензойной кислоты) в виде белого твердого вещества (выход 17,5%).
Ή ЯМР (СОС13, 400 МГц) δ: 1,14-1,18 (т, 2Н), 1,24-1,31 (т, 2Н), 1,41-1,46 (т, 2Н), 2,07-2,08 (т, 1Н), 2,15-2,17 (т, 1Н), 2,35-2,37 (т, 1Н), 4,78 (з, 2Н), 6,67 (бб, >2,4 Гц, 8,8 Гц, 1Н), 6,84 (б, >2,4 Гц, 1Н),
6,96 (б, >8,4 Гц, 1Н), 7,30-7,34 (т, 1Н), 7,38-7,45 (т, 4Н), 7,92-7,95 (т, 2Н).
ЖХ/МС (подвижная фаза: 60-95% ацетонитрил-вода-0,01% ТФУ): чистота >97%, К = 3,699 мин;
МС выч.: 553; МС найд.: 554 (М+Н)+.
Разделение рацемической 3-(2-(2-хлор-4-((5-циклопропил-3-(2,6-дихлорфенил)изоксазол-4ил)метокси)фенил)циклопропил)бензойной кислоты на энантиомеры.
290 мг рацемической 3-(2-(2-хлор-4-((5-циклопропил-3-(2,6-дихлорфенил)изоксазол-4ил)метокси)фенил)циклопропил)бензойной кислоты разделяли посредством препаративной хиральной ВЭЖХ на хиральной колонке (колонка: СШКАЬРАК АЭ-Н; размеры колонки: внутренний диаметр 0,46 см, длина 15 см; подвижная фаза: гексан/ЕЮН/НОАс=50/50/0,1 (об./об./об.); расход: 0,5 мл/мин; длина волны: УФ 220 нм; прибор для ВЭЖХ: 5>1йтаб/и ЬС 20 с УФ-детектором §РИ-20А) с получением 137 мг (-)-3-(2-(2-хлор-4-((5-циклопропил-3-(2,6-дихлорфенил)изоксазол-4-ил)метокси)фенил)циклопропил)бензойной кислоты (К = 7,250 мин, э.и.%: > 98%) и 132 мг (+)-3-(2-(2-хлор-4-((5-циклопропил-3(2,6-дихлорфенил)изоксазол-4-ил)метокси)фенил)циклопропил)бензойной кислоты (К = 8,930 мин, э.и.%: >98%).
(-)-3-(2-(2-Хлор-4-((5-циклопропил-3-(2,6-дихлорфенил)изоксазол-4-ил)метокси)фенил)циклопропил)бензойная кислота (пример 5а).
Ή ЯМР (ΟϋΟ13, 400 МГц) δ: 1,14-1,18 (т, 2Н), 1,24-1,31 (т, 2Н), 1,41-1,46 (т, 2Н), 2,07-2,08 (т, 1Н), 2,15-2,17 (т, 1Н), 2,35-2,37 (т, 1Н), 4,78 (з, 2Н), 6,67 (бб, >2,4 Гц, 8,8 Гц, 1Н), 6,84 (б, >2,4 Гц, 1Н),
6,96 (б, >8,4 Гц, 1Н), 7,30-7,34 (т, 1Н), 7,38-7,45 (т, 4Н), 7,92-7,95 (т, 2Н).
ЖХ/МС (подвижная фаза: 60-95% ацетонитрил-вода-0,01% ТФУ): чистота >97%, К = 3,692 мин;
МС выч.: 553; МС найд.: 554 (М+Н)+.
Оптическое вращение: [а]с 25 = -92° (МеОН, с=0,3).
Абсолютную конфигурацию хиральных центров см. на схеме 14.
(+)-3-(2-(2-Хлор-4-((5-циклопропил-3 -(2,6-дихлорфенил)изоксазол-4-ил)метокси)фенил)циклопропил)бензойной кислоты (пример 5Ь).
Ή ЯМР (СОС13, 400 МГц) δ: 1,14-1,18 (т, 2Н), 1,24-1,31 (т, 2Н), 1,41-1,46 (т, 2Н), 2,07-2,08 (т, 1Н), 2,15-2,17 (т, 1Н), 2,35-2,37 (т, 1Н), 4,78 (з, 2Н), 6,67 (бб, >2,4 Гц, 8,8 Гц, 1Н), 6,84 (б, >2,4 Гц, 1Н),
6,96 (б, >8,4 Гц, 1Н), 7,30-7,34 (т, 1Н), 7,38-7,45 (т, 4Н), 7,92-7,95 (т, 2Н).
ЖХ/МС (подвижная фаза: 60-95% ацетонитрил-вода-0,01% ТФУ): чистота >97%, К = 3,690 мин;
МС выч.: 553; МС найд.: 554 (М+Н)+.
Оптическое вращение: [а]с 25 = +91° (МеОН, с=0,3).
Абсолютную конфигурацию хиральных центров см. на схеме 14.
Синтез соединения согласно примеру 6:
В 14а
НООС,
Пример б
- 30 024083
К раствору соединения В14а (220 мг, 0,39 ммоль) в 6 мл ТГФ и 3 мл Н2О добавляли ЫОН Н2О (162 мг, 3,9 ммоль) и далее смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 24 ч. Смесь концентрировали и разбавляли 10 мл Н2О. добавляли 1н. водный раствор НС1 для подкисления смеси до рН 4 и проводили экстракцию с помощью Е(ОЛс. Органический слой промывали солевым раствором, сушили над №-128О4. фильтровали, концентрировали и очищали посредством хроматографии на силикагеле (элюент: РЕ/ЕЮЛс = 3/1) с получением 80 мг соединения согласно примеру 6 (3-(2-(2-хлор-4-((3-(2,6дихлорфенил)-5-изопропил-изоксазол-4-ил)метокси)фенил)циклопропил)бензойной кислоты) в виде белого твердого вещества (выход 37,3%).
Ή ЯМР (400 МГц, СПС13) δ: 1,45 (т, 8Н), 2,09 (т, 1Н), 2,38 (т, 1Н), 3,35 (т, 1Н), 4,73 (5, 2Н), 6,67 (аа, 1=2,4 Гц, 8,4 Гц, 1Н), 6,83 (ά, 1=2,4 Гц, 1Н), 6,99 (ά, 1=8,8 Гц, 1Н), 7,34-7,48 (т, 5Н), 7,95 (т, 2Н).
ЖХ/МС (подвижная фаза: 80-95% ацетонитрил-вода-0,01% ТФУ): чистота >95%, К = 3,983 мин;
МС выч.: 555; МС найд.: 556 (М+Н)+.
Схема 3
Синтез соединения С2:
С1 С2
Раствор соединения С1 (78,0 г, 456 ммоль) и ίτιί’Ν (45,2 г, 502 ммоль) в 400 мл ДМФА кипятили с обратным холодильником в течение 3 ч. Смесь концентрировали под вакуумом и остаток очищали посредством хроматографии на силикагеле (элюент: РЕ/Е1ОАс = 10/1) с получением 7,7 г соединения С2 в виде белого твердого вещества (выход 14,3%).
Синтез соединения С3:
Раствор соединения С2 (7,5 г, 63,6 ммоль), бензоилпероксида (0,54 г, 2,24 ммоль) и Ν-бромсукцинимида (12,5 г, 70,2 ммоль) в 100 мл СС14 кипятили с обратным холодильником в течение 2 ч. Полученную суспензию фильтровали и разбавляли фильтрат 400 мл ДХМ, промывали насыщенным раствором бикарбоната натрия, сушили над Мд§О4, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении. Остаток очищали посредством флэш-хроматографии на силикагеле (элюент: РЕ/Е1ОАс = 10/1) с получением 3,3 г неочищенного соединения С3 в виде желтого твердого вещества, которое использовали в следующей реакции без дополнительной очистки.
- 31 024083
Раствор соединения С3 (3,3 г, 16,8 ммоль) в 30 мл триэтоксифосфина нагревали при 175°С в течение 4 ч. Смесь концентрировали при пониженном давлении с получением 3,99 г соединения С4, которое использовали на следующей стадии без дополнительной очистки.
Синтез соединения С5:
К раствору соединения С4 (3,90 г, 15,4 ммоль) в 40 мл сухого ТГФ добавляли гидрид натрия (1,23 г, 60% в минеральном масле, 30,8 ммоль) при 0°С в течение 30 мин. К полученной смеси добавляли раствор соединения В9 (4,15 г, 15,4 ммоль) в 40 мл сухого ТГФ при 0°С и перемешивали раствор при комнатной температуре в течение 3 ч. Реакцию гасили насыщенным раствором ИН4С1 и проводили экстракцию с помощью Е1ОАс. Органический слой промывали солевым раствором, сушили над Ыа28О4, фильтровали, концентрировали и очищали посредством хроматографии на силикагеле (элюент: РЕ/Е1ОАс = 10/1) с получением 2,11 г соединения С5 в виде белого твердого вещества (выход 37,1%).
Синтез соединения С6:
К раствору соединения С5 (2,10 г, 5,68 ммоль) и Р6(ОАс)2 (0,3 г) в 30 мл Е12О добавляли раствор СН2Ы2 в Е12О (70 мл, 280 ммоль) при -50°С в атмосфере Ν2. Далее раствор медленно нагревали до комнатной температуры и перемешивали в течение еще 4 ч. Реакционную смесь фильтровали, концентрировали и очищали остаток посредством флэш-хроматографии на силикагеле (элюент: РЕ/Е1ОАс =10/1) с получением 1,68 г соединения С6 в виде белого твердого вещества (выход 77,1%).
Синтез соединения С7:
К раствору соединения С6 (600 мг, 1,56 ммоль) в 10 мл ДМФА добавляли NаН (188 мг, 60% в минеральном масле, 4,68 ммоль) при 0°С и перемешивали в течение 1 ч при комнатной температуре. Далее при перемешивании добавляли соединение А6е (472 мг, 1,56 ммоль), после чего осуществляли перемешивание в течение ночи при комнатной температуре. Раствор приливали к 10 мл ледяной воды и проводили экстракцию с помощью 20 мл ДХМ. Органический слой последовательно промывали водой дважды и солевым раствором дважды и сушили над №28О4, Растворитель удаляли при пониженном давлении и очищали остаток посредством хроматографии на силикагеле (элюент: РЕ/Е1ОАс = 10/1) с получением 370 мг соединения С7 в виде белого твердого вещества (выход 44,2%).
- 32 024083
Синтез соединения согласно примеру 7:
К раствору соединения С7 (220 мг, 0,41 ммоль) в 5 мл ДМФА добавляли ΝαΝ3 (66 мг, 1,02 ммоль), ЫН4С1 (54 мг, 1,02 ммоль) и далее смесь перемешивали при 100°С в течение ночи. После охлаждения до комнатной температуры удаляли ДМФА и далее добавляли воду (10 мл) и подкисляли смесь 1н. водным раствором НС1 до рН 4. Полученное твердое вещество собирали фильтрованием и промывали ЕЮАс и ЕьО с получением 29 мг соединения согласно примеру 7 (4-((4-(2-(6-(1Н-тетразол-5-ил)пиридин-3ил)циклопропил)-3-хлорфенокси)метил)-5-циклопропил-3-(2,6-дихлорфенил)изоксазола) в виде желтого твердого вещества (выход 12,2%).
Ή ЯМР (400 МГц, ДМСО-а6) δ: 1,12-1,22 (т, 4Н), 1,63 (5, 2Н), 2,19 (т, 1Н), 2,38 (т, 1Н), 2,43 (т, 1Н), 4,91 (5, 2Н), 6,76 (ά, 1=8,4 Гц, 1Н), 6,94 (ά, 1=1,2 Гц, 1Н), 7,14 (ά, 1=8,4 Гц, 1Н), 7,56 (т, 1Н), 7,64 (т, 2Н), 7,83 (ά, 1=7,6 Гц, 1Н), 8,13 (ά, 1=8,0 Гц, 1Н), 8,72 (5, 1Н).
ЖХ/МС (подвижная фаза: 60-95% ацетонитрил-вода-0,1% ТФУ): чистота >95%, Κί = 2,886 мин;
МС выч.: 578; МС найд.: 579 (М+1).
Синтез соединения согласно примеру 8:
Раствор соединения С7 (150 мг, 0,28 ммоль), КОН (1,57 г, 28 ммоль) в 15 мл этанола и 6 мл воды перемешивали при 100°С в течение 4 ч. Смесь охлаждали до комнатной температуры и концентрировали. Остаток растворяли в 30 мл воды, подкисляли 1н. водным раствором НС1 до рН 4 и полученное твердое вещество собирали посредством фильтрования. Твердое вещество промывали ЕЮАс и сушили под вакуумом с получением 45 мг соединения согласно примеру 8 (5-(2-(2-хлор-4-((5-циклопропил-3-(2,6дихлорфенил)изоксазол-4-ил)метокси)фенил)циклопропил)пиколиновой кислоты) в виде белого твердого вещества (выход 29%).
Ή ЯМР (400 МГц, ДМСО-а6) δ: 8,52 (5, 1Н), 7,88 (ά, 1=7,2 Гц, 1Н), 7,54-7,65 (т, 4Н), 7,11 (ά, 1=8,8 Гц, 1Н), 6,93 (ά, 1=2,8 Гц, 1 Н), 6,74 (άά, 1=2,4 Гц, 8,4 Гц, 1Н), 4,91 (5, 2Н), 2,45 (т, 1Н), 2,33 (т, 1Н), 2,11 (т, 1Н), 1,52-1,59 (т, 2Н), 1,11-1,20 (т, 4Н).
ЖХ/МС (подвижная фаза: 50-95% ацетонитрил-вода-0,1% ТФУ): чистота >95%, Κί = 3,023 мин;
МС выч.: 554; МС найд.: 555 (М+1).
- 33 024083
Схема 3а
К раствору соединения согласно примеру 8 (460 мг, 0,83 ммоль) и Рб(ОАс)2 (0,08 г) в 10 мл сухого ТГФ добавляли раствор СН^2 в Е!2О (5 мл, 20 ммоль) при комнатной температуре и далее раствор перемешивали при указанной температуре в течение 2 ч. Данные как ТСХ, так и ЖХ/МС показали, что метилирование завершилось, и добавляли АсОН для гашения. Проводили концентрирование при пониженном давлении и очистку посредством флэш-хроматографии на силикагеле (элюент: РЕ/ЕА = 5/1) с получением 345 мг соединения С8 в виде желтого масла (выход 73,1%).
- 34 024083
Разделение посредством хиральной ВЭЖХ.
340 мг соединения С8 разделяли посредством препаративной хиральной ВЭЖХ с применением хиральной колонки (колонка: СНГКАЬРАК ΑΌ-Н; размеры колонки: внутренний диаметр 0,46 см, длина 15 см; подвижная фаза: гексан/ЕЮН/НОАс = 60/40/0,1 (об./об./об.); расход: 1,0 мл/мин; длина волны: УФ 220 нм; прибор для ВЭЖХ: δΐιίιηαύζιι ЬС 20 с УФ-детектором 8РЭ-20А) с получением 106 мг соединения С8а (Κΐ = 6,923 мин, э.и.%: >98%) и 119 мг соединения С8Ь (Κΐ = 8,907 мин, э.и.%: >97%).
Синтез соединения согласно примеру 8а:
Пример 8а (-)-изомер
К раствору соединения С8а (106 мг, 0,19 ммоль) в 5 мл ТГФ и 2 мл Н2О добавляли ЫОН-Н2О (8 мг, 1,9 ммоль) и далее смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 4 ч. Концентрировали, разбавляли 5 мл Н2О и добавляли 1н. водный раствор НС1 для подкисления смеси до рН 5. Полученное твердое вещество собирали и отфильтрованный осадок промывали 3 мл воды. Твердое вещество добавляли к 2 мл воды и перемешивали суспензию в течение 2 ч. Твердое вещество снова фильтровали, и отфильтрованный осадок промывали 2 мл воды. Фильтровали, добавляли ЕЮАс, сушили над №28О4, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении с получением 98 мг соединения согласно примеру 8а ((-)-5-(2-(2-хлор-4-((5-циклопропил-3 -(2,6-дихлорфенил)изоксазол-4-ил)метокси)фенил)циклопропил)пиколиновой кислоты) в виде желтого твердого вещества (выход 93,6%).
Ή ЯМР (ДМСО-й6, 400 МГц) δ: 1,12-1,22 (т, 4Н), 1,57-1,64 (т, 2Н), 2,16 (т, 1Н), 2,37 (т, 1Н), 2,48 (т, 1Н), 4,91 (5, 2Н), 6,75 (йй, 1=2,4 Гц, 8,4 Гц, 1Н), 6,93 (й, 1=2,4 Гц, 1Н), 7,13 (й, 1=8,4 Гц, 1Н), 7,56 (т, 1Н), 7,64 (т, 2Н), 7,73 (йй, 1=2,4 Гц, 8,4 Гц, 1Н), 7,97 (й, 1=8,0 Гц, 1Н), 8,63 (й, 1=1,6 Гц, 1Н).
ЖХ/МС (подвижная фаза: 50-95% ацетонитрил-вода-0,05% ТФУ): чистота >97%, Κΐ = 3,124 мин;
МС выч.: 554; МС найд.: 555 (М+1).
Оптическое вращение: [а]с 25 = -127° (СНС13, с=0,3).
Синтез соединения согласно примеру 8Ь:
Пример 8Ь (+)-изомер
Аналогичным образом, описанным для примера 8а, получали 112 мг соединения согласно примеру 8Ь ((+)-5-(2-(2-хлор-4-((5-циклопропил-3-(2,6-дихлорфенил)изоксазол-4-ил)метокси)фенил)циклопропил)пиколиновой кислоты).
- 35 024083 1Н ЯМР (ДМСО-й6, 400 МГц) δ: 1,12-1,22 (т, 4Н), 1,57-1,64 (т, 2Н), 2,16 (т, 1Н), 2,37 (т, 1Н), 2,48 (т, 1Н), 4,91 (5, 2Н), 6,75 (йй, 1=2,4 Гц, 8,4 Гц, 1Н), 6,93 (й, 1=2,4 Гц, 1Н), 7,13 (й, 1=8,4 Гц, 1Н), 7,56 (т, 1Н), 7,64 (т, 2Н), 7,73 (йй, 1=2,4 Гц, 8,4 Гц, 1Н), 7,97 (й, 1=8,0 Гц, 1Н), 8,63 (й, 1=1,6 Гц, 1Н).
ЖХ/МС (подвижная фаза: 40-95% ацетонитрил-вода-0,05% ТФУ): чистота >97%, Κΐ = 3,551 мин;
МС выч.: 554; МС найд.: 555 (М+1).
Оптическое вращение: [а]с 25 = +128° (СНС13, с=0,29).
Схема 4
Синтез соединения Ό2:
Смесь акриламида (210 г, 1,14 моль), соединения Ό1 (700 мл, 4,73 моль) и п-толуолсульфоновой кислоты (7 г, 38,29 ммоль) в 3500 мл сухого толуола кипятили с обратным холодильником в течение 48 ч с азеотропным удалением воды. Реакционную смесь концентрировали в вакууме и очищали остаток посредством флэш-хроматографии на силикагеле (элюент: РЕ/ЕА = 10/1) с получением 25 г соединения Ό2 в виде белого твердого вещества (выход 9,3%).
Синтез соединения Ό3:
Раствор соединения Ό2 (25 г, 105,48 ммоль) и ΝΒδ (22,53 г, 126,58 моль) в 250 мл СС14 нагревали с обратным холодильником в течение 18 ч. Полученный осадок отфильтровывали, а фильтрат концентрировали при пониженном давлении с получением твердого вещества, которое очищали посредством флэш-хроматографии на силикагеле (элюент: РЕ/ЕА = 10:1) с получением 17,35 г соединения Ό3 в виде белого твердого вещества (выход 70%).
Синтез соединения Ό4:
К раствору соединения Ό3 (4,34 г, 18,46 ммоль) в 20 мл ДМФА добавляли соединения А6е (5,56 г, 18,46 ммоль) и К2СО3 (2,55 г, 18,46 ммоль). Смесь нагревали в течение ночи при 60°С. Данные как ТСХ, так и ЖХ/МС показали, что реакция завершилась. Смесь концентрировали при пониженном давлении и очищали посредством хроматографии на силикагеле (элюент: РЕ/ЕА = 6/1) с получением 6,33 г соедине- 36 024083 ния Ό4 в виде белого твердого вещества (выход 68%). Синтез соединения Ό5:
К суспензии ЬАН (0,46 г, 12,6 ммоль) в 50 мл сухого ТГФ, добавляли при 0°С раствор соединения Ό4 (6,33 г, 12,6 ммоль) в 50 мл сухого ТГФ и перемешивали смесь при комнатной температуре в течение 2 ч. Добавляли МеОН к полученному раствору для гашения реакции с последующим добавлением насыщенного раствора №-128О4. Полученное твердое вещество отфильтровывали, а фильтрат концентрировали и очищали посредством хроматографии на силикагеле (элюент: РЕ/ЕА = 4/1) с получением 4,17 г соединения Ό5 в виде светло-зеленого твердого вещества (выход 72%).
Синтез соединения Ό6:
К раствору соединения Ό5 (3 г, 6,55 ммоль) в 30 мл СНС13 добавляли активированный МпО2 (2,28 г, 26,2 ммоль) и далее кипятили суспензию с обратным холодильником в течение 3 ч. Реакционную смесь фильтровали и отфильтрованный осадок промывали горячим СНС13, далее фильтрат концентрировали с получением 2,81 г соединения Ό6 в виде желтого твердого вещества, которое использовали в следующей реакции без дополнительной очистки.
Синтез соединения Ό7:
К раствору соединения В6 (2,3 г, 8,06 ммоль) в 30 мл сухого ТГФ добавляли гидрид натрия (0,5 г, 12,3 ммоль) при 0°С в течение 30 мин. К полученной смеси добавляли раствор соединения Ό6 (2,81 г, 6,16 ммоль) в 20 мл сухого ТГФ при 0°С и перемешивали раствор при комнатной температуре в течение 3 ч. Смесь гасили насыщенным раствором N^01 и проводили экстракцию с помощью Е!ОАс. Органический слой промывали солевым раствором, сушили над №-ь8О4. фильтровали, концентрировали и очищали посредством хроматографии на силикагеле (элюент: РЕ/ЕА = 10/1) с получением 0,98 г соединения Ό7 в виде белого твердого вещества (выход 27,3%).
Синтез соединения Ό8:
К раствору соединения Ό7 (970 г, 1,65 ммоль) и Рб(ОАс)2 (150 мг) в 20 мл Е!2О добавляли раствор ί'Ή2Ν2 в Е!2О (20 мл, 80 ммоль) при -50°С в атмосфере Ν2. Далее раствор медленно нагревали до комнатной температуры и перемешивали в течение 4 ч. Данные как ТСХ, так и ЖХ/МС показали, что реакция завершилась. Реакционную смесь фильтровали, концентрировали и очищали посредством флэшхроматографии на силикагеле (элюент: РЕ/ЕА =10/1) с получением 378 мг неочищенного соединения Ό8 в виде белого твердого вещества (выход 38,6%).
- 37 024083
Синтез соединения согласно примеру 9:
К раствору соединения Ό8 (367 мг, 0,61 ммоль) в 10 мл ТГФ и 4 мл Н2О добавляли ЫОН Н2О (200 мг, 4,76 ммоль) и далее смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 24 ч. Реакционную смесь концентрировали и разбавляли 10 мл Н2О, добавляли 1н. водный раствор НС1 для подкисления смеси до рН 5, который далее экстрагировали с помощью ЕЮАс. Органический слой промывали солевым раствором, сушили над №2О4, фильтровали, концентрировали и очищали посредством хроматографии на силикагеле (элюент: РЕ/ЕА = 1/3) с получением 140 мг соединения согласно примеру 9 (3-(2-(6-((5-циклопропил-3-(2,6-дихлорфенил)изоксазол-4-ил)метокси)-2-(трифторметил)пиридин-3ил)циклопропил)бензойной кислоты) в виде белого твердого вещества (выход 39,1%).
Ή ЯМР (400 МГц, ДМСО-Л6) δ: 1,16 (т, 4Н), 1,60 (т, 2Н), 2,30 (т, 3Н), 5,28 (в, 2Н), 6,87 (Л, ΐ=8,4 Гц, 1Н), 7,44 (в, 2Н), 7,50 (т, 1Н), 7,55 (т, 2Н), 7,70 (т, 1Н), 7,76 (т, 2Н).
ЖХ/МС (подвижная фаза: 70-95% ацетонитрил-вода-0,01% ТФУ): чистота >97%, Κΐ = 3,033 мин;
МС выч.: 588; МС найд.: 589 (М+1).
К раствору соединения В8 (10 г, 64,1 ммоль) в 100 мл ί.Ή3ί'.’Ν добавляли К2СО3 (18,0 г, 130,4 ммоль) и Ме1 (20 мл, 321,0 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение ночи. Реакционную смесь концентрировали при пониженном давлении с получением 11 г неочищенного соединения Е2, которое использовали в следующей реакции восстановления без дополнительной очистки.
Синтез соединения Е3:
К раствору соединения Е2 (10 г, 61,8 ммоль) в 100 мл ЕЮН добавляли №ВН3 (5,0 г, 123,6 ммоль) и перемешивали смесь при комнатной температуре в течение 2 ч в атмосфере Ν2. Добавляли 1н. раствор НС1, чтобы погасить реакцию. Реакционную смесь концентрировали при пониженном давлении и добав- 38 024083 ляли Е!ОАс дважды для экстракции. Объединенные органические слои последовательно промывали водой и солевым раствором, сушили над №28О4, фильтровали, концентрировали и очищали посредством хроматографии на силикагеле (элюент: РЕ/ЕА = 2/1) с получением 10 г соединения Е3 в виде масла (выход 94,2%).
Синтез соединения Е4:
К раствору соединения Е3 (10 г, 58,1 ммоль) в 100 мл сухого ДХМ добавляли РВг3 (31,2 г, 116,2 ммоль) в атмосфере Ν2 при комнатной температуре, и раствор перемешивали при указанной температуре в течение 2 ч. Полученный раствор приливали к ледяной воде и сушили органический слой над №28О4, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении с получением 13,5 г соединения Е4 в виде коричневого масла, которое использовали в следующей реакции без дополнительной очистки.
Синтез соединения Е5:
Раствор соединения Е4 (13,5 г, 57,7 ммоль) в 50 мл триэтоксифосфина нагревали при 175°С в течение 4 ч. Реакционную смесь концентрировали при пониженном давлении с получением 17 г соединения Е5, которое использовали в следующей реакции без дополнительной очистки.
Синтез соединения Е7:
К раствору соединения Е6 (50 г, 0,25 моль) в 400 мл безводного ТГФ по каплям добавляли раствор ВН3 в ТГФ (1 М, 500 мл, 0,50 моль) при охлаждении в ледяной бане. После добавления, реакционный раствор перемешивали при комнатной температуре в течение ночи. Данные ТСХ показали, что восстановление завершилось. Медленно добавляли 400 мл МеОН для гашения. Смесь концентрировали при пониженном давлении и очищали посредством флэш-хроматографии на силикагеле (элюент: РЕ/ЕА = 1/1) с получением 15 г соединения Е7 в виде белого твердого вещества (выход 32,2%).
Синтез соединения Е8:
Раствор соединения Е7 (15 г, 80,2 ммоль), 2Н-3,4-дигидропирана (26,9 г, 160,4 ммоль) и р-ТзОН (1,5 г, 8,7 ммоль) в 200 мл безводного ДХМ перемешивали при комнатной температуре в течение 2 ч. Добавляли воду, а органическую фазу промывали солевым раствором, сушили над №-ь8О+ фильтровали и концентрировали при пониженном давлении с получением 23 г неочищенного соединения Е8 в виде масла, которое использовали в следующей реакции без дополнительной очистки.
Синтез соединения Е9:
В сосуд автоклава загружали неочищенное соединение Е8 (23 г, 80,2 ммоль), РйС12(йррГ)2 (1,15 г, 2 мол.%) и триэтиламин (16,2 г, 160,4 ммоль) в 200 мл метанола. Сосуд продували азотом три раза и монооксидом углерода три раза. В сосуде создавали давление 2 МПа с помощью монооксида углерода и нагревали до 100°С. Таким образом смесь перемешивали в течение ночи, далее давали остыть до комнатной температуры. Полученный раствор фильтровали через слой диоксида кремния и промывали отфильтрованный осадок 50 мл МеОН. Фильтрат концентрировали и очищали посредством флэшхроматографии на силикагеле (элюент: РЕ/ЕА = 8/1) с получением 18 г соединения Е9 в виде желтого твердого вещества (выход за 2 стадии: 89,4%).
- 39 024083
Синтез соединения Е10:
К раствору соединения Е9 (18 г, 71,7 ммоль) в 200 мл МеОН добавляли р-ТкОН (22,8 г, 120,0 ммоль). Далее раствор перемешивали при комнатной температуре в течение 2 ч. Смесь концентрировали и последовательно добавляли воду и Е!ОАс. Органическую фазу промывали солевым раствором, сушили над Ыа2ЗО4, фильтровали и концентрировали с получением 40,8 г неочищенного соединения Е10 в виде бесцветной жидкости, которую использовали в следующей реакции без дополнительной очистки.
Синтез соединения Е11:
К раствору неочищенного соединения Е10 (40,8 г, 71,7 ммоль) в 300 мл СНС13 добавляли активированный МпО2 (31,2 г, 358,5 ммоль) и далее суспензию кипятили с обратным холодильником в течение 7 ч. Данные ТСХ показали, что окисление прошло успешно. Реакционную смесь фильтровали и отфильтрованный осадок промывали горячим СНС13, далее фильтрат концентрировали с получением 10,3 г соединения Е11 в виде белого твердого вещества (выход за 2 стадии: 87,1%).
Синтез соединения Е12:
К раствору соединения Е5 (17 г, 58,2 ммоль) в 200 мл сухого ТГФ добавляли гидрид натрия (4,66 г, 116,4 ммоль) при 0°С в течение 30 мин. К полученной смеси добавляли раствор соединения Е11 (9,6 г, 58,2 ммоль) в 80 мл сухого ТГФ при 0°С и перемешивали раствор при комнатной температуре в течение 1 ч. Смесь гасили водой и проводили экстракцию с помощью Е!ОАс. Органический слой промывали солевым раствором, сушили над Ыа2ЗО4, фильтровали, концентрировали и очищали посредством хроматографии на силикагеле (элюент: РЕ/ЕА = 5/1) с получением 9,55 г соединения Е12 в виде желтого твердого вещества (выход 54,2%).
Синтез соединения Е13:
К раствору соединения Е12 (9,55 г, 31,5 ммоль) в 100 мл сухого ДХМ добавляли ВВг3 (29,8 мл, 315 ммоль) при -70°С в атмосфере Ν2 и далее раствор перемешивали при комнатной температуре в течение 1 ч. Данные как ТСХ, так и ЖХ/МС показали, что деметилирование завершилось. Раствор снова охлаждали до -30°С и добавляли 50 мл МеОН, чтобы погасить реакцию. Смесь концентрировали при пониженном давлении и к осадку добавляли воду и ДХМ. Органический слой сушили над Ыа2ЗО4, фильтровали и концентрировали с получением 10,1 г неочищенного соединения Е13 в виде коричневого твердого вещества, которое использовали в следующей реакции сочетания без дополнительной очистки.
Синтез соединения Е14:
К раствору неочищенного соединения Е13 (10,1 г, 31,5 ммоль) и соединения А6а (9,51 г, 31,5 ммоль) в 50 мл ДМФА добавляли К2СО3 (43,47 г, 315 ммоль). Смесь нагревали в течение ночи при 60°С. Фильтровали, концентрировали при пониженном давлении, разбавляли 100 мл Н2О и проводили экстракцию с помощью 300 мл Е!ОАс. Органический слой последовательно промывали водой и солевым раствором дважды, сушили над Ыа2ЗО4, фильтровали, концентрировали и очищали посредством хроматографии на силикагеле (элюент: РЕ/ЕА = 5/1) с получением 4,75 г соединения Е14 в виде желтого твердого вещества (выход 27,2%).
- 40 024083
Синтез соединения Е15:
К раствору соединения Е14 (4,0 г, 7,22 ммоль) и Р6(ОАс)2 (0,4 г) в 60 мл Е12О добавляли раствор ί'Ή2Ν2 в Е12О (70 мл, 280 ммоль) при -50°С в атмосфере Ν2. Далее раствор медленно нагревали до комнатной температуры и перемешивали еще 4 ч. Данные как ТСХ, так и ЖХ/МС показали, что реакция прошла успешно. Проводили фильтрование, концентрирование и очистку посредством флэшхроматографии на силикагеле (элюент: РЕ/ЕА = 4/1) с получением 1,53 г соединения Е15 в виде желтого твердого вещества (выход 37,3%).
Синтез соединения согласно примеру 10:
Пример 10
К раствору соединения Е15 (1,53 г, 2,69 ммоль) в 40 мл ТГФ и 10 мл Н2О добавляли ЫОН-Н2О (1,51 г, 36 ммоль) и далее смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 24 ч. Концентрировали, разбавляли 50 мл Н2О и добавляли 1н. водный раствор НС1 для подкисления смеси до рН 5. Полученное твердое вещество собирали и осадок промывали 20 мл воды. Данное твердое вещество добавляли к 50 мл воды и перемешивали суспензию в течение 2 ч. Твердое вещество снова фильтровали, и промывали отфильтрованный осадок 20 мл воды. Далее полученное твердое вещество очищали посредством препаративной ВЭЖХ с получением 705 мг соединения согласно примеру 10 (5-(2-(2-хлор-4-((5циклопропил-3-(2,6-дихлорфенил)изоксазол-4-ил)метокси)фенил)циклопропил)никотиновой кислоты) в виде желтого твердого вещества (выход 47,3%).
Ή ЯМР (400 МГц, СО3ОЭ) δ: 1,23 (т, 4Н), 1,58-1,69 (т, 2Н), 2,20 (т, 1Н), 2,35 (т, 1Н), 2,45 (т, 1Н), 4,91 (к, 2Н), 6,74 (66, 1=2,8 Гц, 8,8 Гц, 1Н), 6,86 (6, 1=2,8 Гц, 1Н), 7,11 (6, 1=8,4 Гц, 1Н), 7,45-7,54 (т, 3Н), 8,37 (к, 1Н), 8,77 (к, 1Н), 9,02 (к, 1Н);
ЖХ/МС (подвижная фаза: 50-95% ацетонитрил-вода-0,01% ТФУ): чистота >97%, К1 = 3,007 мин;
МС выч.: 554; МС найд.: 555 (М+1).
- 41 024083
Синтез соединения Р3:
он о но
К раствору 5-бромсалицилкарбогидроксамовой кислоты Р2 (21,6 г) в тетрагидрофуране (60 мл) по каплям добавляли тионилхлорид (10 мл) при перемешивании при 10-20°С. После перемешивания в течение 2 ч при той же температуре реакционную смесь выпаривали при пониженном давлении и остаток растворяли в диоксане (60 мл) и охлаждали до 0-5°С. К реакционной смеси добавляли триэтиламин (38 мл) и осуществляли перемешивание при комнатной температуре в течение 1 ч. Растворитель выпаривали при пониженном давлении, а к остатку добавляли ледяную воду (300 мл). Смесь доводили до рН 2 концентрированной соляной кислотой и осажденные кристаллы фильтровали и промывали водой. Получали соединение Р3 (17,5 г, 88%) в виде бесцветных игольчатых кристаллов посредством рекристаллизации из этилацетата.
Синтез соединения Р4:
К суспензии соединения Р3 (1 г, 4,67 ммоль) в ДМФА (10 мл) добавляли ЫаН (0,23 г, 9,35 ммоль). Полученную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 1 ч. Далее смесь охлаждали до 5°С и добавляли хлорметил-метиловый эфир (0,45 г, 80,5 моль) с последующим перемешиванием при той же температуре в течение 1 ч. Смесь приливали в ледяную воду и проводили экстракцию с помощью эфира. Органический слой промывали солевым раствором, сушили над МдЗО4, концентрировали и очищали посредством колоночной флэш-хроматографии на силикагеле с получением соединения Р4 (1,1 г, выход 92%).
Ή ЯМР (300 МГц, ДМСОДЭ δ: 8,01-8,02 (ά, 1Н), 7,79-7,82 (άά, 1Н), 7,64-7,67 (ά, 1Н), 5,52 (5, 2Н), 3,51 (5, 3Н).
Синтез соединения Р5:
К раствору соединения Р4 (2 г, 7,7 ммоль) в безводном ТГФ (20 мл) по каплям добавляли и-ВиЫ (2,5 М в гексане, 4,6 мл) при -78°С при защите Ν2 и перемешивали смесь при -78°С в течение 1 ч. Далее по каплям добавляли безводный ДМФА (11,6 ммоль, 0,9 мл) при -78°С и перемешивали смесь при -78°С в течение еще 1 ч. Добавляли насыщенный водный раствор НН4С1, чтобы погасить реакцию, и смесь подвергали экстракции с помощью этилацетата. Органический слой промывали солевым раствором, сушили над МдЗО4 и концентрировали. Остаток очищали посредством колоночной флэш-хроматографии на силикагеле с получением соединения Р5 (800 мг, выход 50%).
Ή ЯМР (300 МГц, ДМСОиЭ δ: 10,07 (5, 1Н), 8,38 (ά, 1Н), 8,11-8,15 (άά, 1Н), 7,80-7,82 (ά, 1Н), 5,55 (5, 2Н), 3,53 (5, 3Н).
Синтез соединения Р7:
К раствору соединения Р6 (5,1 г, 12,1 ммоль) в 10 мл ЕЮН добавляли №ВН4 (0,92 г, 24,2 ммоль). Далее раствор перемешивали в течение 1 ч при комнатной температуре. Концентрировали и добавляли ЕЮАс. Раствор промывали водой и солевым раствором, сушили над Ма2ЗО4, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении с получением 4,19 г неочищенного соединения Р7 в виде белого твердого вещества, которое использовали в следующей реакции без дополнительной очистки.
Синтез соединения Р8:
- 42 024083
К раствору соединения Р7 (4 г, 9,46 ммоль) в 30 мл сухого ЕьО добавляли РВг3 (2,56 г, 9,46 ммоль) в атмосфере Ν2 при 0°С. После перемешивания в течение 0,5 ч, данные как ТСХ, так и ЖХ/МС показали, что реакция завершилась. Полученный раствор приливали к насыщенному раствору NаНСО3 и промывали органический слой водой и солевым раствором. Сушили над №28О4, фильтровали и концентрировали с получением 3,99 г неочищенного Р8 в виде желтого твердого вещества, которое использовали в следующей реакции без дополнительной очистки.
Синтез соединения Р9:
Раствор соединения Р8 (2 г, 4,12 ммоль) в 15 мл триэтоксифосфина при 175°С в течение 2 ч. Концентрировали при пониженном давлении с получением 2,3 г соединения Р9 в виде масла, которое использовали в следующей реакции без дополнительной очистки.
Синтез соединения Р10:
К раствору соединения Р9 (2,3 г, 4,12 ммоль) в 20 мл сухого ТГФ добавляли гидрид натрия (247 мг, 6,18 ммоль) при 0°С в течение 30 мин. К данной полученной смеси добавляли раствор соединения Р5 (0,85 г, 4,12 ммоль) в 160 мл сухого ТГФ при 0°С и перемешивали раствор при комнатной температуре в течение 3 ч. Смесь гасили насыщенным раствором ΝΉ4Ο и проводили экстракцию с помощью ЕЮАс. Органический слой промывали солевым раствором, сушили над №28О4, фильтровали, концентрировали с получением 311 мг соединения Р10 в виде коричневого твердого вещества (выход 12,7%).
Синтез соединения Р11:
К раствору соединения Р10 (311 мг, 0,52 ммоль) и Ра(ОАс)2 (0,1 г) в 10 мл сухого ТГФ добавляли раствор СН^2 в ЕьО (10 мл, 40 ммоль) при -50°С в атмосфере Ν2. Далее раствор медленно нагревали до комнатной температуры и перемешивали еще 4 ч. Данные как ТСХ, так и ЖХ/МС показали, что реакция прошла успешно. Осуществляли фильтрование, концентрирование и очистку посредством флэшхроматографии на силикагеле (элюент: РЕ/ЕА = 4/1) с получением 214 мг соединения Р11 в виде желтого твердого вещества (выход 67,5%).
Синтез соединения согласно примеру 11:
К раствору соединения Р11 (214 мг, 0,35 ммоль) в 5 мл 1,4-диоксана, добавляли 3 М соляную кислоту (1 мл) и полученную смесь перемешивали в течение ночи при комнатной температуре. Далее к реакционной смеси добавляли воду и этилацетат. Органический слой промывали солевым раствором, сушили над Мд§О4 и концентрировали. Остаток очищали посредством препаративной ТСХ с получением 22 мг соединения согласно примеру 11 в виде желтого твердого вещества (выход 11,1%).
Ή ЯМР (400 МГц, СОС1;) δ: 1,18 (т, 2Н), 1,30 (т, 2Н), 1,45 (т, 2Н), 2,13-2,19 (т, 2Н), 2,35 (т, 1Н), 4,81 (5, 2Н), 6,70 (а, 1=6,4 Гц, 1Н), 6,87 (5, 1Н), 6,99 (ά, 1=8,4 Гц, 1Н), 7,36 (т, 2Н), 7,43 (т, 2Н), 7,50 (ά, 1=8,8 Гц, 1Н), 7,59 (5, 1Н);
ЖХ/МС (подвижная фаза: 40-95% ацетонитрил-вода): чистота 90%, К1 = 2,966 мин;
МС выч.: 566; МС найд.: 567 (М+1).
- 43 024083
Схема 7
Пример 12
Синтез соединения 02:
К раствору соединения В9 (31 г, 110 ммоль) в 300 мл сухого ТГФ добавляли гидрид натрия (8,8 г, 220 ммоль) при 0°С в течение 30 мин. К данной полученной смеси добавляли раствор соединения 01 (20,1 г, 130 ммоль) в 160 мл сухого ТГФ при 0°С и перемешивали раствор при комнатной температуре в течение 3 ч. Смесь гасили насыщенным раствором ΝΉ40 и проводили экстракцию с помощью ЕЮАс. Органический слой промывали солевым раствором, сушили над №28О4, фильтровали, концентрировали и очищали посредством флэш-хроматографии на силикагеле (элюент: РЕ/ЕА = 10/1) с получением 25 г соединения 3 в виде желтого твердого вещества (выход 78,9%).
Синтез соединения 03:
К раствору неочищенного соединения 02 (25 г, 86,8 ммоль) и соединения А6е (26,2 г, 86,8 ммоль) в 100 мл ДМФА добавляли К2СО3 (56,9 г, 173,6 ммоль). Смесь нагревали в течение ночи при 60°С. Охлаждали до комнатной температуры, разбавляли 10 мл Н2О и проводили экстракцию с помощью 300 мл ЕЮАс. Органический слой промывали дважды солевым раствором, сушили над №28О4, фильтровали, концентрировали и очищали посредством флэш-хроматографии на силикагеле (элюент: РЕ/ЕА = 20/1) с получением 30 г соединения 4 в виде белого твердого вещества (выход 62,5%).
Синтез соединения 04:
К раствору соединения 03 (30 г, 54,2 ммоль) и Рй(ОАс)2 (3 г) в 300 мл ЕьО добавляли раствор ί'Ή2Ν2 в ЕьО (700 мл, 2,80 моль) при -50°С в атмосфере Ν2. Далее раствор медленно нагревали до комнатной температуры и перемешивали еще 4 ч. Данные как ТСХ, так и ЖХ/МС показали, что реакция прошла успешно. Фильтровали, концентрировали и очищали посредством флэш-хроматографии на силикагеле (элюент: РЕ/ЕА =10/1) с получением 24 г соединения 04 в виде масла (выход 78%).
- 44 024083
Синтез соединения согласно примеру 12:
К раствору соединения О4 (24 г, 42,3 ммоль) в 200 мл ТГФ и 50 мл Н2О добавляли ЬЮН-Н2О (17,77 г, 423 ммоль) и далее смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 24 ч. Концентрировали и разбавляли 200 мл Н2О, добавляли 1н. водный раствор НС1 для подкисления смеси до рН 4, далее смесь подвергали экстракции с помощью ЕЮАс. Органический слой промывали солевым раствором, сушили над №-ьЗО.-|. фильтровали, концентрировали и очищали посредством хроматографии на силикагеле (элюент: РЕ/ЕА = 3/1) с получением 16,35 г соединения согласно примеру 12 в виде белого твердого вещества (выход 37,3%).
Ή ЯМР (400 МГц, СПС13) δ: 1,13 (т, 2Н), 1,18 (т, 2Н), 1,53 (т, 2Н), 2,10 (т, 1Н), 2,31 (т, 1Н), 2,46 (т, 1Н), 4,89 (в, 2Н), 6,73 (ЛЛ, ί=2,4 Гц, 8,4 Гц, 1Н), 6,91 (Л, 1=2,4 Гц, 1Н), 7,08 (Л, 1=8,8 Гц, 1Н), 7,30 (Л, 1=8,4 Гц, 2Н), 7,55 (т, 1Н), 7,63 (т, 2Н), 7,85 (Л, 1=8,4 Гц, 2Н);
ЖХ/МС (подвижная фаза: 30-95% ацетонитрил-вода): чистота >95%, Κί = 2,875 мин;
МС выч.: 553; МС найд.: 554 (М+1).
Пример 12а.
Соответствующее количество трометанамина добавляли к 1 г соединения согласно примеру 12 (свободная кислота), чтобы основное соединение и его противоион были бы в эквимолярном соотношении. Добавляли этанол (30 мл). Смесь перемешивали при 55 °С до полного растворения (са. 1 ч) далее растворитель удаляли под вакуумом. Медленно добавляли изопропанол до полного растворения пленки при перемешивании среды при 75°С. Далее образец медленно охлаждали от 75°С до комнатной температуры, понижая температуру на 2° каждые 15 мин. Супернатант удаляли из колбы. Порошок сушили в динамическом вакууме в течение 2 ч при 70°С. Далее порошок дополнительно сушили при 40°С в течение 4 ч.
Ή ЯМР (400 МГц, СОС1;) δ: 1,09-1,18 (т, 4Н), 1,39-1,46 (т, 2Н), 1,98-2,06 (т, 1Н), 2,21-2,28 (т, 1Н), 2,40-2,45 (т, 1Н), 3,44 (в, 6Н), 4,87 (в, 2Н), 6,15 (Ьв, 6Н), 6,70 (ЛЛ, ί1=18,8 Гц, ί2=2,5 Гц, 1Н), 6,87 (Л, ί=2,5 Гц, 1Н), 7,01 (Л, ί=8,8 Гц, 1Н), 7,14 (Л, 1=8,2 Гц, 2Н), 7,49-7,54 (т, 1Н), 7,57-7,61 (т, 2Н), 7,79 (Л, ί=8,2 Гц, 2Н);
Тпл=143°С.
- 45 024083
Разделение посредством хиральной ВЭЖХ:
3,5 г С4 (рацемат) разделяли посредством препаративной хиральной ВЭЖХ с хиральной колонкой (колонка: СНГКАЬРАК размеры колонки: внутренний диаметр 0,46 см, длина 15 см; подвижная фаза: гексан/изопропиловый спирт = 70/30 (об./об.); расход: 1 мл/мин; длина волны: УФ 254 нм; прибор для ВЭЖХ: δΐιίιικ^χιι ЬС 20 с УФ-детектором δίΩ-ΣΙΑ) с получением 1,5 г С4а (К! = 4,262 мин, э.и.%: >99%) и 1,5 г С4Ь (К! = 5,008 мин, э.и.%: >99%).
Синтез соединения согласно примеру 12Ь:
К раствору С4а (1,5 г, 2,65 ммоль) в 20 мл ТГФ и 15 мл Н2О добавляли ЫОН-Н2О (800 мг, 19 ммоль) и далее перемешивали смесь при 50°С в течение ночи. Концентрировали при пониженном давлении, разбавляли 5 мл Н2О и добавляли 1н. водный раствор НС1 для подкисления смеси до рН 4. Полученное твердое вещество фильтровали и сушили в вакууме с получением 1,1 г соединения согласно примеру 12Ь ((+)-4-(2-(2-хлор-4-((5-циклопропил-3-(2,6-дихлорфенил)изоксазол-4ил)метокси)фенил)циклопропил)бензойной кислоты) в виде белого твердого вещества (выход 75,2%).
Ή ЯМР (400 МГц, СЭС13) δ: 1,13 (т, 2Н), 1,18 (т, 2Н), 1,53 (т, 2Н), 2,10 (т, 1Н), 2,31 (т, 1Н), 2,46 (т, 1Н), 4,89 (5, 2Н), 6,73 (бб, 1=2,4 Гц, 8,4 Гц, 1Н), 6,91 (б, 1=2,4 Гц, 1Н), 7,08 (б, 1=8,8 Гц, 1Н), 7,30 (б, 1=8,4 Гц, 2Н), 7,55 (т, 1Н), 7,63 (т, 2Н), 7,85 (б, 1=8,4 Гц, 2Н);
ЖХ/МС (подвижная фаза: 60-95% ацетонитрил-вода-0,05% ТФУ): чистота >98%, К! = 3,632 мин;
МС выч.: 553; МС найд.: 554 (М+1);
Хиральная ВЭЖХ (колонка: СШКАЬРАК АЭ-Н 250x4,6; подвижная фаза: 93/7 гексан/Е!ОН): э.и.% 100%, К!= 16,408;
Оптическое вращение: [а]с 25 = +132° (МеОН, с=0,295).
Синтез соединения согласно примеру 12с:
К раствору С4Ь (1,5 г, 2,65 ммоль) в 20 мл ТГФ и 15 мл Н2О добавляли ЫОН-Н2О (800 мг, 19 ммоль) и далее смесь перемешивали при 50°С в течение ночи. Концентрировали при пониженном давлении, разбавляли 5 мл Н2О и добавляли 1н. водный раствор НС1 для подкисления смеси до рН 4. Полученное твердое вещество фильтровали и сушили в вакууме с получением 1,1 г соединения согласно примеру 12с ((-)-4-(2-(2-хлор-4-((5-циклопропил-3-(2,6-дихлорфенил)изоксазол-4ил)метокси)фенил)циклопропил)бензойной кислоты) в виде белого твердого вещества (выход 75,2%).
Ή ЯМР (400 МГц, СЭС13) δ:1,13(Μ, 2Н), 1,18 (т, 2Н), 1,53 (т, 2Н), 2,10 (т, 1Н), 2,31 (т, 1Н), 2,46 (т, 1Н), 4,89 (5, 2Н), 6,73 (бб, 1=2,4 Гц, 8,4 Гц, 1Н), 6,91 (б, 1=2,4 Гц, 1Н), 7,08 (б, 1=8,8 Гц, 1Н), 7,30 (б,
- 46 024083
1=8,4 Гц, 2Н), 7,55 (т, 1Н), 7,63 (т, 2Н), 7,85 (й, 1=8,4 Гц, 2Н);
ЖХ/МС (подвижная фаза: 60-95% ацетонитрил-вода-0,05% ТФУ): чистота >98%, К! = 3,632 мин; МС выч.: 553; МС найд.: 554 (М+1);
Хиральная ВЭЖХ (колонка: СН1КАЬРАК АЭ-Н 250x4,6; подвижная фаза: 93/7 гексан/Е!ОН): э.и.% 100%, К! = 24,411;
Оптическое вращение: [α]Β 25 = -140,6° (МеОН, с=0,31).
Схема 8
Синтез соединения Н2:
Охлажденный (0°С) водный раствор NаNО2 (6,1 г, 88,5 ммоль, 27 мл воды) добавляли к охлажденному (0°С) раствору коммерчески доступного соединения Н1 (20 г, 88,5 ммоль) в водном №ГОН (96 мл, 96 ммоль, 1н.). Объединенные растворы медленно добавляли к охлажденному водному раствору Н28О4 (9,2 мл концентрированной Н28О4, 80 мл воды) с помощью капельной воронки с концом ниже поверхности раствора кислоты. К реакционной смеси добавляли лед для поддержания 0°С и для регулирования пены добавляли диэтиловый эфир, при необходимости. После перемешивания в течение еще 10 мин медленно добавляли раствор диазония к охлажденной смеси 8иС12-2Н2О (50 г, 221 ммоль) в концентрированной НС1 (80 мл) с помощью капельной воронки с концом ниже поверхности раствора кислоты. К реакционной смеси добавляли лед для поддержания 0°С и для регулирования пены добавляли диэтиловый эфир, при необходимости. После перемешивания еще в течение 1 ч при 0°С реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение ночи. Фильтровали, порошок золотисто-желтого цвета растворяли в водном №ЮН, промывали диэтиловым эфиром, осаждали водном раствором НС1, фильтровали и сушили с получением 20 г неочищенного соединения Н2 в виде желтого порошка, который использовали в следующей реакции без дополнительной очистки.
Синтез соединения Н3:
К раствору соединения Н2 (20 г, 84 ммоль) в 200 мл сухого МеОН добавляли по каплям концентрированную Н28О4 (15,4 г, 168 ммоль) при 0-5°С. Полученную смесь кипятили с обратным холодильником в течение ночи. Реакционную смесь фильтровали, выпаривали и приливали к воде (50 мл). Раствор доводили до рН 7 насыщенным водным раствором NаΗСОз, проводили экстракцию диэтиловым эфиром (3x50 мл), сушили над Мд8О4, концентрировали и очищали посредством флэш-хроматографии на силикагеле (элюент: РЕ/ЕА = 1/1) с получением 7,1 г соединения Н3 в виде желтого твердого вещества (выход 35%).
- 47 024083
Синтез соединения Н4:
К смеси соединения Н3 (7 г, 27,45 ммоль) и карбоната калия (45 г, 137,25 ммоль) в 200 мл СНзСN добавляли СН31 (19,60 г, 138 ммоль) при комнатной температуре. Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 15 ч. Концентрировали при пониженном давлении, разбавляли водой, и проводили экстракцию с помощью ЕЮАс (3x10 мл). Объединенные органические слои сушили над №-ь8О.-| и концентрировали при пониженном давлении. Неочищенный остаток очищали посредством флэш-хроматографии (элюент: РЕ/ЕА = 4:1) с получением 4,9 г соединения Н4 в виде желтого твердого вещества (выход 70%).
Синтез соединения Н5:
К перемешанному раствору и-ВиЫ (4 мл, 2,5 М раствор в гексане, 10 ммоль) в 30 мл сухого ТГФ добавляли бромид метилтрифенилфосфония (3,57 г, 10 ммоль) в течение периода в 5 мин при -60°С. Реакционную смесь перемешивали в течение 4 ч при данной температуре. К полученному оранжевому раствору по каплям добавляли раствор соединения Р6 (4,21 г, 10 ммоль) в 5 мл сухого ТГФ при -60°С. Раствор становился бесцветным, и ему давали остыть до комнатной температуры. Добавляли 20 мл воды для гашения и дважды проводили экстракцию с помощью ЕЮАс. Объединенные органические слои промывали солевым раствором и далее сушили над безводным М§§О4, Растворитель удаляли с получением 4,53 г неочищенного соединения Н5, которое использовали в следующей реакции Хека без дополнительной очистки.
Синтез соединения Н6:
Смесь соединения Н5 (3,57 г, 10 ммоль), соединения Н6 (3,57 г, 10 ммоль), три(ортотолил)фосфина (3,57 г, 10 ммоль) и ТЭА (3,57 г, 10 ммоль) в 5 мл ДМФА помещали в предварительно нагретую баню при 100°С. Добавляли Рй2(йЬл)3 (3,57 г, 10 ммоль) и смесь выдерживали при 100°С в течение 16 ч. После охлаждения до комнатной температуры смесь распределяли в ЕЮАс/воде/№Н8О4 (рН<4). Органические слои промывали водой, солевым раствором и далее сушили над М§§О4, После выпаривания растворителя неочищенное вещество очищали посредством флэш-хроматографии на силикагеле (элюент: РЕ/ЕА = 5/1) с получением 1,40 г соединения Н6 в виде белого твердого вещества (выход 23%).
Синтез соединения Н7:
К раствору соединения Н6 (400 мг, 0,66 ммоль) и Рй(ОАс)2 (200 мг) в 20 мл ЕьО добавляли раствор СН2Ю в ЕьО (20 мл, 80 ммоль) при -50°С в атмосфере Ν2. Далее раствор медленно нагревали до комнатной температуры и перемешивали еще в течение 4 ч. Данные как ТСХ, так и ЖХ/МС показали, что реакция прошла успешно. Осуществляли фильтрование, концентрирование и очистку посредством флэшхроматографии на силикагеле (элюент: РЕ/ЕА = 10/1) с получением 278 мг неочищенного соединения Н7 в виде белого твердого вещества (выход 68%).
- 48 024083
Пример 13.
Пример 13
К раствору соединения Н7 (278 мг, 0,45 ммоль) в 10 мл ТГФ и 4 мл Н2О добавляли ЬЮН-Н2О (188 мг, 4,48 ммоль) и далее смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 24 ч. Концентрировали и разбавляли 10 мл Н2О, добавляли 1н. водный раствор НС1 для подкисления смеси до рН 5, после чего проводили экстракцию с помощью ЕЮАс. Органический слой промывали солевым раствором, сушили над Ν;·ι28Ο4. фильтровали, концентрировали и очищали посредством хроматографии на силикагеле (элюент: РЕ/ЕА = 1/1) с получением 130 мг соединения согласно примеру 13 в виде белого твердого вещества (выход 48%).
Ή ЯМР (400 МГц, ДМСО-й6) δ: 1,16 (т, 4Н), 1,59 (т, 2Н), 2,23 (т, 1Н), 2,39 (т, 1Н), 2,48 (т, 1Н), 4,09 (8, 3Н), 4,91 (5, 2Н), 6,75 (йй, 1=2,4 Гц, 8,8 Гц, 1Н), 6,92 (й, 1=2,4 Гц, 1Н), 7,12 (й, 1=8,8 Гц, 1Н), 7,20 (й, 1=8,4 Гц, 1Н), 7,56 (т, 2Н), 7,64 (т, 2Н), 7,96 (й, 1=8,4 Гц, 1Н), 12,88 (5, 1Н);
ЖХ/МС (подвижная фаза: 30-95% ацетонитрил-вода): чистота >95%, Κΐ = 3,258 мин;
МС выч.: 607; МС найд.: 608 (М+1).
- 49 024083
Разделение посредством хиральной ВЭЖХ:
600 мг Н7 (рацемат) разделяли посредством препаративной хиральной ВЭЖХ с хиральной колонкой (колонка: СНГКАЬРАК ТА; размеры колонки: внутренний диаметр 0,46 см, длина 15 см; подвижная фаза: гексан/этиловый спирт/диэтиламин (ОЕА) = 50/50/0,1 (об./об./об.); расход: 1,0 мл/мин; длина волны: УФ 254 нм; прибор для ВЭЖХ: 81ита6/и ЬС 20 с УФ-детектором 8РЭ-20А) с получением 210 мг Н7а (К1 = 5,325 мин, э.и.%: >99%) и 186 мг Н7Ь (К1 = 6,804 мин, э.и.%: >99%).
Синтез соединения согласно примеру 13а:
К раствору Н7а (210 мг, 0,35 ммоль) в 5 мл ТГФ и 2 мл Н2О добавляли ЫОН-Н2О (8 мг, 1,9 ммоль) и далее смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 4 ч. Смесь концентрировали, разбавляли 5 мл Н2О и добавляли 1н. водный раствор НС1 для подкисления смеси до рН 5, добавляли Е1ОАс для экстракции дважды, и объединенные органические фазы сушили над №28О4, фильтровали, концентрировали при пониженном давлении и очищали посредством флэш-хроматографии на силикагеле (элюент: РЕ/ЕА = 1/2) с получением 108 мг соединения согласно примеру 13а ((+)-6-(2-(2-хлор-4-((5-циклопропил3-(2,6-дихлорфенил)изоксазол-4-ил)метокси)фенил)циклопропил)-1-метил-1Н-индазол-3-карбоновой кислоты) в виде желтого твердого вещества (выход 50,8%).
Ή ЯМР (400 МГц, СПС13) δ: 1,18 (т, 2Н), 1,32 (т, 2Н), 1,51 (т, 2Н), 2,19 (т, 1Н), 2,45 (т, 1Н), 4,18 (к, 3Н), 4,82 (к, 2Н), 6,71 (66, 1=2,4 Гц, 8,4 Гц, 1Н), 6,87 (6, 1=1,6 Гц, 1Н), 7,01 (6, 1=8,4 Гц, 1Н), 7,23 (т, 2Н), 7,36 (т, 1Н), 7,43 (т, 2Н), 8,17 (6, 1=8,4 Гц, 1Н);
ЖХ/МС (подвижная фаза: 60-95% ацетонитрил-вода-0,05% ТФУ): чистота >98%, К1 = 3,144 мин;
МС выч.: 607; МС найд.: 608 (М+1);
Хиральная ВЭЖХ (колонка: СШКАЬРАК ΛΌ-Н 250x4,6; подвижная фаза: 65/35 гексан/Е1ОН): э.и.% 100%, К1 = 13,101;
Оптическое вращение: [а]с 25 = +159° (МеОН, с=0,300).
Синтез соединения согласно примеру 13Ь:
Аналогично тому, как описано в примере 13 а, получали соединение согласно примеру 13Ь ((-)-6-(2-(2-хлор-4-((5-циклопропил-3-(2,6-дихлорфенил)изоксазол-4-ил)метокси)фенил)циклопропил)-1метил-1Н-индазол-3-карбоновую кислоту) (120 мг; выход 59,2%):
Ή ЯМР (400 МГц, СПС13) δ: 1,10-1,21 (т, 6Н), 1,56 (т, 2Н), 2,20 (т, 1Н), 2,35 (т, 1Н), 2,45 (т, 1Н), 4,09 (к, 3Н), 4,89 (к, 2Н), 6,74 (66, 1=2,4 Гц, 8,8 Гц, 1Н), 6,91 (6, 1=2,0 Гц, 1Н), 7,12 (т, 2Н), 7,53 (т, 2Н),
- 50 024083
7,62 (т, 2Н), 7,99 (б, 1=8,4 Гц, 1Н);
ЖХ/МС (подвижная фаза: 60-95% ацетонитрил-вода-0,05% ТФУ): чистота >98%, К! = 3,180 мин; МС выч.: 607; МС найд.: 608 (М+1);
Хиральная ВЭЖХ (колонка: СН1КАЬРАК АЭ-Н 250x4,6; подвижная фаза: 65/35 гексан/Е!ОН): э.и.% 99,7%, К! = 30,037;
Оптическое вращение: [а]с 25 = -161° (МеОН, с=0,300). Пример 14.
К раствору соединения согласно примеру 12 (400 мг, 0,72 ммоль) и одной капле ДМФА в 10 мл безводного ДХМ добавляли 2 М раствор оксалилхлорида (0,75 мл, 1,5 ммоль) в безводном ДХМ при 0°С и далее раствор перемешивали при комнатной температуре в течение 2 ч. Концентрировали при пониженном давлении и остаток разбавляли 10 мл безводного ТГФ. Добавляли Э1ЕА (0,25 мл, 1,5 ммоль), метансульфонамид (14,3 мг, 1,5 ммоль) и ДМАР (10 мг). Раствор перемешивали в течение ночи. Концентрировали при пониженном давлении и очищали посредством препаративной ВЭЖХ с получением 40 мг соединения согласно примеру 14 в виде белого твердого вещества (выход 8,8%).
Ή ЯМР (400 МГц, СЭС13) δ 1,16-1,21 (т, 2Н), 1,24-1,34 (т, 2Н), 1,52 (т, 2Н), 2,04 (т, 1Н), 2,18 (т, 1Н), 2,44 (т, 1Н), 3,47 (к, 3Н), 4,81 (к, 2Н), 6,69 (бб, 1=2,8 Гц, 8,4 Гц, 1Н), 6,86 (б, 1=2,4 Гц, 1Н), 6,98 (б, 1=8,4 Гц, 1Н), 7,31 (т, 2Н), 7,35 (т, 1Н), 7,44 (т, 2Н), 7,80 (б, 1=8,4 Гц, 2Н), 8,57 (к, 1Н);
ЖХ/МС (подвижная фаза: 60-95% ацетонитрил-вода-0,05% ТФУ): чистота >95%, К! = 3,255 мин;
МС выч.: 630; МС найд.: 631 (М+1).
Пример 15.
Раствор соединения согласно примеру 12 (500 мг, 0,90 ммоль) и НАТИ (500 мг, 1,32 ммоль) в 20 мл сухого ДМФА перемешивали при 0°С в течение 30 мин, далее добавляли 2-аминоэтансульфоновую кислоту (150 мг, 1,2 ммоль), после чего добавляли Э1ЕА (0,4 мл). После перемешивания при комнатной температуре в течение 18 ч реакционную смесь концентрировали при пониженном давлении и очищали посредством препаративной ВЭЖХ с получением 250 мг соединения согласно примеру 15 в виде белого твердого вещества (выход 42%).
Ή ЯМР (400 МГц, С1);О1)) δ 1,17-1,24 (т, 4Н), 1,414,54 (т, 2Н), 2,04 (т, 1Н), 2,346 (т, 2Н), 3,09 (т, 2Н), 3,82 (т, 2Н), 4,90 (к, 2Н), 6,72 (бб, 1=2,8 Гц, 8,8 Гц, 1Н), 6,82 (б, 1=2,4 Гц, 1Н), 7,05 (б, 1=8,4 Гц, 1Н), 7,28 (б, 1=8,8 Гц, 2Н), 7,46-7,55 (т, 3Н), 7,77 (б, 1=8,0 Гц, 2Н), 7,94(к, 1Н);
ЖХ/МС (подвижная фаза: 20-95% ацетонитрил-вода): чистота >95%, К! = 4,099 мин;
МС выч.: 660; МС найд.: 659 (М-1).
- 51 024083
К раствору соединения 01 (65 г, 240 ммоль) в 500 мл сухого ТГФ добавляли гидрид натрия (12 г, 288 ммоль) при 0°С в течение 30 мин. К полученной смеси добавляли раствор соединения Е2 (41 г, 240 ммоль) в 300 мл сухого ТГФ при 0°С и перемешивали раствор при комнатной температуре в течение 3 ч. Смесь гасили насыщенным раствором Ν^Ο и проводили экстракцию с помощью Е!ОАс. Органический слой промывали солевым раствором, сушили над №28О4, фильтровали, концентрировали и очищали дважды посредством флэш-хроматографии на силикагеле (элюент: РЕ/ЕА = 10/1) с получением 72,5 г соединения П в виде белого твердого вещества (выход 100%).
Синтез соединения 12:
К раствору соединения П (20 г, 66,2 ммоль) и Рб(ОАс)2 (3,5 г) в 200 мл Е!2О добавляли раствор СН2Ы2 в Е!2О (250 мл, 1 моль) при -50°С в атмосфере Ν2. Далее раствор медленно нагревали до комнатной температуры и перемешивали еще 4 ч. Данные ЖХ/МС показали, что реакция не завершилась. Проводили фильтрование и концентрирование. К осадку добавляли 200 мл сухого Е!2О с последующим добавлением Рб(ОАс)2 (2 г). Далее добавляли раствор СН^ в Е!2О (150 мл, 0,6 моль) при -50°С в атмосфере Ν2. Далее раствор медленно нагревали до комнатной температуры, и перемешивали еще 4 ч. Данные ЖХ/МС показали, что реакция завершилась, и продукт очищали посредством флэш-хроматографии на силикагеле (элюент: РЕ/ЕА = 50/1) с получением 9 г соединения 12 в виде твердого вещества грязнобелого цвета (выход 43%). Данную реакцию повторно проводили в тех же количествах и при тех же условиях с получением и 26 г соединения 12 (выход 43,2%).
Синтез соединения 13:
Перемешанную смесь соединения 12 (10,5 г, 33,23 ммоль) и ЫОН-Н2О (6,98 г, 166,1 ммоль) растворяли в 20 мл воды и 100 мл ТГФ перемешивали в течение ночи при 55°С. Смесь концентрировали при пониженном давлении, обрабатывали 6н. водным раствором НС1 для доведения рН до 1 и перемешивали еще 30 мин. Полученный осадок собирали посредством фильтрования, промывали водой и сушили в вакууме с получением 9,1 г соединения 13 в виде белого твердого вещества (выход 90,7%).
- 52 024083
Синтез соединения 14:
К раствору соединения 13 (4,5 г, 15,0 ммоль) в 30 мл безводного ДХМ добавляли §О2С1 (2 мл, 28,2 ммоль) и далее данный раствор перемешивали при комнатной температуре в течение 1,5 ч. Концентрировали при пониженном давлении и остаток разбавляли ТГФ. Данный раствор добавляли к 6н. раствору ИН3 в ТГФ при 0°С, и далее данный раствор перемешивали при комнатной температуре в течение 2 ч. Концентрировали при пониженном давлении и добавляли 100 мл воды. Полученное твердое вещество собирали и сушили в вакууме с получением 4,0 г соединения 14 в виде белого твердого вещества (выход 88,6%).
Синтез соединения 15:
К раствору соединения 14 (4,0 г, 13 ммоль) в 60 мл безводного ТГФ добавляли Э1ЕА (4,0 г, 31 ммоль) и ТРАА (ангидрида трифторуксусной кислоты) (5,5 г, 26 ммоль) и далее данную смесь перемешивали в течение 4 ч при комнатной температуре. Концентрировали при пониженном давлении и разбавляли остаток 100 мл ЕЮАс. Раствор последовательно промывали водным раствором ИаНСО3 и солевым раствором. Сушили над Иа28О4, фильтровали, концентрировали при пониженном давлении и очищали посредством флэш-хроматографии на силикагеле (элюент: РЕ/ЕА = 10/1) с получением 3,5 г соединения 15 в виде белого твердого вещества (выход 95,1%).
К раствору соединения 15 (3,5 г, 12 ммоль) в 70 мл безводного ДХМ добавляли ВВг3 (5 мл, 52,9 ммоль) при -78°С, и далее данный раствор перемешивали при -78°С в течение 1 ч. К данной смеси добавляли МеОН для гашения и далее данный раствор приливали к 200 мл насыщенного раствора ИаНСО3. Осуществляли концентрирование при пониженном давлении и добавляли ЕьО для экстракции дважды. Объединенные органические слои сушили над №-ь8О4. фильтровали, концентрировали при пониженном давлении и очищали посредством флэш-хроматографии на силикагеле (элюент: РЕ/ЕА = 8/1) с получением 2,2 г соединения 16 в виде белого твердого вещества (выход 68,2%).
Синтез соединения 17:
К раствору соединения 16 (2,1 г, 8,0 ммоль) в 15 мл ДМФА добавляли соединения А6е (2,5 г,
8,3 ммоль) и К2СО3 (2,2 г, 16 ммоль) и далее данный раствор перемешивали в течение ночи при 50°С. Охлаждали до комнатной температуры и разбавляли ЕЮАс. Раствор промывали водой и солевым раствором, сушили над Иа28О4, фильтровали, концентрировали при пониженном давлении и очищали посредством флэш-хроматографии на силикагеле (элюент: РЕ/ЕА = 1/10) с получением 2,1 г соединения 17 в виде белого твердого вещества (выход 49,2%).
- 53 024083
Синтез соединения согласно примеру 16:
К раствору соединения 17 (400 мг, 0,8 ммоль) в 5 мл ДМФА добавляли ИН4С1 (140 мг, 2,64 ммоль) и №N3 (140 мг, 2,15 ммоль) и далее данный раствор нагревали в течение ночи при 100°С. Охлаждали до комнатной температуры и концентрировали при пониженном давлении. Остаток разбавляли ЕЮАс и трижды промывали водой, органический слой сушили над №28О4, фильтровали, концентрировали при пониженном давлении и очищали посредством препаративной ВЭЖХ с получением 130 мг соединения согласно примеру 16 в виде белого твердого вещества (выход 28,2%).
Ή ЯМР (400 МГц, ДМСО-б6) δ: 1,12-1,22 (т, 4Н), 1,51-1,58 (т, 2Н), 2,10-2,14 (т, 1Н), 2,32-2,36 (т, 1Н), 2,45-2,49 (т, 1Н), 3,18 (з, 1Н), 4,91 (з, 2Н), 6,73-6,76 (бб, >2,4 Гц, 8,8 Гц, 1Н), 6,93 (б, >2,0 Гц, 1 Н), 7,11 (б, >8,8 Гц, 1Н), 7,44 (б, >8,4 Гц, 2Н), 7,56 (т, 1Н), 7,64 (б, >7,6 Гц, 2Н), 7,96 (б, >7,6 Гц, 2Н);
ЖХ/МС (подвижная фаза: 50-95% ацетонитрил-вода-0,05% ТФУ): чистота >95%, К = 3,962 мин;
МС выч.: 577; МС найд.: 578 (М+1).
Схема 10
Синтез соединения Па:
Пример 17
К раствору соединения Σ2 (5 г, 15,8 ммоль) в 40 мл сухого ДХМ добавляли ВВг3 (14,8 мл, 158 ммоль) при -70°С в атмосфере Ν2 и далее раствор перемешивали при комнатной температуре в течение 1 ч. Данные как ТСХ, так и ЖХ/МС показали, что деметилирование завершилось. Раствор снова ох- 54 024083 лаждали до -30°С и добавляли 50 мл МеОН для гашения. Концентрировали при пониженном давлении и к остатку добавляли воду и ДХМ добавляли. Органический слой сушили над №28О4, фильтровали, концентрировали при пониженном давлении и очищали посредством флэш-хроматографии на силикагеле (элюент: РЕ/ЕА = 10/1) с получением 3,9 г 12а в виде желтого твердого вещества (выход 81,7%).
1Н ЯМР (400 МГц, СЭСЕ) δ: 1,49 (т, 2Н), 2,08 (т, 1Н), 2,41 (т, 1Н), 3,94 (5, 3Н), 6,74 (йй, 1=2,4 Гц,
8,4 Гц, 1Н), 6,92 (й, 1=2,4 Гц, 1Н), 7,01 (й, 1=8,4 Гц, 1Н), 7,25 (й, 1=8,0 Гц, 2Н), 8,00 (й, 1=8,4 Гц, 2Н).
Синтез соединения 11:
К раствору соединения А5е (12 г, 42 ммоль), в 200 мл ДХМ добавляли Βί3Ν (12 г, 120 ммоль) и далее (Ас)2О (12 г, 120 ммоль). Раствор перемешивали в течение ночи при комнатной температуре и далее оставшуюся смесь промывали водой и солевым раствором, сушили над №28О4, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении и очищали посредством флэш-хроматографии на силикагеле (элюент: РЕ/ЕЮАс = 15/1) с получением 13 г соединения 11 в виде бесцветного масла (выход 94%).
Синтез соединения 12:
К раствору соединения 11 (13 г, 40 ммоль) в 300 мл СС14 добавляли ΝΒδ (7,8 г, 45 ммоль) и данный раствор перемешивали при кипячении с обратным холодильником в течение 1 ч. Полученный раствор концентрировали при пониженном давлении и очищали посредством флэш-хроматографии на силикагеле (элюент: РЕ/ЕЮАс = 15/1) с получением 12,5 г соединения 12 в виде масла (выход 77%).
Синтез соединения 13:
К раствору соединения 12 (12,5 г, 30,8 ммоль) в 200 мл ТГФ добавляли ΌΒυ (10 г) и данный раствор перемешивали в течение ночи при комнатной температуре. Данный раствор концентрировали при пониженном давлении с получением остатка. К данной оставшейся смеси, которую растворяли в 80 мл МеОН и 40 мл Н2О, добавляли К2СО3 (6 г, 43,5 ммоль) и данный раствор перемешивали при комнатной температуре в течение 30 мин. Полученный раствор гасили водой и концентрировали при пониженном давлении. Суспензию три раза подвергали экстракции с помощью ЕЮАс и объединенные органические фазы сушили над №28О4, фильтровали, концентрировали при пониженном давлении и очищали посредством флэш-хроматографии на силикагеле (элюент: РЕ/ЕЮАс = 5/1) с получением 8 г соединения 13 в виде масла (выход 90%).
Синтез соединения 14:
К раствору соединения 13 (8 г, 28 ммоль) и Э1ЕА (24 мл) в 150 мл безводного ТГФ добавляли ТВ5ОТГ (8,2 г, 31 ммоль) при 0°С и далее раствор перемешивали в течение ночи при комнатной температуре. Полученный раствор гасили водой при 0°С и трижды проводили экстракцию с помощью ЕЮАс. Объединенные органические фазы сушили над М§8О4, фильтровали, концентрировали в вакууме и очищали посредством флэш-хроматографии на силикагеле (элюент: РЕ/ЕЮАс = 15/1) с получением 9 г соединения 14 в виде бесцветного масла (выход 90%).
- 55 024083
Синтез соединения 15:
Раствор соединения 14 (2 г, 5 ммоль), 2,6-лутидин (1 г, 10 ммоль), МаЮ4 (4,27 г, 20 ммоль) и О5О4 (300 мг) в 40 мл 1,4-диоксана и 15 мл воды перемешивали при комнатной температуре в течение 2 ч. Полученный раствор разбавляли водой и трижды проводили экстракцию с помощью ЕЮАс. Объединенные органические фазы промывали дважды водным раствором ШНСОч сушили над Ма2ЗО4, фильтровали, концентрировали при пониженном давлении и очищали посредством флэш-хроматографии на силикагеле (элюент: РЕ/ЕЮАс = 15/1) с получением 1,8 г соединения 15 в виде масла (выход 94%).
Синтез соединения 16:
К раствору соединения 15 (1,6 г, 4 ммоль) в 40 мл безводного ТГФ добавляли МеМ§С1 (3 М, 3,2 мл, 9,6 ммоль) в течение 30 мин при -30°С в атмосфере Ν2. Раствор перемешивали при -30°С-20°С в течение 3 ч. Добавляли 30 мл водного раствора НН4С1 для гашения. Водный слой дважды подвергали экстракции с помощью ДХМ. Объединенные органические фазы сушили над Ма2ЗО4, фильтровали, концентрировали при пониженном давлении и очищали посредством флэш-хроматографии на силикагеле (элюент: РЕ/ЕА = 30/1) с получением 1,2 г соединения 16 в виде бесцветного масла (выход 72,2%).
Синтез соединения 17:
К раствору 16 (1,2 г, 2,9 ммоль) в 40 мл безводного ТГФ добавляли ТВАР (1 М, 2,9 мл, 2,9 ммоль) в течение 30 мин при 0°С в атмосфере Ν2. Реакционную смесь перемешивали при -5°С0°С в течение 3 ч. Данные ТСХ показали, что реакция завершилась. Добавляли 30 мл водного раствора НН4С1 для гашения. Водный слой дважды подвергали экстракции с помощью ДХМ. Объединенные органические слои сушили над Ма2ЗО4, фильтровали, концентрировали и очищали посредством флэш-хроматографии на силикагеле (элюент: РЕ/ЕА=10/1) с получением 500 мг соединения 17 (выход 57%).
Синтез соединения 18:
К смеси соединения 17 (500 мг, 1,65 ммоль), соединения Па (500 мг, 1,65 ммоль) и Р13Р (875 мг, 3,7 ммоль) в 50 мл сухого ТГФ по каплям добавляли ЭЕАЭ (675 мг, 3,7 ммоль) при 0°С в атмосфере Ν2 и перемешивали раствор в течение ночи при комнатной температуре. Далее медленно добавляли 10 мл МеОН. Раствор выпаривали, а осадок очищали посредством колоночной флэш-хроматографии на силикагеле (элюент: РЕ/ЕА = 5/1) с получением 600 мг соединения 18 в виде твердого вещества (выход 62%).
Синтез соединения согласно примеру 17:
К раствору соединения 18 (200 мг, 0,34 ммоль) в 5 мл ТГФ и 2 мл Н2О добавляли ЬЮН-Н2О (42 мг, 1,0 ммоль) и далее смесь перемешивали в течение ночи при комнатной температуре. Концентрировали и разбавляли Н2О. Добавляли 1н. водный раствор НС1 для доведения рН до 5, после чего раствор подверга- 56 024083 ли экстракции с помощью ДХМ. Органический слой промывали солевым раствором, сушили над Ν2δΟ4, фильтровали, концентрировали и очищали посредством флэш-хроматографии на силикагеле (элюент: РЕ/ЕА = 2/1) с получением 50 мг соединения согласно примеру 17 (4-(2-(2-хлор-4-((3-(2,6-дихлорфенил)5-(2-гидроксипропан-2-ил)изоксазол-4-ил)метокси)фенил)циклопропил)бензойной кислоты) в виде белого твердого вещества (выход 24%).
Ή ЯМР (ДМСО, 400 МГц) δ: 1,47-1,61 (т, 8Н), 2,09-2,12 (т, 1Н), 2,29-2,34 (т, 1Н), 5,04 (5, 2Н), 5,98 (5, 1Н), 6,64-6,66 (т, 1Н), 6,81-6,82 (т, 1Н), 7,06-7,08 (т, 1Н), 7,29-7,32 (т, 2Н), 7,53-7,57 (т, 1Н), 7,61-7,63 (т, 2Н), 7,84-7,86 (т, 2Н), 12,80 (5, 1Н);
ЖХ/МС (подвижная фаза: 30-95% ацетонитрил-вода): чистота >95%, Κ = 3,11 мин;
МС выч.: 571; МС найд.: 572 (М+1).
Схема 11
Синтез соединения К1:
он 'о
К раствору соединения 16 (600 мг, 1,45 ммоль) и Т5ОН-Н2О (6 мг, 0,034 ммоль) в 20 мл ТГФ добавляли СН^2 (5 М, 14,5 ммоль в Е12О) при 0°С, далее смесь перемешивали в течение ночи при комнатной температуре. Органический слой промывали солевым раствором, сушили над №-ь8О+ фильтровали, концентрировали и очищали посредством флэш-хроматографии на силикагеле (элюент: РЕ/ЕА = 10/1) с получением 300 мг соединения К1 в виде желтого масла (выход 50%).
Синтез соединения К2:
К раствору соединения К1 (300 мг, 0,7 ммоль) в 40 мл безводного ТГФ добавляли ТВАР (1 М, 0,7 мл, 0,7 ммоль) в течение 30 мин при 0°С в атмосфере Ν2. Реакционную смесь перемешивали при -5-0°С в течение 3 ч. Данные ТСХ показали, что реакция завершилась. Добавляли 30 мл водного раствора ΝΉ4Ο для гашения. Водный слой дважды подвергали экстракции с помощью ДХМ. Объединенные органические слои сушили над №28О4, фильтровали, концентрировали при пониженном давлении и очищали посредством флэш-хроматографии на силикагеле (элюент: РЕ/ЕА = 2/1) с получением 150 мг соединения К2 в виде бесцветного масла (выход 68%).
Синтез соединения К3:
- 57 024083
К смеси соединения К2 (150 мг, 0,47 ммоль), Па (142 мг, 0,47 ммоль) и РЬ3Р (247 мг, 0,94 ммоль) в 30 мл сухого безводного ТГФ по каплям добавляли ПЕЛИ (172 мг, 0,94 ммоль) при 0°С в атмосфере Ν2 и перемешивали раствор в течение ночи при комнатной температуре. Далее медленно добавляли 5 мл МеОН. Раствор концентрировали, а остаток очищали посредством колоночной флэш-хроматографии на силикагеле (элюент: РЕ/ЕА = 5/1) с получением 150 мг соединения К3 в виде твердого вещества (выход 53%).
Синтез соединения согласно примеру 18:
К раствору соединения К3 (150 мг, 0,25 ммоль) в 5 мл ТГФ и 2 мл Н2О добавляли ЫОН-Н2О (42 мг, 1,0 ммоль) и далее смесь перемешивали в течение ночи при комнатной температуре. Концентрировали и разбавляли Н2О. Добавляли 1н. водный раствор НС1 для доведения рН до 5, после чего проводили экстракцию с помощью ДХМ. Органический слой промывали солевым раствором, сушили над №28О4, фильтровали, концентрировали и очищали посредством флэш-хроматографии на силикагеле (элюент: РЕ/ЕА = 2/1) с получением 45 мг соединения согласно примеру 18 4-(2-(2-хлор-4-((3-(2,6-дихлорфенил)5-(2-метоксипропан-2-ил)изоксазол-4-ил)метокси)фенил)циклопропил)бензойной кислоты (выход 30%).
Ή ЯМР (СИзОИ, 400 МГц) δ: 1,48-1,54 (т, 2Н), 1,67 (з, 6Н), 2,06-2,08 (т, 1Н), 2,37-2,39 (т, 1Н), 3,29 (з, 3Н), 4,97 (з, 2Н), 6,65-6,67 (т, 1Н), 6,75-6,76 (т, 1Н), 7,03-7,05 (т, 1Н) 7,28-7,30 (т, 2Н), 7,47-7,54 (т, 3Н), 7,95-7,97 (т, 2Н);
ЖХ/МС (подвижная фаза: 40-95% ацетонитрил-вода): чистота >95%, К = 3,27 мин;
МС выч.: 587; МС найд.: 586 (М-1).
Схема 12
Синтез соединения Ь1:
Пример 19
К раствору метил-3-оксобутаноата (8,9 г, 40 ммоль, 1,0 экв.) и соединения А3а (4,64 г, 40 ммоль, 1,0 экв.) в 70 мл ТГФ добавляли МеО№-1 (2,16 г, 40 ммоль, 1,0 экв.) и далее смесь перемешивали при
- 58 024083 комнатной температуре в течение 16 ч. Реакционную смесь промывали 1н. раствором НС1, проводили экстракцию с помощью Е!ОАс, сушили над №28О4, концентрировали при пониженном давлении и очищали посредством флэш-хроматографии на силикагеле (элюент: РЕ/ЕА = 10/1) с получением 4,3 г соединения Ь1 в виде желтого твердого вещества (выход 38%).
Синтез соединения Ь2:
Раствор соединения Ь1 (4,3 г, 15 ммоль, 1 экв.) в 60 мл ДМФА и 60 мл ДМФА-ДМА нагревали при 110°С в течение 3 ч. Реакционную смесь концентрировали при пониженном давлении и очищали посредством флэш-хроматографии на силикагеле (РЕ/ЕА = 10/1) с получением 3,86 г соединения Ь2 в виде желтого твердого вещества (выход 76%).
Синтез соединения Ь3:
К раствору соединения Ь2 (2,16 г, 6,3 ммоль, 1,0 экв.) и 8Ю2 (в 22 мл воды) в 54 мл ТГФ, далее по каплям добавляли 44 мл концентрированного раствора НС1 при 40°С в течение 1 ч. Реакционную смесь фильтровали, подвергали экстракции с помощью Е!ОАс, промывали водой, сушили над №28О4, концентрировали при пониженном давлении с получением 1,99 г соединения Ь3 в виде желтого масла (выход 99%).
Синтез соединения Ь4:
К раствору соединения Ь3 (1,99 г, 6,4 ммоль, 1,0 экв.) в 20 мл Е!ОН добавляли NаВΗ4 (266 мг, 7 ммоль, 1,1 экв.) при 0°С в течение 20 мин. Далее добавляли водный раствор НС1 (1 моль/л) до обесцвечивания реакционной смеси. Реакционную смесь промывали водой, проводили экстракцию с помощью Е!ОАс, сушили над №28О4, концентрировали при пониженном давлении с получением 2,01 г соединения Ь4 в виде желтого твердого вещества (выход 99%).
Синтез соединения Ь5:
К раствору соединения Ь4 (2,0 г, 6,3 ммоль, 1,0 экв.) и паратолуолсульфоновой кислоты (16 мг, 0,06 ммоль, 0,01 экв.) в 80 мл безводного ДХМ по каплям добавляли 3,4-дигидро-2Н-пиран (800 мг,
9,5 ммоль, 1,5 экв.) в атмосфере Ν2 и перемешивали раствор в течение ночи при комнатной температуре. Реакционную смесь дважды промывали 40 мл водного раствора NаΗСОз и водный слой трижды подвергали экстракции с помощью 100 мл ДХМ. Объединенные органические слои сушили над №28О4, фильтровали, концентрировали и очищали посредством колоночной флэш-хроматографии на силикагеле (элюент: РЕ/ЕА = 10/1) с получением 1,0 г соединения Ь5 в виде масла (выход 40%).
- 59 024083
Синтез соединения Ь6:
К раствору Ь5 (1,0 г, 2,5 ммоль, 1,00 экв.) в 40 мл безводного ТГФ добавляли О1ВАЬ-Н (1 М, 10 мл, 3,75 экв.) в течение 30 мин при -30°С в атмосфере Ν2. Реакционную смесь перемешивали при -5-0°С в течение 3 ч. Данные ТСХ показали, что реакция завершилась. Добавляли 30 мл водного раствора ИН4С1 для гашения. Водный слой подвергали экстракции дважды с помощью ДХМ. Объединенные органические слои сушили над Ка28О4, фильтровали, концентрировали и очищали посредством флэшхроматографии на силикагеле (элюент: РЕ/ЕА = 5/1) с получением 800 мг соединения Ь6 в виде бледножелтого масла (выход 86%).
Синтез соединения Ь7:
К смеси соединения Ь6 (372 мг, 1 ммоль, 1,0 экв.), 12а (302 мг, 1 ммоль, 1,0 экв., полученного согласно методике для В13) и РРЬ3 (524 мг, 2 ммоль, 2,0 экв.) в 20 мл сухого безводного ТГФ по каплям добавляли ПЕЛО (348 мг, 2 ммоль, 2,0 экв.) при 0°С в атмосфере Ν2 и перемешивали раствор в течение ночи при комнатной температуре. Далее медленно добавляли 10 мл МеОН. Раствор выпаривали, а остаток очищали посредством колоночной флэш-хроматографии на силикагеле (элюент: РЕ/ЕА = 10/1) с получением 170 мг соединения Ь7 в виде твердого вещества (выход 26%).
Синтез соединения Ь8:
К раствору соединения Ь7 (170 мг, 0,26 ммоль, 1,00 экв.) в 5 мл ТГФ и 1 мл Н2О добавляли ЫОН-Н2О (110 мг, 2,6 ммоль, 10 экв.) и далее смесь перемешивали в течение ночи при комнатной температуре. Концентрировали и разбавляли Н2О. Добавляли 1н. водный раствор НС1 для доведения рН до 5, после чего проводили экстракцию с помощью ДХМ. Органический слой промывали солевым раствором, сушили над №2ЗО4, фильтровали, концентрировали с получением 150 мг соединения Ь8 в виде белого твердого вещества (выход 90%).
Синтез соединения согласно примеру 19:
К раствору соединения Ь8 (150 мг, 0,23 ммоль, 1,00 экв.) в 5 мл МеОН добавляли ТвОН-Н2О (65 мг, 0,34 ммоль, 1,5 экв.) и далее смесь перемешивали в течение ночи при комнатной температуре. Концентрировали и разбавляли Н2О, далее проводили экстракцию с помощью ДХМ. Органический слой промывали солевым раствором, сушили над Ка28О4, фильтровали, концентрировали и очищали посредством флэш-хроматографии на силикагеле (элюент: РЕ/ЕА = 2/1) с получением 50 мг соединения согласно примеру 19 (4-(2-(2-хлор-4-((3-(2,6-дихлорфенил)-5-(2-гидроксиэтил)изоксазол-4-ил)метокси)фенил)циклопропил)бензойной кислоты) в виде белого твердого вещества (выход 34%).
Ή ЯМР (ДМСО, 400 МГц) δ: 1,48-1,55 (т, 2Н), 2,01-2,11 (т, 1Н), 2,31-2,32 (т, 1Н), 3,09-3,12 (т, 2Н), 3,74-3,78 (т, 2Н), 4,87 (в, 2Н), 4,99-5,01 (т, 1Н), 6,67-6,70 (т, 1Н), 6,84-6,85 (т, 1Н), 7,07-7,09 (т, 1Н) 7,30-7,32 (т, 2Н), 7,55-7,64(т, 3Н), 7,85-7,87(т, 2Н);
- 60 024083
ЖХ/МС (подвижная фаза: 10-95% ацетонитрил-вода): чистота >95%, Κί = 3,19 мин; МС выч.: 557; МС найд.: 556 (М-1).
Схема 13
Синтез соединения М2:
К раствору соединения М1 (5 г, 27,2 ммоль) в 30 мл ДМФА добавляли 60% №-)Н (1,20 г, 30 ммоль) при 0°С и раствор перемешивали в течение 0,5 ч. Далее по каплям добавляли раствор 2-йодпропана (5,1 г, 30 ммоль) в 10 мл ДМФА при 0°С и перемешивали смесь в течение 2,5 ч при комнатной температуре. Добавляли воду, чтобы погасить реакцию, и раствор подвергали экстракции с помощью ЕЮАс трижды. Объединенные органические слои последовательно промывали водой трижды и солевым раствором дважды, сушили над №-ь8О+ фильтровали, концентрировали при пониженном давлении и очищали посредством флэш-хроматографии на силикагеле (элюент: РЕ/ЕА = 5/1) с получением 2 г соединения М2 (выход 18%).
Синтез соединения М3:
К раствору соединения М2 (2 г, 8,85 ммоль) в 20 мл МеОН добавляли раствор КОН в МеОН (10 мл 2,2 М раствора) и перемешивали раствор при 20°С в течение 24 ч. После удаления растворителя под вакуумом при низкой температуре остаток растворяли в 20 мл воды и нейтрализовали раствор 1н. водным раствором НС1 (10 мл, 10 ммоль). После перемешивания в течение 20 ч при 0°С полученное твердое вещество фильтровали, а отфильтрованный осадок промывали водой с получением 1,16 г соединения М3 в виде белого твердого вещества (выход 62%).
Синтез соединения М4:
К перемешанному раствору соединения М3 (1 г, 4,8 ммоль) в 10 мл безводного ТГФ добавляли ВН3-Ме28 (1 мл, 2М в ТГФ) при 0°С в атмосфере Ν2 и данный раствор перемешивали при комнатной температуре в течение ночи, добавляли воду, чтобы погасить реакцию, и полученный раствор подвергали экстракции с помощью ЕЮАс дважды. Объединенные органические слои промывали солевым раствором, сушили над №28О4, фильтровали, концентрировали при пониженном давлении и очищали посредством флэш-хроматографии на силикагеле (элюент: РЕ/ЕА = 3/1) с получением 578 мг соединения М4 в виде бесцветного масла (выход 70%).
Синтез промежуточного соединения М5:
К перемешанному раствору оксалилхлорида (0,4 мл, 5,28 ммоль) в 5 мл безводного ДХМ добавляли раствор ДМСО (0,38 мл, 5,28 ммоль) в 1 мл безводного ДХМ при -30°С. После перемешивания в течение 20 мин, по частям добавляли раствор соединения М4 (578 мг, 2,92 ммоль) в 2 мл безводного ДХМ при -30°С. Раствор перемешивали еще в течение 1 ч и далее добавляли Βί3Ν (1,4 мл, 10,2 ммоль) при -30°С. После перемешивания в течение ночи при комнатной температуре, добавляли 20 мл ДХМ для разбавле- 61 024083 ния реакционной смеси, промывали лимонной кислотой и далее солевым раствором. Раствор сушили над №28О4, фильтровали, концентрировали при пониженном давлении и очищали посредством флэшхроматографии на силикагеле (элюент: РЕ/ЕА = 5/1) с получением 400 мг соединения М5 в виде белого твердого вещества (выход 69,4%).
Другие примеры
- 62 024083
Схема 14
Синтез соединения Ν1:
К раствору соединения В6 (14,3 г, 50 ммоль) в 70 мл сухого ТГФ добавляли гидрид натрия (2,4 г, 60 ммоль) при 0°С в течение 30 мин. К данной полученной смеси добавляли раствор соединения Е2 (8,5 г, 50 ммоль) в 50 мл сухого ТГФ при 0°С и перемешивали раствор при комнатной температуре в течение 3 ч. Смесь гасили насыщенным раствором Ν^Ο и проводили экстракцию с помощью Е!ОАс. Органический слой промывали солевым раствором, сушили над №28О4, фильтровали, концентрировали и очищали посредством флэш-хроматографии на силикагеле (элюент: РЕ/ЕА = 50/1) с получением 7,7 г соединения Ν1 в виде белого твердого вещества (выход 51%).
Синтез соединения Ν2:
К раствору соединения Ν1 (7,7 г, 25,5 ммоль) и Рб(ОАс)2 (1 г) в 50 мл безводного ТГФ добавляли раствор СН^ в Е!2О (25 мл, ~100 ммоль) при -50°С в атмосфере Ν2. Далее раствор медленно нагревали до комнатной температуры и перемешивали в течение еще 4 ч. Данные как ТСХ, так и ЖХ/МС показали, что реакция прошла успешно. Концентрировали и очищали посредством флэш-хроматографии на силикагеле (элюент: РЕ/ЕА = 50/1) с получением 5,1 г соединения Ν2 в виде масла (выход 63,3%).
- 63 024083
Разделение посредством хиральной ВЭЖХ:
1,7 г соединения N2 (рацемат) разделяли посредством препаративной хиральной ВЭЖХ с хиральной колонкой (колонка: СШКАЬРАК размеры колонки: внутренний диаметр 0,46 смхдлина 15 см; подвижная фаза: гексан/изопропиловый спирт = 80/20 (об./об.); расход: 1,0 мл/мин; длина волны: УФ 254 нм; прибор для ВЭЖХ: δΐιίιικ^ζιι ЬС 20 с УФ-детектором δР^-20А) с получением 534 мг соединения №а (К! = 5,143 мин, э.и.%: >99%) и 577 мг соединения N20 (К! = 6,325 мин, э.и.%: >99%).
Синтез соединения N3:
К раствору соединения N20 (500 мг, 1,58 ммоль) в 10 мл ТГФ и 3 мл Н2О добавляли ЫОН-Н2О (664 мг, 15,8 ммоль) и далее смесь перемешивали при 40°С в течение 4 ч. Концентрировали, разбавляли 5 мл Н2О и добавляли 1н. водный раствор НС1 для подкисления смеси до рН 4, дважды добавляли Е!ОАс для экстракции, и объединенные органические фазы сушили над №^О+ фильтровали, концентрировали при пониженном давлении и очищали посредством флэш-хроматографии на силикагеле (элюент: РЕ/ЕА = 1/3) с получением 430 мг соединения N3 в виде белого твердого вещества (выход 90,1%).
Синтез соли N30:
Раствор соединения N3 (200 мг, 0,66 ммоль) и ^)-1-фенилэтиламин (80 мг, 0,66 ммоль) в 5 мл сухого толуола кипятили с обратным холодильником в течение ночи. Охлаждали до комнатной температуры и собирали полученное твердое вещество. Твердое вещество промывали 1 мл охлажденного толуола, сушили в вакууме с получением 137 мг соли N30 с чистотой >99% по данным ВЭЖХ и ЯМР.
Ή ЯМР (400 МГц, ДМСО-б6) δ: 1,37 (б, 1=6,4 Гц, 3Н), 1,47 (т, 2Н), 2,15 (т, 1Н), 2,30 (т, 1Н), 3,77 (5, 3Н), 4,17 (т, 1Н), 6,90 (бб, 1=2,4 Гц, 8,8 Гц, 1Н), 7,04 (б, 1=2,4 Гц, 1Н), 7,16 (б, 1=8,8 Гц, 1Н), 7,26 (!, 1=7,2 Гц, 1Н), 7,33 (т, 4Н), 7,44 (б, 1=7,2 Гц, 2Н), 7,73 (т, 2Н).
Рост кристаллов и определение абсолютной конфигурации N30:
Соль N30 (100 мг) растворяли в 30 мл безводного Е!ОН с последующим добавлением 1,8 мл н-гексана (гексан добавляли до тех пор, пока раствор не стал слегка мутным). Раствор фильтровали и отставляли на полку для выдерживания в сухой емкости (20°С). Через 3 дня образовывались бесцветные кристаллы.
- 64 024083
Согласно исследованию при малом увеличении (10х) отбирали кристалл.
Размеры кристалла
Параметры элементарной ячейки со стандартным отклонением
Объем элементарной ячейки Символ группы симметрии Значение Ζ
Вычисленная плотность
Температура исследования (К) В-фактор
0,35 х 0,15 х 0,14 мм а= 11,898{5)А а = 90° Ь = 6,801 (3)А β = 92,725(5)° с= 13,836(5)А γ = 90°
1118,3(7) А3
Р21
1,259 г/см3 293(2}К
В, =0,0992 даВ2 = 0,1918
По данным рентгеновского кристаллографического анализа для соли И3а, ее абсолютная конфигурация (δ,δ).
Синтез соединения N26 из N4:
К раствору неочищенной кислоты N4 (120 мг, 0,21 ммоль) в 5 мл ТГФ добавляли раствор СН2И2 в ЕьО (0,7 мл, 2,80 ммоль) при -50°С в атмосфере Ν2. Далее раствор медленно нагревали до комнатной температуры и перемешивали еще 4 ч. Данные ТСХ показали, что реакция прошла успешно. Проводили концентрирование и очистку посредством препаративной ТСХ с получением 21 мг соединения N26 в виде белого твердого вещества (выход за 2 стадии: 32,3%).
Ή ЯМР (400 МГц, СПС'Е) δ: 1,47 (т, 2Н), 2,12 (т, 1Н), 2,40 (т, 1Н), 3,82 (5, 3Н), 3,95 (5, 3Н), 6,80 (йй, 1=2,4 Гц, 8,4 Гц, 1Н), 6,97 (й, 1=2,4 Гц, 1Н), 7,06 (й, 1=8,4 Гц, 1Н), 7,41 (т, 2Н), 7,89 (йй, 1=2,4 Гц, 6,4 Гц, 2Н).
Хиральная ВЭЖХ (хиральная колонка: СШКАЕСЕЬ ОЭ; размеры колонки: 4,6x250 мм; подвижная фаза: гексан/ЕЮН/АсОН = 60/40/0,1 (об./об./об.)); расход: 0,8 мл/мин): Κΐ = 9,312 мин (первым элюируется энантиомер по сравнению с рацематом).
Синтез соединения N5:
Раствор соединения согласно примеру 5Ь ((+)-изомер) (50 мг, 0,09 ммоль) и 6н. раствор НС1 (5 мл) в 5 мл диоксана нагревали при 85°С в течение 4 ч и добавляли ЕЮАс для экстракции. Органический слой промывали солевым раствором, сушили над Ш^О4, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении с получением 51 мг неочищенной кислоты N5, которую использовали в следующей реакции без дополнительной очистки.
Синтез соединения ШЬ из N5:
К раствору неочищенной кислоты N5 (51 мг, 0,09 ммоль) в 5 мл ТГФ добавляли раствор СН^2 в ЕьО (1 мл, 4,00 ммоль) при -50°С в атмосфере N2. Далее раствор медленно нагревали до комнатной температуры и перемешивали в течение ночи. Данные ЖХ/МС показали, что реакция прошла успешно. Концентрировали и очищали методом препаративной ТСХ с получением 23 мг ШЬ в виде белого твердого вещества (выход за 2 стадии: 80,9%).
Ή ЯМР (400 МГц, СИСЕ) δ: 1,47 (т, 2Н), 2,12 (т, 1Н), 2,40 (т, 1Н), 3,82 (з, 3Н), 3,95 (з, 3Н), 6,80 (йй, 1=2,4 Гц, 8,4 Гц, 1 Н), 6,97 (й, 1=2,4 Гц, 1Н), 7,06 (й, 1=8,4 Гц, 1Н), 7,41 (т, 2Н), 7,89 (йй, 1=2,4 Гц,
- 65 024083
6,4 Гц, 2Н).
Хиральная ВЭЖХ (хиральная колонка: СШКАЬСЕЬ ОЭ; размеры колонки: 4,6x250 мм; подвижная фаза: гексан/Е!ОН/АсОН = 60/40/0,1 (об./об./об.)); расход: 0,8 мл/мин): К! = 9,466 мин (первым элюируется энантиомер по отношению к рацемату).
Анализы
Анализ активности РКЕТ.
Определение лигандопосредованного взаимодействия кофактора и пептида для количественной оценки связывания лиганда с ядерным рецептором РХК проводили следующим образом. Подготовка лигандсвязывающего домена РХК-альфа человека: ЛСД РХК-альфа человека экспрессировали в штамме ВЬ21(ЭЕ3) Е.соП как гибридный белок, который помечен Ν-концевой С8Т. ДНК, которая кодирует домен связывания лиганда РХК, клонировали в вектор рЭЕ8Т15 (ЗпуНгодеп). Экспрессия была под контролем промотора Т7, который индуцируется 1РТС. Аминокислотные границы лигандсвязывающего домена представляли собой аминокислоты 187-472 в записи базы данных ЫМ 005123 (КеГ§ец).
Экспрессия и очистка РХК-ЛСД.
Предварительно культивируемую в течение ночи культуру трансформированного штамма Е.соН разбавляли 1:20 в среде ЬВ с ампициллином и выращивали при 30°С до оптической плотности ОП600=0,4-0,6. Экспрессия гена затем была индуцирована посредством добавления 0,5 мМ 1РТС. Клетки инкубировали еще 6 ч при 30°С, 180 об/мин. Клетки собирали центрифугированием (7000хд, 7 мин, при комнатной температуре). Клетки были ресуспензированы в 10 мл лизирующего буфера (50 мМ глюкозы, 50 мМ Тпк рН 7,9, 1 мМ ЭДТА и 4 мг/мл лизоцима) на 1 л исходной культуры клеток и оставлены во льду на 30 мин. Затем клетки подвергали обработке ультразвуком и остатки клеток удаляли центрифугированием (22000хд, 30 мин, 4°С). На 10 мл супернатанта добавляли 0,5 мл предварительно промытой суспензии глутатион 4В сефарозы (01адеп) и полученную суспензию выдерживали, медленно вращая в течение 1 ч при 4°С. Гранулы глутатион 4В сефарозы осаждали центрифугированием (2000хд, 15 с, 4°С) и дважды промыты в промывочном буфере (25 мМ Тпк, 50 мМ КС1, 4 мМ МдС12 и 1 М ЫаС1). Осадок ресуспензировали в 3 мл буфера для элюирования на 1 л исходной культуры (буфер для элюирования: 20 мМ Тпк, 60 мМ КС1, 5 мМ МдС12 и 80 мМ глутатиона, который добавили непосредственно перед тем, как использовать в качестве порошка). Суспензию оставили вращаться в течение 15 мин при 4°С, гранулы осаждали и снова элюировали половиной объема буфера для элюирования по сравнению с первым разом. Элюаты объединяли и подвергали диализу в течение ночи в 20 мМ буфере Нерек (рН 7,5), который содержал 60 мМ КС1, 5 мМ МдС12, а также 1 мМ дитиотриетола и 10% (об./об.) глицерина. Белок анализировали с помощью электрофореза в полиакриламидном геле в присутствии СДС-ПААГ.
Данный метод позволяет измерить способность предполагаемых лигандов модулировать взаимодействие между очищенным лигандсвязывающим доменом (ЛСД) РХК, который был экспрессирован в бактериях, и синтетическим биотинилированным белком на основе остатков 676-700 8КС-1 (ЬСЭ2. 676700). Последовательность использованного белка представляла собой
Б-СР88Н88ЕТЕКНК1ЕНКЕЬрЕС8Р8-СООН, где Ν-конец был биотинилирован (Б). Лигандсвязывающий домен (ЛСД) РХК экспрессировали как гибридный белок с С8Т в клетках ВЬ-21 с использованием вектора рЭЕ8Т15. Клетки лизировали ультразвуком, а гибридные белки очищали через глутатионсефарозу (РЛагташа) в соответствии с инструкциями производителя. Для определения влияния соединений на взаимодействие РХК-белок применяли технологию Регкш Е1тег ЬАЫСЕ. В основе указанного метода лежит зависимый от связывания переноса энергии от донора к акцептору флуорофора, который присоединен к исследуемому веществу-партнеру, связывание которого предстоит определить. Для упрощения манипуляций и уменьшения фона из соединения флуоресцентная технология ЬАИСЕ использует универсальные метки флюорофора, и исследования с временным разрешением проводили в конечном объеме 25 мкл в 384 лунках планшета, в буфере на основе Тпк (20 мМ Тпк-НС1 рН 7,5; 60 мМ КС1, 5 мМ МдС12; 35 нг/мкл БСА), который содержит 20-60 нг/лунку рекомбинантно экспрессированного РХК-ЛСД, гибридного с С8Т, 200-600 нМ биотинилированного на Ν-конце белка, который представляет 676-700аминокислоты 8КС1, 200 нг/лунку конъюгата стрептавидин-х1АРС (Рго/уте) и 6-10 нг/лунку Ей А1024 - анти-С8Т (Регк1п Е1тег). Содержание ДМСО в пробах поддерживали на 1%. После получения испытуемой смеси и разбавления потенциальных лигандов, которые модулируют РХК, испытание было уравновешено в течение 1 ч в темноте при комнатной температуре в 384-луночном Р1А-планшете (Сгешег). Сигнал БАЙСЕ детектировали с помощью Регкш Е1тег У1СТОК2УТМ Ми1Н1аЪе1 Соип!ег. Результаты были визуализированы при построении диаграммы отношений между излученным светом при 665 и 615 нм. Базовый уровень образования комплекса РХК-белок наблюдался в отсутствие добавленного лиганда. Лиганды, которые активируют образование комплекса, вызывают зависимое от концентрации увеличение сигнала флуоресценции с временным разрешением. Ожидается, что соединения, которые связываются одинаково хорошо и с мономерным РХК, и с комплексом РХК-белок, не будут давать изменений в сигнале, в то время как лиганды, которые связываются преимущественно с мономерным рецептором, как ожидается, вызовут зависимое от концентрации уменьшение наблюдаемого сигнала.
- 66 024083
Для оценки ингибиторного потенциала соединений, определяли значения ЕС50 для соединений, представленных в примерах, а также для соединений сравнения, перечисленные в табл. 1.
Анализ гибрида 1 млекопитающего (М1Н).
Определение управляемой трансактивации промотора Оа14, которая опосредована лигандом, для измерения активации РХК, которая опосредована связыванием лиганда, проводили следующим образом: часть кДНК, которая кодирует домен, связывающий лиганд РХК, была клонирована в вектор рСМУ-ВЭ (З!га!адепе), в виде гибрида ДНК-связывающего домена дрожжей ОАЬ4 под контролем промотора ЦМВ. Аминокислотные границы лигандсвязывающего домена представляли собой аминокислоты 187-472 в записи базы данных ЫМ005123 (КеГЗес]). В качестве репортерной плазмиды использовали плазмиду рРК-Ьис (З!га!адепе), которая содержит синтетический промотор с пятью тандемными повторами в дрожжевых САЬ4-связывающих сайтах, управляющий экспрессией гена люциферазы РЬобпик ругаЬк (американский светлячок), в качестве репортерного гена. Для увеличения экспериментальной надежности плазмида рКЬ-СМУ (Рготеда) была котрансфицирована. рКЬ-СМУ содержит конститутивный СМУ промотор, который контролирует экспрессию люциферазы КепШа гешГогпик. Анализы всех Оа14 репортерные гены были сделаны на клетках НЕК293 (полученных из ЭЗМ2, Брауншвейг, Германия), выращенных в МОС с Ь-глутамином и ССР Эрла, дополненные 10% эмбриональной бычьей сывороткой, 0,1 мМ неосновных аминокислот, 1 мМ пируватом натрия и 100 единицами пенициллина/стрептавидина на мл при 37°С в 5% СО2. Среда и добавки были получены из 1пу1!годеп. Для анализа 5х 105 клеток/лунку были помещены в лунки 96-луночных планшетов в 100 мкл/лунку МОС без фенола красного и Ь-глутамина и с ССР Эрла с добавлением ЭБС (НуС1опе, Южный Логан, Юта), обработанной 10% уголя/декстрана, 0,1 мМ неосновных аминокислот, 2 мМ глутамина, 1 мМ пируват натрия и 100 единиц пенициллина/стрептавидина на 1 мл при 37°С в 5% СО2. Следующий день клетки были соединены >90%. Среда была удалена и клетки были кратковременно трансфицированы с использованием 20 мкл на лунку ОрбМЕМ -полиэтилен-имин-основанный трансфекционный реагента (ОрЬМЕМ, 1пубгодеп; Ро1уе!Ьу1епе1т1пе, А1бпсЬ кат. № 40,827-7), включая три плазмиды, описанные выше. МОС вместе с той же композицией, которая использовалась для выращивания клеток, была добавлена через 2-4 ч после добавления трансфекционной смеси. Затем была добавлена совокупная смесь, предварительно растворенная в МОС (конечная концентрация среды не превышала 0,1%). Клетки были дополнительно инкубированы 16 ч перед последовательным измерением активности люцифераз светляка и гепШа в тех же самых клеточных экстрактах с использованием системы двойного анализа света люциферазы (Эуег е! а1., Апа1. ВюсЬет. 2000, 282, 158-161). Все эксперименты были проведены трижды.
Чтобы анализировать активность агониста РХК приведенных соединений, так же как эталонных соединений из VО 2000/037077, уровни активности были определены в анализах РПЭФ и М1Н, как указано в табл. 1.
- 67 024083
Таблица 1
Соединение ГНЕТ <3а14 (М1Н)
СМ4064 В В
Рх20535 В В
Пример 1 В В
Пример 2 В В
Пример 3 В В
Пример 4 В В
Пример 5а А В
Пример 5Ь С С
Пример 6 В В
Пример 7 В В
Пример 8 в В
Пример 12 с В
Пример 12Ь с С
Пример 12с в в
Пример 13 в в
Пример 13а в в
Пример 13Ь А А
Пример 14 С В
Пример 15 В С
Пример 16 С В
Пример 17 с с
Пример 20 А А
Пример 21 А А
Пример 23 В А
Пример 24 С С
Пример 28 С С
А = ЕС50<10 нМ; В = 10<ЕС50<100 нМ; С = ЕС50>100 нМ.
Определение фармакокинетики на крысах, мышах и обезьянах.
Соединения вводили перорально через желудочный зонд по 5 мг/кг каждое и путем внутривенной инъекции по 1 мг/кг каждая 12-недельному самцу С57В1/61 или крысам линии Спраг-Доули и определяли концентрации тестируемых объектов в плазме с помощью ЖХ-МС/МС после указанных моментов времени. В случае с яванскими макаками (Масасса тц1айа), доза была скорректирована до 12 мг/кг перорально, внутривенную инъекцию не вводили (фиг. 1а, 1Ь или табл. 2).
- 68 024083
Таблица 2
Фармакокинетические параметры соединений согласно примерам 4 и 12 без учета компартментов в обезьянах после перорального введения дозы 12 мг/кг
Параметр Пример 4 (ср.) Пример 4 %ОСО Пример 12 (ср·) Пример 12 %ОСО
1/2 (мин) 175,04 51,3 272,29 51,8
Ттах (мин) 85,0 71,3 175,0 64,3
Стах (нг/мл) 7336,54 56,2 2218,77 64,3
МПТо., (мин) 258,34 16,2 366,50 28,5
νζ/Ρ (л/кг) 1,926 В1,5 5,187 53,2
С1_г/Р (л/мин/кг) 0,007 31,2 0,013 8,7
АиС/о-,) (нг.мин/мл) 1828898,50 30,3 868263,37 12,1
АиС(о-,п1м) (нг.мин/мл) 1844978,86 28,7 905286,64 12,3
Раствор 2,5 мг/мл для каждого тестируемого объекта получали путем их растворения в носителе, 0,5% гидроксипропилметилцеллюлозе (мас./об.) в 20 мМ фосфатно-солевого буферного раствора рН 7,4. Растворы перемешивали в течение ночи при комнатной температуре и нагревали до 40°С в течение 10 мин, в результате получали полностью гомогенную суспензию. Введение осуществляли путем перорального введения мыши раствора в объеме 5 мл/кг. Для каждого момента времени были использованы по три мыши или крысы. В случае с яванскими макаками пробы крови были получены повторной пункцией вены. Пробы крови были обработаны Ы-гепарином в ходе процедуры забора и помещены на лед до центрифугирования при 645 д (5 мин, 4°С). Плазму собирали и хранили при -20°С до анализа. К 50 мкл пробы плазмы добавляли 6 мкл ацетонитрила, содержащего внутренний стандарт. Пробы интенсивно перемешивали и центрифугировали в течение 10 мин при 6000 д и 20°С. Аликвоту свободного от частиц надосадка перемещали в 200 мкл виалы для проб и последовательно подвергали ЖХ/МС/МС для количественного анализа. Концентрации в плазмы в различные моменты времени определяли и наносили на диаграмму в зависимости от времени отбора проб, как показано на фиг. 2.
Неожиданно было обнаружено, что агонисты РХК, описанные в настоящем изобретении, демонстрируют повышенные уровни в плазме после перорального введения ΐπ У1уо по сравнению с известными агонистами РХК, известными из уровня техники.
Таблица 3
Концентрации СА4064, соединений согласно примерам 4 и 12 в плазме самцов крыс линии Спраг-Доули после внутривенного введения 1 мг/кг дозы, в зависимости от времени СА4064 (1 мг/кг внутривенно)
Время (ч) Средняя концентрация (нг/мл) 30 %ст
0,083 405,13 44,9 11,09
0,25 207,52 17,9 8,62
0,50 123,94 20,3 16,41
1,00 68,33 15,6 22,82
2,00 24,98 4,7 18,71
4,00 15,00 7,4 49,50
- 69 024083
Пример 4 (1 мг/кг внутривенно).
Время (ч) Средняя концентрация (нг/мл) 5ϋ %ον
0,083 1188,90 149,9 12,60
0,25 748,71 197,6 26,39
0,50 450,93 49.8 11,04
1,00 201,63 39,3 19,51
2,00 78,93 16,1 20,41
4,00 44,48 3,2 7,21
Пример 12 (1 мг/кг внутривенно).
Время (ч) Средняя концентрация (нг/мл) 3ϋ %СУ
0,083 660,89 60,6 9,17
0,25 358,74 21,5 5,99
0,50 174,34 20,8 11,92
1,00 84,63 12,3 14,49
2,00 37,69 6,3 16,67
4,00 19,24 2,3 11,95
Приведенные в качестве примера соединения согласно примеру 4 и примеру 12 показали, по существу, более высокие уровни в плазме у С57/Ъ16 и самцов крыс линии Спраг-Доули по сравнению с С\У4064. как отмечено на фиг. 1с и табл. 3.
Таблица 4
Средние фармакокинетические параметры 0А4064, соединений согласно примерам 4 и 12 у самцов крыс линии Спраг-Доули после внутривенного введения 1 мг/кг соединений
Параметр Θ\Λ/4064 Пример 4 Пример 12
Взц 0,9793 0,9537 0,9420
*Стах(нг/мл) 564,93 1496,10 895,38
Ттах (ч) 0,083 0,083 0,083
1ΐ/2 (ч) 1,22 1,14 1,47
# Аис(0.3> (ч*нг/мл) 267,55 850,00 399,19
А11С (0-») (ч *нг/мл) 293,90 923,32 440,02
Экстраполированная А11С (%) 9,0 7,94 9,28
МВТ последнее (ч) 0,84 0,83 0,78
νά (мл/кг) 5977,72 1785,2 4822,49
С1 (мл/ч/кг) 3402,50 1083,05 2272,63
* Концентрация для внутривенного введения.
# Площадь под кривой концентрация-время (0-4) (ч-нг/мл) при внутривенном введении.
- 70 024083
Таблица 5
Средние фармакокинетические параметры для соединений согласно примерам 4 и 12 у самцов крыс линии Спраг-Доули после перорального введения 5 мг/кг соединений
Параметр 3ν/4064 Пример 4 Пример 12
н.д. 0,9720 0,9036
Доза (мг/кг) н.д. 5 5
Стах (нг/мл) н.д. 93,09 210,12
Ттах (ч) н.д. 0,50 0,50
Ιι/2 (ч) н.Д. 4,08 2,78
АиС(0-8) (ч *нг/мл) н.Д. 286,55 569,74
А11С (о. „) (ч *нг/мл) н.Д. 406,44 680,88
Экстраполированная дис (%) н.Д- 33,93 16,32
МАТ последнее <ч) н.Д. 2,97 2,42
νό (мл/кг) Н.д. 72491,39 29444,42
С1 (мл/ч/кг) н.д. 12302,06 7343,42
Абсолютная биодоступность (%) н.Д. 8,8 30,95
Абсолютная пероральная биодоступность для соединения согласно примеру 4 - 8,8% и для соединения согласно примеру 12 - 30,95%.
Определение гиполипидемических эффектов на мышах бЬ/бЬ.
Соединения вводили перорально через желудочный зонд 2х 5 мг/кг каждого С57ВЬК§ мышам 1ерг-/бЬ/бЬ, начиная с возраста 12 недель. Животных содержали на рационе с высоким содержанием жира (ззтГГ ЕР К/М 12330 с 59% (ккал) жира из §зтГГ, Зост, Германия) две недели перед началом кормления через желудочный зонд. Базис крови был взят посредством ретроорбитального кровоизвлечения. Пробы крови обрабатывали Ы-гепарином в ходе процедуры забора и помещали на лед перед центрифугированием при 645 д (5 мин, 4°С). Плазму собирали и хранили при -20°С перед анализом. Общие триглицериды и общий холестерин измеряли в аликвоте 3 мкл плазмы с использованием коммерческого набора ЬаЬАззауТМ триглицерид (кодовый № 290-63701) и ЬаЬАззауТМ холестерин (кодовый № 294-65801) от \Уако ОкщпозОсз (Нейсс, Германия). Для анализа фармакологического эффекта соединений проводили сравнение средних значений для триглицеридов и холестерина в плазме на группу дозирования между базисом и после 8 недель лечения.
Несмотря на то что результаты лечения С\У4064 показали незначительное сокращение -6% на фоне носителя в глюкозе крови натощак после 3 дней введения доз 2x5 мг/кг/день, лечение соединением согласно примеру 5 показало понижение -16% по сравнению с носителем в этом наборе. Кроме того, пример 5 показал значительное уменьшение липидов плазмы после 3 дней введения дозы 2x5 мг/кг/день с 24% уменьшением общего холестерина и 24,2% уменьшением общих триглицеридов по сравнению с контролем в виде носителя.
Активность выбранных соединений в экспериментах на животных ш У1уо.
Мыши линии С57/Ь16 (Е1еуаде 1апу1ег. Франция) в возрасте 8 недель 4 недели содержали на рационе с высоким содержанием жира (добавлено 60% ккал из жира, 8шГГ, Зост, Германия, кат. № Е15771-30 (Моб. διιπνίΐ)) + 0,5% холестерина (81дта-А1бг1сЬ, Германия). Базисные пробы крови были взяты после ночного голодания и глюкоза плазмы натощак была определена с использованием прибора КосЬе АссисЬеск. Параллельно была сформирована Ы-гепариновая плазма для определения базисных уровней общих триглицеридов (ОТ) и общего холестерина (ОХ). Животных содержали на РВСЖ + 0,5% холестериновом рационе 8 недель и еженедельно брались пробы крови для мониторинга уровней ОТ и ОХ плазмы с использованием обычных наборов для ферментативных анализов (\Уако Ихадпозйсз, Нейсс, Германия). Тестируемые соединения растворяли в 100% пальмовом масле и затем примешивали в жидкую еду с ежедневным приблизительным поглощением 30 мг/кг, основанным на усредненном потреблении пищи
- 71 024083 в течение 4 недель адапционного периода РВСЖ. На фиг. 4 и 5 показано развитие значений ОТ и ОХ.
После умерщвления мышей определяли печеночные триглицериды и холестерин с использованием модифицированного метода Фолкха (I. Ро1сЬ е! а1. А к1тр1е те!Ьоб £ог !Ье 1ко1а!юп апб рипйсабоп о£ !о!а1 Пр1бек £гот атта1 Ьккиек. I. Вю1. СЬет. 1957, 226, 497-509). Вкратце, замороженные ткани печени были гомогенизированы и дважды экстрагированы с использованием гексан/2-пропанола (3:2) (30 мг тканей/1 мл органического растворителя). Органический слой удаляли и сушили. Полученные гранулы растворяли в 0,5 мл фосфатно-солевого буферного раствора, который содержал 0,1% (мас./об.) СДС. Содержание триглицеридов и холестерина измеряли с помощью специальных ферментных реагентов (\Уако П1адпокЬск, Нейсс, Германия).
РНК выделяли с применением реагента КНА/о1 КТ (Регтейак) и определяли уровни мРНК посредством количественной полимеразной цепной реакции с обратной транскрипцией (кОТ-ПЦР) с применением АЬко1и!е ОРСК Кох М1х ОпуЦгодеп) и прибора для ПЦР в реальном времени от АррЬеб В1окук!етк (СА). Использованные последовательности праймеров и пробы (от 5' к 3') представляли собой: §НР, прямой САССА0АСТССАТТССАС0; обратный СТАСССТСАА0ААСАТТССА00; проба 56-РАМ/СА0Т0АТ0ТСААС0ТСТСССАТ0АТА0 и В8ЕР, прямой СТ0АСТ0ТТ0АТА00С0АТ00; обратный ССТСАТАС00АААСССАА0АТС; проба 56-РАМ/АТ00СТАССТСА0САСТ00АСААТ. Все пробы были проведены дважды. Экспрессия гена (фиг. 6) была выражена в условных единицах и нормализована относительно гена домашнего хозяйства ТАТА-бокс-связывающего белка (ТСБ, прямой АА0ААА000А0ААТСАТ00АСС; обратный 0А0ТАА0ТССТ0Т0СС0ТАА0; проба 56-РАМ/ССТ0А0САТ/2еи/АА00Т00АА00СТ0ТТ). Экспрессия генов ЭПЖК и КГП была 6-кратно выше в мышах, которые были обработаны примером 12.
Определение УФ-фотостабильности.
Испытуемые соединения растворяли, используя этанол, и анализировали их УФ-спектр для определения Хтах, чтобы установить длину волны излучения, которая будет использована в исследовании (см. фиг. 2). Определили, что наиболее подходящей длиной волны для тестирования УФ-стабильности двойной связи -СН=СН- была длина волны 254 нм. Дальнейший материал соединений далее растворяли в дейтерированном этаноле и анализировали (Т=0) 1Н ЯМР (400 МГц). Каждую пробу затем восстанавливали из трубы ЯМР и подвергали УФ-облучению (254 нм) в течение 4, 15 и 70 ч. В соответствующие моменты времени индивидуальные пробы повторно анализировали с использованием 1Н ЯМР и измеряли сигнал протонов -СН=СН- для оценки процента двойной связи, который остался интактным. Другие изменения в химически измененных сигналах также анализировали для дальнейших изменений во всей структуре молекул.
В отличие от примера 4 (рацемическая 3-(2-(2-хлор-4-((5-циклопропил-3-(2,6дихлорфенил)изоксазол-4-ил)метокси)фенил)циклопропил)бензойной кислоты), соединения 0\У4()64 и РХ20535 подверглись значительным изменениям в спектре 1Н ЯМР после продолжительного УФ-облучения. Основываясь на относительной интеграции сигналов 1Н ЯМР, менее чем 30% 0\У4()64 и 45% РХ20535 все еще присутствуют в смеси, что предполагает, в свою очередь, что 70% 0\У4()64 распалось после 70 ч. Пример 4, вероятно, инертен к 70 ч УФ-облучению при λ=254 нм (см. фиг. 3а-1).
Другую, более быструю экспериментальную установку использовали для исследования широкого круга соединений в сравнении с 0\У4()64. Вещества были растворены в реагенте класса ДМСО (99,5%, Каг1 Ко!Ь) при концентрации 250 мкМ. Раствор ДМСО распределяли по слайду кварцевого стекла на глубину около 2 мм и облучали с использованием УФ-лампы с излучением 366 нм (Вепба Шкйитейк, Вислох, Германия) с использованием лампы 8 Вт, установленной на расстоянии около 2,5 см от облучаемых материалов. Раствор отбирали перед облучением (Т=0 мин) и в различные интервалы впоследствии. Исходный материал и пробы сохраняли от прямого освещения в обернутых фольгой трубках. Пробы вводили (2 мкл) прямо в ЖХМС систему для анализа без дальнейшей подготовки. Результаты отражены на фиг. 3т, на котором показана высокая фотостабильность соединений согласно настоящему изобретению (примеры 12, 12с, 20, 16, 14) по сравнению с соединением О\У4064, содержащим стильбеновый фрагмент.

Claims (13)

  1. ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ
    1. Соединение согласно формуле (1), его энантиомер, диастереомер, таутомер, сольват или фармацевтически приемлемая соль:
    в которой К выбран из группы, состоящей из СООК6, СΟNΚ7Κ8, тетразолила или Н, где Кб независимо выбран из группы, состоящей из Н или О -С6-алкила, и К7 и К8 независимо друг от друга выбраны из группы, состоящей из Н, С1-С6-алкила, С1-С6-галоалкила, С1-С6-алкилена-К9, δΟ2-С1-С6-алкила, К9 выбран из группы, состоящей из СООН, ОН или δΟзН;
    А выбран из группы, состоящей из фенила, пиридила, пиразолила, индолила, тиенила, бензотиенила, индазолила, бензизоксазолила, бензофуранила, бензотриазолила, фуранила, бензотиазолила, тиазолила, каждый из которых возможно замещен одной или двумя группами, независимо выбранными из группы, состоящей из ОН, С1-С6-алкила, С3-С6-циклоалкила или галогена;
    О выбран из группы, состоящей из фенила, пиридила, тиазолила, тиофенила, пиримидила, каждый из которых возможно замещен одной или двумя группами, независимо выбранными из группы, состоящей из С1-С6-алкила, галогена или СР3;
    где X = СН, Ν,
    К! выбран из группы, состоящей из водорода, Ц-Сз-алкила, С3-С6-циклоалкила, С4-С5-алкилциклоалкила, где С1-С3-алкил возможно замещен 1-3 заместителями, независимо выбранными из галогена, гидрокси или С1-С6- алкокси;
    К2 и К3 независимо выбраны из группы, состоящей из водорода, С1-С3-алкила, С1-С3-галоалкила, С1-С3-алкокси, С1-С3-галоалкокси и галогена.
  2. 2. Соединение по п.1, отличающееся тем, что
    К выбран из группы, состоящей из СООК6, СО^7Кв, тетразолила или Н, где К6, К7 и К8 независимо выбраны из группы, состоящей из Н, С1-С6-алкила;
    А выбран из группы, состоящей из фенила, пиридила, индолила, тиенила, бензотиенила, индазолила, бензизоксазолила, бензофуранила, бензотриазолила, фуранила, бензотиазолила, тиазолила, каждый из которых возможно замещен одной или двумя группами, независимо выбранными из группы, состоящей из ОН, С1-С6-алкила, С3-С6-циклоалкила;
    О выбран из группы, состоящей из фенила, пиридила, тиазолила, тиофенила, пиримидила, каждый из которых возможно замещен одной или двумя группами, независимо выбранными из группы, состоящей из С1-С6-алкила, галогена или СР3;
    где X = СН, Ν,
    К1 выбран из группы, состоящей из водорода, С1-С3-алкила, С1-С3-галоалкила, С3-С6-циклоалкила, С4-С5-алкилциклоалкила;
    К2 и К3 независимо выбраны из группы, состоящей из водорода, С1-С3-алкила, С1-С3-галоалкила, С1-С3-алкокси, С1-С3-галоалкокси и галогена.
  3. 3. Соединение по п.1 или 2, имеющее следующую структуру:
    где XI представляет собой СН или Ν;
    К4 и К5 независимо выбраны из группы, состоящей из Н, С1-С6-алкила, галогена или СР3; К-А выбран из
    - 73 024083 или
    К1 выбран из группы, состоящей из изопропила и циклопропила;
    К2 и К3 независимо выбраны из группы, состоящей из галогена, С1-С3-алкила, метокси и трифторметокси.
  4. 4. Соединение по любому из пп.1-3, отличающееся тем, что А представляет собой фенил;
    О представляет собой возможно замещенный фенил;
    X представляет собой СН;
    Κι представляет собой циклоалкил; каждый из К2 и К3 представляет собой галоген.
  5. 5. Соединение по п.4, отличающееся тем, что О представляет собой фенил, замещенный одним заместителем.
  6. 6. Соединение по п.5, отличающееся тем, что указанный один заместитель представляет собой галоген.
  7. 7. Соединение по любому из пп.1-6, выбранное из следующих соединений:
    3-(2-(2-хлор-4-((5-циклопропил-3-(2,6-дихлорфенил)изоксазол-4ил)метокси)фенил)циклопропил)бензойная кислота;
    (-)-3-(2-(2-хлор-4-((5-циклопропил-3-(2,6-дихлорфенил)изоксазол-4ил)метокси)фенил)циклопропил)бензойная кислота;
    (+)-3-(2-(2-хлор-4-((5-циклопропил-3-(2,6-дихлорфенил)изоксазол-4ил)метокси)фенил)циклопропил)бензойная кислота;
    3-(2-(2-хлор-4-((3-(2,6-дихлорфенил)-5-изопропилизоксазол-4ил)метокси)фенил)циклопропил)бензойная кислота;
    3- (2-(2-хлор-4-((5-циклопропил-3-(3,5-дихлорпиридин-4-ил)изоксазол-4ил)метокси)фенил)циклопропил)бензойная кислота;
    4- (4-((4-(2-(3-карбоксифенил)циклопропил)-3-хлорфенокси)метил)-5-циклопропилизоксазол-3-ил)3,5-дихлорпиридин-1-оксид;
    3- (2-(2-хлор-4-((1-(2,6-дихлорфенил)-4-изопропил-1Н-1,2,3-триазол-5ил)метокси)фенил)циклопропил)бензойная кислота;
    4- ((4-(2-(6-(1Н-тетразол-5 -ил)пиридин-3 -ил)циклопропил)-3 -хлорфенокси)метил)-5-циклопропил-3 (2,6-дихлорфенил)изоксазол;
    5- (2-(2-хлор-4-((5-циклопропил-3-(2,6-дихлорфенил)изоксазол-4ил)метокси)фенил)циклопропил)пиколиновая кислота.
  8. 8. Соединение по любому из пп.1-6, выбранное из следующих соединений:
    3- (2-(6-((5-циклопропил-3 -(2,6-дихлорфенил)изоксазол-4-ил)метокси)-2-(трифторметил)пиридин-3ил)циклопропил)бензойная кислота;
    4- (2-(2-хлор-4-((5-циклопропил-3-(2,6-дихлорфенил)изоксазол-4ил)метокси)фенил)циклопропил)бензойная кислота;
    1,3-дигидрокси-2-(гидроксиметил)пропан-2-аминия 4-(2-(2-хлор-4-((5-циклопропил-3-(2,6дихлорфенил)изоксазол-4-ил)метокси)фенил)циклопропил)бензоат;
    (+)-4-(2-(2-хлор-4-((5-циклопропил-3-(2,6-дихлорфенил)изоксазол-4ил)метокси)фенил)циклопропил)бензойная кислота;
    (-)-4-(2-(2-хлор-4-((5-циклопропил-3-(2,6-дихлорфенил)изоксазол-4ил)метокси)фенил)циклопропил)бензойная кислота;
    6- (2-(2-хлор-4-((5-циклопропил-3-(2,6-дихлорфенил)изоксазол-4-ил)метокси)фенил)циклопропил)1 -метил-1Н-индазол-3 -карбоновая кислота;
    (+)-6-(2-(2-хлор-4-((5-циклопропил-3-(2,6-дихлорфенил)изоксазол-4ил)метокси)фенил)циклопропил)-1 -метил-1Н-индазол-3 -карбоновая кислота;
    (-)-6-(2-(2-хлор-4-((5-циклопропил-3-(2,6-дихлорфенил)изоксазол-4ил)метокси)фенил)циклопропил)-1 -метил-1Н-индазол-3 -карбоновая кислота;
    4-(2-(2-хлор-4-((5-циклопропил-3-(2,6-дихлорфенил)изоксазол-4-ил)метокси)фенил)циклопропил)^(метилсульфонил)бензамид;
    2-(4-(2-(2-хлор-4-((5-циклопропил-3-(2,6-дихлорфенил)изоксазол-4ил)метокси)фенил)циклопропил)бензамидо)этансульфоновая кислота;
    4-((4-(2-(4-(1Н-тетразол-5-ил)фенил)циклопропил)-3-хлорфенокси)метил)-5-циклопропил-3-(2,6дихлорфенил)изоксазол;
    4-(2-(2-хлор-4-((3-(2,6-дихлорфенил)-5-(2-гидроксипропан-2-ил)изоксазол-4- 74 024083 ил)метокси)фенил)циклопропил)бензойная кислота;
    5- (2-(2-хлор-4-((5-циклопропил-3-(2,6-дихлорфенил)изоксазол-4-ил)метокси)фенил)циклопропил)1-изопропил-1Н-пиразол-3-карбоновая кислота;
    6- (2-(2-хлор-4-((5-циклопропил-3-(2,6-дихлорфенил)изоксазол-4-ил)метокси)фенил)циклопропил)1-изопропил-1Н-индазол-3-карбоновая кислота;
    4-(2-(2-хлор-4-((5-циклопропил-3-(2,6-дихлорфенил)изоксазол-4-ил)метокси)фенил)циклопропил)2,6-диметилбензойная кислота;
    4-(2-(2-хлор-4-((5-циклопропил-3-(2-(трифторметокси)фенил)изоксазол-4ил)метокси)фенил)циклопропил)бензойная кислота;
    (+)-2-(4-(2-(2-хлор-4-((5-циклопропил-3-(2,6-дихлорфенил)изоксазол-4ил)метокси)фенил)циклопропил)бензамидо)этансульфоновая кислота;
    (-)-2-(4-(2-(2-хлор-4-((5-циклопропил-3-(2,6-дихлорфенил)изоксазол-4ил)метокси)фенил)циклопропил)бензамидо)этансульфоновая кислота;
    2-(4-(2-(2-хлор-4-((5-циклопропил-3-(2,6-дихлорфенил)изоксазол-4ил)метокси)фенил)циклопропил)бензамидо)уксусная кислота;
    4-(2-(2-хлор-4-((4-(2,6-дихлорфенил)-1-изопропил-1Н-1,2,3-триазол-5ил)метокси)фенил)циклопропил)бензойная кислота.
  9. 9. Применение соединения по любому из пп.1-8 для получения лекарственного средства для профилактики и/или лечения заболеваний, опосредованных РХК.
  10. 10. Применение по п.9 для профилактики и/или лечения хронических внутрипеченочных или некоторых форм внепеченочных холестатических состояний или фиброза печени, возникающего в результате хронических холестатических состояний или острых внутрипеченочных холестатических состояний; и/или для профилактики и/или лечения стеатоза печени и связанных синдромов, холестатических или фиброзных эффектов, которые связаны с вызванным алкоголем циррозом или с передаваемыми вирусами формами гепатита; и/или для профилактики и/или лечения печеночной недостаточности или ишемии печени после обширной резекции печени; и/или для профилактики и/или лечения стеатогепатита, связанного с химиотерапией (САЗН); и/или для профилактики и/или лечения острой печеночной недостаточности.
  11. 11. Применение по п.9 для профилактики и/или лечения липидных и липопротеиновых расстройств; и/или для профилактики и/или лечения диабета II типа и клинических осложнений диабета I и II типов, включая диабетическую нефропатию, диабетическую нейропатию, диабетическую ретинопатию и другие наблюдаемые эффекты клинического проявления длительного диабета; и/или для профилактики и/или лечения состояний и заболеваний, возникающих в результате хронической жировой и фиброзной дегенерации органов вследствие усиленного накопления липидов и, конкретно, триглицеридов и последующей активации профиброзных путей, таких как неалкогольная жировая болезнь печени (НЖБП) или неалкогольный стеатогепатит (НАСГ); и/или для профилактики и/или лечения ожирения или метаболического синдрома (общие состояния дислипидемии, диабета и аномально высокого индекса массы тела); и/или для профилактики и/или лечения острого инсульта или тромбоза, который случается в качестве конечной стадии хронического обструктивного атеросклероза.
  12. 12. Применение по п.9 для профилактики и/или лечения гепатоцеллюлярной карциномы и других форм злокачественных неопластических заболеваний печени.
  13. 13. Фармацевтическая композиция для применения в профилактике и/или лечении заболеваний, опосредованных РХК, содержащая соединение по любому из пп.1-8 и один или более инертных ингредиентов, представляющих собой фармацевтически приемлемый носитель.
EA201290047A 2009-08-19 2010-08-19 Новые соединения, связывающие фарнезоидный х-рецептор (fxr) (nr1h4) и модулирующие его активность EA024083B1 (ru)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US23511709P 2009-08-19 2009-08-19
EP09010676A EP2289883A1 (en) 2009-08-19 2009-08-19 Novel FXR (NR1H4) binding and activity modulating compounds
PCT/EP2010/005093 WO2011020615A1 (en) 2009-08-19 2010-08-19 Novel fxr (nr1h4 ) binding and activity modulating compounds

Publications (2)

Publication Number Publication Date
EA201290047A1 EA201290047A1 (ru) 2013-09-30
EA024083B1 true EA024083B1 (ru) 2016-08-31

Family

ID=41137753

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
EA201290047A EA024083B1 (ru) 2009-08-19 2010-08-19 Новые соединения, связывающие фарнезоидный х-рецептор (fxr) (nr1h4) и модулирующие его активность

Country Status (30)

Country Link
US (1) US8952042B2 (ru)
EP (2) EP2289883A1 (ru)
JP (1) JP5692934B2 (ru)
KR (1) KR101712466B1 (ru)
CN (1) CN102548974B (ru)
AU (1) AU2010285175B2 (ru)
BR (1) BR112012003554A2 (ru)
CA (1) CA2771445C (ru)
CL (1) CL2012000369A1 (ru)
DK (1) DK2467366T3 (ru)
EA (1) EA024083B1 (ru)
ES (1) ES2529226T3 (ru)
GE (1) GEP20146109B (ru)
HR (1) HRP20150159T1 (ru)
IL (1) IL217676A (ru)
IN (1) IN2012DN00790A (ru)
MA (1) MA33575B1 (ru)
ME (1) ME02047B (ru)
MX (1) MX2012002119A (ru)
MY (1) MY163109A (ru)
NZ (1) NZ598328A (ru)
PL (1) PL2467366T3 (ru)
PT (1) PT2467366E (ru)
RS (1) RS53812B1 (ru)
SG (1) SG178336A1 (ru)
SI (1) SI2467366T1 (ru)
SM (1) SMT201500029B (ru)
UA (1) UA108209C2 (ru)
WO (1) WO2011020615A1 (ru)
ZA (1) ZA201200730B (ru)

Families Citing this family (80)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CU24152B1 (es) * 2010-12-20 2016-02-29 Irm Llc 1,2 oxazol-8-azabiciclo[3,2,1]octano 8 il como moduladores de fxr
EP2545964A1 (en) 2011-07-13 2013-01-16 Phenex Pharmaceuticals AG Novel FXR (NR1H4) binding and activity modulating compounds
IL253437A0 (en) * 2011-07-13 2017-09-28 Gilead Sciences Inc New compounds modulate fxr (nr1h4) activity and bind
WO2013037482A1 (en) 2011-09-15 2013-03-21 Phenex Pharmaceuticals Ag Farnesoid x receptor agonists for cancer treatment and prevention
KR20150033679A (ko) 2012-06-26 2015-04-01 사니오나 에이피에스 페닐 트리아졸 유도체 및 이의 gabaa 수용체 복합체 조절용 용도
CA2876778A1 (en) 2012-06-26 2014-01-03 Saniona Aps A phenyl triazole derivative and its use for modulating the gabaa receptor complex
WO2014001280A1 (en) 2012-06-26 2014-01-03 Aniona Aps A phenyl triazole derivative and its use for modulating the gabaa receptor complex
WO2014001278A1 (en) 2012-06-26 2014-01-03 Aniona Aps A phenyl triazole derivative and its use for modulating the gabaa receptor complex
WO2014001279A1 (en) 2012-06-26 2014-01-03 Aniona Aps A phenyl triazole derivative and its use for modulating the gabaa receptor complex
JO3215B1 (ar) 2012-08-09 2018-03-08 Phenex Pharmaceuticals Ag حلقات غير متجانسة بها 5 ذرات تحتوي على النيتروجين بها استبدال بكربوكساميد أو سلفوناميد كمعدلات لمستقبل نووي غير محمي RORy
CN102976946A (zh) * 2012-12-13 2013-03-20 烟台泰和新材料股份有限公司 合成间苯二甲酸二甲酯的方法
CN103232378B (zh) * 2013-04-27 2015-11-18 国家海洋局第三海洋研究所 一种含6-溴吲哚满二酮的荔枝螺提取物及制备方法与其抗癌应用
PL3043865T3 (pl) 2013-09-11 2021-07-05 Institut National De La Santé Et De La Recherche Médicale (Inserm) SPOSOBY I KOMPOZYCjE FARMACEUTYCZNE W LECZENIU ZAKAŻENIA WIRUSEM ZAPALENIA WĄTROBY TYPU B
SG11201701723XA (en) 2014-09-24 2017-04-27 Gilead Sciences Inc Methods of treating liver disease
EP3006939A1 (en) 2014-10-06 2016-04-13 Gilead Sciences, Inc. Histidine-rich Glycoprotein as a marker for hepatic Farnesoid X receptor activation
US10208081B2 (en) 2014-11-26 2019-02-19 Enanta Pharmaceuticals, Inc. Bile acid derivatives as FXR/TGR5 agonists and methods of use thereof
EP3034501A1 (en) 2014-12-17 2016-06-22 Gilead Sciences, Inc. Hydroxy containing FXR (NR1H4) modulating compounds
EP3034499A1 (en) * 2014-12-17 2016-06-22 Gilead Sciences, Inc. Novel FXR (NR1H4) modulating compounds
TN2017000344A1 (en) 2015-02-06 2019-01-16 Intercept Pharmaceuticals Inc Pharmaceutical compositions for combination therapy
TWI698430B (zh) 2015-02-13 2020-07-11 南北兄弟藥業投資有限公司 三環化合物及其在藥物中的應用
WO2016161003A1 (en) 2015-03-31 2016-10-06 Enanta Phamraceuticals, Inc. Bile acid derivatives as fxr/tgr5 agonists and methods of use thereof
US10894054B2 (en) 2015-04-07 2021-01-19 Intercept Pharmaceuticals, Inc. FXR agonist compositions for combination therapy
CN106995416A (zh) * 2016-01-26 2017-08-01 上海翰森生物医药科技有限公司 Fxr激动剂及其制备方法和应用
WO2017128896A1 (zh) * 2016-01-26 2017-08-03 江苏豪森药业集团有限公司 Fxr激动剂及其制备方法和应用
CN107021957A (zh) * 2016-02-01 2017-08-08 山东轩竹医药科技有限公司 Fxr受体激动剂
TW201733582A (zh) 2016-03-28 2017-10-01 大日本住友製藥股份有限公司 Fxr促效劑及arb之組合醫藥
WO2017189652A1 (en) 2016-04-26 2017-11-02 Enanta Pharmaceuticals, Inc. Isoxazole derivatives as fxr agonists and methods of use thereof
US10080742B2 (en) 2016-04-26 2018-09-25 Enanta Pharmaceuticals, Inc. Isoxazole derivatives as FXR agonists and methods of use thereof
WO2017189663A1 (en) 2016-04-26 2017-11-02 Enanta Pharmaceuticals, Inc. Isoxazole derivatives as fxr agonists and methods of use thereof
US10144729B2 (en) 2016-05-18 2018-12-04 Enanta Pharmaceuticals, Inc. Isoxazole analogs as FXR agonists and methods of use thereof
WO2017201155A1 (en) * 2016-05-18 2017-11-23 Enanta Pharmaceuticals, Inc. lSOXAZOLE DERIVATIVES AS FXR AGONISTS AND METHODS OF USE THEREOF
WO2017201152A1 (en) * 2016-05-18 2017-11-23 Enanta Pharmaceuticals, Inc. Isoxazole derivatives as fxr agonists and methods of use thereof
CA3252823A1 (en) 2016-06-13 2025-02-25 Gilead Sciences, Inc. Substituted tert-butyl-3-(2-chloro-phenyl)-3-hydroxyazetidine-1-carboxylate compounds
AR108711A1 (es) 2016-06-13 2018-09-19 Gilead Sciences Inc Compuestos moduladores de fxr (nr1h4)
BR112018075734A2 (pt) 2016-06-13 2019-04-02 Gilead Sciences, Inc. composto, composição farmacêutica, método para tratar um paciente com uma doença ou condição mediada pelo menos em parte por fxr, e, uso de um composto.
TW201808283A (zh) 2016-08-05 2018-03-16 廣東東陽光藥業有限公司 含氮三環化合物及其在藥物中的應用
CN106237332A (zh) * 2016-08-11 2016-12-21 河南大学 核受体fxr在肝癌干细胞靶向治疗中的应用
US11091482B2 (en) 2016-08-23 2021-08-17 Ardelyx, Inc. Isoxazolyl-carbonyloxy azabicyclo[3.2.1]octanyl compounds as FXR activators
EP3504205B1 (en) 2016-08-23 2021-08-04 Ardelyx, Inc. Hormone receptor modulators for treating metabolic conditions and disorders
KR102205368B1 (ko) * 2016-09-14 2021-01-20 노파르티스 아게 Fxr 작용제의 신규 요법
KR20180036522A (ko) * 2016-09-30 2018-04-09 (주)나노믹스 스틸벤 유도체 및 그 제조 방법
WO2018067704A1 (en) 2016-10-04 2018-04-12 Enanta Pharmaceuticals, Inc. Isoxazole analogs as fxr agonists and methods of use thereof
CN107973790A (zh) * 2016-10-22 2018-05-01 合帕吉恩治疗公司 杂环fxr调节剂
US10597391B2 (en) 2016-10-26 2020-03-24 Enanta Pharmaceuticals, Inc. Urea-containing isoxazole derivatives as FXR agonists and methods of use thereof
CN106588804B (zh) * 2016-12-09 2018-11-09 都创(上海)医药科技有限公司 一种作为类法尼醇x受体(fxr)的化合物的制备方法
WO2018133730A1 (zh) * 2017-01-20 2018-07-26 四川科伦博泰生物医药股份有限公司 一种杂环化合物及其制备方法和用途
AU2018223146B2 (en) 2017-02-21 2023-12-21 Genfit Combination of a PPAR agonist with a FXR agonist
CN110461328A (zh) 2017-03-28 2019-11-15 吉利德科学公司 治疗肝疾病的治疗组合
US20210085662A1 (en) 2017-03-30 2021-03-25 INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) Methods and pharmaceutical compositions for reducing persistence and expression of episomal viruses
BR112019020780A2 (pt) 2017-04-07 2020-04-28 Enanta Pharm Inc processo para preparação de derivados de ácido biliar de carbamato de sulfonila
JP6886074B2 (ja) 2017-04-12 2021-06-16 イルドン ファーマシューティカル カンパニー リミテッド 核受容体の効能剤であるイソオキサゾール誘導体及びその用途
WO2018190643A1 (en) * 2017-04-12 2018-10-18 Il Dong Pharmaceutical Co., Ltd. An isoxazole derivatives as nuclear receptor agonists and used thereof
KR102725185B1 (ko) 2017-05-26 2024-11-01 씨에스피씨 종콰이 팔마씨우티컬 테크놀로지 (스자좡) 컴퍼니 리미티드 Fxr 수용체 작용제로서 락탐 화합물
US11352358B2 (en) 2017-07-06 2022-06-07 Xuanzhu Biopharmaceutical Co., Ltd. FXR agonist
MA50242A (fr) 2017-09-14 2020-07-22 Ardelyx Inc Modulateurs du récepteur hormonal pour le traitement d'états et de troubles métaboliques mutagènes et fibrotiques
WO2019089665A1 (en) 2017-11-01 2019-05-09 Bristol-Myers Squibb Company Alkene spirocyclic compounds as farnesoid x receptor modulators
CN111511731B (zh) 2017-11-01 2023-05-23 百时美施贵宝公司 作为法尼醇x受体调节剂的烯烃化合物
EP3704107B1 (en) 2017-11-01 2023-04-12 Bristol-Myers Squibb Company Multicyclic compounds as farnesoid x receptor modulators
US10689391B2 (en) 2017-12-12 2020-06-23 Enanta Pharmaceuticals, Inc. Isoxazole analogs as FXR agonists and methods of use thereof
CN110128432B (zh) * 2018-02-02 2021-03-02 广东东阳光药业有限公司 含氮三环化合物及其在药物中的应用
US10829486B2 (en) 2018-02-14 2020-11-10 Enanta Pharmacueticals, Inc. Isoxazole derivatives as FXR agonists and methods of use thereof
AU2019263176B2 (en) * 2018-04-30 2025-02-27 The Trustees Of Indiana University Compounds for modulating DDAH and ADMA levels, as well as methods of using thereof to treat disease
BR102019014802A2 (pt) 2018-07-20 2020-02-04 Boehringer Ingelheim Int difluorometil-fenil triazóis
US11339153B2 (en) 2018-08-08 2022-05-24 Inorbit Therapeutics Ab Compounds useful in modulating the farnesoid X receptor and methods of making and using the same
EP4360632B1 (en) 2019-01-15 2025-10-29 Gilead Sciences, Inc. Fxr (nr1h4) modulating compounds
EP3919489A4 (en) 2019-01-31 2022-10-12 The National Institutes of Pharmaceutical R&D Co., Ltd AROMATIC RING OR HETEROAROMATIC RING COMPOUNDS, PROCESS FOR THEIR PRODUCTION AND MEDICAL USE
US11524005B2 (en) 2019-02-19 2022-12-13 Gilead Sciences, Inc. Solid forms of FXR agonists
WO2020231917A1 (en) 2019-05-13 2020-11-19 Enanta Pharmaceuticals, Inc. Isoxazole derivatives as fxr agonists and methods of use thereof
EA202193334A1 (ru) 2019-05-30 2022-03-14 Интерсепт Фармасьютикалз, Инк. Фармацевтические композиции, содержащие агонист fxr и фибрат, для применения при лечении холестатического заболевания печени
AU2020312735A1 (en) 2019-07-18 2021-12-16 Enyo Pharma Method for decreasing adverse-effects of interferon
US20230060715A1 (en) 2020-01-15 2023-03-02 INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) Use of fxr agonists for treating an infection by hepatitis d virus
US11478533B2 (en) 2020-04-27 2022-10-25 Novo Nordisk A/S Semaglutide for use in medicine
CN113754541B (zh) * 2020-06-02 2025-01-03 深圳湾实验室 靶向eb病毒核抗原蛋白的小分子抑制剂、制备方法及其应用
CN114656460B (zh) 2020-12-22 2025-01-10 江苏天士力帝益药业有限公司 一种新型吡嗪结构fxr激动剂、制备方法及应用
US20240100125A1 (en) 2021-01-14 2024-03-28 Enyo Pharma Synergistic effect of a fxr agonist and ifn for the treatment of hbv infection
CN117320722A (zh) 2021-04-28 2023-12-29 埃尼奥制药公司 使用fxr激动剂作为联合治疗强烈增强tlr3激动剂的作用
WO2023090858A1 (ko) * 2021-11-17 2023-05-25 일동제약(주) 아이속사졸 유도체의 제조 방법 및 그의 중간체
WO2023090859A1 (ko) * 2021-11-17 2023-05-25 일동제약(주) 아이속사졸 유도체의 제조 방법 및 그의 신규한 중간체
KR102740618B1 (ko) * 2021-11-17 2024-12-10 유노비아 주식회사 아이속사졸 유도체의 제조 방법 및 그의 중간체
TW202408494A (zh) * 2022-06-30 2024-03-01 南韓商日東製藥股份有限公司 異噁唑衍生物及其鹽的新晶型以及包括其之醫藥組合物

Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2000037077A1 (en) * 1998-12-23 2000-06-29 Glaxo Group Limited Assays for ligands for nuclear receptors
WO2004048349A1 (en) * 2002-11-22 2004-06-10 Smithkline Beecham Corporation Farnesoid x receptor agonists
WO2007140174A2 (en) * 2006-05-24 2007-12-06 Eli Lilly And Company Compounds and methods for modulating fxr

Family Cites Families (12)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP1285914B1 (en) 2001-08-13 2007-12-19 PheneX Pharmaceuticals AG Nr1h4 nuclear receptor binding compounds
US20050107475A1 (en) 2002-03-21 2005-05-19 Jones Stacey A. Methods of using farnesoid x receptor (frx) agonists
WO2004087076A2 (en) 2003-03-31 2004-10-14 The Rockefeller University Methods for inhibiting adipogenesis and for treating type 2 diabetes
WO2007076260A2 (en) 2005-12-19 2007-07-05 Smithkline Beecham Corporation Farnesoid x receptor agonists
JP5301286B2 (ja) 2006-02-03 2013-09-25 イーライ リリー アンド カンパニー Ｆｘ受容体を調節するための化合物及び方法
DK2029547T3 (da) 2006-05-24 2010-07-26 Lilly Co Eli FXR-agonister
EP1894924A1 (en) 2006-08-29 2008-03-05 Phenex Pharmaceuticals AG Heterocyclic FXR binding compounds
EP1894928A1 (en) 2006-08-29 2008-03-05 PheneX Pharmaceuticals AG Heterocyclic fxr binding compounds
CL2007003035A1 (es) 2006-10-24 2008-05-16 Smithkline Beechman Corp Compuestos derivados de isoxazol sustituidos, agonistas de receptores farnesoid x; procedimiento de preparacion; composicion farmaceutica que lo comprende; y uso del compuesto en el tratamiento de la obesidad, diabetes mellitus, fibrosis en organos,
EA200901512A1 (ru) 2007-06-13 2010-06-30 ГЛАКСОСМИТКЛАЙН ЭлЭлСи Агонисты фарнезоидных х-рецепторов
AU2008270784A1 (en) 2007-07-02 2009-01-08 Glaxosmithkline Llc Farnesoid X receptor agonists
TW200906823A (en) 2007-07-16 2009-02-16 Lilly Co Eli Compounds and methods for modulating FXR

Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2000037077A1 (en) * 1998-12-23 2000-06-29 Glaxo Group Limited Assays for ligands for nuclear receptors
WO2004048349A1 (en) * 2002-11-22 2004-06-10 Smithkline Beecham Corporation Farnesoid x receptor agonists
WO2007140174A2 (en) * 2006-05-24 2007-12-06 Eli Lilly And Company Compounds and methods for modulating fxr

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
PELLICCIARI R. ET AL.: "Potential therapeutic applications of farnesoid X receptor (FXR) modulators". EXPERT OPINION ON THERAPEUTIC PATENTS, INFORMA HEALTHCARE, GB, vol. 16, no. 3, 1 January 2006 (2006-01-01), pages 333-341, XP002417228, ISSN: 1354-3776, page 335; figure 2; compound 4 *

Also Published As

Publication number Publication date
CN102548974B (zh) 2015-11-25
MY163109A (en) 2017-08-15
HRP20150159T1 (hr) 2015-05-22
AU2010285175A1 (en) 2012-02-23
KR20120080574A (ko) 2012-07-17
EA201290047A1 (ru) 2013-09-30
US8952042B2 (en) 2015-02-10
ME02047B (me) 2015-05-20
ZA201200730B (en) 2012-09-26
CN102548974A (zh) 2012-07-04
DK2467366T3 (en) 2015-02-16
US20120232116A1 (en) 2012-09-13
AU2010285175B2 (en) 2014-11-27
SMT201500029B (it) 2015-03-05
KR101712466B1 (ko) 2017-04-06
IL217676A (en) 2015-11-30
CA2771445C (en) 2017-09-12
WO2011020615A1 (en) 2011-02-24
HK1172325A1 (en) 2013-04-19
RS53812B1 (sr) 2015-06-30
PL2467366T3 (pl) 2015-04-30
MX2012002119A (es) 2012-08-23
SI2467366T1 (sl) 2015-03-31
CA2771445A1 (en) 2011-02-24
SG178336A1 (en) 2012-03-29
EP2289883A1 (en) 2011-03-02
MA33575B1 (fr) 2012-09-01
ES2529226T3 (es) 2015-02-18
IN2012DN00790A (ru) 2015-06-26
UA108209C2 (uk) 2015-04-10
CL2012000369A1 (es) 2012-07-13
BR112012003554A2 (pt) 2020-01-28
NZ598328A (en) 2013-04-26
JP2013502389A (ja) 2013-01-24
EP2467366B1 (en) 2014-11-12
GEP20146109B (en) 2014-06-10
EP2467366A1 (en) 2012-06-27
JP5692934B2 (ja) 2015-04-01
PT2467366E (pt) 2015-02-06

Similar Documents

Publication Publication Date Title
JP5692934B2 (ja) 新規のｆｘｒ（ｎｒ１ｈ４）結合性及び活性調節性化合物
TWI731392B (zh) Fxr (nr1h4) 調節化合物
BR102015031497A2 (pt) compostos moduladores de fxr (nr1h4)
TW200539854A (en) Compounds, pharmaceutical compositions and methods for use in treating metabolic disorders
EA024843B1 (ru) Соединения, связывающие фарнезоидный x-рецептор (nr1h4) и модулирующие его активность
JP2022517108A (ja) Ｆｘｒ（ｎｒ１ｈ４）調節化合物
AU2018345221A1 (en) Nitrogen-containing heteroaryl compound, and pharmaceutical use thereof
JP2017502999A (ja) Ｒｘｒアゴニストとしての置換二環式ヘテロアリール化合物
US6727268B2 (en) 2-thioxothiazole derivative, method for preparing the same, and pharmaceutical composition containing the same
US6777434B2 (en) Thiazolidine-4-one derivative, method for preparing the same, and pharmaceutical composition containing the same
US6689805B2 (en) Pyrazole-3-one derivative, method for preparing the same, and pharmaceutical composition containing the same
WO2005095364A1 (ja) フェノキシ酢酸誘導体及びそれを用いた医薬
HK1172325B (en) Novel fxr (nr1h4) binding and activity modulating compounds
JP2007284352A (ja) ピラゾール誘導体
KR100576337B1 (ko) 피리다진-4-온 유도체, 그 제조방법 및 약제학적 조성물
KR20130077775A (ko) 4-티오피라졸 유도체 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염, 이의 제조방법 및 이를 유효성분으로 함유하는 이상지질혈증의 예방 또는 치료용 약학적 조성물
KR20060007787A (ko) 1,2,4-트리아졸 유도체, 그 제조방법 및 약제학적 조성물

Legal Events

Date Code Title Description
PC4A Registration of transfer of a eurasian patent by assignment