EA026406B1

EA026406B1 - Противоопухолевые комбинации, содержащие специфически распознающие cd38 антитела и бортезомиб

Info

Publication number: EA026406B1
Application number: EA201390850A
Authority: EA
Inventors: Джутта Декерт; Паскаль Лежен; Мишель Ф. Мэйо; Питер Ю. Парк
Original assignee: Санофи
Priority date: 2010-12-10
Filing date: 2011-12-08
Publication date: 2017-04-28
Also published as: TW201307392A; ZA201304845B; SG191059A1; SI2648747T1; LT2648747T; CL2013001670A1; EP3412311A1; PH12013501183A1; US20140186337A1; MX393853B; BR112013014370B1; HRP20181787T1; NZ612055A; CN103282050B; BR112013014370A2; ES2694784T3; AR084196A1; AU2011340472A1; PE20140004A1; CN106334187B

Abstract

Изобретение относится к фармацевтической комбинации для лечения рака, экспрессирующего CD38, содержащей специфически распознающее CD38 антитело и бортезомиб.

Description

Настоящее изобретение относится к комбинациям моноклональных антител, направленных против СЭ38, и бортезомибу, которые являются терапевтически пригодными при лечении неопластических заболеваний.

СГО38 представляет собой трансмембранный гликопротеин II типа 45 кДа с длинным С-концевым внеклеточным доменом и коротким Ν-концевым цитоплазматическим доменом. Белок СЭ38 представляет собой бифункциональный экзофермент, который может катализировать конверсию ΝΛΌ+ в циклическую ДЦФ-рибозу (еАЭРР), а также гидролизовать сАЭРР до АДФ-рибозы. Экспрессия СЭ38 повышается, и он связан со многими гематопоэтическими злокачественными новообразованиями.

Моноклональные антитела 388В13, 388В18, 388В19, 388В30, 388В31 и 388В39, которые специфически распознают СЭ38. описаны в заявке РСТ \νϋ 2008/047242, полностью включенной в настоящее описание посредством ссылки. Указанные антитела к СЭ38 способны уничтожать СЭ38' клетки посредством трех различных цитотоксических механизмов: индукция апоптоза, антителозависимая клеточная цитотоксичность (ЛЭСС) и комплементзависимая цитотоксичность (СЭС). Кроме того, эти антитела способны непосредственно индуцировать апоптоз СГО38' клеток даже при отсутствии стромальных клеток или продуцируемых клетками стромы цитокинов.

Термин антитело используют в настоящем описании в самом широком смысле, и оно конкретно включает моноклональные антитела (включая непроцессированные моноклональные антитела) любого изотипа, такого как 1§С, 1дМ, 1§А, Ι§Ό и 1дЕ, поликлональные антитела, полиспецифические антитела, химерные антитела и фрагменты антител. Характерное антитело 1дС состоит из двух идентичных тяжелых цепей и двух идентичных легких цепей, которые соединены дисульфидными связями. Каждая тяжелая и легкая цепь содержит константную область и вариабельную область. Каждая вариабельная область содержит три сегмента, называемых определяющими комплементарность областями (СЭР) или гипервариабельными областями, которые преимущественно ответственны за связывание эпитопа антигена. Как правило, их обозначают как СЭР1, СЭР2 и СЭР3, нумеруя последовательно от Ν-конца. Наиболее высококонсервативные участки вариабельных областей вне СЭР называются каркасными областями.

Как используют в настоящем описании, ν_Η или УН относится к вариабельной области тяжелой цепи иммуноглобулина антитела, включая тяжелую цепь Ρν-, δοΡν-, άδΡν-, РаЬ-, РаЬ¹- или Р(аЬ’)₂-фрагмента. Ссылка на У_ь или УЬ относится к вариабельной области легкой цепи иммуноглобулина антитела, включая легкую цепь Ρν-, δοΡν-, άδΡν-, РаЬ-, РаЬ'- или Р(аЬ')₂-фрагмента.

Антитело 388В13 содержит по меньшей мере одну тяжелую цепь, содержащую аминокислотную последовательность, состоящую из 8ЕЭ ΙΌ ΝΟ: 50, и по меньшей мере одну легкую цепь, содержащую аминокислотную последовательность, состоящую из 8ЕЭ ГО ΝΟ: 38, где указанная тяжелая цепь содержит три последовательные СЭР, содержащие аминокислотные последовательности, состоящие из 8ЕЭ ГО ΝΟ: 1, 2 и 3, и указанная легкая цепь содержит три последовательные СЭР, содержащие аминокислотные последовательности, состоящие из 8ЕЭ ГО ΝΟ: 4, 5 и 6.

Антитело 388В18 содержит по меньшей мере одну тяжелую цепь, содержащую аминокислотную последовательность, состоящую из 8ЕЭ ГО ΝΟ: 52, и по меньшей мере одну легкую цепь, содержащую аминокислотную последовательность, состоящую из 8ЕЭ ГО ΝΟ: 40, где указанная тяжелая цепь содержит три последовательные СЭР, содержащие аминокислотные последовательности, состоящие из 8ЕЭ ГО ΝΟ: 7, 8 и 9, и указанная легкая цепь содержит три последовательные СЭР, содержащие аминокислотные последовательности, состоящие из 8ЕЭ ГО ΝΟ: 10, 11 и 12.

Антитело 388В19 содержит по меньшей мере одну тяжелую цепь, содержащую аминокислотную последовательность, состоящую из 8ЕЭ ГО ΝΟ: 54, и по меньшей мере одну легкую цепь, содержащую аминокислотную последовательность, состоящую из 8ЕЭ ГО ΝΟ: 42, где указанная тяжелая цепь содержит три последовательные СЭР, содержащие аминокислотные последовательности, состоящие из 8ЕЭ ГО ΝΟ: 13, 14 (или 81) и 15, и указанная легкая цепь содержит три последовательные СЭР, содержащие аминокислотные последовательности, состоящие из 8ЕЭ ГО ΝΟ: 16, 17 и 18.

Антитело 388В30 содержит по меньшей мере одну тяжелую цепь, содержащую аминокислотную последовательность, состоящую из 8ЕЭ ГО ΝΟ: 56, и по меньшей мере одну легкую цепь, содержащую аминокислотную последовательность, состоящую из 8ЕЭ ГО ΝΟ: 44, где указанная тяжелая цепь содержит три последовательные СЭР, содержащие аминокислотные последовательности, состоящие из 8ЕЭ ГО ΝΟ: 19, 20 и 21, и указанная легкая цепь содержит три последовательные СЭР, содержащие аминокислотные последовательности, состоящие из 8ЕЭ ГО ΝΟ: 22, 23 и 24.

Антитело 388В31 содержит по меньшей мере одну тяжелую цепь, содержащую аминокислотную последовательность, состоящую из 8ЕЭ ГО ΝΟ: 58, и по меньшей мере одну легкую цепь, содержащую аминокислотную последовательность, состоящую из 8ЕЭ ГО ΝΟ: 46, где указанная тяжелая цепь содержит три последовательные СЭР, содержащие аминокислотные последовательности, состоящие из 8ЕЭ ГО ΝΟ: 25, 26 и 27, и указанная легкая цепь содержит три последовательные СЭР, содержащие аминокислотные последовательности, состоящие из 8ЕЭ ГО ΝΟ: 28, 29 и 30.

Антитело 388В39 содержит по меньшей мере одну тяжелую цепь, содержащую аминокислотную последовательность, состоящую из 8ЕЭ ГО ΝΟ: 60, и по меньшей мере одну легкую цепь, содержащую

- 1 026406 аминокислотную последовательность, состоящую из 8ЕО ГО N0: 48, где указанная тяжелая цепь содержит три последовательные СГОК, содержащие аминокислотные последовательности, состоящие из 8Е0 ГО N0: 31, 32 и 33, и указанная легкая цепь содержит три последовательные СГОК, содержащие аминокислотные последовательности, состоящие из 8Е0 ГО N0: 34, 35 и 36.

Гибридомные клеточные линии, продуцирующие 388В13, 388В18, 388В19, 388В30, 388В31 и 388В39 антитела мыши к СГО38 являлись депонированными в Американской коллекции типовых культур (10801 ишусгЩу Вьй, Маиаззаз, УА, 20110-2209, И8А), на 21 июня 2006 г., под регистрационными номерами РТА-7667, РТА-7669, РТА-7670, РТА-7666, РТА-7668 и РТА-7671 соответственно (как описано в \У0 2008/047242, полностью включенной в настоящее описание посредством ссылки).

Термин гуманизированное антитело, как используют в настоящем описании, относится к химерному антителу, которое содержит минимальную последовательность, выделяемую из не принадлежащего человеку иммуноглобулина. Целью гуманизации является снижение иммуногенности ксеногенного антитела, такого как антитело мыши, для введения человеку, при этом сохраняя полную антигенную аффинность связывания и специфичность антитела. Гуманизированные антитела или антитела, адаптированные для неотторжения другими млекопитающими, можно получать несколькими способами, такими как изменение поверхности и трансплантация СЭР. Как используют в настоящем описании, способ изменения поверхности используют в сочетании с молекулярным моделированием, статистическим анализом и мутагенезом для изменения поверхностей не СОК вариабельных областей антитела для доведения до сходства с поверхностями, известных антител хозяина-мишени. Способ трансплантации СОК включает замещение определяющих комплементарность областей, например, антитела мыши, в каркасном домене человека, например, см. \У0 92/22653, полностью включенную в настоящее описание посредством ссылки. Гуманизированные химерные антитела могут содержать константные области и вариабельные области, отличные от определяющих комплементарность областей (СОК), выделяемых по существу или исключительно из соответствующих областей антитела человека, и СОК, выделяемые по существу или исключительно у млекопитающего, не являющегося человеком.

Стратегии и способы изменения поверхности антител и другие способы снижения иммуногенности антител у различного хозяина, описаны в патенте США 5639641, который, таким образом, полностью включен посредством ссылки. Антитела можно гуманизировать различными другими способами, включая трансплантацию СОК (ЕР 0239400, \У0 91/09967, патенты США № 5530101 и 5585089), замену поверхностных аминокислот или изменение поверхности (ЕР 0592106, ЕР 0519596, Рай1аи Е.А., 1991, Мо1еси1аг 1ттиио1оду 28(4/5):489-498, 81ийшска С.М. е1 а1., 1994, Ρτοΐβίη Еидшеегшд, 7(6): 805-814, Кодизка М.А. е1 а1., 1994, ΡΝΑ8, 91:969-973, полностью включенные в настоящее описание посредством ссылки), перестановку цепей (патент США № 5565332, полностью включенный в настоящее описание посредством ссылки) и определения остатков конформационной подвижности (РСТ/И82008/074381, полностью включенный в настоящее описание посредством ссылки). Антитела человека можно получать различными известными в данной области способами, включая способы фагового дисплея. См. также патенты США № 4444887, 4716111, 5545806 и 5814318 и публикации международных патентных заявок номера У0 98/46645, \Е0 98/50433, \Е0 98/24893, \Е0 98/16654, \Е0 96/34096, \Е0 96/33735 и \У0 91/10741 (указанные ссылки полностью включены посредством ссылки).

Антитела к СО38 фармацевтической комбинации по настоящему изобретению представляют собой гуманизированные антитела, которые распознают СО38 и уничтожают СО38+ клетки путем апоптоза, АОСС и СОС. В дополнительном варианте осуществления гуманизированные антитела по изобретению способны уничтожать указанные СО38+ клетки путем апоптоза даже при отсутствии стромальных клеток или продуцируемых клетками стромы цитокинов.

Один из вариантов осуществления такого гуманизированного антитела представляет собой гуманизированное антитело 388В13, 388В18, 388В19, 388В30, 388В31 или 388В39 или их связывающий эпитоп фрагмент.

СОК антител 388В13, 388В18, 388В19, 388В30, 388В31 и 388В39 определяют моделированием и теоретически рассчитывают их молекулярные структуры. Таким образом, в одном из вариантов осуществления настоящее изобретение относится к гуманизированным антителам или их связывающему эпитоп фрагменту, содержащему одну или более СОК, содержащих аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из 8ЕЦ ГО N0: 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36 и 81. В одном из вариантов осуществления предоставлен гуманизированный вариант 388В13, который содержит по меньшей мере одну тяжелую цепь и по меньшей мере одну легкую цепь, где указанная тяжелая цепь содержит три последовательные определяющие комплементарность области, содержащие аминокислотные последовательности, предоставленные 8ЕЦ ГО N0: 1, 2, и 3, и где указанная легкая цепь содержит три последовательные определяющие комплементарность области, содержащие аминокислотные последовательности, предоставленные 8Е0 ГО N0: 4, 5 и 6. В другом варианте осуществления предоставлен гуманизированный вариант 388В18, который содержит по меньшей мере одну тяжелую цепь и по меньшей мере одну легкую цепь, где указанная тяжелая цепь содержит три последовательные определяющие комплементарность области, содержащие аминокислотные последовательности, предоставленные 8ЕЦ ГО N0: 7, 8 и 9, и где указан- 2 026406 ная легкая цепь содержит три последовательные определяющие комплементарность области, содержащие аминокислотные последовательности, предоставленные 8ЕЦ ГО N0: 10, 11 и 12. В другом варианте осуществления предоставлен гуманизированный вариант 388В19, который содержит по меньшей мере одну тяжелую цепь и по меньшей мере одну легкую цепь, где указанная тяжелая цепь содержит три последовательные определяющие комплементарность области, содержащие аминокислотные последовательности, предоставленные 8ЕЦ ГО N0: 13, 14 (или 81) и 15, и где указанная легкая цепь содержит три последовательные определяющие комплементарность области, содержащие аминокислотные последовательности, предоставленные 8ЕЦ ГО N0: 16, 17 и 18. В другом варианте осуществления предоставлен гуманизированный вариант 388В30, который содержит по меньшей мере одну тяжелую цепь и по меньшей мере одну легкую цепь, где указанная тяжелая цепь содержит три последовательные определяющие комплементарность области, содержащие аминокислотные последовательности, предоставленные 8ЕЦ ГО N0: 19, 20 и 21, и где указанная легкая цепь содержит три последовательные определяющие комплементарность области, содержащие аминокислотные последовательности, предоставленные 8ЕЦ ГО N00:22, 23 и 24. В другом варианте осуществления предоставлен гуманизированный вариант 388В31, который содержит по меньшей мере одну тяжелую цепь и по меньшей мере одну легкую цепь, где указанная тяжелая цепь содержит три последовательные определяющие комплементарность области, содержащие аминокислотные последовательности, предоставленные 8ЕЦ ГО N0: 25, 26 и 27, и где указанная легкая цепь содержит три последовательные определяющие комплементарность области, содержащие аминокислотные последовательности, предоставленные 8ЕЦ ГО N0: 28, 29 и 30. В другом варианте осуществления предоставлен гуманизированный вариант 388В39, который содержит по меньшей мере одну тяжелую цепь и по меньшей мере одну легкую цепь, где указанная тяжелая цепь содержит три последовательные определяющие комплементарность области, содержащие аминокислотные последовательности, предоставленные 8ЕЦ ГО N0: 31, 32 и 33, и где указанная легкая цепь содержит три последовательные определяющие комплементарность области, содержащие аминокислотные последовательности, предоставленные 8ЕЦ ГО N0: 34, 35 и 36.

В одном из вариантов осуществления настоящее изобретение относится к гуманизированным антителам или их фрагментам, которые содержат ν_Η, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из группы из 8ЕЦ ГО N0: 66 и 72. В одном из вариантов осуществления предоставлено гуманизированное антитело 388В19, которое содержит ν_Η, содержащую аминокислотную последовательность, предоставленную 8ЕЦ ГО N0: 66. В другом варианте осуществления предоставлено гуманизированное антитело 388В31, которое содержит ν_Η, содержащую аминокислотную последовательность, предоставленную 8ЕЦ ГО N0: 72.

В другом варианте осуществления настоящее изобретение относится к гуманизированным антителам или их фрагментам, которые содержат У, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из группы из 8ЕЦ ГО N0: 62, 64, 68 и 70. В одном из вариантов осуществления предоставлено гуманизированное антитело 388В19, которое содержит У, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из группы из 8ЕЦ ГО N0: 62 и 64. В другом варианте осуществления предоставлено гуманизированное антитело 388В31, которое содержит ν₂, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из группы из 8ЕЦ ГО N0: 68 и 70.

Показано, что каждый из гуманизированных вариантов антител 388В13, 388В18, 388В19, 388В30, 388В31 и 388В39 является особенно эффективным в качестве противораковых средств. Их получение, физические свойства и благоприятные фармакологические свойства описаны в У0 2008/047242, которая полностью включена в настоящее описание посредством ссылки. В основном, применяемые дозы для лечения являющегося человеком индивидуума, которые зависят от факторов, характерных подлежащему лечению индивидууму, находятся в диапазоне от 1 до 150 мг/кг, от 10 до 100 мг/кг или от 50 до 100 мг/кг при пероральном введении или от 1 до 150 мг/кг, от 10 до 100 мг/кг или от 50 до 100 мг/кг при внутривенном введении.

Бортезомиб представляет собой дипептид бороновой кислоты [(1К)-3-метил-1-({(28)-3-фенил-2[(пиразин-2-илкарбонил)амино]пропаноил}амино)бутил]бороновая кислота, торговое наименование: νοίεαάο™) с противоопухолевым действием (ЮсйагДкоп е! а1., N. Епд1. 1. МеД., 352:2487-2498, 2005). Бортезомиб представляет собой высокоспецифичный обратимый ингибитор 268-протеасомы. В нормальных клетках протеасома регулирует экспрессию и функцию белков посредством деградации убиквитинилированных белков, кроме того, она вовлечена в элиминацию неправильно свернутых белков. Механизм действия бортезомиба включает стабилизацию КР-кВ, р21, р27, р53, В1Д и Вах, ингибирование активации кавеолина-1 и активацию 1ЫК, а также реакцию на стресс эндоплазматического ретикулума (ВоссаДого е! а1., Сапсег Се11 1п!., 5(1):18, 2005). Несмотря на то, что вероятнее всего вовлечены многие механизмы, ингибирование протеасомы, таким образом, может обеспечивать активацию программируемой гибели клеток в неопластических клетках в зависимости от подавления проапоптотических путей. В частности, средство ингибирует ядерный фактор КР-кВ, таким образом, препятствуя опосредованной КР-кВ выживаемости клеток, росту опухоли и ангиогенезу. Таким образом, бортезомиб применяют для лечения множественной миеломы и лимфомы мантийных клеток. Бортезомиб, как правило, вводят внут- 3 026406 ривенно.

В настоящее время и для настоящего изобретения обнаружено, что эффективность гуманизированных антител к СП38 можно значительно улучшать при их введении в комбинации по меньшей мере с одним веществом, которое является терапевтически пригодным в лечении типов рака и обладает механизмом, идентичным или отличным от механизма гуманизированных антител к СЭ38. и которое ограничено в настоящем изобретении бортезомибом.

Кроме того, активность зависит от используемой дозы, можно использовать более низкие дозы и увеличивать активность, в то же время снижая токсичность явлений. Улучшенную эффективность комбинации по изобретению можно продемонстрировать определением терапевтического синергизма. Комбинация проявляет терапевтический синергизм, если она терапевтически превосходит наилучшее средство исследования, применяемое отдельно в его максимально переносимой дозе или в его наиболее высокой тестируемой дозе, при которой не получают токсичность у видов животных.

Эту эффективность можно количественно оценивать, например, посредством 1од₁₀ гибели клеток, который определяют по следующей формуле:

1од₁₀ гибели клеток=Т-С (сутки)/3,32хТ₄, в которой Т-С представляет собой задержку роста опухоли, которое является средним временем в сутках для опухолей группы, получавшей лечение, (Т) и опухолей контрольной группы (С) до достижения предопределенного значения (1 г, например);

Т,| представляет собой время в сутках, необходимое для удвоения объема опухоли у контрольных животных [Т.Н. СотЬей е! а1., Сапсег, 40:2660-2680 (1977), Р.М. 8сйаЬе1 е! а1., Сапсег Эгид Оеуе1ортеп1, Рай В., МеОюйк ίη Сапсег Кекеагсй, 17:3-51, №\ν Уогк, Лсайешю Ргекк 1пс. (1979)].

Считают, что продукт является активным, если 1од₄₀ гибели клеток является больше или равен 0,7. Считают, что продукт является очень активным, если 1од₁₀ гибели клеток является больше или равен 2,8.

Комбинация проявляет терапевтический синергизм, когда 1од₁₀ гибели клеток является больше значения 1од₁₀ гибели клеток наилучшего компонента, вводимого отдельно в его максимально переносимой дозе или в его наиболее высокой тестируемой дозе.

Эффективность комбинаций в отношении солидных опухолей можно определять экспериментально следующим ниже способом.

Подвергаемым эксперименту животным, как правило, мышам, подкожно трансплантируют с одной стороны или с двух сторон опухолевые клетки или фрагмент на 0 сутки. Несущих опухоли животных в случайном порядке распределяли по группам в зависимости от размера их опухоли до подвергания различным видам лечения и контролям. Химиотерапию начинают, когда опухоли достигают предопределенного размера после трансплантации в зависимости от типа опухоли, и наблюдают животных каждые сутки. Различные группы животных взвешивают ежесуточно во время лечения до тех пор пока, не получают максимальную потерю массу, и наступает последующее полное восстановление массы. Затем группы взвешивают один раз или дважды в неделю до окончания испытания.

Опухоли измеряют от 1 до 5 раз в неделю в зависимости от времени удвоения объема опухоли до тех пор, пока опухоль не достигает приблизительно 750 мг, или до тех пор, пока животное не погибает (если это происходит до того, как опухоль достигнет 750 мг). Животным проводят вскрытие сразу после эвтаназии или гибели.

Противоопухолевую активность определяют в соответствии с различными зарегистрированными параметрами.

Результаты, получаемые с комбинациями йи388В19 и бортезомибом, применяемыми в их оптимальных дозах, приведены в настоящем описании в качестве примеров.

Таким образом, настоящее изобретение также относится к фармацевтическим композициям, содержащим комбинации по изобретению.

Компоненты, из которых состоит комбинация, можно вводить одновременно, с небольшим интервалом, раздельно или длительно в течение определенного периода времени так, чтобы получать максимальную эффективность комбинации, где для каждого введения можно изменять его продолжительность от быстрого введения до непрерывной перфузии.

Интервал по меньшей мере между одним введением антитела, специфически распознающего ί'.Ό38, и по меньшей мере одним введением бортезомиба составляет приблизительно 1 месяц или менее, или приблизительно 2 недели или менее, или приблизительно 1 сутки или менее.

Таким образом, в целях настоящего изобретения комбинации не ограничены только такими, которые получают физической ассоциацией компонентов, а также такими, которые позволяют раздельное введение, которое может быть одновременным или длительным в течение определенного периода времени.

Композиции по изобретению предпочтительно представляют собой композиции, которые можно вводить парентерально. Однако эти композиции можно вводить перорально, подкожно или интраперитонеально в случае локальных региональных терапий.

Композиции для парентерального введения, как правило, представляют собой фармацевтически приемлемые стерильные растворы или суспензии, которые необязательно можно получать, как необхо- 4 026406 димо в момент использования. Для получения неводных растворов или суспензий можно использовать природные растительные масла, такие как оливковое масло, сезамовое масло или жидкий вазелин, или инъецируемые органические сложные эфиры, такие как этилолеат. Стерильные водные растворы могут состоять из раствора продукта в воде. Водные растворы являются подходящими для внутривенного введения, получаемый рН является соответствующим образом подведенным, и раствор получают изотоническим, например, с достаточным количеством хлорида натрия или глюкозы. Стерилизацию можно проводить нагреванием или любым другим способом, который не оказывает отрицательного действия на композицию. Комбинации также могут находиться в форме липосом или в форме ассоциации с носителями, такими как циклодекстрины или полиэтиленгликоли.

Композиции для перорального, подкожного или интраперитонеального введения предпочтительно могут представлять собой водные суспензии или растворы.

В комбинациях по изобретению применение компонентов которых может быть одновременным, раздельным или длительным в течение определенного периода времени, особенно предпочтительно, чтобы количество гуманизированного антитела к СО38 составляло от 10 до 90 мас.% комбинации, где возможно, что это содержание варьирует в зависимости от природы ассоциированного вещества, желаемой эффективности и от природы подлежащего лечению рака.

Комбинации по изобретению являются особенно пригодными при лечении некоторых типов рака, включая (но не ограничиваясь ими) следующие: карциному и аденокарциному, включая карциному мочевого пузыря, молочной железы, толстой кишки, головы и шеи, предстательной железы, почки, печени, легкого, яичника, поджелудочной железы, желудка, шейки матки, щитовидной железы и кожи, и включая плоскоклеточную карциному; гемопоэтические опухоли лимфоидного происхождения, включая множественные миеломы, лейкоз, острый и хронический лимфоцитарный (или лимфоидный) лейкоз, острый и хронический лимфобластный лейкоз, В-клеточную лимфому, Т-клеточную лимфому, неходжкинскую лимфому (например, Беркитта); гемопоэтические опухоли миелоидного происхождения, включая острые и хронические миелогенные (миелоидные или миелоцитарные) лейкозы и промиелоцитарный лейкоз, опухоли мезенхимального происхождения, включая фибросаркому, остеосаркому и рабдомиосаркому, опухоли центральной и периферической нервной системы, включая астроцитому, нейробластому, глиому и шванномы, и другие опухоли, включая меланому, тератокарциному, пигментную ксеродерму, кератоакантому и семиному и другие типы рака, которые еще определяют, в которых экспрессируется СО38. Они в основном являются пригодными для лечения лейкоза, лимфомы и типов рака, устойчивых к широко используемым противораковым средствам, так как антитела к СО38 по изобретению обладают уникальным механизмом действия.

В одном из вариантов осуществления противоопухолевая эффективность комбинации составляет приблизительно 11-42% Т/С. Т/С(%) представляет собой отношение средний объем опухоли получавших лечение/средний объем опухоли контроля х 100.

В другом варианте осуществления противоопухолевая эффективность комбинации составляет приблизительно 0-10% Т/С.

Таким образом, один из аспектов изобретения представляет собой указанные выше комбинации для применения при лечении рака. В другом аспекте изобретение также относится к применению указанных выше комбинаций для получения лекарственного средства для лечения рака.

Другой вариант осуществления изобретения представляет собой промышленное изделие, содержащее:

a) упаковочный материал;

b) комбинацию специфически распознающего СО38 антитела и, по меньшей мере, бортезомиба, где указанное антитело способно уничтожать СО38+ клетки путем апоптоза, антителозависимой клеточной цитотоксичности (ЛОСС) и комплементзависимой цитотоксичности (СЭС); и

c) этикетку или вкладыш в упаковку, содержащийся в указанном упаковочном материале, указывающий, что указанная их комбинация является эффективной для лечения рака.

Пример.

В этом примере продемонстрирована эффективность ίη νίνο комбинации антитела к СО38/бортезомиба по изобретению в отношении ингибирования роста опухоли.

Введение тестируемого препарата.

Лечение йи38§В19 и бортезомибом начинали по истечении 34 суток после инокуляции клеток и дозы рассчитывали на основании масс тела отдельных животных, определяемых из последнего измерения, проводимого до дозирования. Введение РВ§ и антитела йи38§В19 проводили путем интраперитонеальной (и/п) инъекции и бортезомиб, посредством внутривенной (в/в) инъекции в хвостовую вену с использованием 1,0 мл шприца, оснащенного иглой 27 калибра, 1/2 дюйма.

Конкретный план исследования.

У самок мышей СВ.17 §СГО инициировали модель подкожного ксенотрансплантата множественной миеломы ΝΟΙ-Η929 путем подкожной инъекции 1 х 10⁷ клеток на мышь, суспендированных в 0,1 мл среды для культивирования, не содержащей сыворотки.

- 5 026406

По истечении 33 суток после инокуляции опухолевых клеток шестьдесят четыре мыши в случайном порядке распределяли в 8 групп (п=8) по объему опухоли. Объемы опухолей находились в диапазоне от 86,7 до 355,2 мм³ ((189,0±74,3), среднее значение+δΌ). Массы тела мышей находились в диапазоне от 17,2 до 22,4 г ((19,4±1,1), среднее значение±8О). Мышей в каждой группе идентифицировали по отверстию в ухе.

Получавшие лечение группы включали контроль РВ§ (200 мкл/мышь/обработка), антитело йи38§В19 (5,0 мг/кг/обработка), бортезомиб (1,0, 0,6 и 0,4 мг/кг/обработка) и группы трех комбинаций с 1ш388В19 (5,0 мг/кг/обработка) и бортезомибом (1,0, 0,6 и 0,4 мг/кг/обработка). РВ§, йи38§В19 и бортезомиб вводили дважды в неделю в течение одной недели (34 и 37 суток совокупно для 2 видов лечения). Лечение начинали на 34 сутки после инокуляции опухолевых клеток.

Объемы опухолей измеряли от одного до двух раз в сутки еженедельно в трех направлениях с использованием циркуля. Объем опухоли выражали в мм³ (или мг) с использованием формулы

У=длинах ширинах высотах 1/2.

Массы тела измеряли дважды в неделю в качестве приблизительного показателя токсичности тестируемого средства. Объем опухоли и массу тела определяли и регистрировали посредством программного обеспечения ЬаЪса!.

Результаты.

Противоопухолевую активность антитела 1ш388В19 и бортезомиба отдельно и в комбинации оценивали у самок мышей §СГО, несущих подкожные ксенотрансплантаты опухоли ΝΟΙ-Η929, модели множественной миеломы человека.

Использовали следующие конечные точки.

Токсичность признавали при дозировках лекарственного средства, включающих >20% потери массы тела или >10% гибели.

Противоопухолевую эффективность определяли, рассчитывая Т/С(%)=средний объем опухоли получавших лечение/средний объем опухоли контролях 100, где Т/С<42% является минимальным уровнем противоопухолевой активности; Т/С<10% расценивают как высокий уровень противоопухолевой активности;

1од₁о гибели клеток=(Т-С значение в сутках)/(3,32хТб в сутках), где Т, С и Тб являются такими, как определено выше.

Противоопухолевую активность не признавали для 1о§₁₀ гибели клеток <0,7.

Выжившие с отсутствием опухоли (ТР§): соответствует полной регрессии ниже предела пальпации (63 мг) в течение всей продолжительности исследования (>100 суток после последнего лечения). Терапевтический синергизм: комбинация обладает терапевтическим синергизмом, если она является более активной, чем наилучшее отдельное средство исследования.

Антитело Ни38§В19 отдельно в дозе 5,0 мг/кг/инъекция обладало несущественной противоопухолевой активностью с % Т/С 41% и 1о§₁₀ гибели клеток 0,5 (см. таблицу).

Аналогично, бортезомиб отдельно являлся неактивным в дозах 0,4 и 0,6 мг/кг/инъекции с Т/С 45 и 75% и 1од₁₀ гибели клеток 0,1 и 0,3 соответственно. Не наблюдали ТР§ при дозе 0,6 мг/кг/инъекция, тогда как отдельных ТР§ получали с дозой 0,4 мг/кг/инъекция. Только наиболее высокая тестируемая доза бортезомиба (1,0 мг/кг/инъекция) являлась в некоторой степени активной с % Т/С 15% и получением 2 ТР§, однако 1о§₁₀ гибели клеток составлял только 0,6.

С другой стороны, комбинация антитела 1ш388В19 (5,0 мг/кг/инъекция) и бортезомиба является активной даже при более низких дозах. Фактически, когда йи38§В19 вводят в дозе 0,4 и 0,6 мг/кг/инъекция, % Т/С составляет 8,7 и 11% соответственно. В обоих случаях 1о§₁₀ гибели клеток составлял приблизительно 1 (0,9 и 1,5 соответственно) и 3 ТР§ из 8 мышей, получаемых с комбинациями.

Таким образом, для комбинации антитела 1ш388В19 (5 мг/кг/инъекция) и бортезомиба (0,4, 0,6 и 1,0 мг/кг/инъекция) показана более высокая активность по сравнению с отдельным наилучшим средством исследования (бортезомибом).

Авторы делают вывод, что для комбинации антитела 1ш388В19 и бортезомиба показан терапевтический синергизм.

- 6 026406

Комбинация Ни388В19 и бортезомиба против множественной миеломы ИС1-Н929, имплантированной мышам 8СГО

Средство, путь введения	Дозирование в мг/кг/инъекция (общая доза)	План в сутках	Средняя потеря массы тела в % на мышь при максимальном снижении (сутки максимального снижения)	Время, за которое средняя опухоль достигает 750 мгв сутках	% т/с	Т-Св сутках	1о§ гибели клеток	ТР8 на сутки 176	Комментарии
РВ5			*	62
Ни385В19, и/п	5(10)	34, 37	#	92	41	30	0,5	2/8	Несущественно активный
Бортезомиб, в/в	1,0 (2,0)	34,37	7,0 (С36)	99	15	37	0,6	2/8	Активный
0,6(1,2)	34,37	0,6 (С40)	80	45	18	0,3	0/8	Неактивный
0,4 (0,8)	34,37	0,8 (С36)	69	74	7	0,1	1/8	Неактивный
Ни385В19, и/п н бортезомиб, в/в	5 (10) и 1,0 (2,0)	34,37	7,5 (С36)	142	0	80	1,2	6/8	Высокоактивный
5 (10) и 0,6 (1,2)	34, 37	2,0 (С40)	156	11	94	1,5	3/8	Активный
5 (10) и 0,4 (0,8)	34,37	4,7 (С40)	122	8,7	60	0,9	3/8	Высокоактивный

Опухолевые клетки ΝΟΙ-Η929, имплантируемые подкожно 1,0х10⁷ клеток/мышь. Время удвоения объема опухоли = 19,5 суток. Средний размер опухоли в начале терапии = 153-201 мг, Т-С = задержка роста опухоли, ΤΡδ = выжившие с отсутствием опухоли. Составы: Ри383В19 = фосфатно-солевой буфер без Са²+ и Мд²+, рН 7,4, бортезомиб = 5% глюкоза в воде.

Claims

ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ

1. Фармацевтическая комбинация для лечения рака, экспрессирующего СИ38, содержащая специфически распознающее СИ38 антитело и бортезомиб, где указанное антитело содержит по меньшей мере одну тяжелую цепь и по меньшей мере одну легкую цепь, где указанная тяжелая цепь содержит три последовательные определяющие комплементарность области, имеющие аминокислотные последовательности 8Еф ГО N0: 13, 14 (или 81) и 15, и где указанная легкая цепь содержит три последовательные определяющие комплементарность области, имеющие аминокислотные последовательности, 8Еф ГО N0: 16, 17 и 18.
2. Комбинация по п.1, в которой указанное антитело представляет собой химерное или гуманизированное антитело.
3. Комбинация по любому из пп.1, 2, в которой тяжелая цепь антитела содержит аминокислотную последовательность 8Еф ГО N0: 66 и легкая цепь антитела содержит аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из 8Еф ГО N0: 62 или 64.
4. Фармацевтическая комбинация для лечения рака, экспрессирующего СИ38, содержащая специфически распознающее СИ38 антитело и бортезомиб, где указанное антитело состоит из легкой цепи, содержащей аминокислотную последовательность 8Еф ГО N0: 62, и тяжелой цепи, содержащей аминокислотную последовательность 8Еф ГО N0: 66.
5. Способ лечения рака, экспрессирующего СИ38, включающий введение индивидууму, нуждающемуся в этом, фармацевтической комбинации по любому из пп.1-4.
6. Способ по п.5, в котором противоопухолевая эффективность комбинации составляет примерно от 11 до примерно 42% Т/С, где Т/С(%) представляет собой отношение средний объем опухоли получавших лечение/средний объем опухоли контроля х 100.
7. Способ по п.5, в котором противоопухолевая эффективность комбинации составляет примерно от 0 до примерно 10% Т/С, где Т/С(%) представляет собой отношение средний объем опухоли получавших лечение/средний объем опухоли контроля х 100.
8. Способ по любому из пп.5-7, в котором специфически распознающее СИ38 антитело и бортезомиб вводят раздельно.
9. Способ по любому из пп.5-7, в котором специфически распознающее СИ38 антитело и бортезомиб вводят одновременно.
10. Набор для лечения рака, экспрессирующего СИ38, содержащий:

a) упаковочный материал;

b) комбинацию специфически распознающего СИ38 антитела и бортезомиба, где указанное антитело содержит по меньшей мере одну тяжелую цепь и по меньшей мере одну легкую цепь, где указанная тяжелая цепь содержит три последовательные определяющие комплементарность области, имеющие аминокислотные последовательности, 8Еф ГО N0: 13, 14 (или 81) и 15, и где указанная легкая цепь содержит три последовательные определяющие комплементарность области, имеющие аминокислотные последовательности, 8Еф ГО N0: 16, 17 и 18; и

c) этикетку или вкладыш, указывающий, что указанная их комбинация является эффективной для лечения рака.