EP0214209A1 - Derives aminoalcools peptidiques inhibiteurs de la renine et des proteases acides, leur procede de preparation, et leur application en therapeutique - Google Patents

Derives aminoalcools peptidiques inhibiteurs de la renine et des proteases acides, leur procede de preparation, et leur application en therapeutique

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EP0214209A1
EP0214209A1 EP86901417A EP86901417A EP0214209A1 EP 0214209 A1 EP0214209 A1 EP 0214209A1 EP 86901417 A EP86901417 A EP 86901417A EP 86901417 A EP86901417 A EP 86901417A EP 0214209 A1 EP0214209 A1 EP 0214209A1
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EP
European Patent Office
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group
substituted
lower alkyl
amino
phenyl
Prior art date
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Withdrawn
Application number
EP86901417A
Other languages
German (de)
English (en)
Inventor
Jean Le Hameau de la Rauze - Villa 34 WAGNON
Rémy Guegan
Colette Lacour
Dino Nisato
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Sanofi SA
Institut National de la Sante et de la Recherche Medicale INSERM
Original Assignee
Sanofi SA
Institut National de la Sante et de la Recherche Medicale INSERM
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Publication date
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Priority claimed from FR8511728A external-priority patent/FR2585708B1/fr
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Withdrawn legal-status Critical Current

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    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K5/00—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K5/02—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing at least one abnormal peptide link
    • C07K5/0227—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing at least one abnormal peptide link containing the (partial) peptide sequence -Phe-His-NH-(X)2-C(=0)-, e.g. Renin-inhibitors with n = 2 - 6; for n > 6 see C07K5/06 - C07K5/10
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K7/00—Peptides having 5 to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K7/04—Linear peptides containing only normal peptide links
    • C07K7/06—Linear peptides containing only normal peptide links having 5 to 11 amino acids
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K5/00—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K5/02—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing at least one abnormal peptide link
    • C07K5/0205—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing at least one abnormal peptide link containing the structure -NH-(X)3-C(=0)-, e.g. statine or derivatives thereof

Definitions

  • Amino derivative peptide inhibitors of renin and acid proteasos the method of preparation, and their application in therapy.
  • the present invention relates to new peptide-inhibitor derivatives of renin and more generally acid proteases. It also relates to a process for obtaining them and applying them in therapy.
  • statin an unusual amino acid, (3S, 4S) amino-4-hydroxy-3-methyl-6 heptanoic acid.
  • Pepstatin has been shown to be an inhibitor of acidic proteases and acts in particular on pepsin, cathepsin D and renin.
  • renin an enzyme of renal origin, is involved in the angiotensinogen sequence, angiotensin I, angiotensin II at the level of the transformation of angiotensinogen into angiotensin.
  • Angiotensin II being a powerful vasoconstrictor agent, intervenes in the regulation of blood pressure. Consideration has been given to using pepstatin to control high blood pressure in humans. However, since pepstatin acts on all of the acid proteases and having a low solubility in an aqueous medium and a low affinity for renin, its use in therapy has proved difficult. Pepstatin derivatives have been described in the scientific literature. For example, attempts have been made to dissolve pepstatin by lengthening the peptide chain (J. Cardiovasc. Pharmacol., 1980, 2, 687-698).
  • the present invention relates to peptides having a high level of activity as inhibitors of renin and other acidic proteases.
  • Sta Statin: 4-amino-3-hydroxy-6-methyl-heptanoic acid
  • AHPPA 3-aminoM hydroxy-5-phenyl pentanoic acid
  • ACHPA 4-amino-5-cyclohexyl-hydroxy 3-pentanoic acid
  • Sta, AHPPA and ACHPA are, unless otherwise indicated, in 3S, 4S configuration.
  • DIPEA Diisopropylethylamine
  • NEM N-ethyl morpholine
  • NMM N-methyl morpholine
  • R1 represents an acyl group selected from alkylcarbonyl, alkoxycarbonyl, arylcarbonyl, arylalkylcarbonyl, arylalkoxycarbonyl, heterocyclylcarbonyl, heterocyclylalkylcarbonyl, in which the alkyl group is optionally substituted by hydroxy, hcierocyolylcarbonylalkylcarbonyle, hcierocyclylalcénylcarbonyle, cycloalkylcarbonyl group or a (lower alkyl) sulfonyl not substituted or substituted on the alkyl by a free amino group or carrying a protective group or by a phenyl; or a phenylsulfonyl group which is unsubstituted or substituted on the phenyl ring with lower alkyl;
  • - R2 represents a lower alkyl group unsubstituted or substituted by a phenyl, naphthyl, cyclohexyl, or pyridyl
  • - R3 represents hydrogen, lower alkenyl, phenyl, naphthyl, cycloalkyl containing 3 to 6 carbon atoms, a 5- or 6-membered monocyclic heterocyclic group unsubstituted or substituted with lower alkyl or trifluoromethyl, or alternatively a lower alkyl unsubstituted or substituted by a free amino group or carrying a protective group, by a di (lower alkyl) amino group, by a free carboxyl or esterified with lower alkyl or benzyl, by a free carbamoyl or substituted with one or two lower alkyls or with a phenyl, by a hydroxy, lower alkoxy or benzyloxy group, by a pyridylmethyloxy
  • - Q represents isopropyl, phenyl or cyclohexyl forming respectively with the radical the residue of the amino acid Sta, or AHPPA or ACHPA;
  • - X is either a direct bond, or the residue of an amino acid such as Ala, Nva, Val, Leu, Nie, Ile, Phg, Abu, Cpg; - R4 represents hydrogen or a lower alkyl unsubstituted or substituted by an indolyl, pyridyl, imidazolyl or phenyl radical;
  • R5 represents an alkyl group of 3 to 20 carbon atoms unsubstituted or substituted by a phenyl, cyclohexyl, hydroxyphenyl group, the said alkyl group containing at least one hydroxyl group and optionally an amino group, in said alkyl group all the atoms of carbon being bound to at least one hydrogen atom;
  • R4 and R5 taken together represent a 1,4 butylene or 1,5 pentylene group substituted by one or more hydroxyl or lower hydroxyalkyl groups,
  • R4 represents hydrogen and X is other than a direct bond or one of the residues Cpg, Phg
  • either R1 is other than an alkylcarbonyl, alkoxycarbonyl, arylcarbonyl, aryalkylcarbonyl, arylalkoxycarbonyl or cycloalkylcarbonyl group
  • either R3 is other than a lower alkyl unsubstituted or substituted by a free amino group or carrying a protective group, by a carboxyl group, by a hydroxy group, by a lower alkylthio group, by a phenyl, by a naphthyl, by an imidazolyl -4; as well as their optional pharmaceutically acceptable salts with mineral or organic acids or alkali or alkaline earth metals.
  • the preferred products according to the present invention have the formula (I) above in which R5 contains from 1 to 3 hydroxyl groups. Particularly the products according to the present invention are of formula (I) above in which R5 represents:
  • - Alk represents methylene, ethylene, a lower alkylidene group unsubstituted or substituted in the omega position by a free amino group or carrying a protective group, a benzylidene or a 2-cyclohexylethylidene group or a 2-phenylethylidene group unsubstituted or substituted on the nucleus phenyl with a hydroxyl;
  • Alk can not be other than methylene or ethylene when R4 is other than hydrogen
  • - p represents an integer between zero and 5 * - R6 represents hydrogen or lower alkyl
  • p is as defined above;
  • R7 represents hydrogen, a lower alkyl unsubstituted or substituted by a free amino group or carrying a protective group
  • alkyl designates the radicals of aliphatic hydrocarbons, saturated or unsaturated containing from 1 to 10 carbon atoms, the preferred alkyl groups, are lower alkyls as defined below.
  • lower alkyl refers to radicals of saturated or unsaturated aliphatic hydrocarbons containing up to 6 carbon atoms.
  • lower alkoxy and lower alkylthio represent the hydroxyl and thiol groups substituted by a lower alkyl group as defined above.
  • the term "5- or 6-membered monocyclic heterocycle” includes pyrrolidine, imidazole, thiazole, thiophene, furan, pyrrole, triazole, oxazole, isoxazole, pyridine, thiadiazoles.
  • protecting group is meant a protecting group normally used in peptide chemistry, for example Boc, Z or iVa.
  • acyl group used for the definition of R1 includes residues of aliphatic, alicyclic, aromatic or heterocyclic carboxylic acids.
  • Preferred acyl groups are the residue of esterified carbonic acid, in particular the Boc and 2 groups, the residue of alkanoic acids containing from 2 to 6 carbon atoms, in particular the iVa group, the residue of cyclohexylcarboxylic acid, residue of phenylaliphatic acids, in particular the phenylacetyl, 3-phenylpropionyl, dibenzylacetyl groups, the residue of arylcarboxylic acids, such as naphthoic acid, biphenyl carboxylic acid and unsubstituted or substituted benzoic acid on the phenyl ring, in particular the group benzoyl, the residue of a carboxylic acid whose carboxyl is linked to a 5 or 6-membered monocyclic heterocycle, in particular the picolinoyl, nicotinoy
  • R1, R2, R3, R4, R5 and Q are as defined above and R3 is such that the residue NH-CH (R3) -CO- represents the residue (tauMe) His.
  • the invention refers to a process for the preparation of the peptide amino alcohol derivatives of formula I above, characterized in that an amino alcohol of formula is treated:
  • W is a protective group or hydrogen and R4 and R5 are as defined above and whose hydroxyl groups are optionally protected, with the lower alkyl ester of the amino acid of formula:
  • the amino acid to be introduced into the sequence has a function capable of reacting in its side chain, it should be blocked by a suitable protective group which is subsequently eliminated.
  • the protection of the N-terminal amino acid by the group R1 is carried out according to known methods, ie before the coupling of the residue
  • this unnatural amino acid is prepared according to known methods. It is then coupled with the following amino acid according to the usual method.
  • the amino alcohol portion can be prepared by various methods.
  • One method (method 1) consists in coupling a suitably chosen amino alcohol with the desired amino acid.
  • the amino alcohol chosen is not commercially available, it can be prepared by reduction of the corresponding amino acid ester.
  • it is also possible to prepare the aminodiol derivatives 1, 2 from protected amino acids N (method 2) or to operate by condensation of an amine on an epoxy propanol or on an optically active glycerol derivative to obtain the dihydroxylated secondary amines, when R 4 is not hydrogen (method 3).
  • deprotection can be carried out subsequently.
  • aminodiol derivatives 1, 2 obtained from the amino acids are synthesized according to the method described in J. Chem. Soc. Chem. Comm., 1979, 875: the amino acid protected, for example by Boc or Z, is transformed into diazoketone, then treated with trifluoroacetic acid and reduced with sodium borohydride.
  • W represents a protective group and R represents an amino acid residue.
  • Diols can be obtained by this method, for example from the following protected amino acids: leucine, phenylalanine, lysine.
  • the chirality of alpha carbon is preserved by this process; however the reduction with sodium borohydride provides the 2 secondary epimer alcohols which can either be separated, for example by chromatography on silica gel, or used as a mixture for the subsequent reactions and separated in a subsequent stage of the synthesis.
  • Method 3 The diols 1, 2 derived from the N-substituted linear aminopropanediols are obtained by condensation of an amine on the racemic 1,2-propanol epoxy. The precursor aminodiol derivatives of compound (I) are then in racemic form.
  • R4 has the meaning given above.
  • the coupling with a protected amino acid can be carried out on the acetonide before or after the hydrolysis; after deprotection, the aminodiol derivative of the desired configuration is obtained:
  • the linear aminodiol derivatives 1, 3 are obtained by reduction of beta hydroxy esters with a boron hydride, such as, for example, excess sodium tetraborohydride, in a hydroxylic solvent at a temperature between 0 and 60 ° C. Dipeptides or polypeptides which contain a terminal statin in the form of an ester can also be reduced in this way.
  • a boron hydride such as, for example, excess sodium tetraborohydride
  • Dipeptides or polypeptides which contain a terminal statin in the form of an ester can also be reduced in this way.
  • N-substituted linear aminodiol derivatives 1, 3 it is possible to first prepare the aminodiol derivatives 1, 2 of determined configuration using methods known per se, for example from an optically active derivative of glycerol such as acetonide of (R) tosyl-3 propanediol-1,2.
  • the compounds of the present invention have, like pepstatin, a marked inhibitory action on acid proteases; in particular, they have a very important inhibitory action on human plasma renin activity and, in general, clearly superior to that of the natural product: pepstatin.
  • the products according to the invention have been studied with regard to their therapeutic properties and in particular their enzymatic inhibitory action. More particularly, the compounds were evaluated "in vitro" on the inhibition of Human Plasma Renin activity (A.R.P.). I - EVALUATION METHOD.
  • the evaluation method is inspired by GUYENE (J. clin. Endocrinol. Metab., 1976, 43, 1301).
  • the inhibition of ARP is evaluated from a pool of human plasmas, rich in renin (15 to 20 mg of angiotensin I released per milliliter and per hour), incubated for 60 minutes at 37 ° C., in a phosphate buffer at pH 7.4, in the presence of increasing concentrations of the product to be studied.
  • Human plasma contains the substrate: angiotensinogen and the enzyme: renin.
  • the angiotensin I released during the reaction is measured by radioimmunoassay: Plasma Renin Activity Kit from Travenol (n ° CA 533,553).
  • a converting enzyme inhibitor, phenylmethylsulfonyl fluoride (PMSF) is added to the incubation medium.
  • the total incubation volume is 555 microliters distributed as follows:
  • a solution of acetic acid in methanol (19/1 by volume) and a solution of sodium hydroxide (IN) in methanol (2/1 by volume) are prepared.
  • a 0.001 M stock solution is prepared, of the product to be studied.
  • Subsequent dilutions are then made in phosphate buffer. The amount of solvent present in a solution does not interfere with the results.
  • results are expressed by the dose of compound evaluated in moles which inhibits by 50% (IC50) the Human Plasmic Renin activity observed in the absence of inhibitor.
  • IC50 Human Plasmic Renin activity observed in the absence of inhibitor.
  • results obtained with various products of the invention are shown in the following table 1 where the IC50s of each molecule appear as regards their inhibition of the Human Plasmatic Renin Activity at pH 7.4. 5-10 doses were required to determine these IC50s.
  • Pepstatin, as a reference substance, is always tested in parallel in each experiment. The results are expressed by their logarithmic value (-Log IC50).
  • the toxicity of the products according to the invention is compatible with their use in therapy.
  • the subject of the present invention is, according to another of its aspects, the pharmaceutical compositions or antihypertensive drugs containing the peptides of formula (I) or their pharmaceutically acceptable salts as active principles.
  • the amino peptide alcohols of the present invention can be used in therapy by injection. intravenous, intramuscular or subcutaneous. They are used in a solvent such as physiological saline (isotonic saline solution) or in a buffer such as phosphate buffer; they can also be suspended in a diluting agent, aqueous or non-aqueous, pharmaceutically acceptable. Each dosage unit can contain from 1 to 1000 mg of active ingredient.
  • the indicated melting points (Fc) are measured at the capillary tube.
  • the rotation indices (alpha D) are measured at 25 ° C.
  • the product is dissolved in CH2Cl2 or mixed with KBr to form a pellet.
  • nuclear magnetic resonance (NMR) spectra are recorded at 250 MHz in solution in DMSO, the internal standard being hexamethyldisiloxane.
  • . H ar means aromatic H
  • H im means H imidazolic; .
  • H pyr means H of pyridine; .
  • H (reduced Sta) means H of 4-amino-6 methyl-heptanediol 1,3 of 3R, 4S or 3S, 4S configuration; . approx. means approximately.
  • the .aminodiol derivative is prepared according to method 3.
  • Boc-Ala-OH (586 mg) in CH2Cl2 containing triethylamine (320 mg) and cooled by brine (internal temperature approximately -10 ° C.), isobutyl chloroformate (421 mg) is added and stir 45 minutes. Then added 760 mg of the preceding product, continues to stir for 3 hours at 0 ° C and allowed to return to RT 48 hours. It is taken up in water, decanted, washed with a NaHCO3 solution, dried and concentrated. An oil is obtained which is chromatographed on silica. The AcOEt-MeOH mixture at 90/10 in eluted volume, the expected product in the form of an oil.
  • Boc-Nle-Sta-OCH3 peptide (800 mg) is treated at 0 ° C. for 10 minutes in TFA (8 ml) and then the excess solvent is evaporated at RT under the vacuum of B ⁇ chi rotavapor.
  • a solution prepared in CH2Cl2 (15 ml), Boc-Phe-ONp (924 mg), HOBt (384 mg) and NMM (400 mg) then brings the pH of the reaction medium to 7 by addition of additional NMM. After 24 hours, the mixture is evaporated to dryness, water is added, AcOEt extract, the organic phase is washed with a solution of KHSO4, several times with a solution of Na2CO3, with saline water, then dried (MgSO4). After evaporation of the solvent and filtration on silica gel (eluent pentane-ethyl acetate 4/6 by volume), the expected compound is isolated in the form of a white powder. Yield 69%.
  • This compound is prepared using method 2 from 2,3-epoxy propanol.
  • This compound is prepared according to step 3 of Example 2, by coupling with Boc-Alanine of the product previously obtained. After drying (MgSO4) and evaporation, an oil is isolated which is chromatographed on silica gel. The expected compound is eluted with the CH2Cl2 / AcOEt mixture (7/3 by volume) in the form of an oil.
  • This compound is prepared by operating as in Example 1 by coupling with the desired polypeptide suitably protected.
  • NMR compares to that of SR 43 094 but many peaks are split or not resolved.
  • the preceding compound (220 mg) is dissolved for 15 minutes by TFA at 0 ° C. After cold evaporation of the excess acid on a Buchi rotary evaporator, the residue is dissolved in CH2Cl2 and neutralized under cold conditions with DIPEA. A solution prepared from Boc-Phe-Nle-Sta-OH (311 mg), Bop (257 mg) containing diisopropylamine in CH2Cl2 is then added and the mixture is stirred for 18 hours at RT.
  • This product is prepared from the ester obtained in the previous step, operating according to method 4.
  • the 1,2-aminodiol derivative is prepared according to method 3.
  • step 3 Condensation of the previous acid with lee prepared in Example 2, step 3, provides the expected peptide which is purified by chromatography on silica gel, eluting with the AcOEt-MeOH mixture at 4/1 by volume.
  • This compound is prepared by reducing Boc-Val-Sta-OCH3.
  • NaBH4 160 mg
  • 100% ethanol 8 ml
  • the solid Boc-Val-Sta-OCH3 dipeptide 370 mg is added and stirred for 270 minutes at RT, then brought to 45 ° C. for 30 minutes
  • the reaction is followed by TLC on silica plates, water is then added (1 vol) and then acidified with care by a solution of KHSO4, the ethanol is evaporated under vacuum at 40 °.
  • the preparation of the aminodiol derivative is then carried out as follows:
  • This product is prepared according to the usual coupling methods.
  • the SR 43195 prepared in Example 7 (53 mg) is solubilized in MeOH (20 ml) in the presence of NaBH4 (25 mg).
  • NaBH4 25 mg
  • KHSO4 is added up to pH 3
  • NaHCO3 up to pH 8.
  • MeOH is evaporated, then the medium is taken up in water and then in AcOEt.
  • This compound is prepared by following method 3 as described in Example 2, steps 1 and 2.
  • the preceding compound (1.3 g) is treated at 0 ° C with TFA (12 ml) for 15 minutes.
  • the salt obtained after evaporation plus CH2Cl2 is neutralized by a slight excess of NMM, and a CH2Cl2 solution of Boc-Ala (ONSu) (1.5 g) and HOBt (800 mg) is added.
  • the mixture is stirred at RT for 48 hours while maintaining the pH around 7 by addition of additional NMM.
  • the medium is then washed with a solution of NaHCO3 then with a solution of KHSO4, water, then dried (MgSO4) and evaporated.
  • the residue is chromatographed on silica gel (eluent AcOEt-MeOH, 8/2 by volume).
  • This aminodiol derivative can also be prepared directly by reduction of Boc-Ala-Sta-OCH3.
  • NaBH4 160 mg
  • 100% ethanol 8 ml
  • the solid Boc-Ala-Sta-OCH3 dipeptide 370 mg
  • the reaction is monitored by TLC on silica plates.
  • water (1 vol) then carefully acidify with a solution of KHSO4, evaporate the ethanol under vacuum at 40 ° C and extract with 4 volumes of AcOEt, wash with water, saline and dry (MgSO4).
  • MgSO4 eluent AcOEt-MeOH at 9/1 by volume
  • This compound is prepared from
  • the compound prepared in step 4 is hydrolyzed and then coupled after acidification of the salt of the carboxylic acid with the diol prepared in step 2, to obtain the expected product.
  • This compound is prepared following the usual methods.

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Abstract

Dérivés aminoalcools peptidiques qui sont inhibiteurs de la rénine et des protéases acides. Ces dérivés sont utilisables en thérapeutique.

Description

Dérivés aminoalcools peptidiques inhibiteurs de la rénine et des proteasos acides, laur procédé dg préparation, et leur application en thérapeutique.
La présente invention concerne des nouveaux dérivés peptidiques-inhibiteurs de la rénine et plus généralement des proteases acides. Elle concerne également un procédé pour leur obtention et leur application en thérapeutique.
En 1970, UMEZAWA a isolé, à partir d'une culture de streptomyces, un pentapeptide désigné sous le nom de pepstatine dont la structure a été établie ultérieurement et répond à la formule :
Isovaléryl - L-valyl - L-valyl - Statyl - L-alanyl - Statine
dans laquelle on désigne sous le nom de "statine" un acide aminé non usuel, l'acide (3S, 4S) amino-4 hydroxy-3 méthyl-6 heptanoîque.
Il a été montré que la pepstatine est un inhibiteur de proteases acides et agit en particulier sur la pepsine, la cathepsine D et la rénine. Spécialement, la rénine, enzyme d'origine rénale, intervient dans la séquence angiotensinogène, angiotensine I, angiotensine II au niveau de la transformation de l'angiotensinogène en angiotensine.
L'angiotensine II étant un puissant agent vasoconstricteur, intervient dans la régulation de la pression artérielle. On a envisagé d'utiliser la pepstatine pour lutter contre l'hypertension artérielle chez l'homme. Toutefois, la pepstatine agissant sur l'ensemble des proteases acides et présentant une faible solubilité en milieu aqueux et une faible affinité pour la rénine, son emploi en thérapeutique s'est avéré difficile. Des dérivés de la pepstatine ont été décrits dans la littérature scientifique. Par exemple, on a tenté de solubiliser la pepstatine par allongement de la chaîne peptidique (J. Cardiovasc. Pharmacol., 1980, 2, 687-698).
Selon la présente invention on a trouvé qu'il est possible d'obtenir des produits très actifs sans allonger la chaîne peptidique mais en introduisant des résidus hydrophiles sur différents sites d'un peptide analogue de la pepstatine. Ceci est d'autant plus surprenant que l'art antérieur (brevets ET 114993 et US 4470971) enseigne que la présence de substituants hydrophiles diminue l'activité inhibitrice envers la rénine.
La présente invention a pour objet des peptides présentant un niveau élevé d'activité en tant qu'inhibiteurs de la rénine et d'autres proteases acides.
Dans la présente invention et dans les revendications les abréviations suivantes seront utilisées.
Acides aminés et groupes protecteurs ou gactivateurs.
Ces abréviations sont en accord avec celles indiquées par la Commission de Nomenclature de l'IUPAC-IUB section Biochimie. Les recommandations les plus récentes sont rapportées dans Eur. J. Biochem., 1984, 138, 5-7 et 9-37.
Acidas aminés :
Abu : Acide gamma aminobutyrique
Ala : Alanine
Asn : Asparagine
Asp : Acide Aspartique
Cpg : Cyclopentylglycine
Gin : Glutamine Gly : Glycine
His : Histidine
Ile : Isoleucine
Leu : Leucine
Met : Methionine
Nie : Norleucine
Nva : Norvaline
Phe : Phénylalanine
Phg : Phenylglycine
Ser : Serine
Val : Valine
(tauMe)His : (télé-méthyl) Histidine
Ces acides aminés sont de configuration L.
Sta : Statine : acide amino-4 hydroxy-3 méthyl-6 heptanoîque AHPPA : acide aminoM hydroxy-3 phényl-5 pentanoïque ACHPA : acide amino-4 cyclohexyl-5 hydroxy-3 pentanoïque
Sta, AHPPA et ACHPA sont, sauf indication contraire, de configuration 3S, 4S.
Groupes protecteurs et activateurs :
Ac : Acétyl
Boc : t.butyloxycarbonyl
(Boc) 2 0 : Anhydride bis terbutyloxycarbonique
HONSu : N-hydroxysuccinimide
OEt : Ester éthylique
OMe : Ester méthylique ONp : Ester p nitrophénylique ONSu : Ester de N-hydroxysuccinimide iVa : Isovaléryl Z : Benzyloxycarbonyl
De plus sont utilisées ici les abréviations suivantes :
AA : Acide aminé
AcOEt : Acétate d'éthyle
AcOH : Acide acétique
Bop : Hexafluorophosphate de benzyloxy tris diméthylamino phosphonium
CCM : Chromatographie en couche mince
DCCI : Dicyclohexylcarbodiimide
DCHA : Dicyclohexylamine
DCU : Dicyclohexylurée
DIPEA : Diisopropyléthylamine
DMF : Diméthylform-amide
DMSO : Diméthylsulfoxyde
Ether : Ether éthylique
HOBt : Hydroxy-1 benzotriazole
MeOH : Méthanol
NEM : N-éthyl morpholine
NMM : N-méthyl morpholine
TA : Température ambiante
TFA : Acide trifluoracétique
Sta réduite : Amino-4 méthyl-6 heptane-1,3 diol.
"on débocule" signifie : on enlève le groupement pro- tecteur Boc.
Les carbones asymétriques pour lesquels la configuration * est déterminée sont notés C. Les composés selon l'invention répondent à la formule générale suivante :
dans laquelle :
- R1 représente un groupe acyle choisi parmi les groupes alkylcarbonyle, alcoxycarbonyle, arylcarbonyle, arylalkylcarbonyle, arylalcoxycarbonyle, hétérocyclylcarbonyle, hétérocyclylalkylcarbonyle dans lequel le groupe alkyle est éventuellement substitué par un groupe hydroxy, hétérocyolylcarbonylalkylcarbonyle, hétérocyclylalcénylcarbonyle, cycloalkylcarbonyle ou un groupe (alkyle inférieur) sulfonyle non substitué ou substitué sur l'alkyle par un groupe amino libre ou portant un groupe protecteur ou par un phényle ; ou un groupe phénylsulfonyle non substitué ou substitué sur le noyau phényle par un alkyle inférieur ;
- R2 représente un groupe alkyle inférieur non substitué ou substitué par un phényle, naphtyle, cyclohexyle, ou pyridyle ; - R3 représente l'hydrogène, un alcényle inférieur, un phényle, un naphtyle, un cycloalkyle contenant 3 à 6 atomes de carbone, un groupe heterocyclique monocyclique à 5 ou 6 chaînons non substitué ou substitué avec un alkyle inférieur ou trifluorométhyle, ou bien un alkyle inférieur non substitué ou substitué par un groupe amino libre ou portant un groupe protecteur, par un groupe di (alkyle inférieur) amino, par un carboxyle libre ou estérifié avec un alkyle inférieur ou un benzyle, par un carbamoyle libre ou substitué avec un ou deux alkyles inférieurs ou avec un phényle, par un groupe hydroxy, alcoxy inférieur ou benzyloxy, par un groupe pyridylméthyloxy, par un groupe alkylthio inférieur, (alkyl inférieur) suifinyl ou (alkyl inférieur) suifonyl, par un phényle, par un naphtyle, par un cycloalkyle contenant de 3 à 6 atomes de carbone ou par un groupe heterocyclique monocyclique à 5 ou 6 chaînons non substitué ou substitué avec un alkyle inférieur ou un trifluorométhyle ;
- Q représente l'isopropyle, le phényle ou le cyclohexyle formant respectivement avec le radical le résidu de l'aminoacide Sta, ou AHPPA ou ACHPA ;
- X est soit une liaison directe, soit le résidu d'un aminoacide tel que Ala, Nva, Val, Leu, Nie, Ile, Phg, Abu, Cpg ; - R4 représente l'hydrogène ou un alkyle inférieur non substitué ou substitué par un radical indolyle, pyridyle, imidazolyle ou phényle ;
- R5 représente un groupe alkyle de 3 à 20 atomes de carbone non substitué ou substitué par un groupe phényle, cyclohexyle, hydroxyphényle, le dit groupe alkyle contenant au moins un groupe hydroxyle et éventuellement un groupe aminé, dans ledit groupe alkyle tous les atomes de carbone étant liés à au moins un atome d'hydrogène ;
- ou R4 et R5 pris ensemble représentent un groupe 1,4 butylène ou 1,5 pentylène substitué par un ou plusieurs groupes hydroxyle ou hydroxyalkyle inférieur,
avec la limitation que lorsque R4 représente l'hydrogène et X est autre qu'une liaison directe ou l'un des résidus Cpg, Phg, soit R1 est autre qu'un groupe alkylcarbonyle, alcoxycarbonyle, arylcarbonyle, aryalkylcarbonyle, arylalcoxycarbonyle ou cycloalkylcarbonyle, soit R3 est autre qu'un alkyle inférieur non substitué ou substitué par un groupe amino libre ou portant un groupe protecteur, par un groupe carboxyle, par un groupe hydroxy, par un groupe alkylthio inférieur, par un phényle, par un naphtyle, par un imidazolyl-4 ; ainsi que leurs sels éventuels pharmaceutiquement acceptables avec des acides minéraux ou organiques ou des métaux alcalins ou alcalino-terreux.
Les produits préférentiels selon la présente invention ont la formule (I) ci-dessus dans laquelle R5 contient de 1 à 3 groupes hydroxyles. Particulièrement les produits selon la présente invention sont de formule (I) ci-dessus dans laquelle R5 représente :
a) un groupe -Alk-CHOH-(CH2)m-OH où
- Alk représente méthylène, éthylène, un groupe alkylidène inférieur non substitué ou substitué en position oméga par un groupe amino libre ou portant un groupe protecteur, un benzylidène ou un groupe 2-cyclohexyléthylidène ou un groupe 2-phényléthylidène non substitué ou substitué sur le noyau phényle par un hydroxyle ;
Alk ne pouvant pas être autre que méthylène ou éthylène lorsque R4 est autre que l'hydrogène ;
- m est un ou deux;
b) un groupe :
- p représente un nombre entier compris entre zéro et 5 * - R6 représente l'hydrogène ou un alkyle inférieur
c) un groupe :
p est tel que défini ci-dessus ;
- R7 représente l'hydrogène, un alkyle inférieur non substitué ou substitué par un groupe amino libre ou portant un groupe protecteur ;
Dans la définition (a) de R5, lorsque R4 est autre que l'hydrogène, Alk ne peut être que méthylène ou éthylène parce que les produits, dans lesquels Alk est autre que méthylène ou éthylène, ne peuvent pas être préparés selon les méthodes décrites.
Dans la définition de R1, le terme alkyle désigne les radicaux d'hydrocarbures aliphatiques, saturés ou insaturés contenant de 1 à 10 atomes de carbone, les groupes alkyles préférés, sont les alkyles inférieurs tels que définis ci-après.
Les expressions "alkyle inférieur", "alcényle inférieur" et "alkylidène inférieur", telles qu'utilisées ici, désignent les radicaux d'hydrocarbures aliphatiques saturés ou insaturés contenant jusqu'à 6 atomes de carbone.
Les expressions "alcoxy inférieur" et "alkylthio inférieur" représentent les groupes hydroxyle et thiol substitués par un groupe alkyle inférieur tel que défini ci-dessus. L'expression "hétérocycle monocyclique à 5 ou 6 chaînons" inclut la pyrrolidine, l'imidazole, le thiazole, le thiophène, le furanne, le pyrrole, le triazole, l'oxazole, l'isoxazole, la pyridine, les thiadiazoles.
Par "groupe protecteur" on entend un groupe protecteur utilisé normalement dans la chimie des peptides, par exemple Boc, Z ou iVa.
L'expression "groupe acyle" utilisée pour la définition de R1 inclut les résidus d'acides carboxyliques aliphatiques, alicycliques, aromatiques ou hétérocycliques. Des groupes acyle préférés sont le résidu de l'acide carbonique estérifié, notamment les groupes Boc et 2, le résidu d'acides alcanoïques contenant de 2 à 6 atomes de carbone, notamment le groupe iVa, le résidu de l'acide cyclohexylcarboxylique, le résidu d'acides phénylaliphatiques, notamment les groupes phénylacétyle, 3-phénylpropionyle, dibenzylacétyle, le résidu d'acides arylcarboxyliques, tels que l'acide naphtoïque, biphényl carboxylique et l'acide benzoïque non substitué ou substitué sur le noyau phényle, notamment le groupe benzoyle, le résidu d'un acide carboxylique dont le carboxyle est lié à un hétérocycle monocyclique à 5 ou 6 chaînons, notamment les groupes picolinoyle, nicotinoyle et isonicotinoyle et le résidu d'acides alcanoïques ou alcénoïques, tels que l'acide acétique, l'acide propionique, l'acide butyrique, l'acide valérique et leurs dérivés oméga-hydroxy ou oméga-oxo, substitués en position oméga par un hétérocycle monocyclique à 5 ou 6 chaînons comme exemplifiés ci-dessus. Plus particulièrement, la présente invention concerne, d'une façon préférentielle, les aminoalcools peptidiques de formule I dans laquelle R2, R3 , Q, R4 et R5 sont tels que définis ci-dessus et R1 représente l'un des groupements suivants :
NH2CH2CH2 - SO2-
BocNHCH2CH2 - SO2-
Z-NHCH2CH2 - SO2-
A - SO2 - , où A est un alkyle inférieur
C6H5 - (CH2)a - SO2 -, où a = 0 , 1 ou 2
Particulièrement préférés sont les aminoalcools peptidiques de formule (I) dans laquelle R2 , R3 , Q, R4 et R5 sont tels que définis ci-dessus et R1 représente un groupe choisi parmi
- isovaléryl,
- (pyridyl-2)-4 oxo-4 butyryl,
- (pyridyl-2)-4 hydroxy-4 butyryl,
- (pyridyl-3)-3 propionyl,
- (pyridyl-3)-4 butyryl.
- nicotinoyl ,
- benzènesulf onyl . De plus, sont particulièrement préférés les composés de formule (I) dans laquelle R1, R2 , R3 , R4 , R5 et Q sont tels que définis précédemment et R3 est tel que le résidu NH-CH(R3) -CO- représente le résidu (tauMe)His.
Les produits selon l'invention peuvent être préparés selon les méthodes habituelles de la chimie des peptides. Ainsi, selon un autre de ses aspects, l'invention se réfère à un procédé pour la préparation des dérivés aminoalcools peptidiques de formule I ci-dessus, caractérisé en ce que l'on traite un aminoalcool de formule :
dans laquelle W est un groupe protecteur ou l'hydrogène et R4 et R5 sont tels que définis ci-dessus et dont les groupes hydroxyle sont éventuellement protégés, avec l'ester d' alkyle inférieur de l'acide aminé de formule :
dans laquelle X' a la définition donnée ci-dessus pour X, mais X' est autre qu'une liaison directe et Q est tel que défini ci-dessus, puis on procède étape par étape à l'élongation de la chaîne peptidique par couplage avec les acides aminés ou les fragments suivants, convenablement protégés, les différentes opérations étant effectuées en utilisant soit un ester activé de l'aminoacide ou du fragment à coupler, soit l'aminoacide N- protégé en présence de DCCI, les groupes N- protecteurs étant clivés après chaque couplage soit par hydrogénolyse, soit par hydrolyse en milieu acide fort et, le cas échéant, on déprotège les groupes hydroxyle de l'aminoalcool ainsi obtenu par hydrolyse acide ; et l'on transforme si nécessaire le produit ainsi obtenu en ses sels pharmaceutiguement acceptables.
Lorsque l'acide aminé à introduire dans la séquence possède dans sa chaîne latérale une fonction susceptible de réagir, il convient de bloquer celle-ci par un groupe protecteur convenable que l'on élimine ultérieurement.
La protection de l'aminoacide N-terminal par le groupe R1 s'effectue selon des méthodes connues, soit avant le couplage du résidu
avec l'aminoacide suivant, soit ultérieurement.
Lorsque le composé (I) porte un substituant R3 tel que le résidu correspondant est un aminoacide non naturel, cet aminoacide non naturel est préparé selon des méthodes connues. Il est ensuite couplé avec l'aminoacide suivant selon la méthode habituelle.
La partie aminoalcool peut être préparée selon diverses méthodes. Une méthode (méthode 1) consiste à coupler un aminoalcool convenablement choisi avec l'aminoacide souhaité. Lorsque l'aminoalcool choisi n'est pas disponible commercialement, on peut le préparer par réduction de l'ester d' amino acide correspondant. On peut également préparer les dérivés aminodiols 1, 2 à partir d' aminoacides N protégés (méthode 2) ou opérer par condensation d'une aminé sur un époxy propanol ou sur un dérivé du glycérol optiquement actif pour obtenir les aminés secondaires dihydroxylées, lorsque R4 n'est pas l'hydrogène (méthode 3) . Pour préparer les dérivés aminodiols linéaires 1, 3 on opère par réduction des béta hydroxy esters correspondants (méthode 4). Lorsque l'aminodiol est présent sous forme d'acétonide, la déprotection peut être effectuée ultérieurement.
Les méthodes 2, 3 et 4 sont décrites ci-dessous :
Méthode 2:
Les dérivés aminodiols 1, 2 obtenus à partir des aminoacides sont synthétisés selon la méthode décrite dans J. Chem. Soc. Chem. Comm., 1979, 875 : l'aminoacide protégé, par exemple par Boc ou Z, est transformé en diazocétone, puis traité par l'acide trifluoroacétique et réduit par le borohydrure de sodium.
W représente un groupement protecteur et R représente un reste d'aminoacide.
On peut obtenir des diols par cette méthode, par exemple à partir des aminoacides suivants protégés : la leucine, la phénylalanine, la lysine.
La chiralité du carbone alpha est préservée par ce procédé ; cependant la réduction par le borohydrure de sodium fournit les 2 alcools secondaires epimères que l'on peut soit séparer, par exemple par chromatographie sur gel de silice, soit utiliser en mélange pour les réactions ultérieures et séparer dans une étape ultérieure de la synthèse.
Méthode 3 : Les diols 1, 2 dérivés des aminopropanediols linéaires N-substitués sont obtenus par condensation d'une aminé sur l'époxy 1,2- propanol racémique. Les dérivés aminodiols précurseurs du composé (I) sont alors sous forme racémique.
R4 a la signification indiquée ci-dessus.
Pour obtenir un dérivé aminodiol optiquement actif, on part d'un dérivé du glycérol lui-même optiquement actif en utilisant des méthodes connues en elle-mêmés. Par exemple, l'utilisation de l'acétonide du (R) tosyloxy-3 propa-nediol-1,2 (produit commercial) fournit, par aminolyse puis hydrolyse en milieu acide, le dérivé (S) amino-3 propanediol-1,2 :
Le couplage avec un aminoacide protégé (W-AA) peut être effectué sur l'acétonide avant ou après l'hydrolyse ; après déprotection, on obtient le dérivé de l'aminodiol de configuration souhaitée :
On peut également faire réagir le (R) acétonide de glycérol dont la synthèse est décrite dans J. Am. Chem. Soc, 1980, 102, 6304-6311.
Méthode 4 :
Les dérivés aminodiols 1, 3 linéaires sont obtenus par réduction des bêta hydroxy esters par un hydrure de bore, tel que, par exemple, le tétraborohydrure de sodium en excès, dans un solvant hydroxylique à une température comprise entre 0 et 60 °C. On peut également réduire de cette manière des dipeptides ou des polypeptides qui contiennent une statine terminale sous forme d'ester. Pour obtenir des dérivés aminodiols 1, 3 linéaires N-substitués, on peut préparer d'abord les dérivés aminodiols 1 , 2 de configuration déterminée en utilisant des méthodes connues en elle-mêmes, par exemple à partir d 'un dérivé optiquement actif du glycérol tel que l'acétonide du (R) tosyl-3 propanediol-1,2. Après condensation avec une aminé R4NH2 et hydrolyse de l'acétonide en milieu acide, on protège la fonction aminé, par exemple par action de (Boc) 20. On obtient ainsi un dérivé propanediol N-protégé de configuration déterminée. Le bêta hydroxyester correspondant est obtenu par plusieurs réactions successives : esterification de l'alcool, par exemple par le chlorure de mésyle, puis substitution par le cyanure de sodium et, après hydrolyse en milieu acide, nouvelle protection de l'aminé et esterification par le diazométhane puis déprotection en milieu acide, par exemple par TFA. Le couplage avec un aminoacide protégé (W-AA) ou un polypeptide protégé est ensuite effectué selon les méthodes habituelles avant de réduire l'ester en alcool, Par exemple par le borohydrure de sodium.
1) R4NH2
2) H+/H20
3) (Boc) 20
D CH3SO2Cl
2) NaCN
3) H+/H2O 4) (Boc) 20
5) CH2N2
6) TFA
+ * (R) H2NR4-CH2-CHOH-CH2-CO2CH3
1) couplage peptidique
2) NaBH4 * (R) W-AA-NR4-CH2-CHOH-CH2-CH20H
Si l'action du cyanure précède l'action de l'aminé, l'alcool secondaire final est de configuration absolue
(S) . Le produit final de formule (I) peut être transformé, selon des méthodes connues, en ses sels pharmaceutiquement acceptables avec des acides minéraux ou organiques ou des métaux alcalins, de préférence sodium ou potassium, ou alcalino-terreux, de préférence calcium.
Les composés de la présente invention ont comme la pepstatine, une action inhibitrice marquée sur les proteases acides ; notamment ils ont une action inhibitrice sur l'activité rénine plasmatique humaine très importante et de façon générale, nettement supérieure à celle du produit naturel : la pepstatine.
Les produits selon l'invention ont été étudiés en ce qui concerne leurs propriétés thérapeutiques et notamment leur action inhibitrice enzymatique. Plus particulièrement, les composés ont été évalués "in vitro" sur l'inhibition de l'activité Rénine Plasmatique Humaine (A.R.P.). I - METHODE D'EVALUATION.
La méthode d'évaluation est inspirée de GUYENE (J. clin. Endocrinol. Metab., 1976, 43, 1301) . L'inhibition de l'A.R.P. est évaluée à partir d'un pool de plasmas humains, riche en rénine (15 à 20 mg d ' angiotensine I libérée par millilitre et par heure), incubée pendant 60 minutes à 37°C, dans un tampon phosphate à pH 7,4, en présence de concentrations croissantes du produit à étudier.
Le plasma humain contient le substrat : l'angiotensinogène et l'enzyme : la rénine. L'angiotensine I libérée au cours de la réaction est mesurée par dosage radio-immunologique : Plasma Renin Activity Kit de Travenol ( n° CA 533,553 ). Un inhibiteur de l'enzyme de conversion, le fluorure de phénylméthylsulfonyl (PMSF) est ajouté au milieu d'incubation. Le volume total d'incubation est de 555 microlitres répartis ainsi :
- 420 microlitres de plasma humain
- 11 à 50 microlitres du produit à étudier à des concentrations variables - 119 à 80 microlitres de tampon phosphate
- 5 microlitres de PMSF.
On prépare une solution d'acide acétique dans le méthanol (19/1 en volume) et une solution de soude (IN) dans le méthanol (2/1 en volume) . Dans un mélange équivolumique de ces 2 solutions, on prépare une solution mère 0,001 M ,du produit à étudier. Les dilutions ultérieures sont alors effectuées dans le tampon phosphate. La quantité de solvant présente dans une solution n'interfère pas avec les résultats.
II - RESULTATS.
Les résultats sont exprimés par la dose de composé évaluée en moles qui inhibe de 50% (IC50) l'activité Rénine Plasmatique Humaine observée en l'absence d' inhibiteur. Les résultats obtenus avec divers produits de l'invention sont représentés dans le tableau 1 suivant où figurent les IC50 de chaque molécule en ce qui concerne leur inhibition de l'Activité Rénine Plasmatique Humaine à pH 7,4. De 5 à 10 doses ont été nécessaires pour déterminer ces IC50. La pepstatine, en tant que substance de référence, est toujours testée en parallèle dans chaque expérience. Les résultats sont exprimés par leur valeur logarithmique (-Log IC50).
TABLEAU 1
: : Inhibition A.R.P.: : Humaine: N° SR : -Log IC 50: : : : pH 7,4 : : : Pepstatine : 4,92 : 42 650 : 5,79 : 42 336 : 6,19 : 42 837 : 6,69 : 43 009 : 5,92 : 43 010 : 6,17: 43 093 : 6,13: 43 094 : 7,02: 43 095 : 5,65: 43 096 : 7,04: 43 195 : 6,18 : 43 251 : 7,28 : 43 298 : 6,85 : 43 378 : 7,14 : 43 493 : 6,69: 43 494 : 6,61: 43 507 : 7,08: 43 533 : 6,79: 43 541 : 6,88: 43 548 : 6,82 : 43 549 : 7,76 : 43 571 : 7,85 : 43 653 : 6,95: 43 654 : 5,85 43 655 6,92
43 657 6,56
43 683 7,38
43 716 6,43
La toxicité des produits selon l'invention est compatible avec leur utilisation en thérapeutique.
On peut donc envisager l'utilisation des produits selon l'invention dans les domaines thérapeutiques où l'inhibition des systèmes enzymatiques rénine-angiotansine est justifiée, notamment l'hypertension artérielle, l'ulcère gastroduodénal et les affections inflammatoires.
Ainsi, la présente invention a pour objet, selon un autre de ses aspects, les compositions pharmaceutiques ou médicaments antihvpertenseurs contenant les peptides de formule (I) ou leurs sels pharmaceutiquement acceptables en tant que principes actifs.
Les aminoalcools peptidiques de la présente invention peuvent être utilisés en thérapeutique par voie injectable. intraveineuse , intramusculaire ou sous-cutanée. Ils sont utilisés dans un solvant tel que le sérum physiologique (solution saline isotonique) ou dans un tampon tel que le tampon phosphate ; ils peuvent également être mis en suspension dans un agent diluant, aqueux bu non-aqueux, pharmaceutiquement acceptable. Chaque unité de dosage peut contenir de 1 à 1000 mg de principe actif.
Les exemples suivants, non limitatifs, sont donnés à titre d'illustration de la présente invention. Le pH des solutions dans un solvant organique est mesuré ou contrôlé en utilisant du papier pH indicateur humide.
Les points de fusion indiqués (Fc) sont mesurés au tube capillaire.
Les indices de rotation (alpha D) sont mesurés à 25°C.
Pour l'enregistrement des spectres Infra Rouge (IR) , le produit est mis en solution dans CH2Cl2 ou mélangé avec KBr pour former une pastille.
Enfin, les spectres de résonnance magnétique nucléaire (RMN) sont enregistrés à 250 MHz en solution dans le DMSO, l'étalon interne étant l'hexaméthyldisiloxane.
Les abréviations suivantes sont utilisées : s : singulet d : doublet m : multiplet ou massif.
De plus, . H ar signifie H aromatique ;
. H im signifie H imidazolique ; . H pyr signifie H de la pyridine ; . H (Sta réduite) signifie H de l'amino-4 méthyl-6 heptanediol 1,3 de configuration 3R,4S ou 3S,4S ; . env. signifie environ.
Les déplacements chimiques (delta) sont mesurés en ppm. EXEMPLE 1 :
Le dérivé .aminodiol est préparé suivant la méthode 3.
1°) (S) ( (imidazolyl-4)-2 éthylamino)-3
O-isopropylidène-1,2 propanediol-1,2.
On ajoute petit à petit 1,6 g de sodium à 200 ml de méthanol. Quand tout est dissous, on rajoute 6,4 g de dihydrochlorhydrate d'histamine en solution dans du méthanol chaud et agite 30 minutes. On filtre le précipité formé, évapore le solvant sous vide, reprend le résidu par 100 ml de méthanol, ajoute 5 g de (R) tosyloxy-3 O-isopropylène-1,2 propanediol-1,2 et porte au reflux 72 heures. On concentre sous vide, puis extrait le résidu obtenu par AcOET. Après évaporâtion du solvant, on recueille une huile que l'on chromatographie sur colonne de silice. L'AcOEt élue le produit attendu sous la forme d'une huile. P = 1,1 g.
SPECTRE DE RMN
Delta Aspect Protons Attribution
7,46 s 1 H CH im 6,70 s 1 H CH im
1,24-1,19 2 s CH3
A une solution de Boc-Ala-OH (586 mg) dans CH2Cl2 contenant de la triéthylamine (320 mg) et refroidie par une saumure (température interne environ -10°C) , on ajoute du chloroformiate d'isobutyle (421 mg) et agite 45 minutes. On ajoute alors 760 mg du produit précédent, continue d'agiter pendant 3 heures à 0°C et laisse revenir à TA 48 heures. On reprend par l'eau, décante, lave avec une solution de NaHCO3, sèche et concentre. On obtient une huile que l'on chromatographie sur silice. Le mélange AcOEt-MeOH à 90/10 en volume élue le produit attendu sous la forme d'une huile.
P = 540 mg. ;
IR : (CH2Cl2) ; 1705-1645 cm-1.
3°) Boc-Nle-Sta-OCH3.
Dans un mélange équivolumique de CH2Cl2 et de dioxanne (16 ml) on fait réagir une solution de Boc-Nle-ONSu (900 mg) , HOBt (421 mg) , TFA-Sta-OCH3 (0,9 équivalent) contenant suffisamment de NMM pour amener le pH de la solution vers 7. Après 18 heures on évapore à siccité, ajoute de l'eau, extrait par de l'éther, lave la phase organique successivement par une solution de KHSO4, de l'eau, une solution de NaHCO3 , puis une solution saline. Après séchage (MgSO4) et evaporation on isole une huile purifiée par chromatographie sur gel de silice (éluant pentaneacétate d'éthyle 1/1 en volume). Rendement 85%.
4°) Boc-Phe-Nle-Sta-OCH3.
On traite à 0°C pendant 10 minutes dans le TFA (8 ml) le peptide Boc-Nle-Sta-OCH3 (800 mg) puis évapore l'excès de solvant à TA sous le vide du rotavapor de Bϋchi. Au sel ainsi obtenu, on ajoute à 0°C une solution préparée dans CH2Cl2 (15 ml), de Boc-Phe-ONp (924 mg) , HOBt (384 mg) et NMM (400 mg) , puis amène le pH du milieu réactionnel vers 7 par addition de NMM supplémentaire. Après 24 heures, on évapore à siccité, ajoute de l'eau, extrait AcOEt, lave la phase organique par une solution de KHSO4, plusieurs fois par une solution de Na2CO3 , par de l'eau saline, puis sèche (MgSO4) . Après evaporation du solvant et filtration sur gel de silice (éluant pentane-acétate. d' éthyle 4/6 en volume), on isole le composé attendu sous forme d'une poudre blanche. Rendement 69%.
S
5 ° ) Boc-Phe-Nle-Sta-OH .
Le solide précédent (750 mg) est hydrolyse à TA dans un mélange d'eau (5 ml) et de dioxanne (10 ml) par de la soude (1,3 équivalent) pendant 3 heures. On évapore à siccité au rotavapor de Bùchi à TA, puis ajoute de l'eau, acidifie par une solution de KHSO4, extrait par 3 volumes d'AcOEt, lave par de l'eau salée, sèche (MgSO4). Après evaporation du solvant on isole un solide (rendement 95%) utilisé comme tel pour les réactions ultérieures. La RMN montre la disparition totale du pic à 3,50 ppm.
6°) SR 43 009.
On traite 330 mg du produit obtenu à l'étape 2 par 5 ml d'acide acétique à 20% pendant 3 heures à 70°C. On concentre sous vide (pression = 5 mm Hg) , reprend le résidu par du benzène et évapore. On obtient une huile que l'on traite par 10 ml de TFA pendant 15 minutes à 0°C. On évapore sous vide, neutralise à froid le sel, en solution dans du CH2Cl2, par un léger excès de DIPEA, puis ajoute du Boc-Phe-Nle-Sta-OH (440 mg) , du Bop (403 mg) et agite 48 heures à TA. On évapore sous vide, reprend par AcOEt, lave par une solution de Na2CO3, par une solution saline, sèche et concentre. On obtient un solide que l'on chromatographie sur silice. Le mélange AcOEt-MeOH à 70-30 en volume élue le produit attendu qui cristallise à l'evaporation du solvant.
P = 270 mg ;
Fc = 89-92°C ;
IR (KBr) : 1690-1645 cm -1.
EXEMPLE 2 :
Pour préparer cet isomère pur, on utilise la méthode 3 en partant d'un acétonide optiquement actif.
1°) (S) Benzylamino-3 O-isopropylidène-1,2 propanediol-1,2
On porte au reflux du benzène (150 ml) pendant 72 heures, un mélange de benzylamine (7,44 g) et de l'acétonide du (R) tosyloxy-3 propanediol-1,2 (10 g). Après refroidissement, on filtre le précipité, lave la solution benzénique par une solution de soude diluée, sèche la phase organique (MgSO4) et évapore le solvant. L'huile obtenue est chromatographiée sur gel de silice. On élue par le mélange AcOEt-MeOH (9/1 en volume) une huile brune. Rendement 69%. alpha D = -3,8° (c = 1, MeOH) .
2°) (S) -benzylamino-3 propanediol-1,2.
Le composé précédemment obtenu (5,1 g) est chauffé à 100°C pendant 3 heures dans de l'acide acétique à 20% (50 ml). Après refroidissement on extrait une fois par de l'éther, puis alcalinise par de la soude concentrée, et extrait plusieurs fois par CH2Cl2. On sèche (MgSO4) . Après evaporation on isole une huile (3,1 g) qui se solidifie. On cristallise 2 fois du mélange CH2Cl2-éther isopropylique. Fc = 56-57°C ; alpha D = -16,5° (c = 1, MeOH).
A une solution refroidie à -10°C de Boc alanine (1,77 g) daas CH2Cl2 (25 ml) on ajoute de la triéthylamine (971 mg) puis lentement le chloroformiate d'isobutyle (1,14 g) en solution dans le même solvant (10 ml) en 45 minutes, puis ajoute l'aminodiol précédent (1,7 g) dans CH2Cl2 (5 ml) puis laisse revenir à TA en une nuit. La phase organique est lavée par de l'eau, par une solution de Na2CO3, puis par une solution de KHSO4 puis séchée sur MgSO4. On chromatographie sur gel de silice et élue par le mélange CH2Cl2-AcOEt à 70/30 en volume. Le produit cristallise du mélange éther-hexane.
Fc = 78°C.
L'existence d'isomères de rotation est visible sur le spectre de RMN.
300 mg de produit obtenu à l'étape 1 sont déprotégés par TFA. L'huile obtenue est reprise par 10 ml de TFA ; le sel est neutralisé à froid par un léger excès de DIPEA puis on ajoute 1 ml de DMF et met en réaction avec un mélange de 375 mg de Bop et 330 mg de Boc-Nle-Sta-OH obtenu par hydrolyse de l'ester correspondant préparé à l'exemple 1, étape 3. Après 24 heures d'agitation, on lave par KHSO4, NaHCO3, sèche et concentre. Le solide obtenu est chromatographie sur silice, le mélange AcOEt-MeOH à 90/10 en volume élue le produit qui précipite dans l'hexane. Rendement 320 mg. Fc = 74-75°C.
5°) SR 43 094.
300 mg du produit précédent sont déprotégés par TFA. Le solide obtenu est repris par CH2Cl2, le sel est neutralisé à froid par un léger excès de NMM puis il est mis en réaction avec un mélange de 200 mg de Boc-Phe-ONp, 80 mg d'HOBt et 50 mg de NMM préalablement agité pendant 2 heures dans CH2Cl2. Après 18 heures d'agitation, on lave par Na2CO3 , KH SO4 , sèche et concentre. L'huile obtenue est chromatographiée sur silice, le mélange AcOEt-MeOH à 90/10 en volume élue le produit attendu qui précipite dans l'éther. Rendement 253 mg. Fc = 95-98°C.
EXEMPLE 3 :
SR 43 298.
On prépare ce composé en utilisant la méthode 2 à partir de l'époxy-2,3 propanol.
1°) (R,S) N-benzylamino-3 propanediol-1, 2 *
Mélange (R,S) C6H5CH2-NH-CH2-CHOH-CH20H.
On porte au reflux de l'éthanol pendant 48 heures un mélange de benzylamine (16 g) et époxy-2,3 propanol. On évapore le solvant sous vide, puis distille l'excès de benzylamine. Le résidu est dissous dans le minimum d'HCl dilué, les impuretés sont éliminées par de l'éther, puis l'aminé (assez fortement soluble dans l'eau) est régénérée par de la soude concentrée, puis extraite par de l'éther. Après séchage (MgSO4) et evaporation, on isole le produit brut utilisé tel quel pour la réaction suivante.
Ce composé est préparé selon l'étape 3 de l'exemple 2, par couplage avec la Boc-Alanine du produit précédemment obtenu. Après séchage (MgSO4) et evaporation on isole une huile qui est chromatographiée sur gel de silice. On élue le composé attendu par le mélange CH2Cl2/AcOEt (7/3 en volume) sous forme d'une huile.
3°) SR 43 298.
Ce composé est préparé en opérant comme à l'exemple 1 par couplage avec le polypeptide souhaité convenablement protégé.
SPECTRE DE RMN
La RMN se compare à celle du SR 43 094 mais de nombreux pics sont dédoublés ou non résolus.
8,11-7,92-7 , 50 (massifs non résolus, 3 NH CO) 6,98 (d, J=8 Hz, 1 H, NH CO2) .
EXEMPLE 4 :
SR 42 837
1°) (S) (Phényl-2) éthylamino-3 O-isopropylidène-1,2 propanediol-1,2
2°) (S) (phényl-2) éthylamino-3 propanediol-1,2. Les 2 premières étapes de la synthèse du SR 42 837 sont réalisées selon la méthode 3, telle que décrite à l'exemple 2, étapes 1 et 2 en remplaçant la benzylamine par la phénéthylamine.
A une solution de Boc-Ala-OH (1,25 g) dans 20 ml de CH2Cl2, contenant de la triéthylamine (0,66 g) et refroidie par une saumure (température interne environ -10°C), on ajoute du chloroformiate d'isobutyle (897 mg et agite 45 minutes. On ajoute alors 1,3 g du produit obtenu à l'étape précédente dissous dans un minimum de CH2Cl2, puis laisse revenir à TA, pendant 18 heures. On lave la phase organique avec une solution de KHSO4; de NaHCO3 et de ClNa, puis sèche et concentre. On obtient une huile que l'on chromatographie sur silice. Le mélange pentane/acétate d'éthyle à 20/80 en volume élue le produit attendu sous forme d'une huile. P = 1,35 g.
4°) SR 42 837.
On traite à 0°C pendant 15 minutes, 250 mg du produit ci-dessus par 8 ml de TFA. On évapore sous vide à 25°C, reprend par l'éther et concentre. On obtient une huile que l'on reprend par de l'acétonitrile (10 ml), neutralise à froid le sel par un léger excès de DIPEA, puis ajoute du Boc-Phe-Nle-Sta-OH (250 mg) , du Bop (247 mg) et agite 48 heures à TA. On concentre sous vide, reprend par AcOET, lave avec une solution de NaHCO3 , de KHSO4, de ClNa, sèche et concentre. On obtient une huile que l'on chromatographie sur silice. Le mélange AcOEt/MeOH à 90/10 en volume élue le produit attendu qui cristallise du mélange hexane-éther. P = 192 mg. Fc = 85-88°C.
EXEMPLE 5 :
SR 43 494. 1°) (S) (Phényl-2) éthylamino-3 propanediol-1,2 ( S ) C6H5- (CH2 ) 2-NH-CH2-CHOH-CH20H .
Ce produit est obtenu selon l'exemple 4, étapes 1 et 2, c'est à dire en suivant la méthode 3. On utilise ensuite la méthode 4 pour préparer le composé 43494
2°) (S) N-Boc (phényl-2 éthylamino)-3 propanediol-1,2
On porte au reflux du THF (200 ml) un mélange de 7,5 g du produit précédent et de 8,17 g de (Boc) 2 O pendant 3 heures, puis on laisse revenir à TA pendant 1 nuit. On évapore sous vide et chromatographie l'huile obtenue sur colonne de silice. Le produit est élue par le mélange équivolumique CH2Cl2-AcOEt. P = 10,5 g.
3°) (R) N-Boc (phényl-2 éthylamino)-4 hydroxy-3 butyronitrile
A une solution du composé précédent (2,9 g) dans la pyridine (15 ml) refroidie à -5°C on ajoute goutte à goutte un équivalent de chlorure de méthanesulfonyle fraîchement distillé, puis conserve à 0°C pendant 18 heures. On verse sur un mélange d'eau et de glace, extrait par CH2Cl2, lave la phase organique plusieurs fois par une solution froide d'HCl 2N, sèche (MgSO4) et évapore le solvant. Après evaporation on isole une huile jaune (3,3 g). On agite pendant 30 minutes au reflux de l'éthanol (50 ml) un mélange du composé précédent (1,8 g) et de cyanure de sodium (236 mg) . On évapore le solvant sous vide, ajoute AcOEt , lave la phase organique par de l'eau, par une solution de KHSO4 puis par une solution de Na2CO3. Après séchage (MgSO4) et evaporation, l'huile obtenue est chromatographiée sur gel de silice. On élue une huile par le mélange CH2Cl2/AcOEt (1/1 en volume). Rendement 50%. alpha D = -9,2° (c = 1,1, CHCl3) ;
IR (CH2Cl2) : 2260-1690-1660 cm-1.
4°) Acide (R) N-Boc (phényl-2 éthylamino)-4 hydroxy-3 butyrique
On chauffe à 100°C pendant 18 heures le composé précédent (1,0 g) dans HCl concentré (5 ml). On évapore à siccité et recueille un solide. On redissout dans un mélange eau-dioxanne (1/1 en volume, 10 ml) puis ajoute de la triéthylamine jusqu'à neutralité, puis agite à TA pendant 18 heures en présence de carbonate de tertiobutyle (787 mg) et de 365 mg de triéthylamine supplémentaire. On évapore à siccité, ajoute de l'eau, extrait par un volume d'éther quelques impuretés, acidifie la phase aqueuse par une solution de KHSO4, extrait le résidu organique par de l'éther. Après séchage (MgSO4) et evaporation on isole une huile qui est purifiée par filtration sur gel de silice. On élue par un mélange AcOEt-MeOH à 9/1 en volume. Rendement 45%. alpha D = +3,4° (c = 1,91, CHCl3) .
5°) (R) N-Boc (phényl-2 éthylamino)-4 hydroxy-3 butyrate de méthyle
Ce composé est obtenu à partir de l'acide précédent par esterification par le diazométhane dans l'éther. Après purification par filtration sur gel de silice en utilisant comme éluant un mélange pentane-éther à 2/3 en volume, on obtient une huile. alpha D = +5,7° (c = 2,7 ; CHCl3) ;
IR (CH2Cl2) : 1735-1690-1665 cm-1.
Le composé précédent (270 mg) est dissous dans TFA à 0°C pendant 15 minutes. L'excès d'acide est évaporé à TA sous vide. Le sel obtenu, neutralisé par de la NMM est additionné sous forme d'une suspension dans le THF à une solution de l'ester activé de la Boc alanine (166 mg) préparé selon l'exemple 1, étape 2, en remplaçant CH2Cl2 par THF et la triéthylamine par le NMM. Après un contact de 18 heures à 0°C on évapore à siccité à TA, ajoute de l'eau et AcOEt, lave la solution par une solution de KHSO4, par de l'eau, puis par une solution de NaHCO3 et une solution saline. Après séchage (MgSO4) et evaporation, le résidu est chromatographie sur gel de silice. On élue le composé attendu, sous forme d'une huile, par le mélange de pentane et d'acétate d'éthyle (2/3 en volume).
IR (CH2Cl2) : 3430-1730-1710-1655 cm-1.
Le composé précédent (220 mg) est dissous pendant 15 minutes par TFA à 0°C. Après evaporation à froid de l'excès d'acide au rotavapor de Bùchi, le résidu est dissous dans CH2Cl2 et neutralisé à froid par de la DIPEA. On ajoute alors une solution préparée à partir de Boc-Phe-Nle-Sta-OH (311 mg) , de Bop (257 mg) contenant de la diisopropylamine dans CH2Cl2 et agite pendant 18 heures à TA. On lave alors la solution organique par de l'eau, par une solution de KHSO4 , par une solution de KHCO3, sèche la phase organique (MgSO4) , évapore le solvant et chromatographie le résidu sur gel de silice (éluant : AcOEt). Le composé cristallise à l'evaporation du solvant. Fc = 82-83°C.
8°) SR 43 494.
Ce produit est préparé à partir de l'ester obtenu à l'étape précédente en opérant selon la méthode 4. A l'ester (67 mg) dans l'éthanol à 100 % (5 ml) on ajoute NaBH4 solide (12 mg) et agite à TA pendant 5 heures. On acidifie par une solution de KHSO4 jusqu'à un pH voisin de 4, puis évapore à siccité. On ajoute de l'eau, puis extrait par AcOEt, lave par de l'eau et de l'eau carbonatee la phase organique, puis sèche (MgSO4) . Après evaporation le résidu est chromatographie sur gel de silice (éluant AcOEt/MeOH à 9/1 en volume).
SPECTRE DE RMN :
Ce composé se distingue de son précurseur l'ester SR 43 762 par la disparition des 2 pics OCH3 à 3,53 et 3,51 ppm, la disparition d'un multiplet entre 2,5 et 2,0 ppm attribué au groupement CH2CO2CH3 et l'apparition d'un groupement CH2 supplémentaire (CH2-CH2-OH) entre 1,70 et 1,0 ppm (23 H) ; 1,23 ppm, s, (CH3)3C ; 1,06 ppm, d, J=7 Hz, CH3 (Ala) .
EXEMPLE 6 :
SR 43 378 .
Le dérivé aminodiol-1,2 est préparé selon la méthode 3.
1°) Boc-Nle-AHPPA-OCH3.
Boc AHPPA OCH3 (3,0 g) est dissous dans TFA (20 ml) selon la technique habituelle, le sel obtenu est dissous dans CH2Cl2 puis neutralisé à 0°C par de la NMM. On ajoute alors au milieu réactionnel Boc-Nle-ONSu (3,3 g), HOBt (1,6 g) puis agite 18 heures à TA en maintenant le pH de la solution vers 7-8 par addition de NMM supplémentaire. Après les traitements habituels, le résidu est chromatographie sur gel de silice (éluant CH2Cl2-AcOEt, 1/1 en volume). Le peptide cristallise à l'evaporation du solvant au rotavapor de Bϋchi à froid (rendement 80%) . Fc = 89-90°C ;
IR (CH2Cl2) : 3420-1715-1675 cm-1.
2° ) Boc-Phe-Nle-AHPPA-OCH3.
Le composé précédent (3,5 g) est dissous à 0°C dans TFA (30 ml) . Le sel obtenu par evaporation de l'excès de réactif selon la méthode habituelle est dissous dans
CH2Cl2 et neutralisé à 0°C par le NMM puis ajouté à 0°C à une solution préalablement obtenue de Boc-Phe-ONp (3,3 g), HOBt (1,33 g) et NMM (808 mg) dans CH2Cl2. On agite pendant 18 heures à TA puis lave la phase organique par de l'eau, par une solution de Na2CO3 , par une solution de KHSO4, par de l'eau, puis sèche (MgSO4) . Par evaporation du solvant, on isole un solide qui est trituré dans l'éther, puis filtré ; homogène en CCM. Rendement 75%. Fc = 182-183°C.
3°) Boc-Phe-Nle-AHPPA-OH.
L'ester décrit à l'étape précédente (2 g) en solution dans le dioxanne (100 ml) , est hydrolyse à TA pendant 4 heures par de la soude (178 mg) dissoute dans l'eau (10 ml). Le traitement ultérieur selon l'exemple 10, étape 2, fournit l'acide qui est trituré dans l'éther isopropylique, filtré et séché sous vide (rendement 95%). Fc = 161-162°C.
4°) SR 43 378.
La condensation de l'acide précédent avec lee préparé à l'exemple 2 , étape 3 , fournit le peptide attendu qui est purifié par chromatographie sur gel de silice en éluant par le mélange AcOEt-MeOH à 4/1 en volume.
EXEMPLE 7 :
(3S,4S) N-((pyridyl-2)-4 oxo-4 butyryl)-Phe-
SR 43195.
Ce composé est préparé en procédant à la réduction du Boc-Val-Sta-OCH3. Dans de l'éthanol à 100 % (8 ml), on ajoute du NaBH4 (160 mg) puis, après dissolution, on ajoute le dipeptide Boc-Val-Sta-OCH3 solide (370 mg et agite pendant 270 minutes à TA, puis porte à 45 °C pendant 30 minutes. La réaction est suivie par CCM sur plaques de silice. On ajoute alors de l'eau (1 vol) puis acidifie avec précaution par une solution de KHSO4, évapore l'éthanol sous vide à 40 °C et extrait par 4 volumes d'AcOEt, lave par de l'eau, de l'eau saline et sèche (MgSO4) . Après chromatographie sur gel silice (éluant AcOEt-MeOH à 9/1 en volume) on élue un produit homogène en CCM.
Rendement 77 % ; alpha D = -33° (c = 0,76 ; MeOH) ;
Fc = 65-67°C (trituré dans le mélange éther-hexane).
On peut également préparer d'abord le (3S,4S) N-Boc amino-4 méthyl-6 heptanediol-1,3 puis le coupler à la valine selon les méhtodes classiques. La préparation du dérivé aminodiol est alors réalisée comme suit :
A une solution de NaBH4 (261 mg) dans l'éthanol à 100 % (15 ml) on ajoute le Boc-Sta-OMe (500 mg) et agite 3 heures à TA. On ajoute de l'eau, puis une solution de KHSO4, évapore l'éthanol sous vide (température du bain environ 35°C). On extrait par AcOEt, lave par de l'eau, de l'eau saline, sèche (MgSO4) . Le résidu est chromatographie sur gel de silice. On élue par le mélange de pentane et d'acétate d'ethyle (1/1 en volume) et cristallise d'un mélange d'éther et d'hexane.
Rendement 60 % ;
Fc = 68-70°C.
Ce produit est préparé selon les méthodes habituelles de couplage.
3 ° ) SR 43195 .
Le produit préparé à l'étape précédente (220 mg) est traité par TFA pendant 20 minutes à 0°C. Le milieu est évaporé à sec puis le trifluoracetate est solubilisé dans l'acétonitrile (25 ml). On neutralise par addition de
DIPEA puis on ajoute l'acide (pyridyl-2)-4 oxo-4 butyrique (70 mg) et du Bop (170 mg) . On vérifie que le pH est supérieur à 7 puis agite 48 heures à TA. Le milieu est évaporé, repris par AcOEt puis lavé successivement par des solutions de KHSO4, NaHCO3 et ClNa. Après séchage et concentration, on chromatographie sur silice. Le mélange AcOEt-MeOH à 9/1 en volume élue le produit amorphe qui précipite dans AcOEt ; P = 101 mg.
EXEMPLE 8 :
(3S,4S) N-((pyridyl-2)-4 hydroxy-4 butyryl)
SR 43251.
Le SR 43195 préparé à l'exemple 7 (53 mg) est solubilisé dans MeOH (20 ml) en présence de NaBH4 (25 mg) . On conserve une nuit à TA. On ajoute KHSO4 jusqu'à pH 3, puis NaHCO3 jusqu'à pH 8. On évapore MeOH, puis le milieu est repris par de l'eau puis par AcOEt. La phase organique est lavée par une solution saturée de ClNa, séchée et concentrée. Le résidu est dissous dans un peu de MeOH puis filtré. On évapore MeOH au jet d'azote puis on fait précipiter le produit attendu dans l'éther ; P = 45 mg. Rendement 85%.
EXEMPLE 9 : SR 43095. 1°) (S) (Phényl-2) éthylamino-3 propanediol-1,2 préparé à l'exemple 4, étape 2.
A une solution de Boc-Nle-OH (1,18 g) dans 25 ml de THF contenant 515 mg de NMM et refroidie par une saumure (température interne : environ -10 °C) , on ajoute goutte à goutte du chloroformiate d'isobutyle (700 mg) et agite 45 minutes. On ajoute alors 1 g de (phényl-2) éthylamino-3 propanediol-1,2 dissous dans le minimum de THF et laisse revenir à TA 18 heures. On concentre sous vide, reprend par AcOEt, lave par une solution de NaHCO3, une solution de KHSO4, sèche et concentre. On obtient une huile que l'on chromatographie sur colonne de silice en éluant par un mélange équivolumique CH2Cl-AcOEt. On recueille 1,6 g du produit attendu sous forme d'une huile.
On débocule 408 mg du produit obtenu précédemment selon la méthode habituelle par 10 ml de TFA. On obtient une huile que l'on reprend par CH2Cl2 (10 ml). Le sel est neutralisé à froid par un léger excès de DIPEA et mis en réaction avec un mélange de Bop (442 mg) et de
Boc-Nle-Sta-OH (388 mg) . Après 18 heures d'agitation à TA, on lave par KHSO4, par NaHCO3 et par de l'eau puis on sèche et concentre. On obtient un solide que l'on chromatographie sur silice ; le mélange AcOEt-MeOH à 9/1 en volume élue le produit attendu qui cristallise dans le pentane ; P = 400 mg. Fc = 70-72°C.
4°) SR 43095.
On débocule 160 mg du produit obtenu précédemment selon la méthode habituelle. On obtient une huile que l'on reprend par CH2Cl2, puis on neutralise à froid le sel par un léger excès de NMM, ajoute Boc-Nle-ONSu (83 mg) , HOBt (39 mg) et agite 18 heures à TA. On lave à l'eau, par. KHSO4, NaHCO3, sèche et concentre. On obtient une huile que l'on chromatograpnie sur silice. Le mélange AcOEt-MeOH à 9/l en volume élue le produit attendu qui précipite dans l'hexane ; P = 110 mg. Fc = 97-100°C.
EXEMPLE 10 :
SR 43096
préparé à l'exemple 9, étape 3.
2°) SR 43096.
On débocule le produit obtenu précédemment selon la méthode habituelle par TFA. On obtient une huile que l'on dissout dans CH2Cl2 ; on neutralise à froid le sel par un léger excès de NMM, puis met en réaction avec un mélange de Boc-Phe-ONp (127 mg) , HOBt (50 mg) et NMM, préalablement agité pendant 2 heures dans CH2Cl2. Après 18 heures d'agitation, on lave à l'eau, par NaHCO3 , par KHSO4, sèche et concentre. On obtient une huile que l'on chromatographie sur silice. Le mélange AcOEt-MeOH à 9/l en volume élue le produit attendu qui précipite dans le pentane ; P = 110 mg. Fc = 94-95°C. EXEMPLE 11 :
SR 43010 1°) (S). ( (Indolyl-3)-2) éthylamino-3 prcpanediol-1,2
Ce composé est préparé en suivant la méthode 3 telle que décrite à l'exemple 2, étape 1 et 2.
Ce composé est préparé en suivant la méthode décrite à l'exemple 2, étape 3. alpha D = -1,2° (c = 1 ; CH2Cl2) .
Ce composé est obtenu par couplage avec Boc-Nle-Sta-OH en suivant la méthode habituelle. Fc = 86-88°C.
4°) SR 43010. Ce composé est préparé par couplage avec Boc-Phe-ONp selon les méthodes habituelles. Fc = 98-100°C.
EXEMPLE 12 :
(3S,4S) N-( (pyridyl-2)-4 hydroxy-4 butyryl)-
SR 43 541. 1°) (3S,4S) N-Boc amino-4 méthyl-6 heptanediol-1,3
A une solution de NaBH4 (261 mg) dans l'éthanol à 100% (15 ml) , on ajoute le Boc-Sta-OMe (500 mg) et agite 3 heures à TA. On ajoute de l'eau, puis une solution de KHSO4, évapore l'éthanol sous vide (température du bain environ 35°C). On extrait par AcOEt, lave par de l'eau, de l'eau saline, sèche (MgSO4) . Le résidu est chromatographie sur gel de silice. On élue par le mélange de pentane et d'acétate d'ethyle (1/1 en volume) et cristallise d'un mélange d'éther et d'hexane. Rendement 60%.
Fc = 68-70°C.
Le composé précédent (1,3 g) est traité à 0°C par TFA (12 ml) pendant 15 minutes. Le sel obtenu après evaporation additionné de CH2Cl2 est neutralisé par un léger excès de NMM, et on ajoute une solution dans CH2Cl2 de Boc-Ala(ONSu) (1,5 g) et de HOBt (800 mg) . On agite à TA pendant 48 heures en maintenant le pH vers 7 par addition de NMM supplémentaire. On lave alors le milieu par une solution de NaHCO3 puis par une solution de KHSO4, de l'eau, puis on sèche (MgSO4) et évapore. Le résidu est chromatographie sur gel de silice (éluant AcOEt-MeOH, 8/2 en volume).
On peut également préparer ce dérivé aminodiol directement par réduction de Boc-Ala-Sta-OCH3. Dans de l'éthanol à 100% (8 ml) on ajoute du NaBH4 (160 mg) puis, après dissolution, on ajoute le dipeptide Boc-Ala-Sta-OCH3 solide (370 mg) et agite pendant 270 minutes à TA, puis porte à 45 °C pendant 30 minutes. La réaction est suivie par CCM sur plaques de silice. On ajoute alors de l'eau (1 vol) puis acidifie avec précaution par une solution de KHSO4, évapore l'éthanol sous vide à 40°C et extrait par 4 volumes d'AcOEt, lave par de l'eau, de l'eau saline et sèche (MgSO4) . Après chromatographie sur gel silice (éluant AcOEt-MeOH à 9/1 en volume) on élue un produit homogène en CCM. Rendement 77%) .
IR (CH2Cl2) : 1710 et 1672 cm-1 ; alpha D = -60,8° (c = 0,72 ; MeOH).
3°) N-((pyridyl-2)-4 oxo-4 butyryl) -Phe-His-Sta-OMe
Ce composé est préparé à partir du
Boc-Phe-His-Sta-OCH3 selon la méthode décrite à l'exemple 7, étape 4.
4°) N-( (pyridyl-2)-4 hydroxy-4 butyryl) -Phe-His-Sta-OMe.
Ce composé est obtenu par réduction du précédent par NaBH4 selon la méthode décrite à l'exemple 8.
5°) SR 42 541.
Le composé préparé à l'étape 4 est hydrolyse puis couplé après acidification du sel de l'acide carboxylique avec le diol préparé à l'étape 2, pour obtenir le produit attendu.
EXEMPLE 13 :
SR 43 507. 1°) Benzylamino-3 propanol. L'ester méthylique de l'acide benzylamino-3 propanoîque (5,0 g) est dissous dans 150 ml d'éther anhydre et refroidi par un bain de glace puis on ajoute par fractions l'hydrure double de lithium et d'aluminium (1,3 g) et on agite 2 heures à TA. L'excès d'hydrure est détruit en ajoutant successivement de l'eau (1,3 ml) une solution de soude à 15% (1,3 ml) puis de l'eau (4 ml). Le solide est filtré, la phase éthérée est évaporée, on isole une huile jaune.
On prépare une solution de 1,15 mg de Boc-Ala-OH dans CH2Cl2 à laquelle on ajoute goutte à goutte 819 mg de chloroformiate d'isobutyle dans 5 ml de CH2Cl2 puis après quelques minutes, on ajoute le produit obtenu à l'étape précédente et on laisse revenir à TA une nuit. On verse dans de l'eau, lave par une solution de Na2CO3 , par de l'eau, une solution de KHSO4, sèche (MgSO4) et concentre. Le résidu est chromatographie sur silice en éluant par un mélange équivolumique CH2Cl2/AcOEt.
3°) SR 43 507
Ce composé est préparé en suivant les méthodes habituelles.
En utilisant les mêmes méthodes de préparation indiquées entre () , les composés décrits dans le tableau 2 ont été obtenus. Ils sont caractérisés par leur spectre de RMN.
SPECTRES DE RMN

Claims

REVENDICATIONS.
1. Dérivé aminoalcool peptidique de formule :
dans laquelle :
- R1 représente un groupe acyle choisi parmi les groupes alkylcarbonyle, alcoxycarbonyle, arylcarbonyle, arylalkyIcarbonyle, arylalcoxycarbonyle, hétérocyclylcarbonyle, hétérocyclylalkvlcarbonvle, dont le groupe alkvle est éventuellement substitué par un αroupe hydroxy, hétérocyclylcarbonylalkylcarbonyle, hétérocyclylalcenylcarbonyle, cycioalkylcarbonyle ou un groupe (alkyle inférieur) sulfonyle non substitué ou substitué sur l'alkyle par un groupe amino libre ou portant un groupe protecteur ou par un phényle; ou un qroupe phënylsulfonyle non substitué eu substitué sur le noyau phényle par un alkyle inférieur ;
- R2 représente un groupe alkyle inférieur non substitué ou substitué par un phényle, naphtyle, cyclohexyle, ou pyridyle ; - R3 représente l'hydrogène, un alcényle inférieur, un phényle, un naphtyle, un cycloalkyle contenant 3 à 6 atomes de carbone, un groupe heterocyclique monocyclique à 5 ou 6 chaînons non substitué ou substitué avec un alkyle inférieur ou trifluorométhyle, ou bien un alkyle inférieur non substitué ou substitué par un groupe amino libre ou portant un groupe protecteur, par un groupe di (alkyle inférieur) amino, par un carboxyle libre ou estérifié avec un alkyle inférieur ou un benzyle, par un carbamoyle libre ou substitué avec un ou deux alkyles inférieurs ou avec un phényle, par un groupe hydroxy, alcoxy inférieur ou benzyloxy, par un groupe pyridylméthyloxy, par un groupe alkylthio inférieur, (alkyl inférieur) sulfinyl ou (alkyl inférieur) suifonyl, par un phényle, par un naphtyle, par un cycloalkyle contenant de 3 à 6 atomes de carbone ou par un groupe heterocyclique monocyclique à 5 ou 6 chaînons non substitué ou substitué avec un alkyle inférieur ou un trifluorométhyle ;
- R4 représente l'hydrogène ou un alkyle inférieur non substitué ou substitué par un radical indolyle, pyridyle, imidazolyle ou phényle ;
- R5 représente un groupe alkyle de 3 à 20 atomes de carbone non substitué ou substitué par un groupe phényle, cyclohexyle, hydroxyphényle, le dit groupe alkyle contenant au moins un groupe hydroxyle et éventuellement un groupe aminé. - ou R4 et R5 pris ensemble représentent un groupe 1,4 butylène ou 1,5 pentylène substitué par au moins 1 groupe hydroxyle ou hydroxyalkyle inférieur ;
- Q représente l'isopropyle, le phényle ou le cyclohexyle formant respectivement avec le radical le résidu de l'aminoacide Sta, ou AHPPA ou ACHPA ;
- X est soit une liaison directe, soit le résidu d'un aminoacide tel que Ala, Nva, Val, Leu, Nie, Ile, Phg, Abu, Cpg :
avec la limitation que lorsque R4 représente l'hydrogène et X est autre qu'une liaison directe ou l'un des résidus Cpg , Phg, soit R1 est autre qu'un groupe alkylcarbonyle, alcoxycarbonyle, arylcarbσnyle, arylalkylcarbonyle, arylalcoxycarbonyle ou cycloalkylcarbonyle, soit R3 est autre qu'un alkyle inférieur non substitué ou substitué par un groupe amino libre ou portant un groupe protecteur, par un groupe carboxyle, par un groupe hydroxy, par un groupe alkylthio inférieur, par un phényle, par un naphtyle, par un imidazolyl-4 ;
ainsi que les sels éventuels pharmaceutiquement acceptables dudit aminoalcool peptidique avec les acides minéraux ou organiques ou avec des métaux alcalins ou alcalino-terreux.
2. D érivé aminoalcool peptidique selon la revendication 1, caractérisé en ce que R5 contient de 1 à 3 groupes hydroxyle.
3. Dérivé aminoalcool peptidique, selon la revendication 1 , de formule :
-CHOH-(CH2)m-OH
dans laquelle R1, R2, R3 , Q, X et R4 sont tels que définis dans la revendication 1,
- Alk représente méthylène, éthylène, un groupe alkylidène inférieur non substitué ou substitué en position oméga par un groupe amino libre ou portant un groupe protecteur, un benzylidène ou un groupe
2-cyclohexyléthylidène ou un groupe 2-phényléthylidène non substitué ou substitué sur le noyau phényle par un hydroxyle ; Alk ne pouvant pas être autre que méthylène ou éthylène lorsque R4 est autre que l'hydrogène ;
- m est un ou deux.
4. Dérivé aminoalcool peptidique, selon la revendication 1 , de formule :
dans laquelle R1, R2, R3 , R4 , Q et X sont tels que dans la revendication 1 et :
- p représente un nombre entier compris entre zéro et cinq ; - R6 représente l'hydrogène ou un alkyle inférieur.
Dérivé aminoalcool, .selon la revendication 1, de formule:
dans laquelle R1, R2 , R3 , Q, X et R4 sont tels que définis dans la revendication 1,
- p représente un nombre entier compris entre zéro et 5 ;
- R7 représente l ' hydrogène ou un alkyle inférieur non substitué ou substitué par un groupe amino libre ou portant un groupe protecteur ;
6. Dérivé aminoalcool peptidique selon l'une des revendications 1 à 5 caractérisé en ce que R1 représente l'un des groupements suivants :
NH2CH2CH2 - SO2-
BOCNHCH2CH2 - SO2-
Z NHCH2CH2 - SO2- A - SO2 - , où A est un alkyle inférieur
C6H5 - (CH2)a - SO2 -, où a = 0 , 1 ou 2
ou un des sels éventuels d'acides minéraux ou organiques pharmaceutiquement acceptables des dits aminoalcools peptidiques.
7. Dérivé aminoalcool peptidique selon l'une des revendication 1 à 5 , caractérisé en ce que R1 représente un groupe choisi par les groupes suivants
- isovaléryl _ (pyridyl-2)-4 oxo-4 butyryl
- (pyridyl-2)-4 hydroxy-4 butyryl
- (pyridyl-3)-3 propionyl
- (pyridyl-3)-4 butyryl
- nicotinoyl - benzène sulfonyl.
8. Dérivé aminoalcool peptidique selon l'une quelconque des revendications 1 à 7 caractérisé en ce que R3 est tel gue le résidu -NH-CH (R3) -CO- représente le résidu (tauMe)His. 9. Dérivé aminoalcool peptidique selon l'une quelconque des revendications 1 à 8, caractérisé en ce que R4 représente un alkyle inférieur non substitué ou substitué par un radical indolyle, pyridyle, imidazolyle ou phényle ; et X représente le résidu d'un aminoacide tel que Ala, Nva, Leu, Nie, Ile, Abu, Val.
10. Procédé pour la préparation des dérivés aminoalcools peptidiques selon la revendication 1, caractérisé en ce que l'on traite un aminoalcool de formule :
dans laquelle W est un groupe protecteur ou l'hydrogène et R4 , R5 sont tels que définis ci-dessus et dont les groupes hydroxyle sont éventuellement protégés, avec l'ester d' alkyle inférieur de l'acide aminé de formule
dans laquelle X' a la définition donnée ci-dessus pour X, mais X' est autre qu'une liaison directe et Q est tel que défini ci-dessus, puis on procède, étape par étape, à l'élongation de la chaîne peptidique par couplage avec les acides aminés ou les fragments suivants, convenablement protégés, les différentes opérations étant effectuées en utilisant soit un ester activé de l'aminoacide ou du fragment à coupler, soit l'aminoacide N- protégé en présence de DCCI, les groupes N- protecteurs étant clivés après chaque couplage soit par hydrogénolyse, soit par hydrolyse en milieu acide fort et, le cas échéant, on déprotège les groupes hydroxyle de l'aminoalcool ainsi obtenu par hydrolyse acide ; et l'on transforme, si nécessaire, le produit ainsi obtenu dans un de ses sels d'acides minéraux ou organiques ou des métaux alcalins ou alcalino-terreux.
11. Compositions pharmaceutiques caractérisées en ce qu'elles contiennent un produit selon l'une des revendications 1 à 9 en tant qu'ingrédient actif.
12. Compositions pharmaceutiques selon la revendication 9, utilisables notamment pour le traitement de la tension artérielle, caractérisées en ce qu'elles contiennent de 1 à 1000 mg de produit selon la revendication 1 par unité de dosage en mélange avec un excipient pharmaceutique.
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