EP3768292A1 - Composition vétérinaire comprenant de la superoxyde dismutase et au moins un hydrolysat de protéines riche en peptides bioassimilables - Google Patents

Composition vétérinaire comprenant de la superoxyde dismutase et au moins un hydrolysat de protéines riche en peptides bioassimilables

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EP3768292A1
EP3768292A1 EP19718786.7A EP19718786A EP3768292A1 EP 3768292 A1 EP3768292 A1 EP 3768292A1 EP 19718786 A EP19718786 A EP 19718786A EP 3768292 A1 EP3768292 A1 EP 3768292A1
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EP
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hydrolyzate
composition according
advantageously
dogs
protein hydrolyzate
Prior art date
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Pending
Application number
EP19718786.7A
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English (en)
Inventor
Cécile DESTAING
Pascal RENAGLIA
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Original Assignee
Matieres Premieres Internationales SAS
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Publication date
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    • C12Y115/01—Oxidoreductases acting on superoxide as acceptor (1.15) with NAD or NADP as acceptor (1.15.1)
    • C12Y115/01001—Superoxide dismutase (1.15.1.1)

Definitions

  • Veterinary composition comprising superoxide dismutase and at least one protein hydrolyzate rich in bioassimilable peptides
  • the invention relates to the field of animal nutrition and / or veterinary medicine.
  • the present invention relates to a veterinary composition
  • a veterinary composition comprising, in effective amounts, superoxide dismutase (SOD) and at least one protein hydrolyzate rich in bioassimilable peptides.
  • SOD superoxide dismutase
  • fear and anxiety are considered in animals (especially in domestic animals and especially in pets - such as the dog (Canis lupus familiaris) or the cat (Felis silvestris catus). ) and new pets (NAC) - as major emotional disorders, because dogs experiencing these conditions may exhibit behavioral disturbances (also known as behavioral disturbances), that is, unwanted behaviors that may be affect dog-human relationships and unfortunately lead to reactions ranging from abandonment to euthanasia (Bamberger and Houpt 2006, Casey 2002).
  • behavioral disturbances also known as behavioral disturbances
  • Clomipramine is the only psychoactive drug currently approved for the treatment of anxiety in dogs with slow onset of action (Sherman and Mills 2008).
  • a new oral transmucosal absorption gel with dexmedetomidine (alpha 2 adrenergic agonist receptors) is the first treatment for dogs suffering from noise aversion (Korpivaara et al., 2017). Nevertheless, short duration of action (half-life time ranging from 0.5 to 3 hours), precautions for use, warnings, contraindications and other undesirable effects, as well as the obligation to deliver on veterinary prescription are all obstacles to its use (see Sileo Summary of Product Characteristics 2015).
  • a fish hydrolyzate was also evaluated using two different assays and is shown to have some effectiveness in reducing the response / overactive reaction of the dog in response to thunder noise as well as for reducing the secretion of cortisol (Landsberg et al., 2015).
  • Landsberg et al. only succeed in demonstrating a reduction in blood cortisol levels and a decrease in the overactive reaction only in some dogs, in response to an acute and short stressor (in this case the thunder noise) but give no indication as for the anxiolytic potential (prevention, regulation and / or treatment of anxiety) of the fish hydrolyzate tested.
  • the dogs tested in this study are all dogs belonging to the same species, namely beagles of an experimental kennel, a dog population that can not be considered representative.
  • a veterinary composition combining superoxide dismutase and at least one protein hydrolyzate rich in bioassimilable peptides (ie biologically assimilable by an animal organism) successfully allowed:
  • fear and / or anxiety preferably anxiety, particularly in response to mild chronic stressors and / or at least one behavioral disorder, preferably related to fear and / or anxiety, preferably related to anxiety, and
  • animals in particular in domestic animals, preferably in pets such as dogs, cats and / or NACs, advantageously in pets such as the dog and / or the cat.
  • the subject of the invention is a veterinary composition, preferably an orally administrable composition, comprising, in effective amounts (or consisting essentially of effective amounts):
  • superoxide dismutase or at least one source of superoxide dismutase and at least one protein hydrolyzate or at least one preparation based on at least one protein hydrolyzate, said at least one protein hydrolyzate being advantageously free of proteins
  • said protein hydrolyzate being at least one protein hydrolyzate comprising a peptide fraction in which less than 1% by weight of the peptides have a molecular weight greater than or equal to 10,000 Da, preferably in which 100% by weight of the peptides have a molecular weight of less than 10,000 Da, preferably less than 3000 Da, advantageously less than or equal to 1800 Da, preferably less than 1800 Da.
  • said peptide fraction represents at least 50% by weight, preferably more than 50% by weight, preferably at least 55% by weight, advantageously at least 60% by weight, preferably more than 60% by weight, by weight. relative to the total weight of said at least one protein hydrolyzate.
  • the veterinary composition according to the invention comprises at least one source of superoxide dismutase and at least one preparation based on at least one protein hydrolyzate in a ratio by weight (source of superoxide dismutase / preparation for base of at least one protein hydrolyzate) between 0.01 / 100 and 100/1, preferably between 1/100 and 1/10, preferably between 1/100 and 5/100, advantageously between 1/100 and 50 and 2/50.
  • said superoxide dismutase is of plant origin, preferably of fruit origin, advantageously derived from O / ea europeae, Vitis vinifera and / or at least one Cucurbitaceae such as Cucumis melo; preferably said superoxide dismutase consisting of Cucumis melo superoxide dismutase.
  • said at least one protein hydrolyzate is a hydrolyzate of animal proteins, preferably a protein hydrolyzate of at least one marine animal, preferably a fish protein hydrolyzate (s), advantageously a fish protein hydrolyzate ( s) belonging to the family Gadidae.
  • animal proteins preferably a protein hydrolyzate of at least one marine animal, preferably a fish protein hydrolyzate (s), advantageously a fish protein hydrolyzate ( s) belonging to the family Gadidae.
  • the invention also relates to a nutritional composition, a compound feed for animals (such as a complete feed for animals or a complementary feed for animals), a feed for particular nutritional purposes, comprising the veterinary composition according to the invention.
  • the subject of the invention is also a veterinary medicinal product comprising the veterinary composition according to the invention.
  • the present invention also relates to:
  • a veterinary medicinal product for its use (s) as a veterinary medicinal product, particularly in domestic animals, preferably in pets such as dogs, cats and / or NACs, preferably in pets such as the dog and / or the cat.
  • composition according to the invention Another subject of the invention relates to: the composition according to the invention,
  • the nutritional composition the compound feedingstuff, or the feed for particular nutritional purposes, as defined above, and / or
  • the veterinary medicinal product as defined above, to prevent, regulate and / or treat, in animals, especially in domestic animals, preferably in pets such as dogs, cats and / or NACs, advantageously in pets such as the dog and / or cat: fear and / or anxiety, preferably anxiety, particularly in response to mild chronic stressors and / or
  • At least one behavioral disorder preferably related to fear and / or anxiety, advantageously related to anxiety.
  • said at least one behavioral disorder is selected from: attacking action, aggression, destruction, improper disposal, repetitive licking of a body part, action of scratching, astasia, shaking, the act of marking one's territory, aberrant motor behavior, abnormal eating behavior such as polyphagia or polydipsia, dysbody, abnormal sensory profile, abnormal posture, abnormal vocalization, sleep disturbances, loss of expression, loss of sociability and abnormal judgment of situations.
  • the subject of the invention is also:
  • the nutritional composition the compound feedingstuff, or the feed for particular nutritional purposes, as defined above, and / or
  • the veterinary composition according to the invention comprises (or consists essentially of):
  • said composition comprises (or consists essentially of): a) from 0.1 to 20 mg, preferably from 5 to 15 mg, preferably from 9 to 13 mg, advantageously from 10 to 12 mg (per example 1 1 mg), a source of superoxide dismutase, and / or
  • the subject of the invention is also the veterinary composition according to the invention, said composition being administered to the animal in the form of at least one dose (preferably encapsulated within a capsule), preferably in the form of a plurality of doses, said at least one dose comprising (or consisting essentially of): a) from 0.5 to 100 IU, preferably from 20 to 80 IU, preferably from 40 to 65 IU, preferably from 50 to 60 IU (by Example 55IU), superoxide dismutase per kilogram of body weight of said animal, and / or
  • said dose comprises (or consisting essentially of): a) from 0.1 to 20 mg, preferably from 5 to 15 mg, preferably from 9 to 13 mg, advantageously from 10 to 12 mg (for example 11 mg), a source of superoxide dismutase per kilogram of body weight of said animal, and / or b) from 10 to 1000 mg, preferably from 200 to 800 mg, preferably from 400 to 600 mg, advantageously between 450 and 550 mg (for example 500 mg), of said at least one preparation based on said at least one protein hydrolyzate per kilogram of body weight of said animal, preferably said dose comprising a) and b) (or consisting essentially of a) and b)).
  • Another subject of the invention relates to a superoxide dismutase, preferably of plant origin, preferably of fruit origin, advantageously derived from O / ea europeae, Vitis vinifera and / or at least one Cucurbitaceae such as Cucumis.
  • melo preferably consisting of Cucumis melo superoxide dismutase, for:
  • fear and / or anxiety preferably anxiety, and / or
  • At least one behavioral disorder preferably related to fear and / or anxiety, preferably related to anxiety, and / or
  • composition according to the invention not only has advantageous properties in terms of effectiveness, rapidity of action but may, in addition, be administered to an animal without contraindications and without addiction, for example in addition to medicament (s). ) Classical veterinarian (s). Moreover, this composition also has the advantage of being "multi-species”.
  • the composition according to the invention - and the nutritional compositions, compound feeds, complementary feeds, animal feeds intended for particular nutritional purposes, veterinary drugs containing them - comprises at least one excipient and / or additive acceptable from the point of view of food and / or pharmaceutical, added (s) in order to obtain the desired dosage form, preferably administrable orally.
  • Said at least one excipient and / or additive is / are, for example, selected from binders, lubricants, sweeteners, diluents, coating agents, flavorings (natural or synthetic).
  • the invention also relates to solid dosage forms (such as capsules, tablets, chewable tablets, pellets, mixtures of solid and divided particles (for example a non-effervescent powder, etc.)) and liquid dosage forms (solutions, oral suspensions, gels, syrups, liquid compositions capable of being coated in soft or hard capsules, etc.) comprising, consisting essentially of or consisting of the composition according to the invention, said liquid dosage forms being advantageously packaged in sachets (preferably hermetic ) or in sticks (preferably hermetic), in particular for reasons of practicality of administration and to promote the observance of the treatment / cure.
  • solid dosage forms such as capsules, tablets, chewable tablets, pellets, mixtures of solid and divided particles (for example a non-effervescent powder, etc.)
  • liquid dosage forms solutions, oral suspensions, gels, syrups, liquid compositions capable of being coated in soft or hard capsules, etc.
  • said liquid dosage forms being advantageously packaged in sachets (preferably hermetic )
  • liquid dosage forms are broadly defined as any composition or formulation that may take the form of the container that contains it (for example the shape of the sachet or stick mentioned above) but whose volume is determined.
  • these liquid forms include / include, in particular solutions, oral suspensions, gels, syrups.
  • the composition according to the invention is administrable orally.
  • the composition according to the invention is in solid form.
  • the composition according to the invention is in the form of a chewable tablet or a powder (powder form) encapsulated in a capsule, advantageously in the form of a powder encapsulated in a capsule.
  • composition according to the invention comprises at least one excipient selected from the following: microcrystalline cellulose, magnesium stearate, silicon dioxide, brewer's yeast, colloidal silica.
  • excipient selected from the following: microcrystalline cellulose, magnesium stearate, silicon dioxide, brewer's yeast, colloidal silica.
  • the composition according to the invention comprises, as an excipient, microcrystalline cellulose (microcellulose).
  • SOD Superoxide dismutase
  • SOD is a ubiquitous enzyme (ie present in almost all aerobic organisms), different isoforms of this metalloprotein having been subsequently demonstrated, each characterized by
  • a metal ion located at its active site (Cu, Zn, Fe or Mn metal cofactors).
  • Fe SOD iron form
  • the different isoforms of SOD are determined by their sensitivity:
  • Fe SOD is inhibited by H2O2 and low concentrations of SDS.
  • the radical O 2 can hardly cross the plasma membranes, therefore it must be detoxified in the same compartment where it was formed. This phenomenon explains the existence of different cytosolic, mitochondrial and extracellular superoxide dismutase isoforms.
  • Cytosolic CuZn SOD is a soluble enzyme, generally very stable, mainly present in the cytosol of eukaryotic cells (exists in certain bacteria), but also in the chloroplasts of plant cells.
  • Homodimeric intracellular protein its two subunits each contain a Cu 2+ ion and a Zn 2+ ion and their molecular weight varies from 16 to 19 kDa.
  • the spatial organization of the electrostatic field at the surface of the Cu / Zn superoxide dismutase reveals a positively charged region, creating a chasm that leads the superoxide radicals to the copper ion to cause an effective collision.
  • the extracellular form is a glycosylated tetrameric Cu / Zn superoxide dismutase. It is present in mammals, some plants, as well as some prokaryotes. Within the bacteria this enzyme is periplasmic, and is not released into the medium extracellular only following an osmotic shock. Its presence is necessary to protect the cell against the many extracellular 02 sources.
  • Mn SOD is a homodimeric mitochondrial enzyme of 40 to 46 kDa in eukaryotes, in tetrameric form of 110 to 140 kDa in prokaryotes.
  • Fe SOD non-existent in animal tissues, as indicated above, has important homologies, amino acid sequences and structure, with Mn SOD. Homodimeric, each of its subunits contains an iron atom and has a molecular weight of 23 kDa, it can also be found in tetrameric form in mammals.
  • free radicals such as reactive oxygen species (ORS).
  • ORS reactive oxygen species
  • the increase in the level of free radicals causes numerous non-reversible damage to the cells of the body, such as peroxidation of membrane lipids, mitochondrial degradations, protein oxidation and alterations of the DNA.
  • free radicals can induce mutagenic effects or the stop of DNA replications (base alteration, DNA-protein bridging, strand breaks, cross-links).
  • the OH radicals are the main cause of the damage. They come from the Fenton reaction, in the presence of ferrous iron chelated to certain amino acids or phosphate groups of DNA. Very reactive, they react immediately on their formation sites, that is to say the nucleotide part with which they are directly in contact. These active forms of oxygen are also responsible for enzymatic inactivations, fragmentation of macromolecules, formation of dimers or protein aggregates in cytoplasmic membranes.
  • oxidative stress is the essential initial cause of many pathologies such as cancers, pulmonary edema, acute pulmonary distress syndrome, amyotrophic lateral sclerosis, pro-inflammatory and cardiovascular diseases, neurological disorders, fibrosis, diabetes, cellular aging, Alzheimer's disease, rheumatism or accelerated aging.
  • Oxidative stress is also a factor that potentiates the genesis of multifactorial diseases such as diabetes, Alzheimer's disease, rheumatism and cardiovascular diseases.
  • the enzymatic activity of SOD makes it possible to reduce the quantity of superoxide anions present in the body and, consequently, to prevent and / or inhibit the oxidative damage that can be caused by oxidizing molecules derived from the superoxide anion.
  • oxidizing molecules derived from the superoxide anion such as the hydroxyl radical or peroxynitrite.
  • the veterinary composition according to the invention comprises superoxide dismutase of plant origin, preferably superoxide dismutase from OIea europeae (as mentioned in the patent application FR-A-3003165, the content of which is incorporated by reference), Vitis vinifera (as mentioned in patent application FR-A-3003164, the content of which is incorporated by reference) and / or Cucurbitaceae such as melon (Cucumis melo); preferably, said superoxide dismutase is derived from Cucumis melo.
  • superoxide dismutase of plant origin preferably superoxide dismutase from OIea europeae (as mentioned in the patent application FR-A-3003165, the content of which is incorporated by reference), Vitis vinifera (as mentioned in patent application FR-A-3003164, the content of which is incorporated by reference) and / or Cucurbitaceae such as melon (Cucumis melo);
  • the veterinary composition according to the invention comprises at least one source of superoxide dismutase, preferably of plant origin (advantageously of fruit origin and preferably from at least one Cucurbitaceae such as Cucumis melo).
  • said at least one source of superoxide dismutase consists of at least one preparation (for example at least one extract) comprising superoxide dismutase, preferably of plant origin (advantageously of fruit origin and preferably from at least one Cucurbitaceae such as Cucumis melo).
  • said at least one preparation is a preparation based on European OIEea, Vitis vinifera and / or at least one Cucurbitaceae such as Cucumis melo (advantageously based on Cucumis melo); said preparation advantageously containing superoxide dismutase in a proportion of at least 100 IU / g dry matter of said preparation (for example of the extract), preferably of at least 1000 IU / g of dry matter of said preparation, preferably at least 3000 IU / g dry matter of said preparation and, particularly preferably, at least 5000 IU / g dry matter of said preparation.
  • the enzymatic unit (symbol U or U1) is a unit of enzymatic activity representing the amount of enzyme required to treat a micromole of substrate in one minute under operating conditions (pH, temperature, solution parameters).
  • the value generally corresponds to the optimum conditions for enzymatic activity, but the values are sometimes standardized at 30 ° C in order to allow comparisons between enzymes.
  • an extract preferably a protein extract, advantageously water-soluble
  • a Cucumis melo having a production plateau is used.
  • the ethylenic crisis for at least five days, preferably for at least seven days (i.e., the production of ethylene has a plateau which may be at least five days and preferably at least seven days).
  • the ethylenic crisis in Cucumis melo is very important and soon after, the fruit begins to disorganize and its market value decreases.
  • the ethylene emission has a stable plateau, preferably for at least five days after the ethylenic crisis and even more advantageously for at least seven days.
  • the above-mentioned protein extract may in particular be obtained from the 95LS444 cell line or from one of the hybrid lines derived from 95LS444 and more particularly from the Vauclusien Clipper and Supporter type commercial varieties. Indeed, from the line 95LS444 of Cucumis melo whose seeds were deposited in accordance with the Budapest Treaty in the NCIMB collection (National Collection of Industrial and Marine Bacteria-Aberdeen AB2 IRY (Scotland - UK) 23 St.
  • hybridization can be obtained by obtaining other varieties of Cucumis melo, for example varieties of the Vauclusien, Clipper and Supporter type having the same characteristics making it possible to lead to the above-mentioned protein extracts.
  • the composition according to the invention comprises as a source of SOD (for example as sole source of SOD) a concentrate of lyophilized melon juice and coated with at least one oil, for example coated with webbed.
  • the composition according to the invention comprises as a source of SOD (for example as sole source of SOD) the product EXTRAMEL ® microgranules (form (s) M and / or S).
  • This product is a freeze-dried melon juice extract obtained by physical treatment (melon grinding, pulp recovery, centrifugation, filtration, lyophilization) of a specific variety of melon (non-GMO, Clipper variety, from one of the hybrid lines derived from the aforesaid 95LS444 cell line) (see FR-B-2716884, the content of which is incorporated by reference), which contains enzymatic antioxidants, mainly SOD (90 IU / mg), measured according to the method of Oberley and Spitz, and, to a lesser extent, catalase (10 IU / mg), which was determined according to the Clairbone method.
  • the powdered melon juice, coated with palm oil, which contains 14 IU of SOD / mg of powder is called EXTRAMEL® microgranules and is manufactured by Bionov Co. (France).
  • the product EXTRAMEL ® microgranules is obtained by coating the concentrate of melon pulp (Cucumis melo) (20%) with palm oil, a vegetable fat (80%).
  • the product is a natural and effective source of natural antioxidants and in particular antioxidant enzymes such as superoxide dismutase (SOD) and catalase.
  • the SOD content in the EXTRAMEL ® microgranules product is 14,000 IU / g.
  • the composition according to the invention comprises, as source of SOD (and advantageously as sole source of SOD), the product SOD B Primo-antioxidant® (5UI / mg), in its form (s) M and / or S, advantageously in its M form.
  • SOD B Primo-antioxidant® 5UI / mg
  • This product manufactured by Bionov Co. (France) is a juice concentrate of Cucumis melo L. (non-GMO proprietary variety of Cantaloupe melon 5 to 10 times more concentrated in SOD. that a conventional variety) lyophilized and coated with palm oil and containing 5 IU of SOD / mg of powder.
  • the veterinary composition according to the invention comprises a mixture of plant-derived superoxide dismutases, consisting essentially of three superoxide dismutases: a manganese superoxide dismutase, a copper and zinc superoxide dismutase and a superoxide dismutase with iron present in at least two isoforms, the first iron superoxide dismutase isoform with a molecular weight of between 28,000 and 36,000 Da, the second iron superoxide dismutase isoform with a molecular weight between 75,000 and 85,000 Da said mixture being capable of being obtained from an extract of the Cucumis Melo MA 7950 hybrid variety F1 or its cells cultured in vitro or by transfer and expression of the genes of these SODs in prokaryotic or eukaryotic cells.
  • said mixture has a total SOD activity greater than or equal to 130 U / mg of said mixture.
  • the first iron superoxide dismutase isoform has a molecular weight of about 32,200 Da.
  • the second iron superoxide dismutase isoform has a molecular weight of about 79,800 Da.
  • the cumulative SOD activity of the two isoforms of iron superoxide dismutases is between 20% and 26%, advantageously between 22% and 26% of the total SOD activity of the mixture.
  • the cumulative SOD activity of the two iron superoxide dismutase isoforms is between 20% and 26% of the total SOD activity of the mixture
  • the activity of copper and zinc superoxide dismutase is between 60% and 70% of the total SOD activity of the mixture
  • the activity of the manganese superoxide dismutase is between 7 and 12% of the total SOD activity of the mixture.
  • the manganese superoxide dismutase has a molecular weight between 70,000 and 90,000 Da and copper and zinc superoxide dismutase has a molecular weight between 27,000 and 33,000 Da.
  • the mixture of the three superoxide dismutases may be obtained by grinding or pressing in an aqueous medium, preferably at a pH of from 5 to 9, of the Cucumis Melo MA 7950 hybrid F1 variety. or of its cells cultured in vitro or by transfer and expression of the genes of these SOD in prokaryotic or eukaryotic cells and recovery of the supernatant and purification by chromatography, in particular by IMAC chromatography.
  • the Cucumis melo MA 7950 hybrid variety Fl whose seeds were deposited according to the Budapest Treaty in the NCIMB collection ( National Collection of Industrial and Marine Bacteria-ABERDEEN AB2 IRY (Scotland - UK) Ferguson Building Craibstone Estate Bucksburn), July 8, 2013, under the number NCIMB 42154, has unique features in appearance, stress resistance and durability.
  • SOD composition This SOD blend has superior antioxidant properties to other SOD blends from other plant sources, including other varieties of melon.
  • the veterinary composition according to the invention comprises at least one protein hydrolyzate rich in bioassimilable peptides, namely preferably free of proteins and whose peptide fraction has the following molecular profile:
  • peptides less than 1% by weight of the peptides have a molecular weight greater than or equal to 10,000 Da, and preferably
  • 100% by weight of the peptides have a molecular weight of less than 10,000 Da, preferably less than 3,000 Da, advantageously less than or equal to 1,800 Da, preferably less than 1,800 Da.
  • the protein hydrolyzate that can be used in the veterinary composition according to the invention can be described as a protein hydrolyzate rich in bioassimilable peptides (ie biologically assimilable by an animal organism), because of the relatively low molecular weight peptides constituting the peptide fraction of said hydrolyzate.
  • said peptide fraction represents at least 50% by weight, preferably more than 50% by weight, preferably at least 55% by weight, advantageously at least 60% by weight, preferably more than 60% by weight. by weight, relative to the total weight of said at least one protein hydrolyzate.
  • the molecular weight distribution (expressed as a percentage by weight relative to the total weight of the peptide fraction of the hydrolyzate) of the protein hydrolyzate rich in bioassimilable peptides that can be used in the veterinary composition.
  • Table 1 the profile presented in Table 1 below:
  • the molecular weight distribution (expressed as a percentage by weight relative to the total weight of the peptide fraction of the hydrolyzate) of the aforesaid protein hydrolyzate rich in bioassimilable peptides has the profile defined in the following Table 2:
  • the protein hydrolyzate that can be used in the veterinary composition according to the invention comprises the following amino acids: aspartic acid, threonine, serine, glutamic acid, proline, glycine, alanine, cystine, methionine, isoleucine, leucine, tyrosine, phenylalanine , lysine, histidine, arginine and tryptophan.
  • the protein hydrolyzate that may be used in the composition according to the invention may be a hydrolyzate of vegetable proteins or of animal proteins.
  • it is a hydrolyzate of animal proteins.
  • said protein hydrolyzate is a hydrolyzate of animal protein / marine animal (s).
  • the above-mentioned protein hydrolyzate is different from a milk protein hydrolyzate (for example a whey hydrolyzate such as a bovine whey hydrolyzate).
  • the hydrolyzate of proteins of interest is obtained by hydrolysis, preferably by enzymatic hydrolysis, advantageously by so-called “controlled” or “controlled” enzymatic hydrolysis of at least one protein source of at least one type. Hydrolysis is continued until the hydrolyzate is obtained, the peptide fraction of which corresponds to the molecular profile as defined above.
  • Stopping the enzymatic hydrolysis can be obtained by inactivating the proteases by raising the temperature of the reaction mixture, preferably at a temperature not exceeding 100 ° C., in particular between 85 and 95 ° C., preferably of the order of 90 ° C. This operation is usually conducted for a period of 5 to 20 minutes.
  • the composition according to the invention comprises a preparation based on at least one protein hydrolyzate rich in bioassimilable peptides, and more particularly based on at least one fish hydrolyzate, namely comprising, in on said protein hydrolyzate rich in bioassimilable peptides, at least one suitable excipient (for example selected from maltodextrin and colloidal silica).
  • a suitable excipient for example selected from maltodextrin and colloidal silica.
  • Hydrolyzate of animal protein / marine animal is a protein hydrolyzate of fish, molluscs and / or crustaceans.
  • this protein hydrolyzate comes from marine animal tissues (in particular fish, molluscs and / or crustaceans) rich in collagen.
  • the veterinary composition according to the invention comprises a hydrolyzate of fish protein (s), advantageously a hydrolyzate of fish protein (s) belonging to the family of Gadidae, fish of cold seas.
  • this hydrolyzate of fish protein (s) is obtained from a selection of one or more (preferably several) eviscerated fish of the family of Gadidae caught in the North Atlantic: Brosme, Cod, Sulfur, Yellow Pollock , Ling, Slingshot, Moruette, Hake, Merluchon, Whiting, Haddock, Grenadier, Pout, Loche, Congre.
  • the fish protein hydrolyzate (s) that can be used in the veterinary composition according to the invention comprises a peptide fraction comprising peptides and amino acids.
  • the proteins represent less than 1% by weight, preferably less than 0.5% by weight, of the peptide fraction of the hydrolyzate of fish protein (s).
  • the hydrolyzate of fish protein (s) is devoid of proteins (residual proteins).
  • the peptide fraction of the fish protein hydrolyzate (s) used in the veterinary composition according to the invention is, for example, the protein hydrolyzate of fish subject of the French patent application FR-A-3036923, the content is incorporated by reference.
  • the peptide fraction of the fish protein hydrolyzate (expressed as a ratio by weight relative to the total weight of the peptide fraction) has the following molecular profile:
  • this molecular profile of the peptide fraction is typically determined by high performance liquid chromatography coupled to mass spectrometry, on a Shodex KW-802.5 silica gel separating column previously calibrated on reference molecules.
  • the molecular profile of the peptide fraction of the fish protein hydrolyzate that can be used in the veterinary composition according to US Pat. invention has the following distribution (expressed in weight ratio relative to the total weight of the peptide fraction of the hydrolyzate):
  • 35 to 45% of the molecules have a molecular weight between 500 and 1500 Da
  • the molecular weight distribution (expressed as a percentage by weight relative to the total weight of the peptide fraction of the hydrolyzate) of the fish protein hydrolyzate that can be used in the veterinary composition according to US Pat.
  • the present invention presents the profile presented in Table 3 infra:
  • the molecular weight distribution (expressed as a percentage by weight relative to the total weight of the peptide fraction of the hydrolyzate) of the above-mentioned fish protein hydrolyzate has the profile defined in the following Table 4:
  • the fish protein hydrolyzate comprises at least one peptide selected from IGP (isoleucine-glycine-proline), LGP (leucine-glycine-proline), VY (valine-tyrosine) and RP (arginine-proline) ).
  • the fish protein hydrolyzate that can be used in the veterinary composition according to the invention comprises up to 25% and, preferably, up to 20% (for example less than 20%) of amino acids. free, relative to the number of total amino acids.
  • the fish proteins ie the raw raw material
  • the fish protein hydrolyzate that can be used in the veterinary composition according to the invention comprises:
  • an amino nitrogen / total nitrogen ratio of between 25 and 40%, especially between 30 and 34%;
  • said hydrolyzate comprises a carbohydrate content of less than 0.2% and especially less than 0.1%, especially less than 0.05% and particularly preferably less than 0.002% by weight relative to weight. total dry extract of the hydrolyzate.
  • the hydrolyzate of the invention is devoid of carbohydrates.
  • the fish protein hydrolyzate that can be used within the veterinary composition according to the invention may be combined with one or more additional edible compounds chosen for example from an oil (vegetable and / or fish), a vitamin (such as vitamin B1), or a mineral element. It is thus possible to use a purified fish meat oil.
  • An oil rich in omega-3 preferably containing at least 25% omega-3 is preferably chosen.
  • the mineral element is at least one trace element such as copper.
  • the additional compounds optionally added to the hydrolyzate of the invention are advantageously chosen from compounds that are edible by animals, especially pets or livestock, and more preferably by the dog (typically Canis lupus familiaris) or the cat (Felis silvestris catus).
  • the nutritional composition may further include ingredients suitable for use as a nutritional supplement such as binders, pulverulent vehicles (such as maltodextrin), flavoring agents, preservatives or dyes.
  • the composition according to the invention comprises a preparation based on at least one protein hydrolyzate rich in bioassimilable peptides, and more particularly based on at least one fish hydrolyzate. i.e. comprising, in addition to said protein hydrolyzate rich in bioassimilable peptides, at least one excipient (preferably selected from: maltodextrin and colloidal silica).
  • this preparation based on at least one protein hydrolyzate rich in bioassimilable peptides (and more particularly based on fish protein hydrolyzate) is GABOLYSAT ® (and in particular GABOLYSAT ® PTP). ), the description of which is presented below (Table 5):
  • the hydrolyzate of fish proteins of interest is obtained by hydrolysis, preferably by enzymatic hydrolysis, advantageously by so-called "controlled” or “controlled” enzymatic hydrolysis of at least one protein source of at least one type (or of at least one species) of fish.
  • a source of fish protein corresponding to the raw material
  • tissues of at least one type of fish of the Gadidae family preferably at least two types of fish of the family of the Gadidae
  • Whole fish or some fish tissue are used. It is also possible to use co-products from the fish industry as raw material.
  • the fish are eviscerated (or emptied), that is, their abdominal wall has been opened longitudinally, the viscera removed and the abdominal cavity cleaned.
  • the fish can be overhead.
  • This raw material is advantageously added with water at a rate of 20 to 25% by weight, relative to the total weight of the raw material. Acidified water having a pH of 4.5 to 6 may be used.
  • the hydrolyzate according to the invention is thus the result of a treatment during which certain peptide bonds of the proteins are broken.
  • the method according to the invention is characterized in that it comprises:
  • a grinding step of said at least one source of fish protein is optionally, a grinding step of said at least one source of fish protein.
  • a step of enzymatic hydrolysis of the fish protein source preferably at a temperature ranging from 45 ° to 65 ° C. This step is typically carried out with stirring.
  • the hydrolysis is carried out at a constant pH ranging from 4.5 to 6, generally for a duration ranging from 2 to 6 hours.
  • endogenous protease any naturally occurring protease in the source of fish protein used (typically any protease that is naturally contained in the fish flesh used).
  • exogenous protease any exogenous enzyme, that is to say added to the source of fish protein, and capable of hydrolyzing the proteins of the selected raw materials which are subjected to the hydrolysis treatment .
  • the proteases used must be compatible with a food use of the hydrolyzate in animals and especially in dogs or cats. It is in particular possible to use one or more proteases of marine or bacterial origin.
  • at least one enzyme, or a mixture of enzymes, naturally occurring in fish (that is naturally occurring in fish) is used as the exogenous protease.
  • the following enzymes or enzyme mixtures may be used: fish intestinal mucosa extract, fish pancreatic extract, chymosin, trypsin, chymotrypsin, papain, alone or in admixture (s).
  • the enzymes (proteases) or the exogenous enzyme mixture are added after the heating step.
  • the hydrolysis is continued until the hydrolyzate having the molecular profile as defined above is obtained. Stopping enzymatic hydrolysis can be achieved by inactivation of proteases by raising the temperature of the reaction mixture, at a temperature not exceeding 100 ° C, in particular between 85 and 95 ° C, preferably of the order of 90 ° C. This operation is usually conducted for a period of 5 to 20 minutes.
  • This separation can be carried out by filtration (for example on a filter of the order of 400 ⁇ m) and / or by centrifugation.
  • the centrifugation can be carried out at a speed of between 4000 and 7000 revolutions per minute (revolution per minute or rpm).
  • the resulting pellet is then removed.
  • the separation of the protein hydrolyzate is carried out by filtration of the reaction mixture followed by centrifugation. Filtration of the reaction medium makes it possible to remove the solids.
  • a dehydration step of the hydrolyzate is carried out after step 3).
  • This dehydration step is generally carried out by concentration under vacuum. It typically provides a paste, preferably containing at least 55% solids.
  • a low temperature drying step of the hydrolyzate by lyophilization or by atomization, can be carried out.
  • the recovery of the hydrolyzate in powder form may involve operations known to those skilled in the art such as: concentration under vacuum, drying at low temperature, grinding and the like.
  • the hydrolyzate is thus recovered in the form of a powder which preferably contains 15% or less, in particular at least 10%, for example between 5 and 10% and more preferably 5% or less by weight of moisture, relative to the weight total of the hydrolyzate in powder form.
  • the drying occurs by atomization.
  • the protein hydrolyzate is then typically pulverized in an enclosure in which the air has been previously heated so that the water evaporates.
  • the powder obtained is separated from the water vapor and collected at the end of the drying step. 6)
  • the hydrolyzate may be packaged in the form of a pulp concentrated to at least 55% of dry extract.
  • hydrolysates may be incorporated in food products (especially before extrusion) or in nutritional compositions (ie, nutritional supplements).
  • Peptide fraction is meant that part of the protein hydrolyzate comprising nitrogen compounds consisting of amino acids (thus including peptides and free amino acids). These compounds are water-soluble molecules.
  • peptide is meant a polymer comprising at least 2 amino acids connected to each other by peptide bonds.
  • a peptide comprises less than 100 amino acids and has a molecular weight generally of less than 1000 Da, preferably less than 10,000 Da.
  • Protein refers to a polypeptide comprising one or more peptide chains and having a three-dimensional organization in space. Typically, a protein comprises at least 120 amino acids and has a molecular weight greater than 15,000 Daltons (Da).
  • proteide has its accepted meaning in biochemistry, ie, accepted in biochemistry and nutrition. It designates amino acids and all their oligomers and polymers, namely: oligopeptide, dipeptide, tripeptide, tetrapeptide, pentapeptide, octapeptide, nonapeptide, decapeptide, polypeptides and proteins.
  • a domestic animal is an animal living in or near the home of the human being, raised and fed therein, bred in captivity and altered from the wild form living in the wild and protected by the man in exchange for his productions (production animal or farm animal) or his only presence, for its beauty, or for the pleasure (songbirds, racing pigeons, ).
  • the dog Canis lupus familiaris
  • the cat Felis silvestris catus
  • the horse Equus ferus caballus or Equus caballus
  • the domestic animal is defined in French law as an animal belonging to "a species that has undergone continuous and constant selection pressure (that is to say, which has object of domestication). This allowed the formation of a group of animals that acquired stable characters, genetically heritable.
  • Pet. A pet is an animal receiving human protection in exchange for its presence, its beauty, its joviality or for its talents (songbirds, speakers ). Because of their very long presence on the side of man, these pets have often been subject to domestication as a result of their taming. However, they are distinguished from the domestic animal living simply in the vicinity of the house, simple commensal of the man as the working dog, and as opposed to so-called "production animals” used for their meat, their milk or their eggs such as cows or hens. In Western countries, the main pets are the cat and the dog which, with the ferret, are animals classified as "domestic carnivores".
  • New pets are pets belonging to species other than the dog and / or cat.
  • NACs include ferrets, rabbits, birds, rodents, fish, reptiles, amphibians, insects and spiders, or even pigs, fennecs or monkeys held by humans as animals. approval, with the specific purpose of making them pets.
  • fear is considered a state of alertness and agitation caused by a present or threatening danger (Sherman and Mills, 2008).
  • anxiety is a response to a potential or imagined danger or uncertainty (Sherman and Mills, 2008).
  • Behavioral disorder also referred to as behavioral disorder.
  • Behavioral disorders are anomalies in the way of acting and reacting.
  • the present invention aims in particular to prevent, regulate and / or treat the following behavioral disorders: the action of attack, aggression, destruction, inappropriate elimination, the action of licking a part of the body to repetition, the action of scratching, astasia (impossibility to keep the standing), the action of trembling, the action of marking one's territory, a behavior aberrant motor, abnormal eating behavior such as polyphagia (excessive eating, which is not limited by the feeling of satiety) or polydipsia (feeling of excessive thirst despite excessive fluid intake), dysbody (difficulty to perform the movements necessary for walking), an abnormal sensory profile, abnormal posture, abnormal vocalization, sleep disorders, loss of expression, loss of sociability and abnormal judgment of situations.
  • Behavior disorders in an animal can be extremely problematic, as these disorders can result in irreversible reactions ranging from abandonment to euthanasia of the animal concerned.
  • the present invention also relates to a compound animal feed comprising the veterinary composition according to the invention.
  • a compound feedingstuff "means a mixture of at least two feed materials, whether or not containing additives for animal feed.
  • animal feed which is intended for animal feed by the oral route, in the form of:
  • the invention also relates to a "complete feed for animals" which comprises the veterinary composition according to the invention as such, defined by the aforesaid EC Regulation No. 767/2009 as a compound feed for animals which, because of its composition , is enough to ensure a daily ration.
  • the complete animal feed comprising the veterinary composition according to the invention may also be considered as a "feed for particular nutritional purposes".
  • Complementary feed for animals also relates to a veterinary nutritional composition or a complementary feed for animals comprising the veterinary composition according to the invention.
  • a veterinary nutritional composition or a complementary feed for animals comprising the veterinary composition according to the invention.
  • 'complementary feed for animals' means a compound feedingstuff which is high in certain substances but which, because of its composition, ensures the daily ration only if it is combined with other feedstuffs.
  • the complementary feed for animals comprising the veterinary composition according to the invention may also be considered as a "feed for particular nutritional purposes".
  • Animal feed for particular nutritional purposes Animal feed capable of meeting a particular nutritional purpose because of its particular composition or manufacturing process, which clearly distinguishes it from ordinary animal feed. It can be a complete food or a complementary food.
  • the expression "particular nutritional objective” designates an objective which consists in satisfying the specific nutritional requirements of animals whose assimilation process, absorption process or metabolism. is or may be temporarily or irreversibly disturbed and, as a result, may benefit from ingestion of animal feed appropriate to their condition.
  • the invention also relates to a veterinary functional food comprising the veterinary composition according to the invention.
  • Example 1 Process for preparing capsules comprising the veterinary composition according to the invention
  • the method of preparation described below relates to a production of 1470 pill boxes of 60 capsules each.
  • the active ingredients used in the composition according to the invention are the following: GABOLYSAT ® PTP 55 (fish protein hydrolyzate preparation) SOD B Primo-antioxidant ® M (5UI / mg) (freeze-dried melon juice concentrate and coated with palm oil)
  • the raw materials used as excipients in the composition according to the invention are as follows:
  • the raw materials described in point A supra are weighed individually and then mixed according to any suitable method known to those skilled in the art. If necessary, a raw material may be milled and / or sieved before mixing.
  • the final mixture is bagged and stored in a positive temperature.
  • the capsules used are 720 mg capsules (reference: milgel 4282).
  • the dosage per capsule is as follows: - GELULE T00 GELATINE WHITE: weight 120 mg
  • a sample of capsules is made by the quality department. Analyzes are performed according to the internal control plan.
  • the loose capsules are packaged in bags, then in casks for storage in positive temperature.
  • the loose capsules are packaged in pilluliers of 60 capsules according to the work instruction associated with the station.
  • the packaging products are as follows:
  • the pilluliers are counted, then put in cartons for storage in positive temperature.
  • the test product is a complementary food (abbreviated as "supplement") in the form of a capsule containing 500 mg of a fish protein hydrolyzate preparation (GABOLYSAT ® PTP 55) and 11 mg of SOD B Primo-antioxidant ® M (5 IU / mg).
  • the main excipient of this dietary supplement is microcrystalline cellulose, said dietary supplement containing 81.5 mg.
  • the process for preparing the tested product (S) is that presented in Example 1 supra.
  • the placebo is a capsule of the same size as that containing the complement, comprising 445 mg / microcrystalline cellulose capsule, and obtained by adapting the preparation method presented in Example 1 supra.
  • Complement / placebo was given daily to the dog during the study (ie for 30 days), starting the day after the first test.
  • the supplement was given to 18 dogs and the placebo to 21 dogs.
  • the dogs were tested 3 times for a period of 30 days (at day 0 - at day 15 - at day 30).
  • the dog / dog enters the room without a leash, without his mistress / master, and the door is closed by an assistant of the experimenter.
  • the test lasted a total of 6 minutes and 50 seconds and was divided into 4 subtests.
  • the test was recorded using a CANON camera (EOS 700D), and the videos were then analyzed.
  • the experimenter recorded the duration of each subtest using a stopwatch.
  • Sub-test 1 Exploring a new environment (3 minutes). The experimenter remains seated on a seat within Experimenter Zone (E) without any physical or visual contact. The dog is left free to explore the entire room.
  • Subtest 2 Interaction with an unknown person (2 minutes). The experimenter gets up from the chair, retrieves 2 balls and a rope and stays in a low position in the play area (P). He / she calls the dog and invites him to play 3 times.
  • Subtest 3 High noise (1 minute 20 seconds). The experimenter makes a sudden noise that lasts 20 seconds. This corresponds to a vacuum noise of 85 dB (CD Clix®). A conventional CD player was used and a calibration was performed in an acoustic field using a precision sound level meter (2235 sound level meter with a 2235 + 1 / 3- 1/1 Octave Filter Set microphone). type 1626, Brüel & Kj ⁇ r Sound & Vibration Measurement A / S, N ⁇ rum, Denmark). After passing the noise, the experimenter sits for a minute.
  • Subtest 4 Reaction to a new object (30 seconds). From a seat, the experimenter directs a remote control car and places it in zone X. The dog is observed during all this time. The dogs were tested at day 0, day 15 and day 30. For subtest 2, the experimenter was changed at each session to prevent the dog from becoming accustomed to the presence of the dog. experimenter. For subtest 4, the same unpublished object was used three times (the remote control car) so that the dog could get used to the object.
  • the averages are expressed with ⁇ SD.
  • the number of zone crossings decreased at day 30 compared to day 0, indicating that dogs were less active at day 30. This could indicate that dogs were more stressed at day 30 (less activity).
  • the touch of the unpublished object (subtest 4) often showed differences between the three sessions: on day 0, the dogs generally hit the object more than the day 15 and the day 30. This could indicate, of the same way as for the zone crossing, that the dogs were more stressed on day 15 and day 30.
  • Complement appears to facilitate dog-human interactions and reduce emotionality in interactions with humans.
  • the number of zone crossings decreased on day 30 compared to day 0, indicating that dogs were less active on day 30. This could indicate that dogs were more stressed at day 30 (less activity).
  • the supplement tested is therefore effective to reduce stress, fear and / or anxiety reactions (especially in the context of daily stressors), and promote learning processes.
  • Araujo et al 2010 ANXITANE® Tablets reduce fear of human beings in a laboratory model of anxiety-related behavior journal of veterinary behavior 2010 5, 268-275

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Abstract

Composition vétérinaire comprenant, en quantités efficaces, de la superoxyde dismutase et au moins un hydrolysat de protéines riche en peptides bioassimilables.

Description

Composition vétérinaire comprenant de la superoxyde dismutase et au moins un hydrolysat de protéines riche en peptides bioassimilables
Domaine technique
L’invention concerne le domaine de la nutrition animale et/ou de la médecine vétérinaire.
En particulier, la présente invention concerne une composition vétérinaire comprenant, en quantités efficaces, de la superoxyde dismutase (SOD) et au moins un hydrolysat de protéines riche en peptides bioassimilables.
Etat de la technique
La peur est considérée comme un état d’alerte et d’agitation causé par un danger présent ou menaçant (Sherman et Mills, 2008). L’anxiété, quant à elle, est une réponse à un danger éventuel ou imaginé ou à une incertitude (Sherman et Mills, 2008).
Tout comme chez l’homme, la peur et l’anxiété sont considérées chez l’animal (en particulier chez les animaux domestiques et notamment chez les animaux de compagnie - tels que le chien ( Canis lupus familiaris) ou le chat (Felis silvestris catus) et les nouveaux animaux de compagnie (NAC) - comme des troubles émotionnels majeurs. En effet, des chiens faisant l’expérience de ces conditions peuvent présenter des troubles du comportement (également dénommés troubles comportementaux), à savoir des comportements non désirés qui peuvent affecter les relations homme-chien et malheureusement engendrer des réactions allant de l’abandon à l’euthanasie (Bamberger et Houpt, 2006 ; Casey, 2002).
La clomipramine est l’unique psychotrope autorisé à ce jour pour le traitement de l’anxiété, chez le chien avec un délai d’action lent (Sherman et Mills, 2008). Un nouveau gel à absorption transmucosale orale avec de la dexmédétomidine (récepteurs alpha 2 adrénergiques agonistes) est le premier traitement pour les chiens souffrant d’une aversion au bruit (Korpivaara et al., 2017). Néanmoins, de courtes durées d’action (temps de demi-vie allant de 0,5 à 3 heures), des précautions d’utilisation, avertissements, contre-indications et autres effets indésirables, ainsi que l’obligation de délivrance sur prescription vétérinaire, sont autant de freins à son utilisation (cf. Sileo Summary of Product Characteristics 2015).
Au regard de ces difficultés et autres inconvénients, divers produits/compléments possédant de potentiels effets anxiolytiques ont été testés tels que l’alpha-casozépine (Beata et al., 2007 ; Palestrini et al., 2010), la l-théanine (Araujo et al., 2010), la phéromone d’apaisement du chien (Denenberg et Landsberg, 2008), une combinaison de tryptophane et d’alpha- casozépine (Kato et al., 2012). Un hydrolysat de poissons a également été évalué à l’aide de deux dosages différents et est présenté comme ayant une certaine efficacité concernant la réduction de la réponse/réaction hyperactive du chien en réponse au bruit du tonnerre ainsi que pour la réduction de la sécrétion de cortisol (Landsberg ét al., 2015). Toutefois, Landsberg et al. parviennent seulement à mettre en évidence une réduction des taux de cortisol sanguins et une diminution de la réaction hyperactive uniquement chez certains chiens, en réponse à un facteur de stress aigu et court (en l’espèce le bruit du tonnerre) mais ne donnent aucune indication quant au potentiel anxiolytique (prévention, régulation et/ou traitement de l’anxiété) de l’hydrolysat de poissons testé. De surcroît, les chiens testés dans cette étude sont tous des chiens appartenant à une même espèce, à savoir des beagles d’un chenil expérimental, population canine qui ne peut pas être considérée comme représentative.
Par ailleurs, un effet anti-stress et anti-fatigue sur des individus humains sains est reporté à l’issue d’un essai clinique contrôlé randomisé en double aveugle contre placebo d’un complément alimentaire administrable per os comprenant un concentré de jus de melon riche en superoxyde dismutase (EXTRAMEL®) (Milesi et al., 2009). Ce concentré de jus de melon riche en superoxyde dismutase a été validé pour ses propriétés antioxydantes et anti- inflammatoires (Vouldoukis et al., 2004 ; Muth et al., 2004).
Dans le domaine vétérinaire, une étude pilote réalisée sur 24 chevaux a montré des effets antioxydants de la superoxyde dismutase sur le sang et sur la fonction musculaire sans aucun effet secondaire (Notin, 2010). En outre, toujours dans le domaine vétérinaire, Lallès et al. (2010) observent qu’un concentré de pulpe de melon riche en superoxyde dismutase permet d’obtenir une diminution de certains marqueurs du stress oxydatif le long du tractus gastrointestinal chez des porcelets sevrés. Toutefois, Lallès et al. ne suggèrent aucunement une quelconque corrélation entre l’administration per os d’un concentré de pulpe de melon riche en superoxyde dismutase et la prévention, la régulation et/ou le traitement, chez les porcelets, de la peur et/ou de l’anxiété ou d’au moins un trouble du comportement, en particulier lié à la peur et/ou à l’anxiété.
Les inventeurs ont découvert qu’une composition vétérinaire combinant de la superoxyde dismutase et au moins un hydrolysat de protéines riche en peptides bioassimilables (à savoir biologiquement assimilables par un organisme animal) permettait, avec succès :
i) de prévenir, réguler et/ou traiter, chez l’animal, en particulier chez l’animal domestique (de préférence chez l’animal de compagnie tel que le chien, le chat et/ou les nouveaux animaux de compagnie, préférablement chez l’animal de compagnie tel que le chien et/ou le chat) :
la peur et/ou l’anxiété, de préférence l’anxiété, en particulier en réponse à des facteurs de stress légers chroniques et/ou au moins un trouble du comportement, préférablement lié à la peur et/ou à l’anxiété, avantageusement lié à l’anxiété, et
ii) d’améliorer les procédés d’apprentissage chez l’animal, en particulier chez les animaux domestiques, de préférence chez les animaux de compagnie tels que le chien, le chat et/ou les NAC, avantageusement chez les animaux de compagnie tels que le chien et/ou le chat.
Par conséquent, l’invention a pour objet une composition vétérinaire, de préférence administrable par voie orale, comprenant, en quantités efficaces (ou consistant essentiellement en, en quantités efficaces):
de la superoxyde dismutase ou au moins une source de superoxyde dismutase, et au moins un hydrolysat de protéines ou au moins une préparation à base d’au moins un hydrolysat de protéines, ledit au moins un hydrolysat de protéines étant avantageusement dépourvu de protéines, ledit au moins un hydrolysat de protéines comprenant une fraction peptidique dans laquelle moins de 1 % en poids des peptides ont un poids moléculaire supérieur ou égal à 10 000 Da, de préférence dans laquelle 100% en poids des peptides ont un poids moléculaire inférieur à 10 000 Da, préférablement inférieur à 3 000 Da, avantageusement inférieur ou égal à 1 800 Da, de manière préférée inférieur à 1 800 Da.
De préférence, ladite fraction peptidique représente au moins 50% en poids, de préférence plus de 50% en poids, préférablement au moins 55% en poids, avantageusement au moins 60% en poids, de manière préférée plus de 60% en poids, par rapport au poids total dudit au moins un hydrolysat de protéines.
Selon un mode de réalisation préféré, la composition vétérinaire selon l’invention comprend au moins une source de superoxyde dismutase et au moins une préparation à base d’au moins un hydrolysat de protéines dans un rapport en poids (source de superoxyde dismutase/préparation à base d’au moins un hydrolysat de protéines) compris entre 0,01/100 et 100/1 , de préférence compris entre 1/100 et 1/10, préférablement compris entre 1/100 et 5/100, avantageusement compris entre 1/50 et 2/50. De préférence, ladite superoxyde dismutase est d’origine végétale, préférablement d’origine fruitière, avantageusement issue d'O/ea europeae, de Vitis vinifera et/ou d’au moins un Cucurbitaceae tels que le Cucumis melo ; de manière préférée ladite superoxyde dismutase consistant en la superoxyde dismutase de Cucumis melo.
De préférence, ledit au moins un hydrolysat de protéines est un hydrolysat de protéines animales, de préférence un hydrolysat de protéines d’au moins un animal marin, préférablement un hydrolysat de protéines de poisson(s), avantageusement un hydrolysat de protéines de poisson(s) appartenant à la famille des Gadidés.
L’invention concerne également une composition nutritionnelle, un aliment composé pour animaux (tel qu’un aliment complet pour animaux ou un aliment complémentaire pour animaux), un aliment pour animaux visant des objectifs nutritionnels particuliers, comprenant la composition vétérinaire selon l’invention.
L’invention a également pour objet un médicament vétérinaire comprenant la composition vétérinaire selon l’invention.
La présente invention a également pour objet :
- la composition vétérinaire selon l’invention,
- la composition nutritionnelle, l’aliment composé pour animaux, ou l’aliment pour animaux visant des objectifs nutritionnels particuliers, tel(le) que défini(e) précédemment, et/ou
- le médicament vétérinaire tel que défini précédemment,
pour son/leur(s) utilisation(s) en tant que médicament vétérinaire, en particulier chez les animaux domestiques, de préférence chez les animaux de compagnie tels que le chien, le chat et/ou les NAC, avantageusement chez les animaux de compagnie tels que le chien et/ou le chat.
Un autre objet de l’invention concerne : la composition selon l’invention,
la composition nutritionnelle, l’aliment composé pour animaux, ou l’aliment pour animaux visant des objectifs nutritionnels particuliers, tel(le) que défini(e) précédemment, et/ou
le médicament vétérinaire tel que défini précédemment, pour prévenir, réguler et/ou traiter, chez l’animal, en particulier chez les animaux domestiques, de préférence chez les animaux de compagnie tels que le chien, le chat et/ou les NAC, avantageusement chez les animaux de compagnie tels que le chien et/ou le chat : la peur et/ou l’anxiété, de préférence l’anxiété, en particulier en réponse à des facteurs de stress légers chroniques et/ou
au moins un trouble du comportement, préférablement lié à la peur et/ou à l’anxiété, avantageusement lié à l’anxiété.
De préférence, ledit au moins un trouble du comportement est sélectionné parmi : l’action d’attaquer, l’agressivité, la destruction, l’élimination inappropriée, l’action de se lécher une partie du corps à répétition, l’action de se gratter, l’astasie, l’action de trembler, l’action de marquer son territoire, un comportement moteur aberrant, un comportement alimentaire anormal tel que la polyphagie ou la polydipsie, la dysbasie, un profil sensoriel anormal, une posture anormale, une vocalisation anormale, les troubles du sommeil, la perte d’expression, la perte de sociabilité et le jugement anormal des situations.
L’invention a également pour objet :
la composition vétérinaire selon l’invention,
la composition nutritionnelle, l’aliment composé pour animaux, ou l’aliment pour animaux visant des objectifs nutritionnels particuliers, tel(le) que défini(e) précédemment, et/ou
le, médicament vétérinaire tel que défini précédemment,
pour son/leur(s) utilisation(s) dans l’amélioration des procédés d’apprentissage chez l’animal, en particulier chez les animaux domestiques, de préférence chez les animaux de compagnie tels que le chien, le chat et/ou les NAC, avantageusement chez les animaux de compagnie tels que le chien et/ou le chat.
Selon un mode de réalisation préféré, la composition vétérinaire selon l’invention comprend (ou consiste essentiellement en) :
a) de 0,5 à 100 Ul, de préférence de 20 à 80 Ul, préférablement de 40 à 65 Ul, avantageusement de 50 à 60 Ul (par exemple 55 Ul), de superoxyde dismutase, et/ou
b) de 10 à 1 000 mg, de préférence de 200 à 800 mg, préférablement de 400 à 600 mg, avantageusement entre 450 et 550 mg (par exemple 500 mg), de ladite au moins une préparation à base dudit au moins un hydrolysat de protéines, de préférence ladite composition comprenant a) et b) (ou consistant essentiellement en a) et b)).
Selon un mode de réalisation, la dite composition comprend (ou consiste essentiellement en) : a) de 0,1 à 20 mg, de préférence de 5 à 15 mg, préférablement de 9 à 13 mg, avantageusement de 10 à 12 mg (par exemple 1 1 mg), d’une source de superoxyde dismutase, et/ou
b) de 10 à 1 000 mg, de préférence de 200 à 800 mg, préférablement de 400 à 600 mg, avantageusement entre 450 et 550 mg (par exemple 500 mg), de ladite au moins une préparation à base dudit au moins un hydrolysat de protéines, de préférence, ladite composition comprenant a) et b) (ou consistant essentiellement en a) et b)).
L’invention a également pour objet la composition vétérinaire selon l’invention, ladite composition étant administrée à l’animal sous forme d’au moins une dose (de préférence encapsulée au sein d’une gélule), de préférence sous forme d’une pluralité de doses, ladite au moins une dose comprenant (ou consistant essentiellement en) : a) de 0,5 à 100 Ul, de préférence de 20 à 80 Ul, préférablement de 40 à 65 Ul, avantageusement de 50 à 60 Ul (par exemple 55 Ul), de superoxyde dismutase par kilogramme de poids corporel dudit animal, et/ou
b) de 10 à 1 000 mg, de préférence de 200 à 800 mg, préférablement de 400 à 600 mg, avantageusement entre 450 et 550 mg (par exemple 500 mg), de ladite au moins une préparation à base dudit au moins un hydrolysat de protéines par kilogramme de poids corporel dudit animal,
de préférence ladite dose comprenant a) et b) (ou consistant essentiellement en a) et b)). Selon un mode de réalisation, ladite dose comprend (ou consistant essentiellement en) : a) de 0,1 à 20 mg, de préférence de 5 à 15 mg, préférablement de 9 à 13 mg, avantageusement de 10 à 12 mg (par exemple 1 1 mg), d’une source de superoxyde dismutase par kilogramme de poids corporel de dudit animal, et/ou b) de 10 à 1 000 mg, de préférence de 200 à 800 mg, préférablement de 400 à 600 mg, avantageusement entre 450 et 550 mg (par exemple 500 mg), de ladite au moins une préparation à base dudit au moins un hydrolysat de protéines par kilogramme de poids corporel dudit animal, de préférence ladite dose comprenant a) et b) (ou consistant essentiellement en a) et b)).
Un autre objet de l’invention concerne une superoxyde dismutase, de préférence d’origine végétale, préférablement d’origine fruitière, avantageusement issue d'O/ea europeae, de Vitis vinifera et/ou d’au moins un Cucurbitaceae tels que le Cucumis melo, de manière préférée consistant en la superoxyde dismutase de Cucumis melo, pour :
i) son utilisation pour prévenir, réguler et/ou traiter, chez l’animal, en particulier chez les animaux domestiques, de préférence chez les animaux de compagnie tels que le chien, le chat et/ou les NAC, avantageusement chez les animaux de compagnie tels que le chien et/ou le chat :
la peur et/ou l’anxiété, de préférence l’anxiété, et/ou
au moins un trouble du comportement, préférablement lié à la peur et/ou à l’anxiété, avantageusement lié à l’anxiété, et/ou
ii) pour son utilisation dans l’amélioration des procédés d’apprentissage chez l’animal, en particulier chez les animaux domestiques, de préférence chez les animaux de compagnie tels que le chien, le chat et/ou les NAC, avantageusement chez les animaux de compagnie tels que le chien et/ou le chat.
La composition selon l’invention présente non seulement des propriétés avantageuses en termes d’efficacité, de rapidité d’action mais peut, en outre, être administrée à un animal sans contre-indications et sans accoutumance, par exemple en complément de médicament(s) vétérinaire(s) classique(s). Par ailleurs, cette composition présente également l’avantage d’être « multi-espèces ».
Selon un mode de réalisation, la composition selon l’invention - et les compositions nutritionnelles, aliments composés pour animaux, aliments complémentaires pour animaux, aliments pour animaux visant des objectifs nutritionnels particuliers, médicaments vétérinaires les contenant - comprend au moins un excipient et/ou additif acceptable du point de vue alimentaire et/ou pharmaceutique, ajouté(s) en vue d'obtenir la forme galénique désirée, de préférence administrable par voie orale. Ledit au moins un excipient et/ou additif est/sont, par exemple, sélectionné(s) parmi des liants, des lubrifiants, des édulcorants, des diluants, des agents d'enrobage, des arômes (naturels ou synthétiques).
L’invention a également pour objet les formes galéniques solides (telles que des gélules, comprimés, comprimés à croquer, pastilles, mélanges de particules solides et divisées (par exemple une poudre non effervescente etc.)) et les formes galéniques liquides (solutions, suspensions buvables, gels, sirops, compositions liquides pouvant être enrobées dans des capsules molles ou dures etc.) comprenant, consistant essentiellement en, ou consistant en la composition selon l’invention, lesdites formes galéniques liquides étant avantageusement conditionnées en sachets (de préférence hermétiques) ou en sticks (de préférence hermétiques), en particulier pour des raisons de praticité d’administration et pour favoriser l’observance du traitement/de la cure.
Il convient de noter que les formes galéniques liquides (plus simplement dénommées « formes liquides ») s’entendent, au sens large, de toute composition ou formulation susceptible de prendre la forme du contenant qui la contient (par exemple la forme du sachet ou du stick mentionnés ci-dessus) mais dont le volume est déterminé. Ainsi, et tel qu’indiqué supra, ces formes liquides incluent/englobent notamment les solutions, suspensions buvables, gels, sirops.
De préférence, la composition selon l’invention est administrable par voie orale. Avantageusement, la composition selon l’invention est sous forme solide. Selon un mode de réalisation préféré, la composition selon l’invention se présente sous forme d’un comprimé à croquer ou d’une poudre (forme pulvérulente) encapsulée dans une gélule, avantageusement sous forme d’une poudre encapsulée dans une gélule.
Selon un mode de réalisation préféré, et en particulier lorsque la composition selon l’invention se présente sous la forme d’une poudre encapsulée dans une gélule, ladite composition comprend au moins un excipient sélectionné parmi les suivants : cellulose microcristalline, stéarate de magnésium, dioxyde de silicium, levure de bière, silice colloïdale. Avantageusement, la composition selon l’invention comprend, en tant qu’excipient, de la cellulose microcristalline (microcellulose).
Définitions
Superoxyde dismutase (SOD). La SOD est une métalloprotéine possédant une activité enzymatique catalysant la dismutation des anions superoxydes en dioxygène et peroxyde d'hydrogène comme suit :
Des études ont démontré que la SOD était une enzyme ubiquitaire (à savoir présente dans presque tous les organismes aérobies), différentes isoformes de cette métalloprotéine ayant été mises en évidence ultérieurement, chacune caractérisée par
un ion métallique situé au niveau de son site actif (cofacteurs métalliques Cu, Zn, Fe ou Mn).
Tel qu’indiqué précédemment, ces métalloprotéines sont présentes chez quasiment tous les organismes consommant de l'oxygène, chez les anaérobies aérotolérants et certains anaérobies stricts. Seule la forme fer (Fe SOD) n'est présente que chez les cellules procaryotes et certaines espèces de végétaux.
Les différentes isoformes de la SOD sont déterminées par leur sensibilité :
La Cu/Zn SOD est inhibée par le cyanure et par H202,
Les Fe SOD sont inhibées par H202 et de faibles concentrations de SDS.
Le radical 02 peut difficilement traverser les membranes plasmiques, par conséquent il doit être détoxifié dans le compartiment même où il a été formé. Ce phénomène explique l'existence de différentes isoformes de superoxyde dismutase cytosoliques, mitochondriales et extracellulaires.
La CuZn SOD cytosolique est une enzyme soluble, généralement très stable, principalement présente dans le cytosol des cellules eucaryotes (existe chez certaines bactéries), mais également dans les chloroplastes des cellules végétales. Protéine intracellulaire homodimérique, ses deux sous unités contiennent chacune un ion Cu2+ et un ion Zn2+ et leur poids moléculaire varie de 16 à 19 kDa. L'organisation spatiale du champ électrostatique à la surface de la Cu/Zn superoxyde dismutase révèle une région positivement chargée, créant ainsi un gouffre qui mène les radicaux superoxydes vers l'ion cuivre afin de provoquer une collision efficace.
La forme extracellulaire est une Cu/Zn superoxyde dismutase, tétramérique glycosylée. Elle est présente chez les mammifères, certains végétaux, ainsi que certains procaryotes. Au sein des bactéries cette enzyme est périplasmique, et n'est libérée clans le milieu extracellulaire que suite à un choc osmotique. Sa présence est nécessaire pour protéger la cellule contre les nombreuses sources d’02 extracellulaires.
La Mn SOD est une enzyme mitochondriale homodimérique de 40 à 46 kDa chez les eucaryotes, sous forme tétramerique de 110 a 140 kDa chez les procaryotes.
La Fe SOD, inexistante au sein des tissus animaux, tel qu’indiqué précédemment, présente d'importantes homologies, de séquences d'acides aminés et de structure, avec la Mn SOD. Homodimérique, chacune de ses sous unités contient un atome de fer et a un poids moléculaire de 23 kDa, elle peut également être rencontrée sous forme tétramérique chez les mammifères.
Dans les conditions physiologiques, l'organisme produit en permanence des molécules oxydantes, appelées radicaux libres (RL), tels que les espèces réactives à l'oxygène (ERO). Comme cela est connu de l’homme du métier, Le pouvoir oxydant des radicaux libres (RL) est rigoureusement contrôlé par les antioxydants formant un équilibre fragile. Dans certaines conditions, (stress, pollutions, etc.) cet équilibre peut faci lement être rompu en faveur d 'une production importante de radicaux libres couplée ou non à une baisse de l'activité antioxydante, ce qui conduit à un stress oxydatif (également dénommé « stress oxydant » dans la littérature).
Comme cela est connu dans l’état de la technique, l'augmentation du taux de radicaux libres occasionne de nombreux dommages non réversibles sur les cellules de l'organisme, tels que la peroxydation des lipides membranaires, des dégradations mitochondriales, des oxydations protéiques et altérations de l'ADN. En effet, les radicaux libres peuvent induire des effets m utagènes ou l’arrêt des réplications de l'ADN (altération de bases, pontages ADN-protéines, ruptures de brins, liens croisés). Les radicaux OH sont les principaux responsables des dégâts. Ils sont issus de la réaction de Fenton, en présence de fer ferreux chélaté à certains acides aminés ou aux groupes phosphates de l'ADN. Très réactifs, ils réagissent immédiatement sur leurs sites de formation, c'est- à-dire la partie nucléotidique avec laquelle ils sont directement en contact. Ces formes actives de T'oxygène sont également responsables d'inactivations enzymatiques, d'une fragmentation des macromolécules, de formation de dimères ou d'agrégats protéiniques dans les membranes cytoplasmiques.
Du fait de la création de molécules biologiques anormales et de la surexpression de certains gènes, le stress oxydatif est la cause initiale essentielle de nombreuses pathologies comme les cancers, l'oedème pulmonaire, le syndrome de détresse pulmonaire aigüe, la sclérose latérale amyotrophique, les maladies pro-inflammatoires et cardiovasculaires, les désordres neurologiques, les fibroses, le diabète, le vieillissement cellulaire, la maladie d'Alzheimer, bs rhumatismes ou encore le vieillissement accéléré.
Le stress oxydatif est également un des facteurs potentialisant la genèse de maladies plurifactorielles telles que le diabète, la maladie d'Alzheimer, les rhumatismes et les maladies cardiovasculaires.
De même dans de nombreuses situations d'infections, la diminution des capacités antioxydantes - facilitant ainsi le stress oxydatif - diminue les défenses immunitaires.
Ainsi, l'activité enzymatique de la SOD permet de réduire la quantité d'anions superoxydes présents dans l'organisme et, par conséquent, de prévenir et/ou inhiber les dommages oxydatifs pouvant être causés par des molécules oxydantes dérivées de l’anion superoxyde, tels que le radical hydroxyle ou peroxynitrite.
De préférence, la composition vétérinaire selon l’invention comprend de la superoxyde dismutase d’origine végétale, préférablement de la superoxyde dismutase issue d'OIea europeae (tel que mentionné dans la demande de brevet FR-A-3003165, dont le contenu est incorporé par référence), de Vitis vinifera (tel que mentionné dans la demande de brevet FR- A-3003164, dont le contenu est incorporé par référence) et/ou de Cucurbitaceae tels que le melon (Cucumis melo) ; de manière préférée, ladite superoxyde dismutase est issue de Cucumis melo.
De préférence, la composition vétérinaire selon l’invention comprend au moins une source de superoxyde dismutase, préférablement d’origine végétale (avantageusement d’origine fruitière et de manière préférée issue d’au moins un Cucurbitaceae tel que le Cucumis melo). Selon un mode de réalisation préféré, ladite au moins une source de superoxyde dismutase consiste en au moins une préparation (par exemple au moins un extrait) comprenant de la superoxyde dismutase, préférablement d’origine végétale (avantageusement d’origine fruitière et de manière préférée issue d’au moins un Cucurbitaceae tel que le Cucumis melo). De préférence, ladite au moins une préparation est une préparation à base d'OIea europeae, de Vitis vinifera et/ou d’au moins un Cucurbitaceae tel que le Cucumis melo (avantageusement à base de Cucumis melo) ; ladite préparation contenant avantageusement de la superoxyde dismutase à raison d’au moins 100 Ul/g de matière sèche de ladite préparation (par exemple de l’extrait), de préférence d’au moins 1000 Ul/g de matière sèche de ladite préparation, préférablement d’au moins 3000 Ul/g de matière sèche de ladite préparation et, de manière particulièrement préférée, d’au moins 5000 Ul/g de matière sèche de ladite préparation.
En biochimie, l'unité enzymatique (symbole U ou Ul) est une unité d'activité enzymatique représentant la quantité d'enzymes nécessaire pour traiter une micromole de substrat en une minute dans des conditions opératoires (pH, température, paramètres de solution). La valeur correspond généralement aux conditions optimales pour l'activité enzymatique, mais on normalise parfois les valeurs à 30°C afin de permettre les comparaisons entre enzymes.
L'unité enzymatique est liée au katal, unité du Système international de l'activité enzymatique, par la relation : 1 kat = 6x107 U.
Selon un mode de réalisation, l’on utilise, aux fins de la présente invention, un extrait (de préférence un extrait protéique, avantageusement hydrosoluble), tel qu'il peut être obtenu à partir d'un Cucumis melo présentant un plateau de production d'éthylène après la crise éthylénique pendant au moins cinq jours, de préférence pendant au moins sept jours (c'est- à-dire que la production d'éthylène présente un plateau qui peut être d’au moins cinq jours et de préférence d’au moins sept jours). Comme cela est connu dans l’art antérieur, la crise éthylénique chez Cucumis melo est très importante et peu de temps après, le fruit commence à se désorganiser et sa valeur marchande diminue. Au contraire, dans le cas des Cucumis melo qui sont susceptibles de fournir l’extrait protéique susvisé, l'émission d'éthylène présente un plateau stable de préférence pendant au moins cinq jours après la crise éthylénique et encore plus avantageusement pendant au moins sept jours. Le susdit extrait protéique peut être notamment obtenu à partir de la lignée cellulaire 95LS444 ou de l'une des lignées hybrides issues de 95LS444 et plus particulièrement des variétés commerciales type Vauclusien Clipper et Supporter. En effet, partir de la lignée 95LS444 de Cucumis melo dont les semences ont été déposées conformément au Traité de Budapest dans la collection NCIMB (National Collection of Industrial and Marine Bacteria-ABERDEEN AB2 IRY (Ecosse - GB) 23 St. Machar Drive), le 19 juillet 1990, sous le numéro 40310, on peut par hybridation obtenir d'autres variétés de Cucumis melo par exemple des variétés du type Vauclusien, Clipper et Supporter présentant les mêmes caractéristiques permettant de conduire aux susdits extraits protéiques.
Selon un mode de réalisation, la composition selon l’invention comprend comme source de SOD (par exemple comme unique source de SOD) un concentré de jus de melon lyophilisé et enrobé avec au moins une huile, par exemple enrobé avec de l’huile de palme. Selon un mode de réalisation, la composition selon l’invention comprend comme source de SOD (par exemple comme unique source de SOD) le produit EXTRAMEL® microgranules (forme(s) M et/ou S). Ce produit est un extrait de jus de melon lyophilisé obtenu par traitement physique (broyage du melon, récupération de la pulpe, centrifugation, filtration, lyophilisation) d'une variété spécifique de melon (non OGM, variété Clipper, provenant de l'une des lignées hybrides issues de la susdite lignée cellulaire 95LS444) (cf. FR-B-2716884 ; dont le contenu est incorporé par référence), qui contient des antioxydants enzymatiques, principalement SOD (90 Ul / mg), mesurés selon la méthode de Oberley et Spitz, et, dans une moindre mesure, de la catalase (10 Ul / mg), qui a été déterminée selon la méthode de Clairbone. Le jus de melon en poudre, enrobé d'huile de palme, qui contient 14 Ul de SOD / mg de poudre est appelé EXTRAMEL® microgranules et est fabriqué par Bionov Co. (France).
Plus précisément, le produit EXTRAMEL® microgranules est obtenu par enrobage du concentré de pulpe de melon ( Cucumis melo) (20%) avec de l'huile de palme, une graisse végétale (80%). Le produit est une source naturelle et efficace d'antioxydants naturels et en particulier d'enzymes antioxydantes telles que la superoxyde dismutase (SOD) et la catalase.
La teneur en SOD dans le produit EXTRAMEL® microgranules est de 14 000 Ul/g.
Selon un mode de réalisation préféré, la composition selon l’invention comprend comme source de SOD (et avantageusement comme unique source de SOD) le produit SOD B Primo- antioxydant® (5UI/mg), sous sa/ses forme(s) M et/ou S, avantageusement sous sa forme M. Ce produit, fabriqué par Bionov Co. (France), est un concentré de jus de Cucumis melo L. (variété propriétaire non-OGM de melon Cantaloup 5 à 10 fois plus concentrée en SOD qu’une variété classique) lyophilisé et enrobé avec de l’huile de palme et contenant 5 Ul de SOD / mg de poudre.
Selon un mode de réalisation particulier, la composition vétérinaire selon l’invention comprend un mélange de superoxydes dismutases d'origine végétale, constitué essentiellement de trois superoxydes dismutases : une superoxyde dismutase au manganèse, une superoxyde dismutase au cuivre et au zinc et une superoxyde dismutase au fer présente sous au moins deux isoformes, la première isoforme de superoxyde dismutase au fer avec un poids moléculaire compris entre 28 000 et 36 000 Da, la deuxième isoforme de superoxyde dismutase au fer avec un poids moléculaire compris entre 75 000 et 85 000 Da, ledit mélange étant susceptible d'être obtenu à partir d'un extrait de la variété hybride Fl de Cucumis Melo MA 7950 ou de ses cellules cultivées in vitro ou par transfert et expression des gènes de ces SOD dans des cellules procaryotes ou eucaryotes. Dans ce mode de réalisation particulier, ledit mélange présente une activité SOD totale supérieure ou égale à 130 U/mg dudit mélange.
Toujours dans ce mode de réalisation particulier, la première isoforme de superoxyde dismutase au fer présente un poids moléculaire d'environ 32 200 Da.
Toujours dans ce mode de réalisation particulier, la deuxième isoforme de superoxyde dismutase au fer présente un poids moléculaire d'environ 79 800 Da.
Toujours dans ledit mode de réalisation particulier, l'activité SOD cumulée des deux isoformes de superoxydes dismutases au fer est comprise entre 20% et 26%, avantageusement entre 22% et 26% de l'activité SOD totale du mélange.
Toujours dans ce mode de réalisation particulier, l'activité SOD cumulée des deux isoformes de superoxyde dismutase au fer est comprise entre 20% et 26% de l'activité SOD totale du mélange, l'activité de la superoxyde dismutase au cuivre et au zinc est comprise entre 60% et 70% de l'activité SOD totale du mélange, et l'activité de la superoxyde dismutase au manganèse est comprise entre 7 et 12% de l'activité SOD totale du mélange.
Toujours dans ledit mode de réalisation particulier, la superoxyde dismutase au manganèse présente un poids moléculaire compris entre 70 000 et 90 000 Da et la superoxyde dismutase au cuivre et au zinc présente un poids moléculaire compris entre 27 000 et 33 000 Da.
Selon un aspect préféré de ce mode de réalisation particulier, le mélange des trois superoxydes dismutases est susceptible d'être obtenu par broyage ou pressage en milieu aqueux, de préférence à pH de 5 à 9, de la variété hybride Fl de Cucumis Melo MA 7950 ou de ses cellules cultivées in vitro ou par transfert et expression des gènes de ces SOD dans des cellules procaryotes ou eucaryotes puis récupération du surnageant et purification par chromatographie, en particulier par chromatographie IMAC.
Tel qu’indiqué dans la demande de brevet WO 2016/128531 (dont le contenu est également incorporé par référence), la variété hybride Fl de Cucumis melo MA 7950, dont les semences ont été déposées conformément au Traité de Budapest dans la collection NCIMB (National Collection of Industrial and Marine Bacteria-ABERDEEN AB2 IRY (Ecosse - GB) Ferguson Building Craibstone Estate Bucksburn), le 8 juillet 2013, sous le numéro NCIMB 42154, possède des caractéristiques uniques quant à son aspect, sa résistance au stress et sa composition en SOD. Ce mélange de SOD possède des propriétés antioxydantes supérieures à d'autres mélanges de SOD issues d'autres sources végétales, et notamment issues d'autres variétés de melon.
Hydrolysat de protéines riche en peptides bioassimilables (à savoir biologiquement assimilables par l’organisme animal). La composition vétérinaire selon l’invention comprend au moins un hydrolysat de protéines riche en peptides bioassimilables, à savoir de préférence dépourvu de protéines et dont la fraction peptidique présente le profil moléculaire suivant :
moins de 1 % en poids des peptides ont un poids moléculaire supérieur ou égal à 10 000 Da, et, de préférence
100% en poids des peptides ont un poids moléculaire inférieur à 10 000 Da, préférablement inférieur à 3 000 Da, avantageusement inférieur ou égal à 1 800 Da, de manière préférée inférieur à 1 800 Da.
En d’autres termes, l’hydrolysat de protéines utilisable dans la composition vétérinaire selon l’invention peut être qualifié d’hydrolysat de protéines riche en peptides bioassimilables (à savoir biologiquement assimilables par un organisme animal), en raison du poids moléculaire relativement faible des peptides constituant la fraction peptidique dudit hydrolysat.
Selon un mode de réalisation préféré, ladite fraction peptidique représente au moins 50% en poids, de préférence plus de 50% en poids, préférablement au moins 55% en poids, avantageusement au moins 60% en poids, de manière préférée plus de 60% en poids, par rapport au poids total dudit au moins un hydrolysat de protéines.
Selon un mode de réalisation de l’invention, la distribution en poids moléculaire (exprimée en pourcentage en poids par rapport au poids total de la fraction peptidique de l’hydrolysat) de l’hydrolysat de protéines riche en peptides bioassimilables utilisable dans la composition vétérinaire selon la présente invention présente le profil présenté dans le tableau 1 infra :
(*) PM : poids moléculaire
Tableau 1
De préférence, la distribution en poids moléculaire (exprimée en pourcentage en poids par rapport au poids total de la fraction peptidique de l’hydrolysat) du susdit hydrolysat de protéines riche en peptides bioassimilables présente le profil défini dans le tableau 2 suivant :
(*) PM : poids moléculaire
Tableau 2
De préférence, l’hydrolysat de protéines utilisable dans la composition vétérinaire selon l’invention comprend les acides aminés suivants : acide aspartique, thréonine, sérine, acide glutamique, proline, glycine, alanine, cystine, méthionine, isoleucine, leucine, tyrosine, phénylalanine, lysine, histidine, arginine et tryptophane.
L’hydrolysat de protéines utilisable dans la composition selon l’invention peut être un hydrolysat de protéines végétales ou de protéines animales. Avantageusement, il s’agit d’un hydrolysat de protéines animales. De préférence, ledit hydrolysat de protéines est un hydrolysat de protéines d’animal/animaux marin(s).
Selon un mode de réalisation, le susdit hydrolysat de protéines est différent d’un hydrolysat de protéines de lait (par exemple d’un hydrolysat de lactosérum tel qu’un hydrolysat de lactosérum bovin). L'hydrolysat de protéines d’intérêt est obtenu par hydrolyse, préférablement par hydrolyse enzymatique, avantageusement par hydrolyse enzymatique dite « contrôlée » ou « ménagée » d'au moins une source de protéines d'au moins un type. L'hydrolyse est poursuivie jusqu'à l'obtention de l'hydrolysat dont la fraction peptidique répond au profil moléculaire tel que défini précédemment. L'arrêt de l'hydrolyse enzymatique peut être obtenu par inactivation des protéases par élévation de la température du mélange réactionnel, de préférence à une température ne dépassant pas 100 °C, notamment comprise entre 85 et 95°C, préférablement de l'ordre de 90 °C. Cette opération est généralement conduite pendant une durée allant de 5 à 20 minutes.
Selon un mode de réalisation préféré, la composition selon l’invention comprend une préparation à base d’au moins un hydrolysat de protéines riche en peptides bioassimilables, et plus particulièrement à base d’au moins un hydrolysat de poissons, à savoir comprenant, en sus dudit hydrolysat de protéines riche en peptides bioassimilables, au moins un excipient approprié (par exemple sélectionné parmi maltodextrine et silice colloïdale).
Hydrolysat de protéines d'animal/animaux marin(s). De préférence, ledit hydrolysat de protéines d’animal/animaux marin(s) est un hydrolysat de protéines de poissons, de mollusques et/ou de crustacés. Selon un mode de réalisation, cet hydrolysat de protéines provient de tissus d'animaux marins (en particulier poissons, mollusques et/ou crustacés) riches en collagène.
Selon un mode de réalisation préféré, la composition vétérinaire selon l’invention comprend un hydrolysat de protéines de poisson(s), avantageusement un hydrolysat de protéines de poisson(s) appartenant à la famille des Gadidés, poissons des mers froides. Avantageusement, cet hydrolysat de protéines de poisson(s) est obtenu à partir d’une sélection d’un ou plusieurs (de préférence plusieurs) poissons éviscérés de la famille des Gadidés pêchés en Atlantique nord : Brosme, Cabillaud, Lieu noir, Lieu jaune, Lingue, Elingue, Moruette, Merlu, Merluchon, Merlan, Eglefin, Grenadier, Tacaud, Loche, Congre.
De préférence, l’hydrolysat de protéines de poisson(s) utilisable dans la composition vétérinaire selon l’invention comprend une fraction peptidique comprenant des peptides et des acides aminés.
Selon un mode de réalisation préféré de l'invention, les protéines représentent moins de1 % en poids, de préférence moins de 0,5% en poids de la fraction peptidique de l'hydrolysat de protéines de poisson(s). De manière particulièrement préférée, l'hydrolysat de protéines de poisson(s) est dépourvu de protéines (protéines résiduelles).
La fraction peptidique de l’hydrolysat de protéines de poisson(s) utilisé dans la composition vétérinaire selon l’invention est, par exemple, l’hydrolysat de protéines de poissons objet de la demande de brevet français FR-A-3036923, dont le contenu est incorporé par référence. Ainsi, tel que décrit dans cette demande de brevet, la fraction peptidique de l’hydrolysat de protéines de poissons (exprimée en ratio de poids par rapport au poids total de la fraction peptidique) présente le profil moléculaire suivant :
- moins de 1 % des molécules ont un poids moléculaire supérieur ou égal à 10 000 Da, et
- 60 à 99 % des molécules ont un poids moléculaire inférieur à 1 500 Da.
Tel qu’indiqué dans FR-A-3036923, ce profil moléculaire de la fraction peptidique est typiquement déterminé par chromatographie liquide à haute performance couplée à la spectrométrie de masse, sur colonne séparative en gel de silice de type Shodex KW-802.5 préalablement étalonnée sur des molécules de référence.
Selon un mode de réalisation de l’invention, et toujours tel que décrit dans la demande de brevet français FR-A-3036923, le profil moléculaire de la fraction peptidique de l’hydrolysat de protéines de poissons utilisable dans la composition vétérinaire selon l’invention présente la répartition suivante (exprimée en ratio de poids par rapport au poids total de la fraction peptidique de l'hydrolysat) :
- 10 à 20% des molécules ont un poids moléculaire compris entre 1 500 et 5 000 Da
- 35 à 45% des molécules ont un poids moléculaire compris entre 500 et 1 500 Da
- 15 à 25% des molécules ont un poids moléculaire compris entre 300 et 500 Da, et
- 19 à 29% des molécules ont un poids moléculaire inférieur à 300 Da.
Selon un mode de réalisation de l’invention, la distribution en poids moléculaire (exprimée en pourcentage en poids par rapport au poids total de la fraction peptidique de l’hydrolysat) de l’hydrolysat de protéines de poissons utilisable dans la composition vétérinaire selon la présente invention présente le profil présenté dans le tableau 3 infra :
(*) PM : poids moléculaire
Tableau 3
De préférence, la distribution en poids moléculaire (exprimée en pourcentage en poids par rapport au poids total de la fraction peptidique de l’hydrolysat) du susdit hydrolysat de protéines de poissons présente le profil défini dans le tableau 4 suivant :
(*) PM : poids moléculaire
Tableau 4
Selon un mode de réalisation, l’hydrolysat de protéines de poissons comprend au moins un peptide choisi parmi IGP (isoleucine-glycine-proline), LGP (leucine-glycine-proline), VY (valine-tyrosine) et RP (arginine-proline). Selon un mode de réalisation, l’hydrolysat de protéines de poissons utilisable dans la composition vétérinaire selon l’invention comprend jusqu’à 25% et, de préférence, jusqu’à 20% (par exemple moins de 20%) d'acides aminés libres, par rapport au nombre d'acides aminés totaux. De préférence, les protéines de poissons (à savoir la matière première brute), sont issues de tissus d'au moins un type de poisson de la famille des Gadidés (de préférence d’au moins deux types de poissons de la famille des Gadidés).
Selon un mode de réalisation, l'hydrolysat de protéines de poissons utilisable dans la composition vétérinaire selon l’invention comprend :
(i) la fraction peptidique, qui représente de 60 à 80% en poids du poids total d'extrait sec dudit hydrolysat,
(ii) une fraction lipidique, qui représente de 5 à 17% en poids du poids total d'extrait sec dudit hydrolysat, et
(iii) une fraction minérale qui représente de 5 à 23% en poids du poids total d'extrait sec dudit hydrolysat.
L'hydrolysat de protéines de poissons utilisable dans la composition vétérinaire selon l'invention peut présenter au moins l’une des caractéristiques suivantes :
- une teneur en matière azotée totale (estimée selon la formule N X 6,25) comprise entre 41 et 91 % en poids par rapport au poids total de l'extrait sec ;
- un rapport azote aminé/azote total compris entre 25 et 40%, notamment entre 30 et 34% ;
- une teneur en acides aminés libres comprise entre 15 et 35% de la matière azotée totale.
Selon un mode de réalisation, ledit hydrolysat comprend une teneur en glucide inférieure à 0,2% et notamment inférieur à 0,1 %, notamment inférieure à 0,05% et de façon particulièrement préférée inférieure à 0,002% en poids par rapport au poids total d'extrait sec de l'hydrolysat. Dans certains modes de réalisation, l'hydrolysat de l'invention est dépourvu de glucides.
L'hydrolysat de protéines de poissons utilisable au sein de la composition vétérinaire selon l’invention peut être associé avec un ou plusieurs composés supplémentaires, comestibles, choisis par exemple parmi une huile (végétale et/ou de poisson), une vitamine (comme la vitamine B1 ), ou un élément minéral. Il est ainsi possible d'utiliser une huile de chair de poisson purifiée. On choisira de préférence une huile riche en oméga-3 contenant de préférence au moins 25% d'oméga-3.
De préférence, l'élément minéral est au moins un oligoélément comme par exemple le cuivre. Les composés supplémentaires éventuellement ajoutés à l'hydrolysat de l'invention sont avantageusement choisis parmi les composés comestibles par les animaux, notamment par les animaux de compagnie ou d'élevage, et de préférence encore par le chien (typiquement Canis lupus familiaris) ou le chat (Felis silvestris catus). La composition nutritionnelle peut en outre inclure des ingrédients adaptés à une utilisation en tant que supplément nutritionnel tels que des liants, des véhicules pulvérulents (comme la maltodextrine), des agents de saveurs, des conservateurs ou des colorants.
Tel qu’indiqué précédemment, selon un mode de réalisation préféré, la composition selon l’invention comprend une préparation à base d’au moins un hydrolysat de protéines riche en peptides bioassimilables, et plus particulièrement à base d’au moins un hydrolysat de poissons, à savoir comprenant, en sus dudit hydrolysat de protéines riche en peptides bioassimilables, au moins un excipient (de préférence sélectionné parmi : maltodextrine et silice colloïdale). Selon un mode de réalisation particulièrement préféré, cette préparation à base d’au moins un hydrolysat de protéines riche en peptides bioassimilables (et plus particulièrement à base d’hydrolysat de protéines de poissons) est du GABOLYSAT® (et en particulier du GABOLYSAT® PTP), dont la description est présentée ci-après (tableau 5) :
Tableau 5 PROCEDE DE FABRICATION
Procédé d'hydrolyse enzymatique ménagée.
Production de petits peptides de poids moléculaires inférieurs à 1 800 daltons. ORIGINES MATIERES PREMIERES
Sélection de poissons éviscérés de la famille des Gadidés pêchés en Atlantique nord : Brosme, Cabillaud, Lieu noir, Lieu jaune, Lingue, Elingue, Moruette, Merlu, Merluchon, Merlan, Eglefin, Grenadier, Tacaud, Loche, Congre.
COMPOSITION EN PEPTIDES PAR POIDS MOLECULAIRES (PM) (± 5)
Tableau 6
Procédé d'obtention de l'hydrolysat de protéines de poissons. Lorsqu’un hydrolysat de protéines de poissons est utilisé dans la composition vétérinaire selon l’invention, le procédé d’obtention décrit en page 8, ligne 24 à page 1 1 , ligne 14 de la demande de brevet français FR-A-3036923 peut être envisagé. Ce procédé d’obtention - décrit en page 8, ligne 24 à page
1 1 , ligne 14 de la demande de brevet français FR-A-3036923 - est incorporé par référence à la présente demande de brevet. Toutefois, dans un souci d’exhaustivité, celui-ci est reproduit ci-après. L'hydrolysat de protéines de poissons d’intérêt est obtenu par hydrolyse, préférablement par hydrolyse enzymatique, avantageusement par hydrolyse enzymatique dite « contrôlée » ou « ménagée » d'au moins une source de protéines d'au moins un type (ou d'au moins une espèce) de poissons. De préférence, en tant que source de protéines de poissons (correspondant à la matière première brute), on utilise des tissus d'au moins un type de poissons de la famille des Gadidés (de préférence au moins deux types de poissons de la famille des Gadidés). On utilise des poissons entiers ou certains tissus de poissons. Il est également possible d'utiliser en tant que matière première brute des coproduits issus de l'industrie du poisson.
De préférence, les poissons sont éviscérés (ou vidés), c'est-à-dire que leur paroi abdominale a été ouverte longitudinalement, les viscères enlevés et la cavité abdominale nettoyée. Les poissons peuvent être étêtés. Cette matière première brute est avantageusement additionnée d'eau à raison de 20 à 25% environ en poids, par rapport au poids total de la matière première brute. De l'eau acidifiée, présentant un pH allant de 4,5 à 6, peut être utilisée.
L'hydrolysat selon l'invention est ainsi le résultat d'un traitement au cours duquel, certaines liaisons peptidiques des protéines sont rompues. Le procédé selon l'invention se caractérise en ce qu'il comprend :
1 ) Eventuellement, une étape de broyage de la dite au moins une source de protéines de poissons.
2) Une étape d'hydrolyse enzymatique de la source de protéines de poissons, de préférence à une température allant de 45° à 65°C. Cette étape est typiquement réalisée sous agitation. Avantageusement l'hydrolyse est réalisée à un pH constant allant de 4,5 à 6, généralement pour une durée allant de 2 à 6 heures.
L'hydrolyse est conduite par digestion enzymatique contrôlée (ou ménagée) sous l'action de protéases endogène(s) et exogène(s). Par « protéase endogène », on entend toute protéase existant naturellement dans la source de protéines de poissons utilisée (typiquement toute protéase qui est naturellement contenue dans la chair de poissons utilisée).
Par « protéase exogène » on entend selon l'invention toute enzyme exogène, c'est-à-dire ajoutée à la source de protéines de poissons, et capable d'hydrolyser les protéines des matières premières sélectionnées qui sont soumises au traitement d'hydrolyse. Les protéases utilisées doivent être compatibles avec une utilisation alimentaire de l'hydrolysat chez l'animal et notamment chez le chien ou le chat. Il est notamment possible d'utiliser une ou plusieurs protéases d'origine marine ou bactérienne. De préférence on utilise en tant que protéase exogène au moins une enzyme, ou un mélange d'enzymes, naturelle(s) de poissons (c'est-à- dire existant naturellement chez le poisson). Les enzymes ou les mélanges d'enzymes suivants peuvent être utilisés : extrait de muqueuse intestinale de poisson, extrait pancréatique de poisson, chymosine, trypsine, chymotrypsine, papaïne, seul(e)s ou en mélange(s).
Typiquement, les enzymes (protéases) ou le mélange d'enzymes exogènes sont ajoutés après l'étape de chauffage. L'hydrolyse est poursuivie jusqu'à l'obtention de l'hydrolysat répondant au profil moléculaire tel que défini précédemment. L'arrêt de l'hydrolyse enzymatique peut être obtenu par inactivation des protéases par élévation de la température du mélange réactionnel, à une température ne dépassant pas 100°C, notamment comprise entre 85 et 95°C, de préférence de l'ordre de 90°C. Cette opération est généralement conduite pendant une durée allant de 5 à 20 minutes.
3) Une étape de séparation de l'hydrolysat de protéines obtenu par rapport au reste du mélange réactionnel issu de l'étape 2).
Cette séparation peut être réalisée par filtration (par exemple sur un filtre de l'ordre de 400 pm) et/ou par centrifugation. La centrifugation peut être réalisée à une vitesse comprise entre 4 000 et 7 000 tours par minute (révolution par minute ou rpm). Le culot obtenu est ensuite éliminé.
Préférentiellement, la séparation de l'hydrolysat de protéines est réalisée par une filtration du mélange réactionnel suivie d'une centrifugation. La filtration du milieu réactionnel permet d'éliminer les matières solides.
4) Avantageusement, une étape de déshydratation de l'hydrolysat est mise en oeuvre après l'étape 3). Cette étape de déshydratation est généralement réalisée par concentration sous vide. Elle permet typiquement d'obtenir une pâte, contenant de préférence au moins 55% d'extrait sec.
5) Eventuellement une étape de séchage à basse température de l'hydrolysat, par lyophilisation ou par atomisation, peut être mise en oeuvre.
La récupération de l'hydrolysat sous forme de poudre peut impliquer des opérations connues de l'homme du métier telles que : concentration sous vide, séchage à basse température, broyage et autres.
L'hydrolysat est ainsi récupéré sous forme de poudre qui contient de préférence 15% ou moins, notamment 10% au moins, par exemple entre 5 et 10% et de préférence encore 5% ou moins en poids d'humidité, par rapport au poids total de l'hydrolysat sous forme de poudre. De préférence, le séchage intervient par atomisation. L'hydrolysat de protéines est alors typiquement pulvérisé dans une enceinte dans laquelle l'air a été préalablement chauffé de façon à ce que l'eau s'évapore. La poudre obtenue est séparée de la vapeur d'eau et collectée à la fin de l'étape de séchage. 6) Eventuellement, une étape de conditionnement de l'hydrolysat de protéine, le cas échéant sous forme de pâte, ou de poudre, après mise en oeuvre de l'étape 4) et/ou 5). L'hydrolysat peut être conditionné sous forme de pâte concentrée à au moins 55% d'extrait sec. Il peut également être conditionné sous forme d'une poudre contenant 15% ou moins, notamment 10% ou moins, par exemple de 5 à 10% et de préférence 5% ou moins en poids d'humidité résiduelle, vis-à-vis du poids total de l'hydrolysat sous forme de poudre. Ces hydrolysats peuvent être incorporés dans des produits alimentaires (notamment avant extrusion) ou dans des compositions nutritionnelles (c.-à-d. : des suppléments nutritionnels).
Fraction peptidique. Par « fraction peptidique », l’on entend la partie de l’hydrolysat de protéines comprenant les composés azotés constitués d'acides aminés (incluant donc les peptides et les acides aminés libres). Ces composés sont des molécules hydrosolubles.
Peptide. Par « peptide », l’on entend un polymère comprenant au moins 2 acides aminés reliés entre eux par des liaisons peptidiques. Typiquement, un peptide comprend moins de 100 acides aminés et possède un poids moléculaire généralement inférieur à 1 1 000 Da, de préférence inférieur à 10 000 Da.
Protéine. Le terme « protéine » se rapporte à un polypeptide comprenant une ou plusieurs chaînes peptidiques et possédant une organisation tridimensionnelle dans l'espace. Typiquement, une protéine comprend au moins 120 acides aminés et possède un poids moléculaire supérieur à 15 000 Daltons (Da).
Protide. Le terme protide revêt, aux fins de la présente demande de brevet, son sens admis en biochimie, à savoir admis en biochimie et en nutrition. Il désigne les acides aminés et tous leurs oligomères et polymères, à savoir : oligopeptide, dipeptide, tripeptide, tétrapeptide, pentapeptide, octapeptide, nonapeptide, decapeptide, polypeptides et protéines.
Animal domestique. Un animal domestique est un animal vivant dans la demeure de l’homme ou dans son voisinage, qui y est élevé et nourri, qui se multiplie en captivité et qui est modifié par rapport à la forme sauvage vivant dans la nature et recevant la protection de l’homme en échange de ses productions (animal de production ou animal d’élevage) ou de sa seule présence, pour sa beauté, ou pour l’agrément (oiseaux chanteurs, pigeons voyageurs, ...). A titre d’exemple, le chien ( Canis lupus familiaris), le chat (Felis silvestris catus) et le cheval ( Equus férus caballus ou Equus caballus) sont des animaux domestiques. A noter que l’animal domestique est défini, en droit français, comme un animal appartenant à « une espèce qui a fait l’objet d’une pression de sélection continue et constante (c'est-à-dire qui a fait l'objet d'une domestication). Ceci a permis la formation d’un groupe d’animaux qui a acquis des caractères stables, génétiquement héritables ».
Animal de compagnie. Un animal de compagnie est un animal recevant la protection des humains en échange de sa présence, sa beauté, sa jovialité ou encore pour ses talents (oiseaux chanteurs, parleurs...). En raison de leur très longue présence au côté de l'Homme, ces animaux familiers ont souvent fait l'objet d'une domestication à la suite de leur apprivoisement. Ils se distinguent toutefois de l'animal domestique vivant simplement dans le voisinage de la maison, simple commensale de l'homme comme le chien de travail, et par opposition aux dits « animaux de production » utilisés pour leur viande, leur lait ou leurs œufs, telles les vaches ou les poules. Dans les pays occidentaux, les principaux animaux de compagnie sont le chat et le chien qui, avec le furet, sont des animaux classés comme « carnivores domestiques ».
Nouveaux animaux de compagnie (NAC). Les nouveaux animaux de compagnie (plus généralement nommés par l'acronyme NAC) sont des animaux de compagnie appartenant à des espèces autres que le chien et/ou le chat. Sont par exemple considérés comme NAC des furets, des lapins, des oiseaux, des rongeurs, des poissons, des reptiles, des amphibiens, des insectes et araignées, voire des porcs, des fennecs ou des singes détenus par l'homme comme animaux d'agrément, dans le but précis d'en faire des animaux de compagnie.
Peur. Tel qu’indiqué en préambule de la présente demande de brevet, la peur est considérée comme un état d’alerte et d’agitation causé par un danger présent ou menaçant (Sherman et Mills, 2008).
Anxiété. Là encore, tel qu’indiqué dans le préambule de la présente demande de brevet, l’anxiété est une réponse à un danger éventuel ou imaginé ou à une incertitude (Sherman et Mills, 2008)
Trouble du comportement (également dénommé trouble comportemental). Les troubles du comportement sont des anomalies dans la façon d’agir et de réagir. La présente invention vise en particulier à prévenir, réguler et/ou traiter les troubles du comportement suivants : l’action d’attaquer, l’agressivité, la destruction, l’élimination inappropriée, l’action de se lécher une partie du corps à répétition, l’action de se gratter, l’astasie (impossibilité de garder la station debout), l’action de trembler, l’action de marquer son territoire, un comportement moteur aberrant, un comportement alimentaire anormal tel que la polyphagie (besoin excessif de manger, qui n’est pas limité par le sentiment de la satiété) ou la polydipsie (sensation de soif excessive malgré une consommation excessive de liquide), la dysbasie (difficulté à exécuter les mouvements nécessaires à la marche), un profil sensoriel anormal, une posture anormale, une vocalisation anormale, les troubles du sommeil, la perte d’expression, la perte de sociabilité et le jugement anormal des situations. Des troubles de comportement chez un animal peuvent s’avérer extrêmement problématiques, dans la mesure où ces troubles peuvent résulter en des réactions irréversibles allant de l’abandon à l’euthanasie de l’animal concerné. En outre, bien évidemment, ces troubles du comportement nuisent au bien-être et à l’équilibre de l’animal concerné.
Aliment composé pour animaux. La présente invention concerne également un aliment composé pour animaux comprenant la composition vétérinaire selon l’invention. Conformément au règlement (CE n° 767/2009) du Parlement européen et du Conseil du 13 juillet 2009 un aliment composé pour animaux» désigne un mélange d’au moins deux matières premières pour aliments des animaux, comprenant ou non des additifs pour l’alimentation animale, qui est destiné à l’alimentation animale par voie orale, sous la forme :
i) d’un aliment complet pour animaux, ou
ii) d’un aliment complémentaire pour animaux.
Aliment complet pour animaux. L’invention concerne également un «aliment complet pour animaux» qui comprend la composition vétérinaire selon l’invention en tant que telle, défini par le susdit règlement CE n° 767/2009 comme un aliment composé pour animaux qui, en raison de sa composition, suffit à assurer une ration journalière.
L’aliment complet pour animaux comprenant la composition vétérinaire selon l’invention peut également être considéré comme un «aliment pour animaux visant des objectifs nutritionnels particuliers».
Aliment complémentaire pour animaux. La présente invention concerne également une composition nutritionnelle vétérinaire ou un aliment complémentaire pour animaux comprenant la composition vétérinaire selon l’invention. Tel qu’indiqué dans le règlement (CE n° 767/2009) du Parlement européen et du Conseil du 13 juillet 2009, par « aliment complémentaire pour animaux », l’on entend un aliment composé pour animaux qui a une teneur élevée en certaines substances mais qui, en raison de sa composition, n’assure la ration journalière que s’il est associé à d’autres aliments pour animaux. L’aliment complémentaire pour animaux comprenant la composition vétérinaire selon l’invention peut également être considéré comme un «aliment pour animaux visant des objectifs nutritionnels particuliers».
Aliment pour animaux visant des objectifs nutritionnels particuliers Aliment pour animaux capable de répondre à un objectif nutritionnel particulier du fait de sa composition particulière ou de son procédé de fabrication particulier, qui le distingue clairement des aliments pour animaux ordinaires. Il peut être un aliment complet ou un aliment complémentaire.
Objectifs nutritionnels particuliers. Toujours selon le susdit règlement CE n° 767/2009, l’expression «objectif nutritionnel particulier», désigne un objectif qui consiste à satisfaire les besoins nutritionnels spécifiques d’animaux dont le processus d’assimilation, le processus d’absorption ou le métabolisme est ou risque d’être perturbé temporairement ou de manière irréversible et qui, de ce fait, peuvent tirer des bénéfices de l’ingestion d’aliments pour animaux appropriés à leur état.
L’invention concerne également un aliment fonctionnel vétérinaire comprenant la composition vétérinaire selon l’invention.
Description détaillée
Les exemples ci-après permettront de mieux appréhender la présente invention. Ces exemples sont donnés à titre illustratif et ne doivent en aucun cas être regardés comme limitant la portée de ladite invention d’une quelconque manière.
Exemple 1 - Procédé de préparation de gélules comprenant la composition vétérinaire selon l’invention
Le procédé de préparation décrit ci-après concerne une production de 1470 piluliers de 60 gélules chacun.
A. MATIERES PREMIERES
A.1 Ingrédients actifs
Les ingrédients actifs entrant dans la composition selon l’invention sont les suivants : GABOLYSAT®PTP 55 (préparation à base d’hydrolysat de protéines de poissons) SOD B Primo-antioxydant® M (5UI/mg) (concentré de jus de melon lyophilisé et enrobé avec de l’huile de palme)
A.2 Excipients
Les matières premières utilisées en tant qu’excipients dans la composition selon l’invention sont les suivantes :
- CELLULOSE MICROCRISTALLINE PDR - E460
- STEARATE MAGNESIUM - E470b
- DIOXYDE DE SILICIUM - E551
- GELULE T00 GELATINE BLANCHE
Ces matières sont stockées en température positive.
B. MELANGE
Les matières premières présentées au point A supra sont pesées individuellement puis mélangées selon toute méthode appropriée et connue de l’homme du métier. Si nécessaire, une matière première peut être broyée et/ou tamisée avant le mélange.
Avant mélange, la fabrication de 1470 piluliers nécessite 59,413 kg de poudre mélangée, selon le dosage suivant :
Cellulose microcristalline (poudre) - E460 : 8,0685 kg
Dioxyde de silicium - E551 : 0,2475 kg
SOD B Primo-antioxydant® M (5UI/mg): 1 ,089 kg
- GABOLYSAT®PTP 55: 49,50 kg
Stéarate de magnésium - E470b : 0,495 kg
Le mélange final est mis en sac, puis stocké en température positive.
C. FABRICATION DES GELULES
Les gélules utilisées sont des gélules de 720 mg (référence : milgel 4282).
Le dosage par gélule est le suivant : - GELULE T00 GELATINE BLANCHE : poids 120 mg
Cellulose microcristalline (poudre) - E460 : 81 ,50 mg
Dioxyde de silicium - E551 : 2,50 mg
SOD B Primo-antioxydant® M (5UI/mg) : 1 1 mg
- GABOLYSAT®PTP 55 : 500 mg
Stéarate de magnésium - E470b : 5mg
Un prélèvement de gélules est effectué par le service qualité. Des analyses sont effectuées selon le plan de contrôle interne.
Des pesées sont effectuées tout au long du procédé de fabrication pour contrôler le poids des gélules.
Les gélules vrac sont conditionnées en sac, puis en fût pour stockage en température positive.
D. CONDITIONNEMENT / COMPTAGE
Les gélules vrac sont conditionnées en piluliers de 60 gélules selon l’instruction de travail associée au poste. Les produits de conditionnement sont les suivants :
Pilulier PEHD 125ml blanc
RCape inviolable EP43
Une fois le conditionnement terminé, les piluliers sont comptés, puis mis en cartons pour stockage en température positive.
Exemple 2 - étude clinique vétérinaire réalisée sur trente-neuf chiens
A. Matériels et méthodes
A.1 Lieu
L’étude a été approuvée par le comité pour l’utilisation et les soins des animaux à l’École nationale vétérinaire d’Alfort et l’Université Paris-Est (ComERC ENVA ; numéro d’agrément COMERC 2016-01 -15). Tous les propriétaires de chiens ont donné leur consentement avisé par l’intermédiaire d’un document écrit et signé avant toute procédure d’étude. L’étude s’est déroulée dans la salle d’expérimentation de l’IRCA (Institut de Recherche Clinique Animale) au sein de l’École nationale vétérinaire d’Alfort. La pièce de 15 m2 était adaptée pour les tests comportementaux et les zones utilisées ont été marquées avec soin. La surface a été divisée en carrés de 1 m2.
A.2 Animaux
A.2.1. Critères d’inclusion généraux
Des chiens de compagnie de races variées, âgés de 1 à 6 ans, ont été recrutés dans la salle d’attente pour les vaccinations ou par internet. Avant leur inclusion, les chiens ont été soumis à un examen clinique général afin de vérifier qu’ils étaient en bonne santé. Les chiens agressifs ou difficiles à gérer ont été exclus de l’étude. La vérification d’une bonne capacité auditive (test du cliquet avec le multi-clicker Clix®) de tous les chiens inclus a été réalisée.
Les chiennes gestantes ou allaitantes et les chiens sous corticoïdes ou traitement psychotique n’ont pas été inclus. Un total de 39 chiens de 4,0 ± 1 ,7 ans de moyenne d’âge ont participé à cette étude. 26 étaient des femelles et 13 étaient des mâles (cf. tableau 7 infra).
NUMÉRO ESPÈCE ÂGE SEXE CBARQ Placebo/
D’INCLUSION au jour 0 Complément
(ans)
(S)
160426-ALEFI BERGER AUSTRALIEN 6 f 1 P
160426-ALEIG CHIHUAHUA 3 m 9 P
160426-ALELI LABRADOR 6 f 2 s
160429-CROHU BERGER ALLEMAND 4 f 1 s
160429-ETHIN CROISEMENT 1 f 9 s
160429-HGUNI CROISEMENT 5 f 6 P
160502-MMUEL CROISEMENT 2 f 7 s
16051 1-ADEFA YORKSHI RE-TERRIER 6 f 3 P
16051 1-ADEKA YORKSHI RE-TERRIER 4 f 2 s
160513-CGAFA BERGER DES PYRÉNÉES 6 f 8 P
160516-AGODJ BERGER AUSTRALIEN 6 m 9 P
160516-AGOLI WHIPPET 5 f 1 P
160516-CAPFL BERGER AUSTRALIEN 6 m 3 s 160520-AGOKE BERGER AUSTRALIEN 6 f 2 P
160520-AGOTI TERRIER BRÉSILIEN 2 f 2 P
160520-1 BALA GOLDEN RETRIEVER 5 f 8 S
160520-MYALE CANICHE 2 f 5 P
160520-VPIJA JACK RUSSEL 5 m 8 P
160520-VPIMO JACK RUSSEL 2 f 3 S
160524-SWENI LABRADOR 6 f 3 S
160525-CLEFI BERGER ALLEMAND 6 m 1 P
160526-CLEIO GOLDEN RETRIEVER 3 f 1 S
160601-HBUNA SHIBA INU 3 f 7 S
160607-IBEIY AKITA 2 f 3 P
160607-NDAFA WEST HIGHLAND TERRIER 5 f 8 S
160607-SJOZA JACK RUSSEL 3 f 6 P
160608-CBEEL BICHON 6 m 8 P
160608-MLELE CROISEMENT 1 f 7 P
160608-MLEWI CROISEMENT 5 f 7 S
160613-ECOIZ BERGER AUSTRALIEN 3 f 8 P
160613-ESELY CROISEMENT 6 f 8 S
160614-ELEHA CANE CORSO 4 f 6 S
160614-ELEJA CANE CORSO 2 m 1 S
160614-LALPA CROISEMENT 1 m 2 P
Tableau 7 - Individus testés
A.2.2. Critères d’inclusion basés sur un résultat du comportement lié à la peur adaptés à partir du CBARQ (Serpell & Hsu, 2003)
Des évaluations comportementales des chiens ont été obtenues en utilisant une version simplifiée du CBARQ (Serpell & Hsu, 2003 ; Bourrienne, 2015), un instrument de surveillance standardisé présentant des caractéristiques de fiabilité et de validité établies. Quatre questions du questionnaire original ont été sélectionnées afin que les propriétaires donnent une note correspondant à leur propre appréciation de la peur chez leur chien. Les notes pour les 4 questions (de 0 à 3 points) ont été additionnées, et allaient de 0 à 12. Cette note a été utilisée en tant que critère d’inclusion : les chiens présentant un résultat allant de 1 à 9 ont été sélectionnés pour cette étude. Les quatre questions ci-dessous ont été notées (cf. tableau 8 infra).
Tableau 8. Questionnaire CBARQ simplifié utilisé afin de sélectionner les chiens
A.3 Protocole expérimental
A.3.1. Produit testé (S) et placebo (P)
Le produit testé est un aliment complémentaire (abrégé en « complément») se présentant sous la forme d’une gélule contenant 500 mg d’une préparation à base d’hydrolysat de protéines de poisson (GABOLYSAT®PTP 55) et 1 1 mg de SOD B Primo-antioxydant® M (5UI/mg). L’excipient principal de ce complément alimentaire est la cellulose microcristalline, ledit complément alimentaire en contenant 81 ,5 mg. Le procédé de préparation du produit testé (S) est celui présenté à l’exemple 1 supra.
Le placebo est une gélule de la même taille que celle contenant le complément, comprenant 445 mg/gélule de cellulose microcristalline, et obtenu en adaptant le procédé de préparation présenté à l’exemple 1 supra.
Le complément/placebo a été donné quotidiennement au chien durant l’étude (à savoir pendant 30 jours), à compter du lendemain du premier test. Le complément a été donné à 18 chiens et le placebo à 21 chiens.
A.3.2. Protocole Le présent test a été adapté d’un test développé et appliqué dans le but d’observer les réactions comportementales chez les chiens face à des situations différentes et spécifiques (Hoummady et al., 2016).
Avant de pénétrer dans la salle, le propriétaire du chien a été prié de remplir le questionnaire CBARQ simplifié (cf. tableau 8 supra). Un échantillon de salive a été collecté à l’aide d’un tampon oral (Salimetrics Kit®) juste avant l’entrée dans la salle de test, et juste après la sortie de la salle. Les tubes contenant la salive ont été stockés à 4°C, puis emmenés au laboratoire afin d’y être centrifugés, gelés à -20°C et ensuite analysés.
Les chiens ont été testés 3 fois pendant une période de 30 jours (au jour 0 - au jour 15 - au jour 30).
A.3.3. Tests comportementaux
Le chien/la chienne entre dans la pièce sans laisse, sans sa maîtresse/son maître, et la porte est fermée par un assistant de l’expérimentateur. Le test a duré en tout 6 minutes et 50 secondes et était divisé en 4 sous-tests. Le test a été enregistré à l’aide d’une caméra CANON (EOS 700D), et les vidéos ont ensuite été analysées. L’expérimentateur a enregistré la durée de chaque sous-test à l’aide d’un chronomètre.
Sous-test 1 (ST1 ). Exploration d’un nouvel environnement (3 minutes). L’expérimentateur demeure assis sur un siège au sein de la zone d’expérimentateur (E) sans aucun contact physique ou visuel. Le chien est laissé libre d’explorer l’ensemble de la pièce.
Sous-test 2 (ST2). Interaction avec une personne inconnue (2 minutes). L’expérimentateur se lève de la chaise, récupère 2 balles et une corde et demeure dans une position basse dans la zone de jeu (P). Il/elle appelle le chien et l’invite à jouer 3 fois.
Sous-test 3 (ST3). Bruit important (1 minute 20 secondes). L’expérimentateur passe un bruit soudain qui dure 20 secondes. Cela correspond à un bruit d’aspirateur de 85 dB (CD Clix®). Un lecteur CD classique a été utilisé et une calibration a été réalisée dans un champ acoustique à l’aide d’un sonomètre de précision (sonomètre de type 2235 avec un microphone de type 2235 +1/3— 1/1 Octave Filter Set de type 1626, Brüel &Kjær Sound & Vibration Measurement A/S, Nærum, Danemark). Après avoir passé le bruit, l’expérimentateur reste assis pendant une minute.
Sous-test 4 (ST4). Réaction vis-à-vis d’un objet inédit (30 secondes). À partir d’un siège, l’expérimentateur dirige une voiture téléguidée et la place dans la zone X. Le chien est observé, pendant tout ce temps. Les chiens ont été testés au jour 0, au jour 15 et au jour 30. Pour le sous-test 2, l’expérimentateur a été changé à chaque session afin d’éviter que le chien ne s’accoutume à la présence de l’expérimentateur. Pour le sous-test 4, le même objet inédit a été utilisé les trois fois (la voiture téléguidée), afin que le chien puisse s’accoutumer à l’objet.
Une fois le test fini, la porte a été ouverte et le chien a été invité à sortir de la salle. La caméra a été arrêtée. Les vidéos ont été ensuite analysées avec le logiciel BORIS v 2.97 (Behavioral Observation Research Interactive Software). Les comportements listés dans le tableau 9 ont été observés et quantifiés par deux expérimentateurs dont la conformité a été au préalable testée à l’aide du coefficient tau de Kendall (0,983 ± 0,012 pour 11 vidéos).
Tableau 9. Résultats comportementaux lors du test
A.3.4. Dosage de cortisol salivaire (avant les sous-tests)
Un volume minimum de salive collectée était nécessaire (50 mI) afin de pouvoir réaliser une analyse. Un échantillon a été prélevé pour tous les chiens, mais seulement 31 d’entre eux ont produit suffisamment de salive. Le cortisol a été analysé par un laboratoire spécialisé situé dans la ville de Namur (UNamur - Unité de recherche vétérinaire intégrée URVI).
A.4 Analyses statistiques
Des comparaisons entre les chiens ayant obtenu des CBARQ allant de 1 à 5 et les chiens ayant obtenu des CBARQ allant de 6 à 9 ont été réalisées en utilisant les tests non paramétriques de Mann-Whitney.
Les comparaisons des comportements tout au long des 3 sessions ont été réalisées à l’aide d’une analyse de variance non paramétrique sur des mesures répétées (quand la normalité n’avait pas été vérifiée).
La comparaison des comportements et des deltas (jour 15 -jour 0 ; jour 30 - jour 0) pour le complément et le placebo a été réalisée en utilisant les tests non paramétriques Mann- Whitney.
Les moyennes sont exprimées avec ± ET.
B. Résultats
B.1 Évaluation des tests comportementaux et du questionnaire CBARQ simplifié relatif à la peur Le résultat CBARQ simplifié moyen pour les 39 chiens au jour 0 était de 4,85 ± 2,86 (cf. tableau 7 supra).
Afin de confirmer que le questionnaire CBARQ simplifié peut être utilisé comme outil fiable permettant de classer et d’inclure des chiens présentant des niveaux différents de peur et d’anxiété, les individus ont été divisés en deux groupes selon leur résultat : CBARQ allant de
1 à 5 (chiens « moins craintifs», n = 21 ) et CBARQ allant de 6 à 9 (chien «plus craintifs », n = 18). Les deux groupes ont été comparés du point de vue de leur taux de cortisol avant le test au jour 0, et les comportements ont été évalués lors du test au jour 0. Les résultats ont montré une différence significative du taux de cortisol entre les deux groupes au jour 0 (p = 0,013 ; U = 56 ; df = 30), les chiens ayant des résultats entre 6 et 9 présentant des valeurs supérieures (6,64 ± 3,66 nmol/L par opposition à 5,23 ± 3,24 nmol/L).
Pour ce qui est du comportement, six unités comportementales ont montré des différences significatives entre les deux groupes de chiens (cf. tableau 10 infra) : traversée de zone lors du sous-test 1 (ST1 ) (p = 0,007 ; U = 239 ; df = 38), léchage des babines lors du sous-test 1 (ST1 ) (p = 0,042 ; U = 267 ; df = 38), temps passé dans la zone de la porte lors du sous-test
2 (ST2) (p = 0,019 ; U = 409 ; df = 38), temps de jeu lors du sous-test ST2 (p = 0,046 ; U = 264 ; df = 38), léchage des babines lors du sous-test 3 (ST3) (p = 0,025 ; U = 262 ; df = 38) et approche de l’objet inédit lors du sous-test 4 (ST4) (p = 0,023 ; U = 259 ; df = 38).
Ces résultats confirment la cohérence entre le résultat CBARQ simplifié attribué aux chiens et les mesures du stress et les comportements liés au stress observés lors des tests. Les chiens les plus craintifs se caractérisaient par un taux de cortisol plus élevé, une activité moindre, un temps passé dans la zone de la porte plus important, un temps passé à jouer moins important, et un nombre d’approches de l’objet inédit plus faible, une tendance à plus bâiller mais un léchage de babines moindre.
Tableau 10. Comparaison du cortisol et des comportements des chiens avec les résultats CBARQ simplifiés allant de 1 à 5 (chiens « moins craintifs ») et de 6 à 9 (chiens « plus craintifs ») (au jour 0) Une fois révélée l’information sur le placebo et le complément, les moyennes des résultats simplifiés CBARQ au jour 0 ont été calculées. Les résultats médians pour le placebo étaient de 5,0 (IQ allant de [2,0 ; 8,0]) et les résultats médians pour le complément étaient de 3,5 (IQ 5 allant de [2,75 ; 7,25]). Il n’y a eu aucune différence significative entre les deux groupes de chiens en termes de niveau de peur (U = 176, p = 0,722, df = 38). Les chiens avaient donc été affectés de manière égale dans le groupe ayant reçu le placebo ou le groupe ayant reçu le complément. Ceci signifie que les deux groupes de chiens (« chiens moins craintifs » et « chiens plus craintifs » sont homogènes).
10
B.2 Comparaison entre le placebo et le complément : tests comportementaux
B.2.1 Comparaison au jour 0
15 Au jour 0, aucune différence n’a été détectée entre le groupe ayant reçu le placebo et le groupe ayant reçu le complément (cf. tableau 1 1 infra). Cependant, les chiens du groupe ayant reçu le placebo ont montré une tendance à être plus actifs lors du sous-test 1 (p = 0,055) et à rester dans la zone de la porte pendant le sous-test 2 (p = 0,09).
20
Tableau 1 1. Comparaisons placebo et complément des comportements durant les différents sous-tests
B.2.2. Comparaison au jour 15
5 Au jour 15, les chiens du groupe ayant reçu le complément ont eu tendance à rester plus longtemps dans la zone de l’expérimentateur lors du sous-test 1 (p = 0,061 ; cf. tableau 12 infra).
Tableau 12. Comparaisons des comportements placebo et complément durant les différents sous-tests B.2.3. Comparaison au jour 30
Au jour 30, les chiens du groupe ayant reçu le complément ont été moins sujets aux bâillements lors du sous-test 2 (p = 0,057). Aucun chien du groupe ayant reçu le complément n’a bâillé (0/18), tandis que trois chiens du groupe ayant reçu le placebo (3/21 ) ont bâillé pendant le sous-test 2 (cf. tableau 13 infra).
Tableau 13. Comparaisons placebo et complément des comportements durant les différents sous-tests
B.3. Comparaison placebo et complément des variations entre le jour 0 et le jour 30 : tests comportementaux
Entre le jour 30 et le jour 0, les chiens du groupe ayant reçu le complément ont vu leur activité s’accroître tandis que les chiens du groupe ayant reçu le placebo ont vu leur activité décroître (p = 0,036) pendant le sous-test 1 (cf. tableau 14 infra). De plus, les chiens du groupe ayant reçu le complément ont été moins sujets aux bâillements entre le jour 0 et le jour 30 (p = 0,086) lors du sous-test 4 : deux chiens du groupe ayant reçu le complément ont vu leurs bâillements diminuer tandis qu’un chien du groupe ayant reçu le placebo a vu ses bâillements s’accroître (cf. tableau 14 infra).
Tableau 14. Comparaisons placebo et complément des variations entre le jour 30 et le jour 0 pour des comportements de sous-tests différents
B.4. Variations placébo et complément des comportements des chiens pendant les tests entre les jours 0, 15 et 30
B.4.1. Groupe ayant reçu le complément
Entre le jour 0, le jour 15 et le jour 30, une différence significative a été détectée entre les comportements des chiens du groupe ayant reçu le complément (cf. tableau 15 infra) à propos du temps passé dans la zone de l’expérimentateur. En effet, une différence significative a été observée à cet égard avec le jour 0, par comparaison au jour 15 et au jour 30 ; des chiens sont restés plus longtemps dans la zone de l’expérimentateur le jour 15 et le jour 30 (p = 0,078). Cela pourrait s’expliquer par une réaction de stress moins importante, dans la mesure où l’expérimentateur est une personne inconnue.
Tableau 15. Groupe avant reçu le complément : variations des comportements sur les 3
échantillonnages : jour 0, jour 15, jour 30
B.4.2. Groupe ayant reçu le placebo
Entre le jour 0, le jour 15 et le jour 30, certaines différences importantes ont été détectées entre les comportements des chiens du groupe ayant reçu le placebo (cf. tableau 16 infra).
La traversée de zone était différente d’une journée à l’autre (p = 0,032). En particulier, le nombre de traversées de zone a diminué au jour 30 comparé au jour 0, indiquant que des chiens étaient moins actifs au jour 30. Ceci pourrait indiquer que les chiens étaient plus stressés au jour 30 (moins d’activité). Le toucher de l’objet inédit (sous-test 4) a souvent présenté des différences entre les trois sessions : le jour 0, les chiens ont généralement plus touché l’objet que le jour 15 et le jour 30. Cela pourrait indiquer, de la même façon que pour la traversée de zone, que les chiens étaient plus stressés le jour 15 et le jour 30.
Tableau 16. Groupe avant reçu le placebo : variations des comportements sur les 3 périodes d’échantillonnage : jour 0, jour 15, jour 30
C. Conclusions
C.1. Validation des tests comportementaux
En corrélation avec le CBARQ en tant que critère d’inclusion, il a été considéré, aux fins de la présente étude, que lorsqu’une enquête par questionnaire était utilisée en tant qu’outil permettant de déterminer des émotions animales telles que la peur, la joie et l’agressivité, sa validité est de la plus grande importance. Une validité externe indique avec quelle efficacité la mesure prévoit conceptuellement des comportements, des résultats ou des critères pertinents (John et Soto, 2007). Dans ce cas, il a été validé avec succès en découvrant des différences significatives entre les chiens « moins craintifs » et « plus craintifs» (selon leur score CBARQ). Comme Van den Berg (2010) le suggérait, ce questionnaire peut être utilisé en toute confiance comme outil de recherche afin de comparer des comportements dans des populations canines différentes dans ce genre d’études.
En comparant les chiens ayant un score entre 6 et 9 («plus craintifs ») pour le CBARQ et les chiens ayant un score entre 1 et 5 (« moins craintifs»), les résultats montrent que les chiens qui étaient plus craintifs présentaient un taux de cortisol supérieur, une activité inférieure, un temps supérieur passé dans la zone de la porte, un temps inférieur passé à jouer, et un nombre moins élevé d’approches vers l’objet inédit, une tendance à plus bâiller mais un léchage des babines plus rare.
C.2. Effets comportementaux du complément sur les chiens Une fois l’information sur le placebo et sur le complément révélée, les moyennes des scores CBARQ simplifiés au jour 0 ont été calculées. Il n’y avait aucune différence significative entre les deux groupes de chiens concernant le niveau de peur, donc les chiens ont été affectés de manière égale aux groupes placebo et complément.
C.2.1. Comparaisons des comportements entre les groupes placebo et complément
Au jour 15, les chiens du groupe ayant reçu le complément ont eu tendance à rester plus longtemps dans la zone de l’expérimentateur lors du sous-test 1 (p = 0,061 ).
Au jour 30, les chiens du groupe ayant reçu le complément ont été moins sujets aux bâillements lors du sous-test 2 (p = 0,057).
Le complément apparaît ainsi faciliter les interactions chien-humain et réduire l’émotivité lors d’interactions avec les humains.
Entre le jour 0 et le jour 30, les chiens du groupe ayant reçu le complément ont été plus actifs, tandis que les chiens du groupe ayant reçu le placebo ont été moins actifs (p = 0,036) lors du sous-test 1 . De plus, les chiens du groupe ayant reçu le complément ont eu tendance à moins bâiller entre le jour 0 et le jour 30 (p = 0,086) lors du sous-test 4.
Au jour 30, le complément apparaît faciliter les procédés d’apprentissage d’accoutumance chez les chiens, en augmentant l’activité. En effet, les chiens du groupe ayant reçu le complément exploraient encore l’environnement pendant la troisième session de test. De plus, les chiens bâillaient moins et montraient par conséquent moins d’émotivité.
C.2.2. Évolution des comportements sur les 30 jours pour le groupe ayant reçu le placebo et le groupe ayant reçu le complément
GROUPE AYANT REÇU LE COMPLÉMENT.
Entre le jour 0, le jour 15 et le jour 30, une différence significative a été observée le jour 0 en comparaison avec le jour 15 et le jour 30 : les chiens sont restés plus longtemps dans la zone de l’expérimentateur le jour 15 et le jour 30 (p = 0,078). Cela peut vraisemblablement s’expliquer par une réaction de stress moins importante, dans la mesure où l’expérimentateur est une personne inconnue. En effet, lors des tests, la personne a été changée entre chaque session et les chiens ne pouvaient donc pas s’habituer à l’expérimentateur.
GROUPE AYANT REÇU LE PLACEBO.
La traversée de la zone lors du sous-test 1 a été différente d’un jour à l’autre (p = 0,032). En particulier, le nombre de traversées de zone a diminué le jour 30 par comparaison avec le jour 0, ce qui indique que les chiens étaient moins actifs le jour 30. Ceci pourrait indiquer que les chiens étaient plus stressés au jour 30 (moins d’activité).
Le fait de toucher l’objet inédit (sous-test 4) a eu tendance à varier d’une session à l’autre : le jour 0, les chiens ont eu tendance à toucher plus l’objet que le jour 15 et le jour 30. Cela pourrait indiquer, de la même façon que pour la traversée de zone, que les chiens étaient plus stressés le jour 15 et le jour 30.
En comparant les évolutions pour le groupe ayant reçu le complément et pour le groupe ayant reçu le placebo, il apparaît que les chiens du groupe ayant reçu le complément semblent explorer plus et être plus curieux que les chiens du groupe ayant reçu le placebo. Ces chiens pourraient donc être plus motivés à explorer et plus rapides à assimiler un nouvel apprentissage.
D. Conclusion générale
Les résultats la présente étude clinique vétérinaire suggèrent une augmentation de l’activité, de la familiarité à une nouvelle personne et de la curiosité, avec une diminution du comportement lié au stress, à la peur et/ou à l’anxiété pour les chiens qui ont reçu le complément par comparaison à ceux du groupe ayant reçu le placebo.
Le complément testé s’avère donc efficace afin de réduire les réactions de stress, de peur et/ou à d’anxiété (en particulier dans le cadre de facteurs de stress légers quotidiens), et favoriser les procédés d’apprentissage.
En outre, la présente étude a permis de mettre en évidence l’existence d’effets positifs sur la communication chien-humain et sur les procédés d’apprentissage provoqués par des facteurs de stress chroniques. Bibliographie
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Claims

Revendications
1. Composition vétérinaire, de préférence administrable par voie orale, comprenant, en quantités efficaces :
de la superoxyde dismutase ou au moins une source de superoxyde dismutase, et au moins un hydrolysat de protéines ou au moins une préparation à base d’au moins un hydrolysat de protéines, ledit au moins un hydrolysat de protéines étant avantageusement dépourvu de protéines, ledit au moins un hydrolysat de protéines comprenant une fraction peptidique dans laquelle moins de 1 % en poids des peptides ont un poids moléculaire supérieur ou égal à 10 000 Da, de préférence dans laquelle 100% en poids des peptides ont un poids moléculaire inférieur à 10 000 Da, préférablement inférieur à 3 000 Da, avantageusement inférieur ou égal à 1 800 Da, de manière préférée inférieur à 1 800 Da.
2. Composition selon la revendication 1 , dans laquelle ladite fraction peptidique représente au moins 50% en poids, de préférence plus de 50% en poids, préférablement au moins 55% en poids, avantageusement au moins 60% en poids, de manière préférée plus de 60% en poids, par rapport au poids total dudit au moins un hydrolysat de protéines.
3. Composition selon la revendication 1 ou 2 comprenant au moins une source de superoxyde dismutase et au moins une préparation à base d’au moins un hydrolysat de protéines dans un rapport en poids compris entre 0,01/100 et 100/1 , de préférence compris entre 1/100 et 1/10, préférablement compris entre 1/100 et 5/100, avantageusement compris entre 1/50 et 2/50.
4. Composition selon l’une des revendications précédentes, dans laquelle ladite superoxyde dismutase est d’origine végétale, de préférence d’origine fruitière, avantageusement issue d'O/ea europeae, de Vitis vinifera et/ou d’au moins un Cucurbitaceae tels que le Cucumis melo ; de manière préférée ladite superoxyde dismutase consistant en la superoxyde dismutase de Cucumis melo.
5. Composition selon l’une des revendications précédentes, dans laquelle ledit au moins un hydrolysat de protéines est un hydrolysat de protéines animales ou un hydrolysat de protéines végétales.
6. Composition selon l’une des revendications précédentes, dans laquelle ledit au moins un hydrolysat de protéines est :
- un hydrolysat de protéines d’au moins un animal marin, préférablement un hydrolysat de protéines de poisson(s), avantageusement un hydrolysat de protéines de poisson(s) appartenant à la famille des Gadidés, ou
- un hydrolysat de protéines végétales.
7. Composition selon l’une des revendications précédentes, dans laquelle ledit au moins un hydrolysat de protéines est un hydrolysat de protéines d’au moins un animal marin, préférablement un hydrolysat de protéines de poisson(s), avantageusement un hydrolysat de protéines de poisson(s) appartenant à la famille des Gadidés.
8. Composition selon l’une des revendications 1 à 7, ladite composition comprenant : a) de 0,5 à 100 Ul, de préférence de 20 à 80 Ul, préférablement de 40 à 65 Ul, avantageusement de 50 à 60 Ul, de superoxyde dismutase, et/ou
b) de 10 à 1 000 mg, de préférence de 200 à 800 mg, préférablement de 400 à 600 mg, avantageusement entre 450 et 550 mg, de ladite au moins une préparation à base dudit au moins un hydrolysat de protéines,
de préférence ladite composition comprenant a) et b).
9. Composition nutritionnelle, aliment composé pour animaux tel qu’un aliment complet pour animaux ou un aliment complémentaire pour animaux, aliment pour animaux visant des objectifs nutritionnels particuliers, comprenant la composition selon l’une des revendications précédentes.
10. Médicament vétérinaire comprenant la composition selon l’une des revendications 1 à 8.
1 1. Composition selon l’une des revendications 1 à 8, composition nutritionnelle, aliment composé pour animaux, aliment pour animaux visant des objectifs nutritionnels particuliers selon la revendication 9, médicament vétérinaire selon la revendication 10, pour son/leur(s) utilisation(s) en tant que médicament vétérinaire, en particulier chez les animaux domestiques, de préférence chez les animaux de compagnie tels que le chien, le chat et/ou les NAC, avantageusement chez les animaux de compagnie tels que le chien et/ou le chat.
12. Composition selon l’une des revendications 1 à 8, composition nutritionnelle, aliment composé pour animaux, aliment pour animaux visant des objectifs nutritionnels particuliers selon la revendication 9, médicament vétérinaire selon la revendication 10, pour son/leur(s) utilisation(s) pour prévenir, réguler et/ou traiter, chez l’animal, en particulier chez les animaux domestiques, de préférence chez les animaux de compagnie tels que le chien, le chat et/ou les NAC, avantageusement chez les animaux de compagnie tels que le chien et/ou le chat : la peur et/ou l’anxiété, de préférence l’anxiété, en particulier en réponse à des facteurs de stress légers chroniques et/ou
au moins un trouble du comportement, préférablement lié à la peur et/ou à l’anxiété, avantageusement lié à l’anxiété.
13. Composition selon la revendication précédente, dans laquelle ledit au moins un trouble du comportement est sélectionné parmi : l’action d’attaquer, l’agressivité, la destruction, l’élimination inappropriée, l’action de se lécher une partie du corps à répétition, l’action de se gratter, l’astasie, l’action de trembler, l’action de marquer son territoire, un comportement moteur aberrant, un comportement alimentaire anormal tel que la polyphagie ou la polydipsie, la dysbasie, un profil sensoriel anormal, une posture anormale, une vocalisation anormale, les troubles du sommeil, la perte d’expression, la perte de sociabilité et le jugement anormal des situations.
14. Composition selon l’une des revendications 1 à 8, composition nutritionnelle, aliment composé pour animaux, aliment pour animaux visant des objectifs nutritionnels particuliers selon la revendication 9, médicament vétérinaire selon la revendication 10, pour son/leur(s) utilisation(s) dans l’amélioration des procédés d’apprentissage chez l’animal, en particulier chez les animaux domestiques, de préférence chez les animaux de compagnie tels que le chien, le chat et/ou les NAC, avantageusement chez les animaux de compagnie tels que le chien et/ou le chat.
15. Composition selon l’une des revendications 1 1 à 14, ladite composition étant administrée à l’animal sous forme d’au moins une dose, de préférence sous forme d’une pluralité de doses, ladite au moins une dose comprenant : a) de 0,5 à 100 Ul, de préférence de 20 à 80 Ul, préférablement de 40 à 65 Ul, avantageusement de 50 à 60 Ul, de superoxyde dismutase par kilogramme de poids corporel dudit animal, et/ou
b) de 10 à 1 000 mg, de préférence de 200 à 800 mg, préférablement de 400 à
600 mg, avantageusement entre 450 et 550 mg, de ladite au moins une préparation à base dudit au moins un hydrolysat de protéines par kilogramme de poids corporel dudit animal,
de préférence ladite dose comprenant a) et b).
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