EP4135735A1 - Principe actif comprenant un extrait d'écorce de fruit immature de punica granatum et utilisations pour prevenir et/ou lutter contre l'acne - Google Patents

Principe actif comprenant un extrait d'écorce de fruit immature de punica granatum et utilisations pour prevenir et/ou lutter contre l'acne

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EP4135735A1
EP4135735A1 EP21716954.9A EP21716954A EP4135735A1 EP 4135735 A1 EP4135735 A1 EP 4135735A1 EP 21716954 A EP21716954 A EP 21716954A EP 4135735 A1 EP4135735 A1 EP 4135735A1
Authority
EP
European Patent Office
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active principle
acne
principle according
hydrolyzate
skin
Prior art date
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Pending
Application number
EP21716954.9A
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German (de)
English (en)
Inventor
Jean Paufique
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Industrielle Limousined'application Biologique Ste
Original Assignee
Societe Industrielle Limousine dApplication Biologique SA SILAB
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Filing date
Publication date
Application filed by Societe Industrielle Limousine dApplication Biologique SA SILAB filed Critical Societe Industrielle Limousine dApplication Biologique SA SILAB
Publication of EP4135735A1 publication Critical patent/EP4135735A1/fr
Pending legal-status Critical Current

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    • A61K2236/33—Extraction of the material involving extraction with hydrophilic solvents, e.g. lower alcohols, esters or ketones
    • A61K2236/331—Extraction of the material involving extraction with hydrophilic solvents, e.g. lower alcohols, esters or ketones using water, e.g. cold water, infusion, tea, steam distillation or decoction

Definitions

  • the invention relates to an active principle for the specific skin comprising a hydrolyzate of the peel of immature fruits of Punica granatum, useful in cosmetics or dermatology in particular for preventing and / or combating acne.
  • the invention also relates to cosmetic or dermatological compositions including it, a process for obtaining such an active principle as well as its uses.
  • Acne involves four major biological components which are the modification of the activity of the sebaceous gland, hyperkeratinization, modification of the skin microbiota by colonization of the bacteria Cutibacterium acnes (C. acnes) and inflammation. . These four pathophysiological components of acne are biologically linked because they all have an impact on each other without forming a vicious circle.
  • the objective of the invention is to respond to this problem by proposing an active principle capable of effectively combating the multiplicity of parameters at the origin of acne.
  • the invention relates to a cosmetic or dermatological active principle comprising at least one particular extract of Punica granatum.
  • Punica granatum or pomegranate is very well known and widely used.
  • the pomegranate fruit can be eaten fresh, in syrup, in juice, the dried arils (whole, powder or molasses).
  • the pomegranate fruit peel has astringent, anti-bacterial, anti-haemorrhagic, anti-inflammatory properties
  • a pomegranate bark decoction or powder is used for the treatment of gastrointestinal diseases
  • extracts are used in particular as antioxidants, in capillaries and as skin cleansers.
  • extracts of pomegranate bark for anti-acne applications, in particular ethanolic extracts alone or in combination with other extracts, to reduce the amount of secreted sebum, minimize pores and for an anti-bacterial effect.
  • the inventor has demonstrated that these existing extracts of pomegranate bark do not exhibit satisfactory results for preventing or combating all the biological components of acne.
  • the inventor has selected a precise step in the ripening of the fruits of Punica granatum and a particular type of extraction.
  • the subject of the invention is therefore a particular cosmetic or dermatological active principle, namely an active principle comprising at least one hydrolyzate of the peel of immature fruits of Punica granatum, as well as its use in application to the skin to prevent and / or fight acne.
  • a subject of the invention is also a process for obtaining such an active principle as well as the compositions including it suitable for topical application to the skin.
  • the particular selection of immature fruits of Punica granatum combined with an enzymatic hydrolysis makes it possible to fight effectively against acne, in particular to fight effectively against the four major components of acne: changes in sebogenesis, l 'hyperkeratinization, inflammation, and changes in microbiota.
  • Figure 1 shows the chromatographic profile between 250 and 390 nm of an extract of the bark of immature fruits of Punica granatum.
  • Figure 2 shows the chromatographic profile between 250 and 390 nm of an extract of the bark of mature fruits of Punica granatum.
  • Figure 3 shows the chromatographic profile between 250 and 390 nm of the juice of Punica granatum.
  • cosmetic or dermatological active or “cosmetic or dermatological active principle” within the meaning of the invention, is meant at least one molecule, preferably a set of molecules having an effect on the skin.
  • extract of a raw material X, within the meaning of the present invention, is meant any molecule or mixture of at least two molecules obtained from a raw material X, regardless of the process for extracting said molecule (s). It may for example be an extract obtained by aqueous and / or hydroalcoholic and / or hydroglycolic extraction, etc.
  • hydrolyzate of a raw material X within the meaning of the invention is meant any extraction obtained from a raw material X, by a process comprising at least one enzymatic or chemical hydrolysis step of an aqueous extract.
  • the hydrolyzate is in liquid form.
  • enzymatic hydrolyzate of a raw material X within the meaning of the invention, is meant any extraction obtained from a raw material X by a process comprising at least one step of enzymatic hydrolysis of an extract aqueous.
  • hydroglycolic extract of a raw material X within the meaning of the invention, is meant any extract obtained from a raw material X by a process comprising as main step an extraction step using at least a mixture of at least two solvents (water and a glycolic solvent, such as for example butylene glycol).
  • aqueous extraction of a raw material X within the meaning of the invention is meant any extract obtained from a raw material X by a process comprising water as the sole extraction solvent.
  • film within the meaning of the invention is meant a cosmetic product which is applied momentarily to the skin and which is removed after a certain application time, exhibiting a cosmetic or dermocosmetic effect. It may for example be a face mask.
  • dry film within the meaning of the invention is meant a film having a water activity of less than 0.6.
  • water activity is meant within the meaning of the invention a parameter well known to those skilled in the art making it possible to know the availability of water in the material. It can be measured using a device called AWmeter such as a LabSift-aw type AWmeter. The value is unitless, it is between 0 and 1. This parameter is different from the water content.
  • water content of the dry film is understood to mean the amount of liquid water contained in the film (ratio of the weight of water to the total weight of the film) and is measured by successive weighings before and after drying in the film. oven.
  • Ellagitannins polyphenolic compounds also called ellagic tannins.
  • the invention therefore relates to a specific active principle, particularly useful for preventing and / or combating acne.
  • Said active principle is a cosmetic or dermatological active principle comprising at least one particular hydrolyzate of Punica granatum.
  • the active principle is obtained from the peel of immature fruits of Punica granatum.
  • the choice of this stage of fruit maturity is essential because it contains different molecules or the same molecules but in different quantities, from those contained in the rind of mature fruits of Punica granatum.
  • Punica granatum fruits: - which have a diameter less than 10 cm, preferably less than 8cm, and / or
  • the active principle according to the invention is a hydrolyzate, that is to say that it is obtained by a process comprising a step of hydrolysis of an aqueous extract.
  • it is an enzymatic hydrolyzate, even more preferably an enzymatic hydrolyzate obtained by hydrolysis carried out using at least one carbohydrase.
  • it is an aqueous hydrolyzate, that is to say that before hydrolysis, the bark of Punica granatum has undergone solubilization in water.
  • the invention excludes any other extract such as ethanolic or hydroglycolic extracts of Punica granatum.
  • the active principle according to the invention can be in liquid form or in powder form or in film form.
  • the active principle according to the invention When it is in liquid form, the active principle according to the invention preferably consists exclusively of the hydrolyzate of the peel of immature fruits of Punica granatum and of water, as well as the extraction solvent. Preservatives or stabilizers can be added to facilitate the preservation and industrial use of the active principle.
  • the active principle according to the invention in liquid form is preferably in the form of a clear liquid, with a weak odor and an ocher to amber color. It can, however, be more colored and / or be discolored in any method known to those skilled in the art.
  • the active principle according to the invention in liquid form has a dry matter content of 10 g / L to 40 g / L.
  • the active principle according to the invention consists of:
  • the hydrolyzate represents at least 10% by weight of the active principle and the support at most 90%.
  • the active principle according to the invention can also be presented in the form of a dry film.
  • the hydrolyzate of the peel of immature fruits of Punica granatum preferably represents at least 0.1% by weight of the dry film.
  • the active principle comprises:
  • the polymer of natural origin can be chosen from: Pectin, Tamarind gum, Alginate, Pullulan, Psyllium, Xanthan, Guar, Tara, Carob, Agar, Gum arabic, Gellan, Dextran, Carrageenan, Cellulose, Konjac and Chitosan.
  • the plasticizer can be chosen from: Glycerol, Sorbitol, Sucrose, Erythritol, Urea, Propylene glycol and Butylene glycol.
  • the mineral filler can be chosen from: Calcium carbonate, green clay, kaolin, perlite, talc, magnesium silicate, mica, diatomaceous sericite, silica, calcium sulphate, calcium chloride, potassium chloride, iron oxide and zinc oxide.
  • the active principle can also comprise a pigment for coloring the film.
  • the hydrolyzate comprises polyphenols, sugars, minerals and proteins, and this, whether the active principle is in liquid, solid or film form.
  • the hydrolyzate of the active principle according to the invention comprises:
  • the active principle when the active principle is in liquid form and that it consists only of the hydrolyzate, the active principle according to the invention comprises these constituents in these proportions.
  • the active principle according to the invention comprises:
  • phenolic compounds by weight relative to the weight of dry matter of the active principle.
  • the content of phenolic compounds can be determined by colorimetric assay.
  • the phenolic compounds form, in the presence of potassium ferricyanide and iron chloride, colored complexes which can be determined by spectrophotometry at 715 nm. The intensity of this coloration is proportional to the quantity of phenolic compounds present in the sample.
  • Calibration solutions are prepared from a gallic acid or ellagic acid standard of 40 to 120 mg / L, preferably ellagic acid. A calibration curve of the optical densities of the calibration solutions as a function of their concentration is constructed. The samples are diluted beforehand with distilled water so that the polyphenol content corresponds to the calibration range. The amount of polyphenols in the samples is determined using the calibration curve.
  • the phenolic compounds of the active principle according to the invention can be characterized by any suitable method, in particular by liquid chromatography coupled to mass spectrometry.
  • the polyphenols present in the hydrolyzate are Ellagitannins.
  • the Ellagitannins present in the hydrolyzate are preferably at least 50% Punicalagin and its derivatives, less than 40% Punicalin, less than 20% HHDP derivatives and less than 10% Ellagic acid.
  • the active principle according to the invention comprises the Ellagitannins presented in Table 1.
  • the total sugar content can be determined using the DUBOIS method (Dubois M. et al. Analytical chemistry, 28, 3, 350-356, 1956). All the reducing functions are released in the presence of concentrated sulfuric acid and together with the phenol give a yellow-orange colored compound. The coloration obtained, measured at 490 nm on a spectrophotometer, is proportional to the quantity of total sugars in the sample.
  • the determination of the molar masses of the sugars is carried out by HPLC with RI detection.
  • the carbohydrate fraction of the active principle according to the invention in powder form is preferably composed of 55% to 65% of oligosaccharides and of 35% to 45% of polysaccharides consisting of glucose and fructose.
  • the average size of sugars is an average molar mass of 13,140 Da.
  • the carbohydrate fraction of the active principle in liquid form is preferably composed of 85 to 100% of oligosaccharides consisting of glucose and fructose. Their sizes are less than 3600Da.
  • the determination of the proteins in the active principle according to the invention can be carried out in particular by the method of KJELDHAL (reference: Official method of analysis of the AOC, 12th ed. W Horwitz, ED, New York, 15-60, 1975).
  • the protein content is expressed as a percentage relative to the dry matter content.
  • the crude ash content can be determined by weighing the residues resulting from the incineration of the samples of the extract according to the invention at 550 ° C. in an electric muffle furnace.
  • the minerals present in the active principle are mainly potassium, sodium and chlorine. Other minerals such as phosphorus, magnesium, and sulfur may be present.
  • the analysis of the minerals constituting the ashes of the active principle according to the invention can be carried out by optical emission spectrometry (ICP / OES) and the determination of the chloride ions by titration with silver nitrate.
  • the hydrolyzate of the peel of immature fruits of Punica granatum according to the invention can be obtained by any means. Preferably, it is obtained by carrying out a process comprising at least one aqueous extraction and one enzymatic hydrolysis.
  • the hydrolyzate according to the invention is obtained by carrying out the following steps: a) Solubilization of powder from the peel of immature Punica granatum fruits in water, at a rate of at least 50 g / L, b) Enzymatic hydrolysis, preferably using a carbohydrase, c) Separation of the soluble and insoluble phases, by any means making it possible to separate an insoluble phase from the soluble phase, for example by centrifugation , filtration or decantation d) recovery of the soluble phase, and enzymatic inactivation by any means allowing the inactivation of the enzymatic activities, for example by heat treatment, e) purification of the polyphenolic compounds by any means allowing molecular sorting, f) optionally deodorization or decoloration by adding a process adjuvant allowing deodorization or decoloration g) preferably filtration and sterilizing filtration.
  • the hydrolyzate obtained can be used as it is in liquid form and constitutes the active principle according to the invention.
  • the hydrolyzate can also optionally be combined with a support and dried (atomization or lyophilization in particular), so as to be in powder form.
  • the hydrolyzate can also optionally be combined with compounds allowing its presentation in the form of a dry film.
  • compositions comprising a cosmetically / dermatologically acceptable medium. These are compositions in different dosage forms, suitable for topical application to the skin.
  • compositions can be in particular in the form of oil-in-water emulsions, water-in-oil emulsions, multiple emulsions (Water / Oil / Water or Oil / Water / Oil) which can optionally be microemulsions or nanoemulsions, or in the form of solutions, suspensions, water dispersions, aqueous gels or powders. They can be more or less fluid and have the appearance of creams, emulsions, gels or films or all other aspects of skin care cosmetics.
  • compositions comprising at least 0.1% of an active principle according to the invention in liquid form, preferably between 0.1 and 10% or at least 0.05% of the active principle according to the invention. the invention in powder form, preferably between 0.05% and 2%.
  • compositions comprise, in addition to the active agent, a physiologically acceptable medium and preferably cosmetically and / or dermatologically acceptable, that is to say which does not cause unacceptable feelings of discomfort for the user such as redness, tightness or tingling.
  • compositions according to the invention may contain as adjuvant at least one compound chosen from:
  • oils which can be chosen in particular from silicone oils, linear or cyclic, volatile or non-volatile;
  • waxes such as ozokerite, polyethylene wax, beeswax or wax carnauba,
  • surfactants preferably emulsifiers, whether nonionic, anionic, cationic or amphoteric,
  • humectants such as polyols such as glycerin
  • compositions are in particular intended to be used for improving the quality of the skin, in particular for preventing and / or combating acne.
  • the composition comprising the cosmetic active principle according to the invention is applied, preferably to the face, at least once a day for at least 14 days.
  • compositions according to the invention are particularly effective for a topical treatment of the skin and in particular for an effect of preventing or treating acne.
  • a subject of the invention is therefore also an active principle according to the invention or a composition including it for its use in the prevention and / or treatment of acne.
  • the invention relates to the use of a hydrolyzate of the peel of immature fruits of Punica granatum for preventing and / or combating acne.
  • the active principle according to the invention is capable of having a positive influence on these four biological components of acne.
  • the active principle according to the invention is capable of acting on the various factors increasing sebogenesis.
  • various endogenous (eg hormones, C. acnes, lipophagic activity) and exogenous (eg stress) factors the metabolism of the sebaceous glands is activated, characterized by quantitative and qualitative modifications of the sebum. This results in an increase in sebogenesis and consequently in an abnormally high production of sebum.
  • the active principle according to the invention is also capable of acting on hyperkeratinization, another component of acne.
  • Hyperkeratinization is an early biological event in the development of acne lesions. It is characterized by an abnormality of proliferation and keratinization of follicular keratinocytes favoring obstruction of the excretory duct, poor evacuation of sebum and consequently dilation of the pilosebaceous duct at the origin of the formation of a microcomedon.
  • the active principle according to the invention also acts on inflammation, the third component of acne.
  • Inflammation is the biological phenomenon concomitant with all the stages of the formation of acne lesions: microcomedon, comedo, inflammatory lesion, post-inflammatory erythema and even scar.
  • the bacterium C. acnes plays an essential role in the appearance of inflammatory lesions. It stimulates the production of pro-inflammatory mediators by several cell types of the pilosebaceous unit (keratinocytes, sebocytes, immune cells infiltrating acne lesions).
  • the active principle according to the invention has the capacity to act on the cutaneous microbiota of acne-prone skin.
  • C. acnes The Cutibacterium acnes bacteria (C. acnes) is considered to be one of the major pathogenic factors contributing to the development of acne. Acne is characterized by a loss of phylotypic diversity of C. acnes in favor of the IA1 phylotype.
  • the population of C. acnes phylotype IA1 has an ability to communicate and organize itself to set up virulence factors (eg formation of biofilms) via the quorum sensing system and thus colonize the follicle.
  • the active principle according to the invention restores the homeostasis of acne-prone skin.
  • the sebaceous glands are sensitive to androgens. They have the enzymatic equipment necessary for the metabolism of testosterone into dihydrotestosterone (DHT) and specific receptors for DHT. Stimulation of these receptors activates genes involved in the production of sebum.
  • DHT dihydrotestosterone
  • Stimulation of these receptors activates genes involved in the production of sebum.
  • DHT dihydrotestosterone
  • the number of receptors for DHT is increased in the acne sufferer as well as his sensitivity to DHT. This is why acne is considered "a peripheral hormonal disease".
  • the active principle according to the invention inhibits the conversion of testosterone into DHT, and thus limits the excess of androgens involved in the pathophysiology of acne.
  • Sebum is a substrate of choice for the growth of microorganisms contributing to the development of acne, such as C. acnes, it has been shown that C. acnes has an activity which stimulates lipogenesis. In acne, the hyperproliferative bacteria would be able to stimulate directly, or indirectly via soluble factors, the production of lipid droplets by the sebocytes. By this mechanism, C. acnes is able to aggravate hyperseborrhea, a major pathophysiological component of acne.
  • the active principle according to the invention limits the secretion of lipids in the sebocytes.
  • the active principle according to the invention inhibits the secretion of lipids induced by substance P or by the combination of C. acnes and substance P on sebocytes.
  • the active principle according to the invention makes it possible to normalize the activity of the sebaceous gland, a key biological component of pathophysiology acne.
  • the active principle according to the invention is also capable of acting on the hyperkeratinization which occurs in acne.
  • Hyperkeratinization is an early biological event in the development of acne lesions. This is an abnormality in the proliferation and keratinization of the keratinocytes that line the wall of the follicle. It leads to an accumulation of corneocytes and obstruction of the excretory duct. These changes alter the normal evacuation of sebum causing retention and dilation of the pilosebaceous duct, causing the formation of a microcomedon. The latter is a preclinical lesion invisible to the naked eye characterized histologically by the distension of the wall of the follicle and which progressively progresses to the comedo.
  • cytokeratin-16 CK-16
  • Squalene a component of sebum, is the main source of peroxidized lipids in acne-prone skin. Beyond causing skin irritation, peroxidized squalenes exert a strong comedogenic power, colonization by C. acnes.
  • C. acnes By colonizing the pilosebaceous duct, C. acnes is able to modify the biology of keratinocytes and influence their proliferation and differentiation.
  • the bacterium stimulates the synthesis of pro-inflammatory cytokines in the pilosebaceous follicle, in particular interleukin la (IL-la), a major factor in the appearance of hyperkeratinization.
  • IL-la interleukin la
  • this cytokine is capable of activating the genes encoding cytokeratins, in particular CK-16, but also of inducing the production of other keratins such as CK-5.
  • studies have shown that C. acnes is able to exert a direct effect on the biology of keratinocytes and the formation of microcomedones.
  • a hydrolyzate of the peel of immature fruits of Punica granatum according to the invention is capable of having an effect on the hyperkeratinization which occurs in acne.
  • the active principle according to the invention is capable of:
  • the active principle according to the invention is also capable of acting on the inflammation which occurs in acne.
  • Inflammation is a fundamental process present throughout the development of acne lesions. Indeed, it is present from the early stages to the later stages of the pathology.
  • C. acnes actively participates in the creation of an inflammatory environment.
  • the bacteria By colonizing the pilosebaceous follicle, the bacteria play an essential role in triggering the inflammatory reaction and the appearance of inflammatory lesions. It stimulates the production of inflammation mediators by several cell types of the pilosebaceous unit.
  • exogenous and endogenous factors such as hormones, stress, composition of sebum, etc., accentuate the inflammatory phenomenon.
  • keratinocytes Several cell types of the pilosebaceous follicle are involved in these inflammatory mechanisms: keratinocytes, sebocytes but also immune cells infiltrating acne lesions.
  • the modification of the composition of the sebum and in particular the peroxidation of squalenes influences the inflammatory state of the pilosebaceous follicle by stimulating the secretion of the pro-inflammatory cytokine IL-Ia by the keratinocytes.
  • colonization of the pilosebaceous follicle by C. acnes leads to the production and secretion by the keratinocytes of numerous pro-inflammatory mediators:
  • MMP2 - metalloproteinases
  • the active principle according to the invention inhibits the secretion of chemokines, cytokines and metalloproteinases in reconstructed 3D epidermis mimicking acne-prone skin.
  • Sebocyte inflammation [0126] Sebocyte inflammation.
  • Acne is characterized by a change in the composition of the microenvironment of the sebaceous follicles inducing colonization and increased metabolic activity of C. acnes.
  • the bacteria are able to induce an inflammatory response at the level of the sebocytes which produce numerous pro-inflammatory mediators.
  • sebocytes secrete pro-inflammatory cytokines (IL-6, IL-8, etc.) contributing to the inflammatory reaction observed in acne lesions.
  • the secretion of these mediators confers on the sebocytes the capacity to promote the differentiation of the naive helper T lymphocytes into Th17, thus reinforcing the inflammatory phenomenon.
  • the sebaceous gland is sensitive to negative emotions such as stress. It has been shown that acne patients exhibit increased innervation in the environment of the sebaceous glands indicating the existence of communication between the nervous and sebaceous systems.
  • substance P as a neurotransmitter of inflammation in acne has so far been well described in the literature. It causes the secretion of pro-inflammatory cytokines (IL-6, IL-8, etc.) exacerbating the inflammatory environment of the sebaceous glands.
  • an infiltrate of immune cells is present in the acne lesions, an infiltrate composed mainly of CD4 + helper T lymphocytes.
  • Thl7 Thl7 lymphocytes contribute significantly to the inflammatory phenomenon.
  • C. acnes has been shown to have the ability to induce differentiation of naive lymphocytes into Th17 lymphocytes.
  • IL-17 interleukin 17
  • the presence of IL-17 results in the secretion of pro-inflammatory mediators by epithelial cells, such as IL-8 and CCL20, thereby exacerbating the inflammatory process.
  • the appearance and exacerbation of the inflammatory phenomenon described in acne lesions therefore involves various protagonists and factors.
  • the inflammatory mediators produced promote comedogenesis and then the rupture of the follicle leading to the appearance of inflammatory lesions.
  • the active principle is capable of regulating the biology of LThl7 and of limiting the inflammation induced by these cells.
  • a hydrolyzate of the peel of immature fruits of Punica granatum is capable of having an effect on the inflammation which occurs in acne.
  • the active principle according to the invention is capable of:
  • a marker of the pathophysiology of acne in particular by inhibiting the secretion of CCL5, of CCL20, of CXCL1, and by inhibiting the secretion of IL-Ia, of IL-8, and inhibiting the secretion of MMP2 and MMP9;
  • the active principle according to the invention is capable of acting against C. acnes.
  • Cutibacterium acnes is a major species of the cutaneous commensal flora, the preferred habitat of which is the pilosebaceous follicle. This bacteria is considered to be one of the major pathogenic factors contributing to the development of acne. Studies on C. acnes and its role in acne have brought to light new data and mechanisms explaining its virulence in pathology.
  • the bacterial component is therefore an important parameter in the development of acne lesions. Targeting the bacterium C. acnes phylotype IA1 and reducing its virulence is an essential strategy to fight against this pathology.
  • the active principle according to the invention limits the growth of the bacterium C. acnes phylotype IA1.
  • the microcomedones constitute anaerobic microenvironments rich in lipids, favorable to the growth and establishment of C. acnes. Indeed, the latter can behave like an opportunistic pathogenic bacterium thanks to a mode of growth in biofilm.
  • the biofilm is a heterogeneous structure made up of the bacterial population enclosed in an extracellular matrix of DNA, proteins and polysaccharides produced by it, all adhering to a surface. This biofilm growth gives bacteria specific properties of morphology, growth, communication and resistance to biocides in order to optimize their survival.
  • QS quorum sensing
  • the active principle according to the invention also exhibits an anti-bacterial effect against the bacteria which are involved in acne, in particular C. acnes of phylotype IA1.
  • the direct anti-bacterial efficacy of the active principle according to the invention is real since it
  • the active principle according to the invention is capable of targeting the four major components of the pathophysiology of acne. It normalizes the activity of the sebaceous gland. It also has keratolytic activity and controls colonization by C. acnes. It reduces the inflammatory sebocytic, keratinocyte and lymphocyte responses of the Thl7 type. Finally, it acts directly as an anti-bacterial by limiting the growth of C. acnes and by inhibiting quorum sensing and the formation of a bacterial biofilm. [0148] Its therapeutic efficacy has been clinically demonstrated on adult volunteers suffering from mild to moderate acne: the number of acne lesions is significantly reduced with a lower GEA score. This active ingredient improves the quality and appearance of acne-prone skin. It is a high-performance treatment combining speed of action and efficiency in the daily care of acne-prone skin.
  • the invention relates to the use of an active principle comprising a hydrolyzate of the peel of immature pomegranate fruit on acne-prone skin for:
  • the invention thus also relates to a non-therapeutic process, namely a non-therapeutic cosmetic process for treating the skin for an anti-acne effect, which consists in the topical application to the skin of a composition comprising a principle. active according to the invention.
  • Example of active principles and comparison with existing pomegranate extracts [0154] IV.A1.
  • Example 1 Example of Active Principle According to the Invention in Liquid Form
  • the active principle is obtained by carrying out the following steps: a) Solubilization of powder from the peel of immature Punica granatum fruits in water, at a rate of 50g / L, b) Enzymatic hydrolysis using a carbohydrase, c) Separation of the soluble and insoluble phases, by centrifugation, d) recovery of the soluble phase, and enzymatic inactivation by heat treatment, e) purification by filtration of the polyphenolic compounds, f) deodorization by addition of a process adjuvant allowing deodorization, g) filtrations and sterilizing filtration.
  • the polyphenols of the hydrolyzate are Ellagitannins, more precisely, they are Punicalagin and its derivatives, Punicalin, HHDP derivatives and Ellagic acid.
  • Example 2 Example of Active Principle According to the Invention in Powder Form
  • the active principle is obtained by carrying out the following steps: a) Solubilization of powder from the peel of immature Punica granatum fruits in water, at a rate of 50g / L, b) Enzymatic hydrolysis using a carbohydrase, c) Separation of the soluble and insoluble phases, by centrifugation, d) recovery of the soluble phase, and enzymatic inactivation by heat treatment , e) purification by filtration of the polyphenolic compounds, f) introduction of maltodextrin, at a rate of 90% (v / v), g) concentration, sterilization and atomization.
  • the active principle comprising the hydrolyzate according to the invention and a support, obtained by implementing the method described above, has the following analytical characteristics:
  • the polyphenols present in the hydrolyzate are Ellagitannins. These are Punicalagin and its derivatives, Punicalin, HHDP derivatives and Ellagic acid.
  • Example 3 example of active principle according to the invention in the form of a film.
  • the active principle in the form of a film containing the active principle can be obtained by the following process: a) Solubilization of powder of the peel of immature Punica granatum fruits in water, at a rate of 50 g / L, b) Enzymatic hydrolysis using a carbohydrase, c) Separation of the soluble and insoluble phases, by centrifugation, d) recovery of the soluble phase, and enzymatic inactivation by heat treatment, e) purification by filtration of the polyphenolic compounds, f) addition of polymers of natural origin, plasticizers, mineral fillers and surfactant g) deposit of the solution on a support h) evaporation of water in an oven heated to a temperature between 70 and 100 ° C i ) laser cutting according to the desired shape.
  • the active principle according to the invention obtained by carrying out the process described above has the following composition: 28.3% of polymers of natural origin including carrageenans, guar and cellulose, 49 , 5% plasticizers including urea and glycerol, 20.5% mineral fillers including silica and kaolin and 1.2% surfactant and 0.5% extract of immature Punica granatum.
  • an "immature" fruit harvested at the beginning of summer has a green rind, a diameter of less than 8 cm and exhibits particular markers (high content of punicalagin & derivatives), while that a “mature” fruit harvested at the end of autumn, has an orange / red peel, a diameter greater than 10 cm and has different markers (high punicalin content).
  • the pomegranate peels available on the market are a by-product of the pomegranate juice industry. Thus, the pomegranate peels from this industry are always mature pomegranate peels, so that the pomegranate juice is sweet and sweet in taste.
  • Table 5 shows the results comparing an ethanolic extract and an aqueous extract.
  • the ethanolic extract is obtained by dissolving pomegranate peel powder at a rate of 50 g / L in absolute ethanol. It is compared with an aqueous extract obtained in a similar manner by dissolving pomegranate peel powder at a rate of 50 g / L in distilled water.
  • the aqueous extract has a much higher content of Ellagitannins compounds than the ethanolic extract.
  • Example 4 Example of the Composition of a Purifying Lotion According to the Invention An example of a formulation containing an active principle according to the invention is presented in Table 7 below. This lotion is fresh and non-sticky, it gently purifies the skin.
  • Example 5 Example of a Treating Serum Composition According to the Invention
  • Table 8 An example of a formulation containing an active principle according to the invention is presented in Table 8 below. This light and slippery treatment spreads easily and penetrates quickly, leaving the skin soft without leaving a greasy or sticky feeling. [0196] [Table 8]
  • Acne is a pathology characterized by quantitative and qualitative changes in sebum. Indeed, under the influence of various endogenous (eg hormones, Cutibacterium acnes, lipophagic activity) and exogenous (eg stress) factors, the metabolism of the sebaceous glands is activated. This results in an increase in sebogenesis and consequently in an abnormally high production of sebum.
  • endogenous eg hormones, Cutibacterium acnes, lipophagic activity
  • exogenous eg stress
  • the objective of this study was to evaluate the effect of an active principle according to the invention on the sebaceous component, the activity of which is modified by androgenic hormones.
  • the activity of 5-alpha reductase was evaluated in vitro on primary human sebocytes (SHN). This enzyme catalyzes the conversion of testosterone to dihydrotestosterone (DHT).
  • SHN normal human sebocytes
  • DHT dihydrotestosterone
  • the operating protocol for the culture and the treatment of human sebocytes for the study of the metabolism of testosterone is as follows. Normal human sebocytes (SHN) are seeded in a specific culture medium and incubated at 37 ° C. In a first, the cells are then pretreated with the active principle of Example 2 at 0.0006% or 0.0015%. The next day, the cells are treated with a radiolabeled testosterone solution containing or not the active principle of Example 2 at 0.0006% or 0.0015% for 24 hours. The culture supernatants are recovered. [0206] Analysis of the activity of 5-alpha reductase:
  • the steroids contained in the culture supernatants were extracted into a mixture of chloroform / methanol.
  • the organic phase, containing the steroids, was collected and the different molecular species (testosterone metabolites) were separated by thin layer chromatography (TLC) using a dichloromethane / ethyl acetate / methanol mixture as separation solvent.
  • TLC thin layer chromatography
  • the revelation of the chromatography plates and the evaluation of the quantity of transformed testosterone were carried out by densitometric analysis of the different spots corresponding to the different metabolites of testosterone.
  • the active principle according to the invention significantly inhibits the conversion of testosterone into DHT by 37%.
  • the active principle according to the invention therefore regulates the biology of sebocytes and thus limits the excess of androgens involved in the physiology of acne.
  • the objective of this study is to evaluate in vitro the effect of the active principle according to the invention on the sebogenesis, thanks to the analysis of the secretion of lipid droplets by the NHS subjected to a stress by the substance. P and / or C. acnes.
  • the operating protocol for the culture and treatment of human sebocytes for the study of sebogenesis is described below.
  • Normal human sebocytes (SHN) are seeded in a specific culture medium and incubated at 37 ° C. Then, the cells are treated with a suspension of C. acnes in the presence or absence of substance P for 24 hours.
  • the active principle of Example 2 is applied at 0.0006% or 0.0015% together with the C. acnes +/- Substance P treatment. Finally, the cells are rinsed with PBS buffer and then fixed.
  • the cells are fixed in paraformaldehyde and the BODIPY TM probe, which stains neutral lipids, is used. The nuclei are marked.
  • the results on the sebogenesis are presented in Table 10 (Average values of the coloration of the lipids by the BODIPY TM probe of the NHS treated with C. acnes).
  • the active principle according to the invention significantly inhibits the secretion of lipid droplets induced by C. acnes by 62%, by the substance P 87% and the combination of C. acnes and substance P 73%. In response to C. acnes and / or to substance P, the active principle according to the invention thus limits the excess secretion of lipids, a parameter characteristic of the pathophysiology of acne. [0223] C. Study of the effectiveness of the active principle according to the invention on lipophagia of the sebaceous gland.
  • the cells are fixed in methanol.
  • the primary antibody is used.
  • the cores are labeled with 4 ', 6-diamidino-2-phenylindole.
  • the visualization is carried out on the microscope coupled to an image analysis system.
  • the coloring and the synthesis of the various markers studied are proportional to the intensity of the fluorescence (yellow or green color) present in the NHS.
  • the active principle according to the invention significantly increases the synthesis of LC3b by 121% and significantly inhibits the secretion of 77% lipid droplets.
  • ACNESIUM ® limits the production of lipids, a characteristic component of the pathophysiology of acne.
  • hyperkeratinization is an early biological event in the development of acne lesions. It is characterized by an abnormality of proliferation and keratinization of follicular keratinocytes favoring obstruction of the excretory duct, poor evacuation of sebum and consequently dilation of the pilosebaceous duct at the origin of the formation of a microcomedon.
  • the objective of this study was to evaluate the effect of an active principle according to the invention on hyperkeratinization. Hyperkeratinization was assessed by measuring the thickness of the stratum corneum and by studying the synthesis of cytokeratins CK-5 and CK-16 in a model mimicking acne-prone skin (named SILABSKIN ® RE mimic acne).
  • SILABSKIN ® RE mimic acne
  • Normal human keratinocytes are seeded in inserts in a specific culture medium and incubated at 37 ° C.
  • the SILABSKIN ® RE are passed through an air / liquid interface then the culture medium is changed every 2 days.
  • the SILABSKIN ® RE are treated topically with a suspension of C. acnes, the active principle of example 2 is applied topically at 0.003% and 0.006% together with the application of C. acnes. After 2 hours, the excess bacterial solution is aspirated.
  • the next day the SILABSKIN ® RE are again treated topically with a suspension of C.
  • Example 2 the active ingredient of Example 2 was applied topically to 0.003% and 0.006% in conjunction with the application of C. acnes. After 2 hours, the excess bacterial solution is aspirated. SILABSKIN ® RE are finally treated topically with a solution of peroxidized squalene. Finally, the sub-swim-culture are recovered and stored at -80 ° C and tissues were collected and fixed in paraformaldehyde .After fixation, SILABSKIN ® RE are dehydrated and embedded in paraffin. Sections are made using a microtome.
  • the hematoxylin / eosin staining is carried out.
  • the immunohistological analyzes of cytokeratins-5 and -16 were carried out after incubation of the primary antibodies, followed by incubation with the secondary antibody.
  • the cores are labeled with 4 ', 6-diamidino-2-phenylindole.
  • the visualization is carried out on the microscope coupled to an image analysis system.
  • the synthesis of the various markers studied is proportional to the intensity of the fluorescence (green color) present on the reconstructed epidermis.
  • a quantitative analysis of the images was carried out using Matlab software.
  • the cells are then incubated at 37 ° C. in an atmosphere containing 5% CO 2.
  • the cells are recovered and the total RNAs extracted for the study of filaggrin, loricrin, claudin-4, GBA and ABCA12.
  • the RNAs were reverse-transcribed and the complementary DNAs obtained were analyzed by the quantitative PCR technique.
  • the mRNAs of reference controls were also analyzed in parallel with the mRNAs of filaggrin, claudin-4, GBA and ABCA12.
  • the quantification of the incorporation of fluorescence (SYBR Green) is measured continuously using a thermal cycler.
  • Ct analysis is performed using software. The results are presented in Tables 33 and 34 below.
  • the active principle according to the invention induces the expression of mRNAs encoding filaggrin and does not induce the expression of mRNAs encoding Loricrin, Claudine-4, ABCA12 and GBA.
  • inflammation is the biological phenomenon concomitant with all the stages of the formation of acne lesions: microcomedon, comedone, inflammatory lesion, post-inflammatory erythema and even scar.
  • the C. acnes bacterium stimulates the production of pro-inflammatory mediators by several cell types of the pilosebaceous unit (keratinocytes, sebocytes, immune cells infiltrating acne lesions).
  • the objective of these studies was to evaluate the effect of an active principle according to the invention on keratinocyte inflammation, sebocytic inflammation and on the biology of Th17 lymphocytes.
  • the keratinocyte inflammation was studied on a 3D model mimicking acne skin (called SILABSKIN ® RE mimic acne) assaying various mediators of inflammation, found in large quantities in acne-prone skin: CCL5, CCL20, CXCL1, IL-1a, IL-8, MMP2 and MMP9.
  • SILABSKIN ® RE mimic acne
  • Normal human keratinocytes are seeded in inserts in a specific culture medium and incubated at 37 ° C.
  • the SILABSKIN ® RE are passed through an air / liquid interface then the culture medium is changed every 2 days.
  • the SILABSKIN ® RE are treated topically with a suspension of C. acnes, the active principle according to the invention is applied topically at 0.003% and 0.006% together with the application of C. acnes.
  • SILABSKIN ® RE After 2 hours, the excess bacterial solution is aspirated. The next day the SILABSKIN ® RE are again treated topically with a suspension of C. acnes, the active principle according to the invention is applied topically to 0.003% and 0.006% in conjunction with the application of C. acnes. After 2 hours, the excess bacterial solution is aspirated. SILABSKIN ® RE are finally treated topically with a solution of peroxidized squalene. The culture sub-swimmers of the SILABSKIN ® RE are recovered and stored at -80 ° C.
  • Th17 inflammatory response The effect of the active principle according to the invention was evaluated on the Th17 inflammatory response. This study relates to the analysis of the secretion of IL-17 produced by Thl7 lymphocytes, cells found in large numbers in lesion areas of acne.
  • Naive T (LT) lymphocytes are isolated from peripheral blood mononuclear cells. They are seeded in plates pre-coated with an anti-CD3 antibody containing specific medium. A mix allowing the differentiation of naive LT into LThl7 is added. The cells are then incubated at 37 ° C. After several days, the culture medium is removed and replaced by a medium containing the differentiation mix in the presence or absence of the active principle according to the invention (0.0015% or 0.0060%). The next day, the cell culture supernatants are collected and stored at -80 ° C. [0283] The secretion of IL-17 was evaluated by the ELISA technique.
  • the active principle according to the invention significantly inhibits the secretion of IL-17 by 38%.
  • the active principle according to the invention regulates the biology of LThl7 and thus limits the inflammation induced by these cells, which are important actors in the pathophysiology of acne.
  • C Study of the effectiveness of the active principle according to the invention on sebocytic inflammation.
  • C. acnes induces an inflammatory response in the sebocytes.
  • the latter then produce numerous mediators (IL-6, IL-8, etc.) which contribute to the inflammatory reaction observed in acne lesions.
  • mediators IL-6, IL-8, etc.
  • substance P as a neurotransmitter of inflammation in acne has so far been well described in the literature.
  • the sebocytic inflammation was studied by analyzing the secretion of IL-6 and IL-8 by sebocytes subjected to bacterial exposure (C. acnes phylotype I Al) and to a neuronal influence (substance P). .
  • the operating protocol for the culture and the treatment of human sebocytes is described below.
  • Normal human sebocytes (SHN) are seeded in a specific culture medium and incubated at 37 ° C. in an atmosphere containing 5% CO2.
  • the cells are treated with a suspension of C. acnes and / or substance P, and the active principle according to the invention is applied at 0.0006% or 0.0015% together with the C. acnes +/- Substance P. treatment.
  • the culture supernatants are then collected and stored at -80 ° C.
  • the active principle according to the invention significantly inhibits the secretion of IL-6 and IL-8 by 186% and 196% respectively.
  • the C. acnes bacterium is considered to be one of the major pathogenic factors contributing to the development of acne.
  • Acne is characterized by a loss of phylotypic diversity of C. acnes in favor of the IA1 phylotype.
  • the population of C. acnes phylotype IA1 has an ability to communicate and organize itself to set up virulence factors (biofilm formation) via the quorum sensing system and thus colonize the follicle.
  • MIC minimum inhibitory concentration
  • the population of C. acnes phylotype IA1 possesses an ability to communicate and organize itself in order to set up virulence factors via the quorum sensing system.
  • the effect of the active principle according to the invention on quorum sensing was apprehended by measuring the expression of the Lux gene, a pivot gene whose level of activity is linked to that of QS.
  • a culture of C. acnes is inoculated with specific broth, in the presence and absence of the active principle according to the invention (0.006%), from a preculture in the exponential growth phase. This culture is carried out at 37 ° C. under anaerobic conditions for 24 hours, and is followed by measuring the optical density at 600 nm. At the end of the 24 hours of growth, the cultures are centrifuged:
  • RNAprotect Bacteria Reagent RNA Protect according to the supplier's recommendations. They are then stored dry at -80 ° C. with a view to extracting the total RNAs.
  • the culture supernatants are for their part taken, filtered (0.2 ⁇ m) and stored at -20 ° C. with a view to measuring the quantity of AI-2 secreted during growth.
  • the bacterium is inoculated from a preculture in exponential phase in the presence or absence of a sub-inhibitory quantity. of the active principle according to the invention (0.006%), in microplates.
  • the microplates are incubated anaerobically at 37 ° C for 48 hours to promote the formation of the biofilm.
  • the active principle according to the invention prevents significantly the formation of a biofilm by C. acnes phylotype IA1 of 43%.
  • the active principle according to the invention exerts an anti-bacterial activity against the virulent phylotype associated with the development of acne lesions.
  • the active principle according to the invention is capable of targeting the four major components of the pathophysiology of acne. Trials have also been performed to clinically demonstrate therapeutic efficacy in adult volunteers with mild to moderate acne, including its impact on the lipidoma of acne-prone skin.
  • a hydrolyzate of the peel of immature fruits of Punica granatum is capable of having an effect on the quantitative and qualitative modifications of the lipid profile of the. sebum that are involved in acne.
  • the active principle according to the invention is capable of:
  • the active principle according to the invention is capable of regulating the biology of sebocytes. [0335] A. Study of the effectiveness of the active principle according to the invention on the lipidoma of acne-prone skin.
  • the objective of this study was to evaluate the effect of the active principle according to the invention formulated at 0.5% on the lipid profile of the sebum of skin exhibiting mild to moderate acne.
  • Placebo group group of 18 women who applied a placebo formula twice a day for 30 days to the entire face.
  • Active principle group according to the invention group of 18 women having applied twice daily for 30 days, a formula containing the active principle according to the invention to the entire face.
  • the quantity and the nature of the lipids of the sebum were evaluated by sampling, on D0 and D30, followed by the UPLC-MS / MS assays.
  • the identification of the species of interest was validated by the injection of standard compounds and the quantification of the species was carried out by addition of deuterated standard compounds at known concentrations.
  • active agent according to the invention formulated at 0.5% significantly improves the quality of the lipid profile of sebum in acne sufferers by: significantly reducing the quantity of fatty acid (palmitic acid: -42%, sapienic acid: -61%, oleic acid : -49%, sebaleic acid: -65%); significantly lowering the unsaturated fatty acid / saturated fatty acid ratio by 14%; significantly reducing the amount of squalenes by 28%; significantly reducing the amount of cholesterol by 26%;
  • Placebo group group of 46 women who applied the placebo formula to the entire face for 30 days, morning and evening.
  • Active principle group group of 46 women having applied for 30 days, morning and evening, the formula containing the active principle according to the invention to the entire face.
  • the GEA scale has 6 stages.
  • the dermatologist established a clinical condition of the skin by evaluating various parameters relating to the problem of acne-prone skin according to the following 6 criteria on a rating scale ranging from 0 to 9 (from zero to significant): intensity of seborrhea, intensity of erythema linked to pimples, importance of dilated pores, intensity of skin dryness, irregularity of the complexion, irregularity of the relief [0354]
  • intensity of seborrhea intensity of erythema linked to pimples
  • importance of dilated pores intensity of skin dryness
  • irregularity of the complexion irregularity of the relief
  • the product reduces dilated pores 5)
  • the product has a moisturizing effect
  • the product can be used to treat mild to moderate acne
  • the group using the formula containing the active principle according to the invention reveals significantly more favorable performance than the placebo group: reduction in the number of lesions 40.6% retention for the group which used the formula containing the active ingredient according to the invention versus 30.9% for the group which applied the placebo formula.
  • the results corresponding to the count of the total number of inflammatory lesions are presented in table 43.
  • the group using the formula containing the active principle according to the invention shows significantly more favorable performance than the placebo group: reduction in the total number of lesions by 43.9% for the group having used the formula containing the active principle according to invention versus 34.0% for the group which applied the placebo formula.
  • the group using the formula containing the active principle according to the invention reveals more favorable performance than the placebo group: intensity of seborrhea (-39 % versus 33%), intensity of erythema linked to pimples (-39% versus -32%), size of dilated pores (-27% versus -26%), complexion irregularity (-37% versus -32%) , and irregularity of the relief (-37% versus -31%),
  • the objective of this study is to evaluate, in vivo, the immediate effect in film form on subjects after 10 minutes of application as well as after a period of persistence of 6 hours after application, corresponding to an effect on the day.
  • the active principle according to the invention in the form of a film increases the level of hydration of the skin throughout the day. In fact, immediately after application, a significant increase of 45% was observed and this effect is visible for 100% of the subjects. This level of hydration is maintained throughout the day, with a significant increase maintained at 40% in 100% of subjects after 3 hours and at 34% 6 hours after application in 94% of subjects.
  • the active principle according to the invention in the form of a film, decreases the sebum of the skin throughout the day. In fact, immediately after application, a significant decrease of 51% in the sebum level was observed in 100% of the subjects. This variation is maintained throughout the day, with a significant decrease maintained at 20% in 88% of subjects after 3 hours and at 15% in 76% of subjects.
  • the active principle according to the invention in the form of a film significantly improves skin hydration, while reducing the level of sebum in the skin. All of these effects are maintained throughout the day.
  • the active principle according to the invention in the form of a film significantly increases the hydration of the skin by 37% in 72% of subjects after 6 applications and by 40% in 83% of subjects after 12 applications.
  • the active principle according to the invention in the form of a film significantly reduces the sebum level by 22% in 83% of subjects after 6 applications and by 24% in 83% of subjects after 12 applications.

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Abstract

L'invention concerne un principe actif cosmétique ou dermatologique comprenant au moins un hydrolysat d'écorce de fruits immatures de Punica granatum, pouvant se présenter sous forme liquide, sous forme solide ou sous forme de film. L'invention a également pour objet une composition l'incluant, un procédé d'obtention ainsi que l'utilisation de ce principe actif pour prévenir et/ou lutter contre l'acné.

Description

PRINCIPE ACTIF COMPRENANT UN EXTRAIT D'ÉCORCE DE FRUIT IMMATURE DE PUNICA GRANATUM ET UTILISATIONS POUR PREVENIR ET/OU LUTTER CONTRE L'ACNE
[0001] Domaine de l'invention
[0002] L'invention concerne un principe actif pour la peau spécifique comprenant un hydrolysat d'écorce de fruits immatures de Punica granatum, utile en cosmétique ou dermatologique en particulier pour prévenir et/ou lutter contre l'acné. L'invention concerne également les compositions cosmétiques ou dermatologiques l'incluant, un procédé d'obtention d'un tel principe actif ainsi que ses utilisations.
[0003] Etat de la technique [0004] L'acné est une pathologie cutanée chronique multifactorielle du système pilosébacé.
Elle se manifeste notamment par l'apparition de différentes lésions cutanées non inflammatoires ou rétentionnelles telles que les comédons, et des lésions inflammatoires telles que les papules, pustules, nodules et kystes. Elle affecte principalement le visage. Ces imperfections sont inconfortables et difficiles à masquer et entraînent souvent un impact négatif sur la qualité de vie de ceux qui en souffrent.
[0005] L'acné implique quatre grandes composantes biologiques que sont la modification de l'activité de la glande sébacée, l'hyperkératinisation, la modification du microbiote cutané par la colonisation de la bactérie Cutibacterium acnés (C. acnés) et l'inflammation. Ces quatre composantes physiopathologiques de l'acné sont biologiquement liées car elles ont toutes un impact les unes sur les autres sans pour autant former un cercle vicieux.
[0006] De nombreux traitements anti-acné existent sur le marché mais beaucoup sont constitués de produits de synthèse de substances médicamenteuses et très peu de produits d'origine naturelle sont réellement efficaces. On trouve aussi des actifs agissant sur l'une ou l'autre des composantes biologiques de l'acné, mais aucun actif naturel n'agissant sur l'ensemble de ces quatre paramètres.
[0007] L'objectif de l'invention est de répondre à cette problématique en proposant un principe actif capable de lutter efficacement contre la multiplicité des paramètres à l'origine de l'acné.
[0008] A cet effet, l'invention a pour objet un principe actif cosmétique ou dermatologique comprenant au moins un extrait particulier de Punica granatum.
[0009] Punica granatum ou grenadier est très connu et très utilisé.
[0010] Le fruit du grenadier peut être consommé frais, en sirop, en jus, les arilles séchés (entiers, poudre ou mélasse).
[0011] De nombreuses utilisations médicinales sont également connues :
- en médecine traditionnelle l'écorce de fruit de grenade a des propriétés astringentes, anti-bactérienne, antihémorragique, anti inflammatoire,
- en pharmacopée marocaine la décoction d'écorce de grenade ou en poudre est utilisée pour le traitement de maladies gastro-intestinales,
- en pharmacopée indienne les extraits de zeste, de fleurs, de feuilles et écorce de grenade sont utilisées comme anti-bactériens.
[0012] En cosmétique des extraits sont utilisés notamment comme antioxydants, en capillaire et comme nettoyant cutané.
[0013] De plus, il a été décrit l'utilisation d'extraits d'écorce de grenade pour des applications anti-acné en particulier des extraits éthanoliques seuls ou en combinaison avec d'autres extraits, pour diminuer la quantité de sébum sécrétée, minimiser les pores et pour un effet anti-bactérien. Toutefois l'inventeur a démontré que ces extraits existants d'écorce de grenade ne présentent pas des résultats satisfaisants pour prévenir ou lutter contre toutes les composantes biologiques de l'acné.
[0014] L'inventeur a sélectionné une étape précise de la maturation des fruits de Punica granatum et un type d'extraction particulier.
[0015] En effet, de façon surprenante, le choix spécifique de fruits immatures de Punica granatum combiné à une hydrolyse enzymatique, permet d'améliorer efficacement l'effet anti acné par rapport aux extraits de Punica granatum existants.
[0016] Résumé de l'invention
[0017] L'invention a par conséquent pour objet un principe actif cosmétique ou dermatologique particulier à savoir un principe actif comprenant au moins un hydrolysat d'écorce de fruits immatures de Punica granatum, ainsi que son utilisation en application sur la peau pour prévenir et/ou lutter contre l'acné.
[0018] L'invention a également pour objet un procédé d'obtention d'un tel principe actif ainsi que les compositions l'incluant adaptées à une application topique sur la peau.
[0019] Avantageusement, la sélection particulière de fruits immatures de Punica granatum combinée à une hydrolyse enzymatique permet de lutter efficacement contre l'acné, en particulier de lutter efficacement contre les quatre grandes composantes de l'acné : les modifications de la sébogénèse, l'hyperkératinisation, l'inflammation, et les modifications du microbiote.
[0020] D'autres caractéristiques et avantages ressortiront de la description détaillée de l'invention qui va suivre réalisée en regard notamment des exemples, résultats d'essais, résultats d'essais comparatifs et figures.
[0021] Figures
[0022] La Figure 1 représente le profil chromatographique entre 250 et 390 nm d'un extrait d'écorce de fruits immatures de Punica granatum.
[0023] La Figure 2 représente le profil chromatographique entre 250 et 390 nm d'un extrait d'écorce de fruits matures de Punica granatum.
[0024] La Figure 3 représente le profil chromatographique entre 250 et 390 nm du jus de Punica granatum.
[0025] Définitions
[0026] Par « actif cosmétique ou dermatologique » ou « principe actif cosmétique ou dermatologique » au sens de l'invention, on entend au moins une molécule, préférentiellement un ensemble de molécules présentant un effet sur la peau.
[0027] Par « extrait » d'une matière première X, au sens de la présente invention, on entend toute molécule ou mélange d'au moins deux molécules obtenu(e) à partir d'une matière première X, quel que soit le procédé d'extraction de ladite ou desdites molécule(s). Il peut s'agir par exemple d'un extrait obtenu par extraction aqueuse et/ou hydroalcoolique et/ou hydroglycolique, etc.
[0028] Par « hydrolysat » d'une matière première X au sens de l'invention, on entend toute extraction obtenue à partir d'une matière première X, par un procédé comprenant au moins une étape d'hydrolyse enzymatique ou chimique d'un extrait aqueux. L'hydrolysat est sous forme liquide.
[0029] Par « hydrolysat enzymatique » d'une matière première X au sens de l'invention, on entend toute extraction obtenue à partir d'une matière première X par un procédé comprenant au moins une étape d'hydrolyse enzymatique d'un extrait aqueux.
[0030] Par « extrait hydroglycolique » d'une matière première X au sens de l'invention, on entend tout extrait obtenu à partir d'une matière première X par un procédé comprenant comme principale étape une étape d'extraction à l'aide d'au moins un mélange d'au moins deux solvants (eau et un solvant glycolique, comme par exemple le butylène glycol).
[0031] Par « extrait éthanolique » d'une matière première X au sens de l'invention, on entend tout extrait obtenu à partir d'une matière première X par un procédé comprenant au moins une étape d'extraction à l'aide d'éthanol, comme par exemple une distillation éthanolique. [0032] Par « extraction aqueuse » d'une matière première X au sens de l'invention, on entend tout extrait obtenu à partir d'une matière première X par un procédé comprenant comme seul solvant d'extraction l'eau.
[0033] Par « film » au sens de l'invention on entend un produit cosmétique que l'on applique momentanément sur la peau et que l'on retire après un certain temps d'application, présentant un effet cosmétique ou dermocosmétique. Il peut par exemple s'agir d'un masque pour le visage.
[0034] Par « film sec » au sens de l'invention on entend un film présentant une activité de l'eau inférieure à 0,6.
[0035] Par « activité de l'eau » on entend au sens de l'invention un paramètre bien connu de l'homme du métier permettant de connaître la disponibilité en eau dans la matière. Il peut être mesuré à l'aide d'un appareil nommé AWmètre comme par exemple un AWmètre de type LabSift-aw. La valeur est sans unité, elle est comprise entre 0 et 1. Ce paramètre est différent de la teneur en eau.
[0036] Par « teneur en eau » du film sec, on entend la quantité d'eau liquide contenue dans le film (rapport du poids d'eau sur le poids total du film) et se mesure par pesées successives avant et après séchage au four.
[0037] Par « Ellagitanins », on entend les composés polyphénoliques aussi nommés tanins ellagiques.
[0038] Description détaillée de l'invention
[0039] I. Principe actif
[0040] L'invention vise donc un principe actif spécifique, particulièrement utile pour prévenir et/ou lutter contre l'acné.
[0041] Ledit principe actif est un principe actif cosmétique ou dermatologique comprenant au moins un hydrolysat particulier de Punica granatum.
[0042] Le principe actif est obtenu à partir d'écorce de fruits immatures de Punica granatum. Le choix de ce stade de maturité des fruits est essentiel car il contient des molécules différentes ou des mêmes molécules mais en quantité différentes, de celles contenues dans l'écorce de fruits matures de Punica granatum.
[0043] Préférentiellement par fruits immatures de Punica granatum on entend des fruits : - qui ont un diamètre inférieur à 10 cm, préférentiellement inférieur à 8cm, et/ou
- qui ont une couleur qui n'est ni rouge, ni orangée, préférentiellement qui ont une couleur verte.
[0044] Par ailleurs le principe actif selon l'invention est un hydrolysat, c'est-à-dire qu'il est obtenu par un procédé comprenant une étape d'hydrolyse d'un extrait aqueux. Préférentiellement il s'agit d'un hydrolysat enzymatique, encore plus préférentiellement un hydrolysat enzymatique obtenu par hydrolyse réalisée à l'aide d'au moins une carbohydrase. Selon un mode de réalisation préféré, il s'agit d'un hydrolysat aqueux c'est-à-dire qu'avant hydrolyse, l'écorce de Punica granatum a fait l'objet d'une solubilisation dans l'eau. Quoi qu'il en soit l'invention exclut tout autre extrait comme les extraits éthanolique ou hydroglycolique de Punica granatum.
[0045] Le principe actif selon l'invention peut se présenter sous forme liquide ou sous forme poudre ou sous forme de film.
[0046] Lorsqu'il se présente sous forme liquide, le principe actif selon l'invention est préférentiellement exclusivement constitué de l'hydrolysat d'écorce de fruits immatures de Punica granatum et d'eau, ainsi que le solvant d'extraction. Des conservateurs ou stabilisants peuvent être ajoutés pour faciliter la conservation et l'utilisation industrielle du principe actif. [0047] Le principe actif selon l'invention sous forme liquide se présente préférentiellement sous forme d'un liquide limpide, avec une faible odeur et une couleur ocre à ambré. Il peut toutefois être plus coloré et/ou être décoloré partout procédé connu de l'homme du métier. [0048] Préférentiellement, le principe actif selon l'invention sous forme liquide a une teneur en matières sèches de 10 g/L à 40g/L.
[0049] Lorsqu'il se présente sous forme poudre, le principe actif selon l'invention est constitué par :
- un support tel que par exemple les maltodextrines, et
- au moins l'hydrolysat d'écorce de fruits immatures de Punica granatum selon l'invention.
[0050] Dans ce cas, préférentiellement, l'hydrolysat représente au moins 10% en poids du principe actif et le support au plus 90%.
[0051] Le principe actif selon l'invention peut aussi être présenté sous forme d'un film sec. Dans ce cas, l'hydrolysat d'écorce de fruits immatures de Punica granatum représente préférentiellement au moins 0.1% en poids du film sec. [0052] Lorsqu'il se présente sous forme de film, le principe actif comprend :
- au moins une charge minérale, et
- au moins un polymère d'origine naturelle, et
- au moins un plastifiant, et
- au moins un tensio-actif, et
- au moins l'hydrolysat d'écorce de fruits immatures de Punica granatum selon l'invention.
[0053] Le polymère d'origine naturelle peut être choisi parmi la : Pectine, Gomme tamarin, Alginate, Pullulane, Psyllium, Xanthane, Guar, Tara, Caroube, Agar, Gomme arabique, Gellane, Dextran, Carraghénane, Cellulose, Konjac et le Chitosan.
[0054] Le plastifiant peut être choisi parmi : Glycérol, Sorbitol, Saccharose, Erythritol, Urée, Propylène glycol et le Butylène glycol.
[0055] La charge minérale peut être choisie parmi : Carbonate de calcium, argile verte, kaolin, perlite, talc, silicate de magnésium, mica, sericite diatomée, silice, sulfate de calcium chlorure de calcium, chlorure de potassium, oxyde de fer et l'oxyde de zinc.
[0056] Le principe actif peut comprendre en outre un pigment pour colorer le film.
[0057] Préférentiellement, l'hydrolysat comprend des polyphénols, des sucres, des minéraux et des protéines, et ce, que le principe actif se présente sous forme liquide, solide ou sous forme de film.
[0058] Plus préférentiellement, l'hydrolysat du principe actif selon l'invention comprend :
- au moins 35% de polyphénols en poids par rapport au poids de matières sèches de l'hydrolysat, et/ou
- au moins 25% de sucres en poids par rapport au poids de matières sèches de l'hydrolysat, et/ou
- moins de 15% de protéines en poids par rapport au poids de matières sèches de l'hydrolysat, et/ou
- moins de 25% de minéraux en poids par rapport au poids de matières sèches de l'hydrolysat.
[0059] Ainsi, lorsque le principe actif est sous forme liquide et qu'il est constitué uniquement par l'hydrolysat, le principe actif selon l'invention comprend ces constituants dans ces proportions.
[0060] Lorsqu'il est sous forme de poudre, et qu'il est constitué au moins par l'hydrolysat et un support, le principe actif selon l'invention comprend :
- au moins 4% de polyphénols en poids par rapport au poids de matières sèches du principe actif, et/ou.
- au moins 93% de sucres en poids par rapport au poids de matières sèches du principe actif, et/ou
- moins de 1% de protéines en poids par rapport au poids de matières sèches du principe actif, et/ou
- moins de 2% de minéraux en poids par rapport au poids de matières sèches du principe actif. [0061] La teneur en composés phénoliques peut être déterminée par dosage colorimétrique.
Les composés phénoliques forment en présence de ferricyanure de potassium et de chlorure de fer des complexes colorés qui peuvent être dosés par spectrophotométrie à 715 nm. L'intensité de cette coloration est proportionnelle à la quantité de composés phénoliques présents dans l'échantillon. Des solutions de calibration sont préparées à partir d'un standard d'acide gallique ou d'acide ellagique de 40 à 120 mg/L, préférentiellement d'acide ellagique. Une courbe de calibration des densités optiques des solutions de calibration en fonction de leur concentration est construite. Les échantillons sont préalablement dilués avec de l'eau distillée pour que la teneur en polyphénols corresponde à la gamme d'étalonnage. La quantité de polyphénols des échantillons est déterminée grâce à la courbe de calibration. [0062] Les composés phénoliques du principe actif selon l'invention peuvent être caractérisés par toute méthode adaptée en particulier par chromatographie liquide couplée à la spectrométrie de masse.
[0063] Selon un mode de réalisation préféré, les polyphénols présents dans l'hydrolysat sont des Ellagitanins. Les Ellagitanins présents dans l'hydrolysat sont préférentiellement au moins pour 50% la Punicalagine et ses dérivés, pour moins de 40% la Punicaline, pour moins de 20% les dérivés d'HHDP et pour moins de 10% l'acide Ellagique. Préférentiellement, le principe actif selon l'invention comprend les Ellagitanins présentés dans le tableau 1.
[0064] [Tableau 1]
HHDP : 2,3-(S)-HexaHydroxyDiPhenoyl
[0065] La teneur en sucres totaux peut être déterminée à l'aide de la méthode de DUBOIS (Dubois M. et al. Analytical chemistry, 28, 3, 350-356, 1956). Toutes les fonctions réductrices sont libérées en présence d'acide sulfurique concentré et donnent avec le phénol un composé coloré jaune-orangé. La coloration obtenue, mesurée à 490 nm sur un spectrophotomètre, est proportionnelle à la quantité de sucres totaux de l'échantillon.
[0066] La détermination des masses molaires des sucres est réalisée par HPLC avec détection RI.
[0067] La fraction glucidique du principe actif selon l'invention sous forme de poudre est préférentiellement composée de 55% à 65% d'oligosaccharides et de 35% à 45% de polysaccharides constitués de glucose et de fructose. La taille moyenne des sucres est une masse molaire moyenne 13 140 Da.
[0068] La fraction glucidique du principe actif sous forme liquide est préférentiellement composée de 85 à 100% d'oligosaccharides constitués de glucose et de fructose. Leurs tailles sont inférieures à 3600Da.
[0069] Le dosage des protéines dans le principe actif selon l'invention peut être réalisé notamment par la méthode de KJELDHAL (référence : Official method of analysis of the A.O.C., 12th ed. W Horwitz, E.D., New-York, 15-60, 1975). La teneur en protéines est exprimée en pourcentage par rapport à la teneur en matières sèches. De plus, pour déterminer la taille des composés peptidiques présents dans le principe actif selon l'invention, il est possible de réaliser une chromatographie de type F.P.L.C.
[0070] La teneur en cendres brutes peut être déterminée par la pesée des résidus issus de l'incinération des échantillons de l'extrait selon l'invention à 550°C dans un four à moufle électrique.
[0071] Les minéraux, présents dans le principe actif, sont le potassium, sodium et le chlore majoritairement. D'autres minéraux tels que le phosphore, le magnésium et le soufre peuvent être présents. L'analyse des minéraux constituant les cendres du principe actif selon l'invention peut être réalisée par spectrométrie d'émission optique (ICP/OES) et le dosage des ions chlorures par titration au nitrate d'argent.
[0072] L'hydrolysat d'écorce de fruits immatures de Punica granatum selon l'invention peut être obtenu par tout moyen. Préférentiellement il est obtenu par la mise en oeuvre d'un procédé comprenant au moins une extraction aqueuse et une hydrolyse enzymatique.
[0073] Selon un mode de réalisation particulièrement adapté, l'hydrolysat selon l'invention est obtenu par la mise en oeuvre des étapes suivantes : a) Solubilisation de poudre d'écorce de fruits de Punica granatum immatures dans l'eau, à raison d'au moins 50g/L, b) Hydrolyse enzymatique, préférentiellement à l'aide d'une carbohydrase, c) Séparation des phases soluble et insoluble, par tout moyen permettant de séparer une phase insoluble de la phase soluble, par exemple par centrifugation, filtration ou décantation d) récupération de la phase soluble, et inactivation enzymatique par tout moyen permettant l'inactivation des activités enzymatiques, par exemple par traitement thermique, e) purification des composés polyphénoliques par tout moyen permettant le tri moléculaire, f) éventuellement désodorisation ou décoloration par ajout d'un adjuvant de procédé permettant la désodorisation ou la décoloration g) préférentiellement filtration et filtration stérilisante.
[0074] Les étapes du procédé décrit ci-avant, prises individuellement, sont usuelles dans le domaine des extractions d'actifs à partir de matières premières naturelles et l'homme du métier est à même d'en ajuster les paramètres réactionnels sur la base de ses connaissances générales.
[0075] L'hydrolysat obtenu peut être utilisé tel quel sous forme liquide et constitue le principe actif selon l'invention.
[0076] L'hydrolysat peut également éventuellement être associé à un support et séché (atomisation ou lyophilisation notamment), pour se présenter sous forme poudre.
[0077] L'hydrolysat peut également éventuellement être associé à des composés permettant sa présentation sous forme d'un film sec.
[0078] II. Composition
[0079] Le principe actif selon l'invention est préférentiellement utilisé dans des compositions, comprenant un milieu cosmétiquement/dermatologiquement acceptable. Il s'agit de compositions dans différentes formes galéniques, adaptées à une application par voie topique sur la peau.
[0080] Ces compositions peuvent se présenter notamment sous forme d'émulsions huile- dans-eau, émulsions eau-dans-huile, émulsions multiples (Eau/Huile/Eau ou Huile/Eau/Huile) qui peuvent être éventuellement des microémulsions ou des nanoémulsions, ou sous forme de solutions, suspensions, hydrodispersions, gels aqueux ou poudres. Elles peuvent être plus ou moins fluides et avoir l'aspect de crèmes, émulsions, gels ou films ou tous autres aspects des cosmétiques de soin peau.
[0081] Il peut s'agir de compositions comprenant au moins 0,1% d'un principe actif selon l'invention sous la forme liquide, préférentiellement entre 0,1 et 10% ou au moins 0,05% du principe actif selon l'invention sous la forme poudre, préférentiellement entre 0,05% et 2%. [0082] Ces compositions comprennent, outre l'actif, un milieu physiologiquement acceptable et de préférence cosmétiquement et/ou dermatologiquement acceptable, c'est-à-dire qui ne provoque pas de sensations d'inconfort inacceptables pour l'utilisateur telles que des rougeurs, tiraillements ou picotements.
[0083] Les compositions selon l'invention peuvent contenir comme adjuvant au moins un composé choisi parmi :
- les huiles, qui peuvent être choisies notamment parmi les huiles de silicone, linéaires ou cycliques, volatiles ou non volatiles ;
- les cires, telles que l'ozokérite, la cire de polyéthylène, la cire d'abeille ou la cire de carnauba,
- les élastomères de silicone,
- les tensioactifs, de préférence émulsionnants, qu'ils soient non ioniques, anioniques, cationiques ou amphotères,
- les co-tensioactifs, tels que les alcools gras linéaires,
- les épaississants et/ou gélifiants,
- les humectants, tels que les polyols comme la glycérine,
- les colorants, les conservateurs, les charges,
- les tenseurs,
- les séquestrants,
- les parfums,
- et leurs mélanges, sans que cette liste soit limitative.
[0084] Des exemples de tels adjuvants sont cités notamment dans le Dictionnaire CTFA (International Cosmetic Ingrédient Dictionary and Handbook publié par le Personal Care Product Council).
[0085] Bien entendu, l'homme du métier veillera à choisir les éventuels composés complémentaires, actifs ou non-actifs, et leur quantité, de telle sorte que les propriétés avantageuses du mélange ne soient pas, ou sensiblement pas, altérées par l'adjonction envisagée.
[0086] Ces compositions sont notamment destinées à être utilisées pour améliorer la qualité de la peau, en particulier pour prévenir et/ou lutter contre l'acné.
[0087] Préférentiellement la composition comprenant le principe actif cosmétique selon l'invention est appliquée, préférentiellement sur le visage, au moins une fois par jour pendant au moins 14 jours.
[0088] III. Utilisation.
[0089] Le principe actif et les compositions selon l'invention, sont particulièrement efficaces pour un traitement de la peau par voie topique et en particulier pour un effet de prévention ou de traitement de l'acné.
[0090] L'invention a par conséquent également pour objet un principe actif selon l'invention ou une composition l'incluant pour son utilisation dans la prévention et/ou le traitement de l'acné. Ainsi l'invention vise l'utilisation d'un hydrolysat d'écorce de fruits immatures de Punica granatum pour prévenir et/ou lutter contre l'acné. [0091] Le principe actif selon l'invention est capable d'influer positivement sur ces quatre composantes biologiques de l'acné.
[0092] Sur la modification de la glande sébacée, première composante de l'acné, le principe actif selon l'invention est capable d'agir sur les différents facteurs augmentant la sébogénèse. [0093] En effet, sous l'influence de divers facteurs endogènes (ex : hormones, C. acnés, activité lipophagique) et exogènes (ex : stress), le métabolisme des glandes sébacées est activé, caractérisé par des modifications quantitatives et qualitatives du sébum. Ceci se traduit par une augmentation de la sébogénèse et par conséquent une production anormalement élevée de sébum.
[0094] Le principe actif selon l'invention est aussi capable d'agir sur l'hyperkératinisation, autre composante de l'acné.
[0095] L'hyperkératinisation est un évènement biologique précoce dans le développement des lésions d'acné. Elle est caractérisée par une anomalie de prolifération et de kératinisation des kératinocytes folliculaires favorisant l'obstruction du canal excréteur, une mauvaise évacuation du sébum et consécutivement la dilatation du canal pilosébacé à l'origine de la formation d'un microcomédon.
[0096] Le principe actif selon l'invention agit aussi sur l'inflammation, troisième composante de l'acné.
[0097] L'inflammation est le phénomène biologique concomitant à toutes les étapes de la formation des lésions acnéiques : microcomédon, comédon, lésion inflammatoire, érythème post-inflammatoire et même cicatrice. La bactérie C. acnés joue un rôle essentiel dans l'apparition des lésions inflammatoires. Elle stimule la production de médiateurs pro inflammatoires par plusieurs types cellulaires de l'unité pilosébacée (les kératinocytes, les sébocytes, les cellules immunitaires infiltrant les lésions d'acné).
[0098] Le principe actif selon l'invention présente enfin la capacité d'agir sur le microbiote cutané des peaux acnéiques.
[0099] La bactérie Cutibacterium acnés (C. acnés) est considérée comme l'un des facteurs pathogènes majeurs contribuant au développement de l'acné. L'acné est caractérisée par une perte de diversité phylotypique de C. acnés au profit du phylotype IA1. La population de C. acnés phylotype IA1 possède une capacité à communiquer et s'organiser pour mettre en place des facteurs de virulence (ex : formation de biofilms) via le système de quorum sensing et ainsi coloniser le follicule. [0100] Le principe actif selon l'invention, ou les compositions le contenant, agissent sur les principales modifications induites au cours de l'acné :
En normalisant l'activité de la glande sébacée,
En exerçant une activité kératolytique, - En réduisant la réponse inflammatoire,
Et en contrôlant le microbiote cutané modifié par la colonisation par C. acnés.
[0101] Par la normalisation de ces quatre paramètres, le principe actif selon l'invention rétablit l'homéostasie des peaux acnéiques.
[0102] III. A/ Influence sur les modifications quantitatives et qualitatives du sébum. [0103] L'acné est une pathologie caractérisée par des modifications quantitatives et qualitatives du sébum. La physiopathologie de ce désordre cutané est associée à une augmentation de la production du sébum et une altération de sa composition lipidique. Le métabolisme des glandes sébacées est influencé par divers facteurs endogènes et exogènes :
- sensibilité aux hormones : [0104] Les glandes sébacées sont sensibles aux androgènes. Elles possèdent l'équipement enzymatique nécessaire à la métabolisation de la testostérone en dihydrotestostérone (DHT) et les récepteurs spécifiques de la DHT. La stimulation de ces récepteurs active les gènes intervenant dans la production du sébum. Dans l'acné, il existe une augmentation de la quantité et de l'activité des enzymes de la glande sébacée intervenant dans le métabolisme de la testostérone et notamment de la 5-alpha-réductase de type I aboutissant à une surproduction de DHT. De plus, le nombre des récepteurs à la DHT est augmenté chez le sujet acnéique ainsi que sa sensibilité à la DHT. C'est pourquoi l'acné est considérée comme « une maladie hormonale périphérique ».
[0105] Avantageusement, le principe actif selon l'invention inhibe la conversion de la testostérone en DHT, et limite ainsi l'excès d'androgènes impliqués dans la physiopathologie de l'acné.
- colonisation par C. acnés :
[0106] Le sébum est un substrat de choix pour la croissance de microorganismes contribuant au développement de l'acné tels que C. acnés, li a été montré que C. acnés possède une activité stimulatrice de la lipogénèse. Dans l'acné, la bactérie hyperproliférative serait capable de stimuler directement, ou indirectement via des facteurs solubles, la production de gouttelettes lipidiques par les sébocytes. Par ce mécanisme, C. acnés est capable d'aggraver l'hyperséborrhée, composante physiopathologique majeure de l'acné.
[0107] Avantageusement, en réponse à l'agression cutanée par C. acnés, le principe actif selon l'invention limite la sécrétion de lipides dans les sébocytes.
- Impact neuronale consécutif au stress :
[0108] De nombreuses preuves cliniques supportent aujourd'hui l'hypothèse de l'influence de neuromédiateurs sur le cours de l'acné. En effet, les émotions négatives telles que le stress sont capables d'en exacerber les symptômes. D'un point de vue neurologique, la particularité des patients acnéiques est qu'ils possèdent une innervation accrue dans l'environnement des glandes sébacées. Ces observations morphologiques appuient l'existence d'une véritable communication entre le système nerveux et les glandes sébacées. En effet, ces dernières possèdent les récepteurs spécifiques à des neuropeptides, notamment la substance P, qui une fois activés entraînent la production de sébum.
[0109] Avantageusement, le principe actif selon l'invention inhibe la sécrétion de lipides induite par la substance P ou par la combinaison de C. acnés et de la substance P sur des sébocytes.
- altération de l'activité lipophagique des sébocytes :
[0110] Des travaux de recherche récents ont mis en évidence une activation de l'autophagie dans les sébocytes normaux. En cas d'altération du fonctionnement de ce processus, des changements morphologique et fonctionnel au niveau de la glande sébacée apparaissent. Cette dernière devient hypertrophique, la lipogénèse est augmentée et la composition lipidique du sébum est modifiée. mTORCl, puissant inhibiteur de l'autophagie et régulateur de la production des lipides, est retrouvé fortement exprimé dans la peau acnéique, reliant ainsi les changements quantitatif et qualitatif du sébum à une inactivation de l'autophagie. [0111] Avantageusement le principe actif selon l'invention rétablit le mécanisme de lipophagie dans les sébocytes humains différenciés.
[0112] En limitant l'impact des médiateurs bactériens, hormonaux et neuropeptidiques sur les sébocytes tout en rétablissant le mécanisme de lipophagie, le principe actif selon l'invention permet de normaliser l'activité de la glande sébacée, composant biologique clé de la physiopathologie de l'acné.
[0113] III. B/. Influence sur l'hyperkératinisation
[0114] Le principe actif selon l'invention est également capable d'agir sur l'hyperkératinisation qui intervient dans l'acné. [0115] L'hyperkératinisation est un évènement biologique précoce dans le développement des lésions d'acné. Il s'agit d'une anomalie de prolifération et de kératinisation des kératinocytes qui tapissent la paroi du follicule. Elle conduit à une accumulation de cornéocytes et une obstruction du canal excréteur. Ces modifications altèrent l'évacuation normale du sébum provoquant alors une rétention et une dilatation du canal pilosébacé, à l'origine de la formation d'un microcomédon. Ce dernier est une lésion préclinique invisible à l'œil nu caractérisée histologiquement par la distension de la paroi du follicule et qui évolue progressivement vers le comédon.
[0116] D'un point de vue biologique, le phénomène d'hyperkératinisation est caractérisé par l'augmentation de kératines, notamment la cytokératine-16 (CK-16) dont la présence est fortement accrue dans les lésions acnéiques. Ces observations ont permis de qualifier la cytokératine-16 de marqueur d'hyperkératinisation liée à l'acné.
[0117] Plusieurs facteurs seraient impliqués dans le phénomène d'hyperkératinisation dont : la modification de la composition du sébum :
Les changements quantitatif et qualitatif du sébum observés dans l'acné seraient associés à l'apparition des défauts de prolifération et kératinisation des kératinocytes tapissant la paroi du canal pilosébacé. Le squalène, composant du sébum, est la principale source de lipides péroxydés dans la peau acnéique. Au-delà de provoquer une irritation cutanée, les squalènes péroxydés exercent un fort pouvoir comédogène, la colonisation par C. acnés.
En colonisant le canal pilosébacé, C. acnés est capable de modifier la biologie des kératinocytes et d'influencer leur prolifération et leur différenciation. La bactérie stimule la synthèse de cytokines pro-inflammatoires dans le follicule pilosébacé, en particulier l'interleukine la (IL-la), facteur majeur de l'apparition d'une hyperkératinisation. En effet, cette cytokine est capable d'activer les gènes codant pour des cytokératines, notamment CK-16 mais également induire la production d'autres kératines telles que CK-5. De plus, des études ont montré que C. acnés est capable d'exercer un effet direct sur la biologie des kératinocytes et la formation de microcomédons.
[0118] Avantageusement, un hydrolysat d'écorce de fruits immatures de Punica granatum selon l'invention est capable d'avoir un effet sur l'hyperkératinisation qui intervient dans l'acné. En particulier, lorsqu'il est appliqué sur la peau, le principe actif selon l'invention est capable de :
- renormaliser l'épaisseur du stratum corneum et,
- diminuer la synthèse des cytokératines CK-5 et CK-16.
[0119] III. C./ Influence sur l'inflammation
[0120] Le principe actif selon l'invention est également capable d'agir sur l'inflammation qui intervient dans l'acné.
[0121] L'inflammation est un processus fondamental présent tout au long du développement des lésions d'acné. En effet, elle est présente dès les stades précoces jusqu'aux stades les plus tardifs de la pathologie. En tant que bactérie majeure associée à la pathogénèse de l'acné, C. acnés participe activement à la création d'un environnement inflammatoire. En colonisant le follicule pilosébacé, la bactérie joue un rôle essentiel dans le déclenchement de la réaction inflammatoire et l'apparition des lésions inflammatoires. Elle stimule la production de médiateurs de l'inflammation par plusieurs types cellulaires de l'unité pilosébacée. De plus, des facteurs exogènes et endogènes tels que les hormones, le stress, composition du sébum, etc., accentuent le phénomène inflammatoire.
[0122] Plusieurs types cellulaires du follicule pilosébacé sont impliqués dans ces mécanismes inflammatoires : les kératinocytes, les sébocytes mais également les cellules immunitaires infiltrant les lésions d'acné.
[0123] Inflammation kératinocytaire.
[0124] Dans une peau acnéique, la modification de la composition du sébum et notamment la peroxydation des squalènes influence l'état inflammatoire du follicule pilosébacé en stimulant la sécrétion de la cytokine pro-inflammatoire IL-Ia par les kératinocytes. De plus, la colonisation du follicule pilosébacé par C. acnés entraîne la production et la sécrétion par les kératinocytes de nombreux médiateurs pro-inflammatoires :
- des cytokines pro-inflammatoires ( I L-S, IL-Ia, etc) ;
- des chimiokines (CCL5, CCL20, CXCL1, etc) ;
- des métalloprotéinases (MMP2, MMP9, etc).
[0125] Avantageusement le principe actif selon l'invention inhibe la sécrétion des chimiokines, des cytokines et des métalloprotéinases dans des épidermes reconstruits 3D mimant une peau acnéique.
[0126] Inflammation sébocytaire. [0127] L'acné est caractérisée par un changement de la composition du microenvironnement des follicules sébacés induisant une colonisation et une activité métabolique accrue de C. acnés. La bactérie est capable d'induire une réponse inflammatoire au niveau des sébocytes qui produisent de nombreux médiateurs pro-inflammatoires. Parmi ces derniers, les sébocytes sécrètent des cytokines pro-inflammatoires (IL-6, IL-8, etc) contribuant à la réaction inflammatoire observée dans les lésions d'acné. La sécrétion de ces médiateurs confère aux sébocytes la capacité de promouvoir la différenciation des lymphocytes T helper naïfs en Thl7, renforçant ainsi le phénomène inflammatoire.
[0128] De plus, la glande sébacée est sensible à des émotions négatives telles que le stress. Il a été montré que les patients acnéiques présentent une innervation accrue dans l'environnement des glandes sébacées témoignant de l'existence d'une communication entre les systèmes nerveux et sébacé. Le rôle pathogène de la substance P comme neuromédiateur de l'inflammation dans l'acné est à ce jour bien décrit dans la littérature. Elle entraîne la sécrétion de cytokines pro-inflammatoires (IL-6, IL-8, etc) exacerbant l'environnement inflammatoire des glandes sébacées.
[0129] La suite de la description montrera que le principe actif selon l'invention inhibe la sécrétion d'IL-6 et d'IL-8 par les sébocytes humains soumis à l'inflammation par la substance P et/ou C. acnés.
[0130] Inflammation lymphocytaire Thl7 :
[0131] Un infiltrat de cellules immunitaires est présent dans les lésions d'acné, infiltrat composé majoritairement de lymphocytes T helper CD4+. Récemment, des études ont mis en évidence le profil Thl7 de ces cellules, suggérant que l'acné est une pathologie dans laquelle les lymphocytes Thl7 contribuent de manière significative au phénomène inflammatoire. Il a été démontré que C. acnés détient la capacité à induire une différenciation des lymphocytes naïfs en lymphocytes Thl7. Ces cellules produisent une cytokine pro-inflammatoire impliquée dans de nombreuses pathologies inflammatoires, l'interleukine 17 (IL-17) et dont la quantité est également retrouvée augmentée dans les lésions d'acné. La présence d'IL-17 entraîne la sécrétion de médiateurs pro-inflammatoires par les cellules épithéliales, tels que l'IL-8 et le CCL20, exacerbant alors le processus inflammatoire.
[0132] L'apparition et l'exacerbation du phénomène inflammatoire décrit dans les lésions d'acné fait donc intervenir divers protagonistes et facteurs. Les médiateurs inflammatoires produits favorisent la comédogénèse puis la rupture du follicule conduisant à l'apparition des lésions inflammatoires.
[0133] Avantageusement le principe actif est capable de réguler la biologie des LThl7 et de limiter l'inflammation induite par ces cellules.
[0134] Ainsi, un hydrolysat d'écorce de fruits immatures de Punica granatum est capable d'avoir un effet sur l'inflammation qui intervient dans l'acné. En particulier, lorsqu'il est appliqué sur la peau, le principe actif selon l'invention est capable de :
- réguler la biologie de l'épiderme acnéique et limiter l'inflammation marqueur de la physiopathologie de l'acné, notamment en inhibant la sécrétion de CCL5, de CCL20, de CXCL1, et en inhibant la sécrétion d'IL-Ia, d'IL-8, et en inhibant la sécrétion de MMP2 et MMP9 ;
- réguler la biologie des LThl7 et limiter ainsi l'inflammation induite par ces cellules, actrices importantes de la physiopathologie de l'acné,
- limiter l'inflammation sébocytaire caractéristique de la physiologie de l'acné, notamment en inhibant la sécrétion d'IL-6 et d'IL-8.
[0135] III. D/. Influence sur le microbiote de C. acnés
[0136] Le principe actif selon l'invention est capable d'agir face au C. acnés.
[0137] Le Cutibacterium acnés (C. acnés) est une espèce majeure de la flore commensale cutanée dont l'habitat privilégié est le follicule pilosébacé. Cette bactérie est considérée comme l'un des facteurs pathogènes majeurs contribuant au développement de l'acné. Les études menées sur C. acnés et son rôle dans l'acné ont mis en lumière de nouvelles données et mécanismes expliquant sa virulence dans la pathologie.
[0138] Phylotypes de C. acnés.
[0139] Récemment, des études de taxonomie basées sur des investigations génomiques et biologiques ont permis d'identifier différents sous-types de l'espèce C. acnés et de les classer en trois phylotypes : I, Il et III. Des études phylogénétiques supplémentaires ont conduit à la re-segmentation du phylotype I en quatre phylotypes I Al, IA2, IB et IC. L'espèce bactérienne C. acnés est donc aujourd'hui classée en six phylotypes différents avec des caractéristiques biochimiques et de virulence distinctes.
[0140] Dans l'acné, une perte de diversité phylotypique de C. acnés au profit du phylotype IA1 a été observée en comparaison aux peaux saines. Ce phylotype possède une capacité à former des biofilms supérieure aux autres. Il a ainsi été décrit comme le phylotype virulent associé au développement des lésions acnéiques. [0141] La prépondérance du C. acnés IA1 contribue à la pathogénèse de l'acné en induisant de nombreuses modifications dans l'environnement pilo-sébacé. En effet, il agit sur les autres composantes impliquées dans la physiopathologie de l'acné en :
- induisant une augmentation de la lipogénèse et en modifiant les lipides du sébum ;
- stimulant les sébocytes, les kératinocytes et les cellules immunitaires pour produire les nombreuses cytokines, chimiokines et métalloprotéinases matricielles impliquées dans le phénomène inflammatoire observé dans l'acné ;
- modifiant la biologie des kératinocytes et ainsi favoriser l'hyperkératinisation à l'origine de la formation de microcomédons.
La composante bactérienne constitue donc un paramètre important dans le développement des lésions d'acné. Cibler la bactérie C. acnés phylotype IA1 et réduire sa virulence est une stratégie incontournable pour lutter contre cette pathologie.
[0142] Avantageusement, le principe actif selon l'invention limite la croissance de la bactérie C. acnés phylotype IA1.
[0143] Quorum sensing et biofilm.
[0144] Dans la peau acnéique, les microcomédons constituent des microenvironnements anaérobies riches en lipides, favorables à la croissance et l'établissement de C. acnés. En effet, ce dernier peut se comporter comme une bactérie opportuniste pathogène grâce à un mode de croissance en biofilm. Le biofilm est une structure hétérogène constituée par la population bactérienne englobée dans une matrice extracellulaire d'ADN, de protéines et de polysaccharides produite par ses soins, le tout adhérant à une surface. Cette croissance en biofilm confère aux bactéries des propriétés spécifiques de morphologie, de croissance, de communication et de résistance aux biocides afin d'optimiser leur survie.
[0145] Pendant longtemps, les bactéries ont été considérées comme des entités individuelles et asociales jusqu'à la découverte d'un système de communication inter-bactérien nommé quorum sensing (QS). Le QS implique la production, la sécrétion et la détection par les bactéries de petites molécules de communication appelées auto-inducteurs (Al). Il permet aux bactéries de communiquer afin de mettre en place une réponse précise aux signaux qu'elles perçoivent et ainsi adapter leur mode de vie pour qu'il soit le plus propice à leur survie. Via ce système, elles synchronisent la régulation de leurs gènes, notamment ceux impliqués dans la virulence (Mion et al. 2019 ; Jiang et al. 2019). En effet, plusieurs études ont mis en évidence le rôle du QS dans la formation des biofilms, notamment dans l'acné où C. acnés produit l'auto- inducteur 2 (AI-2) via l'enzyme LuxS (Lwin, Kimber et McFadden 2014).
[0146] Le principe actif selon l'invention présente également un effet anti-bactérien à l'encontre des bactéries qui interviennent dans l'acné, en particulier C. acnés de phylotype IA1. L'efficacité anti-bactérienne directe du principe actif selon l'invention est réelle puisqu'il
- présente un effet bactériostatique en inhibant la croissance du C. acnés,
- réduit l'activité du quorum sensing de C. acnés, et
- inhibe aussi la formation de biofilm.
[0147] Grâce à cette approche inédite, le principe actif selon l'invention est capable de cibler les quatre composantes majeures de la physiopathologie de l'acné. Il normalise l'activité de la glande sébacée. Il possède également une activité kératolytique et de contrôle sur la colonisation par C. acnés. Il réduit les réponses inflammatoires sébocytaire, kératinocytaire et lymphocytaire de type Thl7. Enfin, il agit directement en anti-bactérien en limitant la croissance de C. acnés et en inhibant le quorum sensing et la formation d'un biofilm bactérien. [0148] Son efficacité thérapeutique est cliniquement démontrée sur des volontaires adultes souffrant d'acné légère à modérée : le nombre de lésions acnéiques est significativement diminué avec un score GEA abaissé. Cet actif améliore la qualité et l'aspect des peaux acnéiques. C'est un soin performant alliant rapidité d'action et efficacité dans le soin quotidien des peaux acnéiques.
[0149] Ainsi l'invention vise l'utilisation d'un principe actif comprenant un hydrolysat d'écorce de fruit de grenade immature sur les peaux acnéiques pour :
- réduire les lésions acnéiques rétentionnelles et inflammatoires, et/ou
- réduire les lésions acnéiques non-inflammatoires, et/ou
- atténuer l'aspect gras de la peau, et/ou
- atténuer l'aspect brillant de la peau, et/ou
- diminuer les marques sur la peau liées aux boutons d'acné, et/ou
- rendre les pores moins visibles, et/ou
- affiner le grain de peau.
[0150] L'invention vise ainsi également un procédé non thérapeutique, à savoir un procédé cosmétique non thérapeutique de traitement de la peau pour un effet anti-acné, qui consiste en l'application topique sur la peau d'une composition comprenant un principe actif selon l'invention.
[0151] IV. Exemples et résultats d'essais [0152] L'invention est à présent illustrée par des exemples et des résultats d'essais démontrant le caractère nouveau et inventif du principe actif tant dans le choix de la matière première utilisée (écorce de grenade immature) que dans le procédé d'obtention, pour cibler l'efficacité multifactorielle recherchée.
[0153] IV.A Exemple de principes actifs et comparaison à des extraits de grenades existants [0154] IV.A1. Exemple 1 : exemple de principe actif selon l'invention sous forme liquide [0155] Le principe actif est obtenu par la mise en oeuvre des étapes suivantes : a) Solubilisation de poudre d'écorce de fruits de Punica granatum immatures dans l'eau, à raison de 50g/L, b) Hydrolyse enzymatique à l'aide d'une carbohydrase, c) Séparation des phases soluble et insoluble, par centrifugation, d) récupération de la phase soluble, et inactivation enzymatique par traitement thermique, e) purification par filtration des composés polyphénoliques, f) désodorisation par ajout d'un adjuvant de procédé permettant la désodorisation, g) filtrations et filtration stérilisante.
[0156] Le principe actif obtenu présente les caractéristiques analytiques suivantes :
- un taux de matières sèches de 14,8 g/L,
- une teneur en polyphénols totaux (gamme en acide ellagique) de 5,5g/l, soit 37% en poids de matière sèche
- une teneur en sucres totaux de 5.2g/l, soit 35% en poids de matière sèche de l'hydrolysat (calculé à l'aide d'une gamme de glucose)
- une teneur en peptides de 0.28g/l, soit 2% en poids de matière sèche de l'hydrolysat (déterminée par la méthode de KJELDAHL)
- et 1.6g/l de cendres soit 11% de cendres en poids de matière sèche (déterminée par la pesée des résidus issus de l'incinération des échantillons de l'hydrolysat à 550°C dans un four à moufle électrique).
[0157] Les polyphénols de l'hydrolysat sont des Ellagitanins, plus précisément, ce sont la Punicalagine et ses dérivés, la Punicaline, les dérivés d'HHDP et l'acide Ellagique.
[0158] IV.A2. Exemple 2 : exemple de principe actif selon l'invention sous forme poudre [0159] Le principe actif est obtenu par la mise en oeuvre des étapes suivantes : a) Solubilisation de poudre d'écorce de fruits de Punica granatum immatures dans l'eau, à raison de 50g/L, b) Hydrolyse enzymatique à l'aide d'une carbohydrase, c) Séparation des phases soluble et insoluble, par centrifugation, d) récupération de la phase soluble, et inactivation enzymatique par traitement thermique, e) purification par filtration des composés polyphénoliques, f) introduction de maltodextrine, à raison de 90% (v/v), g) concentration, stérilisation et atomisation.
[0160] Le principe actif comprenant l'hydrolysat selon l'invention et un support, obtenu par la mise en oeuvre du procédé ci-avant décrit, présente les caractéristiques analytiques suivantes :
- un taux de matières sèches de 965 mg/g de principe actif,
- une teneur en sucres totaux de 897,5 mg/g, soit 93% en poids de matière sèche du principe actif (calculé à l'aide d'une gamme de glucose)
- une teneur en polyphénols totaux (gamme en acide ellagique) de 38,6 mg/g, soit 4% en poids de matière sèche du principe actif
- une teneur en peptides de 1% en poids de matière sèche du principe actif (déterminée par la méthode de KJELDAHL) et
- 2% de cendres en poids de matière sèche (déterminée par la pesée des résidus issus de l'incinération des échantillons de l'hydrolysat à 550°C dans un four à moufle électrique).
[0161] Les polyphénols présents dans l'hydrolysat sont des Ellagitanins. Ce sont la Punicalagine et ses dérivés, la Punicaline, les dérivés d'HHDP et l'acide Ellagique.
[0162] IV.A3. Exemple 3 : exemple de principe actif selon l'invention sous forme de film. [0163] Le principe actif sous forme de film contenant le principe actif peut être obtenue par le procédé suivant : a) Solubilisation de poudre d'écorce de fruits de Punica granatum immatures dans l'eau, à raison de 50g/L, b) Hydrolyse enzymatique à l'aide d'une carbohydrase, c) Séparation des phases soluble et insoluble, par centrifugation, d) récupération de la phase soluble, et inactivation enzymatique par traitement thermique, e) purification par filtration des composés polyphénoliques, f) ajout des polymères d'origine naturelle, des plastifiants, des charges minérales et du tensioactif g) dépôt de la solution sur un support h) évaporation de l'eau dans un four chauffé à une température comprise entre 70 et 100°C i) découpe au laser selon la forme voulue.
[0164] Le principe actif selon l'invention obtenu par la mise en oeuvre du procédé ci-avant décrit, présente la composition suivante : 28,3% de polymères d'origine naturelle dont des carraghénanes, du guar et de la cellulose, 49,5% de plastifiants dont de l'urée et du glycérol, 20,5% de charges minérales dont de la silice et du kaolin et 1,2% de tensioactif et de 0,5% d'extrait de Punica granatum immatures.
[0165] IV.A4. Essais comparatifs démontrant le caractère inventif du principe actif selon l'invention
[0166] A. Comparaison jus commercial, jus frais et écorce [0167] L'objectif de cette étude est de comparer l'efficacité de plusieurs produits issus de grenade. Un jus commercial de grenade a été sélectionné. Un jus de grenade fraîche a été préparé par pression des grenades. Une extraction aqueuse d'écorce de grenade fraîche a été réalisée par solubilisation aqueuse à raison de 200g/l et filtration. Des dilutions ont été réalisées afin d'obtenir des produits ayant des teneurs en matière sèche semblables. [0168] Ces trois produits ont été comparés à l'hydrolysat de l'exemple 1. Les informations sont présentées dans le tableau 3. [0169] [Tableau 3]
0170] Pour des teneurs en matières sèches similaires (ll,6g/L à 14,3 g/L)), les 4 produits présentent de fortes différences en termes de teneur en Ellagitanins. L'hydrolysat d'écorce de grenade immature présente bien une plus grande teneur en Ellagitanins que les deux jus de grenade fraîche ou jus commercial de grenade et que l'extrait d'écorce fraîche de grenade. [0171] B. Comparaison fruits immatures vs. fruits matures [0172] Dans le cadre de la présente comparaison, un fruit « immature » récolté en début d'été a une écorce verte, un diamètre inférieur à 8 cm et présente de marqueurs particuliers (teneur élevée en punicalagine & dérivés), tandis qu'un fruit « mature » récolté en fin d'automne, a une écorce orangée/rouge, un diamètre supérieur à 10 cm et présente des marqueurs différents (teneur élevée en punicaline). [0173] Les écorces de grenade disponibles sur le marché sont un sous-produit de l'industrie du jus de grenade. Ainsi, les écorces de grenade issues de cette industrie sont toujours des écorces de grenade matures, afin que le jus de grenade soit sucré et doux gustativement. [0174] Le chromatogramme des différents extraits (écorces de fruits immatures, écorces de fruits matures, jus de fruits matures) sont présentés respectivement dans les Figures 1, 2 et 3 [0175] On constate que l'extrait de grenade immature présente une richesse et une diversité en polyphénols bien plus importante que le jus de grenade ou que l'extrait de grenade mature. [0176] De plus, l'activité anti-bactérienne (C. acnés) de ces trois produits a été comparée selon la méthode décrite plus loin dans la présente demande. Le diamètre d'inhibition est proportionnel à l'efficacité anti-bactérienne du produit testé. [0177] Les résultats sont présentés dans le tableau 4.
[0178] [Tableau 4]
[0179] On constate que le jus de grenade n'est pas capable d'inhiber la croissance bactérienne de C. acnés et également que l'extrait de grenade immature présente une activité anti bactérienne plus forte que l'extrait de grenade mature. [0180] C. Comparaison des produits obtenus par une extraction aqueuse versus une extraction à l'éthanol
[0181] L'art antérieur indique l'existence d'extraits éthanoliques de grenade sur le marché. [0182] Dans le tableau 5 sont présentés les résultats comparant un extrait éthanolique et un extrait aqueux. L'extrait éthanolique est obtenu par solubilisation de poudre d'écorce de grenade à raison de 50g/L dans l'éthanol absolu. Il est comparé à un extrait aqueux obtenu de manière similaire par solubilisation de poudre d'écorce de grenade à raison de 50g/L dans l'eau distillée.
[0183] [Tableau 5]
0184] On constate que l'extrait aqueux présente une teneur en composés Ellagitanins beaucoup plus importante, que l'extrait éthanolique.
[0185] D. Comparaison du principe actif selon l'invention avec la punicalagine seule [0186] Les résultats de l'effet anti-bactérien du principe actif selon l'invention comparé à ceux de la punicalagine, composé majoritaire des polyphénols présents dans le fruit de la grenade sont présentés dans le tableau 6.
[0187] [Tableau 6]
0188] On constate que la punicalagine présente un effet anti-bactérien sur la croissance du C. acnés, mais on note surtout que l'hydrolysat de l'exemple 1 selon l'invention inhibe la croissance du C. acnés de manière plus importante que la punicalagine à la même dose (+23%). [0189] IV.B Exemples de compositions cosmétiques ou dermatologiques selon l'invention [0190] IV. Bl. Exemple 4 : exemple de composition d'une lotion purifiante selon l'invention [0191] Un exemple de formulation contenant un principe actif selon l'invention est présenté dans le tableau 7 suivant. Cette lotion est fraîche et non collante, elle purifie la peau en douceur.
[0192] [Tableau 7]
019B] Il est obtenu par la mise en œuvre du mode opératoire suivant :
- Placer A sous agitation magnétique jusqu'à solubilisation,
- Placer B sous agitation magnétique
- Ajouter B dans A en filet sous agitation magnétique - Ajouter C, puis D et E sous agitation magnétique et agiter jusqu'à limpidité
[0194] IV. B2. Exemple 5 : exemple de composition de sérum traitant selon l'invention [0195] Un exemple de formulation contenant un principe actif selon l'invention est présenté dans le tableau 8 suivant. Ce soin léger et glissant s'étale facilement et pénètre rapidement en laissant la peau douce sas laisser de sensation grasse ou collante. [0196] [Tableau 8]
0197] Il est obtenu par la mise en œuvre du mode opératoire suivant :
- Placer A sous agitation douce et chauffer à 80°C
- Placer B sous agitation magnétique et chauffer à 80°C
- Sous rotor stator, émulsionner B dans A durant 5 min.
- A 40°C, sous agitation modérée, ajouter C puis D
- Ajuster le pH entre 4,5 et 5,0 avec E.
[0198] IV. C. Démonstration de l'effet et de l'efficacité d'un principe actif selon l'invention sur les différents facteurs à l'origine de l'acné.
[0199] Les études suivantes permettent de démontrer l'ensemble des efficacités du principe actif selon l'invention. Il agit sur l'activité de la glande sébacée, sur l'activité kératolytique, sur l'inflammation et sur le contrôle de C. acnés. L'ensemble de ces 4 voies d'efficacité lui procure une efficacité globale et complète sur l'acné.
[0200] IV.C1. Etude de l'efficacité du principe actif selon l'invention sur les modifications de l'activité de la glande sébacée.
[0201] L'acné est une pathologie caractérisée par des modifications quantitatives et qualitatives du sébum. En effet, sous l'influence de divers facteurs endogènes (ex : hormones, Cutibacterium acnés, activité lipophagique) et exogènes (ex : stress), le métabolisme des glandes sébacées est activé. Ceci se traduit par une augmentation de la sébogénèse et par conséquent une production anormalement élevée de sébum. Les études suivantes vont montrer que le principe actif selon l'invention agit sur les 4 paramètres influant l'activité de la glande sébacée.
[0202] A. Etude de l'efficacité du principe actif selon l'invention sur l'activité de la glande sébacée sous influence hormonale.
[0203] L'objectif de cette étude a été d'évaluer l'effet d'un principe actif selon l'invention sur la composante sébacée dont l'activité est modifiée par les hormones androgènes.
[0204] L'activité de la 5-alpha réductase a été évaluée in vitro sur sébocytes humains primaires (SHN). Cette enzyme catalyse la conversion de la testostérone en dihydrotestostérone (DHT). [0205] Le protocole opératoire pour la culture et le traitement des sébocytes humains pour l'étude du métabolisme de la testostérone est le suivant. Des sébocytes humains normaux (SHN) sont ensemencés dans un milieu de culture spécifique et incubés à 37°C. Dans un premier temps, les cellules sont ensuite prétraitées avec le principe actif de l'exemple 2 à 0,0006% ou 0,0015%. Le lendemain, les cellules sont traitées avec une solution de testostérone radiomarquée contenant ou non le principe actif de l'exemple 2 à 0,0006% ou 0,0015% pendant 24 heures. Les surnageants de culture sont récupérés. [0206] Analyse de l'activité de la 5-alpha réductase :
[0207] Les stéroïdes contenus dans les surnageants de culture ont été extraits dans un mélange de chloroforme/méthanol. La phase organique, contenant les stéroïdes, a été collectée et les différentes espèces moléculaires (métabolites de la testostérone) ont été séparées par chromatographie sur couche mince (CCM) en utilisant comme solvant de séparation un mélange dichlorométhane/acétate d'éthyle/méthanol. La révélation des plaques de chromatographie et l'évaluation de la quantité de testostérone transformée ont été réalisées par analyse densitométrique des différents spots correspondant aux différents métabolites de la testostérone.
[0208] Les résultats sur l'activité de la 5-alpha réductase sont présentés dans le tableau 9 (Valeurs moyennes de la conversion de la testostérone en DHT par la 5-alpha réductase par les SHN différenciés.).
[0209] [Tableau 9]
0210] Testé à 0,0015% sur SHN différenciés, le principe actif selon l'invention inhibe significativement la conversion de la testostérone en DHT de 37%. Le principe actif selon l'invention régule donc la biologie des sébocytes et limite ainsi l'excès d'androgènes impliqués dans la physiologie de l'acné.
[0211] B. Etude de l'efficacité du principe actif selon l'invention sur l'activité de la glande sébacée sous influence de la substance P et/ou de C. acnés.
[0212] L'objectif de cette étude est d'évaluer in vitro l'effet du principe actif selon l'invention sur la sébogénèse, grâce à l'analyse de la sécrétion de gouttelettes lipidiques par les SHN soumis à un stress par la substance P et/ou C. acnés. [0213] Le protocole opératoire pour la culture et le traitement des sébocytes humains pour l'étude de la sébogénèse est décrit en suivant. Des sébocytes humains normaux (SHN) sont ensemencés dans un milieu de culture spécifique et incubés à 37°C. Ensuite, les cellules sont traitées avec une suspension de C. acnés en présence ou non de substance P pendant 24 heures. Le principe actif de l'exemple 2 est appliqué à 0,0006% ou 0,0015% conjointement au traitement C. acnés +/- Substance P. Enfin, les cellules sont rincées avec du tampon PBS puis fixées.
[0214] Pour la coloration des gouttelettes lipidiques, les cellules sont fixées dans du paraformaldéhyde et la sonde BODIPY™, qui colore les lipides neutres, est utilisée. Les noyaux sont marqués. [0215] Les résultats sur la sébogénèse sont présentés dans le tableau 10 (Valeurs moyennes de la coloration des lipides par la sonde BODIPY™ des SHN traités C. acnés).
[0216] [Tableau 10]
[0217] Les résultats sur la sébogénèse sont présentés dans le tableau 11 (Valeurs moyennes de la coloration des lipides par la sonde BODIPY™ des SHN traités par la substance P.). [0218] [Tableau 11]
[0219] Les résultats sur la sébogénèse sont présentés dans le tableau 12 (Valeurs moyennes de la coloration des lipides par la sonde BODIPY™ des SHN traités C. acnés + Substance P).
[0220] [Tableau 12]
[0221] On constate que testé à 0,0015% sur SHN traités C. acnés +/- Substance P, le principe actif selon l'invention inhibe significativement la sécrétion de gouttelettes lipidiques induite par C. acnés de 62%, par la substance P de 87% et la combinaison de C. acnés et de la substance P de 73%. [0222] En réponse à C. acnés et/ou à la substance P, le principe actif selon l'invention limite ainsi l'excès de sécrétion de lipides, paramètre caractéristique de la physiopathologie de l'acné. [0223] C. Etude de l'efficacité du principe actif selon l'invention sur la lipophagie de la glande sébacée. [0224] Lors du dysfonctionnement des sébocytes, des travaux de recherche ont montré que des changements morphologique et fonctionnel au niveau de la lipophagie des sébocytes apparaissent. L'implication de la lipophagie a été étudiée grâce à l'analyse simultanée du marqueur Light Chain 3 (LC3b) et de la sécrétion de gouttelettes lipidiques par les SHN stimulés par un cocktail de différenciation. [0225] Le protocole opératoire pour la culture et le traitement des sébocytes humains pour l'étude de la lipophagie est décrit en suivant. Des sébocytes humains normaux (SHN) sont ensemencés dans un milieu de culture spécifique et incubés à 37°C dans une atmosphère contenant 5% de CO2. Les cellules sont traitées avec une solution d'acide linoléique et de testostérone pendant 24 heures. 6 heures après le début du traitement, le principe actif de l'exemple 2 est ajouté à 0,0006% ou 0,0015%. Les cellules sont ensuite rincées avec du tampon PBS puis fixées.
[0226] Pour l'analyse immunocytologique du LC3b, les cellules sont fixées dans du méthanol. L'anticorps primaire est utilisé. Les noyaux sont marqués avec du 4',6-diamidino-2- phenylindole. La visualisation est réalisée sur le microscope couplé à un système d'analyse d'images. La coloration et la synthèse des différents marqueurs étudiés sont proportionnelles à l'intensité de la fluorescence (couleur jaune ou verte) présente dans les SHN.
[0227] Les résultats sur la lipophagie sont présentés dans le tableau 13 (valeurs moyennes de la synthèse de LC3b par les SHN différenciés.) et dans le tableau 14 (valeurs moyennes de la coloration des lipides par la sonde BODIPY™ des SHN différenciés).
[0228] [Tableau 13]
[0229] [Tableau 14]
[0230] On constate que testé à 0,0015% sur SHN différenciés, sébocytes présentant une défaillance de la lipophagie et une lipogénèse accrue, le principe actif selon l'invention augmente significativement la synthèse de LC3b de 121% et inhibe significativement la sécrétion de gouttelettes lipidiques de 77%. En rétablissant le mécanisme de lipophagie dans des sébocytes humains différenciés, ACNESIUM® limite la production de lipides, composante caractéristique de la physiopathologie de l'acné.
[0231] IV.C2. Etude de l'efficacité du principe actif selon l'invention sur l'hyperkératinisation. [0232] A. Etude. [0233] Comme décrit précédemment dans la partie C2, l'hyperkératinisation est un évènement biologique précoce dans le développement des lésions d'acné. Elle se caractérise par une anomalie de prolifération et de kératinisation des kératinocytes folliculaires favorisant l'obstruction du canal excréteur, une mauvaise évacuation du sébum et consécutivement la dilatation du canal pilosébacé à l'origine de la formation d'un microcomédon. [0234] L'objectif de cette étude a été d'évaluer l'effet d'un principe actif selon l'invention sur l'hyperkératinisation. L'hyperkératinisation a été évaluée en mesurant l'épaisseur du stratum corneum et en étudiant la synthèse des cytokératines CK-5 et CK-16 dans un modèle mimant une peau acnéique (nommé SILABSKIN® RE mimic acné).
[0235] Le protocole opératoire pour la culture et le traitement des SILABSKIN® RE mimic acné est présenté en suivant. Des kératinocytes humains normaux sont ensemencés dans des inserts dans un milieu de culture spécifique et incubés à 37°C. Les SILABSKIN® RE sont passés en interface air/liquide puis le milieu de culture est changé tous les 2 jours. Ensuite, les SILABSKIN® RE sont traités topiquement avec une suspension de C. acnés, le principe actif de l'exemple 2 est appliqué topiquement à 0,003% et 0,006% conjointement à l'application de C. acnés. Après 2h, l'excédent de solution bactérienne est aspiré. [0236] Le lendemain, les SILABSKIN® RE sont de nouveau traités topiquement avec une suspension de C. acnés, le principe actif de l'exemple 2 est appliqué topiquement à 0,003% et 0,006% conjointement à l'application de C. acnés. Après 2h, l'excédent de solution bactérienne est aspiré. Les SILABSKIN® RE sont enfin traités topiquement avec une solution de squalène péroxydé. Enfin, les sous-nageants de culture sont récupérés et stockés à -80°C et les tissus sont récupérés et fixés dans du paraformaldéhyde .Après fixation, les SILABSKIN® RE sont déshydratés et inclus en paraffine. Des coupes sont réalisées à l'aide d'un microtome.
[0237] La coloration hématoxyline/éosine est réalisée. Les analyses immunohistologiques des cytokératines-5 et -16 ont été réalisées après incubation des anticorps primaires, suivie d'une incubation avec l'anticorps secondaire. Les noyaux sont marqués avec du 4',6-diamidino-2- phenylindole. La visualisation est réalisée sur le microscope couplé à un système d'analyse d'images. La synthèse des différents marqueurs étudiés est proportionnelle à l'intensité de la fluorescence (couleur verte) présente sur les épidermes reconstruits. Une analyse quantitative des images a été réalisée à l'aide du logiciel Matlab.
[0238] Les résultats sont présentés dans les tableaux 15 (valeurs moyennes de l'épaisseur du stratum corneum des SILABSKIN® RE mimic acné), 16 (valeurs moyennes de la synthèse de cytokératine-5 par les SILABSKIN® RE mimic acné) et 17 (valeurs moyennes de la synthèse de cytokératine-16 par les SILABSKIN® RE mimic acné).
[0239] [Tableau 15]
[0240] Dans le modèle 3D d'épiderme reconstruit mimant une peau acnéique, le stratum cornéum est plus épais que dans le modèle témoin, témoignant d'une hyperkératinisation.
[0241] On constate qu'appliqué en topique à 0,006% sur SILABSKIN® RE mimic acné, le principe actif selon l'invention renormalise significativement l'épaisseur du stratum corneum de 100%. [0242] [Tableau 16]
[0243] [Tableau 17] [0244] Dans le modèle 3D d'épiderme reconstruit mimant une peau acnéique, les cytokératines -5 et -16 sont retrouvées en quantité plus importante que dans les épidermes reconstruits témoin.
[0245] On constate qu'appliqué en topique à 0,006% sur SILABSKIN® RE mimic acné, le principe actif selon l'invention diminue significativement la synthèse des cytokératines-5 et 16 de respectivement 85% et 92%, limitant ainsi l'hyperkératinisation, modification épidermique majeure apparaissant lors de l'acné.
[0246] B. Effet du principe actif selon l'invention sur les gènes de la barrière mécanique épidermique. [0247] L'étude vise à évaluer l'effet du principe actif selon l'invention sur sa capacité à modifier l'expression des gènes de la barrière mécanique épidermique : filaggrine, loricrine, claudine- 4, GBA : b- glucosylceramidase, ABCA12.
[0248] Cette étude a été réalisée sur kératinocytes humains normaux par PCR quantitative. Le protocole opératoire de l'étude est décrit en suivant. Les kératinocytes humains normaux sont ensemencés puis incubés à 37°Cdans une étuve contenant 5% de C02. Puis le milieu de culture est éliminé et remplacé par du milieu contenant le principe actif selon l'invention.
[0249] Les cellules sont ensuite incubées à 37°C dans une atmosphère contenant 5% de C02. Les cellules sont récupérées et les ARN totaux extraits pour l'étude de filaggrine, loricrine, claudine-4, GBA et ABCA12. Les ARN ont été reverses-transcripts et les ADN complémentaires obtenus ont été analysés par la technique de PCR quantitative.
[0250] Les ARNm de témoins de référence, ont été également analysés en parallèle des ARNm de filaggrine, claudine-4, GBA et ABCA12. La quantification de l'incorporation de fluorescence (SYBR Green) est mesurée en continu à l'aide d'un thermocycleur. L'analyse des Ct (quantification relative) est réalisée à l'aide d'un logiciel. [0251] Les résultats sont présentés dans les tableaux 33 et 34 ci-après.
[0252] [Tableau 33]
[0253] [Tableau 34]
[0254] Testé à 0,05% le principe actif selon l'invention induit l'expression des ARNm codant pour la filaggrine et n'induit pas l'expression des ARNm codant pour la Loricrine, la Claudine- 4, ABCA12 et GBA.
[0255] IV.C3. Etude de l'efficacité du principe actif selon l'invention sur l'inflammation.
[0256] Comme décrit précédemment dans la partie C3, l'inflammation est le phénomène biologique concomitant à toutes les étapes de la formation des lésions acnéiques : microcomédon, comédon, lésion inflammatoire, érythème post-inflammatoire et même cicatrice. La bactérie C. acnés stimule la production de médiateurs pro-inflammatoires par plusieurs types cellulaires de l'unité pilosébacée (kératinocytes, sébocytes, cellules immunitaires infiltrant les lésions d'acné).
[0257] L'objectif de ces études a été d'évaluer l'effet d'un principe actif selon l'invention sur l'inflammation kératinocytaire, l'inflammation sébocytaire et sur la biologie des lymphocytes Thl7.
[0258] A. Etude de l'efficacité du principe actif selon l'invention sur l'inflammation kératinocytaire.
[0259] L'inflammation kératinocytaire a été étudiée sur un modèle 3D mimant une peau acnéique (nommé SILABSKIN® RE mimic acné) en dosant différents médiateurs de l'inflammation, retrouvés en grande quantité dans la peau acnéique : CCL5, CCL20, CXCL1, IL- la, IL-8, MMP2 et MMP9.
[0260] Le protocole opératoire de culture et de traitement des SILABSKIN® RE mimic acné est décrit en suivant. Des kératinocytes humains normaux sont ensemencés dans des inserts dans un milieu de culture spécifique et incubés à 37°C. Les SILABSKIN® RE sont passés en interface air/liquide puis le milieu de culture est changé tous les 2 jours. Ensuite, les SILABSKIN® RE sont traités topiquement avec une suspension de C. acnés , le principe actif selon l'invention est appliqué topiquement à 0,003% et 0,006% conjointement à l'application de C. acnés.
[0261] Après 2h, l'excédent de solution bactérienne est aspiré. Le lendemain, les SILABSKIN® RE sont de nouveau traités topiquement avec une suspension de C. acnés, le principe actif selon l'invention est appliqué topiquement à 0,003% et 0,006% conjointement à l'application de C. acnés. Après 2h, l'excédent de solution bactérienne est aspiré. Les SILABSKIN® RE sont enfin traités topiquement avec une solution de squalène péroxydé. Les sous-nageants de culture des SILABSKIN® RE sont récupérés et stockés à -80°C.
[0262] La sécrétion des médiateurs inflammatoires (CCL5, CCL20, CXCL1, IL-Ia, I L-S, MMP2 et MMP9) par des SILABSKIN RE® mimic acné a été évaluée par la technique multiplex (LEGENDPIex™). L'acquisition des résultats est réalisée à l'aide d'un cytomètre en flux. L'analyse est faite à l'aide du logiciel LEGENDplex™ Data Analysis Software.
[0263] Les résultats sur la sécrétion de CCL5, de CCL20 et de CXCL1 sont présentés dans le tableau 18 (valeurs moyennes de la synthèse de CCL5 par les SILABSKIN® RE mimic acné), dans le tableau 19 (Valeurs moyennes de la synthèse de CCL20 par les SILABSKIN® RE mimic acné.), et dans le tableau 20 (Valeurs moyennes de la synthèse de CXCL1 par les SILABSKIN® RE mimic acné).
[0264] [Tableau 18]
[0265] [Tableau 19]
[0266] [Tableau 20]
[0267] Dans le modèle 3D d'épiderme reconstruit mimant une peau acnéique, la synthèse des chimiokines, médiateurs responsables de l'attraction des cellules immunitaires est augmentée. [0268] On constate que testé à 0,006% sur SILABSKIN® RE mimic acné, le principe actif selon l'invention inhibe significativement la sécrétion de CCL5, de CCL20, de CXCL1 de respectivement 100%, 78%, 94%. Le principe actif selon l'invention régule la biologie de l'épiderme acnéique et limite ainsi l'inflammation marqueur important de la physiopathologie de l'acné.
[0269] Les résultats sur la synthèse de cytokines sont présentés dans le tableau 21 (valeurs moyennes de la synthèse d'IL-Ia par les SILABSKIN® RE mimic acné) et dans le tableau 22 (valeurs moyennes de la synthèse d'IL-8 par les SILABSKIN® RE mimic acné).
[0270] [Tableau 21]
[0271] [Tableau 22]
[0272] Dans le modèle 3D d'épiderme reconstruit mimant une peau acnéique, la synthèse des cytokines pro-inflammatoires caractéristiques des peaux acnéiques est augmentée.
[0273] On constante que testé à 0,006% sur SILABSKIN® RE mimic acné, le principe actif selon l'invention inhibe significativement la sécrétion d'IL-Ia, d'IL-8 de respectivement 90%, 88%. [0274] Les résultats sur la synthèse de métalloprotéinases matricielles sont présentés dans le tableau 23 (valeurs moyennes de la synthèse de MMP2 par les SILABSKIN® RE mimic acné) et dans le tableau 24 (valeurs moyennes de la synthèse de MMP9 par les SILABSKIN® RE mimic acné).
[0275] [Tableau 23] [0276] [Tableau 24]
[0277] Dans le modèle 3D d'épiderme reconstruit mimant une peau acnéique, la synthèse des métalloprotéinases matricielles contribuant à l'extension du phénomène inflammatoire dans les lésions d'acné est augmentée.
[0278] On constate que testé à 0,006% sur SILABSKIN® RE mimic acné, le principe actif selon l'invention inhibe significativement la sécrétion de MMP2 et de MMP9 de respectivement 139% et 95%.
[0279] L'ensemble de ces études démontrent la capacité du principe actif selon l'invention à limiter l'inflammation kératinocytaire.
[0280] B. Etude de l'efficacité du principe actif selon l'invention sur la réponse inflammatoire Thl7. [0281] Un infiltrat de cellules immunitaires est présent dans les lésions d'acné, infiltrat composé majoritairement de lymphocytes T helper CD4+. Ces cellules ont un profil Thl7, ce qui suggère que l'acné est une pathologie dans laquelle les lymphocytes Thl7 contribuent de manière significative au phénomène inflammatoire.
L'effet du principe actif selon l'invention a été évalué sur la réponse inflammatoire Thl7. Cette étude porte sur l'analyse de la sécrétion de l'IL-17 produite par les lymphocytes Thl7, cellules retrouvées en grand nombre dans les zones lésionnelles d'acné.
[0282] Le protocole opératoire la culture et le traitement des lymphocytes Thl7 est décrit en suivant. Des lymphocytes T (LT) naïfs sont isolés à partir de cellules mononucléées du sang périphérique. Ils sont ensemencés dans des plaques pré-coatées avec un anticorps anti-CD3 contenant du milieu spécifique. Un mix permettant la différenciation des LT naïfs en LThl7 est ajouté. Les cellules sont ensuite incubées à 37°C. Après plusieurs jours, le milieu de culture est éliminé et remplacé par un milieu contenant le mix de différenciation en présence ou non du principe actif selon l'invention (0,0015% ou 0,0060%). Le lendemain, les surnageants de culture des cellules sont récupérés et stockés à -80°C. [0283] La sécrétion d'IL-17 a été évaluée par la technique ELISA.
Les résultats de l'effet sur les lymphocytes Thl7 sont présentés dans le tableau 25 (valeurs moyennes de la sécrétion d'IL-17 par les lymphocytes Thl7).
[0284] [Tableau 25]
0285] On constate que testé à 0,0060% sur des lymphocytes Thl7, le principe actif selon l'invention inhibe significativement la sécrétion d'IL-17 de 38%. Le principe actif selon l'invention régule la biologie des LThl7 et limite ainsi l'inflammation induite par ces cellules, actrices importantes de la physiopathologie de l'acné. [0286] C. Etude de l'efficacité du principe actif selon l'invention sur l'inflammation sébocytaire.
[0287] C. acnés induit une réponse inflammatoire au niveau des sébocytes. Ces derniers produisent alors de nombreux médiateurs (IL-6, IL-8...) qui contribuent à la réaction inflammatoire observée dans les lésions d'acné. Par ailleurs, le rôle pathogène de la substance P comme neuromédiateur de l'inflammation dans l'acné est à ce jour bien décrit dans la littérature.
[0288] L'inflammation sébocytaire a été étudiée en analysant la sécrétion d'IL-6 et d'IL-8 par des sébocytes soumis à une exposition bactérienne (C. acnés phylotype I Al) et à une influence neuronale (substance P). [0289] Le protocole opératoire la culture et le traitement des sébocytes humains est décrit en suivant. Des sébocytes humains normaux (SHN) sont ensemencés dans un milieu de culture spécifique et incubés à 37°C dans une atmosphère contenant 5% de CO2. Les cellules sont traitées avec une suspension de C. acnés et/ou de substance P, et le principe actif selon l'invention est appliqué à 0,0006% ou 0,0015% conjointement au traitement C. acnés +/- Substance P. Les surnageants de culture sont ensuite récupérés et stockés à -80°C.
[0290] La sécrétion d'IL-17, d'IL-6, d'IL-8 a été évaluée par la technique ELISA. Les résultats de l'effet sur l'inflammation sébocytaire sont présentés : dans le tableau 25 (synthèse d'IL-6 par les sébocytes traités par C. acnés ), dans le tableau 26 (synthèse d'IL-8 par les sébocytes traités par C. acnés ), - dans le tableau Tl (synthèse d'IL-6 par les sébocytes traités par la substance P), dans le tableau 28 (synthèse d'IL-8 par les sébocytes traités par la substance P), dans le tableau 29 (synthèse d'IL-6 par les sébocytes traités par C. acnés + Substance
P·) et dans le tableau 30 (synthèse d'IL-8 par les sébocytes traités par C. acnés + Substance
P.).
[0291] [Tableau 26]
[0292] [Tableau 27] normaux. Testé à 0,0015%, le principe actif selon l'invention inhibe significativement la sécrétion d'IL-6 et d'IL-8 par les sébocytes humains de respectivement 109% et 126%.
[0294] [Tableau 28]
[0295] [Tableau 29]
[0296] Le traitement par la substance P, neuromédiateur du stress, stimule l'inflammation dans les sébocytes humains normaux.
[0297] On constate que testé à 0,0015% sur sébocytes traités par la substance P, le principe actif selon l'invention inhibe significativement la sécrétion d'IL-6 et d'IL-8 de respectivement 186% et 196%.
[0298] [Tableau 30] [0299] [Tableau 31]
[0300] Le traitement cumulé par C. acnés et la substance P, exacerbe l'inflammation dans les sébocytes humains normaux.
[0301] Testé à 0,0015% sur sébocytes traités par C. acnés + Substance P, le principe actif selon l'invention inhibe significativement la sécrétion d'IL-6 et d'IL-8 de respectivement 71% et 88%. L'ensemble de ces études démontrent la capacité du principe actif selon l'invention à réguler l'inflammation sébocytaire caractéristique de la physiologie de l'acné. Ces effets ont été démontrés face à l'agent pathogène clé de la pathologie C. acnés mais aussi dans des conditions mimant un stress psychologique. [0302] IV.C4. Etude de l'efficacité du principe actif selon l'invention sur la modification du microbiote.
[0303] Comme décrit précédemment dans la partie C4, la bactérie C. acnés est considérée comme l'un des facteurs pathogènes majeurs contribuant au développement de l'acné. L'acné est caractérisée par une perte de diversité phylotypique de C. acnés au profit du phylotype IA1. De plus, la population de C. acnés phylotype IA1 possède une capacité à communiquer et s'organiser pour mettre en place des facteurs de virulence (formation de biofilms) via le système de quorum sensing et ainsi coloniser le follicule.
[0304] L'objectif de ces études est de montrer l'effet du principe actif sur la croissance de la bactérie C. acnés, sur le recrutement des bactéries par le quorum sensing et sur la formation d'un biofilm de C. acnés. [0305] A. Etude de l'efficacité du principe actif selon l'invention sur la croissance bactérienne. [0306] L'objectif de cette étude a été d'évaluer l'effet anti-bactérien direct du principe actif sur la croissance de C. acnés.
[0307] Le protocole opératoire de culture de la souche bactérienne est le suivant : [0308] C. acnés est cultivé en conditions d'anaérobiose à 37°C, sur des géloses au sang dans des bouillons adéquats. Pour mesurer la concentration minimale inhibitrice (CMI) du principe actif selon l'invention, C. acnés a été ensemencé en absence et en présence du principe actif selon l'invention à différentes concentrations. La croissance est évaluée par mesure de la densité optique à 600nm. Une courbe de décroissance exponentielle est tracée et modélisée selon l'équation DO = DOmax x e - d c (c= concentration du principe actifs, d=facteur déduit des données expérimentales). On en déduit la CMI50, qui représente la concentration minimale du principe actif à partir de laquelle la croissance de C. acnés est abaissée de 50%. [0309] Les résultats sur la croissance de C. acnés phylotype lAlsont présentés dans le tableau 36. [0310] [Tableau 36] [0311] Plus la concentration du principe actif selon l'invention est élevée, plus la croissance de la souche C. acnés est inhibée. La concentration minimale inhibitrice (CMI) permettant d'inhiber 50% de la croissance est de 0,043% du principe actif selon l'invention. Le principe actif selon l'invention présente un effet bactériostatique d'au moins 50% sur la croissance de C. acnés phylotype I Al, à partir d'une concentration de 0,043%.
[0312] B. Etude de l'efficacité du principe actif selon l'invention sur le quorum sensing.
[0313] La population de C. acnés phylotype IA1 possède une capacité à communiquer et s'organiser pour mettre en place des facteurs de virulence via le système de quorum sensing. L'effet du principe actif selon l'invention sur le quorum sensing a été appréhendé en mesurant l'expression du gène Lux, un gène pivot dont le niveau d'activité est lié à celui du QS.
[0314] Une culture de C. acnés est ensemencée en bouillon spécifique, en présence et en absence du principe actif selon l'invention (0,006%), à partir d'une pré-culture en phase exponentielle de croissance. Cette culture est réalisée à 37°C dans des conditions d'anaérobiose durant 24h, et est suivie par mesure de densité optique à 600 nm. À l'issue des 24h de croissance, les cultures sont centrifugées :
- les culots bactériens sont incubés et lavés dans le RNAprotect Bacteria Reagent RNA Protect, selon les recommandations du fournisseur. Ils sont ensuite conservés à sec à -80°C en vue de l'extraction des ARN totaux.
- les surnageants de culture sont quant à eux prélevés, filtrés (0,2pm) et conservés à -20°C en vue de mesurer la quantité d'AI-2 sécrétée au cours de la croissance.
[0315] Les résultats sur l'expression de LuxS et de la synthèse de l'autoinducteur AI-2 sont présentés dans les tableaux 37 et 38.
[0316] [Tableau 37]
0317] Testé à 0,006% sur C. acnés , le principe actif selon l'invention limite de 26% l'expression de LuxS, gène majeur du quorum sensing. [0318] [Tableau 38]
0B19] Testé à 0,006% sur C. acnés , le principe actif selon l'invention limite significativement la sécrétion de l'autoinducteur AI-2 de 17%.
[0320] L'ensemble de ces données démontrent la capacité du principe actif à réduire l'activité du quorum sensing de C. acnés . [0321] C. Etude de l'efficacité du principe actif selon l'invention sur la formation de biofilm
[0322] Pour évaluer la capacité du principe actif selon l'invention à limiter le biofilm de C. acnés , la bactérie est ensemencée à partir d'une pré-culture en phase exponentielle en présence ou en absence d'une quantité sub-inhibitrice du principe actif selon l'invention (0,006%), en microplaques. Les microplaques sont incubées en anaérobiose à 37°C durant 48h pour favoriser la formation du biofilm.
[0323] Après 48h, les puits de la microplaque sont vidés par aspiration et les bactéries non adhérées sont éliminées. Le biofilm est ensuite coloré au cristal violet. Le cristal violet est quantifié par mesure de spectrophotométrie à 540nm. La quantité de biofilm formé est proportionnelle au cristal violet dosé dans le puits. [0324] Les résultats sur les biofilms de C. acnés phylotype IA1 sont présentés dans le tableau
39.
[0325] [Tableau 39]
0326] A la concentration sub-inhibitrice (0.006%), le principe actif selon l'invention empêche significativement la formation d'un biofilm par C. acnés phylotype IA1 de 43%.
[0327] En limitant la croissance et la formation de biofilm du C. acnés, le principe actif selon l'invention exerce une activité anti-bactérienne contre le phylotype virulent associé au développement des lésions acnéiques.
[0328] IV.D. Démonstration de l'effet et de l'efficacité d'un principe actif selon l'invention sur les peaux acnéiques.
[0329] Il a été démontré précédemment que grâce à une approche inédite, le principe actif selon l'invention est capable de cibler les quatre composantes majeures de la physiopathologie de l'acné. Des essais ont également été réalisés pour démontrer cliniquement l'efficacité thérapeutique sur des volontaires adultes souffrant d'acné légère à modérée, y compris son impact sur le lipidome des peaux acnéiques.
[0330] Des travaux précédents ont démontré qu'il existe une variation du lipidome entre des peaux présentant des lésions d'acné et des peaux saines. Le profil lipidique des peaux acnéiques présente des particularités à savoir :
- la formation en grande quantité d'acides gras libres pro-inflammatoires par l'hydrolyse des triglycérides par la lipase bactérienne (acide oléique, acide palmitique) ;
- une modification du profil de saturation/insaturation des acides gras en faveur des AG insaturés (augmentation des AG insaturés spécifiques du sébum : acide sapiénique et acide sébaléique) ;
- une élévation des taux de cholestérol, esters de cire et composés associés aux squalènes (tri-terpènes).
[0331] Ces modifications lipidiques sont impliquées dans la pathogénèse de l'acné puisqu'elles participent au phénomène inflammatoire, à la perturbation de la fonction barrière, à l'hyperkératose et la formation de comédons.
[0332] Au-delà de l'augmentation de la quantité de sébum, les modifications qualitatives et quantitatives des lipides sébacés jouent donc un rôle important dans la comédogénèse et l'apparition d'un terrain inflammatoire. Ces modifications altèrent l'environnement physiologique des sébocytes et des kératinocytes et influencent grandement la formation des lésions acnéiformes.
[0333] Avantageusement, un hydrolysat d'écorce de fruits immatures de Punica granatum est capable d'avoir un effet sur les modifications quantitatives et qualitatives du profil lipidique du sébum qui interviennent dans l'acné. En particulier, lorsqu'il est appliqué sur la peau, le principe actif selon l'invention est capable de :
- Diminuer la quantité d'acide gras
- D'abaisser le ratio acides gras insaturés / acides gras saturés
- De réduire la quantité de squalènes,
- De diminuer la quantité de cholestérol
- De tendre à diminuer la quantité de cire.
[0334] Le principe actif selon l'invention est capable de réguler la biologie des sébocytes. [0335] A. Etude de l'efficacité du principe actif selon l'invention sur le lipidome des peaux acnéiques.
[0336] L'objectif de cette étude a été d'évaluer l'effet du principe actif selon l'invention formulé à 0,5% sur le profil lipidique du sébum des peaux présentant une acné légère à modérée.
[0337] Cette étude a été réalisée chez 36 sujets adultes caucasiens, de sexe féminin et d'âge compris entre 25 et 43 ans, concernés par une acné d'intensité légère à modérée, localisée sur le visage et nécessitant la mise en place d'un traitement.
[0338] Les sujets ont été répartis en deux groupes :
Groupe placebo : groupe de 18 femmes ayant appliqué biquotidiennement pendant 30 jours, une formule placebo sur l'ensemble du visage.
Groupe Principe actif selon l'invention : groupe de 18 femmes ayant appliqué biquotidiennement pendant 30 jours, une formule contenant le principe actif selon l'invention sur l'ensemble du visage.
[0339] La quantité et la nature des lipides du sébum a été évalué par prélèvement, à J0 et J30, suivi des dosages UPLC-MS/MS. L'identification des espèces d'intérêt a été validée par l'injection de composés standards et la quantification des espèces a été réalisée par addition de composés standards deutérés à des concentrations connues.
[0340] Les résultats correspondant à la quantité d'acides gras libres après utilisation d'une des deux formules sont présentés dans le tableau 40.
[0341] [Tableau 40] actif selon l'invention formulé à 0,5% améliore significativement la qualité du profil lipidique du sébum des sujets acnéiques en : diminuant significativement la quantité d'acide gras (acide palmitique : -42%, acide sapiénique : -61%, acide oléique : -49%, acide sébaléique : -65%) ; abaissant significativement le ratio acides gras insaturés / acides gras saturés de 14% ; réduisant significativement la quantité de squalènes de 28% ; diminuant significativement la quantité de cholestérol de 26% ;
[0343] Il tend également à réduire la quantité de la cire de 35%. [0344] L'ensemble des résultats obtenus révèle de bonnes performances du soin contenant le principe actif selon l'invention et confirme l'intérêt de ce dernier chez les sujets adultes caucasiens dans l'amélioration de la composante lipidique de l'acné.
[0345] B. Etude clinique du principe actif selon l'invention sur des peaux présentant une acné légère à modérée. [0346] L'objectif de cette étude clinique a été d'évaluer l'effet du principe actif selon l'invention formulé à 0,5% en tant que soin destiné au traitement des peaux présentant une acné légère à modérée.
[0347] Cette étude a été réalisée chez 92 sujets adultes caucasiens, sexe féminin et d'âge compris entre 25 et 48 ans, concernés par une acné d'intensité légère à modérée, localisée sur le visage et nécessitant la mise en place d'un traitement.
[0348] Les sujets ont été répartis en deux groupes :
Groupe placebo : groupe de 46 femmes ayant appliqué pendant 30 jours, matin et soir, la formule placebo sur l'ensemble du visage. - Groupe Principe actif : groupe de 46 femmes ayant appliqué pendant 30 jours, matin et soir, la formule contenant le principe actif selon l'invention sur l'ensemble du visage. [0349] Après 30 jours d'étude, les évaluations ont été réalisées par le dermatologue (scorage clinique des lésions, scorage de la gravité de l'acné, évaluation de l'état de la peau et appréciation globale du soin). Achacune des visites, le dermatologue a évalué le nombre exact de lésions acnéiques sur le visage (comédons ouverts, comédons fermés, papules, pustules, nodules et kystes) et a scoré la gravité de l'acné en utilisant l'échelle internationalement reconnue GEA (Global Evaluation Acné).
[0350] L'échelle GEA comporte 6 stades.
[0351] [Tableau 41]
[0352] Une diminution du score GEA permet de conclure à une efficacité clinique du traitement correspondant.
[0353] A chacune des visites (JO et J30), le dermatologue a établi un état clinique de la peau en évaluant différents paramètres ayant trait à la problématique des peaux acnéiques selon les 6 critères suivants sur une échelle de cotation allant de 0 à 9 (de nul à important) : intensité de la séborrhée, intensité de l'érythème lié aux boutons, importance des pores dilatés, intensité de la sécheresse cutanée, irrégularité du teint, irrégularité du relief [0354] L'appréciation globale de l'efficacité du produit a été évaluée par le dermatologue après 30 jours d'application biquotidienne, à l'aide d'un questionnaire qui contenait les items suivants :
1) Le produit favorise la réduction des lésions inflammatoires
2) Le produit favorise la réduction des lésions rétentionnelles
3) Le produit atténue l'aspect brillant de la peau
4) Le produit atténue les pores dilatés 5) Le produit présente un effet hydratant
6) Le produit peut être utilisé pour soigner l'acné légère à modérée
7) Globalement, le produit est satisfaisant
[0355] Pour les items allant de 1 à 7, 5 choix de notation étaient possibles : tout à fait d'accord, d'accord, pas d'accord, pas du tout d'accord, sans opinion. [0356] Les résultats correspondant au comptage du nombre total de lésions rétentionnelles
(comédons ouverts et fermés) sont présentés dans le tableau 42.
[0357] [Tableau 42]
[0358] Dans les conditions de cette étude, après 30 jours d'utilisation biquotidienne sur le visage, le groupe utilisant la formule contenant le principe actif selon l'invention révèle des performances significativement plus favorables que le groupe placebo : réduction du nombre de lésions rétentionnelles de 40,6% pour le groupe ayant utilisé la formule contenant le principe actif selon l'invention versus 30,9% pour le groupe ayant appliqué la formule placebo. [0359] Les résultats correspondant au comptage du nombre total de lésions inflammatoires (papules, pustules et nodules) sont présentés dans le tableau 43.
[0360] [Tableau 43]
0361] Dans les conditions de cette étude, après 30 jours d'utilisation biquotidienne sur le visage, le groupe utilisant la formule contenant le principe actif selon l'invention révèle des performances plus favorables que le groupe placebo : réduction du nombre de lésions inflammatoires de 49,2% pour le groupe ayant utilisé la formule contenant le principe actif selon l'invention versus 38,9% pour le groupe ayant appliqué la formule placebo.
[0362]
[0363] Les résultats correspondant au comptage du nombre total de lésions (rétentionnelles + inflammatoires) sont présentés dans le tableau 44.
[0364] [Tableau 44]
0365] Dans les conditions de cette étude, après 30 jours d'utilisation biquotidienne sur le visage, le groupe utilisant la formule contenant le principe actif selon l'invention révèle des performances significativement plus favorables que le groupe placebo : réduction du nombre total de lésions de 43,9% pour le groupe ayant utilisé la formule contenant le principe actif selon l'invention versus 34,0% pour le groupe ayant appliqué la formule placebo.
[0366] L'ensemble de ces résultats montre l'intérêt du traitement par le principe actif selon l'invention dans le soin quotidien des états de la peau acnéique.
[0367] Les résultats du scorage de la gravité de l'acné après utilisation des formules sont présentés dans le tableau 45.
[0368] [Tableau 45]
0369] Dans les conditions de cette étude, après 30 jours d'utilisation biquotidienne sur le visage, une réduction du score de gravité de l'acné de 26,4% a été obtenue chez les sujets ayant utilisé la formule contenant le principe actif selon l'invention et de 17,0% chez les sujets ayant appliqué la formule placebo.
[0370] Cet effet a été observé chez 61% des sujets appartenant au groupe le principe actif selon l'invention contre seulement 33% des sujets du groupe placebo.
[0371] Les résultats correspondant au scorage de différents paramètres caractéristiques de l'état de la peau acnéique après utilisation de la formule principe actif selon l'invention ou placebo sont présentés respectivement dans les tableaux 46 et 47.
[0372] [Tableau 46]
[0373] [Tableau 47]
0374] Dans les conditions de cette étude, après 30 jours d'utilisation biquotidienne sur le visage, le groupe utilisant la formule contenant le principe actif selon l'invention révèle des performances plus favorables que le groupe placebo : intensité de la séborrhée (-39% versus 33%), intensité de l'érythème lié aux boutons (-39% versus -32%), importance des pores dilatés (-27% versus -26% ), irrégularité du teint (-37% versus -32%), et irrégularité du relief (-37% versus -31%),
[0375] Ces résultats montrent l'intérêt du traitement le principe actif selon l'invention dans le soin quotidien des états de la peau acnéique.
[0376] C. Etude de l'effet immédiat et rémanent suite à une unique application.
[0377] L'objectif de cette étude est d'évaluer, in vivo, l'effet immédiat sous forme de film sur des sujets après 10 minutes d'application ainsi qu'après une période de rémanence de 6 heures après application, correspondant à un effet sur la journée.
[0378] Cette étude a été réalisée sur 21 sujets caucasiens, sains, de sexe féminin, âgés de 34 ± 8 ans. En particulier, les inventeurs ont étudié l'effet hydratant par mesure du taux d'hydratation sur les joues à l'aide d'un Cornéomètre1’ CM 820 (Courage et Khazaka) et l'effet sur le taux de sébum sur le front à l'aide d'un sébumètre® (Courage et Khazaka) après une application unique du principe actif sous forme de film selon l'exemple 3 de 20 minutes. [0379] Résultats de l'étude
[0380] [Tableau 48]
[0381] Le principe actif selon l'invention sous forme de film augmente le taux d'hydratation de la peau tout au long de la journée. En effet, immédiatement après application, une augmentation significative de 45% a été observée et cet effet est visible pour 100% des sujets. Ce niveau d'hydratation est maintenu tout au long de la journée, avec une augmentation significative maintenue à 40% chez 100% des sujets après 3h et à 34% 6 heures après l'application chez 94% des sujets.
[0382] Le principe actif selon l'invention sous forme de film, diminue le sébum de la peau tout au long de la journée. En effet, immédiatement après application, une diminution significative de 51% du taux de sébum a été observée chez 100% des sujets. Cette variation est maintenu tout au long de la journée, avec une diminution significative maintenue à 20% chez 88% des sujets après 3h et à 15% chez 76% des sujets.
[0383] Ainsi, après une unique application de 20 minutes, le principe actif selon l'invention sous forme de film améliore significativement l'hydratation cutanée, tout en diminuant le taux de sébum de la peau. L'ensemble de ces effets est maintenue tout au long de la journée. [0384] D. Effet à long terme du principe actif selon l'invention.
[0385] Lors de cette étude, l'effet in vivo du principe actif selon l'invention sous forme de film a été évalué après une cure de 6 applications de 20 minutes sur une période de 14 jours et 12 applications de 20 minutes sur une période de 28 jours. Cette étude a été réalisée sur 18 sujets caucasiens, sains, de sexe féminin et âgés de 33 ± 8 ans. Les inventeurs ont étudié l'effet hydratant par mesures du taux d'hydratation de la peau à l'aide d'un Cornéomètre® CM 820 (Courage et Khazaka) et l'effet sur le taux de sébum à l'aide d'un sébumètre® (Courage et Khazaka).
[0386] Résultats de l'étude [0387] [Tableau 49]
[0388] Utilisée en cure, le principe actif selon l'invention sous forme de film augmente significativement l'hydratation de la peau de 37% chez 72% des sujets après 6 applications et de 40% chez 83% des sujets après 12 applications. [0389] Utilisée en cure, le principe actif selon l'invention sous forme de film diminue significativement le taux de sébum de 22% chez 83% des sujets après 6 applications et de 24% chez 83% des sujets après 12 applications.

Claims

Revendications
[Revendication 1] Principe actif cosmétique ou dermatologique comprenant au moins un hydrolysat d'écorce de fruits immatures de Punica granatum.
[Revendication 2] Principe actif selon la revendication 1, caractérisé en ce que les fruits immatures de Punica granatum ont un diamètre inférieur à 10 cm.
[Revendication B] Principe actif selon l'une des précédentes revendications, caractérisé en ce que les fruits immatures de Punica granatum ont un diamètre inférieur à 8 cm.
[Revendication 4] Principe actif selon l'une des précédentes revendications, caractérisé en ce que les fruits immatures de Punica granatum sont de couleur verte.
[Revendication 5] Principe actif selon l'une des précédentes revendications, caractérisé en ce que l'hydrolysat comprend des polyphénols, des sucres, des minéraux et des protéines.
[Revendication 6] Principe actif selon l'une des précédentes revendications, caractérisé en ce que l'hydrolysat comprend au moins 35% de polyphénols en poids par rapport au poids de matières sèches de l'hydrolysat.
[Revendication 7] Principe actif selon l'une des précédentes revendications, caractérisé que l'hydrolysat comprend au moins 25% de sucres en poids par rapport au poids de matières sèches de l'hydrolysat.
[Revendication 8] Principe actif selon l'une des précédentes revendications, caractérisé en ce qu'il se présente sous forme liquide ou sous forme de poudre ou sous forme de film.
[Revendication 9] Principe actif selon l'une des précédentes revendications, caractérisé en ce que les polyphénols présents dans l'hydrolysat sont au moins pour partie des Ellagitanins.
[Revendication 10] Principe actif selon la précédente revendication, caractérisé en ce que les Ellagitanins représentent la totalité des polyphénols de l'hydrolysat.
[Revendication 11] Principe actif selon la revendication 9 ou 10, caractérisé en ce que les Ellagitanins présents dans l'hydrolysat sont au moins pour partie la Punicalagine et ses dérivés, la Punicaline, les dérivés d'HHDP et l'acide Ellagique.
[Revendication 12] Principe actif selon l'une des précédentes revendications caractérisé en ce que l'hydrolysat est un hydrolysat enzymatique.
[Revendication 13] Composition cosmétique ou dermatologique comprenant au moins 0,1% en poids d'un principe actif sous forme liquide ou au moins 0,05% d'un principe actif sous forme poudre selon l'une des revendications 1 à 12.
[Revendication 14] Composition cosmétique ou dermatologique selon la précédente revendication, caractérisée en ce qu'elle se présente sous forme d'un gel, d'une lotion, d'une émulsion, d'une crème ou d'une pommade.
[Revendication 15] Procédé d'obtention d'un principe actif selon l'une des revendications 1 à 12, caractérisé en ce qu'il comprend au moins une extraction aqueuse et une hydrolyse enzymatique.
[Revendication 16] Procédé d'obtention d'un principe actif selon la précédente revendication, caractérisé en ce qu'il comprend au moins les étapes suivantes : a. Solubilisation de poudre d'écorce de fruits immatures de Punica granatum dans l'eau, à raison d'au moins 50g/L, b. Hydrolyse enzymatique à l'aide d'une carbohydrase, c. Séparation des phases soluble et insoluble, d. récupération de la phase soluble et inactivation enzymatique thermique, e. purification des composés polyphénoliques.
[Revendication 17] Principe actif cosmétique ou dermatologique selon l'une des revendications 1 à 12, pour son utilisation sur la peau pour prévenir et/ou lutter contre l'acné.
[Revendication 18] Principe actif cosmétique ou dermatologique pour une utilisation selon la revendication 17, pour prévenir et/ou lutter contre un excès de sécrétion de sébum.
[Revendication 19] Principe actif cosmétique ou dermatologique pour une utilisation selon la revendication 17 ou 18, pour prévenir et/ou lutter contre les modifications quantitatives et qualitatives du sébum.
[Revendication 20] Principe actif cosmétique ou dermatologique pour une utilisation selon l'une des revendications 17 à 19, pour prévenir et/ou lutter contre une hyperkératinisation de la peau.
[Revendication 21] Principe actif cosmétique ou dermatologique pour une utilisation selon l'une des revendications 17 à 20, pour prévenir ou lutter contre une inflammation des cellules de la peau et/ou des sébocytes.
[Revendication 22] Principe actif cosmétique ou dermatologique pour une utilisation selon l'une des revendications 17 à 21, pour un effet anti-bactérien.
[Revendication 23] Principe actif cosmétique ou dermatologique pour une utilisation selon l'une des revendications 17 à 22, pour prévenir ou lutter contre le quorum sensing et la formation d'un biofilm de Cutibacterium acnés.
[Revendication 24] Principe actif cosmétique ou dermatologique pour une utilisation selon l'une des revendications 17 à 23, pour : réduire les lésions acnéiques rétentionnelles et inflammatoires, et/ou réduire les lésions acnéiques non-inflammatoires, et/ou atténuer l'aspect gras de la peau, et/ou atténuer l'aspect brillant de la peau, et/ou - diminuer les marques sur la peau liées aux boutons d'acné, et/ou rendre les pores moins visibles, et/ou affiner le grain de peau.
[Revendication 25] Principe actif cosmétique ou dermatologique pour une utilisation selon l'une des revendications 17 à 24, caractérisé en ce que l'utilisation est réalisée au sein d'une composition selon l'une des revendications 13 ou 14.
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