EP4638689A1 - Dispositif clos de culture et de transport de produit de therapie cellulaire - Google Patents

Dispositif clos de culture et de transport de produit de therapie cellulaire

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Publication number
EP4638689A1
EP4638689A1 EP23824946.0A EP23824946A EP4638689A1 EP 4638689 A1 EP4638689 A1 EP 4638689A1 EP 23824946 A EP23824946 A EP 23824946A EP 4638689 A1 EP4638689 A1 EP 4638689A1
Authority
EP
European Patent Office
Prior art keywords
peripheral walls
culture
cutting
cutting tool
cultivation device
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
EP23824946.0A
Other languages
German (de)
English (en)
Inventor
Gilles LEMAÎTRE
Christine Baldeschi
Sophie Domingues
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Universite D'evry Val D' Essonne
Institut National de la Sante et de la Recherche Medicale INSERM
Centre d'Etude des Cellules Souches CECS
Original Assignee
Universite D'evry Val D' Essonne
Institut National de la Sante et de la Recherche Medicale INSERM
Centre d'Etude des Cellules Souches CECS
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Universite D'evry Val D' Essonne, Institut National de la Sante et de la Recherche Medicale INSERM, Centre d'Etude des Cellules Souches CECS filed Critical Universite D'evry Val D' Essonne
Publication of EP4638689A1 publication Critical patent/EP4638689A1/fr
Pending legal-status Critical Current

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Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12M—APPARATUS FOR ENZYMOLOGY OR MICROBIOLOGY; APPARATUS FOR CULTURING MICROORGANISMS FOR PRODUCING BIOMASS, FOR GROWING CELLS OR FOR OBTAINING FERMENTATION OR METABOLIC PRODUCTS, i.e. BIOREACTORS OR FERMENTERS
    • C12M23/00—Constructional details, e.g. recesses, hinges
    • C12M23/38—Caps; Covers; Plugs; Pouring means
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12M—APPARATUS FOR ENZYMOLOGY OR MICROBIOLOGY; APPARATUS FOR CULTURING MICROORGANISMS FOR PRODUCING BIOMASS, FOR GROWING CELLS OR FOR OBTAINING FERMENTATION OR METABOLIC PRODUCTS, i.e. BIOREACTORS OR FERMENTERS
    • C12M21/00—Bioreactors or fermenters specially adapted for specific uses
    • C12M21/08—Bioreactors or fermenters specially adapted for specific uses for producing artificial tissue or for ex-vivo cultivation of tissue
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12M—APPARATUS FOR ENZYMOLOGY OR MICROBIOLOGY; APPARATUS FOR CULTURING MICROORGANISMS FOR PRODUCING BIOMASS, FOR GROWING CELLS OR FOR OBTAINING FERMENTATION OR METABOLIC PRODUCTS, i.e. BIOREACTORS OR FERMENTERS
    • C12M23/00—Constructional details, e.g. recesses, hinges
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12M—APPARATUS FOR ENZYMOLOGY OR MICROBIOLOGY; APPARATUS FOR CULTURING MICROORGANISMS FOR PRODUCING BIOMASS, FOR GROWING CELLS OR FOR OBTAINING FERMENTATION OR METABOLIC PRODUCTS, i.e. BIOREACTORS OR FERMENTERS
    • C12M23/00—Constructional details, e.g. recesses, hinges
    • C12M23/52—Mobile; Means for transporting the apparatus
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12M—APPARATUS FOR ENZYMOLOGY OR MICROBIOLOGY; APPARATUS FOR CULTURING MICROORGANISMS FOR PRODUCING BIOMASS, FOR GROWING CELLS OR FOR OBTAINING FERMENTATION OR METABOLIC PRODUCTS, i.e. BIOREACTORS OR FERMENTERS
    • C12M45/00—Means for pre-treatment of biological substances
    • C12M45/22—Means for packing or storing viable microorganisms
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12M—APPARATUS FOR ENZYMOLOGY OR MICROBIOLOGY; APPARATUS FOR CULTURING MICROORGANISMS FOR PRODUCING BIOMASS, FOR GROWING CELLS OR FOR OBTAINING FERMENTATION OR METABOLIC PRODUCTS, i.e. BIOREACTORS OR FERMENTERS
    • C12M47/00—Means for after-treatment of the produced biomass or of the fermentation or metabolic products, e.g. storage of biomass

Definitions

  • tissue culture is carried out in vitro and consists of the growth of tissues or cells in a sterile artificial medium.
  • Tissue culture generally involves a nutrient culture medium, in liquid, semi-solid or solid form.
  • the invention will find a preferential application in the culture of cell therapy products of the skin substitute type, such as the epidermis, composed of human pluripotent stem cells, more precisely based on keratinocytes, for example keratinocytes derived from pluripotent stem cells. or based on melanocytes, or fibroblasts, or even endothelial cells.
  • the invention further aims at a therapeutic application by grafting animal but preferably human skin, for example in the treatment of skin ulceration.
  • the invention relates to a device for culturing and transporting a cell therapy product, hereinafter referred to as a “culture device”.
  • cell culture involves a container, with a bottom and peripheral walls, forming an internal volume with an opening in the upper part, closed by a lid.
  • This internal volume makes it possible to receive the culture medium by depositing it through the opening, then the cells to be cultivated.
  • a container is generally in the form of a Petri dish, cylindrical in shape, or more rarely in a rectangular parallelepiped shape.
  • a disadvantage of a Petri dish lies in the closure of its lid, without sealing, which allows the gas exchanges necessary for the good culture of the cells, but does not in any way ensure maintenance in a sterile atmosphere.
  • An alternative solution lies in a container in the form of a culture flask.
  • a container in the form of a culture flask.
  • a bottle generally has the shape of a flask, with an upper opening hermetically closed by a lid.
  • This flask also includes on a side wall a neck inclined upwards, with a neck provided with a cap, which can be screwed from a hermetic closing position to a ventilation position, and vice versa.
  • a cap can also provide a filter membrane, generally hydrophobic, protecting the interior of the bottle from contaminants present in the external atmosphere.
  • said cover can be replaced by a peelable film, closing the opening hermetically.
  • a peelable film is applied by sealing, in particular heat sealing, in contact with the edges or edges of the peripheral walls around said opening.
  • these containers are made of plastic material, whose These characteristics allow sterilization, but also the good development of the cells to be cultivated within such containers.
  • the invention aims to overcome the drawbacks of the state of the art by proposing a closed device for culturing and transporting cell therapy products.
  • a closed device for culturing and transporting cell therapy products.
  • Such a culture device has characteristics and different elements allowing internally to ensure the development of the cell culture in a protected medium, closed hermetically by a lid or covered hermetically by a peelable film, while allowing the introduction and extraction of different solutions required for said culture, in a controlled manner and without risk of contamination.
  • the cultivation device allows easy transport of cultures, without restrictive precautions.
  • the cultivation device includes
  • peripheral walls comprises at least two through channels opening into said internal volume.
  • such a cultivation device may include
  • said primary and secondary channels are equipped with plugs dedicated to: i) filtration allowing gas exchange; j) an entry authorizing the introduction of a culture medium; jj) an entry authorizing the introduction of a hydrogel matrix of exclusively biological origin; jjj) an entry authorizing the introduction of cells; k) an outlet allowing the evacuation of said culture medium.
  • said device comprises
  • the cutting tool being provided on the lower face with at least one cutting module with beveled lower edges forming cutting blades.
  • said device comprises a pusher, attached to the upper face of said cutting tool.
  • said at least one cutting module has a generally rectangular parallelepiped shape, with a truncated corner.
  • said cutting tool comprises six cutting modules distributed in two rows and three columns.
  • said closing means is hermetic and comprises a cover, provided with lateral tabs for fixing by snap-fastening with said peripheral walls.
  • the invention also relates to a cell therapy product culture and transport kit comprising
  • said shovel comprising a handle connected to a flat end, provided with
  • said flat end of said shovel comprises a rough surface.
  • FIG. 1 schematically represents a perspective view of an embodiment of a culture kit, showing in particular said culture device with a pusher and two formats of cutting tools, as well as the cover and the sampling member under shovel shape;
  • FIG. 2 schematically represents a perspective view of an embodiment of said culture device, closed by its cover and with five primary and secondary channels connected to different plugs;
  • FIG. 3 schematically represents a view similar to Figure 2, showing the culture device closed hermetically by a sealed film;
  • FIG. 4 schematically represents a perspective view of several stacked cultivation devices
  • FIG. 5 schematically represents a perspective view from below of a format of the cutting tool with six cutting modules, showing in particular the beveled edges of each of said six cutting modules;
  • FIG. 6 schematically represents a perspective view of one embodiment of the pusher, showing in particular an impact face provided with six cylindrical lugs;
  • FIG. 7 schematically represents a view similar to Figure 6, with said cultivation device, within the housing of which a cutting tool with six cutting modules is introduced.
  • the present invention enters the medical field of tissue culture and relates to a device 1 for culturing and transporting cell therapy products, hereinafter referred to as “device”.
  • Such a device 1 is intended to be closed, namely that it has an internal volume accessible during certain operations, such as taking a cultured sample, but which can be closed, in order to define a closed environment, separated from the atmosphere exterior.
  • the device 1 comprises a container 2 with a bottom 20 surmounted by peripheral walls 21, delimiting an internal volume with an opening 22 in the upper part.
  • Such a container 2 can have any shape, preferably rectangular parallelepiped, in particular with rounded corners.
  • the container 2 has a generally flat bottom 20, in order to allow the development of tissue culture.
  • said peripheral walls 21 are shaped in an inverted U with a hollow.
  • said peripheral walls 21 of a first device 1 have an internal space, open below, authorizing the introduction and nesting of an upper part of the peripheral walls 21 of another device 1 thus nested.
  • said walls 21 comprise an upper edge forming an overhang 210 parallel or substantially parallel to said bottom 20.
  • the upper edge of the peripheral walls 21 is planar.
  • said peripheral walls 21 comprise an offset 21 1 shaped complementary to said hollow, forming a lug for stacking several cultivation devices 1.
  • said offset 21 1 is positioned set back relative to the external face of the peripheral walls 21, with part of the overhang 210 forming a bearing surface of the lower edge of the peripheral walls 21 of a superimposed device 1.
  • peripheral walls 21 can be projecting relative to the bottom 20, protruding lower, which allows several devices 1 to be fitted in superposition, the container 2 of which is closed, in particular by a cover 30.
  • Such an offset 21 1 extends over all or part of the upper edge of the peripheral walls 21, preferably at least along two adjacent walls 21.
  • Said offset 21 1 can be continuous or interrupted, preferably continuous at the levels of at least two corners of said device 1.
  • said offset 21 1 extends along two adjacent peripheral walls 21 continuously, as well as over part of the length of the two other walls 21, with corners rounded.
  • the offset 21 1 can serve as a key, with a view to vertical alignment in the same orientation of at least two devices 1 thus nested.
  • Figure 4 shows three devices 1 superimposed and oriented in the same direction, in particular three stacked vacuum containers 2.
  • the device 1 is designed to be closable and for this purpose comprises a closing means 3, attached as a removable attachment covering said opening 22.
  • said closing means 3 is provided hermetically and comprises a cover 30, provided with lateral tabs 31 for fixing by snap-fastening with said peripheral walls 21.
  • the peripheral walls 21 can comprise any type of complementary member, shaped to cooperate by snap-fastening with said tongues 31. Therefore, in the latching position of the side tabs 31, the cover 30 ensures complete sealing covering the opening 22, to air as well as to any fluid.
  • the lower face of said cover 30 may include seals ensuring sealing in contact with the surface of the walls of the container 2 and by compression upon snapping. As visible in Figure 2, the latching of the tongues 31 can be carried out at the levels of the outer edges of the peripheral walls 21.
  • the cover 30 comprises two tongues 31, provided at the level of two contiguous edges of said cover 30.
  • the cover 30 is then positioned at the level of the diametrically opposite corner in interlocking internally relative to the offset 21 1 made projecting relative to the upper edges of said peripheral walls 21.
  • the cover 30 then, on the one hand, fits against said offset 21 1 at the levels of two edges and, on the other hand, clips by means of its tabs 31 cooperating by snapping with the two opposite edges, ensuring its positioning and maintaining said opening 22 closed.
  • said cover 30 may comprise on the lower face means ensuring sealing in the closed position, such as seals provided around the periphery of said lower face of said cover 30.
  • said closing means 3 comprises a peelable cover 32 attached in hermetic attachment by heat sealing to the upper edge of said peripheral walls 21.
  • a cover 32 must ensure a seal against contaminants and fluids, coming from the outside as well as the inside, while allowing the gas exchanges necessary for the proper development of the culture.
  • the heat sealing of said cover 32 is carried out on the overhang 21 1 provided on the upper edge of the peripheral walls 21.
  • said cover 32 can be made of any type of material, preferably a composite or plastic material, such as a plastic from the polyethylene family.
  • This material can be transparent or translucent, allowing light to pass through and making it possible to look inside the volume of the device 1, for example to control the development of tissue culture.
  • Such a material can also include a filtering coating, limiting or blocking certain wavelengths of light radiation, such as for example certain ultraviolet rays, which are harmful to the development of certain cells.
  • Figure 3 shows an example of a cover 32 in the form of a transparent plastic film, attached by heat sealing to said overhang 21 1.
  • This embodiment shows in particular a part of the overhang 210 provided internally with respect to said offset 21 1, forming a flat surface around the internal volume of the container 2.
  • the cover 30 can be fixed over the cover 32.
  • the invention allows the introduction and extraction of different solutions required for said culture, in a controlled manner and without risk of contamination, in particular by keeping the internal volume hermetically closed.
  • the device 1 provides at least one of the peripheral walls 21 comprising at least two through channels 4 opening into said internal volume.
  • Said at least two channels 4 can be located at the same peripheral wall 21, or at the level of two different peripheral walls 21, preferably adjacent.
  • Each channel 4 comprises a portion projecting externally relative to the corresponding peripheral wall 21.
  • Each of said primary channels 40,41 and secondary channels 42,43,44 are then dedicated to the introduction or extraction of a solution, as well as to gas exchanges.
  • said primary channels 40,41 and said secondary channels 42,43,44 are equipped with plugs 400.
  • Such plugs 400 are attached in removable attachment, in particular by fitting with said projecting portion of said channels 4 then forming an end piece.
  • a tip is preferably of the “LUER” or “LUER LOCK” type, international standard in the medical field, corresponding to a conicity of 6%, possibly with a tensile-resistant notch, as well as a screwing system provided on said plugs, allowing connection with another medical device or organ.
  • said plugs 400 dedicated to: i) filtration allowing gas exchanges; j) an entry authorizing the introduction of a culture medium; jj) an entry authorizing the introduction of a hydrogel matrix of exclusively biological origin; jjj) an entry authorizing the introduction of cells; k) an outlet allowing the evacuation of said culture medium.
  • a device 1 equipped with five plugs 400 is visible in Figure 2.
  • said channels 4 can be connected to an automated or semi-automated cultivation system.
  • Said plugs 400 can therefore include connections for tubes or tubings, or even septums provided with a self-sealing membrane, generally made of silicone material (the material and the thickness of this membrane allowing it to be pierced by a needle, and above all to maintain its airtight nature once the needle is removed).
  • the filtration authorizing exchanges can be equipped with a plug 400 provided with an elbow on which a filter is mounted, in particular at 0.22 pm, filtering particles and fluids, but authorizing gas exchanges with the atmosphere;
  • the inlet of the culture medium can be equipped with a cap 400 provided with a safety non-return valve, to prevent the medium from exiting to the outside once introduced through this channel 41, particularly during transport and manipulations;
  • the entrance to the matrix, such as the hydrogel) is used only once and includes a cap 400 which is intended to be sealed;
  • the entrance to the cells, during seeding, is only used once and includes a plug 400 which is intended to be sealed;
  • the outlet of the “consumed” medium includes a plug 400 equipped with a safety non-return valve, to prevent the medium from returning inwards during its extraction.
  • the matrix is injected using a syringe, in particular of the standardized “LUER LOCK” type in secondary channel 42.
  • the air inside is purged by lightly pressing on the film 32, before closing said secondary channel 42 with a stopper 400.
  • the matrix is treated for a period of two hours (2 hours) at a temperature of 37.5°C (degrees Celsius), particularly within an incubator.
  • Several devices 1 can then be covered by their lid 31 and stacked, with a view to simultaneous incubation. This incubation allows in particular coagulation and adhesion on the bottom 20 of container 2.
  • a cell suspension is injected using a “LUER LOCK” type syringe through secondary channel 43.
  • the air is purged by lightly pressing on the film 32, before closing said channel 43 with a cap 400.
  • the device 1 containing the matrix and the cell suspension is then treated for 24 hours at a temperature of 37.5°C, in particular within an incubator), to allow the cells to adhere to the matrix.
  • the “consumed” medium contained in device 1 is evacuated using a “LUER LOCK” type syringe via secondary outlet channel 44.
  • a fresh medium is injected using a “LUER LOCK” type syringe via primary inlet channel 41.
  • the device 1 is returned to a temperature of 37.5°C, in particular within an incubator, until the next change of medium.
  • the “consumed” medium contained in the device 1 is evacuated using a “LUER LOCK” type syringe via the secondary outlet channel 44.
  • the fresh medium is injected using a “LUER LOCK” type syringe via the primary inlet channel 41.
  • the filter is removed and channel 40 is sealed with a suitable plug 400, like channel 41.
  • the cover 31 is then clipped to the device 1, hermetically closing the whole, protecting the cover 32: the device 1 is then ready to be transported.
  • the device 1 comprises a cutting tool 5 sized and shaped for its insertion within said internal volume until it comes into contact with said bottom 20.
  • the tool 5 has smaller dimensions , in length and width, in relation to the internal dimensions of the container 2, to allow its insertion and extraction inside said internal volume, until it comes into insertion against the surface of said bottom 20.
  • the cutting tool 5 is provided on the lower face with at least one cutting module 50 with beveled lower edges 51 forming cutting blades.
  • said cutting tool 5 comprises six cutting modules 50 distributed in two rows and three columns.
  • tissue culture into several portions or “grafts”, in particular into as many grafts as modules 50.
  • each cutting module 50 forms an inclination with the corresponding vertical wall.
  • the inclination of this bevel can be oriented inwards or outwards.
  • each edge 51 is minimal, forming a blade wire capable of penetrating and cutting through the tissue culture.
  • the device 1 comprises a pusher 6, attached to the upper face of said cutting tool 5.
  • a pusher 6 serves as a surface to ensure, on the one hand, the gripping of said cutting tool 5 during its insertion and of its extraction within the container 2 and, on the other hand, of support surface in a downward vertical direction in order to apply sufficient pressure to ensure the cutting of the tissue culture.
  • the cutting can be carried out step by step, by hammering the upper face of said pusher 6, for example by means of a surgical mallet.
  • said pusher 6 comprises on the upper face a knocker, in the form of at least one impact contact face provided with solid lugs 61.
  • said lugs 61 have a cylindrical shape.
  • the knocker may comprise one or more lugs 61, preferably six lugs 61 distributed in two rows and three columns, corresponding to the embodiment with six cutting modules 50. The latter then find themselves in vertical alignment with said six lugs 61 when said knocker is associated with said cutting tool 5, improving the pressure applied for cutting each of said modules 50.
  • said pusher 6 can be removably attached to the cutting tool 5, in particular by complementary nesting.
  • the pusher 6 has a shoe 60, projecting on the lower face and dimensioned complementary, to the nearest clearance, to be introduced by sliding nesting within a recess 52 with which the cutting tool 5 on the upper face.
  • said shoe 60 is provided with latching means by clipping with said cavity 52, ensuring the locking of these two elements together.
  • the pusher 6 mounted with the cutting tool 5 forms two integral elements, the lugs 6 of which ensure in particular resistance to impacts during hammering, as well as the integral transmission of the force thus applied, with a view to ensure the cutting of the culture by the modules 50.
  • the lugs 61 can be consolidated by connections 62, improving the rigidity of said pusher 6.
  • similar reinforcements can be provided on the internal face of said pusher 6.
  • lugs 61 and the connections 62 can be made integrally during the molding of the plastic part of said pusher 6.
  • the device 1 is made of plastic material.
  • the different elements of said devices are made of plastic material, namely the container 2, the cover 30, or the cutting tool 5, or the pusher 6.
  • the device 1 is made of polypropylene (PP), in particular “HP671T” polypropylene.
  • said cutting tool 5 and/or the pusher 6 are made of composite or plastic material, ensuring increased resistance to shocks and providing a sufficiently strong and sharp blade wire to each cutting module 50.
  • all or part of the device 1 is made of PP having undergone a plasma type treatment.
  • a plasma treatment makes it possible to modify the Arithmetic Average Roughness (Ra) of the surface of the device 1, in particular of the internal walls and especially of the bottom 20 of the container 2, increasing its hydrophilic properties, without generating particles or releasable substances.
  • a plasma-treated PP plastic thus offers a suitable surface for coagulation and fibrin adhesion.
  • the PP plastic material maintains the characteristics of the device 1 during sterilization, in particular during sterilization by irradiation.
  • the PP plastic material also allows the sealing of the cover 32.
  • the PP plastic material provides impact resistance when cutting.
  • the invention also relates to a kit 7 for culture and transport of cell therapy product, comprising a culture device 1 according to the invention, as previously described.
  • kit 7 An example of kit 7, with device 1 and its different parts, is notably visible in Figure 1.
  • such a kit 7 comprises a sampling member 8 shaped in the form of a shovel, dimensioned complementary to said cutting tool 5.
  • said shovel comprises a handle 80 connected to a flat end 81.
  • said flat end 81 has dimensions substantially equal to those of a module 50 of the cutting tool 5, preferably slightly larger dimensions, in order to ensure the removal of a graft previously cut, with sufficient clearance .
  • said handle 80 is ribbed, improving grip and preventing it from slipping in the hands.
  • said flat end 81 of the shovel comprises a rough surface, improving the adhesion of the graft taken and preventing it from slipping when it is taken.
  • said flat end 81 comprises an inclined distal end, making it possible to scrape the bottom 20 and recover a graft.
  • the flat end 81 also includes two raised longitudinal edges, preventing the removed graft from sliding laterally during removal or movement of said shovel.
  • An example of such a sampling member 8 in the form of a shovel is particularly visible in Figure 1.
  • said sampling member is made entirely of plastic material, preferably polypropylene (PP).
  • the device 1 has dimensions allowing the cultivation and transport of a tissue culture with a surface area of approximately 60 square centimeters (cm 2 ), which can be divided when cutting into pieces. grafts of approximately 10 cm 2 , directly within the device 1 without extracting said culture.

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Abstract

La présente invention concerne un dispositif (1) clos de culture et de transport de produit de thérapie cellulaire, comprenant un contenant (2) avec un fond (20) surmonté de parois (21) périphériques, délimitant un volume interne avec une ouverture (22) en partie supérieure; un moyen (3) de fermeture, rapporté en fixation amovible en recouvrement de ladite ouverture (22); caractérisé en ce que au moins une des parois (21) périphériques comprend au moins deux canaux (4) traversant débouchant au sein dudit volume interne. L'invention concerne aussi un kit (7) équipé d'un tel dispositif (1) de culture et d'un organe (8) de prélèvement.

Description

DISPOSITIF CLOS DE CULTURE ET DE TRANSPORT DE PRODUIT DE THERAPIE CELLULAIRE
DOMAINE TECHNIQUE DE L’INVENTION
La présente invention entre dans le domaine médical de la culture tissulaire. Rappelons que la culture tissulaire est réalisée in vitro et consiste en la croissance de tissus ou cellules dans un milieu artificiel stérile. La culture tissulaire fait généralement intervenir un milieu nutritif de culture, sous forme liquide, semi-solide ou solide.
L'invention trouvera une application préférentielle dans la culture de produit de thérapie cellulaire de type substitut de peau, comme l'épiderme, composé de cellules souches pluripotentes humaines, plus précisément à base de de kératinocytes, par exemple de kératinocytes dérivés de cellules souches pluripotentes ou bien à base de mélanocytes, ou de fibroblastes, ou encore de cellules endothéliales. L'invention vise en outre une application thérapeutique par greffe de peau animale mais préférentiellement humaine, par exemple dans le traitement de l'ulcération cutanée.
A cet effet, l'invention porte sur un dispositif de culture et de transport de produit de thérapie cellulaire, ci-après désigné « dispositif de culture ».
ETAT DE LA TECHNIQUE
Actuellement, la culture cellulaire fait intervenir un contenant, avec un fond et des parois périphériques, formant un volume interne avec une ouverture en partie supérieure, refermée par un couvercle. Ce volume interne permet de recevoir le milieu de culture par dépose au travers de l'ouverture, puis des cellules à cultiver. Un tel contenant se présente généralement sous la forme d'une boîte de Pétri, de forme cylindrique, ou plus rarement de forme parallélépipédique rectangle. Un inconvénient d'une boîte de Pétri réside dans la fermeture de son couvercle, sans étanchéité, ce qui permet les échanges gazeux nécessaire à la bonne culture des cellules, mais n'assure aucunement le maintien sous atmosphère stérile.
Une solution alternative réside dans un contenant sous forme de flacon de culture. Un tel flacon présente généralement une forme de flasque, avec une ouverture supérieure refermée par un couvercle de façon hermétique. Cette flasque comprend aussi sur une paroi latérale un col incliné vers le haut, avec un goulot pourvu d'un bouchon, qui peut être vissé depuis une position de fermeture hermétique vers une position d'aération, et inversement. Un tel bouchon peut aussi prévoir une membrane filtrante, généralement hydrophobe, préservant l'intérieur du flacon de contaminants présents dans l'atmosphère extérieure.
Plus rarement, ledit couvercle peut être remplacé par un film pelable, refermant l'ouverture de façon hermétique. Un tel film est appliqué par scellage, notamment thermo-scellage, au contact des chants ou des bords des parois périphériques autour de ladite ouverture.
Plus avant, ces contenants sont réalisés en matériau plastique, dont les caractéristiques permettent la stérilisation, mais aussi le bon développement des cellules à cultiver au sein de tels contenants.
Ces différents contenants connus présentent de multiples inconvénients, en raison de leurs formats et leurs dimensions, de leurs fermetures hermétiques ou non, rendant soit difficile ou sous une surveillance méticuleuse, soit impossible leur transport. De fait, les contenants non hermétiques nécessitent leur maintien sous une atmosphère contrôlée.
En outre, ils imposent un transport avec d'extrêmes précautions, les rendant peu pratique.
Ces contenants imposent aussi des restrictions pour introduire plusieurs solutions l'une après l'autre, sans contamination.
EXPOSE DE L’INVENTION
L'invention a pour but de pallier les inconvénients de l’état de la technique en proposant un dispositif clos de culture et de transport de produit de thérapie cellulaire. Un tel dispositif de culture présente des caractéristiques et différents éléments permettant intérieurement d'assurer le développement de la culture cellulaire dans un milieu protégé, refermé hermétiquement par un couvercle ou recouvert hermétiquement par un film pelable, tout en autorisant l'introduction et l'extraction de différentes solutions requises à ladite culture, de façon contrôlée et sans risque de contamination.
En outre, le dispositif de culture permet le transport aisé des cultures, sans précaution contraignante.
Pour ce faire, le dispositif de culture comprend
- un contenant avec un fond surmonté de parois périphériques, délimitant un volume interne avec une ouverture en partie supérieure ;
- un moyen de fermeture, rapporté en fixation amovible en recouvrement de ladite ouverture ; caractérisé en ce que
- au moins une des parois périphériques comprend au moins deux canaux traversants débouchant au sein dudit volume interne.
Selon des caractéristiques additionnelles, non limitatives, un tel dispositif de culture peut comprendre
- deux canaux primaires, ménagés au travers d'une première des parois périphériques ;
- trois canaux secondaires, ménagés au travers d'une seconde des parois périphériques.
Selon un mode de réalisation, lesdits canaux primaires et secondaires sont équipés de bouchons dédiés à : i) une filtration autorisant les échanges gazeux ; j) une entrée autorisant l'introduction d'un milieu de culture ; jj) une entrée autorisant l'introduction d'une matrice d'hydrogel d'origine exclusivement biologique ; jjj) une entrée autorisant l'introduction de cellules ; k) une sortie autorisant l'évacuation dudit milieu de culture.
Selon un mode de réalisation, ledit dispositif comprend
- un outil de découpe dimensionné et conformé pour son insertion au sein dudit volume interne jusqu'à venir au contact dudit fond ;
- l'outil de découpe étant pourvu à la face inférieure d'au moins un module de découpe avec des chants inférieurs biseautés formant des lames de découpe.
Selon un mode de réalisation, ledit dispositif comprend un poussoir, rapporté en fixation en face supérieure dudit outil de découpe.
Selon un mode de réalisation, ledit au moins un module de découpe présente une forme globalement parallélépipédique rectangle, avec un coin tronqué.
Selon un mode de réalisation, ledit outil de découpe comprend six modules de découpe répartis selon deux rangées et trois colonnes.
Selon un mode de réalisation, ledit moyen de fermeture est hermétique et comprend un couvercle, pourvu de languettes latérales de fixation par encliquetage avec lesdites parois périphériques.
Selon un mode de réalisation, ledit moyen de fermeture comprend un opercule pelable rapporté en fixation hermétique par thermo-scellage sur le chant supérieur desdites parois périphériques.
L'invention concerne encore un kit de culture et de transport de produit de thérapie cellulaire comprenant
- un dispositif de culture selon l'invention, caractérisé en ce qu'il comprend
- un organe de prélèvement conformé sous forme de pelle, dimensionnée complémentairement audit outil de découpe,
- ladite pelle comprenant un manche relié à une extrémité plane, pourvue d'
- ladite extrémité plane de ladite pelle comprend une surface rugueuse.
PRESENTATION DES DESSINS
D'autres caractéristiques et avantages de l'invention ressortiront de la description détaillée qui va suivre des modes de réalisation non limitatifs de l'invention, en référence aux figures annexées, dans lesquelles :
[Fig. 1 ] représente schématiquement une vue en perspective d'un mode de réalisation d'un kit de culture, montrant notamment ledit dispositif de culture avec un poussoir et deux formats d'outils de découpe, ainsi que le couvercle et l'organe de prélèvement sous forme de pelle ; [Fig. 2] représente schématiquement une vue en perspective d'un mode de réalisation dudit dispositif de culture, refermé par son couvercle et avec cinq canaux primaires et secondaires connectés à différents bouchons ;
[Fig. 3] représente schématiquement une vue similaire à la figure 2, montrant le dispositif de culture refermé hermétiquement par un film operculé ;
[Fig. 4] représente schématiquement une vue en perspective de plusieurs dispositifs de culture gerbés ;
[Fig. 5] représente schématiquement une vue en perspective du dessous d'un format de l'outil de découpe à six modules de découpe, montrant notamment les chants biseautés de chacun desdits six modules de découpe ;
[Fig. 6] représente schématiquement une vue en perspective d'un mode de réalisation du poussoir, montrant notamment une face d'impact pourvue de six ergots cylindriques ;
[Fig. 7] représente schématiquement une vue similaire à la figure 6, avec ledit dispositif de culture, au sein du logement duquel est introduit un outil de découpe avec six modules de découpe.
DESCRIPTION DETAILLEE
La présente invention entre dans le domaine médical de la culture tissulaire et concerne un dispositif 1 de culture et de transport de produit de thérapie cellulaire, ci- après dénommé « dispositif ».
Un tel dispositif 1 est prévu clos, à savoir qu'il présente un volume interne accessible lors de certaines opérations, comme le prélèvement d'un échantillon cultivé, mais qui peut être refermé, afin de définir un environnement clos, séparé de l'atmosphère extérieure.
Plus avant, le dispositif 1 comprend un contenant 2 avec un fond 20 surmonté de parois 21 périphériques, délimitant un volume interne avec une ouverture 22 en partie supérieure.
Un tel contenant 2 peut présenter toute forme, préférentiellement parallélépipédique rectangle, notamment avec des coins arrondis.
En outre, le contenant 2 présente un fond 20 globalement plat, afin de permettre le développement de la culture tissulaire.
Selon un mode de réalisation préféré, afin de faciliter le stockage et le transport, plusieurs dispositifs 1 peuvent être gerbés.
Pour ce faire, lesdites parois 21 périphériques sont conformées en U inversé avec un creux. En d'autres termes, lesdits parois 21 périphériques d'un premier dispositif 1 présentent un espace interne, ouvert inférieurement, autorisant l'introduction et l'emboîtement d'une partie supérieure des parois 21 périphériques d'un autre dispositif 1 ainsi emboîté. En particulier, lesdites parois 21 comprennent un chant supérieur formant un débord 210 parallèle ou sensiblement parallèle audit fond 20. En somme, le chant supérieur des parois 21 périphériques est plan.
De plus, saillant par rapport audit débord 210, lesdites parois 21 périphériques comprennent un déport 21 1 conformé complémentairement audit creux, formant un ergot de gerbage de plusieurs dispositifs 1 de culture. En particulier, ledit déport 21 1 est positionné en retrait par rapport à la face externe des parois 21 périphériques, avec une partie du débord 210 formant d'une surface d'appui du chant inférieur des parois 21 périphériques d'un dispositif 1 superposé.
En outre, les parois 21 périphériques peuvent être saillantes par rapport au fond 20, dépassant inférieurement, ce qui permet d'autoriser d'emboîter en superposition plusieurs dispositif 1 dont le contenant 2 est refermé, notamment par un couvercle 30.
Un tel déport 21 1 s'étend sur toute ou partie du chant supérieure des parois 21 périphériques, préférentiellement au moins le long de deux parois 21 adjacentes.
Ledit déport 21 1 peut être continu ou interrompu, préférentiellement continu aux niveaux d'au moins deux coins dudit dispositif 1 .
Selon un mode préférentiel de réalisation, comme visible sur la figure 3, ledit déport 21 1 s'étend le long de deux parois 21 périphériques adjacentes de façon continue, ainsi que sur une partie de la longueur des deux autres parois 21 , avec des coins arrondis.
En outre, le déport 21 1 peut servir de détrompeur, en vue d'un alignement vertical selon une même orientation d'au moins deux dispositifs 1 ainsi emboîtés.
La figure 4 montre trois dispositifs 1 superposés et orientés dans le même sens, en particulier trois contenants 2 à vide gerbés.
Comme évoqué précédemment, afin de déterminer un espace interne clos propice à la culture tissulaire, le dispositif 1 est prévu refermable et comprend à cet effet un moyen 3 de fermeture, rapporté en fixation amovible en recouvrement de ladite ouverture 22.
Selon un mode de réalisation avantageux, ledit moyen 3 de fermeture est prévu hermétique et comprend un couvercle 30, pourvu de languettes 31 latérales de fixation par encliquetage avec lesdites parois 21 périphériques. A cet effet, les parois 21 périphériques peuvent comprendre tout type d'organe complémentaire, conformés pour coopérer par encliquetage avec lesdites languettes 31 . Dès lors, en position d'encliquetage des languettes 31 latérales, le couvercle 30 assure une étanchéité totale en recouvrement de l'ouverture 22, à l'air comme à tout fluide. En outre, la face inférieure dudit couvercle 30 peut comprendre des joints assurant l'étanchéité au contact de la surface des parois du contenant 2 et par compression à l'encliquetage. Comme visible sur la figure 2, l'encliquetage des languettes 31 peut s'effectuer aux niveaux des rebords extérieurs des parois 21 périphériques.
Selon un mode préférentiel de réalisation, comme visible sur les figures 1 et 2, le couvercle 30 comprend deux languettes 31 , ménagées aux niveaux de deux bords contigus dudit couvercle 30. Le couvercle 30 vient alors se positionner au niveau du coin diamétralement opposé en emboîtement intérieurement par rapport au déport 21 1 réalisé en saillie par rapport aux chants supérieurs desdites parois 21 périphériques. Le couvercle 30 vient alors, d'une part, s'emboîter contre ledit déport 21 1 aux niveaux de deux bords et, d'autre part, se clipser au moyen de ses languettes 31 coopérant par encliquetage avec les deux bords opposés, assurant son positionnement et son maintien en fermeture de ladite ouverture 22.
En outre, ledit couvercle 30 peut comprendre en face inférieure des moyens assurant l'étanchéité en position de fermeture, comme des joints ménagés sur le pourtour de ladite face inférieure dudit couvercle 30.
Selon un mode de réalisation préféré, ledit moyen 3 de fermeture comprend un opercule 32 pelable rapporté en fixation hermétique par thermo-scellage sur le chant supérieur desdites parois 21 périphériques. Un tel opercule 32 doit assurer une étanchéité aux contaminants et aux fluides, provenant de l'extérieur comme de l'intérieur, tout en permettant les échanges gazeux nécessaires au bon développement de la culture.
Selon un mode préférentiel de réalisation, le thermo-scellage dudit opercule 32 s'effectue sur le débord 21 1 ménagé sur le chant supérieur des parois 21 périphériques.
En outre, ledit opercule 32 peut être réalisé en tout type de matériau, préférentiellement en un matériau composite ou plastique, comme un plastique de la famille des polyéthylènes. Ce matériau peut être transparent ou translucide, laissant traverser la lumière et permettant de regarder à l'intérieur du volume du dispositif 1, pour contrôler par exemple le développement de la culture tissulaire. Un tel matériau peut aussi comprendre un revêtement filtrant, limitant ou bloquant certaines longueurs d'ondes du rayonnement lumineux, comme par exemple certains ultra-violets, nocifs pour le développement de certaines cellules.
La figure 3 montre un exemple d'un opercule 32 sous forme d'un film plastique transparent, rapporté en thermo-scellage sur ledit débord 21 1 . Ce mode de réalisation montre notamment une partie du débord 210 ménagé intérieurement par rapport audit déport 21 1 , formant une surface plane autour du volume interne du contenant 2.
Selon un mode de réalisation combiné, le couvercle 30 peut être rapporté en fixation par-dessus l'opercule 32. Avantageusement, l'invention permet l'introduction et l'extraction de différentes solutions requises à ladite culture, de façon contrôlée et sans risque de contamination, en particulier en conservant le volume interne fermé hermétiquement.
Pour ce faire, le dispositif 1 prévoit au moins une des parois 21 périphériques comprenant au moins deux canaux 4 traversant débouchant au sein dudit volume interne.
Lesdits au moins deux canaux 4 peuvent être situés au niveau d'une même paroi 21 périphérique, ou bien aux niveaux de deux parois 21 périphériques différentes, préférentiellement adjacentes.
Chaque canal 4 comprend une portion saillante extérieurement par rapport à la paroi 21 périphérique correspondante.
Selon un mode préférentiel de réalisation, le dispositif 1 de culture comprend deux canaux primaires 40,41 , ménagés au travers d'une première des parois 21 périphériques, ainsi que trois canaux 42,43,44 secondaires, ménagés au travers d'une seconde des parois 21 périphériques.
Chacun desdits canaux 40,41 primaires et des canaux 42,43,44 secondaires sont alors dédiés à l'introduction ou à l'extraction d'une solution, ainsi qu'à des échanges gazeux.
Selon un mode de réalisation, lesdits canaux 40,41 primaires et lesdits canaux 42,43,44 secondaires sont équipés de bouchons 400.
De tels bouchons 400 sont rapportés en fixation amovible, notamment par emboîtement avec ladite portion saillante desdits canaux 4 formant alors un embout. Un tel embout est préférentiellement de type « LUER » ou « LUER LOCK », standard international dans le domaine médical, correspondant à une conicité de 6 %, éventuellement avec un crantage résistant à la traction, ainsi qu'un système de vissage prévu sur lesdits bouchons, permettant une connexion avec un autre appareil ou organe médical.
Plus avant, lesdits bouchons 400 dédiés à : i) une filtration autorisant les échanges gazeux ; j) une entrée autorisant l'introduction d'un milieu de culture ; jj) une entrée autorisant l'introduction d'une matrice d'hydrogel d'origine exclusivement biologique ; jjj) une entrée autorisant l'introduction de cellules ; k) une sortie autorisant l'évacuation dudit milieu de culture.
Un dispositif 1 équipé de cinq bouchons 400 est visible sur la figure 2.
Selon un mode de réalisation, lesdits canaux 4 peuvent être reliés à un système de culture automatisé ou semi-automatisé. Lesdits bouchons 400 peuvent donc comprendre des raccords pour des tubes ou tubulures, voire de septum pourvu d'une membrane auto-obturante, généralement en matériau siliconé (le matériau et l'épaisseur de cette membrane lui permettant d'être transpercée par une aiguille, et surtout de conserver le caractère hermétique une fois l'aiguille retirée).
En particulier, i) la filtration autorisant les échanges peut être équipée d'un bouchon 400 pourvu d'un coude sur lequel est monté un filtre, notamment à 0,22pm, filtrant les particules et les fluides, mais autorisant les échanges gazeux avec l'atmosphère ; j) l'entrée du milieu de culture peut être équipée d'un bouchon 400 pourvu d'un clapet anti-retour de sécurité, pour éviter que le milieu ne sorte vers l’extérieur une fois introduit par ce canal 41 notamment lors du transport et des manipulations ; jj) l'entrée de la matrice, comme l'hydrogel), n’est utilisée qu’une seule fois et comprend un bouchon 400 qui est prévu pour être scellé ; jjj) l'entrée des cellules, lors de l’ensemencement, n’est utilisé qu’une seule fois et comprend un bouchon 400 qui est prévu pour être scellé ; k) la sortie du milieu « consommé » comprend un bouchon 400 équipé d'un clapet anti-retour de sécurité, pour éviter un retour du milieu vers l'intérieur lors de son extraction.
Ainsi, au cours de l'utilisation du dispositif 1 en vue de la culture tissulaire, tout d'abord, après stérilisation et fermeture du contenant 2, notamment par le film 32, la matrice est injectée à l’aide d’une seringue, notamment de type standardisé « LUER LOCK » dans le canal 42 secondaire. L’air à l'intérieur est purgé en appuyant légèrement sur le film 32, avant fermeture dudit canal 42 secondaire avec un bouchon 400. La matrice est traitée pendant une durée de deux heures (2h) à une température de 37,5°C (degrés Celsius), notamment au sein d'un incubateur. Plusieurs dispositif 1 peuvent alors être recouverts par leur couvercle 31 et gerbés, en vue d'une incubation simultanée. Cette incubation permet notamment la coagulation et l’adhésion sur le fond 20 du contenant 2.
Ensuite, une suspension cellulaire est injectée à l’aide d’une seringue, de type « LUER LOCK » par le canal 43 secondaire. L’air est purgé en appuyant légèrement sur le film 32, avant fermeture dudit canal 43 avec un bouchon 400.
Le dispositif 1 contenant la matrice et la suspension cellulaire est traité alors pendant 24 h à une température de 37,5°C, notamment au sein d'un incubateur), pour permettre l’adhésion des cellules sur la matrice.
Ensuite, périodiquement, un jour sur deux jusqu'à atteindre 7 jours, le milieu « consommé » contenu dans le dispositif 1 est évacué à l’aide d’une seringue de type « LUER LOCK » via le canal 44 secondaire de sortie. Un milieu frai est injecté à l’aide d’une seringue de type « LUER LOCK » via le canal 41 primaire d"entrée.
Le dispositif 1 est remis à une température de 37,5°C, notamment au sein d'un incubateur, jusqu’au prochain changement de milieu. Au terme, le milieu « consommé » contenu dons le dispositif 1 est évacué à l’aide d’une seringue de type « LUER LOCK » via le canal 44 secondaire de sortie. Le milieu frais est injecté à l’aide d’une seringue de type « LUER LOCK » via le canal 41 primaire d'entrée. Le filtre est retiré et le canal 40 est scellé avec un bouchon 400 adapté, comme le canal 41 .
Le couvercle 31 est alors clipsé au dispositif 1 , refermant hermétiquement l'ensemble, protégeant l’opercule 32 : le dispositif 1 est alors prêt à être transporté.
Selon un mode de réalisation, le dispositif 1 comprend un outil 5 de découpe dimensionné et conformé pour son insertion au sein dudit volume interne jusqu'à venir au contact dudit fond 20. En d'autres termes, l'outil 5 présente des dimensions inférieures, en longueur et largeur, par rapport aux dimensions internes du contenant 2, pour permettre son insertion et son extraction à l'intérieur dudit volume interne, jusqu'à venir en insertion contre la surface dudit fond 20.
De plus, l'outil 5 de découpe est pourvu en face inférieure d'au moins un module 50 de découpe avec des chants 51 inférieurs biseautés formant des lames de découpe.
Selon un mode de réalisation, comme visible sur les figures 5 et 7, ledit outil 5 de découpe comprend six modules 50 de découpe répartis selon deux rangées et trois colonnes.
Ainsi, il est possible de diviser la culture tissulaire en plusieurs portions ou « greffons », en particulier en autant de greffons que de modules 50.
On notera que le biseau des chants 51 inférieurs de chaque module 50 de découpe forme une inclinaison avec la paroi verticale correspondante. L'inclinaison de ce biseau peut être orienté vers l'intérieur ou l'extérieur.
En outre, l'épaisseur de chaque chant 51 est minime, formant un fil de lame à même de pénétrer et trancher au travers de la culture tissulaire.
Plus avant, selon un mode de réalisation, chaque module 50 de découpe présente une forme globalement parallélépipédique rectangle. Préférentiellement, chaque module 50 de découpe présente une forme parallélépipédique rectangle, avec un coin tronqué, servant à découper une encoche dans chaque greffon et déterminant une orientation visuellement reconnaissable dudit greffon, en particulier pour s'assurer que les kératinocytes se situent supérieurement lors de la manipulation dudit greffon, ou de remarquer s'il s'est retourné et de pouvoir le remettre dans le bon sens de l'outil 5 de découpe au sein du dispositif 1. En particulier, le coin tronqué d'un module 50 situé en périphérie, proche d'un angle du volume interne du contenant 2, peut alors servir de détrompeur.
Selon un mode de réalisation, le dispositif 1 comprend un poussoir 6, rapporté en fixation en face supérieure dudit outil 5 de découpe. Un tel poussoir 6 sert de surface pour assurer, d'une part, la préhension dudit outil 5 de découpe lors de son insertion et de son extraction au sein du contenant 2 et, d'autre part, de surface d'appui selon une direction verticale descendante en vue d'appliquer une pression suffisante pour assurer la découpe de la culture tissulaire.
En particulier, selon un mode de réalisation préférentielle, la découpe peut s'effectuer par à-coup, en martelant la face supérieure dudit poussoir 6, par exemple au moyen d'un maillet chirurgical.
Pour ce faire, ledit poussoir 6 comprend en face supérieure un heurtoir, sous forme d'au moins une face de contact par impact pourvue d'ergots 61 pleins.
Selon un mode de réalisation, tel que visible sur les figures 1 et 6, lesdits ergots 61 présentent une forme cylindrique.
Le heurtoir peut comprendre un ou plusieurs ergots 61 , préférentiellement six ergots 61 répartis selon deux rangées et trois colonnes, correspondant au mode de réalisation avec six modules 50 de découpe. Ces derniers se retrouvent alors en alignement vertical avec lesdits six ergots 61 lorsque ledit heurtoir est associé avec ledit outil 5 de découpe, améliorant la pression appliquée pour la découpe de chacun desdits modules 50.
A ce titre, selon un mode de réalisation, ledit poussoir 6 peut être rapporté de façon amovible sur l'outil 5 de découpe, notamment par emboîtement complémentaire.
Selon le mode de réalisation représenté sur la figure 1 , le poussoir 6 présente un sabot 60, saillant en face inférieure et dimensionné complémentairement, au jeu près, pour s'introduire par emboîtement en glissement au sein d'une empreinte 52 dont est pourvu l'outil 5 de découpe en face supérieure.
Selon un mode de réalisation préférentiel, ledit sabot 60 est pourvu de moyens d'encliquetage par clipsage avec ladite empreinte 52, assurant le verrouillage de ces deux éléments entre eux.
Ainsi, le poussoir 6 monté avec l'outil 5 de dé coupe forment deux éléments solidaires, dont les ergots 6 assurent notamment la résistance aux impacts lors d'un martèlement, tout autant que la transmission intégrale de la force ainsi appliquée, en vue d'assurer la découpe de la culture par les modules 50.
Selon un mode de réalisation, comme visible sur la figure 6, les ergots 61 peuvent être consolidés par des liaisons 62, améliorant la rigidité dudit poussoir 6. En outre, des renforts similaires peuvent être prévus en face interne dudit poussoir 6.
On notera que les ergots 61 et les liaisons 62 peuvent être réalisées de façon intégrale lors du moulage de la pièce plastique dudit poussoir 6.
Selon un mode de réalisation avantageux, le dispositif 1 est fabriqué en matériau plastique. En d'autres termes, les différents éléments dudit dispositifs sont fabriqués en matériau plastique, à savoir le contenant 2, le couvercle 30, ou encore l'outil 5 de découpe, ou le poussoir 6. Préférentiellement, le dispositif 1 est en polypropylène (PP), notamment du polypropylène « HP671T ».
Selon un mode de réalisation, ledit outil 5 de découpe et/ou le poussoir 6 sont en matériau composite ou plastique, assurant une résistance accrue aux chocs et offrant un fil de lame suffisamment résistant et tranchant à chaque module 50 de découpe.
Selon un mode de réalisation, toute ou partie du dispositif 1 est en PP ayant subi un traitement de type plasma. Un tel traitement plasma permet de modifier la Rugosité Moyenne Arithmétique (Ra) de la surface du dispositif 1 , en particulier des parois internes et surtout du fond 20 du contenant 2, augmentant ses propriétés hydrophiles, sans générer de particules ni de substances relargables. Un plastique PP traité plasma offre ainsi une surface appropriée à la coagulation et à l'adhésion de la fibrine.
Par ailleurs, le matériau plastique PP confère un maintien des caractéristiques du dispositif 1 lors d'une stérilisation, notamment lors d'une stérilisation par irradiation.
On notera que la matériau plastique PP permet aussi le scellage de l'opercule 32.
En outre, le matériau plastique PP confère une résistance aux chocs lors de la découpe.
L'invention concerne aussi un kit 7 de culture et de transport de produit de thérapie cellulaire, comprenant un dispositif 1 de culture selon l'invention, tel que précédemment décrit.
Un exemple de kit 7, avec le dispositif 1 et ses différentes parties, est notamment visible sur la figure 1 .
Avantageusement, un tel kit 7 comprend un organe 8 de prélèvement conformé sous forme de pelle, dimensionnée complémentairement audit outil 5 de découpe.
Selon un mode de réalisation, ladite pelle comprend un manche 80 relié à une extrémité 81 plane. En particulier, ladite extrémité 81 plane présente des dimensions sensiblement égales à celles d'un module 50 de l'outil 5 de découpe, préférentiellement des dimensions légèrement supérieures, afin d'assurer le prélèvement d'un greffon préalablement découpé, avec un jeu suffisant.
Selon un mode de réalisation préféré, ledit manche 80 est strié, améliorant la préhension et évitant qu'il ne glisse dans les mains.
Selon un mode de réalisation avantageux, ladite extrémité 81 plane de la pelle comprend une surface rugueuse, améliorant l'adhérence du greffon prélevé et évitant qu'il ne glisse lorsqu'il est prélevé.
Selon un mode de réalisation préféré, ladite extrémité 81 plane comprend une extrémité distale inclinée, permettant de racler le fond 20 et récupérer un greffon. L'extrémité 81 plane comprend aussi deux bords longitudinaux surélevés, évitant que le greffon prélevé ne glisse latéralement lors du prélèvement ou du déplacement de ladite pelle. Un exemple d'un tel organe 8 de prélèvement sous forme de pelle est notamment visible sur la figure 1 .
Selon un mode de réalisation, ledit organe de prélèvement est intégralement réalisé en matériau plastique, préférentiellement en polypropylène (PP). Plus avant, selon un mode de réalisation, le dispositif 1 présente des dimensions permettant la culture et le transport d'une culture tissulaire d'une surface d'environ 60 centimètres carrés (cm2), pouvant être divisée lors de la découpe en des greffons d'environ 10 cm2, directement au sein du dispositif 1 sans en extraire ladite culture.

Claims

REVENDICATIONS
1. Dispositif (1 ) clos de culture et de transport de produit de thérapie cellulaire, comprenant :
- un contenant (2) avec un fond (20) surmonté de parois 21 ) périphériques, délimitant un volume interne avec une ouverture (22) en partie supérieure ;
- un moyen (3) de fermeture, rapporté en fixation amovible en recouvrement de ladite ouverture (22) ; caractérisé en ce que au moins une des parois (21 ) périphériques comprend au moins deux canaux (4) traversant débouchant au sein dudit volume interne.
2. Dispositif de culture selon la revendication précédente, caractérisé en ce qu'il comprend
- deux canaux (40,41 ) primaires, ménagés au travers d'une première des parois (21 ) périphériques ;
- trois canaux (42,43,44) secondaires, ménagés au travers d'une seconde des parois (21 ) périphériques.
3. Dispositif (1 ) de culture selon la revendication précédente, caractérisé en ce que lesdits canaux (40,41 ,42,43,44) primaires et secondaires sont équipés de bouchons dédiés à : i) une filtration autorisant les échanges gazeux ; j) une entrée autorisant l'introduction d'un milieu de culture ; jj) une entrée autorisant l'introduction d'une matrice d'hydrogel d'origine exclusivement biologique ; jjj) une entrée autorisant l'introduction de cellules ; k) une sortie autorisant l'évacuation dudit milieu de culture.
4. Dispositif (1 ) de culture selon l'une quelconque des revendications précédentes, caractérisé en ce qu'il comprend
- un outil (5) de découpe dimensionné et conformé pour son insertion au sein dudit volume interne jusqu'à venir au contact dudit fond (20) ;
- l'outil (5) de découpe étant pourvu à la face inférieure d'au moins un module (50) de découpe avec des chants -51 ) inférieurs biseautés formant des lames de découpe.
5. Dispositif (1 ) de culture selon la revendication précédente, caractérisé en ce qu'il comprend - un poussoir (6), rapporté en fixation en face supérieure dudit outil (5) de découpe.
6. Dispositif (1 ) de culture selon l'une des revendications 4 ou 5, caractérisé en ce que
- ledit au moins un module (50) de découpe présente une forme globalement parallélépipédique rectangle, avec un coin tronqué.
7. Dispositif ( 1 ) de culture selon l'une des revendications 4 à 6, caractérisé en ce que ledit outil (5) de découpe comprend
- six modules (50) de découpe répartis selon deux rangées et trois colonnes.
8. Dispositif (1 ) de culture selon l'une quelconque des revendications précédentes, caractérisé en ce que
- ledit moyen (3) de fermeture est hermétique et comprend un couvercle (30), pourvu de languettes (31 ) latérales de fixation par encliquetage avec lesdites parois (21 ) périphériques.
9. Dispositif (1 ) de culture selon l'une quelconque des revendications précédentes, caractérisé en ce que
- ledit moyen (3) de fermeture comprend un opercule (32) pelable rapporté en fixation hermétique par thermo-scellage sur le chant supérieur desdites parois (21 ) périphériques.
10. Kit (7) de culture et de transport de produit de thérapie cellulaire, comprenant
- un dispositif (1 ) de culture selon l'une quelconque des revendications 1 à 9, caractérisé en ce que ledit kit (7) comprend
- un organe (8) de prélèvement conformé sous forme de pelle, dimensionnée complémentairement audit outil de découpe- ladite pelle comprenant un manche (80) relié à une extrémité plane (81 ), pourvue d'une surface rugueuse.
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