ES2198587T3 - Formulacion a base de microorganismos, que contiene acidos grasos omega-3, como agente profilactico o terapeutico contra la coccidiosis en animales. - Google Patents

Formulacion a base de microorganismos, que contiene acidos grasos omega-3, como agente profilactico o terapeutico contra la coccidiosis en animales.

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ES2198587T3 ES97934504T ES97934504T ES2198587T3 ES 2198587 T3 ES2198587 T3 ES 2198587T3 ES 97934504 T ES97934504 T ES 97934504T ES 97934504 T ES97934504 T ES 97934504T ES 2198587 T3 ES2198587 T3 ES 2198587T3
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Abstract

LA PRESENTE INVENCION TRATA DE LA UTILIZACION DE UNA PREPARACION PROCEDENTE DE MICROORGANISMOS ACUATICOS QUE CONTIENE EL ACIDO GRASO OMEGA - 3 (EN PARTICULAR UN ACIDO EICOSAPENTANOICO O EL ACIDO DOCOSAHEXANOICO) PARA LA PREPARACION DE UN MEDICAMENTO PARA SU UTILIZACION PREVENTIVA O TERAPEUTICA CONTRA UNA ENFERMEDAD PARASITARIA EN ANIMALES. LA PREPARACION CONTIENE MICROALGAS QUE SE PUEDEN CULTIVAR DE MANERA HETEROTROFICA, MICROALGAS ACUATICAS FOTOSINTETICAS, HONGOS INFERIORES O BACTERIAS Y PUEDEN CONTENER OPCIONALMENTE OTRO MEDICAMENTO P. E. UN COCCIDIOESTATICO O UNA SALINOMICINA.

Description

Formulación a base de microorganismos, que contiene ácidos grasos omega-3, como agente profiláctico o terapéutico contra la coccidiosis en animales.
El presente invento se refiere a la utilización de una formulación a base de microorganismos acuáticos, que contiene ácidos grasos omega-3, en forma de una biomasa o en forma de un aceite, para la producción de un medicamento destinado a la utilización profiláctica y terapéutica contra la coccidiosis en animales.
Los ácidos grasos omega-3 (ácidos grasos poliinsaturados en omega-3 = omega-3-PUFAs), en particular el EPA (ácido eicosapentaenoico) y el DHA (ácido docosahexaenoico), están ganando en los últimos tiempos cada vez más importancia para la nutrición humana. Éstos presentan efectos dietéticos positivos y tienen un efecto favorecedor de la salud. El enriquecimiento de la nutrición humana con ácidos grasos omega-3 es conveniente en atención a obtener una disminución del nivel de colesterol así como una reducción de la frecuencia de enfermedades del corazón y la circulación (cardio-circulatorias). En un gran número de estudios se demostró la influencia positiva de los omega-3-PUFAs sobre procesos metabólicos patológicos. El ácido docosahexaenoico desempeña además un importante cometido como contenido en el sistema nervioso central (cerebro) así como en la retina.
Existen hasta ahora relativamente pocas investigaciones, con excepción de la cría de peces, en lo que se refiere a la importancia de los omega-3-PUFAs en el sector sanitario veterinario. Las formulaciones de omega-3-PUFAs se administraban a los animales hasta ahora principalmente a través del pienso, con la meta de enriquecer con omega-3-PUFAs a determinados productos animales destinados al consumo humano (huevos, carne). Así, el contenido de omega-3-PUFAs en el tejido graso de los músculos de pollos de engorde se pudo aumentar significativamente suministrándoles como pienso un producto que contiene PUFAs (Mooney & van Elswyk, 1995, Poultry Science 74, suplemento 1, 89). Además se pudo mostrar que, por enriquecimiento del pienso para gallinas ponedoras con componentes que contienen omega-3-PUFAs (aceite de linaza, aceite de colza, aceite de soja, aceite de pescado) es posible un enriquecimiento con omega-3-PUFAs en los huevos (Herber & van Elswyk, 1995, Poultry Science 74, Suplemento 1, página 57; Grashorn y Blanch 1996, DGS 6, 6 - 9).
Acerca del empleo de formulaciones de omega-3-PUFAs dentro del marco de las medidas profilácticas así como terapéuticas para combatir enfermedades parasitarias en animales útiles, no existen hasta ahora investigaciones algunas. En la moderna cría de aves de corral ha adquirido una gran importancia económica la coccidiosis provocada por una determinada especie de protozoos (del género de los Eimeria) como enfermedad intestinal a causa de las altas cuotas de pérdidas para la práctica. En un estudio publicado hace poco tiempo se pudo mostrar que por enriquecimiento del pienso con un aceite de pescado se pueden influir positivamente sobre el incidente de una infección causada por coccidios (disminución del número y de la intensidad de las lesiones en el intestino, reducción de las pérdidas de peso) (Muirhead, 1995, Feedstuffs, 6 de Noviembre de 1995, 12). Este efecto se atribuyó a la actividad de los omega-3-PUFAs presentes en el aceite de pescado.
La utilización de un aceite de pescado como fuente de ácidos grasos omega-3-PUFAs no carece sin embargo de problemas, puesto que se presentan en el aceite de pescado, junto a una serie de otros ácidos grasos, también colesterol y determinados metales pesados. Además de ello, la composición de los contenidos de PUFAs fluctúa de un modo considerable dependiendo de la especie de pez, la época del año y las razones de captura y pesca, con lo que se manifiesta como difícil la preparación de productos de PUFAs uniformes en sus contenidos de concentración a partir de un pescado. Además, un aceite de pescado, por causa de la influencia del sabor y del olor en el producto final se puede emplear solamente en una cantidad limitada en las dietas de piensos. Como otro problema ha de resaltarse que la concentración de omega-3-PUFAs en el aceite de pescado está situada por regla general en como máximo 15-20% y es extremadamente difícil a escala técnica el necesario aumento de la concentración de los ácidos grasos para la preparación de un aditivo para piensos.
El presente invento resuelve los problemas antes mencionados mediante la utilización de microorganismos acuáticos (microalgas, protozoos, hongos, bacterias) como cepas de producción para la preparación de formulaciones que contienen omega-3-PUFAs, en particular ácido eicosapentaenoico (EPA) y ácido docosahexaenoico (DHA). Estas formulaciones se emplean como aditivos para piensos, a fin de desarrollar su efecto anti-parasitario (en particular coccidiostático). Las cepas productoras se cultivan de manera heterótrofa o autótrofa, se cosechan, y a continuación se secan y/o se extraen. Las formulaciones de PUFAs se pueden emplear en tal caso como un aditivo para piensos en forma de una biomasa o un aceite.
Por consiguiente, el presente invento se refiere en particular a la utilización de una formulación que contiene ácidos grasos omega-3, obtenible a partir de microorganismos acuáticos, para la preparación de un medicamento destinado a su utilización profiláctica o terapéutica contra la coccidiosis en el caso de animales.
La formulación está caracterizada porque consta de una biomasa obtenible por cultivación de microorganismos acuáticos, porque se presenta en forma de un aceite, o por ambas cosas a la vez.
De acuerdo con una forma de realización especialmente preferida del presente invento, la formulación que contiene ácidos grasos omega-3 es obtenible a partir de microalgas cultivables de manera heterótrofa, perteneciendo éstas de modo especialmente preferido al género Crypthecodinium o al género Euglena.
En otra forma de realización preferida, la formulación mencionada es obtenible a partir de hongos inferiores, preferiblemente de los géneros Thraustochytrium o Mortierella.
En otra forma de realización preferida del presente invento, los microorganismos acuáticos pertenecen a las microalgas foto-sintetizadoras, caracterizadas preferiblemente porque éstas se seleccionan entre los géneros Phaeodactylum, Isochrysis, Monodus, Porphyridium, Spirulina, Chlorella, Botryococcus, Cyclotella, Nitzschia, Dunaliella y Nannochloropsis.
Otra forma de realización preferida adicional prevé que la mencionada formulación sea obtenible a partir de bacterias, seleccionadas preferiblemente entre los géneros Alteromonas y Shewanella.
La figura adjunta, que es parte constituyente de esta solicitud, contiene la evaluación gráfica de la segregación de oocistos de pollos de un grupo testigo sin la administración de ningún PUFA, así como de un grupo al que se había administrado un PUFA.
Facultativamente, la formulación es obtenible a partir de mezclas de dos o más microorganismos diferentes seleccionados entre los microorganismos acuáticos mencionados.
La formulación que contiene ácidos grasos omega-3 es apropiada especialmente para la preparación de un medicamento destinado a su utilización profiláctica y terapéutica contra la coccidiosis de las aves de corral.
Correspondientemente, el presente invento se refiere también a un medicamento destinado a su utilización profiláctica o terapéutica contra la coccidiosis en animales, que contiene una formulación con un contenido de ácidos grasos omega-3, que es obtenible tal como se ha descrito precedentemente.
El medicamento se puede combinar también con uno o varios otros medicamentos distintos.
El medicamento conforme al invento para la terapia y la profilaxis de la coccidiosis es especialmente eficaz, cuando contiene otro agente coccidiostático, preferiblemente salinomicina.
A continuación, se describe el presente invento con detalle particular.
Como organismos productores para la preparación de la formulación que contiene ácidos grasos \omega-3 se adecuan en especial microalgas y protozoos que crecen de manera heterótrofa, tales como Crypthecodinium y Euglena; hongos inferiores tales como Thraustochytrium, Schizochytrium y Mortierella, microalgas foto-sintetizadoras de los géneros Phaeodactylum, Isochrysis, Monodus, Porphyridium, Spirulina, Chlorella, Botryococcus, Cyclotella, Nitzschia, Dunaliella y Nannochloropsis, y bacterias por ejemplo de los géneros Alteromonas y Shewanella.
El procedimiento de preparación de la formulación que contiene ácidos grasos \omega-3 comprende las siguientes etapas:
-
Inocular el medio de cultivo con la cepa productora.
-
Incubar el cultivo en condiciones apropiadas, pudiendo ser ejecutada la cultivación como fermentación discontinua (batch), discontinua con alimentación (fed-batch) o continua.
-
Cosechar el cultivo, pudiéndose utilizar, entre otros, los siguientes métodos: criogranulación, filtración, centrifugación, secado por atomización.
-
Si la biomasa se utiliza directamente como formulación de omega-3-PUFA, puede seguir a continuación una etapa de extracción (p.ej. extracción con CO_{2} hipercrítico o extracción con disolventes orgánicos) para la obtención de un extracto, empleándose o bien la biomasa húmeda o la seca.
Opcionalmente, la formulación presente en forma de extracto se puede purificar antes de la utilización, p.ej. a través de métodos de SFC (de Supercritical Fluid Chromatography = cromatografía con fluido hipercrítico) o métodos de HPLC (de High Performance Liquid Chromatography = cromatografía de líquido con alto rendimiento).
Los omega-3-PUFAS se pueden presentar en la formulación conforme al invento, entre otras formas, en la de fosfolípidos, glicolípidos, mono-, di- o tri-glicéridos o sulfolípidos, o también como ácidos libres o sus ésteres etílicos.
El contenido de DHA o respectivamente EPA de la formulación de omega-3-PUFAS añadida al pienso (biomasa o aceite) está situado entre 5 y 80% referido al contenido total de ácidos grasos.
Además, el aceite antes de su utilización se puede microencapsular, a fin de garantizar una mejor elaboración y una protección de los PUFAS. Con el fin de aumentar la estabilidad frente a la oxidación de los omega-3-PUFAS se pueden aportar a la formulación estabilizadores tales como, por ejemplo, tocoferol y palmitato de ascorbilo.
El efecto coccidiostático de la formulación que contiene ácidos grasos omega-3 se comprueba en el marco de experimentos de infección con la especie de animales diana pollos de engorde. Como especies infectadoras se incluyen Eimeria acervulina, E. maxima y E. tenella. Los experimentos se desarrollan durante un período de tiempo de 3 semanas. En los experimentos se comprueba el efecto de los PUFAS sobre el incidente de infección en dos diferentes concentraciones.
Aplicación y plan de tratamiento
Número de
Grupos de tratamiento Formulación animales Dosificación Infección
A Testigo - 15 - -
B Tratamiento si 15 Dosis 1 -
C Tratamiento si 15 Dosis 2 -
D Testigo - 15 - si
E Tratamiento si 15 Dosis 1 si
F Tratamiento si 15 Dosis 2 si
Durante las investigaciones se captan diferentes parámetros de medición.
Los siguientes parámetros proporcionan información acerca de la actividad de los PUFAs:
-
desarrollo de peso individual de los animales
-
segregación de oocistos
-
reducción de las lesiones en el intestino (registro según el índice de calificación de lesiones)
-
tasa de mortalidad
Además, en el marco de ensayos de sensibilidad se puede comprobar el efecto del agente coccidiostático salinomicina en combinación con la formulación que contiene ácidos grasos \omega-3 de acuerdo con el presente invento.
El daño para gusanos adultos (efecto terapéutico) y para los estadios de gusanos que se están desarrollando (efecto profiláctico), en un medio que contiene la formulación conforme al invento, se puede comprobar en apropiados modelos de ensayos in vitro con gusanos que no viven como parásitos (p.ej. Caenorhabditis elegans) o con estadios de gusanos parásitos, que se desarrollan en el medio ambiente exterior (p.ej. Tricostrongílidos de los rumiantes). Como criterios para la actividad de la formulación conforme al invento se toman en consideración la supervivencia y la movilidad de los gusanos así como el régimen de desarrollo de los estadios juveniles.
Experimento
Se investigó la influencia de la combinación de un PUFA (ácido docosahexanoico procedente de Crypthecodinium) y salinomicina sobre el incidente de infección después de una infección con E. tenella (Houghton, cepa de laboratorio) tomando en consideración especial la segregación individual total de oocistos en el marco de un experimento de alimentación con pienso en pollos de engorde.
En el experimento, al realizar la alimentación como pienso de una dieta acentuada en cuanto a maíz (proporción de maíz 44,6%) se investigó el efecto de la combinación de ácido docosahexaenoico y salinomicina sobre la infección con Eimeria. Con el fin de poder proporcionar una información acerca de la influencia de la combinación sobre la patogenicidad del agente patógeno, se comprobaron la segregación de oocistos totales así como el pronunciamiento de las calificaciones de lesión en las heces de cada animal experimental. El desarrollo de peso y el aprovechamiento de los piensos por los animales dieron indicaciones adicionales acerca del pronunciamiento del incidente de infección.
Datos característicos de la comprobación
Período de tiempo
del experimento: 20 días
Formulaciones
de ensayo
Nombre: Sacox® RBD-DHASCO® ácido docosahexaenoico
Concentración: Sustancia activa contiene 40% de ácido docosahexaenoico
Salinomicina (DHA)
Fabricante: HRVET Martek Biosciences Corporation, EE.UU.
Sistema de ensayo
Especie: Pollos de engorde
Lohmann
Sexo: Masculino
Edad: Polluelos de
un solo día
Fases del experimento
Fase del experimento Día del
experimento
Llegada de los animales/comienzo del experimento d-8
Clasificación en grupos
Control de las heces de los grupos en cuanto a infecciones ajenas d-3
Caracterización de los animales (marcas de aves de corral)
Comienzo de la cría individual
Infección de los animales (estimulación) d0
Control de las heces de grupos en cuanto a infecciones ajenas d+3
Recogida de las heces de grupos (grupos testigos) d+4 hasta d+10
Recogida individual de heces (grupos con infección)
Determinación de la salida total de oocistos
Determinación de la calificación de lesión d+11
Aplicación y esquema de tratamiento
Aplicación de Sacox® + RBD-DHASCO® : por vía oral con el pienso
Infección con E. tenella, : por vía oral con la sonda
Houghton (cepa de laboratorio) esofágica
Dosis de infección : 500 oocistos esporulados/animal
(en 1 ml de una solución acuosa
al 1% p/v de bilis de buey)
Edad de los oocistos en el caso de una infección : 21 días
Grupos Denominación / ración de pienso Formulación n Dosificación Infección
A Testigo/dieta de maíz - 15 - -
B Sacox Salinomicina 15 60 ppm -
C Sacox/RBD-DHASCO Salin./DHA 15 60 ppm/4% -
D Testigo/dieta de maíz - 15 - si
E Sacox Salinomicina 15 60 ppm si
F Sacox/RBD-DHASCO Salin./DHA 15 60 ppm/4% si
Tratamiento del material de las muestras Recogida de las heces
Las heces se recogieron diariamente durante un período de tiempo de 24 horas (día = d) en cubetas de material sintético, que se habían mezclado con una solución al 4% de dicromato de potasio. La cantidad total de las heces se transfirió a un recipiente colector.
Tratamiento de las muestras de heces
Las muestras de heces individuales se agitaron (con un agitador magnético, a 250 rpm), se tamizaron (con una anchura de mallas de 1 mm) y se ajustaron con una solución concentrada de NaCl a un volumen final de 300 u 800 ml (dependiente de la segregación de oocistos que es de esperar). A continuación se añadió en un exceso NaCl cristalino mediando agitación. Durante la agitación se aplicó aproximadamente 1 ml de la suspensión con una pipeta o una jeringa (zona central de la columna de líquido) y con ello se llenó la cámara de McMaster.
Recuento de los oocistos
Las cámaras se llenaron sin burbujas por el lado orientado hacia el investigador. Antes de la carga, el cubreobjetos se desplazó de manera tal que se formase una rendija con una anchura de aproximadamente3 mm por encima de las cámaras. Antes del recuento, el cubreobjetos se llevó a la posición propiamente dicha (las cámaras deben estar totalmente cubiertas). Después de una flotación durante aproximadamente 5 minutos, los oocistos se recontaron en los 10 segmentos de las 3 redes de recuento con un aumento de 80 ó 320 veces.
Tomando en consideración el volumen existente por debajo de cada red de recuento (10 mm x 10 mm x 1,5 mm = 0,15 ml) y el volumen de la suspensión, se calculó el número de los oocistos.
Realización del experimento
Todo el experimento se llevó a cabo de acuerdo con el principio de la buena práctica de laboratorio.
Los resultados se representan en la tabla siguiente así como en la figura.
Desarrollo de peso, recepción de pienso, aprovechamiento del pienso y segregación de oocistos
Masa viva Aumento Recepción Aprovechamiento Segregación
del pienso del pienso de oocistos
Comienzo Final g/d g/d kg de RP/kg de MV X 1.000/animal
g g
A 102 580 34 57 1,6
testigo 100,0 100,0 100,0 100,0 100,0
B 103 566 33 57 1,6
Sacox 60 ppm
10,0 97,6 97,0 100,0 100,0
(Continuación)
Masa viva Aumento Recepción Aprovechamiento Segregación
del pienso del pienso de oocistos
Comienzo Final g/d g/d kg de RP/kg de MV X 1.000/animal
g g
C 100 571 34 56 1,5
Sacox 60 ppm +
RBD-DHASCO 4% 98,0 98,4 100,0 98,2 93,8
D 102 560 33 56 1,6 62.795
Testigo
100,0 96,6 97,0 98,2 100,0 100,0
Grupo con infección
E 103 551 32 56 1,6 6.170
Sacox 60 ppm
101,0 95,0 94,1 98,2 100,0 9,8
Grupo con infección
F 100 577 34 55 1,5 605
Sacox 60 ppm +
RBD-DASCO 4%
Grupo con infección 98,0 99,5 100,0 96,5 93,8 1,0
* kg de RP/kg de MV = kg de recepción de pienso/kg de aumento de la masa viva

Claims (14)

1. Utilización de una formulación que contiene ácidos grasos omega-3 obtenida a partir de microorganismos acuáticos en forma de una biomasa y/o en forma de un aceite, para la preparación de un medicamento destinado a la utilización profiláctica o terapéutica contra la coccidiosis en animales.
2. Utilización de acuerdo con la reivindicación 1, caracterizada porque la formulación contiene 40% de DHA.
3. Utilización de acuerdo con la reivindicación 1 o la reivindicación 2, caracterizada porque los microorganismos son microalgas que se pueden cultivar de manera heterótrofa.
4. Utilización de acuerdo con la reivindicación 3, caracterizada porque las microoalgas pertenecen al género Crypthecodinium.
5. Utilización de acuerdo con la reivindicación 3, caracterizada porque las microalgas pertenecen al género Euglena.
6. Utilización de acuerdo con la reivindicación 1 o la reivindicación 2, caracterizada porque los microorganismos son hongos inferiores.
7. Utilización de acuerdo con la reivindicación 6, caracterizada porque los hongos inferiores pertenecen al género Thraustochytrium.
8. Utilización de acuerdo con la reivindicación 6, caracterizada porque los hongos inferiores pertenecen al género Mortierella.
9. Utilización de acuerdo con la reivindicación 1 o la reivindicación 2, caracterizada porque los microorganismos pertenecen a las microoalgas foto-sintetizadoras.
10. Utilización de acuerdo con la reivindicación 9, caracterizada porque las microoalgas se seleccionan entre los géneros Phaedactylum, Isochrysis, Monodus, Porphyridium, Spirulina, Chlorella, Botryococcus, Cyclotella, Nitzschia, Dunaliella y Nannochloropsis.
11. Utilización de acuerdo con la reivindicación 1 o la reivindicación 2, caracterizada porque los microorganismos pertenecen a las bacterias.
12. Utilización de acuerdo con la reivindicación 11, caracterizada por las bacterias se seleccionan entre los géneros Alteromonas y Schewanella.
13. Utilización de acuerdo con la reivindicación 1 o la reivindicación 2, caracterizada porque la formulación es obtenible a partir de mezclas de dos o más diferentes microorganismos de acuerdo con una de las reivindicaciones 3 a 12.
14. Utilización de acuerdo con una de las reivindicaciones precedentes, caracterizada porque la coccidiosis en animales es la coccidiosis de las aves de corral.
ES97934504T 1996-07-22 1997-07-21 Formulacion a base de microorganismos, que contiene acidos grasos omega-3, como agente profilactico o terapeutico contra la coccidiosis en animales. Expired - Lifetime ES2198587T3 (es)

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DE19629433 1996-07-22
DE19629433A DE19629433A1 (de) 1996-07-22 1996-07-22 Omega-3-fettsäurenenthaltende Zubereitung aus Mikroorganismen als Prophylaktikum bzw. Therapeutikum gegen parasitäre Erkrankungen beim Tier

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