ES2201492T3 - Uso de microparticulas que comprenden una proteina y un anticuerpo adsorbido en la misma para la preparacion de una composicion farmaceutica de administracion intranasal. - Google Patents

Abstract

Se presenta la utilización de una micropartícula que tiene una proteína y un anticuerpo absorbidos en la misma para la preparación de una composición farmacéutica de administración intranasal.

Description

Uso de micropartículas que comprenden una proteína y un anticuerpo adsorbido en la misma para la preparación de una composición farmacéutica de administración intranasal.

La presente invención se refiere al uso de una micropartícula que comprende una proteína y un anticuerpo adsorbido en la misma para la preparación de una composición farmacéutica para administración intranasal.

En la presente descripción y en las reivindicaciones siguientes, el término "proteína" comprende cualquier compuesto de condensación de dos o más aminoácidos. El término por lo tanto, comprende, sin estar limitado a los mismos, los péptidos biológicamente activos, polipéptidos y proteínas.

Es conocido que en varias especies animales, incluido el hombre, la absorción de proteínas administradas por vía nasal es mayor del 40% en el caso de los péptidos que contienen entre 3 y 6 aminoácidos (AA), aproximadamente un 10-15% para los polipéptidos que contienen entre 9 y 27 AA y menor del 1% para los polipéptidos que tienen un peso molecular mayor (por ejemplo, en el caso de la insulina (51 AA), la absorción es casi nula), aunque hay diferencias apreciables para el mismo péptido dependientes de la especie o incluso entre individuos de la misma especie [Lee W.A., Longenecker J.P. "Biopharm. Manufact." Abril, pp 1-7 (1988)].

Es por tal motivo que a finales de los años 80 sólo 3 nonapéptidos, como tales, (desmopresina, lipresina y oxitoccina) se administraban por vía nasal y los inhibidores de la proteasa y los potenciadores del tránsito a través de la mucosa nasal se habían estudiado a principios de esa misma década. En general, estos potenciadores son surfactantes que aumentan la permeabilidad pasiva de la mucosa nasal. Debido a ello, ha sido posible disponer de formulaciones para la administración intranasal de calcitonina (32 AA), insulina (51 AA), hormona de crecimiento (191 AA) y otras proteínas y polipéptidos de alto peso molecular [Lee W.A., Longenecker J.P. "Biopharm. Manufact." Abril pp. 1-7 (1988); Verhoef J.C. et al. "Eur. J. of Drug Metab. and Pharmacokin." 15, 83 (1990); Mishima M. et al. "J. Pharmacobio-Dyn." 10, s.69 (1987); Mishima M. et al. "J. Pharmacobio-Dyn." 12 32 (1989); Watanabe Y et al. "Chem. Pharm. Bull." 40, 3100 (1992); Schipper N.G.M. et al "Pharmaceutical Res." 10, 682 (1993); Shao Z. et al. "Pharmaceutical Res." 11 1174 (1994)].

Los potenciadores, sin embargo, al tratarse esencialmente de surfactantes, tienen la desventaja de dañar la mucosa más o menos profunda y reversiblemente, con lo que se aumenta la permeabilidad pasiva de la misma.

Para intentar favorecer la absorción también se han usado los retardadores del tránsito nasal, tales como los agentes viscosos, polímeros adhesivos, etc., y los resultados obtenidos han sido moderados. Los retardantes, sin embargo, también presentan efectos tóxicos sobre la mucosa y los cilios.

Para obviar estas desventajas, se ha propuesto la administración de fármacos incorporados en microesferas de almidón que no se absorben porque son demasiado grandes, pero que se hidratan parcialmente en el lumen nasal y liberan lentamente los péptidos previamente incorporados [Illum L. et al. "Int. J. Pharm." 39, 189 (1987); Björk E., Edman P. "Int. J. Pharm." 47, 233 (1988)]. De esta forma, se obtuvo un efecto retardante junto con la mejoría de la absorción de moléculas de pequeño y mediano tamaño. Por el contrario, la absorción de moléculas grandes no mejora porque no se producen alteraciones en la mucosa.

El documento EP-A-0 474 453 da a conocer una composición farmacéutica para administración nasal que consiste en i) una proteína, y ii) una subunidad de enterotoxina B termolábil (LTB). El complejo proteína/LTB proporciona un aumento de la absorción de la proteína por vía nasal en comparación con la administración de la proteína sola (véase la Tabla 1). Sin embargo, el LTB no es un anticuerpo y el complejo proteína/LTB no se vehiculiza por una micropartícula. Además, en el documento EP-A-0 474 453 no se informa de la absorción del complejo proteína/LTB por la mucosa nasal con respecto a la mucosa intestinal.

El documento EP-A-0 681 833 da a conocer una composición farmacéutica para administración nasal que consiste en (i) una proteína adsorbida en (ii) un vehículo metálico polivalente. Se afirma que esta composición tiene una biodisponibilidad igual o mayor comparada con la obtenida por la administración inyectable o vía oral. Sin embargo, en la Tabla 1 del documento EP-A-0 681 833 se muestra que la diferencia de la biodisponibilidad de la insulina por vía nasal es sólo dos veces mayor que por la vía subcutánea que, a su vez, se sabe que proporciona una biodisponibilidad mayor que la vía oral.

Por último, en la solicitud de patente PCT WO 94/28879 se da a conocer una composición farmacéutica para administración oral que consiste en un material biológicamente activo, un anticuerpo que se une específicamente a dicho material biológicamente activo y una pluralidad de micropartículas de material polimérico. En particular, el material biológicamente activo pertenece a la familia de los péptidos, polipéptidos y proteínas. Preferiblemente, las micropartículas son microesferas de poliestireno.

El material biológicamente activo y los anticuerpos se absorben en dicha micropartícula y estas últimas son objeto de endocitosis por el epitelio de recubrimiento de los folículos de las placas de Peyer en el ratón. Por lo tanto, es posible calcular en el animal de laboratorio tanto la cantidad de micropartículas que entra en las células portadoras (captación) como la cantidad de micropartículas que atraviesan eficazmente la membrana y alcanzan los vasos linfáticos en el conducto mesentérico, que recoge todo el material transportado.

En la solicitud mencionada anteriormente, el transporte más eficiente se ha obtenido usando la hormona de crecimiento bovina como la proteína y el anticuerpo específico de la misma, bGH-Ab, como anticuerpo.

Las mediciones de la captación se realizaron insertando in vivo en el yeyuno e íleon de la rata 3,6 x 10^{11} micropartículas recubiertas, fijando el tejido después de 90 minutos y realizando la medición (para el cálculo se tuvieron en cuenta 6 ciclos endocíticos en 90 minutos).

Los resultados obtenidos fueron los siguientes:

a)

captación total en 90 minutos a través de 40 cm^{2}: 8.400.000 micropartículas [rendimiento = 0,023\textperthousand (= 8.400.000 / 3,6 x 10^{11})];

b)

captación total por unidad de superficie en 90 minutos a través de 40 cm^{2}: 210.000 micropartículas/cm^{2}; [rendimiento/cm^{2} = 0,00058\textperthousand (= 210.000 / 3,6 x 10^{11}).

A su vez, las mediciones del flujo transmural se realizaron introduciendo in vivo en el yeyuno e íleon de la rata 3,6 x 10^{11} micropartículas recubiertas y recogiéndose la linfa del conducto mesentérico canulado cada 5 minutos.

Los resultados fueron los siguientes:

a)

transporte transmural en 40 cm^{2} en 90 minutos: 65.000 micropartículas: [rendimiento en 40 cm^{2} = 65.000 / 3,6 x 10^{11} (=0,00018\textperthousand)];

b)

material transportado transmuralmente en 90 minutos/cm^{2}: 1625 micropartículas/cm^{2}; [rendimiento/cm^{2} = 4,4 x 10^{-9} (0,0000044\textperthousand].

Estos datos demuestran que el rendimiento de la endocitosis en el intestino es 130 veces (2,3 x 10^{-5}/1,8 x 10^{-7}) mayor que el rendimiento del transporte transmural. Esto significa que de cada 130 partículas que se han endocitado, 129 quedan atrapadas en dicho tejido linfoide de las placas de Peyer y sólo 1 pasa hacia la linfa.

Ahora, sorprendentemente, se ha encontrado que el rendimiento del transporte activo en la mucosa nasal de una proteína y el anticuerpo específico de dicha sustancia adsorbidos en micropartículas de una sustancia polimérica es 400.000 veces mayor que el del intestino.

Más concretamente, como los datos de absorción en los experimentos en el intestino se obtuvieron in vivo, estos datos se relacionan con un flujo entrante (linfa en el lumen) formado por el transporte paracelular tanto activo como pasivo, lo que aumenta el rendimiento. Según esta premisa inicial, la relación entre el rendimiento del transporte nasal e intestinal es, sin duda, mayor del que previamente se había mencionado de 400.000 veces.

De hecho, la mucosa nasal se estudió aislada in vitro, y fue posible medir los dos flujos unidireccionales opuestos de micropartículas recubiertas, y se calculó la absorción neta como la diferencia entre esos flujos. La absorción neta de la mucosa nasal, por lo tanto, no incluye el componente pasivo de entrada pero, a diferencia de lo que se ha descrito para el intestino, es únicamente el resultado de la absorción activa.

Por otra parte, es importante mencionar que, además de su relación de rendimiento extremadamente favorable, en general la vía nasal es también más ventajosa comparada con la vía oral porque la sustancia absorbida tiene que pasar a través del sistema digestivo complicado del tracto gastrointestinal y que una vez entrado en la circulación no tiene que pasar súbitamente a través del hígado.

Por lo tanto, es un primer objetivo de la presente invención es proporcionar un uso de una micropartícula polimérica que comprende una proteína y un anticuerpo adsorbido en la misma para la preparación de una composición farmacéutica para administración intranasal.

La proteína se selecciona preferentemente de entre el grupo formado por BSA (albúmina sérica bovina), insulina, encefalina, hormonas, factores de crecimiento, citocinas, factores de coagulación, neuropéptidos, fármacos antimicrobianos y sus fragmentos. El anticuerpo, a su vez, es una inmunoglobulina seleccionada de entre el grupo formado por IgM, IgA y IgG. La inmunoglobulina es preferiblemente específica para la proteína. Las micropartículas preferiblemente son microesferas de un material polimérico no inmunógeno como poliestireno, látex u otros polímeros. Opcionalmente, el material polimérico es de tipo biodegradable.

Preferiblemente, la composición farmacéutica según la presente invención se prepara en una forma posológica adecuada formada por una dosis efectiva de una proteína y un anticuerpo adsorbido en micropartículas de material polimérico junto con un componente inerte farmacéuticamente aceptable.

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Ejemplos de formas posológicas adecuadas para al administración por la vía intranasal son cremas, pomadas, aerosoles, spray y gota.

Las formas posológicas también pueden contener otros componentes convencionales como conservantes, estabilizantes, tampones, sales para ajustar la presión osmótica, emulsionantes, saborizantes, etc.

La cantidad de proteína y anticuerpo en la composición farmacéutica según la presente invención puede variar dentro de un amplio intervalo en relación con factores conocidos como, por ejemplo, el estadio y gravedad de la enfermedad, el peso corporal del paciente, el número de las dosis diarias y la actividad de la proteína seleccionada. Los expertos en la materia podrán determinar fácil y sistemáticamente dicha cantidad óptima.

En general, la relación proteína/inmunoglobulina oscila entre 1 y 15.000 moles de proteína por cada mol de inmunoglobulina. Preferiblemente entre 1 y 5.000, e incluso más preferiblemente entre 1 y 100 moles de proteína por cada mol de inmunoglobulina.

A su vez, un experto en la materia determinará fácilmente la cantidad en peso de la proteína en la composición farmacéutica según la presente invención, a partir de la actividad conocida de la proteína utilizada.

Las formas posológicas de la composición farmacéutica según la presente invención se pueden preparar por métodos que conocen bien los químicos farmacéuticos, consistentes en mezclado, granulación, compresión, disolución, esterilización, etc.

Se ha valorado la actividad de las proteínas adsorbidas en las micropartículas junto con los anticuerpos específicos para la proteína en evaluación mediante los experimentos que se describen a continuación.

Ejemplo 1 Transporte de micropartículas por vía intranasal

Para este experimento se usaron dos mucosas nasales heterolaterales aisladas de conejos New Zealand albinos macho (peso corporal: 3-3,5 kg), después de sacrificar al animal por dislocación cervical. Las superficies de mucosa correspondientes a la concha nasal superior se lavaron con solución de Krebs-Henseleit ["Comp. Biochem. Physiol.", Cremaschi D. et al., 99A, 361, (1991); "Biochem. Biophys. Acta", Cremaschi D. et al., 27, 1280 (1996)] y después se montaron en teflón en una cámara de Ussing (superficie expuesta: 0,3 cm^{2}) y se incubaron con solución de Krebs-Henseleit, mantenida a 27 \pm 1ºC.

La composición de la solución de Krebs-Henseleit fue la siguiente (en mM): Na^{+} 142,9; K^{+} 5,9; Ca^{2+} 2,5; Mg^{2+} 1,2; Cl^{-} 127,7; HCO_{3}^{-} 24,9; H_{2}PO_{4}^{-} 1,2; SO_{4} 2^{-} 1,2; glucosa 5,5. El pH se mantuvo en 7,4 mientras se lavaba con O_{2} al 95% + CO_{2} al 5%. El gas de lavado también se usó para oxigenar el tejido y mezclar la solución.

Las diferencias de potencial eléctrico transepitelial (V_{ms}) se determinaron en estos tejidos heterolaterales así montados usando un multímetro digital (Keithley Instr., Cleveland, USA, modelo 136). Las mediciones se hicieron cada 10 minutos durante los primeros 30 minutos del experimento (para permitir la evaluación de la funcionalidad del epitelio después del aislamiento), y al final del experimento (150 minutos después del inicio; es decir, un periodo de incubación de 120 minutos).

Al final del periodo preincubación, la solución del lado submucoso de uno de los dos tejidos y del lado mucos del otro tejido se sustituyó por 250 \mul de una suspensión de microesferas de poliestireno fluorescente (conjugado con isotiocianato de fluoresceína, FITC: Polyscience Inc., Warrington, PA, USA) aproximadamente 0,5 \mum de diámetro. La concentración de las microesferas se midió en muestras de 10 \mul (tomadas al menos al inicio y al final del periodo de incubación), con líneas rectas de calibración de la absorbancia (\lambda5 fotómetro disponible de Perkin-Elmer Corp., Norwalk, CT, USA) en una longitud de onda de 600 nm. Las concentraciones de referencia de las microesferas se predeterminaron en una cámara Burker después de la dilución adecuada (microscopio de fluorescencia Orthoplan MPV2 de Leitz GMBH, D6330 Wetzlar, Alemania). Durante el experimento, las concentraciones iniciales y finales de las micropartículas no mostraron cambios significativos. Estas micropartículas transportadas durante los 120 minutos de incubación se midieron en la cámara de Burker por su baja concentración y se expresaron como flujos unidireccionales mucosa-submucosa (J_{ms}) o viceversa (J_{sm}) en número de micropartículas cm^{-2} h^{-1}.

Tanto la solución donante como la solución que contiene las micropartículas transportadas se sometieron a tratamiento con ultrasonidos al inicio y al final del experimento, antes de realizar las mediciones, para prevenir que las micropartículas colocadas en la solución Krebs-Henseleit agreguen entre sí y tiendan a ser absorbidas por el tejido. La solución donante se renovó completamente cada 30 minutos, habiéndose demostrado que este procedimiento es adecuado para mantener una concentración constante de micropartículas libres.

Ejemplo 2 Transporte por vía intranasal de proteínas adsorbidas en micropartículas

Se siguió el mismo procedimiento que en el Ejemplo 1 anterior, excepto en que las micropartículas se suspendieron en una solución proteica (6,5 x 10^{-6} M) y la suspensión completa se incubó durante 90 minutos a 37ºC. A continuación se realizaron 4 lavados, consistente cada uno de ellos en una precipitación por centrifugación y resuspensión en solución de Krebs-Henseleit que contiene albúmina sérica bovina, BSA (7,4 x 10^{-4} M, 5% p/v).

Ejemplo 3 Transporte por vía intranasal de anticuerpos adsorbidos en micropartículas

Se siguió el mismo procedimiento que en los Ejemplos 1 y 2 anteriores, excepto en que las micropartículas se suspendieron en una solución proteica que contenía un anticuerpo.

Ejemplo 4 Transporte por vía intranasal de las proteínas adsorbidas en micropartículas con anticuerpos

Se siguió el mismo procedimiento que en los Ejemplos 1 y 2 anteriores, excepto en que se usaron polipéptidos adsorbidos en micropartículas y específicamente unidos a anticuerpos. Las micropartículas, antes de nada, se suspendieron en una solución proteica adecuada (6,5 x 10^{-6} M) y la suspensión completa se incubó durante 90 minutos a 37ºC. A continuación se realizaron 4 lavados, consistente cada uno de ellos en una precipitación por centrifugación y resuspensión en solución de Krebs-Henseleit que contiene albúmina sérica bovina, BSA (7,4 x 10^{-4} M, 5% p/v). Por último, se realizó una segunda incubación de las micropartículas recubiertas con una solución que contenía un anticuerpo específico anti- polipéptido (6,5 x 10^{-8} M) durante 16 horas a 4ºC.

Para el estudio de la cinética de transporte de las micropartículas recubiertas, estas últimas no se diluyeron o concentraron hasta después de que se hubiesen recubierto en la concentración inicial habitual, de forma que se encontrasen recubrimientos homogéneos independientemente de la concentración final de micropartículas.

Entre los polipéptidos usados, la albúmina sérica bovina (BSA), la inmunoglobulina A (IgA de calostro humano), la inmunoglobulina G (insulina antihumana y anti-BSA de ratón) han sido suministrados por Sigma (St. Louis, MO, USA), mientras que la insulina bovina y la encefalina ([Leu5]encefalina) han sido suministradas por Calbiochem AG (Lucerna, Suiza).

Los resultados de los Ejemplos 1-4 se ilustran en la Tabla 1, en la que se muestran los flujos mucosa-submucosa (J_{ms}) y viceversa (J_{sm}) de las micropartículas nativas (no recubiertas) o recubiertas con varias proteínas.

Independientemente del tipo de recubrimiento, el experimento sólo se consideró válido cuando se encontró que la mucosa seguía viva al inicio del experimento y durante la preincubación, así como al final de la misma. Los parámetros en consideración para este propósito fueron la diferencia de potencial eléctrico transepitelial (V_{ms}), los índices de transporte transepitelial de los iones electrogénicamente activos y del metabolismo celular (que apoya a este último) y de la integridad del epitelio como barrera.

El valor inicial mínimo de V_{ms} fue de +1 mV (submucosa positiva). El V_{ms} aumentó lenta y progresivamente durante el experimento, indicando con ello no sólo que la mucosa aislada no estaba sufriendo una degradación, sino que también indicaba una recuperación constante de la funcionalidad de dicha mucosa in vitro. La tendencia en el tiempo se demostró similar a la descrita por Cremaschi D. et al. "Comp. Biochem. Physiol." 99A, 361, (1991).

La temperatura de incubación fue de 27 \pm 1ºC. Comparado con 37ºC, esta temperatura reduce el metabolismo y transporte aproximadamente en el doble como mucho, pero hace que el tejido aislado sea más estable. En estos tipos variados de experimentos realizados, el valor de V_{ms} después de 30 minutos de preincubación a 27ºC (antes de la inserción de la solución donante con las micropartículas y el inicio de la incubación con las mediciones flujo) fue de 40 \pm 0,1 mV (134 mucosas).

El valor de V_{ms} al final de los 120 minutos de incubación fue de 6,6 \pm 0,2 mV (134 mucosas, p<0,01).

Independientemente del tipo de recubrimiento, la concentración de micropartículas en la solución donante no mostró una reducción significativa en el tiempo durante los 120 minutos de incubación. Esta concentración, de hecho, fue igual a 3,25 \pm 0,05 x 10^{11} micropartículas/ml (134 experimentos) al inicio de la incubación y 3,22 \pm 0,04 x 10^{11} micropartículas/ml (134 experimentos realizados por nosotros) al final de la incubación.

Esto significa que los flujos J_{ms} y J_{sm} eran unidireccionales en el periodo de tiempo considerado y que no se produjeron pérdidas de micropartículas debido a la absorción o agregación. Además, nos dio una referencia segura de la concentración de la solución que crea los flujos.

Los resultados descritos en la Tabla 1 muestran que:

a)

en las diferentes condiciones del recubrimiento, el valor J_{sm} se corresponde con aproximadamente 3-6 millones de micropartículas cm^{-2} h^{-1} de los 325.000 millones de micropartículas/ml en la solución donante;

b)

cuando las micropartículas no están recubiertas con polipéptidos, el valor J_{ms} no es significativamente diferente del valor J_{sm}; por lo tanto, no se produce la absorción neta de microesferas (J_{net} no es significativamente diferente de cero);

c)

el recubrimiento con polipéptidos, independientemente del polipéptido usado (BSA, insulina, encefalina, IgA, IgG antiinsulina, IgG anti-BSA) hace que el valor J_{ms} siempre será significativamente mayor del valor J_{sm}; por lo tanto, se produce la absorción neta (J_{net} significativamente diferente de cero);

d)

cuando, después del recubrimiento de las micropartículas a través de la absorción de insulina o BSA, el anticuerpo respectivo (IgG antiinsulina o IgG anti-BSA en una concentración de 1:100 con respecto a la concentración usada para la adsorción) se une a ellos con un enlace que es específico para estas dos proteínas, el valor de J_{ms} se estimula fuertemente con respecto al de la insulina y el de BSA, así como con respecto al de los dos anticuerpos específicamente adsorbidos en las micropartículas; en consecuencia, la absorción neta (J_{net}) muestra un incremento notable.

Como los flujos netos más altos se obtuvieron con insulina ligada a su IgG específica, se examinó la cinética de transporte para este tipo de recubrimiento. En este extremo, las micropartículas se recubrieron como se reveló previamente, después de diluyeron o concentraron y los flujos se midieron con diferentes concentraciones de micropartícula.

La Tabla 2 muestra los resultados obtenidos realizándose 6 experimentos con cada concentración. Estos resultados demuestran que:

a)

con una concentración de 2.000 millones y 200 millones de micropartículas/ml, con un valor de J_{ms} no significativamente diferente de J_{sm}. J_{net} es, por lo tanto, no significativamente diferente de cero;

b)

con concentraciones mayores, mientras que J_{sm} no muestra cambios estadísticamente significativos, el valor de J_{ms} va siendo significativamente mayor que el de J_{sm}. Por lo tanto, J_{net} es estadísticamente diferente de cero;

c)

cuando aumenta la concentración, el valor de J_{ms} aumenta progresivamente y la diferencia con respecto a J_{sm} también aumenta; en consecuencia, J_{net} también aumenta. El aumento todavía se puede observar con una concentración de 982.000 millones de micropartículas/ml, es decir, 500 veces más que la concentración mínima usada;

d)

la tendencia de la cinética es sigmoidea y el rendimiento máximo/cm^{2} del transporte transepitelial se obtiene con 3,2 x 10^{11} micropartículas/ml, que es equivalente a un 1,7\textperthousand. Este rendimiento, obtenido a 27ºC, es 400.000 veces mayor que el rendimiento correspondiente obtenido en el intestino medido a 37ºC y considerando como flujo el total del flujo neto activo y el flujo linfático pasivo en el lumen, como ya se ha mencionado (1,7 x 10^{-3}/4,4 x 10^{-9} = 400.000).

TABLA 1 Flujos de micropartículas nativas o micropartícula recubiertas con a polipéptido (Ag) o con un anticuerpo o con un polipéptido unido a la lgG específica en su interior (Ay +Ab)

Recubrimiento	Nº de	V_{ms} (mV)	Concentración	Flujos (10^{6} cm^{-2} h^{-1})
de las	experi-		(10^{11}/ml)
micropartículas	mento	Inicial	Final	Inicial	Final	J_{ms}	J_{sm}	J_{net}
No recubiertas		4,4 \pm 0,5	6,2 \pm 0,4**	2,53 \pm 0,06	2,47 \pm 0,02
(nativas)	5	(10)	(10)	(10)	(10)	3,94 \pm 0,48	3,37 \pm 0,44	0,5 \pm 0,38
		5,0 \pm 0,4	7,6 \pm 0,4**	3,45 \pm 0,05	3,54 \pm 0,05
BSA	6	(12)	(12)	(12)	(12)	7,46 \pm 0,64\bullet\bullet	4,85 \pm 0,23	2,60 \pm 0,50ºº
		3,1 \pm 0,3	5,2 \pm 0,3**	3,81 \pm 0,08	3,72 \pm 0,11
Insulina	13	(26)	(26)	(26)	(26)	11,06 \pm 1,47\bullet\bullet	3,96 \pm 0,57	7,10 \pm 1,15ºº
		4,0 \pm 0,3	7,2 \pm 1,1**	3,20 \pm 0,05	3,28 \pm 0,06
Encefalina	6	(12)	(12)	(12)	(12)	7,26 \pm 0,53\bullet\bullet	4,66 \pm 0,09	2,60 \pm 0,53ºº
		3,5 \pm 0,4	6,8 \pm 1,0**	3,26 \pm 0,13	3,18 \pm 0,9
IgA	6	(12)	(12)	(12)	(12)	6,98 \pm 0,83\bullet	3,92 \pm 0,16	3,06 \pm 0,87º
		3,0 \pm 0,2	7,1 \pm 0,5**	2,78 \pm 0,10	2,80 \pm 0,10
IgG antiinsulina	6	(12)	(12)	(12)	(12)	13,47 \pm 1,08\bullet\bullet	3,66 \pm 0,22	9,81 \pm 1,08ºº
		5,7 \pm 0,7	9,0 \pm 1,2**	3,23 \pm 0,04	3,34 \pm 0,05
IgG anti-BSA	6	(12)	(12)	(12)	(12)	10,15 \pm 1,24\bullet\bullet	4,08 \pm 0,34	6,06 \pm 0,94ºº
Insulina + lgG		3,3 \pm 0,2	5,4 \pm 0,3**	3,17 \pm 0,05	3,01 \pm 0,05
antiinsulina	13	(26)	(26)	(26)	(26)	74,23 \pm 7,06\bullet\bullet	5,91 \pm 0,48	68,32 \pm 6,87ºº
BSA +IgG		5,5 \pm 1,0	8,2 \pm 0,8*	3,12 \pm 0,07	3,22 \pm 0,08
anti-BSA	6	(12)	(12)	(12)	(12)	13,56 \pm 1,49\bullet\bullet	4,17 \pm 0,31	9,39 \pm 1,28ºº
		4,0 \pm 0,1	6,6 \pm 0,2**	3,25 \pm 0,05	3,22 \pm 0,04
Medias		(134)	(134)	(134)	(134)
*, **: p<0,05 ó 0,01 con respecto al valor inicial; º, ºº: p<0,05 ó 0,01 con respecto a cero; \bullet, \bullet\bullet: p<0,05 ó 0,01 con respecto a J_{sm}

TABLA 2

Flujos de micropartículas recubiertas con insulina unida a IgG antiinsulina. Solución donante que contiene diferentes
concentraciones de micropartícula.
Concentración de micropartículas (10^{11}/ml)	Flujos (10^{6} cm^{-2} h^{-1})
	J_{ms}	J_{sm}	J_{net}
0,022 \pm 0,002	5,84 \pm 0,65	5,14 \pm 0,54	0,69 \pm 0,44
0,14 \pm 0,01	7,62 \pm 0,55\bullet\bullet	5,17 \pm 0,35	2,45 \pm 0,36ºº
0,32 \pm 0,01	9,40 \pm 0,78\bullet\bullet	4,28 \pm 0,12	5,12 \pm 0,79ºº
0,69 \pm 0,03	13,16 \pm 0,69\bullet\bullet	4,20 \pm 0,18	8,96 \pm 0,67ºº
1,52 \pm 0,06	26,75 \pm 1,43\bullet\bullet	4,69 \pm 0,21	22,06 \pm 1,33ºº
1,73 \pm 0,03	34,27 \pm 1,66\bullet\bullet	4,36 \pm 0,16	29,91 \pm 1,53ºº
2,79 \pm 0,08	61,39 \pm 3,87\bullet\bullet	4,45 \pm 0,34	56,94 \pm 3,76ºº

TABLA 2 (continuación)

Flujos de micropartículas recubiertas con insulina unida a IgG antiinsulina. Solución donante que contiene diferentes
concentraciones de micropartícula.
Concentración de micropartículas (10^{11}/ml)	Flujos (10^{6} cm^{-2} h^{-1})
5,43 \pm 0,13	79,85 \pm 5,73\bullet\bullet	5,54 \pm 0,63	74,32 \pm 5,81 ºº
9,82 \pm 0,14	98,84 \pm 7,12\bullet\bullet	6,31 \pm 0,90	92,53 \pm 6,67ºº
ºº: p<0,01 con respecto a cero
\bullet\bullet: p<0,01 con respecto a J_{sm}

Claims (10)

1. Uso de una micropartícula que comprende una proteína y un anticuerpo adsorbido en la misma para la preparación de una composición farmacéutica para administración intranasal.

2. Uso de una partícula polimérica según la reivindicación 1, caracterizado porque la proteína se selecciona de entre el grupo formado por BSA, insulina, encefalina, hormones, factores de crecimiento, citocinas, factores de coagulación, polipéptidos, fármacos antimicrobianos y sus fragmentos.

3. Uso de una partícula polimérica según la reivindicación 1 ó 2, caracterizado porque el anticuerpo es una inmunoglobulina seleccionada de entre el grupo formado por IgM, IgA e IgG.

4. Uso de una partícula polimérica según la reivindicación 3, caracterizado porque la inmunoglobulina es específica para la proteína.

5. Uso de una partícula polimérica según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4, caracterizado porque las micropartículas son microesferas de material polimérico.

6. Uso de una partícula polimérica según la reivindicación 5, caracterizado porque el material polimérico es biodegradable.

7. Uso de una partícula polimérica según la reivindicación 5, caracterizado porque el material polimérico es poliestireno.

8. Uso de una partícula polimérica según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6, caracterizado porque la relación proteína/inmunoglobulina oscila entre 1 y 15.000 moles de proteína por mol de inmunoglobulina.

9. Uso de una partícula polimérica según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6, caracterizado porque la relación proteína/inmunoglobulina oscila entre 1 y 5.000 moles de proteína por mol de inmunoglobulina.

10. Uso de una partícula polimérica según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6, caracterizado porque la relación proteína/inmunoglobulina oscila entre 1 y 100 moles de proteína por mol de inmunoglobulina.