ES2201812T3 - Acido n-3,3-dimetilbutil-l-aspartico y sus esteres procedimiento de preparacion, y procedimiento para preparar n-(-(3,3-dimetilbutil)-l-alfa-aspartil)-l-fenilalanina-1-metilester a partir de ellos. - Google Patents
Acido n-3,3-dimetilbutil-l-aspartico y sus esteres procedimiento de preparacion, y procedimiento para preparar n-(-(3,3-dimetilbutil)-l-alfa-aspartil)-l-fenilalanina-1-metilester a partir de ellos.Info
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Abstract
Un compuesto representado por la fórmula en el que R1 y R2 son de forma independiente hidroxi o alcoxi que tienen de 1 a 6 átomos de carbono o juntos son oxígeno, formando uno de sus anhídridos; y Q es hidrógeno o (CH3)3C(CH2)2-.
Description
Ácido
N-3,3-dimetilbutil-L-aspártico
y sus ésteres, procedimiento de preparación, y procedimiento para
preparar
N-[N-(3,3-dimetilbutil)-L-\alpha-aspartil]-L-fenilalanina-1-metiléster
a partir de ellos.
Este invento se refiere al ácido
N-3,3-dimetilbutil-L-aspártico
y a sus derivados. El invento también se refiere a un procedimiento
para preparar éster 1-metílico de
N-[N-(3,3-dimetilbutil)-L-\alpha-aspartil]-L-fenilalanina
(neotame) vía acoplamiento péptido de un derivado del novedoso
ácido N-(3,3-dimetilbutil)-L-
aspártico con L-fenilalanina o un éster de
L-fenilalanina.
El éster 1-metílico de
N-[N-(3,3-dimetilbutil)-L-\alpha-aspartil]-L-fenilalanina
(neotame) es un agente edulcorante altamente intenso no nutritivo
útil para conferir dulzor a una amplia variedad de productos
alimenticios. Este edulcorante, descrito en la patente de EE.UU.
Nº. 5.480.668, es aproximadamente 8.000 veces más dulce que la
sacarosa, en base en peso. Por ello, pueden utilizarse cantidades
muy pequeñas de este agente edulcorante para producir alimentos y
productos alimenticios que presentan un sabor igual de dulce que
los productos alimenticios altos en calorías disponibles en la
actualidad.
La patente de EE.UU. Nº. 5.510.508 describe un
método para preparar éster 1-metílico de
N-[N-(3,3-dimetilbutil)-L-\alpha-aspartil]-L-fenilalanina
de fórmula
que comprende tratar una disolución alcohólica de
aspartame/ácido acético acuoso y
3,3-dimetilbutiraldehído, a temperatura ambiente,
con hidrógeno a una presión igual o menor a 1 bar (0,1 MPa) en
presencia de un catalizador basado en platino o paladio. El
producto se purifica por precipitación y filtración después de
eliminar el alcohol de la disolución a
vacío.
La patente de EE.UU. Nº. 5.728.862 describe un
método que comprende tratar una disolución de aspartame y
3,3-dimetilbutiraldehído en un disolvente orgánico
con el agente reductor, hidrógeno en presencia de un catalizador.
Tras eliminar el catalizador, se añade agua para formar una
disolución acuosa/disolvente orgánico que contiene alrededor de 17%
a alrededor de 30% del disolvente orgánico, en peso, a partir de la
cual se obtiene el neotame por precipitación y filtración.
No obstante, sería deseable desarrollar métodos
más eficaces y rentables para preparar neotame de alta pureza a
partir de materiales disponibles o que puedan obtenerse
fácilmente.
El invento se refiere al novedoso ácido
N-(3,3-dimetilbutil)-L-aspártico
y a sus derivados, por ejemplo, ésteres y anhídridos. Estos
compuestos novedosos del ácido aspártico pueden prepararse por
alquilación reductora de 3,3-dimetilbutiraldehído
con ácido L-aspártico o sus derivados. El ácido
N-(3,3-dimetilbutil)-L-aspártico
también puede prepararse por alquilación reductora de
3,3-dimetilbutiraldehído con el éster dialquílico
del ácido L-aspártico, seguido de hidrólisis de los
grupos éster dialquílicos.
Este invento también se refiere a procedimientos
para la preparación de éster 1-metílico de
N-[N-(3,3-dimetilbutil)-L-\alpha-aspartil]-L-fenilalanina
empleando una metodología de acoplamiento péptido. En estos
procedimientos, puede formarse el enlace péptido amida del éster
1-metílico de
N-[N-(3,3-dimetilbutil)-L-\alpha-aspartil]-L-fenilalanina
vía acoplamiento péptido de un derivado inactivo del ácido
N-(3,3-dimetilbutil)-L-aspártico
con L-fenilalanina o un éster de
L-fenilalanina. Puede obtenerse el éster
1-metílico de
N-[N-(3,3-dimetilbutil)-L-\alpha-aspartil]-L-fenilalanina
de alta pureza por cristalización directa del producto condensado o
mediante transformación de grupo funcional adicional de ese
producto, seguida de cristalización o cromatografía en columna.
El invento va destinado al ácido
N-(3,3-dimetilbutil)-L-aspártico
novedoso y a sus derivados representados por la fórmula
en la que R^{1} y R^{2} son de forma
independiente hidroxi o alcoxi inferior que tienen 1 a 6 átomos de
carbono o juntos son oxígeno, formando un anhídrido; y Q es
hidrógeno o (CH_{3})_{3}C(CH_{2})_{3}.
Preferiblemente, Q es hidrógeno. Preferiblemente, R^{1} y R^{2}
son hidroxi o
metoxi.
Este invento también va también dirigido a
métodos útiles para la preparación del éster
1-metílico de
N-[N-(3,3-dimetilbutil)-L-\alpha-aspartil]-L-fenilalanina
con alto rendimiento y de alta pureza vía acoplamiento péptido de
derivados inactivos del ácido
N-(3,3-dimetilbutil)-L-aspártico
novedoso con L-fenilalanina, o su éster
metílico.
El Esquema I muestra un método de preparación de
ácido
N-(3,3-dimetilbutil)-L-aspártico
vía alquilación reductora del ácido L-aspártico
utilizando 3,3-dimetilbutiraldehído.
Esquema
I
Típicamente, la reacción de alquilación reductora
se lleva a cabo en agua, un disolvente de alcohol alquílico
inferior o sus mezclas. Se prefieren disolventes de alcohol
alquílico inferiores, por ejemplo, metanol, etanol, propanol,
isopropanol y butanol. Típicamente, la reducción se lleva a cabo
utilizando paladio sobre carbono en una atmósfera de hidrógeno.
Otros catalizadores de hidrogenación que pueden utilizarse incluyen
platino sobre carbono, negro de platino, negro de paladio, níquel
sobre catalizadores homogéneos de hidrogenación de sílice o alúmina,
níquel Raney, negro de rutenio, rutenio sobre carbono, óxido de
paladio, hidróxido de paladio sobre carbono, negro de rodio, rodio
sobre carbono o alúmina. Otros agentes reductores útiles incluyen
cianoborohidruro de sodio, borohidruro de litio o de sodio. De
manera opcional, se añade una base, por ejemplo, bicarbonato de
sodio, carbonato de sodio, bicarbonato de potasio, carbonato de
potasio, carbonato de litio o una base orgánica, para disolver el
ácido aspártico. Si la reacción se lleva a cabo en ausencia de base,
tiene lugar la dialquilación y puede obtenerse ácido
N,N-di-(3,3-dimetilbutil)-L-aspártico.
De manera alternativa, como se muestra en el
Esquema II, puede obtenerse ácido
N-(3,3-dimetilbutil)-L-aspártico
a través de un procedimiento de dos etapas de alquilación reductora
de ácido L-aspártico di-protegido
con 3,3-dimetilbutiraldehído seguido de la
eliminación de los grupos carboxilo protectores. Cada uno de los
grupos carboxilo del ácido L-aspártico se
encuentran protegidos por un grupo protector apropiado. Los grupos
protectores-carboxilo que son apropiados para ser
utilizados en el presente invento son los que por un lado son
estables frente a las condiciones de reacción de la alquilación
reductora y por otro pueden eliminarse del producto final sin
racemización o degradación de dicho producto. De manera opcional,
los grupos carboxilo están protegidos mediante la conversión en
grupos éster. Grupos éster ejemplares incluyen ésteres de alquilo
C_{1}-C_{4}, ésteres de alquilo
C_{1}-C_{4} sustituido o ésteres de sililo. Los
métodos para proteger y desproteger los compuestos que contienen
grupos carboxilo son bien conocidos por los expertos en la técnica
y se describen en T.W. Greene, et al., "Protective Groups in
Organic Synthesis", Segunda Edición, John Wiley & Sons, New
Cork (1991). En esta secuencia de reacción, la alquilación reductora
puede llevarse a cabo de la misma manera sin la adición de una
base, y empleando los mismos catalizadores de hidrogenación o
agentes reductores que se han descrito anteriormente. La reacción
también puede llevarse a cabo en disolventes orgánicos tales como
acetato de etilo, acetato de propilo, acetato de isopropilo,
acetato de butilo, tetrahidrofurano (THF), éter dietílico, éter
tert-butilmetílico y tolueno.
Esquema
II
Como se habrá notado previamente, otra
realización de este invento va dirigida a métodos para preparar
éster 1-metílico de
N-[N-(3,3-dimetilbutil)-L-\alpha-aspartil]-L-fenilalanina
vía acoplamiento péptido de un derivado inactivo del ácido
N-(3,3-dimetilbutil)-L-aspártico
con L-fenilalanina o un éster de
L-fenilalanina. De acuerdo con el presente invento,
el derivado inactivo del ácido
N-(3,3-dimetilbutil)-L-aspártico
incluye el anhídrido o anhídridos mezclados del ácido aspártico,
así como también derivados activos intermedios, que pueden o no
aislarse, formado por tratamiento del ácido aspártico, o un ácido
aspártico protegido, con un agente de acoplamiento péptido. Los
métodos de acoplamiento péptido son bien conocidos por los expertos
en la técnica y se describen en M. Bodansky, et al., "The
Practice of Peptide Synthesis, Reactivity and Structure, Concepts
in Organic Chemistry" Volumen 21, Segunda Edición Revisada,
Springer-Verlag, New York, New York (1994).
En una primera realización del método de
acoplamiento péptido de este invento, el enlace amida péptido del
éster 1-metílico de
N-[N-(3,3-dimetilbutil)-L-\alpha-aspartil]-L-fenilalanina
se forma por condensación de L-fenilalanina o éster
metílico de L-fenilalanina con el anhídrido del
ácido
N-(3,3-dimetilbutil)-L-aspártico,
en lo sucesivo anhídrido
N-neohexil-L-aspártico.
El Esquema III muestra la preparación de anhídrido
N-neohexil-L-aspártico
y el Esquema IV ilustra la preparación de éster
1-metílico de
N-[N-(3,3-dimetilbutil)-L-\alpha-aspartil]-L-fenilalanina
a través de esta primera realización. En las estructuras de los
siguientes Esquemas III a IV, el grupo
N-(3,3-dimetilbutil), o neohexilo, se abrevia como
"Neo".
Esquema
III
El anhídrido
N-neohexil-L-aspártico
puede prepararse por deshidratación del ácido
N-neohexil-L-aspártico
empleando un agente deshidratante. Las reacciones de deshidratación
son conocidas por los expertos en la técnica y pueden llevarse a
cabo empleando condiciones de reacción conocidas. Agentes
deshidratantes ejemplares incluyen pentóxido de fósforo, tricloruro
de fósforo, ácido fosfórico, anhídrido de ácido, tales como
anhídrido acético y anhídrido fórmico, carbodiimidas, tales como
diciclohexil carbodiimida (DCC).
De manera opcional, antes de la formación del
anhídrido, el grupo amino del ácido
N-neohexil-L-aspártico
puede protegerse mediante la formación de ácido
N-neohexil-L-aspártico
N-protegido. Los grupos
protectores-amino que son útiles para ser
utilizados en este invento deben ser estables frente a las
condiciones de reacción de deshidratación y debe ser posible su
eliminación de la
N-neohexil-L-\alpha-aspartil-L-fenilalanina
o su éster metílico sin racemización. Generalmente, los grupos
protectores-amino apropiados son grupos protectores
de tipo carbamato o amida. Grupos protectores-amino
ejemplares incluyen formilo, acetilo, benciloxicarbonilo,
tert-butoxicarbonilo y
p-metoxibenciloxicarbonilo. Los métodos para
proteger y desproteger los compuestos que contienen nitrógeno
empleando estos grupos son bien conocidos por los expertos en la
técnica y se describen en T.W. Greene, et al., supra.
Preferiblemente, el grupo protector de nitrógeno
es tanto benciloxicarbonilo, formilo como acetilo y más
preferiblemente formilo. El ácido
N-benciloxicarbonil-N-neohexil-L-aspártico
puede formarse por reacción del ácido
N-neohexil-L-aspártico
con cloroformiato de bencilo. El ácido
N-formil-N-neohexil-L-aspártico
puede prepararse por reacción del ácido
N-neohexil-L-aspártico
con un agente formilante tal como anhídrido fórmico o ácido fórmico
y anhídrido acético. El ácido
N-acetil-N-neohexil-L-aspártico
puede prepararse por reacción del ácido
N-neohexil-L-aspártico
con un agente acetilante tal como anhídrido acético. De manera
ventajosa, en el presente invento, la utilización de anhídrido
fórmico o anhídrido acético, como agente deshidratante, en presencia
de un ácido tal como ácido fórmico o ácido fosfórico, proporciona
la formación de anhídrido
N-neohexil-L-aspártico
a partir tanto del ácido
N-neohexil-L-aspártico
como del ácido
N-neohexil-L-aspártico
N-protegido.
Esquema
IV
La formación del enlace péptido amida del éster
1-metílico de
N-[N-(3,3-dimetilbutil)-L-\alpha-aspartil]-L-fenilalanina
puede lograrse por condensación del anhídrido
N-neohexil-L-aspártico
con L-fenilalanina, tal como se muestra en el
Esquema IV. La formación del enlace amida ocurre haciendo reaccionar
cantidades equimolares del anhídrido aspártico y fenilalanina en un
disolvente inerte. La reacción puede llevarse a cabo a
20-100ºC. Disolventes inertes ejemplares, apropiados
para su utilización en la reacción de formación del enlace amida,
incluyen tolueno, acetato de metilo, acetato de etilo,
tetrahidrofurano, acetonitrilo, dioxano y dimetilformamida (DMF) que
contengan o no ácidos orgánicos, tales como ácido acético, ácido
propiónico, ácido butírico y ácido isobutírico.
La reacción de condensación del anhídrido
N-neo-L-aspártico
con L-fenilalanina produce una mezcla de dos
productos amida,
N-neohexil-\alpha-L-aspartil-L-fenilalanina
y
N-neohexil-\beta-L-aspartil-L-fenilalanina.
El anhídrido
N-neo-L-aspártico es
un anhídrido asimétrico; es decir, el anhídrido aspártico y el ácido
aspártico precursor contienen dos grupos carboxilo diferentes
designados como \alpha y \beta, basado en su relación con el
grupo de nitrógeno. Los productos amida \alpha y \beta se forman
por reacción de la fenilalanina bien con el grupo
\alpha-carboxilo o
\beta-carboxilo del anhídrido.
Ambas amidas \alpha y \beta del ácido
aspártico se obtienen a partir de la condensación del anhídrido
N-neohexil-L-aspártico
y L-fenilalanina. Generalmente, la relación de
isómeros obtenida en esta reacción de condensación es de 2:1 a
3:1.
La esterificación con metanol de la mezcla de
amidas \alpha y \beta del ácido aspártico, en un ácido, da
lugar a la formación de una mezcla de producto \alpha y \beta.
El éster 1-metílico de
N-[N-(3,3-dimetilbutil)-L-\alpha-aspartil]-L-fenilalanina
deseado puede aislarse en forma pura sometiendo a esta mezcla a
cristalización o a cromatografía en columna. La utilización de
metanol y agua, tal como se ha descrito, por ejemplo, en la patente
de EE.UU. Nº.5.728.862, cuya descripción se incorpora en la
presente memoria como referencia, proporciona un rendimiento
excelente del producto alfa de alta pureza.
De manera alternativa, el éster
1-metílico de
N-[N-(3,3-dimetilbutil)-L-\alpha-aspartil]-L-fenilalanina
puede formarse directamente empleando el método de acoplamiento
péptido del presente invento vía condensación del anhídrido
N-neohexil-L-aspártico
con éster metílico de L-fenilalanina, como se
muestran en el Esquema V.
Esquema
V
La reacción de acoplamiento péptido puede
llevarse a cabo bajo las mismas condiciones útiles para el
acoplamiento de L-fenilalanina, descrito
anteriormente. Esta reacción de acoplamiento forma una mezcla de
éster 1-metílico de
N-[N-(3,3-dimetilbutil)-L-\alpha-aspartil]-L-fenilalanina
y éster 1-metílico de
N-[N-(3,3-dimetilbutil)-L-\beta-aspartil]-L-fenilalanina,
generalmente, con una relación de 2:1 a 3:1. El éster
1-metílico de
N-[N-(3,3-dimetilbutil)-L-\alpha-aspartil]-L-fenilalanina
puede obtenerse con alta pureza por
re-cristalización de la mezcla de neotame,
empleando metanol y agua o mediante cromatografía en columna
empleando gel de sílice o resinas.
El Esquema VI muestra otra realización del método
de acoplamiento péptido de este invento para la preparación de
éster 1-metílico de
N-[N-(3,3-dimetilbutil)-L-\alpha-aspartil]-L-fenilalanina.
Esquema
VI
En esta realización, la formación del enlace
péptido amida del éster 1-metílico de
N-[N-(3,3-dimetilbutil)-L-\alpha-aspartil]-L-fenilalanina
se logra mediante condensación del éster metílico de
L-fenilalanina con un anhídrido mixto del ácido
N-neohexil-L-aspártico.
Un anhídrido mixto es un anhídrido que procede de dos compuestos
diferentes que contienen ácidos carboxílicos, o puede formarse in
situ a partir de un compuesto que contiene ácido carboxílico y
un derivado de ácido fosfórico, tal como
o-fenilenfosfocloridita. Una categoría especial de
anhídridos mixtos son los
N-carboxi-anhídridos o anhídridos de
Leuch, preparados mediante el tratamiento de un aminoácido, por
ejemplo, ácido aspártico \beta-protegido, con
fosgeno, o mediante calentamiento de cloruros de benciloxicarbonil
aminoácidos. Estos anhídridos mixtos pueden obtenerse con alta
eficiencia utilizando métodos conocidos en la técnica.
Preferiblemente, el anhídrido mixto del ácido
N-neohexil-L-aspártico
se prepara mediante reacción del ácido aspártico con un agente
acilante, tal como cloruro de alquilo o arilo, cloroformiato,
clorocarbonato o imida. Típicamente, la reacción se lleva a cabo en
presencia de una base no nucleófila a temperatura ambiente o
reducida. Bases no nucleófilas ejemplares incluyen, carbonatos
alcalinos, tales como carbonato de sodio, aminas alquílicas, tales
como aminas terciarias, trietilamina o N-metil
morfolina y aminas aromáticas, tales como piridina. La reacción
puede llevarse a cabo en un disolvente, tal como tolueno, DMF,
acetonitrilo, acetato de metilo y dioxano. De manera alternativa,
también pueden utilizarse aminas básicas, por ejemplo, trietilamina
o piridina, como disolventes de reacción apropiados. Reactivos
acilantes ejemplares incluyen, pero no se limitan a, cloruros de
ácidos tales como cloruro de pivaloilo, cloruro de isovalerilo,
cloruro de benzoilo, cloruro de
p-nitro-benzoilo, cloruro de
pentaclorobenzoilo, cloruro de pentafluorobenzoilo, cloroformiatos,
tales como cloroformiato de butilo terciario, cloroformiato de
isopropilo, cloroformiato de isobutilo, clorocarbonatos, tales como
clorocarbonato de isobutilo, clorocarbonato de etilo y similares, o
imidas tales como N-hidroxi succinimida,
N-hidroxisuccinimida.
Como se ha indicado anteriormente, el ácido
N-neohexil-L-aspártico
contiene dos grupos carboxilo diferentes, \alpha- y \beta-, y
cualquiera de estos grupos carboxílicos puede participar en la
reacción para formar el anhídrido mixto. Por consiguiente, uno de
los grupos carboxilo, el carboxilo-\beta, está
protegido de manera opcional para que la formación del anhídrido
mixto, y la eventual formación del enlace péptido amida, ocurra de
manera selectiva en el grupo
\hbox{carboxilo- \alpha }. El grupo
carboxilo-\beta puede protegerse con un grupo
protector-carbonilo que no sea reactivo ni en la
reacción de formación del anhídrido ni en la reacción de
acoplamiento péptido y que puede eliminarse del producto final, el
éster 1-metílico de
N-[N-(3,3-dimetilbutil)-L-\alpha-aspartil]-L-fenilalanina,
sin racemización o degradación de dicho producto. De manera
opcional, el grupo carboxilo-\beta se protege por
conversión en un grupo éster. Grupos éster ejemplares, incluyen
éster de tert-butilo, éster de sililo y ésteres de
bencilo. Los métodos para proteger y desproteger los compuestos que
contienen carboxilo son bien conocidos por los expertos en la
técnica y se describen en T.W. Greene, et al., supra.
El grupo carboxilo-\beta del
ácido
N-neohexil-L-aspártico
se protege en la etapa anterior a la reacción de formación del
anhídrido. De manera opcional, el grupo
carboxilo-\beta se protege en la etapa anterior a
la formación del ácido
N-neohexil-L-aspártico
por alquilación reductora. También pueden formarse ésteres
\beta-carboxílicos por reacción de anhídrido
N-neohexil-L-aspártico
con un alcohol. El Esquema VI muestra la preparación de ácido
N-neohexil-L-aspártico
\beta-protegido, mediante la alquilación
reductora de ácido L-aspártico
\beta-protegido con
3,3-dimetilbutiraldehído. La reacción de
alquilación reductora puede llevarse a cabo empleando las
condiciones y reactivos que se han descrito anteriormente. El ácido
N-neohexil-L-aspártico
\beta-protegido, preparado según el método de
acuerdo con el método del Esquema VI, puede tratarse con un agente
acilante, de acuerdo con el método del Esquema V, descrito
anteriormente, para formar un anhídrido mixto (R es alquilo o
arilo). La formación del enlace péptido amida puede lograrse por
condensación del anhídrido mixto del
N-neohexil-L-aspartato
\beta-protegido con éster metílico de
L-fenilalanina, empleando condiciones de
acoplamiento descritas anteriormente. El éster
1-metílico de
N-[N-(3,3-dimetilbutil)-L-\alpha-aspartil]-L-fenilalanina
puede prepararse mediante la desprotección, es decir, eliminando el
grupo protector-\beta, a partir del éster
1-metílico de
N-[N-(3,3-dimetilbutil)-L-\alpha-aspartil]-L-fenilalanina
\beta-protegido resultante empleando las
condiciones de reacción conocidas en la técnica. Si se desea, es
posible purificar posteriormente el éster 1-metílico
de
N-[N-(3,3-dimetilbutil)-L-\alpha-aspartil]-L-fenilalanina
mediante cristalización a partir de metanol/agua o mediante
cromatografía en columna.
El Esquema VII muestra otra realización del
método de acoplamiento péptido de este invento para la preparación
de éster 1-metílico de
N-[N-(3,3-dimetilbutil)-L-\alpha-aspartil]-L-fenilalanina.
Esquema
VII
En esta realización, se logra la formación del
enlace péptido amida del éster 1-metílico de
N-[N-(3,3-dimetilbutil)-L-\alpha-aspartil]-L-fenilalanina
mediante condensación directa de un éster de
L-fenilalanina con un ácido
N-neohexil-L-aspártico
empleando un agente de acoplamiento péptido. Los agentes de
acoplamiento péptido apropiados actúan para formar un derivado
intermedio activo del grupo ácido carboxílico del ácido
N-neohexil-L-aspártico.
El derivado intermedio activo del ácido aspártico, que puede
aislarse o no, experimenta reacción con el grupo nitrógeno del éster
1-metílico de L-fenilalanina para
formar el enlace péptido amida del éster 1-metílico
de
N-[N-(3,3-dimetilbutil)-L-\alpha-aspartil]-L-fenilalanina.
Un ejemplo de derivado activo del ácido aspártico que puede
aislarse es un cloruro de aspartilo
\beta-protegido, que experimenta acoplamiento
péptido mediante formación de amida simple por reacción del cloruro
de ácido y fenilalanina o éster metílico de fenilalanina. Ejemplos
de otros derivados activos aislables incluyen hidrazidas y ésteres
activos. Los derivados hidrazida del ácido aspártico
\beta-protegido puede formarse utilizando un
hidrato de hidrazina o derivados de hidracinas de acuerdo con
procedimientos convencionales. El acoplamiento de los derivados
aspartil hidrazida \beta-protegidos puede
lograrse mediante la conversión de la hidrazida en azida, seguida
de tratamiento con fenilalanina o éster metílico de fenilalanina.
Pueden formarse derivados éster activos del ácido aspártico
\beta-protegido empleando técnicas de
esterificación convencionales. Derivados éster activos útiles en las
reacciones de acoplamiento péptido incluyen, pero no se limitan a,
ésteres de cyanometilo, ésteres de p-nitrofenilo,
ésteres de 2,4,5-trinitrofenilo, ésteres de
pentaclorofenilo, ésteres de pentafluorofenilo, ésteres de
tert-butiloxicarbonilamino pentafluorofenilo,
ésteres de N-hidroxiftalimida, ésteres de
N-hidroxisuccinimida, ésteres de
1-hidroxipiridina, ésteres de
5-cloro-8-hidroxi-quinolina
y similares. El acoplamiento de los derivados éster activos con
fenilalanina o éster metílico de fenilalanina puede lograrse por
reacción simple de los dos materiales en condiciones de reacción
ácidas, neutras o básicas convencionales. De manera alternativa, la
reacción de acoplamiento de éster activo puede catalizarse
empleando reactivos convencionales de acoplamiento, tales como
imidazol, 1-hidroxibenzotriazol o
3-hidroxi-3,4-dihidro-quinazolin-4-ona.
Típicamente, el derivado activo de ácido
aspártico no se aísla, pero se forma en condiciones de reacción
como producto intermedio que participa en la formación del enlace
péptido amida. Preferiblemente, el derivado activo intermedio de
ácido aspártico se prepara por reacción de ácido
N-neohexil-L-aspártico
\beta-protegido con un agente de acoplamiento
péptido. El grupo \beta-carboxilo del ácido
N-neohexil-L-aspártico
puede protegerse con cualquier grupo
protector-carboxilo apropiado que no sea reactivo
en la reacción de acoplamiento péptido y que pueda ser eliminado del
producto final, el éster 1-metílico de
N-[N-(3,3-dimetilbutil)-L-\alpha-aspartil]-L-fenilalanina,
sin racemización o degradación de dicho producto. Los ácidos
aspárticos \beta-protegidos apropiados se han
descrito anteriormente. Agentes de acoplamiento péptido que son
útiles en el método del presente invento incluyen, pero no se
limitan a, diciclohexil carbodiimida (DCC),
DCC/1-hidroxibenzotriazol,
DCC/N-hidroxisuccinimida,
1-isobutoxicarbonil-2-isobutoxi-1,2-dihidroquinona
(IIDQ), carbonildiimidazol,
N-etil-5-fenilisoxazolio-3'-sulfonato
(Reactivo de Woodward K), hexafluorofosfato de
benzotriazolil-N-hidroxitris(dimetilamino)fosfonio
(BOP). Los agentes de acoplamiento péptido descritos anteriormente y
los métodos para la utilización de estos agentes, y otros, pueden
encontrarse en cualquiera de las revisiones del asunto, por ejemplo
M. Bodansky, et al., supra.
En otra realización de este invento, pueden
utilizarse métodos enzimáticos para formar el enlace péptido amida
del éster 1-metílico de
N-[N-(3,3-dimetilbutil)-L-\alpha-aspartil]-L-fenilalanina,
como se muestra en el Esquema VIII.
Esquema
VIII
De acuerdo con esta realización, se puede hacer
reaccionar el ácido
N-neohexil-L-aspártico
con éster metílico de L-fenilalanina, en presencia
de la enzima proteasa, papaína, para proporcionar
\alpha-neotame. También puede emplearse el ácido
N-neohexil-L-aspártico
N-protegido para formar el producto péptido
acoplado. La eliminación del grupo protector de nitrógeno
proporciona el éster 1-metílico de
N-[N-(3,3-dimetilbutil)-L-\alpha-aspartil]-L-fenilalanina.
El disolvente en el que se lleva a cabo la reacción puede
escogerse de forma tal, que el producto deseado sea insoluble, o
ligeramente soluble en el disolvente, dando como resultado un
cambio en el equilibrio de reacción para favorecer la formación del
péptido. Grupos protectores de nitrógeno, útiles en el método
enzimático de este invento pueden incluir cualquiera de los grupos
protectores descritos anteriormente. Preferiblemente, acetoacetilo,
acetilo, benzoilo, benciloxicarbonilo,
tert-butiloxicarbonilo, formilo, isovalerilo,
(p-metoxibencil)oxicarbonilo o fenilacetilo.
Preferiblemente, el grupo protector de nitrógeno es
benciloxicarbonilo. Disolventes útiles en los que puede llevarse a
cabo la reacción de acoplamiento enzimático incluyen los que son
miscibles o inmiscibles con agua. Disolventes ejemplares incluyen
co-disolventes orgánicos tales como glicerol y otros
glicoles, acetonitrilo, acetato de etilo, alcohol
tert-amílico y fosfato de trietilo. También pueden
utilizarse sistemas de disolventes mixtos, tales como acetato de
etilo y alcohol tert-amílico.
Una vez que se ha completado la reacción de
acoplamiento empleando cualquiera de los métodos descritos
anteriormente, cualquier grupo protector que se encuentre presente
sobre el grupo de ácido aspártico (por ejemplo, grupos protectores
de nitrógeno o grupos protectores de
\beta-carboxilo) puede eliminarse empleando
procedimientos típicos de desprotección. El éster
1-metílico de
N-[N-(3,3-dimetilbutil)-L-\alpha-aspartil]-L-fenilalanina
puede purificarse posteriormente mediante cristalización a partir de
metanol/agua o mediante cromatografía en columna.
Se pretende que los siguientes ejemplos sean una
ilustración de determinadas realizaciones preferidas del invento, y
no suponen una limitación del invento.
Procedimiento
A
Se añadió ácido L-aspártico (4 g,
0,03 moles) a una botella Parr que contenía una disolución de
bicarbonato de sodio (5,04 g, 0,06 moles) en agua (50 mL) para
formar una disolución transparente, con efervescencia. A
continuación, se añadió una disolución de
3,3-dimetilbutiraldehído (3 g, 0,03 moles) en
metanol (50 mL) a la botella Parr, seguido de Pd/C (paladio sobre
carbono al 4%, 50% de humedad, 0,4 g). La mezcla se hidrogenó a 50
psi/temperatura ambiente durante 2 días. Si la reacción no es
completa, se añade Pd/C nuevo (0,2 g) y se continúa la
hidrogenación durante 8 horas más. Se filtró la mezcla a través de
un lecho de Celite*, y se lavó el lecho con metanol (20 mL). El
filtrado y los lavados se combinaron y se concentraron a presión
reducida a 40-50ºC. El pH de la disolución acuosa
restante se ajustó a 3 con ácido clorhídrico concentrado. El
precipitado sólido se filtró y se secó a vacío a 50ºC durante 4
horas para dar 4,75 g (73%) de ácido
N-neohexil-L-aspártico
bruto. Se formó un lodo a partir del producto bruto con etanol
acuoso (47,5, 80% de etanol, 20% de agua) durante 15 minutos y se
filtró para dar 3,3 g (51%) de ácido
N-neohexil-L-aspártico
de pureza > 98%. P. F. 184-186ºC;
[\alpha]_{D} +12,35 (c=1, agua); RMN (D_{2}O) \delta
3,37 (t, 3H); 2,25-2,65 (m, 4H);
1,27-1,47 (m, 2H); 0,89 (s, 9H), Anal. calculado de
C_{10}H_{19}NO_{4}; C, 55,28; H, 8,81; N, 6,45; Encontrado;
C,55,35; H, 8,86; N, 6,50.
Procedimiento
B
Se añadió hidrogenocarbonato de sodio (1,68 g,
0,02 moles) a una botella Parr que contenía una disolución de
hidrocloruro de L-aspartato de dimetilo (3,94 g,
0,02 moles) en agua (10 mL), seguida de la adición de
3,3-dimetilbutiraldehído (2,2 g, 0,02 moles) en
metanol (100 mL) y Pd/C (paladio sobre carbono al 4%, 50% de
humedad), 10% en peso de substrato. La mezcla se hidrogenó a 50 psi
a temperatura ambiente durante 1,5 horas, a continuación se filtró
a través de un lecho de Celite* y se lavó el lecho con metanol (10
mL). El filtrado y los lavados se concentraron a presión reducida.
La disolución acuosa residual se extrajo con éter dietílico (2 x
100 mL). La fase orgánica se lavó con una disolución acuosa
saturada de hidrogenocarbonato de sodio (50 mL), se secó sobre
sulfato de magnesio anhidro, se filtró y se concentró para dar el
éster dimetílico del ácido
N-neohexil-L-aspártico
(4,65 g, 95%) en forma de aceite. RMN (CDCI_{3}) \delta 3,67
(s, 3H); 3,50 (s, 3H); 3,57 (t, 3H); 2,37-2,70 (m,
4H); 1,20-1,40 (m, 2H); 0,80 (s, 9H).
Se calentó a reflujo durante 4 horas una mezcla
de éster dimetílico de ácido
N-neohexil-L-aspártico
(15 g, 0,061 moles) en ácido clorhídrico 1N (350 mL) para formar
una disolución transparente. La mezcla se secó por congelación para
dar hidrocloruro
N-neohexil-L-aspártico
en forma de sólido de color blanco (14 g, 91%), P.F.
133-138ºC, [\alpha]_{D} +14,69 (c=1,
agua). Anal. calculado de C_{10}H_{19}NO_{4} \cdot HCl; C,
47,52; H, 7,92; N, 5,54; Cl,14,05. Encontrado: C, 47,84; H, 8,14; N,
5,31; Cl, 13,08.
Se añadió
3,3-dimetilbutiraldehído puro (3 g, 0,03 moles) a un
lodo de ácido L-aspártico (4 g, 0,03 moles) en
metanol/agua 1:1 (80 mL), seguido de Pd/C (4%, 50% de humedad, 0,5
g). Se hidrogenó la mezcla empleando H_{2}(50 psi) a
temperatura ambiente durante 2 días. La mezcla de reacción
resultante se filtró a través de un lecho de Celite*, y el lecho se
lavó con metanol (50 mL). El filtrado y los lavados se combinaron y
se eliminó el metanol empleando un evaporador rotatorio a presión
reducida a 40-50ºC para proporcionar el ácido
N,N-dineohexil-L-aspártico
en forma de precipitado sólido en agua. El sólido se filtró, se
lavó con agua (2 mL) y se secó en un horno a vacío a 50ºC durante 4
horas para proporcionar 3,2 g de ácido
N,N-di-neohexil-L-aspártico
(36%), P.F. 197-198ºC, [\alpha]_{D} -3
(c=1, metanol). Anal. calculado de C_{10}H_{31}NO_{4}; C,
63,78; H, 10,29; N, 4,65; Encontrado: C, 63,43; H, 10,29; N,
4,70.
Procedimiento
A
Se añadió tricloruro de fósforo (3,7 ml, 43
mmoles), gota a gota, a ácido
N-neohexil-L-aspártico
en forma de lodo a 10ºC (11,6 g, 53,4 mmoles) en ácido acético
glacial (50 ml). Tras completar la adición (0,5 hr), la disolución
transparente resultante se agitó a temperatura ambiente durante la
noche. Se recogió el precipitado sólido resultante mediante
filtración a vacío, se lavó con ácido acético y cloruro de metileno,
a continuación se secó a 35-40ºC durante 3 horas
para dar 3,62 g (69,8%) de anhídrido
N-neohexil-L-aspártico
puro.
Procedimiento
B
Se disuelve hidrocloruro
N-neohexil-L-aspártico
en una disolución acuosa de bicarbonato de sodio bajo agitación. Se
enfría la disolución, y se trata con cloruro de benciloxicarbonilo
e hidróxido de sodio acuoso, añadidos poco a poco, de manera
alternativa, bajo agitación enérgica. La mezcla de reacción
resultante se agita a temperatura ambiente durante alrededor de 3
horas. Se extrae la disolución dos veces con éter dietílico y se
acidifica con ácido clorhídrico concentrado hasta el punto final
del azul de Congo. El ácido
N-benciloxicarbonil-N-neohexil-L-aspártico
se separa en forma de sólido o de aceite que solidifica lentamente.
Se enfría la mezcla de reacción resultante a
10-15ºC durante varias horas y el sólido resultante
se recoge por filtración, se lava con agua y se seca a vacío. El
ácido
N-benciloxicarbonil-N-neohexil-L-aspártico
puede utilizarse según se obtiene o puede
re-cristalizarse en un disolvente adecuado.
Se calienta a reflujo durante 0,5 a 5 horas una
disolución de ácido
N-benciloxicarbonil-N-neohexil-L-aspártico,
en anhídrido acético con una cantidad catalítica de ácido
fosfórico, se enfría a temperatura ambiente y se concentra a presión
reducida, con calentamiento. El material residual se disuelve en
agua y a continuación se neutraliza con hidróxido de sodio acuoso.
Se recoge el precipitado resultante por filtración a vacío y se
re-cristaliza para proporcionar anhídrido
N-neohexil-L-aspártico
considerablemente puro.
Procedimiento
A
Se añaden anhídrido
N-neohexil-L-aspártico
y L-fenilalanina a dioxano seco y la disolución se
agita a 20-80ºC durante 1-8 horas.
La mezcla de reacción resultante se diluye con un disolvente
orgánico que no sea miscible en agua, se lava sucesivamente con
KHCO_{3} acuoso, a continuación con HCl acuoso, se seca sobre
Na_{2}SO_{4} anhidro y se evapora a sequedad a presión
reducida, proporcionando una mezcla de amidas:
N-neohexil-\alpha-L-aspartil-L-fenilalanina
y
N-neohexil-\beta-L-aspartil-L-fenilalanina.
La mezcla de amidas se disuelve en una disolución de metanol/ácido
clorhídrico y la mezcla de reacción resultante se agita a
20-80ºC durante 1-8 horas para
formar una mezcla de éster 1-metílico de
N-[N-(3,3-dimetilbutil)-L-\alpha-aspartil]-L-fenilalanina
y éster 1-metílico de
N-[N-(3,3-dimetilbutil)-L-\beta-aspartil]-L-fenilalanina.
La recristalización de la mezcla de \alpha- y
\beta-aspartame a partir de metanol/agua o la
cromatografía en columna sobre gel de sílice empleando acetato de
etilo:metanol:hexano (60:30:10) como eluyente proporciona éster
1-metílico de
N-[N-(3,3-dimetilbutil)-L-\alpha-aspartil]-L-fenilalanina
puro.
Procedimiento
B
Se calentó a 55-60ºC durante 3
horas una mezcla de hidrocloruro
N-neohexil-L-aspártico
(2 g, 8,5 mmoles) y éster metílico de L-fenilalanina
en tolueno seco (13 ml), se enfrió a temperatura ambiente, y se
dejó en reposo durante la noche. La mezcla de reacción resultante
se concentró a sequedad a presión reducida a
40-45ºC. El material sólido residual se disolvió en
acetato de etilo (20 ml), se lavó sucesivamente con agua (10 ml),
KHCO_{3} acuoso y HCl acuoso, se secó sobre Na_{2}SO_{4}
anhidro y se evaporó a sequedad a presión reducida para
proporcionar una mezcla de éster 1-metílico de
N-[N-(3,3-dimetilbutil)-L-\alpha-aspartil]-L-fenilalanina
y éster 1-metílico de
N-[N-(3,3-dimetilbutil)-L-\beta-aspartil]-L-fenilalanina
(3 g). La recristalización de la mezcla de \alpha- y
\beta-aspartame a partir de metanol/agua o la
cromatografía en columna sobre gel de sílice empleando acetato de
etilo:metanol:hexano (60:30:10) como eluyente proporciona éster
1-metílico de
N-[N-(3,3-dimetilbutil)-L-\alpha-aspartil]-L-fenilalanina
puro.
Procedimiento
C
Se añadió una disolución de
3,3-dimetilbutiraldehido (1 mmol) en metanol (30
ml) a una disolución en metanol de éster
\beta-t-butílico de ácido
L-aspártico en una botella Parr, seguido de una
adición de Pd/C (0,1 mmoles). La mezcla se hidrogenó a 50 psi a
temperatura ambiente durante 1 hora. Si la reacción no es completa,
puede añadirse más Pd/C y la hidrogenación continúa. La mezcla de
reacción se filtró a través de un lecho de Celite*, y el lecho se
lavó con metanol. El filtrado y los lavados se combinaron, y el
metanol se eliminó a presión reducida. Se ajustó a 3 el pH de la
disolución acuosa restante con ácido clorhídrico concentrado. El
precipitado sólido se filtró y se secó en un horno a vacío para dar
el hidrocloruro del éster
\beta-t-butílico de ácido
N-neohexil-L-aspártico
puro. Se formó un lodo con el producto puro y metanol acuoso y se
filtró para dar el hidrocloruro del éster
\beta-t-butílico de ácido
N-neohexil-L-aspártico
puro con un rendimiento de 90%.
Se añadieron de forma secuencial
hexafluorofosfato de
benzotriazolil-N-hidroxitris(dimetianimo)fosfonio
(BOP, 3,7 mmoles) y trietil amina (7,4 mmoles) a una disolución
agitada de éster \beta-t-butílico
de ácido
N-neohexil-L-aspártico
y hidrocloruro del éster metílico de fenilalanina (3,7 mmoles) en
DMF/acetonitrilo (15/20 ml) y la mezcla resultante se dejó agitando
a temperatura ambiente durante la noche. La adición de salmuera (60
ml) dio como resultado la formación instantánea de un precipitado
de color blanco. La suspensión resultante se agitó durante 2 horas y
se transfirió a un embudo de decantación. Se extrajo la fase acuosa
con acetato de etilo (1 x 200 mL, 2 x 50-80 mL).
Los extractos de acetato de etilo se combinaron y se lavaron
sucesivamente con HCl 1N (2 x 100 mL), agua (1 x 100 mL),
NaHCO_{3}saturado (2 x 100 mL), y salmuera (1 x 100 mL), y se
secaron sobre MgSO_{4}, se filtraron y se evaporaron hasta dar un
aceite de color amarillento con un rendimiento cuantitativo. Este
aceite se disolvió en acetato de etilo (30 mL) y se trató con ácido
clorhídrico (4,3 M, 20 mL), con agitación, durante 6 horas a
temperatura ambiente. Se ajustó a 5,2 el pH de la mezcla y se
transfirió a un embudo de decantación. Se separó la fase orgánica.
La fase acuosa se extrajo con acetato de etilo (3 x 30 mL) y los
extractos de acetato de etilo se secaron sobre MgSO_{4} anhidro,
se filtraron y se evaporaron hasta sequedad. La recristalización del
producto puro sobre metanol 25%- agua 75% (30 mL) dio 2,5 g de
éster 1-metílico de
N-[N-(3,3-dimetilbutil)-L-\alpha-aspartil]-L-fenilalanina
puro.
Se añadió papaína (180 mg) a una mezcla de
disolución tampón de Mc Ilvaine (pH 5,5) y etanol (disolución
tampón al 60%/etanol al 40%, volumen total; 3 mL) que contenía
mercaptoetanol (100 mmoles), ácido
neohexil-L-aspártico (200 mmoles) y
éster metílico de L-fenilalanina (200 mmoles). La
mezcla se agitó durante 20 horas a temperatura ambiente. Los
productos de reacción pueden separarse por cromatografía utilizando
acetato de etilo:metanol:hexano (60:30:10) como eluyente para
proporcionar \alpha- neotame puro.
Claims (29)
1. Un compuesto representado por la fórmula
en el que R^{1} y R^{2} son de forma
independiente hidroxi o alcoxi que tienen de 1 a 6 átomos de
carbono o juntos son oxígeno, formando uno de sus anhídridos; y Q es
hidrógeno o
(CH_{3})_{3}C(CH_{2})_{2}-.
2. Un compuesto de acuerdo con la reivindicación
1, en el que Q es hidrógeno.
3. Un compuesto de acuerdo con la reivindicación
1, en el que R^{1} y R^{2} son hidroxi o metoxi.
4. El compuesto ácido
N-(3,3-dimetilbutil)-L-aspártico.
5. El compuesto ácido
N,N-di-(3,3-dimetilbutil)-L-aspártico.
6. El compuesto anhídrido
N-(3,3-dimetilbutil)-L-aspártico.
7. Un procedimiento para preparar ácido
N-(3,3-dimetilbutil)-L-aspártico,
que comprende la etapa de alquilación reductora del ácido
L-aspártico y
3,3-dimetilbutiraldehído.
8. Un procedimiento para preparar ácido
N-(3,3-dimetilbutil)-L-aspártico
o sus derivados representado por la fórmula
en la que R^{1} y R^{2} son de forma
independiente hidroxi o alcoxi inferior que tienen de 1 a 6 átomos
de carbono o juntos son oxígeno, formando un anhídrido, y Q es
hidrógeno o (CH_{3})_{3}C(CH_{2})_{2}-,
comprendiendo dicho procedimiento la etapa de alquilación
reductora
de
en la que R^{1} y R^{2} son como se ha
descrito anteriormente, con
3,3-dimetilbutiraldehído.
9. Un procedimiento de acuerdo con la
reivindicación 8, en el que la alquilación reductora se lleva a
cabo utilizando paladio sobre carbono en una atmósfera de hidrógeno
con bicarbonato de sodio.
10. Un procedimiento de acuerdo con la
reivindicación 9, en el que Q es hidrógeno.
11. Un procedimiento de acuerdo con la
reivindicación 10, en el que R^{1} y R^{2} son hidroxi.
12. Un procedimiento de acuerdo con la
reivindicación 10, en el que R^{1} y R^{2} son metoxi.
13. Un procedimiento para preparar éster
1-metílico de
N-[N-(3,3-dimetilbutil)-L-\alpha-aspartil]-L-fenilalanina,
que comprende las etapas de:
(a) condensar anhídrido
N-(3,3-dimetilbutil)-L-aspártico
con éster metílico de L-fenilalanina para formar
una mezcla de éster 1-metílico de
N-[N-(3,3-dimetilbutil)-L-\alpha-aspartil]-L-fenilalanina
y éster 1-metílico de
N-[N-(3,3-dimetilbutil)-L-\beta-aspartil]-L-fenilalanina;
y
(b) aislar dicho éster 1-metílico
de
N-[N-(3,3-dimetilbutil)-L-\alpha-aspartil]-L-fenilalanina
de dicha mezcla.
14. Un procedimiento de acuerdo con la
reivindicación 13, que además comprende la etapa de formar anhídrido
N-(3,3-dimetilbutil)-L-aspártico
por deshidratación de un ácido N-(3,3-dimetilbutil)
aspártico N-protegido.
15. Un procedimiento de acuerdo con la
reivindicación 14, en el que la deshidratación del ácido aspártico
se lleva a cabo utilizando anhídrido acético.
16. Un procedimiento de acuerdo con la
reivindicación 14, en el que ácido
N-(3,3-dimetilbutil)-L-aspártico
N-protegido es ácido
N-formil-N-(3,3-dimetil-butil)-L-aspártico,
ácido
N-acetil-N-(3,3-dimetilbutil)-L-aspártico
o ácido
N-beniciloxicarbonil-N-(3,3-dimetil-butil)-L-aspártico.
17. Un procedimiento de acuerdo con la
reivindicación 13, en el que dicha etapa de asilamiento es mediante
cristalización.
18. Un procedimiento para preparar éster
1-metílico de
N-[N-(3,3-dimetilbutil)-L-\alpha-aspartil]-L-fenilalanina,
que comprende las etapas de:
(a) condensar anhídrido
N-(3,3-dimetilbutil)-aspártico con
L-fenilalanina para formar una mezcla de amida del
ácido
\alpha-L-fenilalanina-N-neohexil-aspártico
y amida del ácido
\beta-L-fenilalanina-N-neohexil
aspártico
(b) esterificar dicha mezcla de amidas para
formar una mezcla de éster 1-metílico de
N-[N-(3,3-dimetilbutil)-L-\alpha-aspartil]-L-fenilalanina
y éster 1-metílico de
N-[N-(3,3-dimetilbutil)-L-\beta-aspartil]-L-fenilalanina;
y
(c) aislar de dicha mezcla dicho éster
1-metílico de
N-[N-(3,3-dimetilbutil)-L-\alpha-aspartil]-L-fenilalanina.
19. Un procedimiento de acuerdo con la
reivindicación 18, que además comprende formar anhídrido
N-(3,3-dimetilbutil)-L-aspártico
por deshidratación de un ácido
N-(3,3-dimetilbutil)aspártico
N-protegido.
20. Un procedimiento de acuerdo con la
reivindicación 19, en el que la deshidratación del ácido aspártico
se lleva a cabo utilizando anhídrido acético.
21. Un procedimiento de acuerdo con la
reivindicación 19, en el que el ácido
N-(3,3-dimetilbutil)-L-aspártico
N-protegido es ácido
N-formil-N-(3,3-dimetil-butil)-L-aspártico,
N-acetil-N-(3,3-dimetilbutil)-L-aspártico
o ácido
N-benciloxicarbonil-N-(3,3-dimetilbutil)-L-aspártico.
22. Un procedimiento de acuerdo con la
reivindicación 18, en el que dicha etapa de aislamiento es mediante
cristalización.
23. Un procedimiento para preparar éster
1-metílico de
N-[N-(3,3-dimetilbutil)-L-\alpha-aspartil]-L-fenilalanina,
que comprende las etapas de:
(a) reducir un producto de condensación de
3,3-dimetilbutiraldehído y ácido
L-aspártico \beta-protegido para
formar ácido
N-(3,3-dimetilbutil)-L-aspártico
\beta-protegido;
(b) formar un anhídrido mixto de dicho ácido
N-(3,3-dimetilbutil)-L-aspártico
\beta-protegido;
(c) condensar dicho anhídrido mixto con éster
metílico de L-fenilalanina para formar éster
1-metílico de
N-[N-(3,3-dimetilbutil)-L-\alpha-aspartil]-L-fenilalanina
\beta-protegido; y
(d) desproteger dicho éster
1-metílico de
N-[N-(3,3-dimetilbutil)-L-\alpha-aspartil]-L-fenilalanina
\beta-protegido para formar éster
1-metílico de
N-[N-(3,3-dimetilbutil)-L-\alpha-aspartil]-L-fenilalanina.
24. Un procedimiento de acuerdo con la
reivindicación 23, que además comprende cristalizar dicho éster
1-metílico de
N-[N-(3,3-dimetilbutil)-L-\alpha-aspartil]-L-fenilalanina.
25. Un procedimiento para preparar éster
1-metílico de
N-[N-(3,3-dimetilbutil)-L-\alpha-aspartil]-L-fenilalanina
que comprende las etapas de:
(a) reducir un producto de condensación de
3,3-dimetilbutiraldehído y ácido
L-aspártico \beta-protegido para
formar ácido
N-(3,3-dimetilbutil)-L-aspártico
\beta-protegido;
(b) condensar dicho ácido
N-(3,3-dimetilbutil)-L-aspártico
\beta-protegido con éster metílico de
L-fenilalanina para formar éster
1-metílico de
N-[N-(3,3-dimetilbutil)-L-\alpha-aspartil]-L-fenilalanina
\beta-protegido; y
(c) desproteger dicho éster
1-metílico de
N-[N-(3,3-dimetilbutil)-L-\alpha-aspartil]-L-fenilalanina
\beta-protegido para formar éster
1-metílico de
N-[N-(3,3-dimetilbutil)-L-\alpha-aspartil]-L-fenilalanina.
26. Un procedimiento de acuerdo con la
reivindicación 25, en el que dicho éster de
L-fenilalanina se escoge en el grupo formado por
éster metílico de L-fenilalanina, hidrocloruro del
éster metílico de L-fenilalanina.
27. Un procedimiento de acuerdo con la
reivindicación 25, que además comprende cristalizar dicho éster
1-metílico de
N-[N-(3,3-dimetilbutil)-L-\alpha-aspartil]-L-fenilalanina.
28. Un procedimiento para preparar éster
1-metílico de
N-[N-(3,3-dimetilbutil)-L-\alpha-aspartil]-L-fenilalanina
que comprende tratar una mezcla de ácido
N-(3,3-dimetilbutil)-L-aspártico
y éster metílico de L-fenilalanina con una enzima
proteasa para formar éster 1-metílico de
N-[N-(3,3-dimetilbutil)-L-\alpha-aspartil]-L-fenilalanina.
29. El procedimiento de acuerdo con la
reivindicación 28, en el que dicha enzima proteasa es papaína.
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