ES2202159T3 - Cassette de electroforesis termoconformado de un solo uso. - Google Patents
Cassette de electroforesis termoconformado de un solo uso.Info
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Abstract
Cassette de electroforesis, que comprende: - una primera (14) y segunda (16) superficies termoconformadas que comprenden sus bordes en contacto hermético entre sí y definiendo un volumen intermedio para recibir un medio electroforético; - comprendiendo cualesquiera de dichas primera o segunda superficies, como mínimo, un recipiente abierto moldeado en la misma en un extremo dirigido a la otra de dichas primero o segunda superficies; - comprendiendo además dichas primera o segunda superficies, como mínimo, una abertura (24), (26) en un extremo opuesto de dicha superficie; - poseyendo un elemento macho (22) una estructura complementaria a la de, como mínimo, un recipiente, estando adaptado el elemento macho para su inserción desmontable en su interior y comprendiendo además: - una entrada (30) y una salida (34) para la inyección del medio electroforético a través de las mismas y hacia el interior del volumen definido por la primera y segunda superficies; y - como mínimo, una abertura paradescarga (38) del exceso de medio electroforético.
Description
Cassette de electroforesis termoconformado de un
solo uso.
La presente invención da a conocer un cassette de
electroforesis de un solo uso, particularmente adecuado para
productos electroforéticos premoldeados para electroforesis de
proteínas y ácido nucleico. La invención comprende también una placa
de soporte para dicho cassette a efectos de asegurar la rigidez
apropiada en el mismo, dentro del aparato de electroforesis, y
actuando como sumidero térmico, proporcionando de esta manera un
frente de migración más uniforme en funcionamiento, dado que la
temperatura del medio es substancialmente regular en cualquier lugar
dentro del cassette durante la operación de electroforesis. La
invención comprende también un peine de inyección del medio de
electroforesis en el cassette, así como el correspondiente método de
inyección.
La electroforesis es una técnica de separación
bien conocida que requiere la aplicación de una corriente eléctrica
en ambos polos de un cassette o placa a efectos de obligar a las
muestras a pasar a través de un medio electroforético que actúa como
criba molecular. La aplicación de la diferencia de potencial entre
la sección superior y la sección interior del cassette asume la
creación de dos áreas cerradas de forma estanca una con respecto a
otra. Dado que la corriente es transmitida con intermedio de dos
recipientes tampón separados, es necesario aplicar una cierta
presión o fuerza en el cassette de manera que los elementos de
estanqueidad o retenes funcionan de manera adecuada. Por lo tanto,
es imperativo que el conjunto del sistema, incluyendo el cassette,
posea una cierta rigidez.
Los cassettes convencionales de electroforesis
están realizados a base de dos placas de cristal separadas entre sí
mediante separadores de plástico o lengüetas que crean un espacio
intermedio asegurando simultáneamente que los lados del conjunto
quedan bien estanqueizados. De modo importante, los separadores no
deben conducir corriente eléctrica. El conjunto es mantenido en
general en posición mediante abrazaderas, y es frecuentemente
necesario reforzar los retenes o cierres estancos con agar en
caliente. Cuando el gel es moldeado dentro del cassette, se
introduce un peine por un extremo del conjunto para crear uno o
varios receptáculos o pozos en los que se pueden recibir
posteriormente las muestras. La forma del peine puede comprender
varios números y dimensiones de recipientes, dependiendo de la
aplicación requerida y de las dimensiones del cassette. Por ejemplo,
un gel de preparación requiere menos recipientes, mientras que un
gel analítico requerirá un número mayor de recipientes y su anchura
dependerá de la resolución deseada.
No obstante, estos conjuntos tienen varios
inconvenientes y limitaciones. La operación de montaje requiere
destreza y es una operación que requiere mucho tiempo, porque se
realiza manualmente. Las placas son realizadas convencionalmente a
base de cristal, y por lo tanto deben ser manipuladas con cuidado.
Además, se debe limpiar cuidadosamente para obtener buenos
resultados. Finalmente, la manipulación de un gel de acrilamida,
medio electroforético habitualmente utilizado, representa un peligro
para la salud a largo plazo de los operadores, dado que dicho gel es
altamente tóxico.
Más recientemente, para simplificar el trabajo de
montaje de los operadores y reducir la toxicidad y peligros de la
manipulación, se han puesto a disposición comercialmente cassettes
premoldeados que ya contienen el gel. Los cassettes comprenden un
gel de acrilamida, y se pone un peine en un extremo del mismo. No
obstante, el coste de estos cassettes es prohibitivo, y su
desmoldeo, para visualización de los resultados, es un proceso
delicado y complicado. Además, el peine es producido por moldeo por
inyección, y se utiliza para formar los mencionados pozos o
receptáculos en el gel. En general, representan una parte importante
del coste total del cassette.
Para que sea factible económicamente y capaz de
soportar, sin doblado substancial, las fuerzas mecánicas aplicadas
sobre los mismos, los cassettes que contienen medio de
electroforesis premoldeado, deben ser suficientemente rígidos y
deben estar realizados a base de un material económicamente adecuado
y preferentemente reciclable, tal como, por ejemplo, materiales
termoplásticos, tales como polimetilmetacrilato (PMMA). No obstante,
de modo convencional, a efectos de que sean suficientemente rígidas,
las placas deben ser relativamente gruesas. Por lo tanto, dos
problemas evidentes se manifiestan: a) la cantidad de material
termoplástico requerido es significativo, lo cual incrementa el
coste, que no es adecuado para un dispositivo de un solo uso; y b)
el mantenimiento del gel a una temperatura operativa apropiada es
complicado, porque las paredes gruesas del material termoplástico
actúan como material dieléctrico. Las paredes de plástico más
gruesas afectan también la difusión del calor generado durante el
proceso electroforético, creando gradientes de temperatura dentro
del medio de electroforesis y migración no uniforme de las muestras
analizadas.
El documento WO 97/41070 describe un aparato para
llevar a cabo separación por electroforesis. El aparato comprende
una cámara que tiene en su interior un cuerpo de gel de separación
para llevar a cabo en su interior separación por electroforesis y
electrodos para conectar la cámara a una fuente de potencia externa.
En una realización, el cassette se encuentra substancialmente
cerrado antes, durante y después de la electroforesis, con aberturas
para la introducción de una muestra de moléculas en su interior. El
cassette comprende una cámara tridimensional substancialmente plana,
que tiene paredes de fondo y laterales, y una tapa que forma la
pared superior del cassette. El fondo y la tapa están realizados a
base de cualquier material adecuado transparente a las radiaciones
UV, tales como un plástico PMMA. El método de fabricación del
cassette utiliza un proceso de moldeo de plástico. La tapa puede
incluir dos orificios de ventilación para permitir la salida de los
gases.
Los procesos convencionales para llenado de los
cassettes son en general normales o estándar, independientemente del
medio electroforético. De manera típica, un gel que comprende una
mezcla de acrilamida y bis-acrilamida, un agente
tampón como etilenediamina trisborato (EDTA),
tris-acetato-EDTA,
tris-glicina, tricina, y un iniciador de
polimerización son inyectados o moldeados dentro del cassette.
Algunos de estos productos son neurotóxicos y/o irritantes, y por lo
tanto deben ser manipulados con mucho cuidado. Se puede utilizar una
pipeta de laboratorio o una bomba para llenar el cassette desde la
parte superior con el medio líquido. Una vez que el cassette ha sido
llenado, un peine cierra la parte alta del cassette. El peine tiene
un diseño tal que contiene uno o varios dientes que forman
recipientes en el gel, de manera que la muestra será colocada más
adelante. Después de polimerización del medio, el peine es retirado,
y también el separador presente en la parte más baja del cassette.
El cassette es colgado a continuación en un aparato de
electroforesis, de manera que las partes inferior y superior del gel
se encontrarán en contacto con dos soluciones tampón independientes.
Las muestras son introducidas a continuación en los recipientes, y
se aplica corriente para separar los diferentes componentes de cada
muestra. Después de completar la separación, el medio es retirado
del cassette para proceso adicional, es decir, coloración,
fotografía y análisis.
También, este sistema y procedimiento tiene
varios inconvenientes y limitaciones importantes. Tal como se ha
indicado anteriormente, el llenado manual del cassette requiere gran
cuidado y destreza, sin mencionar la exposición del operador a
agentes químicos tóxicos. Además, frecuentemente y de modo no
deseable, se forman burbujas durante el llenado, y asimismo la
instalación del peine después del llenado puede crear también
burbujas en el fondo de los dientes. Estas burbujas de aire se deben
de evitar en todo momento, puesto que interfieren de manera
significativa con las muestras que emigran en el gel polimerizado
durante el proceso de electroforesis.
Los geles premoldeados han sido comercializados
recientemente, pero no han sido capaces de superar otros problemas
mencionados anteriormente para cassettes que contienen los mismos,
tales como los prohibitivos costes. Una de las razones más
importantes es que los cassettes se obtienen por inyección por
moldeo, que es un proceso costoso y relativamente recto a causa de
la cantidad significativa de material plástico requerida para su
inyección, coste del propio material plástico y el tiempo necesario
para permitir el enfriamiento completo del cassette conseguido de
este modo. Además, dado que los cassettes son realizados a base de
un material termoplástico, la polimerización del gel queda muy
afectada y relentizada, dado que el polímero absorbe radicales
libres generados por la reacción en cadena de polimerización. Como
resultado, el medio electroforético polimerizado no se "pega" a
las superficies internas del cassette. Una capa o sobrecapa de
recubrimiento de precio elevado se debe aplicar por lo tanto sobre
las superficies del material termoplástico para minimizar este
problema y asegurar la calidad apropiada de la polimerización, así
como su velocidad.
La operación de electroforesis requiere la
aplicación de un voltaje a través del gel que genera calor que debe
ser disipado de algún modo. Durante el proceso disipación de calor,
si la temperatura del gel no es uniforme, provoca distorsión en la
proteína separada o en las bandas de ácido polinucleico. Este calor
es por lo tanto un problema crítico porque limita la velocidad a la
que se pueden hacer circular los geles. Temperaturas más elevadas
reducen la resistencia e incrementan la corriente a un voltaje
determinado. Si bien el efecto neto es una pasada más corta, la
temperatura excesiva puede llevar a un ensanchamiento de banda
indeseable. Por lo tanto, es preferible funcionar a un voltaje más
elevado y temperatura constante más baja.
La presente invención se refiere a un cassette de
electroforesis de acuerdo con la reivindicación 1.
En un segundo aspecto de la invención, se dispone
un peine para un cassette electroforético adaptado para su inserción
desmontable en el cassette, y permitiendo la inyección en su
interior de un medio electroforético y la descarga de exceso de
medio electroforético desde aquél, comprendiendo, como mínimo, una
entrada y una salida para inyección del medio electroforético hacia
adentro del cassette, extendiéndose la salida longitudinalmente
sobre un primer lado de, como mínimo, un diente.
Según el tercer aspecto de la invención, se
dispone un conjunto electroforético que comprende:
- -
- un cassette tal como se ha definido anteriormente;
- -
- un medio electroforético comprendido en el volumen; y
- -
- un soporte que comprende un armazón adaptado para recibir el cassette, comprendiendo además el soporte una serie de rebajes que forman de manera correspondiente canales entre una superficie del cassette y el soporte, permitiendo por lo tanto al paso de un refrigerante en su interior, de manera que la temperatura del medio es substancialmente la misma dentro del volumen.
Según un cuarto aspecto de la invención, se da a
conocer un método para el moldeo de un medio electroforético en un
cassette, que comprende las siguientes etapas:
- -
- cerrar de manera estanca cualquier abertura presente en el cassette;
- -
- inyectar el medio electroforético dentro de la entrada del peine definido anteriormente, penetrando el medio en el volumen a través del peine; y
- -
- inyectar de manera continua dicho medio hasta que todo el volumen queda lleno y se descarga el exceso del mismo desde, como mínimo, una abertura del peine.
Se prevé un compuesto para su utilización como
medio electroforético que no forma parte de la invención y que
comprende:
- -
- un gel electroforético;
- -
- un iniciador de polimerización;
- -
- un tampón; y
- -
- un agente adhesivo que permite la adherencia de medio electroforético polimerizado sobre una superficie de un cassette electroforético termoplástico.
La figura 1 muestra un cassette y la
correspondiente placa de soporte de acuerdo con la presente
invención;
la figura 2 muestra los detalles de un peine
desarrollado de acuerdo con la presente invención; y
la figura 3 muestra una placa de soporte
desarrollada para soportar el cassette de la invención.
La presente invención se refiere al sector de
electroforesis, y más particularmente se refiere a un cassette
adecuado para la misma. Se debe suponer que el gel utilizado como
medio electroforético es preferentemente una acrilamida (o
poliacrilamida) en forma de gel, reticulada o no. No obstante, se
pueden utilizar otros medios electroforéticos convencionales y bien
conocidos, tales como gel de agarosa y gel de almidón. Un gel de
poliacrilamida es particularmente preferente porque es transparente,
neutro eléctricamente, y puede quedar realizado en varios tamaños de
poros. Otros comonómeros bien conocidos en este campo comprenden
N,N'-metilenbisacrilamida,
N,N-bisacrilicistamina,
N,N'-(1,2-dihidroxi-etileno)
bisacrilamida,
N,N'-dialil-tartardiamida, y
similares.
Los dibujos que se adjuntan tienen solamente
finalidad ilustrativa de realizaciones preferentes de la invención,
y no se considerarán limitativos de la misma.
Haciendo referencia a los dibujos, la figura 1
muestra un conjunto de cassette (10) y un soporte (12) para el
mismo. El cassette (10) comprende una placa superior (14) y una
placa de recipiente (16), cada una de las cuales tiene forma
substancialmente cuadrada poseyendo cuatro bordes cerrados de manera
estanca, mediante una capa de adhesivo (11) insertada de forma
intermedia, o con ayuda de cualquier otro medio de estanqueización
adecuada, tal como cola, soldadura por ultrasonidos, una cinta, etc.
La estructura de la capa (11) es complementaria con la de ambas
placas (14) y (16).
Las placas (14) y (16) están realizadas
preferentemente a base de un material química y eléctricamente
inerte que tiene el grado deseado de rigidez para soportar y
proteger el gel durante su moldeado, así como durante su expedición
y manipulación. Un material termoplástico "termoformable" es el
más preferente porque las placas pueden ser producidas
comercialmente con intermedio de termoconformación de productos
laminares, que es un método rápido, fiable y relativamente
económico. Los materiales termoplásticos preferentes adecuados para
los objetivos de la invención incluyen cualquier material
termoplástico eléctrica y químicamente inerte que se puede
termoconformar de manera fácil y económica. Los ejemplos más
preferentes son poliestireno, polietileno de alta densidad (HDPE),
polietileno de baja densidad (LDPE), polietileno de baja densidad
lineal (LLDPE), polietilén tereftalato (PET), PET modificado por
glicol, polietilén naftalato, cloruro de polivinilo (PVC), cloruro
de polivinilideno (PVDC), policarbonato, PMMA, polivinlacetato
(PVA), etilén vinilacetato (EVA), polipropilén, poliésteres,
acetatos de celulosa, poliamidas tales como nylonTM, y copolimeros
de los mismos. Preferentemente, ambas placas (14) y (16) están
realizadas a base del mismo material a efectos de compatibilidad.
Además, como mínimo, la placa de recipiente (16) debe ser
transparente, pero es preferible que sean transparentes ambas placas
(14) y (16).
La placa de recipiente (16) comprende una serie
de recipientes (18) para recibir la serie correspondiente de dientes
(20) del peine (22). La placa superior (14) tiene una estructura
complementaria, es decir, una serie de aberturas (24), que permiten
el paso a través de las mismas de la serie de dientes (20) para su
acoplamiento en los recipientes (18). La placa de recipiente (16)
comprende además una serie de ranuras (26) alineadas con la serie de
recipientes (18), y substancialmente de la misma anchura. Durante
las operaciones de llenado, expedición y manipulación, estas ranuras
quedan estanqueizadas con una tira de estanqueización desmontable
(28) que se retirará antes de colocar el cassette (10) en el
dispositivo de electroforesis. En una realización alternativa, se ha
descubierto que la serie de ranuras (26) pueden quedar substituidas
por ranuras que tienen una anchura menor pero que se encuentran
presentes en un número más elevado, es decir, preferentemente el
doble que el número de ranuras (26), con el mismo resultado
final.
El peine (22) comprende una abertura o entrada
(30) que se extiende de modo pasante substancialmente de forma
perpendicular a su sección longitudinal, y alineada con un diente
(32), comprendiendo este último un rebaje longitudinal (34) mostrado
en líneas de trazos en la figura 2 y que sirve de salida. Después de
acoplamiento de los dientes (10) en la serie de recipientes (18), se
inyecta un medio electroforético en el cassette (10) a través de la
abertura (30) y el rebaje (34), tal como se ha indicado por la
flecha (36). El flujo del medio electroforético dentro del cassette
(10) está indicado también por las flechas (31) y (33). Para
asegurar un llenado completo y apropiado del cassette (10), y
asimismo, minimizar las burbujas de aire, se debe inyectar un ligero
exceso de medio electroforético. Este exceso es descargado del
cassette (10) a través de un rebaje longitudinal (38) dispuesto en
cada uno de los dientes (18). El flujo de descargas se ha indicado
por la flecha (44). El rebaje (38) está situado en el lado de un
diente (20) que se encuentra en la oposición con el lateral del
diente (32) que comprende el rebaje (34). Cada uno de los dientes
(20) comprende además un par de ranuras (40) y (42), cuya
profundidad es mucho menor que la del rebaje (38), y dispuestas para
formar una V. El objetivo de estas ranuras es principalmente
facilitar la separación de gel con respecto al peine (22) después de
su retirada, después de completar la polarización del medio
electroforético, si bien pueden ser también útiles para descargar un
exceso de gel. Las ranuras (40) y (42) permiten una separación
limpia del peine (22) con respecto al gel, dejando de esta manera
una superficie inferior del recipiente (18) que contiene el medio
substancialmente similar y regular en cada recipiente (18).
Durante el proceso de moldeo del medio
electroforético, el medio es vertido en el cassette (10) a través de
la abertura (30) del peine (22), y se deja solidificar.
Preferentemente, el cassette es sostenido de manera que las placas
(14) y (16) se mantienen substancialmente paralelas para facilitar
el llenado del cassette. Las placas (14) y (16) pueden ser
mantenidas substancialmente paralelas, por ejemplo, aplicando una
cierta tensión en cada lado de las mismas para extender su posición,
o se aplica una cola "no adhesiva" en la superficie externa de
las placas, de manera que éstas últimas pueden "pegarse" de
manera desmontable durante la inyección del medio electroforético
entre ambas. De manera alternativa, se puede aplicar vacío tanto por
fuera como por dentro del cassette, es decir, por dentro para llevar
el gel hacia adentro del cassette, y por fuera para mantener las
placas substancialmente paralelas. Una combinación de vacío por
fuera y presión positiva por dentro del cassette puede ser también
utilizada. El proceso de polimerización empieza después de que se ha
vertido un exceso de medio de cada rebaje (38), confirmando el
llenado completo del cassette (10). Este método elimina por lo tanto
substancialmente las burbujas de aire del cassette (10). Una vez que
se ha terminado la polimerización, el cassette (10) es almacenado de
manera apropiada de forma convencional.
El peine (22) es retirado preferentemente
solamente unos minutos antes de la utilización del cassette, o
inmediatamente después de la polimerización completa del gel, antes
de almacenamiento, si los recipientes (18) están bien protegidos
contra deshidratación. Llegado a este punto, es estirado lentamente
hacia afuera del cassette, y cada recipiente (18) es llenado
posteriormente con un volumen apropiado de una muestra que se debe
someter a electroforesis.
Es bien conocido que, en su funcionamiento, la
temperatura del gel de electroforesis se incrementa. También es bien
conocido que la temperatura será más elevada hacia la parte media
del cassette que en los lados del mismo. Como resultado, el frente
de migración de los productos a separar se altera, y pueden ocurrir
interpretaciones erróneas. Por lo tanto, se ha desarrollado una
nueva placa de soporte para superar estos problemas, y también para
proporcionar un perfil de mantenimiento adecuado, es decir,
suficiente rigidez de las paredes delgadas del cassette, y para
facilitar la instalación del cassette en una posición operativa en
un aparato de electroforesis convencional.
La placa de soporte (12) comprende un armazón
(46) adaptado para recibir en su interior el cassette (10), y
comprende una superficie (48) con una serie de rebajes
longitudinales (50), que pueden tener cualquier forma y dimensión.
Las aberturas (52) y (54) son cortadas dentro de la placa para
definir un espacio libre que corresponde substancialmente en su
tamaño al recipiente (18) y a las ranuras (26). Cuando el cassette
(10) es situado sobre el soporte (12), descansa directamente sobre
unos rebordes (56) de la placa (12), formando de esta manera una
serie de canales entre los rebajes (50) y una superficie del
cassette (10) para circulación de la solución tampón en su interior
(flujo indicado por las flechas (51)), y ayudando de esta manera a
dispersar el calor generado dentro del cassette. Tal como se ha
mostrado, cada uno de los rebajes (50) está preferentemente alineado
con un recipiente (18) y una ranura (26), para asegurar que la
temperatura del producto que emigra y el gel son substancialmente
iguales, tanto si en el recipiente se encuentra cerca del lado o de
la parte media del cassette. No obstante, se ha descubierto que
dicha alineación no es obligatoria. El elemento crítico es el que
permita circular una solución tampón entre la placa de soporte y el
cassette para "extraer" calor de este último. La placa de
soporte (12) puede ser realizada a base de cualquier material rígido
adecuado, pero es realizada preferentemente de un material conductor
del calor, de manera que el calor se extrae también desde los
soportes (56) que se encuentran en contacto directo con la
superficie del cassette (10) dispuesta encima de aquéllos, y se
dispersa dentro de la estructura del soporte. El cassette (10) puede
ser mantenido en su lugar en la placa (12) con ayuda de un par de
placas de retención (58).
Con respecto al problema de interferencia del
proceso de polimerización provocado por el material termoplástico
del cassette, se ha observado, lo cual no forma parte de la
invención, que al combinar un potente iniciador que genera más
radicales libres con un apropiado agente de "pegado" en la
composición del gel, no existe necesidad de aplicar una costosa capa
de protección sobre las superficies termoplásticas. Se incluyen
entre los ejemplos de iniciadores de este tipo el persulfato amónico
y N,N,N,N-tetrametiletilendiamina (TEMED);
4-dimetilaminopropionitrilo;
1-hidroxiciclohexil fenil cetona;
2,2-dietoxi-acetofenona;
2,2-dimetoxi-2-fenilacetofenona;
2',4' -dimetoxi-acetofenona;
2-hidroxi-2-metil-1-propiofenona;
2-hidroxi-2-metil-1-fenilpropan-1-ona,
y mezclas de los mismos. Estos potentes iniciadores permiten una
polimerización substancialmente completa del gel. No obstante, el
gel polimerizado resultante no se pega a la superficie de plástico,
lo cual es crítico, particularmente teniendo en cuenta el hecho de
que la estructura del cassette es relativamente flexible. El
despegado o desacoplamiento del medio electroforético polimerizado
con respecto a las superficies internas del cassette puede conducir
a la introducción de burbujas de aire poco deseables entre la
superficie de material plástico y el gel, y también puede provocar
irregularidades en la estructura del medio, dificultando severamente
la eficacia del cassette. De manera sorprendente, se ha descubierto
que añadir al gel una pequeña cantidad de un compuesto adhesivo es
suficiente para permitir que el gel se pegue de manera adecuada
sobre la superficie del plástico. El compuesto adhesivo corresponde
preferentemente al utilizado para el recubrimiento de las
superficies internas de cassettes termoplásticos habitualmente
disponibles con el mismo objetivo. No obstante, los costes asociados
con el proceso y recubrimiento de dicha capa en las superficies
internas del cassette son significativas. Por otra parte, todo lo
que se tiene que hacer es añadir una suficiente cantidad de dicho
compuesto adhesivo compuesto en el gel a inyectar en el cassette
para conseguir un mismo resultado. El procedimiento no solamente es
más simple, sino que la cantidad de compuesto adhesivo necesario
resulta más reducida. Se incluyen entre los compuestos adhesivos
adecuados los polisilazanos o derivados de silicio
tetra-substituidos. Los substituyentes pueden ser
iguales o distintos y comprenden alquilo, alcoxi, cetona, éster o
amida de cadera recta o ramificada, cada uno de los cuales comprende
de 1 a 8 átomos de carbono, o un amino, halógeno, ciano o hidroxi.
Los adhesivos son derivados de alquil alcoxi silano. Los adhesivos
comprenden Silano A-174,
metacriloxitrimetoxisililpropano, 3-(trimetoxisilil)propil
metacri-lato,
3-metacriloxipropiltrimetoxisilano, MEMO, DYNASYLAN
MEMO, y
\gamma-metacriloxipropiltrimetoxisilano.
El grosor de las placas (14) y (16) debe ser
suficiente para conseguir suficiente rigidez para funcionamiento del
sistema electroforético. A efectos económicos, se ha descubierto que
no es necesario superar un grosor aproximado de 40/1000.
Si bien la invención se ha descrito en relación
con una realización específica de la misma, se comprenderá que es
capaz de modificaciones adicionales, y esta solicitud está destinada
a extenderse a cualesquiera variaciones, utilizaciones o
adaptaciones de la invención que sigan, en general, los principios
de la misma, e incluyendo desviaciones tales con respecto a la
presente descripción como las que entran dentro de la práctica
habitual dentro de la técnica a la que pertenece esta invención, y
tal como se puede aplicar a las características esenciales que se
han indicado anteriormente.
Claims (19)
1. Cassette de electroforesis, que comprende:
- -
- una primera (14) y segunda (16) superficies termoconformadas que comprenden sus bordes en contacto hermético entre sí y definiendo un volumen intermedio para recibir un medio electroforético;
- -
- comprendiendo cualesquiera de dichas primera o segunda superficies, como mínimo, un recipiente abierto moldeado en la misma en un extremo dirigido a la otra de dichas primero o segunda superficies;
- -
- comprendiendo además dichas primera o segunda superficies, como mínimo, una abertura (24), (26) en un extremo opuesto de dicha superficie;
- -
- poseyendo un elemento macho (22) una estructura complementaria a la de, como mínimo, un recipiente, estando adaptado el elemento macho para su inserción desmontable en su interior y comprendiendo además:
- -
- una entrada (30) y una salida (34) para la inyección del medio electroforético a través de las mismas y hacia el interior del volumen definido por la primera y segunda superficies; y
- -
- como mínimo, una abertura para descarga (38) del exceso de medio electroforético.
2. Cassette, según la reivindicación 1, en el que
la primera superficie comprende una placa recipiente que comprende,
como mínimo, un recipiente en un extremo y aberturas en extremos
opuestos, y de manera que la segunda superficie comprende una placa
superior que comprende, como mínimo, una abertura alineada con dicho
o dichos recipientes abiertos de la placa recipiente.
3. Cassette, según la reivindicación 1, en el que
el elemento macho comprende un peine dotado de una serie de dientes
correspondientes a la serie de recipientes, poseyendo cada uno de
los dientes una estructura adaptada para acoplarse de manera
cooperativa y desmontable en uno o varios recipientes abiertos.
4. Cassette, según la reivindicación 1, en el que
una capa de adhesivo queda insertada entre la primera y segunda
superficies.
5. Cassette, según la reivindicación 1, en el que
tanto dicha primera como segunda superficies quedan realizadas a
base de un material substancialmente transparente, no conductor y
químicamente inerte.
6. Cassette, según la reivindicación 5, en el que
el material comprende poliestireno, polietileno de alta densidad
(HDPE), polietileno de baja densidad (LDPE), polietileno de baja
densidad lineal (LLDPE), polietileno tereftalato (PET), PET
modificado mediante glicol, polietilén naftalato, cloruro de
polivinilo (PVC), cloruro de polivinilideno (PVDC), policarbonato,
PMMA, polivinilacetato (PVA), etilén vinil acetato (EVA),
polipropileno, poliésteres, acetato de celulosa, poliamidas, y
copolímeros de los mismos.
7. Cassette, según la reivindicación 3, en el que
la salida se prolonga longitudinalmente sobre un primer lado de un
diente.
8. Cassette, según la reivindicación 7, en el
que, como mínimo, un diente comprende un rebaje que se prolonga
longitudinalmente sobre un segundo lado opuesto al primer lado, para
descarga de exceso de medio electroforético.
9. Cassette, según la reivindicación 8, en el que
el rebaje comprende una ranura en cada uno de sus lados, formando
una ranura en forma de V.
10. Peine para un cassette electroforético
adaptado para su inserción desmontable dentro del cassette y
permitiendo la inyección en el mismo de un medio electroforético y
descargando el exceso de medio electroforético del mismo,
comprendiendo, como mínimo, una entrada y una salida para inyección
del medio electroforético hacia dentro del cassette, prolongándose
la salida longitudinalmente sobre un primer lado de, como mínimo, un
diente.
11. Peine, según la reivindicación 10, en el que,
como mínimo, un diente comprende un rebaje para descarga del exceso
del medio electroforético, extendiéndose el rebaje longitudinalmente
sobre un segundo lado opuesto al primer lado del diente.
12. Peine, según la reivindicación 11, en el que
el rebaje comprende una ranura a cada lado del mismo, para formar
una ranura en forma de V.
13. Conjunto de electroforesis, que
comprende:
- -
- un cassette, según la reivindicación 1;
- -
- un medio electroforético comprendido en el volumen; y
- -
- un soporte (12) que comprende un armazón adaptado para recibir el cassette, comprendiendo además el soporte una serie de rebajes que forman canales correspondientes (50) entre una superficie de cassette y el soporte, permitiendo de este modo el paso de un refrigerante por su interior, de manera que la temperatura del medio es substancialmente la misma dentro del volumen.
14. Método para el moldeo de un medio
electroforético en el interior de un cassette, según la
reivindicación 1, que comprende las siguientes etapas:
- -
- cierre estanco, como mínimo, de una abertura;
- -
- inyección del medio electroforético dentro de la entrada, penetrando el medio en el volumen a través del elemento macho, y
- -
- continuar la inyección del medio hasta que la totalidad del volumen se encuentra lleno y un exceso del mismo es descargado desde, como mínimo, una abertura del elemento macho.
15. Método, según la reivindicación 14, en el que
el medio electroforético es polimerizado inmediatamente después del
moldeo, o justamente antes de la utilización del cassette.
16. Método, según la reivindicación 14, en el que
el elemento macho comprende un peine dotado de una serie de dientes
que corresponden al número de recipientes, poseyendo cada uno de los
dientes una estructura adaptada para acoplarse de forma cooperativa
y desmontable, como mínimo, en un recipiente.
17. Método, según la reivindicación 16, en el que
la salida se extiende longitudinalmente con respecto al primer lado
de un diente.
18. Método, según la reivindicación 17, en el
que, como mínimo, un diente comprende un rebaje para descarga del
medio electroforético, siendo el rebaje un segundo lado opuesto al
primer lado del diente.
19. Método, según la reivindicación 18, en el que
el rebaje comprende una ranura en cada lado del mismo, para formar
una ranura en forma de v.
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