ES2207614T3 - Antagonistas del receptor de crf y metodos relacionados con estos. - Google Patents

Antagonistas del receptor de crf y metodos relacionados con estos.

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ES2207614T3
ES2207614T3 ES01935788T ES01935788T ES2207614T3 ES 2207614 T3 ES2207614 T3 ES 2207614T3 ES 01935788 T ES01935788 T ES 01935788T ES 01935788 T ES01935788 T ES 01935788T ES 2207614 T3 ES2207614 T3 ES 2207614T3
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ES
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Mustapha Haddach
John P. Williams
Michael K. Schwaebe
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Neurocrine Biosciences Inc
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Abstract

Un compuesto que tiene la siguiente estructura (I): o un estereoisómero, profármaco o su sal farmacéuticamente aceptable, en la que: X es nitrógeno o CR3; Z es O, S, o NR4; Y es N, NR5 u O; A es O, S, o NR6; representa un doble enlace opcional; R es un sustituyente opcional que, en cada aparición es, por separado, alquilo, arilo, heteroarilo, alquilidenilo, arilalquilo o heteroarilalquilo, en el que m es 0, 1, 2 ó 3 y representa el número de sustituyentes R; R1 es alquilo, alquilo sustituido, arilo, arilo sustituido, heteroarilo o heteroarilo sustituido; R2 es hidrógeno, alquilo, alquilo sustituido, alcoxi o tioalquilo; R3 es hidrógeno, halógeno, alquilo o alquilo sustituido; R4 es hidrógeno, ciano, nitro, alquilo o alquilo sustituido; R5 es hidrógeno, alquilo o alquilo sustituido; y R6 es hidrógeno, alquilo, alquilo sustituido, arilo, arilo sustituido, heteroarilo o heteroarilo sustituido.

Description

Antagonistas del receptor de CRF y métodos relacionados con estos.
Campo técnico
Esta invención se refiere, en líneas generales, a antagonistas del receptor de la CRF, y a métodos para tratar trastornos por administración de tales antagonistas a animales de sangre caliente que los necesiten.
Antecedentes de la invención
La primera corticoliberina (factor liberador de corticotropina) (CRF) se aisló a partir de hipotálamos ovinos y se identificó como un péptido de 41 aminoácidos (Vale et al., Science 213: 1394-1397, 1981). Posteriormente, se aislaron secuencias de la CRF humana y de rata y se determinó que eran idénticas, pero diferentes de las CRF ovinas en 7 de los 41 residuos de aminoácido (Rivier et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 80: 4851, 1983; Shibahara et al., EMBO J. 2: 775,1983).
Se ha descubierto que la CRF produce profundas alteraciones en las funciones de los sistemas endocrino, nervioso e inmunitario. Se cree que la CRF es el principal regulador fisiológico de la liberación basal y por estrés de hormona adrenocorticotrópica ("ACTH"), \beta-endorfina y otros péptidos derivados de la pro-opiomelanocortina ("POMC") a partir de la adenohipófisis (Vale et al., Science 213: 1394-1397,1981). En resumen, se cree que la CRF inicia sus efectos biológicos uniéndose a un receptor de membrana plasmática que se ha descubierto que esta distribuido por todo el cerebro (DeSouza et al., Science 224: 1449-1451, 1984), hipófisis (DeSouza et al., Methods Enzymol. 124: 560, 1986; Wynn et al., Biochem. Biophys. Res. Comm. 110: 602-608, 1983), suprarrenales (Udelsman et al., Nature 319: 147-150, 1986) y bazo (Webster, E.L., y E.B. DeSouza, Endocrinology 122: 609-617, 1988). El receptor de la CRF se acopla a una proteína de unión a GTP (Perrin et al., Endocrinology 118: 1171-1179, 1986) que media en un incremento de la producción intracelular de cAMP estimulado por la CRF (Bilezikjian, L.M., y W.W Vale, Endocrinology 113: 657-662, 1983). El receptor para la CRF se ha clonado ahora a partir de la rata (Perrin et al., Endo 133(6): 3058-3061, 1993), y del cerebro humano (Chen et al., PNAS 90(19): 8967-8971, 1993; Vita et al., FEBS 335(1): 1-5, 1993). Este receptor es una proteína de 415 aminoácidos que comprende siete dominios de expansión de membrana. Una comparación de identidad entre secuencias humanas y de rata muestra un alto grado de homología (97%) en el nivel aminoácido.
Además de su papel en estimular la producción de ACTH y POMC, también se cree que la CRF coordina muchas de las respuestas endocrinas, autónomas y conductuales al estrés y puede estar implicada en la fisiopatología de los trastornos afectivos. Es más, se cree que la CRF es la llave intermedia en la comunicación entre los sistemas inmunitario, nervioso central, endocrino y cardiovascular (Crofford et al., J. Clin. Invest. 90: 2555-2564, 1992; Sapolsky et al., Science 238: 522-524, 1987; Tilders et al., Regal. Peptides 5: 77-84, 1982). En conjunto, la CRF parece ser uno de los neurotransmisores fundamentales del sistema nervioso central y juega un papel crucial en integrar la respuesta de conjunto del cuerpo al estrés.
La administración de CRF directamente al cerebro provoca respuestas conductuales, fisiológicas y endocrinas idénticas a las observadas para un animal expuesto a un entorno estresante. Por ejemplo, la inyección intracerebroventricular de CRF resulta en una activación conductual (Sutton et al., Nature 297: 331,1982), activación persistente del electroencefalograma (Ehlers et al., Brain Res. 278: 332, 1983), estimulación del camino simpaticoadrenomedular (Brown et al., Endocrinology 110: 928, 1982), un incremento de la frecuencia cardiaca y de la presión sanguínea (Fisher et al., Endocrinology 110: 2222, 1982), un aumento del consumo de oxígeno (Brown et al., Life Sciences 30: 207, 1982), alteración de la actividad gastrointestinal (Williams et al., Am. J. Physiol. 253: G582, 1987), supresión del consumo de comida (Levine et al., Neuropharmacology 22: 337, 1983), modificación de la conducta sexual (Sirinathsinghji et al., Nature 305: 232, 1983), y compromiso de la función inmunitaria (Irwin et al., Am. J. Physiol. 255: R744, 1988). Además, los datos clínicos sugieren que la CRF puede ser hipersecretada en el cerebro en depresiones, trastornos relacionados con la ansiedad, y anorexia nerviosa. (DeSouza, Ann. Reports in Med. Chem. 25: 215-223, 1990). Por consiguiente, los datos clínicos sugieren que los antagonistas del receptor de la CRF pueden representar novedosos fármacos antidepresivos y/o ansiolíticos que pueden ser útiles en el tratamiento de trastornos neuropsiquiátricos que se manifiestan con hipersecreción de CRF.
Los primeros antagonistas del receptor de la CRF fueron péptidos (véanse, por ejemplo, Rivier et al., patente de los EE.UU. nº 4.605.642; Rivier et al., Science 224: 889, 1984). Aunque estos péptidos establecían que los antagonistas del receptor de la CRF pueden atenuar las respuestas farmacológicas a la CRF, los péptidos antagonistas del receptor de la CRF padecen los inconvenientes habituales de las terapias con péptidos, incluyendo falta de estabilidad y actividad oral limitada. Más recientemente, se ha informado de pequeñas moléculas de antagonistas del receptor de la CRF. Por ejemplo, se ha informado de derivados sustituidos de la 4-tio-5-oxo-pirazolina (Abreu et al., patente de los EE.UU. nº 5.063.245) y derivados sustituidos del 2-aminotiazol (Courtemanche et al., patente australiana nº AU-A-41399/93) como antagonistas del receptor de la CRF. Se descubrió que estos derivados en concreto eran eficaces en inhibir la unión de la CRF a su receptor en el intervalo de 1-10 \muM y en el intervalo de 0,1-10 \muM, respectivamente.
Debido a la importancia fisiológica de la CRF, el desarrollo de moléculas pequeñas biológicamente activas que tienen una actividad de unión al receptor de la CRF importante y que son capaces de antagonizar al receptor de la CRF, permanece como un objetivo deseable. Tales antagonistas del receptor de la CRF serían útiles en el tratamiento de afecciones y enfermedades endocrinas, psiquiátricas y neurológicas, incluyendo trastornos relacionados, en general, con el estrés.
Aunque que se han hecho progresos significativos hacia conseguir la regulación de la CRF a través de la administración de antagonistas del receptor de la CRF, permanece la necesidad en la técnica de una molécula pequeña, eficaz, de antagonista del receptor de la CRF. También existe la necesidad de composiciones farmacéuticas que contengan tales antagonistas del receptor de la CRF, así como métodos que se relacionan con su uso para tratar, por ejemplo, trastornos relacionados con el estrés. La presente invención satisface estas necesidades, y proporciona otras ventajas relacionadas.
Compendio de la invención
En resumen, esta invención está dirigida, en líneas generales, a antagonistas del receptor de la CRF, y más específicamente, a antagonistas del receptor de la CRF que tienen la siguiente estructura general (I):
1
incluyendo estereoisómeros, profármacos y sus sales farmacéuticamente aceptables, en la que m, R, R_{1}, R_{2}, A, X, Y y Z son como se define a continuación.
Los antagonistas del receptor de la CRF de esta invención en un amplio rango de aplicaciones terapéuticas, y pueden usarse para tratar varios trastornos o enfermedades, incluyendo trastornos relacionados con el estrés. Tales métodos incluyen administrar una cantidad eficaz de un antagonista del receptor de la CRF de esta invención, preferentemente en forma de una composición farmacéutica, a un animal que lo necesite. Por consiguiente, en otra realización, se revelan composiciones farmacéuticas contienen uno o más antagonistas del receptor de la CRF de esta invención en combinación con un vehículo y/o diluyente farmacéuticamente aceptable.
Estos y otros aspectos de la invención estarán claramente en referencia en la siguiente descripción detallada. Para este fin, se exponen varias referencias en la presente memoria, que describen con más detalle ciertos procedimientos, compuestos y/o composiciones, y se incorporan, por este medio, en su totalidad como referencias.
Descripción detallada de la invención
La presente invención está dirigida, en líneas generales, a compuestos útiles como antagonistas del receptor de la corticoliberina (CRF).
En una primera realización, los antagonistas del receptor de la CRF de esta invención tienen la siguiente estructura (I):
2
incluyendo estereoisómeros, profármacos y sus sales farmacéuticamente aceptables, en la que:
X es nitrógeno o CR_{3};
Z es O, S, o NR_{4};
Y es N, NR_{5} u O;
A es O, S, o NR_{6};
cada aparición de "- - -" representa un doble enlace opcional;
R es un sustituyente opcional que, en cada aparición es, por separado, alquilo, arilo, heteroarilo, alquilidenilo, arilalquilo o heteroarilalquilo, en el que m es 0, 1, 2 ó 3 y representa el número de sustituyentes R;
R_{1} es alquilo, alquilo sustituido, arilo, arilo sustituido, heteroarilo o heteroarilo sustituido;
R_{2} es hidrógeno, alquilo, alquilo sustituido, alcoxi o tioalquilo;
R_{3} es hidrógeno, halógeno, alquilo o alquilo sustituido;
R_{4} es hidrógeno, ciano, nitro, alquilo o alquilo sustituido;
R_{5} es hidrógeno, alquilo o alquilo sustituido; y
R_{6} es hidrógeno, alquilo, alquilo sustituido, arilo, arilo sustituido, heteroarilo o heteroarilo sustituido.
Como se usa en la presente memoria, los términos anteriores tienen el siguiente significado:
"Alquilo" significa una cadena alifática hidrocarbonada lineal o ramificada, no cíclica o cíclica, insaturada o saturada que contienen de 1 a 10 átomos de carbono, mientras que la terminología "alquilo inferior" tiene el mismo significado que alquilo pero contiene de 1 a 6 átomos de carbono. Cadenas lineales saturadas de alquilos representativas incluyen metilo, etilo, n-propilo, n-butilo, n-pentilo, n-hexilo, y similares; mientras que alquilos ramificados saturados incluyen isopropilo, sec-butilo, isobutilo, terc-butilo, isopentilo, y similares. Alquilos cíclicos saturados representativos incluyen ciclopropilo, ciclobutilo, ciclopentilo, ciclohexilo, -CH_{2}ciclopropilo, -CH_{2}ciclobutilo, -CH_{2}ciclopentilo, -CH_{2}ciclohexilo, y similares; mientras que alquilos cíclicos insaturados incluyen ciclopentenilo y ciclohexenilo, y similares. Alquilos cíclicos, también denominados "anillos homocíclicos", e incluyen anillos di-y poli-homocíclicos como decalina y adamantilo. Los alquilos insaturados contienen, al menos, un doble o triple enlace entre átomos de carbono adyacentes (denominados como un "alquenilo" o "alquinilo", respectivamente). Alquenilos de cadena lineal o ramificada representativos incluyen etilenilo, propilenilo, 1-butenilo, 2-butenilo, isobutilenilo, 1-pentenilo, 2-pentenilo, 3-metil-1-butenilo, 2-metil-2-butenilo, 2,3-dimetil-2-butenilo, y similares; mientras que alquinilos de cadena lineal y ramificada representativos incluyen acetilenilo, propinilo, 1-butinilo, 2-butinilo, 1-pentinilo, 2-pentinilo, 3-metil-1-butinilo, y similares.
"Alquilidenilo" representa un alquilo divalente del que se toman dos átomos de hidrógeno del mismo átomo de carbono, como =CH_{2}, =CHCH_{3}, =CHCH_{2}CH_{3}, =C(CH_{3})CH_{2}CH_{3}, y similares.
"Arilo" significa un resto carbocíclico aromático como fenilo o naftilo.
"Arilalquilo" significa un alquilo que tiene, al menos, un átomo de hidrógeno del alquilo sustituido por un resto arilo, como bencilo (es decir, -CH_{2}fenilo), -CH_{2}-(1 ó 2-naftilo), -(CH_{2})_{2}fenilo, -(CH_{2})_{3}fenilo, -CH(fenilo)_{2}, y similares.
"Heteroarilo" significa un anillo heterocíclico aromático de 5 a 10 miembros y que tiene, al menos, un heteroátomo seleccionado entre nitrógeno, oxígeno y azufre, y que contiene, al menos, 1 átomo de carbono, incluyendo sistemas de anillos tanto mono- como bicíclicos. Heteroarilos representativos incluyen (pero no están limitados a) furilo, benzofuranilo, tiofenilo, benzotiofenilo, pirrolilo, indolilo, isoindolilo, azaindolilo, piridilo, quinolinilo, isoquinolinilo, oxazolilo, isooxazolilo, benzoxazolilo, pirazolilo, imidazolilo, benzimidazolilo, tiazolilo, benzotiazolilo, isotiazolilo, piridazinilo pirimidinilo, pirazinilo, triazinilo, cinnolinilo, ftalazinilo, y quinazolinilo.
"Heteroarilalquilo" significa un alquilo que tiene, al menos, un átomo de hidrógeno del alquilo sustituido por un resto heteroarilo, como -CH_{2}piridinilo, -CH_{2}pirimidinilo, y similares.
"Heterociclo" (también denominado en la presente memoria como "anillo heterociclo") significa un anillo heterociclo monocíclico de 5 a 7 miembros o policíclico de 7 a 14 miembros, que es saturado, insaturado o aromático, y que contiene de 1 a 4 heteroátomos seleccionados, por separado, entre nitrógeno, oxígeno y azufre, y en el que los heteroátomos de nitrógeno y azufre pueden estar opcionalmente oxidados, y el heteroátomo de nitrógeno puede estar opcionalmente cuaternizado, incluyendo anillos bicíclicos en los que cualquiera de los heterociclos anteriores está fusionado a un anillo de benceno así como a anillos heterocíclicos tricíclicos (y mayores). El heterociclo puede estar unido vía cualquier heteroátomo o átomo de carbono. Los heterociclos incluyen heteroarilos como se definió anteriormente. De este modo, además de los heteroarilos aromáticos listados anteriormente, los heterociclos incluyen también (pero no están limitados a) morfolinilo, pirrolidinonilo, pirrolidinilo, piperidinilo, hidantoinilo, valerolactamilo, oxiranilo, oxetanilo, tetrahidrofuranilo, tetrahidropiranilo, tetrahidropiridinilo, tetrahidroprimidinilo, tetrahidrotiofenilo, tetrahidrotiopiranilo, tetrahidropirimidinilo, tetrahidrotiofenilo, tetrahidrotiopiranilo, y similares.
"Heterocicloalquilo" significa un alquilo que tiene, al menos, un átomo de hidrógeno del alquilo reemplazado por un heterociclo, como -CH_{2}morfolinilo, y similares.
El término "sustituido" como se usa en la presente memoria significa cualquiera de los grupos anteriores (es decir, alquilo, arilo, arilalquilo, heteroarilo, heteroarilalquilo, heterociclo y heterocicloalquilo) en los que, al menos, un átomo de hidrógeno es reemplazado por un sustituyente. En el caso de un sustituyente ceto ("-C(=O)-") están reemplazados dos átomos de hidrógeno. "Sustituyentes" dentro del contexto de esta invención, incluyen halógeno, hidroxi, ciano, nitro, aminoo, alquilamino, dialquilamino alquilo, alcoxi, tioalquilo, haloalquilo, hidroxialquilo, arilo, arilo sustituido, arilalquilo, arilalquilo sustituido, heteroarilo, heteroarilo sustituido, heteroarilalquilo, heteroarilalquilo sustituido, heterociclo, heterociclo sustituido, heterocicloalquilo, heterocicloalquilo sustituido, -NR_{a}R_{b}, -NR_{a}C(=O)R_{b}, -NR_{a}C(=O)NR_{a}R_{b}, -NR_{a}C(=O)OR_{b} -NR_{a}SO_{2}R_{b}, -OR_{a}, -C(=O)R_{a}C(=O)OR_{a}, -C(=O)NR_{a}R_{b}, -OC(=O)NR_{a}R_{b}, -SH, -SR_{a}, -SOR_{a}, -S(=O)_{2}R_{a}, -OS(=O)_{2}R_{a}, -S(=O)_{2}OR_{a}, en los que R_{a} y R_{b} son iguales o diferentes y, por separado, hidrógeno, alquilo, haloalquilo, alquilo sustituido, arilo, arilo sustituido, arilalquilo, arilalquilo sustituido, heteroarilo, heteroarilo sustituido, heteroarilalquilo, heteroarilalquilo sustituido, heterociclo, heterociclo sustituido, heterocicloalquilo o heterocicloalquilo sustituido.
"Halógeno" significa flúor, cloro, bromo y yodo.
"Haloalquilo" significa un alquilo que tiene, al menos, un átomo de hidrógeno reemplazado por halógeno, como trifluorometilo y similares. Haloalquilo es una realización específica de alquilo sustituido, en la que el alquilo se sustituye con uno o más átomos de halógeno.
"Alcoxi" significa un resto alquilo unido a través de un puente de oxígeno (es decir, -O-alquilo) como -O-metilo, -O-etilo, y similares.
"Tioalquilo" significa un resto alquilo unido a través de un puente de sulfuro (es decir, -S-alquilo) como -S-metilo, -S-etilo, y similares.
"Alquilamino" y "dialquilamino" significan uno o dos restos alquilo unidos a través de un puente de nitrógeno (es decir, -NHalquilo o -N(alquilo)(alquilo)) como metilamino, etilamino, dimetilamino, dietilamino, y similares.
"Hidroxialquilo" significa un alquilo sustituido con, al menos, un grupo hidroxilo.
Dependiendo de los grupos A, X, Y, y Z, compuestos representativos de esta invención tienen las estructuras (II) a (XII) siguientes:
3
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6
Como se usa en el contexto de esta invención,
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representa -CH_{2}CH_{2}- o -CH=CH- opcionalmente sustituidos con 1, 2 ó 3 sustituyentes R (es decir, m= 0, 1, 2 ó 3). Por consiguiente, compuestos representativos de esta invención también incluyen (pero no están limitados a) compuestos que tienen las estructuras (Ia) a (Ii) siguientes, en las que cada aparición de R es igual o diferente y representa un grupo (distinto de hidrógeno) como se definió anteriormente:
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9
10
Cuando están presentes, los grupos R representativos de esta invención incluyen (pero no están limitados a) alquilo (como metilo, etilo, n-propilo, isopropilo o isobutilo), arilo (como fenilo), heteroarilo (como piridilo), y alquilidenilo (como =CH_{2} y =CHCH_{3}). En el caso de que R sea un resto alquilidenilo, el átomo de carbono al que el resto alquilidenilo está unido debe tener la valencia apropiada. Por ejemplo, un resto alquilidenilo no sería apropiado en la posición R como se muestra en la estructura (If) anterior.
En realizaciones más específicas de esta invención, grupos R_{1} representativos de esta invención incluyen (pero no están limitados a) 2, 4-diclorofenilo, 2,4-dimetilfenilo, 2-cloro-4-metilfenilo, 2-metil-4-clorofenilo, 2,4,6-trimetilfenilo, 2-cloro-4-metoxifenilo, 2-metil-4-metoxifenilo, 2,4-dimetoxifenilo, 2-trifluorometil-4-clorofenilo, 3-metoxi-4-clorofenilo, 2,5-dimetoxi-4-clorofenilo, 2-metoxi-4-triclorometilfenilo, 2-metoxi-4-isopropilfenilo, 2-metoxi-4-trifluorometilfenilo, 2-metoxi-4-isopropilfenilo, 2-metoxi-4-metilfenilo, 4-metil-6-dimetilaminopiridin-3-ilo, 4-dimetilamino-6-metil-piridin-3-ilo, 6-dimetilamino-piridin-3-ilo y 4-dimetilamino-piridin-3-ilo.
De forma similar, grupos R_{2} representativos incluyen hidrógeno y alquilo, como metilo y etilo, mientras que grupos R_{3} representativos incluyen hidrógeno, halógeno como cloro, flúor y bromo, alquilo como metilo y etilo, y haloalquilo como trifluorometilo. Grupos R_{4} representativos incluyen alquilo como metilo, ciano y nitro, mientras que grupos R_{5} representativos incluyen hidrógeno y metilo. Grupos R_{6} representativos incluyen alquilo, como propilo, heptilo y pentilo, y alquilo sustituido en los que el alquilo, como etilo, propilo y pentilo, están sustituidos con grupos como alcoxi, ácido carboxílico y éster de ácido carboxílico.
Los compuestos de la presente invención pueden, en general, utilizarse como la base libre. Si no, los compuestos de esta invención pueden usarse en forma de sales de adición a ácidos. Sales de adición a ácidos de los compuestos amino de la base libre de la presente invención pueden prepararse por métodos muy conocidos en la técnica, y pueden formarse a partir de ácidos orgánicos e inorgánicos. Ácidos orgánicos adecuados incluyen los ácidos maleico, fumárico, benzoico, ascórbico,succínico, metanosulfónico, acético, oxálico, propiónico, tartárico, salicílico, cítrico, glucónico, láctico, mandélico, cinámico, aspártico, esteárico, palmítico, glicólico, glutámico, y bencenosulfónico. Ácidos inorgánicos adecuados incluyen los ácidos clorhídrico, bromhídrico, sulfúrico, fosfórico, y nítrico. De esta forma, la terminología "sal farmacéuticamente aceptable" de estructura (I) tiene la intención de abarcar cualquiera y todas las formas de sal aceptables.
En general, los compuestos de estructura (I) pueden hacerse según las técnicas de síntesis orgánica conocidas para aquéllos expertos en este campo, así como por los métodos representativos expuestos en los Ejemplos.
La efectividad de un compuesto como antagonista del receptor de la CRF puede determinarse por varios métodos de análisis. Antagonistas de la CRF adecuados de esta invención son capaces de inhibir la unión específica de la CRF a su receptor y antagonizar actividades asociadas con la CRF. Un compuesto de estructura (I) puede valorarse por la actividad como un antagonista de la CRF por uno o más análisis aceptados, en general, para este propósito, incluyendo (pero no limitados a) los análisis revelados por DeSouza et al. (J. Neuroscience 7: 88, 1987) y Battaglia et al. (Synapse 1: 572, 1987). Como se ha mencionado anteriormente, antagonistas de la CRF adecuados incluyen compuestos que demuestran afinidad por el receptor de la CRF. La afinidad por el receptor de la CRF puede determinarse por estudios de unión que miden la capacidad de un compuesto de inhibir la unión de una CRF radiomarcada (por ejemplo, [^{125}I]tirosina-CFR) a su receptor (por ejemplo, receptores preparados a partir de membranas de corteza cerebral de rata). El análisis de unión del radioligando descrito por DeSouza et al. (citado anteriormente, 1987) proporciona un análisis para determinar la afinidad de un compuesto por el receptor de la CRF. Tal actividad se calcula, por regla general, a partir del IC_{50} como la concentración de un compuesto necesaria para desplazar el 50% del ligando radiomarcado del receptor, y se informa como un valor "Ki" calculado por la siguiente ecuación:
K_{i}=\frac{IC_{50}}{1+L/K_{D}}
en la que L = radioligando y K_{D} = afinidad del radioligando por el receptor (Cheng y Prusoff, Biochem. Pharmacol. 22: 3099, 1973).
Además de inhibir la unión del receptor de la CRF, la actividad de un compuesto antagonista de un receptor de la CRF puede establecerse por la capacidad del compuesto de antagonizar una actividad asociada con la CRF. Por ejemplo, se sabe que la CRF estimula varios procesos bioquímicos, incluyendo la actividad de la adenilatociclasa. Por lo tanto, se pueden evaluar los compuestos como antagonistas de la CRF por su capacidad para antagonizar actividad de adenilatociclasa estimulada por la CRF midiendo, por ejemplo, los niveles de cAMP. El análisis de la aactividad de adenilatociclasa estimulada por la CRF descrito por Battaglia et al. (mencionado anteriormente, 1987) proporciona un análisis para determinar la capacidad de un compuesto para antagonizar la actividad de la CRF. Por consiguiente, la actividad del antagonista del receptor de la CRF puede determinarse por técnicas de análisis que, en general, incluyen un análisis inicial de unión (como reveló DeSouza (mencionado anteriormente, 1987)) seguido por un protocolo de detección sistemática de cAMP (como reveló Battaglia (mencionado anteriormente, 1987)).
Con referencia a las afinidades de unión del receptor de la CRF, los antagonistas del receptor de la CRF de esta invención tienen una Ki de menos de 10 \muM. En una realización preferida de esta invención, un antagonista del receptor de la CRF tiene una Ki de menos de 1 \muM, y más preferentemente, menos de 0,25 \muM (es decir, 250 nM). Como se expone con más detalle a continuación, los valores de Ki de compuestos representativos de esta invención pueden analizarse por los métodos expuestos en el Ejemplo 14.
Los antagonistas del receptor de la CRF de la presente invención demuestran actividad en el sitio del receptor de la CRF, y pueden usarse como agentes terapéuticos para el tratamiento de un amplio rango de trastornos o enfermedades, incluyendo trastornos o enfermedades endocrinas, psiquiátricas y neurológicas. Más específicamente, los antagonistas del receptor de la CRF de la presente invención pueden ser útiles para tratar afecciones psicológicas o trastornos que aparecen a partir de la hipersecreción de CRF. Debido a que se cree que la CRF es un neurotransmisor fundamental que activa y coordina las respuestas endocrinas, conductuales y automáticas al estrés, los antagonistas del receptor de la CRF de la presente invención pueden usarse para tratar trastornos neuropsiquiátricos. Los trastornos neuropsiquiátricos que pueden ser tratables con los antagonistas del receptor de la CRF de esta invención incluyen trastornos afectivos como depresión; trastornos relacionados con la ansiedad como el trastorno de ansiedad generalizada, trastorno de angustia, trastorno obsesivo-compulsivo, agresividad anormal, anomalías cardiovasculares como angina de pecho inestable e hipertensión reactiva; y trastornos alimentarios como anorexia nerviosa, bulimia, y síndrome del intestino irritable (colon irritable). Los antagonistas de la CRF pueden ser también útiles para tratar supresión inmunitaria inducida por estrés asociada con varios estados de enfermedad, así como ictus. Otros usos de los antagonistas de la CRF de esta invención incluyen tratamiento de afecciones inflamatorias (como artritis reumatoide, uveítis, asma, enfermedad inflamatoria del intestino y motilidad G.I.), dolor, síndrome de Cushing, espasmos infantiles, epilepsia y otros ataques tanto en niños como adultos, y el abuso y abstinencia de varias sustancias (incluyendo el alcoholismo).
En otra realización de la invención, se revelan composiciones farmacéuticas que contienen uno o más antagonistas del receptor de la CRF. Para los propósitos de administración, los compuestos de la presente invención pueden formularse como composiciones farmacéuticas. Las composiciones farmacéuticas de la presente invención comprenden un antagonista del receptor de la CRF de la presente invención (es decir, un compuesto de estructura (I)) y un vehículo y/o diluyente farmacéuticamente aceptable. El antagonista del receptor de la CRF está presente en la composición en una cantidad que es eficaz para tratar un trastorno particular, es decir, en una cantidad suficiente para conseguir actividad del antagonista del receptor de la CRF, y preferentemente, con efectos secundarios aceptables por el paciente. Por regla general, las composiciones farmacéuticas de la presente invención pueden incluir un antagonista del receptor de la CRF en una cantidad de 0,1 mg a 250 mg por dosis, dependiendo de la vía de administración, y más comúnmente de 1 mg a 60mg. Concentraciones y dosificaciones apropiadas pueden determinarse fácilmente por alguien experto en la técnica.
Vehículos y/o diluyentes farmacéuticamente aceptables son familiares para aquéllos expertos en la técnica. Para composiciones formuladas como soluciones líquidas, vehículos y/o diluyentes aceptables incluyen solución salina y agua estéril, y pueden incluir, opcionalmente, antioxidantes, tampones, bacteriostáticos y otros aditivos comunes. Las composiciones pueden formularse también como pastillas, cápsulas, gránulos, o comprimidos que contienen, además del antagonista del receptor de la CRF, diluyentes, agentes dispersantes y tensioactivos, agregantes, y lubricantes. Alguien experto en esta técnica puede además formular el antagonista del receptor de la CRF de una manera apropiada, y conforme a prácticas aceptadas, como las reveladas en Remington's Pharmaceutical Sciences, Gennaro, Ed., Mack Publishing Co., Easton, PA 1990.
Además, también se incluyen profármacos dentro del contexto de esta invención. Los profármacos son cualquier vehículo unido de forma covalente que libera un compuesto de estructura (I) in vivo cuando se administra tal profármaco a un paciente. Los profármacos se preparan, en general, modificando grupos funcionales de una manera tal que la modificación se rompe, bien por manipulación rutinaria o in vivo, para dar el compuesto original.
Con respecto a los estereoisómeros, los compuestos de estructura (I) pueden tener centros quirales y pueden presentarse como racematos, mezclas racémicas y como enantiómeros o diastereómeros individuales. Todas tales formas isómeras están incluidas dentro de la presente invención, incluyendo sus mezclas. Además, algunas de las formas cristalinas de los compuestos de estructura (I) pueden existir como polimorfas, que están incluidas en la presente invención. Además, algunos de los compuestos de estructura (I) pueden formar, también, solvatos con agua u otros disolventes orgánicos. Tales solvatos están incluidos, de forma similar, dentro del alcance de esta invención.
En otra realización, la presente invención proporciona un método para tratar diversos trastornos o enfermedades, incluyendo trastornos o enfermedades endocrinas, psiquiátricas y neurológicas. Tales métodos incluyen la administración de un compuesto de la presente invención a un animal de sangre caliente en una cantidad suficiente para tratar el trastorno o enfermedad. Tales métodos incluyen la administración general de un antagonista del receptor de la CRF de esta invención, en forma de, preferentemente, una composición farmacéutica. Como se ha usado en la presente memoria, la administración general incluye métodos de administración por vía oral y parenteral. Para administración por vía oral, composiciones farmacéuticas adecuadas de los antagonistas del receptor de la CRF incluyen polvos, gránulos, pastillas, comprimidos, y cápsulas así como líquidos, jarabes, suspensiones y emulsiones. Estas composiciones pueden incluir también aromatizantes, conservantes, agentes de suspensión, espesantes y emulsificantes, y otros aditivos farmacéuticamente aceptables. Para administración por vía parenteral, los compuestos de la presente invención pueden prepararse en inyecciones de soluciones acuosas, que pueden contener, además del antagonista del receptor de la CRF, tampones, antioxidantes, bacteriostáticos, y otros aditivos empleados comúnmente en tales soluciones.
En otra realización, los compuestos de esta invención y sus análogos pueden usarse como ligandos de Tomografía de emisión de positrones (PET), ligandos de Tomografía computerizada de emisión monofotónica (SPECT), u otros agentes radiofarmacéuticos de diagnóstico. La incorporación del isótopo apropiado (como ^{11}C o ^{18}F para PET o ^{125}I en el caso de SPECT) puede proporcionar un agente útil para el diagnóstico o tratamiento terapéutico de un paciente. Además, el uso de un compuesto de la presente invención puede proporcionar una valoración fisiológica, funcional o biológica de un paciente o facilitar la detección y valoración de una afección o patología.
Como se ha mencionado anteriormente, la administración de un compuesto de la presente invención puede usarse para tratar una amplia variedad de afecciones o enfermedades. En particular, los compuestos de la presente invención pueden administrarse a un animal de sangre caliente para el tratamiento de depresión, trastorno de ansiedad, trastorno de angustia, trastorno obsesivo-compulsivo, agresividad anormal, angina de pecho inestable, hipertensión reactiva, anorexia nerviosa, bulimia, síndrome del intestino irritable, supresión inmunitaria inducida por estrés, ictus, inflamación, dolor, enfermedad de Cushing, espasmos infantiles, epilepsia y abuso y abstinencia de sustancias.
Los siguientes ejemplos se proporcionan con propósito de ilustración, no de limitación.
Ejemplos
Los antagonistas del receptor de la CRF representativos de esta invención pueden prepararse como se revela en los Ejemplos 1 a 13. El Ejemplo 14 presenta un método para determinar la actividad de unión del receptor de la CRF (Ki), mientras que el Ejemplo 15 está dirigido a un análisis para detección sistemática de compuestos de esta invención para actividad de la adenilatociclasa estimulada por la CRF.
Ejemplo 1 Síntesis de compuestos representativos
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Compuesto 1-1
Se cargaron 500 mL (3,29 moles) de malonato de dietilo y 0,5 L de difeniléter en un recipiente de 5 L provisto de un agitador mecánico. Se añadió a esta mezcla etóxido de sodio (224,1 g, 3,29 moles) a temperatura ambiente. La mezcla se calentó a 175ºC y el etanol liberado se eliminó mediante una corriente de gas nitrógeno. Después de 30 minutos se añadieron 416 mL de 3-aminocrotonato de etilo (3,29 moles), eliminando el etanol adicional con una corriente de nitrógeno. Después de 30 minutos, el agitador mecánico ya no podía agitar la masa espumosa. El matraz de reacción se enfrió hasta temperatura ambiente y se añadió metil-terc-butil éter (MTBE) (1 L) mientras se trituraba el sólido granular. Se filtró el sólido y se lavó con MTBE. Se añadió entonces el sólido a HCl concentrado (200 mL) para solubilizar la mezcla. Se recogió entonces la mezcla en 500 mL de cloroformo (3X), y se secó sobre sulfato de sodio. Se concentró la mezcla a vacío para proporcionar una masa gomosa naranja que se trituró con éter y se filtró, lavando de nuevo con éter. El sólido resultante se recristalizó en etanol para dar el éster de dihidroxipiridina 1-1 como agujas rosáceas. (253,5 g, 39%). ^{1}H NMR (CDCl_{3}) \delta: 5,84 (s, 1H), 4,43 (q, 2H), 2,31 (s, 3H), 1,43 (t,3H).
Compuesto 1-2
A un matraz de fondo redondo de 3 L cargado con el éster de piridina-diona 1-1(320 g, 1,617 moles) y trietilamina (490 mL, 3,5 moles) en 1 L cloruro de metileno, se añadió anhídrido tríflico (950 g, 3,369 moles, diluido con 0,5 L de CH_{2}Cl_{2}) a 0ºC mediante un embudo de adición durante 2 horas. Se dejó calentar la mezcla a temperatura ambiente y se agitó durante 2 horas más. La reacción se detuvo con agua (0,5 L) y la capa orgánica se lavó con HCl 1N (2 X 200 mL), salmuera (100 mL), se secó sobre sulfato de magnesio y se filtró sobre una almohadilla de gel de sílice (80 X 120 mm) eluyendo con éter etílico. Se eliminó el disolvente a vacío para dar el bis-triflato 1-2 como un aceite (789,6 g) GCMS T_{r} = 4,97 min, MS (70 eV, EI) m/z 461 (2), 433 (35), 416 (40), 284 (75).
Compuesto 1-3
A una mezcla del bis-triflato 1-2 (105,3 g, 228,4 mmoles) y trietilamina (48 mL, 176,8 mmoles) en acetonitrilo (300 mL) a 0ºC mediante embudo de adición durante 2 horas. Se dejó calentarse la mezcla a temperatura ambiente y se agitó durante 2 horas más. La mezcla de reacción se diluyó entonces con cloruro de metileno (500 mL) y se lavó con HCl 1N (2 X 100 mL), salmuera (100 mL), se secó sobre sulfato de magnesio y se filtró sobre una almohadilla de gel de sílice (50 X 80 mm) eluyendo con éter etílico. Se eliminó el disolvente a vacío y el material resultante se cromatografió en gel de sílice eluyendo con acetato de etilo/hexanos 1:3 (R_{f}= 0,25). Se eliminó el disolvente a vacío para dar la 4-amino-piridina 1-3 como un aceite incoloro (75,3 g, 176,8 mmoles, 77%). GCMS T_{r} = 7,56 min, MS (70 eV, EI) m/z 497 [M-29] (2), 483 (100), 439 (5).
Compuesto 1-4
A una disolución de la 4-amino-piridina 1-3 (75,3 g, 176,8 mmoles) en éter etílico (500 mL) a temperatura ambiente, se añadió terc-butóxido de potasio (20,8 g, 185,6 mmoles) y se dejó agitar la mezcla durante 1 hora. La mezcla se filtró para eliminar cualquier material hidrolizado. Se eliminó el disolvente a vacío para dar la sal de potasio del éster bicíclico 1-4 como un sólido amarillo brillante (56,1 g). MS (M+1) 481.
Compuesto 1-5
El éster bicíclico 1-4 (56, 1 g) se disolvió en HCI 4M en dioxano (100 mL) y se dejo agitar durante 2 horas a temperatura ambiente. Entonces se añadió HCl 4N y la mezcla se calentó en un baño de aceite a 100ºC durante 12 horas. La mezcla se enfrió entonces a temperatura ambiente y se neutralizó con NaOH 1N. La capa acuosa se extrajo con acetato de etilo (4 X 100 mL), se secó sobre sulfato de magnesio y se filtró sobre una almohadilla de gel de sílice (50 X 80 mm) eluyendo con éter etílico. Se eliminó el disolvente a vacío para dar la clorocetona 1-5 como un aceite que solidificó durante 2 días (24 g). GCMS T_{r} = 8,15 min, MS (70 eV, El) m/z 294 (7), 251 (100), 223 (17).
Compuesto 1-6
A la clorocetona 1-5 (1,98 g, 6,73 mmoles) disuelta en acetonitrilo, se añadió 2-cloro-4-metilanilina y la mezcla se calentó a 80ºC en un baño aceite durante 4 horas. El disolvente se eliminó entonces a vacío para dar la 2-anilino piridina 1-6 como un aceite con un contenido de, aproximadamente, un 5% de impureza de anilina (3,29 g). GCMS T_{r} = 12,09 min, MS (70 eV, EI) m/z 399 (4), 364 (100), 292 (10), 266 (30). MS (M+1) 400.
Compuesto 1-7
A una mezcla de la 2-anilino piridina bicíclica 1-6 (3,29 g, 8,25 mmoles), trietilamina (11,5 mL, 82,5 mmoles) e hidrocloruro de metilamina (2,78 g, 41,25 mmoles) en cloruro de metileno a 0ºC, se añadió, gota a gota, tetracloruro titanio (16,5 mL, [1,0M] en CH_{2}Cl_{2}. La mezcla se dejó entonces llegar a temperatura ambiente y se agitó en atmósfera inerte durante 12 horas. La reacción se detuvo entonces con NaOH 1N a 0ºC, se extrajo con cloruro de metileno, se secó sobre sulfato de magnesio, se filtró sobre gel de sílice y se concentró a vacío. El aceite rojo resultante se recogió entonces en metanol y se añadió borohidruro de sodio en porciones (un gran exceso) hasta que el análisis por TLC indicó una reacción completa. La reacción se detuvo entonces con NaOH 1N, se extrajo con cloruro de metileno, se secó sobre sulfato de magnesio, se filtró sobre gel de sílice y se concentró a vacío para dar el compuesto metil-amino 1-7 como un aceite oscuro (2,54 g). MS (M+1) 415.
Compuesto 1-8
Al compuesto metil-amino 1-7 (15 mg, 0,036 mmoles) y trietilamina (0,072 mmoles) en cloruro de metileno a 0ºC, se añadió trifosgeno (0,036 mmoles) y la mezcla de reacción se dejó agitar durante 30 minutos. La mezcla de reacción se purificó entonces en gel de sílice eluyendo con acetato de etilo/hexanos 1:3 (R_{f}=0,10). Se eliminó el disolvente a vacío para dar la urea cíclica 1-8 como un sólido blanco (5 mg). MS (M+1) 441.
Ejemplo 2 Síntesis de compuestos representativos
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Compuesto 2-1
Al compuesto metil-amino 1-7 (del Ejemplo 1, 15 mg, 0,036 mmoles) en etanol absoluto a temperatura ambiente, se añadió dimetilcianoditioiminocarbonato (0,072 mmoles). La reacción se calentó en una placa calefactora a 80ºC en un recipiente sellado durante 72 horas. La mezcla de reacción se purificó entonces en gel de sílice eluyendo con acetato de etilo/hexanos 1:3 (R_{f}= 0,10). Se eliminó el disolvente a vacío para dar la N-cianoguanidina 2-1 como un sólido blanco (5 mg). MS (M+1) 465.
Ejemplo 3 Síntesis de compuestos representativos
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Compuesto 3-1
Al compuesto metil-amino 1-7 (del Ejemplo 1, 50 mg, 0,12 mmoles), disuelto en etanol, se añadió KOH 4N (0,1 mL, 0,40 mmoles) y disulfuro de carbono (1,5 mmoles).
La mezcla de reacción se calentó en una placa a 60ºC durante 12 horas. Se eliminó el disolvente a vacío y se reemplazó por acetato de etilo, lavando con salmuera. La capa orgánica se secó sobre sulfato de magnesio y el producto se purificó entonces en gel de sílice eluyendo con acetato de etilo/hexanos 1:3 (R_{f}= 0,45). Se eliminó el disolvente a vacío para dar la tiourea cíclica 3-1 como un sólido blanco (25 mg). MS (M+1) 457.
Ejemplo 4 Síntesis de compuestos representativos
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Compuesto 4-2
El compuesto 4-1 (0,095 mmoles) y R_{5}NH_{2} (0,20 mL) se disolvieron en acetonitrilo (1 mL) y se trataron con cianoborohidruro de sodio (25 mg). Se añadió ácido acético (1 gota) y la mezcla se agitó durante 4 horas, se diluyó con NaHCO_{3} acuoso (2 mL), y se extrajo con acetato de etilo (4 x 2 mL). Los extractos orgánicos combinados se secaron (MgSO_{4}), se concentraron a vacío, y el residuo se recogió en tolueno (1 mL) y se trató con una disolución de fosgeno en tolueno (0,1 mL al 20%). Después de 18 horas, la disolución se concentró a vacío y el residuo se purificó por TLC preparativo para dar la urea 4-2a. Un tratamiento similar del aducto de amina intermedio con tiofosgeno produjo la tiourea 4-2b.
Ejemplo 5 Síntesis de intermedios representativos
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Compuesto 5-2
La cloropiridina 5-1 se disolvió en THF y se añadió a una suspensión agitada de LAH en THF a -78ºC. La mezcla se agitó durante 6 horas a esta temperatura y durante 1 hora a -30ºC. La mezcla se trató entonces, con prudencia, con agua, NaOH acuoso al 15% y agua con agitación vigorosa. La mezcla se calentó a temperatura ambiente y se filtró. El precipitado blanco se lavó generosamente con acetato de etilo. Las porciones orgánicas combinadas se secaron (MgSO_{4}) y se concentraron a vacío. La purificación mediante cromatografía instantánea (flash) dio el compuesto 5-2 deseado.
Compuesto 5-3
Se añadió DMSO (6 equivalentes) a una disolución agitada de cloruro oxalilo (3 equivalentes) en diclorometano a -70ºC. Después de 15 min, se añadió el alcohol 5-2 (1 equivalente) en diclorometano, seguido de trietilamina. La mezcla se dejo calentarse a temperatura ambiente y se agitó durante 1 hora. La mezcla se lavó con bicarbonato de sodio acuoso (75 mL), se secó (MgSO_{4}), y se concentró a vacío. La purificación mediante cromatografía instantánea dio el producto 5-3 deseado.
Compuesto 5-4
Se añadió bromuro de alquenilmagnesio en THF (1 equivalente) a una disolución agitada del aldehido 5-3 (1 equivalente) en THF a -78ºC. La mezcla se agitó a esta temperatura durante 30 minutos, se calentó a temperatura ambiente y se detuvo con bicarbonato de sodio acuoso. La mezcla se extrajo entonces con acetato de etilo y los extractos combinados se secaron (MgSO_{4}) y se concentraron a vacío. La purificación mediante cromatografía instantánea dio el compuesto 5-4 deseado.
Compuesto 5-5
El compuesto 5-4 y R_{6}NH_{2} (1 equivalente) en etanol (20 mL) se calentaron a 60ºC durante 16 horas. La mezcla se concentró, se recogió en acetato de etilo (50 mL), se lavó con NaHCO_{3} acuoso (20 mL), se secó (MgSO_{4}) y se concentró a vacío. El residuo se purificó en una columna de gel de sílice (elución con acetato de etilo al 25% en hexanos) para dar el compuesto 5-5.
Compuesto 5-6
La cetona 5-5 (0,16 mmoles), ácido toluensulfónico monohidratado (30 mg, 0,16 mmoles) y R_{1}NH_{2} (0,18 mmoles) se disolvieron en etanol (0,5 mL) y se calentaron a 80ºC en un tubo sellado durante 20 horas. La mezcla se enfrió a temperatura ambiente, se diluyó con NaHCO_{3} acuoso (2 mL), y se extrajo con acetato de etilo (4 x 2 mL). Los extractos orgánicos combinados se secaron (MgSO_{4}), se concentraron a vacío, y el residuo se purificó por TLC preparativo para dar el compuesto 5-6.
Ejemplo 6 Síntesis de intermedios representativos
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21
Compuesto 6-2
La cloropirimidina 6-1 se disolvió en THF y se añadió a una suspensión agitada de LAH en THF a -78ºC. La mezcla se agitó durante 6 horas a esta temperatura y durante 1 hora a -30ºC. La mezcla se trató entonces, con prudencia, con agua, NaOH acuoso al 15% y agua con agitación vigorosa. La mezcla se calentó a temperatura ambiente y se filtró. El precipitado blanco se lavó generosamente con acetato de etilo. Las porciones orgánicas combinadas se secaron (MgSO_{4}) y se concentraron a vacío. La purificación mediante cromatografía instantánea dio el producto 6-2 deseado.
Compuesto 6-3
Se añadió DMSO (6 equivalentes) a una disolución agitada de cloruro de oxalilo (3 equivalentes) en diclorometano a -70ºC. Después de 15 min, se añadió el alcohol 6-2 (1 equivalente) en diclorometano, seguido de trietilamina. La mezcla se dejó calentarse a temperatura ambiente y se agitó durante 1 hora. La mezcla se lavó con bicarbonato de sodio acuoso (75 mL), se secó (MgSO_{4}), y se concentró a vacío. La purificación mediante cromatografía instantánea dio el producto 6-3 deseado.
Compuesto 6-4
Se añadió bromuro de alquenilmagnesio (1 equivalente) en THF a una disolución agitada del aldehido 6-3 (1 equivalente) en THF a -78ºC. La mezcla se agitó a esta temperatura durante 30 minutos, se calentó a temperatura ambiente y se detuvo con bicarbonato de sodio acuoso. La mezcla se extrajo con acetato de etilo y los extractos combinados are se secaron (MgSO_{4}) y se concentraron a vacío. La purificación mediante cromatografía instantánea dio el producto 6-4 deseado.
Compuesto 6-5
El compuesto 6-4 y R_{6}NH_{2} (1 equivalente) en etanol (20 mL) se calentaron a 60ºC durante 16 horas. La mezcla se concentró, se recogió en acetato de etilo (50 mL), se lavó con NaHCO_{3} acuoso (20 mL), se secó (MgSO_{4}) y se concentró a vacío. El residuo se purificó en una columna de gel de sílice (elución con acetato de etilo al 25% en hexanos) para dar el compuesto 6-5.
Compuesto 6-6
La cetona 6-5 (0,16 mmoles), ácido toluensulfónico monohidratado (30 mg, 0,16 mmoles) y R_{1}NH_{2} (0,18 mmoles) se disolvieron en etanol (0,5 mL) y se calentaron a 80ºC en un tubo sellado durante 20 horas. La mezcla se enfrió a temperatura ambiente, se diluyó con NaHCO_{3} acuoso (2 mL), y se extrajo con acetato de etilo (4 x 2 mL). Los extractos orgánicos combinados se secaron (MgSO_{4}), se concentraron a vacío, y el residuo se purificó por TLC preparativo para dar el compuesto 6-6.
Ejemplo 7 Síntesis de compuestos representativos
22
Compuesto 7-2
La cetona 7-1 (0,16 mmoles), urea (30 mg) y ZnCl_{2} (25 mg) se calentaron a 200ºC durante 5 horas. La mezcla se enfrió a temperatura ambiente, se diluyó con NaHCO_{3} acuoso (2 mL), y se extrajo con acetato de etilo (4 x 2 mL). Los extractos orgánicos combinados se secaron (MgSO_{4}), se concentraron a vacío, y el residuo se purificó por TLC preparativo para dar la urea 7.
Compuesto 7-3
La urea 7 (0,070 mmoles) y PCl_{5} (15 mg, 0,070 mmoles) se calentaron en tolueno a 90ºC durante 3 horas, tiempo durante el cual se formó un sólido blanco. La mezcla se enfrió a temperatura ambiente y se trató con R_{4}NH_{2} (0,10 mL). Se continuó agitando durante 30 min. La mezcla se diluyó con NaHCO_{3} acuoso (2 mL), y se extrajo con acetato de etilo (4 x 2 mL). Los extractos orgánicos combinados se secaron (MgSO_{4}), se concentraron a vacío, y el residuo se purificó por TLC preparativo para dar la guanidina 8.
Ejemplo 8 Síntesis de compuestos representativos
23
Compuesto 8-1
La urea 7-2 (del Ejemplo 7, 0,070 mmoles) y P_{4}S_{10} (50 mg) se calentaron en tolueno a 90ºC durante 20 horas. La mezcla se enfrió a temperatura ambiente, se diluyó con NaHCO_{3} acuoso (2 mL), y se extrajo con acetato de etilo (4 x 2 mL). Los extractos orgánicos combinados se secaron (MgSO_{4}), se concentraron a vacío, y el residuo se purificó por TLC preparativo para dar la tiourea 8-1.
Ejemplo 9 Síntesis de compuestos representativos
24
Compuesto 9-2
El compuesto 9-1 (0,095 mmoles) y R_{5}NH_{2} (0,20 mL) se disolvieron en acetonitrilo (1 mL) y se trataron con cianoborohidruro de sodio (25 mg). Se añadió ácido acético (1 gota) y se agitó la mezcla durante 4 horas, se diluyó con NaHCO_{3} acuoso (2 mL), y se extrajo con acetato de etilo (4 x 2 mL). Los extractos orgánicos combinados se secaron (MgSO_{4}), se concentraron a vacío, y el residuo se recogió en tolueno (1 mL) y se trató con una disolución de fosgeno en tolueno (0,1 mL al 20%). Después de 18 horas, la disolución se concentró a vacío y el residuo se purificó por TLC preparativo para dar la urea 9-2a. Un tratamiento similar del aducto de amina intermedio con tiofosgeno produjo la tiourea 9-2b.
Ejemplo 10 Síntesis de intermedios representativos
25
26
27
Compuesto 10-2
Trimetilsililetanol se trató con n-butilitio a -78ºC en THF. Después de 15 minutos se añadió la dicloropiridina 10-1 y la mezcla se dejó calentarse a temperatura ambiente. La mezcla se calentó entonces a 50ºC durante 2 horas. Tras enfriarse a temperatura ambiente, la mezcla se vertió en NH_{4}Cl saturado y se extrajo con acetato de etilo. Las capas orgánicas se combinaron y se lavaron tres veces con agua y salmuera. La fase orgánica se secó (MgSO_{4}) y se concentró a vacío. La purificación mediante cromatografía instantánea dio el producto 10-2 deseado.
Compuesto 10-3
La cloropiridina 10-2 se disolvió en THF y se añadió a una suspensión agitada de LAH en THF a -78ºC. La mezcla se agitó durante 6 horas a esta temperatura y durante 1 hora a -30ºC. La mezcla se trató entonces, con prudencia, con agua, NaOH acuoso al 15% y agua con agitación vigorosa. La mezcla se calentó a temperatura ambiente y se filtró. El precipitado blanco se lavó generosamente con acetato de etilo. Las porciones orgánicas combinadas se secaron (MgSO_{4}) y se concentraron a vacío. La purificación mediante cromatografía instantánea dio el producto 10-3 deseado.
Compuesto 10-4
Se añadió DMSO (6 equivalentes) a una disolución agitada de cloruro de oxalilo (3 equivalentes) en diclorometano a -70ºC. Después de 15 min, se añadió el alcohol 10-3 (1 equivalente) en diclorometano, seguido de trietilamina. La mezcla se dejó calentarse a temperatura ambiente y se agitó durante 1 hora. La mezcla se lavó con bicarbonato de sodio acuoso (75 mL), se secó (MgSO_{4}), y se concentró a vacío. La purificación mediante cromatografía instantánea dio el producto 10-4 deseado.
\newpage
Compuesto 10-5
Se añadió bromuro de alquenilmagnesio en THF (1 equivalente) a una disolución agitada del aldehido 10-4 (1 equivalente) en THF a -78ºC. La mezcla se agitó a esta temperatura durante 30 minutos, se calentó a temperatura ambiente y se detuvo con bicarbonato de sodio acuoso. La mezcla se extrajo entonces con acetato de etilo y los extractos combinados se secaron (MgSO_{4}) y se concentraron a vacío. La purificación mediante cromatografía instantánea dio el producto 10-5 deseado.
Compuesto 10-6
El alcohol alílico 10-5 se trató con fluoruro de tetrabutilamonio en THF. Después de 1 hora la mezcla se diluyó con acetato de etilo y se lavó con cloruro de amonio saturado, se secó (MgSO_{4}) y se concentró a vacío. La mezcla bruta y N-oxido de N-metilmorfolina (1,5 equivalentes) se disolvieron en diclorometano y se agitaron en presencia de tamices moleculares de 4 angstrom durante 20 minutos. Se añadió per-rutenato detetrappropilamonio catalítico y la mezcla se agitó durante 1 hora. La mezcla se filtró (Celite) y se concentró a vacío. La mezcla bruta se disolvió en 5 equivalentes de diisopropiletilamina y se calentó a 50ºC durante 6 horas. La mezcla resultante se concentró a vacío y la purificación mediante cromatografía instantánea proporcionó el producto 10-6 deseado.
Compuesto 10-7
La cetona 10-6 (0,16 mmoles), ácido toluensulfónico monohidratado (30 mg, 0,16 mmoles) y R_{1}NH_{2} (0,18 mmoles) se disolvieron en etanol (0,5 mL) y calentaron a 80ºC, en un tubo sellado, durante 20 horas. La mezcla se enfrió a temperatura ambiente, se diluyó con NaHCO_{3} acuoso (2 mL), y se extrajo con acetato de etilo (4 x 2 mL). El extractos orgánicos combinados se secaron (MgSO4), se concentraron a vacío, y el residuo se purificó por TLC preparativo para dar el compuesto 10-7.
Ejemplo 11 Síntesis de intermedios representativos
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29
30
Compuesto 11-2
Se trató trimetilsililetanol con n-butillitio a -78ºC en THF. Después de 15 minutos, se añadió la dicloropirimidina 11-1 y la mezcla se dejó calentarse a temperatura ambiente. La mezcla se calentó entonces a 50ºC durante 2 horas. Tras enfriarse a temperatura ambiente la mezcla se vertió en NH_{4}Cl saturado y se extrajo con acetato de etilo. Las capas orgánicas se combinaron y se lavaron tres veces con agua y salmuera. La fase orgánica se secó (MgSO_{4}) y se concentró a vacío. La purificación mediante cromatografía instantánea dio el producto 11-2 deseado.
\newpage
Compuesto 11-3
Se disolvió la cloropirimidina 11-2 en THF y se añadió a una suspensión agitada de LAH en THF a -78ºC. La mezcla se agitó durante 6 horas a esta temperatura y durante 1 hora a -30ºC. La mezcla se trató entonces, con prudencia, con agua, NaOH acuoso al 15% y agua con agitación vigorosa. La mezcla se calentó a temperatura ambiente y se filtró. El precipitado blanco se lavó generosamente con acetato de etilo. Las porciones orgánicas combinadas se secaron (MgSO_{4}) y se concentraron a vacío. La purificación mediante cromatografía instantánea dio el producto 11-3 deseado.
Compuesto 11-4
Se añadió DMSO (6 equivalentes) a una disolución agitada de cloruro de oxalilo (3 equivalentes) en diclorometano a -70ºC. Después de 15 min, se añadió el alcohol 11-3 (1 equivalente) en diclorometano, seguido de trietilamina. La mezcla se dejó calentarse a temperatura ambiente y se agitó durante 1 hora. La mezcla se lavó con bicarbonato de sodio acuoso (75 mL), se secó (MgSO_{4}), y se concentró a vacío. La purificación mediante cromatografía instantánea dio el producto 11-4 deseado.
Compuesto 11-5
Se añadió bromuro de alquenilmagnesio (1 equivalente) en THF a una disolución agitada del aldehido 11-4 (1 equivalente) en THF a -78ºC. La mezcla se agitó a esta temperatura durante 30 minutos, se calentó a temperatura ambiente y se detuvo con bicarbonato de sodio acuoso La mezcla se extrajo con acetato de etilo y los extractos combinados se secaron (MgSO_{4}) y se concentraron a vacío. La purificación mediante cromatografía instantánea dio el producto 11-5 deseado.
Compuesto 11-6
El alcohol alílico 11-5 se trató con fluoruro de tetrabutilamonio en THF. Después de 1 hora la mezcla se diluyó con acetato de etilo y se lavó con cloruro de amonio saturado, se secó (MgSO_{4}) y se concentró a vacío. La mezcla bruta y N-oxido de N-metilmorfolina (1,5 equivalentes) se disolvieron en diclorometano y se agitaron en presencia de tamices moleculares de 4 angstrom molecular durante 20 minutos. Se añadió per-rutenato detetrappropilamonio catalítico y la mezcla se agitó durante 1 hora. La mezcla se filtró (Celite) y se concentró a vacío. La mezcla bruta se disolvió en 5 equivalentes de diisopropiletilamina y calentó a 50ºC durante 6 horas. La mezcla resultante se concentró a vacío y la purificación mediante cromatografía instantánea proporcionó el producto 11-6 deseado.
Compuesto 11-7
La cetona 11-6 (0,16 mmoles), ácido toluensulfónico monohidratado (30 mg, 0,16 mmoles) y R_{1}NH_{2} (0,18 mmoles) se disolvieron en etanol (0,5 mL) y calentaron a 80ºC, en un tubo sellado, durante 20 horas. La mezcla se enfrió a temperatura ambiente, se diluyó con NaHCO_{3} acuoso (2 mL), y se extrajo con acetato de etilo (4 x 2 mL). Los extractos orgánicos combinados se secaron (MgSO_{4}), se concentraron a vacío, y el residuo se purificó por TLC preparativo para dar el compuesto 11-7.
Ejemplo 12 Síntesis de compuestos representativos
31
Compuesto 12-2
La cetona 12-1 (0,16 mmoles), urea (30 mg) y ZnCl_{2} (25 mg) se calentaron a 200ºC durante 5 horas. La mezcla se enfrió a temperatura ambiente, se diluyó con NaHCO_{3} acuoso (2 mL), y se extrajo con acetato de etilo (4 x 2 mL). Los extractos orgánicos combinados se secaron (MgSO_{4}), se concentraron a vacío, y el residuo se purificó por TLC preparativo para dar la urea 12-2.
\newpage
Compuesto 12-3
La urea 12-2 (0,070 mmoles) y PCl_{5} (15 mg, 0,070 mmoles) se calentaron en tolueno a 90ºC durante 3 horas tiempo durante el cual se formó un sólido blanco. La mezcla se enfrió a temperatura ambiente y se trató con R_{4}NH_{2} (0,10 mL). Se continuó agitando durante 30 min. La mezcla se diluyó con NaHCO_{3} acuoso (2 mL), y se extrajo con acetato de etilo (4 x 2 mL). Los extractos orgánicos combinados se secaron (MgSO_{4}), se concentraron a vacío, y el residuo se purificó por TLC preparativo para dar la guanidina 12-3.
Ejemplo 13 Síntesis de compuestos representativos
32
Compuesto 13-2
La urea 13-1 (0,070 mmoles) y P_{4}S_{10} (50 mg) se calentaron en tolueno a 90ºC durante 20 horas. La mezcla se enfrió a temperatura ambiente, se diluyó con NaHCO_{3} acuoso (2 mL), y se extrajo con acetato de etilo (4 x 2 mL). Los extractos orgánicos combinados se secaron (MgSO_{4}), se concentraron a vacío, y el residuo se purificó por TLC preparativo para dar la tiourea 13-2.
Ejemplo 14 Actividad de unión al receptor de la CRF
Los compuestos de esta invención pueden ser evaluados por la actividad de unión al receptor de la CRF por un análisis de unión a un radioligando estándar, como describieron, en líneas generales, DeSouza et al. (J. Neurosci. 7: 88-100, 1987). Utilizando varios ligandos de CRF radiomarcados, el análisis puede usarse para evaluar la actividad de unión de los compuestos de la presente invención con cualquier subtipo de receptor de la CRF. En resumen, el análisis de unión implica el desplazamiento de un ligando de CRF radiomarcado del receptor de la CRF.
Más específicamente, el análisis de unión se realiza en tubos Eppendorf de 1,5 mL usando, aproximadamente, 1 x 10^{6} células por tubo, transinfectadas de forma estable con receptores humanos de la CRF. Cada tubo recibió, aproximadamente, 0,1 mL de tampón de análisis (por ejemplo, solución salina de fosfato tamponada de Dulbecco, cloruro de magnesio 10 mM, bacitracina 20 \muM) con o sin sauvagina sin marcar, urotensina I o CRF (concentración final, 1 \muM) para determinar uniones no específicas, 0,1 mL de tirosina[^{125}I]-CRF ovina (concentración final \sim200 pM o aproximadamente la K_{D} como se determinó por el análisis dde Scatchard) y 0,1 mL de una suspensión de membranas de células que contenían el receptor de la CRF. La mezcla se incubó durante dos horas a 22ºC seguido de la separación por centrifugación de los radioligandos unidos y libres. Tras dos lavados de los pelets, los tubos se cortaron justo por encima de los pelets y se controló la radiactividad en un contador gamma a, aproximadamente, el 80% de eficacia. Todos los datos de radioligandos unidos pueden analizarse usando el programa LIGAND de Munson y Rodbard de ajuste de curvas no lineales por mínimos cuadrados (Anal. Biochem. 107: 220, 1990).
Ejemplo 15 Actividad de la adenilatociclasa estimulada por CRF
Los compuestos de la presente invención se pueden evaluar también por varias pruebas funcionales. Por ejemplo, los compuestos de la presente invención pueden ser detectados sistemáticamente por la actividad de la adenilatociclasa estimulada por la CRF. Un análisis para la determinación de la actividad de la adenilatociclasa estimulada por la CRF puede realizarse como describieron, en líneas generales, Battaglia et al. (Synapse 1: 572, 1987), con modificaciones para adaptar el análisis a las preparaciones de células enteras.
Más específicamente, la mezcla de análisis estándar puede contener lo siguiente en un volumen final de 0,5 mL: L-glutamina 2 mM, HEPES 20 mM, e IMBX 1 mM en tampón DMEM. En estudios de estimulación, las células enteras, con los receptores de la CRF transinfectados, se colocan en placas de 24 pocillos y se incuban durante 1 h a 37ºC con varias concentraciones de péptidos relacionados y no relacionados con la CRF para establecer el perfil del orden farmacológico del subtipo concreto de receptores. Tras la incubación, se aspira el medio, los pocillos se aclaran una vez suavemente con medio fresco y el medio aspirado. Para determinar la cantidad de cAMP intracelular, se añade a cada pocillo 300 \muL de una disolución de etanol al 95% y ácido clorhídrico acuoso 20 mM, y se incuban las suspensiones resultantes a -20ºC durante 16 a 18 horas. La solución se elimina a tubos Eppendorf de 1,5 mL y los pocillos se lavan con 200 \muL más de etanol/ácido clorhídrico acuoso y se reúnen con la primera fracción. Las muestras se liofilizan y después se resuspenden con 500 \muL de tampón de acetato de sodio. La medida del cAMP en las muestras se realiza usando un único kit de anticuerpos de Biomedical Technologies Inc. (Stoughton, MA). Para la valoración funcional de los compuestos, una única concentración de CRF o de péptidos relacionados que causan el 80% de la estimulación de la producción de cAMP, se incuban junto con varias concentraciones de compuestos que compiten (10^{-12} a 10^{-6} M).
Se apreciará que, aunque las realizaciones específicas de la invención se han descrito en la presente memoria con intención de ilustrar, pueden hacerse varias modificaciones sin apartarse del espíritu y alcance de la invención. Por consiguiente, la invención no está limitada, excepto por las reivindicaciones adjuntas.

Claims (23)

1. Un compuesto que tiene la siguiente estructura (I):
33
o un estereoisómero, profármaco o su sal farmacéuticamente aceptable, en la que:
X es nitrógeno o CR_{3};
Z es O, S, o NR_{4};
Y es N, NR_{5} u O;
A es O, S, o NR_{6};
"- - - -" representa un doble enlace opcional;
R es un sustituyente opcional que, en cada aparición es, por separado, alquilo, arilo, heteroarilo, alquilidenilo, arilalquilo o heteroarilalquilo, en el que m es 0, 1, 2 ó 3 y representa el número de sustituyentes R;
R_{1} es alquilo, alquilo sustituido, arilo, arilo sustituido, heteroarilo o heteroarilo sustituido;
R_{2} es hidrógeno, alquilo, alquilo sustituido, alcoxi o tioalquilo;
R_{3} es hidrógeno, halógeno, alquilo o alquilo sustituido;
R_{4} es hidrógeno, ciano, nitro, alquilo o alquilo sustituido;
R_{5} es hidrógeno, alquilo o alquilo sustituido; y
R_{6} es hidrógeno, alquilo, alquilo sustituido, arilo, arilo sustituido, heteroarilo o heteroarilo sustituido.
2. El compuesto de la reivindicación 1, en el que X es CR_{3}.
3. El compuesto de la reivindicación 1, en el que X es nitrógeno.
4. El compuesto de la reivindicación 1, en el que A es O.
5. El compuesto de la reivindicación 1, en el que A es S.
6. El compuesto de la reivindicación 1, en el que A es NR_{6}.
7. El compuesto de la reivindicación 6, en el que R_{6} es alquilo.
8. El compuesto de la reivindicación 1, en el que Y es N.
9. El compuesto de la reivindicación 1, en el que Y es NR_{5}.
10. El compuesto de la reivindicación 9, en el que R_{5} es alquilo.
11. El compuesto de la reivindicación 1, en el que Y es O.
12. El compuesto de la reivindicación 1, en el que Z es O.
13. El compuesto de la reivindicación 1, en el que Z es S.
14. El compuesto de la reivindicación 1, en el que Z es NR_{4}.
15. El compuesto de la reivindicación 1, en el que R_{1} es arilo sustituido.
16. El compuesto de la reivindicación 15, en el que R_{1} es fenilo sustituido.
17. El compuesto de la reivindicación 1, en el que R_{2} es alquilo.
18. El compuesto de la reivindicación 1, en el que m es 0.
19. Una composición que comprende un compuesto de la reivindicación 1, en combinación con un vehículo o diluyente farmacéuticamente aceptable.
20. Un compuesto de la reivindicación 1, para uso en un método para tratar un trastorno que se manifiesta con hipersecreción de CRF en un animal de sangre caliente, que comprende administrar al animal una cantidad eficaz de la composición de la reivindicación 19.
21. Un compuesto según la reivindicación 20, para uso en el método de la reivindicación 20, en el que el trastorno es ictus.
22. Un compuesto según la reivindicación 20, para uso en el método de la reivindicación 20, en el que el trastorno es depresión.
23. Un compuesto según la reivindicación 20, para uso en el método de la reivindicación 20, en el que el trastorno es ansiedad.
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