ES2209403T3

ES2209403T3 - Oligodesoxirribonucleotidos que comprenden o6-benzilguanina y su uso.

Info

Publication number: ES2209403T3
Application number: ES99906925T
Authority: ES
Inventors: Robert C. Moschel; Gary T. Pauly; Anthony E. Pegg; M. Eileen Dolan
Original assignee: Arch Development Corp; Penn State Research Foundation; US Department of Health and Human Services
Current assignee: Arch Development Corp; Penn State Research Foundation; US Department of Health and Human Services
Priority date: 1998-02-13
Filing date: 1999-02-12
Publication date: 2004-06-16
Anticipated expiration: 2019-02-12
Also published as: ATE252111T1; JP2002503671A; AU742667B2; US6060458A; DE69912099D1; EP1054890B1; DE69912099T2; AU2672199A; CA2320288C; WO1999041269A1; EP1054890A1; CA2320288A1

Abstract

Un oligodesoxirribonucleótido de banda sencilla, que (i) comprende no menos de 5 y no más de 11 bases, al menos una de las cuales es una O6-benzilguanina sustituida o no sustituida, e (ii) inactiva la alquiltransferasa humana.

Description

Oligodesoxirribonucleótidos que comprenden O^{6}-benzilguanina y su uso.

Campo técnico de la invención

Esta invención se refiere a oligodesoxirribonucleótidos de 5 a 11 bases que comprenden O^{6}-benzilguanina y a composiciones relacionadas. Esta invención se refiere también al uso de tales oligodesoxirribonucleótidos y composiciones relacionadas para potenciar el efecto de un agente alquilante antineoplásico en el tratamiento quimioterapéutico de cáncer en un mamífero.

Antecedentes de la invención

La O^{6}-alquilguanina-ADN alquiltransferasa (AGT) es una proteína reparadora de ADN. La AGT elimina grupos alquilo y aralquilo que se unen en la posición O^{6} de la guanina en el ADN o grupos alquilo en la posición O^{4} de la timina en el ADN tras la exposición a agentes alquilantes mutagénicos y/o carcinogénicos. Lo hace causando una transferencia estequiométrica del grupo unido a la posición O^{6} de un residuo de guanina en el ADN, por ejemplo, a un residuo de cisteína dentro de la proteína AGT (Pegg, Cancer Research 50: 6119-6129 (1990)). Por consiguiente, la AGT es beneficiosa para una célula normal porque elimina los aductos que se forman en el ADN por agentes tóxicos, mutagénicos y carcinogénicos, devolviendo por lo tanto el ADN a su estado original y ayudando a prevenir mutaciones de ADN que pueden conducir a la iniciación de la formación del tumor. Desafortunadamente, la AGT es también beneficiosa para una célula cancerosa porque también elimina los aductos que se forman en la posición O^{6} de la guanina en el ADN por agentes alquilantes antineoplásicos, como agentes metilantes monofuncionales, por ejemplo, procarbacina, dacarbacina y temozolomida, y agentes cloroetilantes, es decir, CENUs, como BCNU, ACNU, CCNU, MeCCNU, fotemustina y clomesona (Pegg y col, Prog Nucleic Acid Research Molec. Biol. 51: 167-223 (1995)). La molécula de AGT alquilada resultante por consiguiente se inactiva y es incapaz de llevar a cabo posteriores reacciones de desalquilación. La presencia de más AGT en una célula aumenta su capacidad para reparar ADN por este mecanismo en comparación con una célula que tiene menos AGT.

La reducción en la eficacia de fármacos quimioterapéuticos de cáncer debida a la AGT, que actúa sin requerir la presencia de enzimas o cofactores adicionales, y la existencia de una elevada correlación entre la actividad de AGT y la reducción en sensibilidad de las células tumorales a las nitrosoureas ha conducido a que la AGT se convierta en un objetivo primordial para la modulación. La modulación se ha intentado por dos vías diferentes. Una vía es indirecta e implica el uso de agentes metilantes que introducen lesiones de O^{6}-metilguanina en el ADN para la posterior reparación por AGT, reduciendo por lo tanto los niveles de AGT. La otra vía es directa e implica el uso de un inactivador de AGT, como una O^{6}-aralquilguanina (véase, por ejemplo, Moschel y col. Patentes de EE.UU. Nº 5,091,430, 5,352,669 y 5,358,952).

La primera O^{6}-alquilguanina desarrollada como un potencial inactivador de AGT fue la O^{6}-metilguanina. A pesar de que los resultados iniciales obtenidos en un cultivo celular parecían prometedores, la O^{6}-metilguanina era sólo capaz de reducir la actividad de AGT en 85% y no era capaz de potenciar el índice terapéutico de BCNU en el tratamiento de ratones que portaban injertos de tumor humano (Pegg y col. (1995), supra). Además, el uso de O^{6}-metilguanina estaba plagado de problemas, como una solubilidad escasa, afinidad escasa por AGT, captación escasa en las células, y falta de selectividad, necesitando dosis elevadas de O^{6}-metilguanina para administrarse durante largos periodos de tiempo (Pegg y col. (1995), supra).

La prueba de la O^{6}-metilguanina condujo al desarrollo de la O^{6}-benzilguanina como un inactivador potencial de la AGT (Moschel y col., J. Med. Chem. 35(23): 4486-4491 (1992); Pegg y col., Biochem. 32(45) 11998-12006 (1993); Pegg y col., Proc. Amer. Assoc. Cancer Research 34.565 (1993); y Gerson y col., Proc. Amer. Assoc. Cancer Research 35.669 (1994)). Se ha demostrado que la O^{6}-benzilguanina inactiva la AGT en células MER, haciéndolas por lo tanto más sensibles a los efectos citotóxicos de los agentes alquilantes (Pegg y col. (1995), supra). Además, la correlación entre el grado de sensibilidad aumentada a agentes alquilantes y el nivel de inhibición de la actividad de AGT por la O^{6}-benzilguanina es fuerte (Pegg y col. (1995), supra). Se ha demostrado también que la O^{6}-benzilguanina aumenta la sensibilidad de las células tumorales del cerebro óxico e hipóxico a BCNU (Pegg y col. (1995), supra). La sensibilidad aumentada a MeCCNU o BCNU debida a la anterior administración de O^{6}-benzilguanina se demostró también en ratones desnudos que portaban injertos del tumor SF767 (Dolan y col., Cancer Comm. 2(11): 371-377 (1990)), ratones que portaban un injerto de tumor de cerebro D341MED o D456MG o un injerto de rabdosarcoma humano TE-671 (Pegg y col. (1995), supra; Friedman y col., J. Natl. Cancer Inst. 84(24) 1926-1931 (1992); y Felker y col., Cancer Chemother. Pharmacol. 32 471-476 (1993)). Sólo se demostró un aumento significativo en la supervivencia médica en animales tratados con O^{6}-benzilguanina antes de BCNU comparado con BCNU en el modelo de meduloblastoma D341MED intracraneal (Pegg y col. (1995), supra; y Friedman y col. (1992), supra). Se han hecho observaciones similares con respecto a injertos de tumor de colon con elevada actividad AGT (Mitchell y col., Cancer Research
52 1171-1175 (1992), y Dolan y col., Biochem. Pharmacol. 46(2): 285-290 (1993) y el modelo de tumor de próstata de rata Dunning (Pegg y col. (1995), supra; y Dolan y col., Cancer Chemother. Pharmacol. 32 221-225 (1993)).

Se ha demostrado que ADN añadido exógenamente, como oligodesoxirribonucleótidos de banda sencilla y de doble banda que varían en longitud desde 4 hasta 16 bases (o pares de bases), en particular oligodesoxirribonucleótidos de 12 bases (o 12 pares de bases), estimula la producción de guanina por la AGT humana recombinante a partir de
O^{6}-benzilguanina, pero no O^{6}-benzilguaninas 9-sustituidas (Goodzova y col., Biochem 33(28): 8385-8389 (1994)).

También se ha demostrado que el p-clorobencilo y el p-metilbencilo análogos de la O^{6}-benzilguanina inactivan la AGT rápida e irreversiblemente (Dolan y col., PNAS USA 87. 5368-5372 (1990); y Dolan y col., Cancer Research 51: 3367-3372 (1991)). Se ha demostrado que tales análogos son tan buenos como la O^{6}-benzilguanina al potenciar la citotoxicidad de los agentes cloroetilantes hacia las células de glioma SF767 y células del tumor de colon HT29 (Dolan y col. (1990), supra; y Dolan y col. (1991), supra). Basándose en tales resultados, se sugería que la O^{6}-benzilguanina era potencialmente útil en el tratamiento de tumores mer y como adyuvante para un agente alquilante que produce una lesión tóxica en la posición O^{6} de los residuos de guanina en el ADN (Dolan y col. (1991), supra).

La O^{6}-benzilguanina, en combinación con BCNU, está ahora en pruebas clínicas. A pesar de que la O^{6}-benzilguanina es claramente el compuesto más prometedor para inactivar la AGT en este momento, no es un fármaco ideal. Tiene sólo solubilidad limitada en agua y se caracteriza por el despeje rápido del plasma sanguíneo debido a la conversión metabólica a otros compuestos (Dolan y col., Cancer Research 54: 5123-5130 (1994)).

Además, los datos in vitro sugieren que la O^{6}-benzilguanina puede no ser capaz de inactivar formas mutantes de la AGT, que podrían resultar de mutaciones inducidas por fármacos quimioterapéuticos, como agentes cloroetilantes o metilantes, in vivo. Dado que la proteína Ada-G y Ogt alquiltransferasa de E. Coli y la AGT de levadura son insensibles a la O^{6}-benzilguanina (Pegg y col., Biochem. 32 11998-12006 (1993); y Elder y col., Biochem. J. 298: 231-235 /1994), se ha usado mutagénesis dirigida (Crone y col., Cancer Research 53: 4750-4753 (1993); Crone y col., Cancer Research 54: 6221-6227 (1994); y Edara y col., Cancer Research 56:5571-5575 (1996)) para crear AGT mutantes, que difieren de la AGT del tipo salvaje en uno o más cambios de aminoácido. Se ha encontrado que varias AGTs mutantes son mucho menos sensibles que la AGT de tipo salvaje a la inactivación por O^{6}-benzilguanina (Crone y col. (1993), supra; Crone y col (1994), supra; y Edara y col. (1996), supra).

En un esfuerzo para abordar su solubilidad limitada en agua, se ha formulado la O^{6}-benzilguanina en un vehículo basado en polietilenglicol 400 (Pegg y col. (1995), supra). Se ha demostrado que la formulación es eficaz en sensibilizar injertos de glioblastoma D456MG en ratones desnudos a BCNU a dosis más bajas que las anteriores formulaciones basadas en cromóforo EL (Pegg y col. (1995), supra).

Se han identificado dos nuevos tipos de compuestos, a saber O^{6}-benzilguaninas 8-sustituidas y 2,4-diamino-6-(benziloxi)pirimidinas 5-sustituidas como que son significativamente más eficaces que la O^{6}-benzilguanina en inactivar la AGT en extractos de células de tumor de colon HT29 humano y células de tumor de colon HT29 intactas (Chae y col., J. Med. Chem. 38: 359-365 (1995)). Por consiguiente, se ha sugerido que estos nuevos compuestos pueden ser superiores a las O^{6}-benzilguaninas como adyuvantes quimioterapéuticos para potenciar la eficacia de fármacos antitumorales que modifican la posición O^{6}de residuos de guanina en el ADN (Chae y col. (1995) supra). Sin embargo, algunas de las pirimidinas parece que se metabolizan y se excretan rápidamente (Roy y col., Drug Metab. Disposition, 24: 1205-1211 (1996)).

Se han generado oligonucleótidos de dieciséis bases que comprenden uno o dos residuo(s) O^{6}-metilo, O^{6}-etilo o O^{6}-benzil-2'-desoxiguanosina. Éstos tienen la secuencia del gen H-ras de rata que se extiende desde el codon 9 hasta la primera base del codon 14. Estos oligonucleótidos se usaron para establecer si el tipo de residuo de 2'-desoxiguanosina O^{6}-sustituida o su posición conduce a alguna disgregación diferencial significativa de la estabilidad o conformación del duplex que pudiera contribuir finalmente a una lógica para la mutabilidad selectiva aparente del segundo residuo de guanina del codon 12 de H-ras en carcinomas mamarios de rata bajo activación siguiendo una única dosis de NMU (Pauly y col., Chem. Research Toxicol. 1(6): 391-398 (1988)). Se han incorporado oligonucleótidos de dieciséis bases relacionados también en un plásmido módulo para uso en E. Coli para controlar la mutagenicidad de bases modificadas carcinogénicas en un único ensayo sectorizado de colonias (Pauly y col., Biochemistry 30: 11700-11706 (1991)) y para comparar su reparación por AGTs de mamífero y bacterianas (Elder y col., Biochem. J. 298:231-235 (1994)). Se encontró que un ejemplo de tal oligonucleótido de dieciséis bases reducía la actividad de AGT rápidamente y se ha descrito como posiblemente un buen sustrato para AGT (Dolan y col. (1990), supra). La Patente de EE.UU. 5,691,307 describe ciertos oligonucleótidos que comprenden O^{6}-benzilguanina para uso en reducción de la AGT.

En vista de lo anterior, queda una necesidad de un inhibidor de AGT, que (i) sea más soluble en agua que la
O^{6}-benzilguanina, (ii) sea eficaz a concentración mucho más baja que la O^{6}-benzilguanina, (iii) sea capaz de inactivar formas mutantes de AGT, que sean resistentes a la inactivación por O^{6}-benzilguanina, y (iv) sea todavía más activo que la O^{6}-metilguanina y análogos de la misma.

En consecuencia, es un objeto de la presente invención proporcionar un inactivador tal. Es otro objeto de la presente invención proporcionar una composición que comprenda un inactivador tal. Es otro objeto más de la presente invención proporcionar un procedimiento de uso de tales inactivadores y composiciones.

Breve resumen de la invención

La presente invención proporciona un oligodesoxirribonucleótido de banda sencilla, que (i) comprende no menos de 5 y no más de 11 bases, al menos una de las cuales es una O^{6}-benzilguanina sustituida o no sustituida, e (ii) inactiva la AGT humana. La presente invención también proporciona un oligodesoxirribonucleótido de banda sencilla, que puede inactivar una AGT humana mutante, que o no se inactiva por la O^{6}-benzilguanina o se inactiva menos por la O^{6}-benzilguanina que por dicho oligodesoxirribonucleótido de banda sencilla. Uno o más fosfatos del oligodesoxirribonucleótido de banda sencilla se pueden modificar, por ejemplo, por sustitución con un metilfosfonato o un fosforotioato. La presente invención también proporciona una composición que comprende un oligodesoxirribonucleótido tal. Además, la presente invención proporciona un procedimiento para potenciar el efecto de un agente alquilante antineoplásico, que alquila la posición O^{6} de los residuos de guanina en el ADN, en el contacto quimioterapéutico de células cancerosas in vitro. Adicionalmente, la presente invención comprende tales ligodesoxirribonucleótidos y composiciones para uso en terapia y como medicina así como para la elaboración de un medicamento para el tratamiento de tumor y cáncer. Adicionalmente comprende la co-administración al mamífero de una cantidad eficaz de tratamiento de cáncer de un agente alquilante antineoplásico y una cantidad potenciadora del tratamiento quimioterapéutico de un oligodesoxirribonucleótido de la presente invención o una composición del mismo.

Breve descripción de los dibujos

Las Figuras 1A-C son gráficos de porcentaje de la actividad alquiltransferasa que queda (% AGT actividad que queda) frente a la concentración de un oligodesoxirribonucleótido de banda sencilla (3-11 nts de largo, designados
3-mer, 5-mer, 7-mer, 9-mer y 11-mer) que comprende O^{6}-benzilguanina (inhibidor nM) para la alquiltransferasa humana de tipo salvaje (AGT, Fig. 1A) y alquiltransferasas humanas mutantes (G156A, Fig. 1B, y P140A, Fig. 1C).

Descripción detallada de la invención

La presente invención se basa en el descubrimiento de que un oligodesoxirribonucleótido de banda sencilla, que comprende no menos de 5 y no más de 11 bases, al menos una de las cuales es una O^{6}-benzilguanina sustituida o no sustituida, es un activador de la AGT humana más eficaz que la base libre O^{6}-benzilguanina. No sólo es el oligodesoxirribonucleótido de banda sencilla más eficaz al inactivar la AGT humana, no sufre los efectos de la principal desventaja que asiste la base libre O^{6}-benzilguanina, a saber su solubilidad limitada en agua. Otra característica que distingue el oligodesoxirribonucleótido de banda sencilla de la base libre O^{6}-benzilguanina es su capacidad para inactivar las AGT humanas mutantes, que podría producirse por varios fármacos quimioterapéuticos, como agentes cloroetilantes o metilantes, in vivo y que o no se inactivan por la O^{6}-benzilguanina o se inactivan menos por la
O^{6}-benzilguanina que por el oligodesoxirribonucleótido de banda sencilla. Además, los oligodesoxirribonucleótidos de banda sencilla inventivos presentes se han diseñado de forma que no son más largos de lo necesario para encajar en el sitio activo de la AGT humana, haciendo por ello más fácil sintetizarlos y purificarlos que comparativamente oligodesoxirribonucleótidos de banda sencilla más largos y oligodesoxirribonucleótidos de doble banda.

En vista de lo anterior, la presente invención proporciona un oligodesoxirribonucleótido de banda sencilla, que (i) comprende no menos de 5 y no más de 11 bases, al menos una de las cuales es una O^{6}-benzilguanina sustituida o no sustituida, e (ii) inactiva la AGT humana. Preferiblemente, el oligodesoxirribonucleótido de banda sencilla comprende de 7 a 11 bases, más preferiblemente de 9 a 11 bases. Se establecen ejemplos de tales oligodesoxirribonucleótidos en la Tabla 1.

A pesar de que es sólo necesario que una única base en el oligodesoxirribonucleótido de banda sencilla sea una O^{6}-benzilguanina sustituida o no sustituida, tantas como dos, tres, cuatro o incluso todas las bases en el oligodesoxirribonucleótido de banda sencilla pueden ser una O^{6}-benzilguanina sustituida o no sustituida. Si hay más de una O^{6}-benzilguanina sustituida o no sustituida presentes en el oligodesoxirribonucleótido de banda sencilla, pueden ser iguales o diferentes. Un oligodesoxirribonucleótido de banda sencilla preferido es uno en el que la base del medio es una O^{6}-benzilguanina sustituida o no sustituida.

A pesar de que la al menos una O^{6}-benzilguanina es preferiblemente no sustituida, la O^{6}-benzilguanina puede ser sustituida. La forma en la que la O^{6}-benzilguanina se sustituye y la extensión en la que la O^{6}-benzilguanina se sustituye no es por poco crítico para la práctica de la presente invención. Lo que importa es que el oligodesoxirribonucleótido de banda sencilla resultante inhiba la AGT humana.

Deseablemente, el oligodesoxirribonucleótido de banda sencilla inactiva la AGT humana más eficazmente que la base libre O^{6}-benzilguanina. Preferiblemente, el oligodesoxirribonucleótido de banda sencilla inactiva una AGT humana mutante, que se podría producir por diversos fármacos quimioterapéuticos, como los agentes cloroetilantes o metilantes, in vivo y que o no se inactiva por la O^{6}-benzilguanina o se inactiva menos por la O^{6}-benzilguanina que por el oligodesoxirribonucleótido de banda sencilla.

Si la O^{6}-benzilguanina se sustituye, preferiblemente se sustituye con desde uno a cinco sustituyentes, que pueden ser iguales o diferentes y son hidro, halo, haloalquilo, hidroxi, hidroxiamino, hidracino, un alquilo, un arilo, nitro, un alquilo aromático policíclico, un cicloalquilo, un alquenilo, un alquinilo, un hidroxialquilo, un alcoxi, un alcoxialquilo, un ariloxi, un aciloxi, un aciloxialquilo, un monoalquilamino, un dialquilamino, un acilamino, un ureido, un tioureido, un carboxi, un carboxialquilo, un ciano, un cianoalquilo, C-formilo, C-acilo, un dialcoxialquilo, o SO_{n}R_{1}, en el que n es un número entero de cero a tres y R_{1} es hidro, un alquilo C_{1}-C_{6}, o un alquilo sustituido C_{1}-C_{4} o un arilo no sustituido. Los uno a cinco sustituyentes son independientemente sustituidos o no sustituidos. Más preferiblemente, el haloalquilo es un alquilo de cadena lineal C_{2}-C_{6} o un alquilo de cadena ramificada C_{3}-C_{6}, que se sustituye con de uno a tres grupos halo, el alquilo es un alquilo de cadena lineal C_{2}-C_{6} o de cadena ramificada C_{3}-C_{6}, el arilo se sustituye con un alquilo de cadena lineal C_{1}-C_{8} o de cadena ramificada C_{3}-C_{5}, el alquilo aromático policíclico comprende de dos a cuatro anillos aromáticos y un alquilo de cadena lineal C_{1}-C_{6} o de cadena ramificada C_{3}-C_{6}, el cicloalquilo es un cicloalquilo C_{3}-C_{8}, el alquenilo es un alquenilo de cadena lineal C_{2}-C_{6} o de cadena ramificada C_{4}-C_{6}, el alquinilo es un alquinilo de cadena lineal C_{2}-C_{6} o de cadena ramificada C_{4}-C_{6}, el hidroxialquilo es un hidroxialquilo de cadena lineal C_{1}-C_{6} o de cadena ramificada C_{3}-C_{6}, el alcoxi es un alcoxi de cadena lineal C_{1}-C_{8} o de cadena ramificada
C_{3}-C_{8}, el alcoxialquilo es un alcoxialquilo C_{2}-C_{8}, el aciloxialquilo comprende un alquilo de cadena lineal C_{1}-C_{6} o de cadena ramificada C_{3}-C_{6}, el monoalquilamino y el dialquilamino comprenden un alquilo de cadena lineal C_{1}-C_{6} o de cadena ramificada C_{3}-C_{6}, el carboxialquilo comprende un alquilo de cadena lineal C_{1}-C_{6} o de cadena ramificada
C_{3}-C_{6}, el cianoalquilo comprende un alquilo de cadena lineal C_{1}-C_{6} o de cadena ramificada C_{3}-C_{6}, y el dialcoxialquilo comprende un alcoxi de cadena lineal C_{1}-C_{6} o de cadena ramificada C_{3}-C_{6}, que pueden ser iguales o diferentes, y un alquilo de cadena lineal C_{1}-C_{6} o de cadena ramificada C_{3}-C_{6}.

La O^{6}-benzilguanina se puede preparar según el procedimiento establecido en Bowles y col., J. Med. Chem.
6: 471-480 (1963), o Frihart y col., J. Am. Chem. Soc. 95: 7144-7175 (1973). Las O^{6}-benzilguaninas sustituidas se pueden sintetizar haciendo reaccionar 2-amino-6-cloropurina con el alcóxido de un benzil alcohol que comprende un sustituyente orto, meta o para deseado. Los procedimientos que se pueden usar para preparar O^{6}-benzilguaninas se establecen en Dolan y col. (1990), supra. El tratamiento de O^{6}-benzilguanina en su forma aniónica con agentes alquilantes, como bromoacetato de etilo, 2-bromoacetamida, 1,2-epoxibutano, bromoacetonitrilo o 1,3,4,6-tetra-O-acetil-2-desoxi-2-(cloroacetamido)-\beta-D-glucosa, se describe en Moschel y col. (1992), supra, y Fondy y col., J. Med. Chem.
21: 1222-1225 (1978). Se pueden preparar aductos de \alpha-aminoácidos de la O^{6}-benzilguanina por desplazamiento nucleófilo por O^{6}-benzilguanina o su anión sobre reactivos seleccionados, como la \beta-lactona protegida de L-serina (Pansare y col., Org. Syn. 70: 1-9 (1991)) o (S)-3-amino-2- oxoetanona (Pansare y col., Org. Syn. 70: 10-17 (1991)). Ejemplos específicos de la síntesis de O^{6}-benzilguanina se establecen en Moschel y col., Patente de EE.UU. Nº 5,691,307.

Los oligodesoxirribonucleótidos de banda sencilla que comprenden al menos una O^{6}-benzilguanina se pueden sintetizar según procedimientos conocidos por aquellos expertos en la materia. Por ejemplo, se pueden usar procedimientos de síntesis de ADN automatizada para introducir una fosforamidita protegida adecuadamente de O^{6}-benzil-2'-desoxiguanosina en una secuencia de ADN en cualquier posición (Pauly y col. (1988), supra; y Pauly y col. (1991), supra). Si se desea, se puede unir O^{6}-benzilguanina a través de un conector a un grupo hidroxilo en un residuo carbohidrato terminal de un oligodesoxirribonucleótido, por ejemplo, haciendo reaccionar 2-amino-6-benziloxi-9-carboetoximetilpurina con el grupo hidroxilo del residuo carbohidrato terminal del oligodesoxirribonucleótido.

El oligodesoxirribonucleótido de banda sencilla descrito anteriormente, se puede modificar, por ejemplo, para aumentar su resistencia a la digestión de nucleasa in vivo. En este respecto, al menos un fosfato, aunque pueden ser más, se modifica, preferiblemente por sustitución con un metilfosfonato o un fosforotioato. Más preferiblemente, al menos uno de cualquiera de los fosfatos terminales se sustituye por un metilfosfonato o un fosforotioato. Incluso más preferiblemente, ambos fosfatos terminales se sustituyen independientemente por un metilfosfonato o un fosforotioato, es decir, las sustituciones pueden ser iguales o diferentes. Tales modificaciones están dentro de la experiencia habitual en la materia (véase, por ejemplo, Markus-Sekura y col., Nucleic Acids Research 15: 5749-5763 (1987) y antecedentes citados en él). Debería cuidarse el asegurar que no tantos fosfatos en ningún oligodesoxirribonucleótido dado se modifican para afectar negativamente la capacidad del oligodesoxirribonucleótido para inactivar la AGT humana.

Deseablemente, el oligodesoxirribonucleótido de banda sencilla también inactiva una alquiltransferasa humana mutante. Preferiblemente, la alquiltransferasa humana mutante es una que o no se inactiva por la O^{6}-benzilguanina o se inactiva menos por O^{6}-benzilguanina que por el oligodesoxirribonucleótido de banda sencilla.

Si un oligodesoxirribonucleótido de banda sencilla inactiva o no una alquiltransferasa de tipo salvaje o humana mutante se puede determinar midiendo la reducción de alquiltransferasa. Por ejemplo, se puede preparar una solución madre (100 mM) de un oligodesoxirribonucleótido de banda sencilla dado en un disolvente acuoso o mezcla de acuoso/orgánico. Se pueden incubar soluciones de la AGT humana de tipo salvaje, AGT mutante humana, o la AGT de células HT29 y extractos celulares (Domoradzki y col., Carcinogenesis 5: 1641-1647 (1984)) con concentraciones que varían (entre 0 y 400 \muM, por ejemplo) del oligodesoxirribonucleótido durante 30 min en un tampón que contiene Tris-HCl 50 mM, pH 7,5, EDTA 0,1 mM, y ditiotreitol 5 mM, y se puede medir la reducción de alquiltransferasa. Alternativamente, las células se pueden plaquear a una densidad de 5 x 10^{6} células/ matraz T75 y dejadas crecer durante tres días, tiempo en el que el medio se puede sustituir con medio que contiene una concentración dada de un oligodesoxirribonucleótido. Después de cuatro horas, las células se pueden recoger y congelar a -80ºC para el análisis de la reducción de alquiltransferasa más tarde. La reducción de alquiltransferasa se determina midiendo la pérdida de O^{6}-[^{3}H]metilguanina, por ejemplo, a partir de un sustrato de ADN [^{3}H]metilado, por ejemplo, que se puede preparar haciendo reaccionar [^{3}H]metilnitrosourea (21,5 Ci/mmol) con ADN de timo de ternero como se describe previamente (Domoradzki y col. (1984), supra; y Dolan y col. (1990), supra).

Cualquier oligodesoxirribonucleótido según la presente invención que reduzca eficazmente células tumorales de actividad alquiltransferasa como se mide, por ejemplo, en el ensayo descrito anteriormente, se espera que potencie el efecto de un agente alquilante antineoplásico, que alquila la posición O^{6} de los residuos de guanina en el ADN, en el tratamiento quimioterapéutico del cáncer en un mamífero. Se ha demostrado que esto es verdad con el reductor de alquiltransferasa débil O^{6}-metilguanina (Dolan y col., Cancer Research 46: 4500-4504 (1986) y los reductores de alquiltransferasa más potentes O^{6}-benzilguanina y O^{6}-(p-clorobencil)- y O^{6}-(p-metilbencil)-guanina (Dolan y col. (1990), supra; Dolan y col. (1991), supra; Dolan y col. (1993), supra; Mitchell y col., Cancer Research 52:1171-1175 (1992); y Moschel y col., Patente de EE.UU. Nº 5,691,307.)

Además de los oligodesoxirribonucleótidos mencionados anteriormente, la presente invención también proporciona una composición que comprende un oligodesoxirribonucleótido de banda sencilla y un vehículo farmacéuticamente aceptable. Vehículos, adyuvantes, excipientes y diluyentes apropiados farmacéuticamente aceptables son conocidos en la materia. El oligodesoxirribonucleótido mencionado anteriormente o sales farmacéuticamente aceptables del mismo se pueden formular en formulaciones sólidas, semi-sólidas, líquidas o gaseosas. Ejemplos de tales formulaciones incluyen comprimidos, cápsulas, polvos, gránulos, ungüentos, soluciones, supositorios, inyecciones, inhalantes y aerosoles. La elección de la formulación se determinará, en parte, por la ruta correspondiente de administración elegida. Las siguientes formulaciones son puramente ejemplares y no son, en ningún caso, limitantes.

Las composiciones para administración por vía oral (también bucal o sublingual) pueden comprender aditivos, como lactosa, manitol, almidón de maíz o almidón de patata, conectores, como celulosa cristalina, derivados de celulosa, acacia, almidón de maíz o gelatina, con carboximetilcelulosa de sodio, lubricantes, como talco o estearato magnésico, y, si se desea, diluyentes, agentes tamponantes, agentes hidratantes, conservantes y agentes saborizantes. Tales composiciones pueden estar en forma de comprimidos, polvos, gránulos o cápsulas, por ejemplo. Las formas de dosis unitarias para administración por vía oral, como jarabes, elixires y suspensiones, en las que cada unidad de dosis, por ejemplo, cucharilla de té o cuchara de mesa, contiene una cantidad predeterminada de un oligodesoxirribonucleótido de la presente invención, se pueden combinar con agua estéril para inyección (USP) o salina normal.

Las composiciones para la administración en forma de supositorios pueden comprender una base. Las bases adecuadas incluyen bases emulsionantes y bases solubles en agua. También se pueden usar vehículos, como manteca de coco, carboceras y polietilenglicoles, que son sólidos a temperatura ambiente y se funden a la temperatura corporal,.

Las composiciones para la administración transdérmica comprenden un vehículo adecuado o sal. La adsorción se puede ayudar por el uso de una corriente o campo eléctrico.

Las composiciones para la administración por inyección se pueden preparar disolviendo, suspendiendo o emulsionando un oligodesoxirribonucleótido de la presente invención en un disolvente acuoso o no acuoso, como un aceite vegetal, glicéridos de ácidos alifáticos sintéticos, ésteres de ácidos alifáticos superiores o propilenglicol. Se pueden añadir si se desea, solubilizantes, agentes isotónicos, agentes suspendedores, agentes emulsionantes, estabilizantes y conservantes.

Las composiciones para administración aerosolizada se pueden preparar en forma de un líquido o polvo minúsculo. Un recipiente de aerosol puede rellenarse con agentes pulverizadores gaseosos o líquidos y, si se desea, adyuvantes convencionales, como agentes humidificadores. Los propulsantes adecuados incluyen diclorodifluorometano, propano, nitrógeno y similares. Si se desea, la composición se puede formular para preparaciones no presurizadas, como un nebulizador o un atomizador.

En vista de lo anterior, la presente invención también proporciona un procedimiento para potenciar el efecto de un agente alquilante antineoplásico, que alquila la posición O^{6} de los residuos de guanina en el ADN, en el tratamiento quimioterapéutico de cáncer en un mamífero, particularmente un humano. El procedimiento comprende co-administrar al mamífero una cantidad eficaz de tratamiento de cáncer de un agente alquilante antineoplásico y una cantidad potenciadora de tratamiento quimioterapéutico de un oligodesoxirribonucleótido de banda sencilla según la presente invención.

Por "potenciar el efecto de un agente alquilante antineoplásico" se entiende que el agente alquilante antineoplásico tiene un efecto mayor en presencia de un oligodesoxirribonucleótido de la presente invención que en la ausencia de un oligodesoxirribonucleótido de la presente invención. Cuando una alquiltransferasa actúa sobre el oligodesoxirribonucleótido, se inactiva y, por lo tanto, no es capaz de actuar sobre el ADN en una célula cancerosa que se ha alquilado por el agente alquilante antineoplásico. Dado que la alquiltransferasa no es capaz de actuar sobre el ADN alquilado en una célula cancerosa, el ADN en la célula cancerosa no se repara, conduciendo por ello a la muerte de la célula cancerosa.

Por "coadministración" se entiende administrar el agente alquilante antineoplásico y el oligodesoxirribonucleótido suficientemente cercano en el tiempo de tal forma que el oligodesoxirribonucleótido pueda potenciar el efecto del agente alquilante antineoplásico. A este respecto, el oligodesoxirribonucleótido se puede administrar primero y el agente alquilante antineoplásico se puede administrar segundo o viceversa. Alternativamente, el oligodesoxirribonucleótido y el agente alquilante antineoplásico se pueden administrar simultáneamente. Además, se puede administrar una combinación de oligodesoxirribonucleótidos, y uno o más oligodesoxirribonucleótidos se pueden administrar en combinación con otro agente útil en el tratamiento del cáncer.

Por "cantidad eficaz de tratamiento de cáncer de un agente alquilante antineoplásico" se entiende que el agente alquilante antineoplásico se administra en una dosis suficiente para tratar el cáncer. Tales dosis son conocidas en la materia (véase, por ejemplo, la Physicians' Desk Reference). Por ejemplo, se puede administrar 1,3-bis(2-cloroetil)-1-nitrosourea (carmustina o BCNU, Bristol-Myers, Evansville, IN) intravenosamente a una dosis de desde aproximadamente 150 hasta 200 mg/m^{2} cada seis semanas. Otro agente alquilante, a saber el 1-(2-cloroetil)-3-ciclohexil-1-nitrosourea (lomustina o CCNU, Bristol-Myers), se puede administrar por vía oral a una dosis de aproximadamente 130 mg/m^{2} cada seis semanas.

Por "cantidad potenciadora de tratamiento quimioterapéutico de un oligodesoxirribonucleótido de banda sencilla" se entiende que el oligodesoxirribonucleótido se administra en una dosis suficiente para potenciar el efecto del agente alquilante antineoplásico. Una dosis adecuada es la que dará como resultado una concentración de oligodesoxirribonucleótido en las células cancerosas que se van a tratar suficiente para reducir la actividad alquiltransferasa, por ejemplo, desde aproximadamente 10 nM hasta 200 nM intracelularmente, que puede requerir una concentración extracelular de desde aproximadamente 10 \muM hasta 50 \muM. La dosis se puede ajustar según sea necesario para potenciar el efecto del agente alquilante antineoplásico.

El oligodesoxirribonucleótido de la presente invención es útil al potenciar el efecto de cualquier agente alquilante antineoplásico, siempre que el agente sea uno que alquile la posición O^{6} de los residuos de guanina en el ADN. Los ejemplos de agentes alquilantes antineoplásicos incluyen agentes cloroetilantes. Los agentes cloroetilantes usados más frecuentemente incluyen 1-(2-cloroetil)-3ciclohexil-1-nitrosourea (CCNU, lomustina), 1,3-bis(2-cloroetil)-1-nitrosourea (BCNU, carmustina), 1-(2-cloroetil)-3(4-metilciclohexil)-1-nitrosourea (MeCCNU, semustina), y 1-(2-cloroetil)-3-(4-amino-2-metil-5-pirimidinil)metil-1-nitrosourea (ACNU). Tales agentes se han usado clínicamente contra tumores del sistema nervioso central, mieloma múltiple, melanoma, linfoma, tumores gastrointestinales, y otros tumores sólidos (Colvin y Chabner. Agentes Alquilantes. In: Cancer Chemotherapy: Principles and Practice. Editado por B.A. Chabner y J.M. Collins, Lippincort, Philadelphia, PA. pgs. 276-313 (1990); y McCormick y col., Eur. J. Cancer 26: 207-221 (1990)). Agentes cloroetilantes, que tienen menos efectos secundarios y están actualmente en desarrollo incluyen 1-(2-cloroetil)-3-(2-hidroxietil)-1-nitrosourea (HECNU), 2-cloroetilmetilsulfonilmetanosulfonato (Clomesona), y ácido 1-[N-(2-cloroetil)-N-nitrosoureido]etilfosfónico dietil éster (Fotemustina) (Colvin y Chabner (1990), supra; y McCormick y col. (1990), supra). Los agentes metilantes incluyen Estreptozotocina (2-deoxi-2-(3-metil-3-nitrosoureido)-D-glucopiranosa), Procarbacina (N-(1-metiletil)-[(2-metilhidracino)metil]benzamida), Dacarbacina o DTIC (5-(3,3-dimetil-1-triazenil)-1H-imidazol-4-carboxamida), y Temozolomida (8-carbamoil-3-metilimidazo
[5.1-d]-1,2,3,5-tetrazin-4-(3H)-ona).

La Temozolomida es activa contra melanomas malignos, tumores cerebrales y micosis fungoides. La Estreptozotocina es eficaz contra tumores pancreáticos. La Procarbacina se usa para tratar la enfermedad de Hodkin y tumores cerebrales. La DTIC se usa para tratar melanoma y linfomas(Colvin y Chabner (1990), supra; y Longo, Semin. Concol. 17: 716-735 (1990)). El agente alquilante antineoplásico se puede administrar por cualquier vía. Los medios convencionales de administración se describen en Wasserman y col. (Cancer 36: 1258-1268 (1975)) y en la Physicians' Desk Reference (44ª ed., Edward R. Barnhart, Publisher, 1990.)

El presente procedimiento inventivo se puede usar para tratar cualquier cáncer susceptible a tratamiento por un agente alquilante antineoplásico. Ejemplos de tales cánceres incluyen cáncer de próstata, cáncer de cerebro, linfoma, leucemia, cáncer de pecho, cáncer de ovario, cáncer de pulmón, tumor de Wilm, rabdomiosarcoma, mieloma múltiple, cáncer de estómago, sarcoma de tejido blando, enfermedad de Hodgkin, y linfoma no de Hodgkin.

El siguiente ejemplo ilustra adicionalmente la presente invención. El ejemplo, por supuesto, no se debería considerar de ninguna forma limitando el alcance de la presente invención.

Se sintetizó O^{6}-benzilguanina como se describe previamente (Dolan y col. (1990) supra). Se sintetizaron también oligodesoxirribonucleótidos de banda sencilla según los procedimientos descritos por Pauly y col. (1991), supra. La O^{6}-benzilguanina se purificó por cristalización de agua y los oligodesoxirribonucleótidos se purificaron por HPLC (Pauly y col. (1988), supra). La composición de los oligodesoxirribonucleótidos se confirmó por digestión enzimática a 2'-oligodesoxirribonucleósidos (Pauly y col. (1988), supra).

Ejemplo

Este ejemplo demuestra que las alquiltransferasas humanas de tipo salvaje y mutantes son más sensibles a la inactivación por un oligodesoxirribonucleótido de banda sencilla que comprende O^{6}-benzilguanina que por la
O^{6}-benzilguanina por sí misma.

La AGT humana de tipo salvaje y mutantes de la misma, a saber P 140A y G156A, se prepararon usando el sistema de vector de expresión pIN. pIN-AGT, pIN-P140A (Pro-140 a Ala) y pIN-G156A (Gly-156 a Ala) (Crone y col. (1993), supra; Crone y col. (1994), supra; y Pegg y col. (1993), supra).

Las proteínas AGT de tipo salvaje y mutantes expresadas a partir de vectores pIN se purificaron a homogeneidad por precipitación de sulfato de amonio, cromatografía Mono-S y filtración de gel como se describe previamente (Pegg y col. (1993), supra; y Kanugula y col. (1995), supra). La proteína purificada se incubó después con O^{6}-benzilguanina, O^{6}-benzil-2'-desoxiguanosina, o un oligodesoxirribonucleótido de banda sencilla que varía en longitud desde tres hasta once bases y comprende O^{6}- benzilguanina en 0,1 ml de Tris-HCl 50 MM, pH 7,5, EDTA 0,1 mM y ditiotreitol 5,0 mM durante 30 min a 37ºC. Después, se determinó la actividad AGT residual por una incubación de 30 min con un sustrato de ADN [^{3}H]-metilado (volumen 1,0 ml), que se había metilado por reacción con N-[^{3}H]-metil-N-nitrosourea como se describe previamente (Dolan y col. (1993), supra; y Dolan y col. (1991), supra).

Los resultados se expresaron como el porcentaje de la actividad AGT que quedaba y después se usaron para calcular el valor DE_{50} (la concentración necesaria para reducir la actividad AGT en el 50%) para el inactivador como se muestra en la Tabla I.

TABLA I

Oligodesoxirribonucleótido	DE_{50} para la inactivación de AGT (nM)
	AGT	G156A	P140A
O^{6}-benzilguanina^{a}	200	60000	5000
O^{6}-benzil-2'-desoxiguanosina^{b}
5'-d(Ab^{6}GC)-3'	2000	>100000	>20000
5'-d(GAb^{6}GCT)-3'	90	4600	770
5'-d(TGAb^{6}GCTG)-3'	13	60	50
5'-d(GTGAb^{6}GCTGT)-3'	7	50	60
5'-d(TGTGAb^{6}GCTGTG)-3'	8	90	60
	13	110	75
^{a}Datos previamente publicados (Crone y col. (1993), supra; y Crone y col. (1994), supra)
^{b} Datos previamente publicados (Moschel y col. (1992), supra).

Los resultados demuestran que un oligodesoxirribonucleótido de banda sencilla que comprende O^{6}-benzilguanina (b^{6}G), incluso uno tan corto como tres nucleótidos, fue más eficaz inactivando las AGTs de tipo salvaje y mutantes que la base libre O^{6}-benzilguanina o O^{6}-benzil-2'-desoxiguanosina. A este respecto, los oligodesoxirribonucleótidos, que eran de 5 a 11 nucleótidos de largo y que comprendían O^{6}-benzilguanina, inactivaron las AGTs mutantes P140A y G156A a concentraciones 4 veces y 11 veces superiores, respectivamente, que la concentración requerida para inactivar la AGT de tipo salvaje, mientras que la O^{6}-benzilguanina inactivó las AGTs mutantes P140A y G156A a concentraciones 25 veces y 300 veces superiores, respectivamente, que la concentración requerida para inactivar la AGT de tipo salvaje. La máxima eficacia se observó para oligodesoxirribonucleótidos que eran de 5 a 11 nucleótidos de largo. No hubo pérdida significativa (<5%) de actividad AGT en la ausencia de inactivador.

(1) INFORMACIÓN GENERAL

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(i): SOLICITANTE: MOSCHEL, ROBERT C

\hskip3,3cm

PAULY, GARY T.

\hskip3,3cm

PEGG, ANTHONY E

\hskip3,3cm

DOLAN, M. EILEEN

\vskip0.666000\baselineskip

(ii): TÍTULO DE LA INVENCIÓN: OLIGODESOXIRRIBONUCLEÓTIDOS QUE COMPRENDEN O^{6}-BENZILGUANINA Y SU USO

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(iii): NÚMERO DE SECUENCIAS: 1

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(iv): DIRECCIÓN DE CORRESPONDENCIA

\vskip0.333000\baselineskip

(A): DESTINATARIO: LEYDIG VOIT & MAYER, LTD.

\vskip0.333000\baselineskip

(B): CALLE. TWO PRUDENTIAL PLAZA, SUITE 4900

\vskip0.333000\baselineskip

(C): CIUDAD. CHICAGO

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(D): ESTADO: IL

\vskip0.333000\baselineskip

(E): PAÍS: EE.UU.

\vskip0.333000\baselineskip

(F): CÓDIGO POSTAL: 60601-6780

\vskip0.666000\baselineskip

(v): FORMA DE LECTURA INFORMÁTICA

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(A): TIPO DE MEDIO: disquete

\vskip0.333000\baselineskip

(B): ORDENADOR: IBM PC compatible

\vskip0.333000\baselineskip

(C): SISTEMA OPERATIVO: PC-DOS/MS-DOS

\vskip0.333000\baselineskip

(D): SOFTWARE: Patent In Release #1.0, Versión #1.25

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(vi): DATOS DE SOLICITUD ACTUALES

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(A): NÚMERO DE SOLICITUD

\vskip0.333000\baselineskip

(B): FECHA DE PRESENTACIÓN

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(C): CLASIFICACIÓN

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(vii): DATOS DE SOLICITUD ANTERIORES

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(A): NÚMERO DE SOLICITUD

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(B): FECHA DE PRESENTACIÓN

\vskip0.333000\baselineskip

(C): CLASIFICACIÓN

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(viii): INFORMACIÓN DEL ABOGADO/AGENTE

\vskip0.333000\baselineskip

(A): NOMBRE: Larcher, Carol

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(B): NÚMERO DE REGISTRO: 35243

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(C): NÚMERO DE REFERENCIA/EXPEDIENTE 75835

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(ix): INFORMACIÓN DE TELECOMUNICACIONES

\vskip0.333000\baselineskip

(A): TELÉFONO: (312)616-5600

\vskip0.333000\baselineskip

(B): TELEFAX: (312)616-5700

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(2) INFORMACIÓN PARA LA SEC ID Nº. 1

\vskip0.666000\baselineskip

(i): CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA

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(A): LONGITUD: 11 bases

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(B): TIPO: ácido nucleico

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(C): TIPO DE BANDA: Sencilla

\vskip0.333000\baselineskip

(D): TOPOLOGÍA: Lineal

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(ii): TIPO DE MOLÉCULA: ADN (sintético)

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(iii): HIPOTÉTICO: NO

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(iv): ANTISENTIDO: NO

\vskip0.666000\baselineskip

(ix): CARACTERÍSTICA

\vskip0.333000\baselineskip

(A): NOMBRE/CLAVE: misc_feature

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(B): UBICACIÓN: 6

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(D): OTRA INFORMACIÓN: La guanina en la posición 6 es una O^{6}-benzilguanina

\vskip0.666000\baselineskip

(xi): DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC ID Nº: 1:

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\hskip-.1em\dddseqskip

TGTGAGCTGT G

\hfill

11

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\vskip0.333000\baselineskip

<110> MOSCHEL, ROBERT C

\hskip1cm

PAULY, GARY T

\hskip1cm

PEGG, ANTHONY E.

\hskip1cm

DOLAN, M. EILEEN

\vskip0.333000\baselineskip

<120> TÍTULO DE LA INVENCIÓN: OLIGODESOXIRRIBONUCLEÓTIDOS QUE COMPRENDEN O^{6}-BENZILGUANINA Y SU USO

\vskip0.333000\baselineskip

<130> 400077

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<140>

\vskip0.333000\baselineskip

<141>

\vskip0.333000\baselineskip

<150> 09/023,726

\vskip0.333000\baselineskip

<151> 1998-02-13

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<160> 1

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<170> Patentin Ver. 2.0

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<210> 1

\vskip0.333000\baselineskip

<211> 11

\vskip0.333000\baselineskip

<212> ADN

\vskip0.333000\baselineskip

<213> Secuencia Artificial

\vskip0.333000\baselineskip

<220> O6-benzilguanina

\vskip0.333000\baselineskip

<221> base_modificada

\vskip0.333000\baselineskip

<222> Posición 6

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<400> 1

\vskip0.333000\baselineskip

\hskip-.1em\dddseqskip

tgtgagctgt g

\hfill

11

Claims

1. Un oligodesoxirribonucleótido de banda sencilla, que (i) comprende no menos de 5 y no más de 11 bases, al menos una de las cuales es una O^{6}-benzilguanina sustituida o no sustituida, e (ii) inactiva la alquiltransferasa humana.

2. El oligodesoxirribonucleótido de banda sencilla de la reivindicación 1, en el que dicho oligodesoxirribonucleótido comprende no menos de 7 bases.

3. El oligodesoxirribonucleótido de banda sencilla de la reivindicación 2, en el que dicho oligodesoxirribonucleótido comprende no menos de 9 bases.

4. El oligodesoxirribonucleótido de banda sencilla de la reivindicación 3, en el que dicho oligodesoxirribonucleótido se compone de 11 bases.

5. El oligodesoxirribonucleótido de banda sencilla de la reivindicación 1, en el que dicha O^{6}-benzilguanina se sustituye con desde uno a cinco sustituyentes, que pueden ser iguales o diferentes y se seleccionan del grupo que compuesto por hidro, halo, haloalquilo, hidroxi, hidroxiamino, hidracino, un alquilo, un arilo, nitro, un alquilo aromático policíclico, un cicloalquilo, un alquenilo, un alquinilo, un hidroxialquilo, un alcoxi, un alcoxialquilo, un ariloxi, un aciloxi, un aciloxialquilo, un monoalquilamino, un dialquilamino, un acilamino, un ureido, un tioureido, un carboxi, un carboxialquilo, un ciano, un cianoalquilo, C-formilo, C-acilo, un dialcoxialquilo, y SO_{n}R_{1}, en el que n es un número entero de cero a tres y R_{1} es hidro, un alquilo C_{1}-C_{6}, o un alquil-sustituido C_{1}-C_{4} o un arilo no sustituido.

6. El oligodesoxirribonucleótido de banda sencilla de la reivindicación 5, en el que dichos de uno a cinco sustituyentes son independientemente sustituidos o no sustituidos.

7. El oligodesoxirribonucleótido de banda sencilla de la reivindicación 5, en el que dicho haloalquilo es un alquilo de cadena lineal C_{2}-C_{6} o de cadena ramificada C_{3}-C_{6}, que se sustituye con de uno a tres grupos halo, dicho alquilo es un alquilo de cadena lineal C_{2}-C_{6} o de cadena ramificada C_{3}-C_{6}, dicho arilo se sustituye con un alquilo de cadena lineal C_{1}-C_{8} o de cadena ramificada C_{3}-C_{8}, dicho alquilo aromático policíclico comprende de dos a cuatro anillos aromáticos y un alquilo de cadena lineal C_{1}-C_{6} o de cadena ramificada C_{3}-C_{6}, dicho cicloalquilo es un cicloalquilo C_{3}-C_{8}, dicho alquenilo es un alquenilo de cadena lineal C_{2}-C_{6} o de cadena ramificada C_{4}-C_{6}, dicho alquinilo es un alquinilo de cadena lineal C_{2}-C_{6} o de cadena ramificada C_{4}-C_{6}, dicho hidroxialquilo es un hidroxialquilo de cadena lineal C_{1}-C_{6} o de cadena ramificada C_{3}-C_{6}, dicho alcoxi es un alcoxi de cadena lineal C_{1}-C_{8} o de cadena ramificada C_{3}-C_{8}, dicho alcoxialquilo es un alcoxialquilo C_{2}-C_{8}, dicho aciloxialquilo comprende un alquilo de cadena lineal C_{1}-C_{6} o de cadena ramificada C_{3}-C_{6}, dicho monoalquilamino y dicho dialquilamino comprenden un alquilo de cadena lineal C_{1}-C_{6} o de cadena ramificada C_{3}-C_{6}, dicho carboxialquilo comprende un alquilo de cadena lineal C_{1}-C_{6} o de cadena ramificada C_{3}-C_{6}, dicho cianoalquilo comprende un alquilo de cadena lineal
C_{1}-C_{6} o de cadena ramificada C_{3}-C_{6}, y dicho dialcoxialquilo comprende un alcoxi de cadena lineal C_{1}-C_{6} o de cadena ramificada C_{3}-C_{6}, que pueden ser iguales o diferentes, y un alquilo de cadena lineal C_{1}-C_{6} o de cadena ramificada
C_{3}-C_{6}.

8. El oligodesoxirribonucleótido de banda sencilla de la reivindicación 1, en el que una base intermedia es una
O^{6}-benzilguanina sustituida o no sustituida.

9. El oligodesoxirribonucleótido de banda sencilla de la reivindicación 1, en el que al menos se modifica un fosfato.

10. El oligodesoxirribonucleótido de banda sencilla de la reivindicación 9, en el que dicho al menos un fosfato se sustituye por un metilfosfonato o un fosforotioato.

11. El oligodesoxirribonucleótido de banda sencilla de la reivindicación 9, en el que dicho al menos un fosfato es un fosfato terminal.

12. El oligodesoxirribonucleótido de banda sencilla de la reivindicación 11, en el que se sustituyen independientemente dos fosfatos internucleósido terminales.

13. El oligodesoxirribonucleótido de banda sencilla de la reivindicación 1, que también inhibe una alquiltransferasa humana mutante, que o no se activa por la O^{6}-benzilguanina o se activa menos por la O^{6}-benzilguanina que por dicho oligodesoxirribonucleótido de banda sencilla.

14. El oligodesoxirribonucleótido de banda sencilla de la reivindicación 1, en el que dicho oligodesoxirribonucleótido se selecciona del grupo que compuesto por 5'-d(GAb^{6}GCT)-3', 5'-d(TGAb^{6}GCTG)-3', 5'-d(GTGAb^{6}GCTGT)-3' y 5'-d(TGTGAb^{6}GCTGTG)-3', en el que b^{6}G es una O^{6}-benzilguanina sustituida o no sustituida.

15. Un oligodesoxirribonucleótido de banda sencilla que inactiva la alquiltransferasa humana que comprende la secuencia 5'-dGAb^{6}GCT-3' en la que b^{6}G es una O^{6}-benzilguanina sustituida o no sustituida.

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16. El oligodesoxirribonucleótido de banda sencilla de la reivindicación 1 en el que al menos una de las 5 a 11 bases distinta a la O^{6}-benzilguanina sustituida o no sustituida se sustituye.

17. El oligodesoxirribonucleótido de banda sencilla de la reivindicación 1, que comprende al menos una unión fosfato internucleósido modificada.

18. El oligodesoxirribonucleótido de banda sencilla de la reivindicación 17, que comprende dos o más uniones fosfato internucleósido modificadas.

19. El oligodesoxirribonucleótido de banda sencilla de la reivindicación 17, en el que dicha unión fosfato internucleósido modificada es una unión fosfato internucleósido terminal modificada.

20. El oligodesoxirribonucleótido de banda sencilla de la reivindicación 19, en el que dicha unión fosfato internucleósido terminal modificada es un metilfosfonato o un fosforotioato.

21. El oligodesoxirribonucleótido de banda sencilla de la reivindicación 1, que incluye una pluralidad de bases
O^{6}-benzilguanina sustituidas o no sustituidas.

22. El oligodesoxirribonucleótido de banda sencilla de la reivindicación 21, que incluye al menos tres bases
O^{6}-benzilguanina sustituidas o no sustituidas.

23. El oligodesoxirribonucleótido de banda sencilla de la reivindicación 21, que incluye al menos cuatro bases de O^{6}-benzilguanina sustituidas o no sustituidas.

24. El oligodesoxirribonucleótido de banda sencilla de la reivindicación 21, que incluye al menos cinco bases de O^{6}-benzilguanina sustituidas o no sustituidas.

25. El oligodesoxirribonucleótido de banda sencilla de la reivindicación 2, que incluye una pluralidad de bases de O^{6}-benzilguanina sustituidas o no sustituidas.

26. El oligodesoxirribonucleótido de banda sencilla de la reivindicación 25, que incluye al menos tres bases de
O^{6}-benzilguanina sustituidas o no sustituidas.

27. El oligodesoxirribonucleótido de banda sencilla de la reivindicación 25, que incluye al menos cuatro bases de O^{6}-benzilguanina sustituidas o no sustituidas.

28. El oligodesoxirribonucleótido de banda sencilla de la reivindicación 25, que incluye al menos cinco bases de O^{6}-benzilguanina sustituidas o no sustituidas.

29. Una composición que comprende un oligodesoxirribonucleótido de banda sencilla de cualquiera de las reivindicaciones 1-28 y un vehículo farmacéuticamente aceptable.

30. Un procedimiento de potenciación del efecto de un agente alquilante antineoplásico, que alquila la posición O^{6} de los residuos de guanina en el ADN, en el contacto quimioterapéutico de células cancerosas in vitro, procedimiento que comprende co-administrar a las células cancerosas un agente alquilante antineoplásico y un oligodesoxirribonucleótido de banda sencilla de cualquiera de las reivindicaciones 1-28.

31. Un oligodesoxirribonucleótido según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 28 o una composición según la reivindicación 29 para uso como una medicina.

32. Un oligodesoxirribonucleótido según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 28 o una composición según la reivindicación 29 para uso en terapia.

33. Un oligodesoxirribonucleótido según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 28 o una composición según la reivindicación 29 para uso en el tratamiento de tumor o cáncer.

34. Un oligodesoxirribonucleótido o composición según la reivindicación 33 para uso en el tratamiento de cáncer por co-administración de un agente alquilante antineoplásico, que alquila la posición O^{6} de los residuos de guanina en el ADN.

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35. Uso de un oligodesoxirribonucleótido según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 28 o composición según la reivindicación 29 para la elaboración de un medicamento para el tratamiento de tumor o cáncer.