ES2210009T3 - Derivados de benzopiranil-guanidina, proceso para su obtencion y composiciones farmaceuticas que los contienen. - Google Patents
Derivados de benzopiranil-guanidina, proceso para su obtencion y composiciones farmaceuticas que los contienen.Info
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Abstract
Derivados de benzopiranil-guanidina representados por sus isómeros estereoquímicos y sus sales farmacéuticamente aceptables. **fórmula** en la que R1 significa H, halógeno, CF3, NO2, CN, ORa, O(C=O)Ra, COORa, NH2, NHS(O)mRa, NH(C=O)Ra o S(O)mRa; Ra significa un grupo alquilo C1-C4 lineal o ramificado o un grupo arilo; y m es un número entero de 0 a 2; R2 significa un grupo alquilo C1-C4 lineal o ramificado; R3 significa CH2ORa, Ra tiene el significado definido antes; Rb y Rc con indepen dencia entre sí significan en cada caso un grupo alquilo C1- C4 lineal o ramificado; y Z significa un grupo alquilo C1-C5 lineal o ramificado; R4 significa OH, H, halógeno, ONO2 u O(C=O)Ra; y Ra tiene el significado definido anteriormente; R5 y R6 con independencia entre sí significan en cada caso H, halógeno, un grupo alquilo C1-C3 lineal o ramificado, ORa, CX3, NO2, CO2Ra, -(C=O)Ra o SO3Ra.
Description
Derivados de
benzopiranil-guanidina, proceso para su obtención y
composiciones farmacéuticas que los contienen.
La presente invención se refiere a nuevos
derivados de benzopiranil-guanidina de la fórmula 1.
Se refiere además a procesos de obtención de los nuevos compuestos y
de fabricación de formulaciones farmacéuticas que contienen como
principio activo uno o varios de dichos compuestos.
La presente invención se refiere también al uso
farmacéutico de los derivados de
benzopiranil-guanidina. La presente invención es
útil en el sentido farmacológico sobre todo para la protección
contra lesiones del corazón, células neuronales o del cerebro o para
prevenir órganos y también es útil en sentido farmacológico para
inhibir la generación de NO, la peroxidación de lípidos, la
angiogénesis y la restenosis.
Fórmula
1
en la que R_{1}, R_{2}, R_{3}, R_{4},
R_{5}, R_{6} y n tienen los significados definidos en la
descripción.
Las enfermedades cardíacas isquémicas ocurren
normalmente como consecuencia de la isquemia de miocardio, cuando el
suministro de oxígeno disminuye de modo significativo si se compara
con la demanda de oxígeno, debido al desequilibrio entre ambos. En
la mayoría de casos se observa que un trastorno de la arteria
coronaria es la principal razón de los trastornos cardíacos
isquémicos. Si el diámetro interior de la arteria coronaria de
estrecha, el suministro de sangre, traducido en un suministro de
oxígeno, se convierte en insuficiente, lo cual provoca la angina de
pecho, el infarto de miocardio, la cardioplegía aguda, la arritmia,
etcétera (G.J. Grover, Can. J. Physiol. 75, 309 (1997); G.D.
Lopaschuk y col., Science & Medicine 42 (1997)). Dado que las
enfermedades cardíacas isquémicas pueden deberse a otros factores
complejos, aparte de los trastornos de la arteria coronaria, para
este tratamiento se requiere la terapia medicamentosa así como el
método quirúrgico, por ejemplo la angioplastia coronaria
transluminar percutánea (PTCA). A tal efecto se han empleado
diversos fármacos, incluidos los agentes antitrombóticos, los
agentes antiescleróticos, en especial los bloqueadores beta,
nitrato, antagonistas del calcio, por ejemplo la nifedipina, agentes
trombolíticos, la aspirina e inhibidores de enzima conversora de
angiotensina (ACE).
A diferencia de los agentes convencionales que
abren los canales de potasio, se ha publicado que el compuesto de
piranil-guanidina (BMS-180448),
representado por la siguiente fórmula 2, actúa selectivamente sobre
los canales de potasio sensibles al ATP (K_{ATP}) localizados en
el corazón (K.S. Atwal y col., J. Med. Chem. 36, 3971 (1993);
K.S. Atwal y col., J. Med. Chem. 38, 1966 (1995)). Se ha
constatado que el compuesto BMS-180448 protege los
corazones isquémicos sin una disminución importante de la presión
sanguínea, lo cual abre nuevas perspectivas al desarrollo de
fármacos nuevos como protectores cardíacos.
Fórmula
2
Tanto la isquemia global como la local inician
cambios celulares progresivos, que conducen a la lesión cerebral
isquémica (M.D. Ginsburg, Nueros. Scientist 1, 95 (1995)).
Incluso después del restablecimiento del riego sanguíneo, el oxígeno
puede favorecer las reacciones bioquímicas que generan radicales
libres, que pueden conducir a la aparición de un potencial de
"lesión por reperfusión". Con el fin de prevenir la lesión
cerebral causada por la reperfusión isquémica, el cerebro tiene que
protegerse durante el período isquémico con el fin de evitar una
lesión adicional y de minimizar los cambios patológicos celulares
progresivos. Para tal fin se han utilizado agentes neuroprotectores,
por ejemplo antagonistas de aminoácidos excitantes y
antioxidantes.
Se sabe que el deterioro o la muerte de las
neuronas es la principal causa de varios trastornos neurológicos,
por ejemplo la apoplejía, trauma craneano, enfermedad de Alzheimer,
asfixia infantil, glaucoma y neuropatía diabética, etc. (G.J. Zoppo
y col., Drugs 54, 9 (1997); I. Sziraki y col., Neurosci.
85, 110 (1998)). Las neuronas pueden resultar dañadas por
diversos factores, por ejemplo por el aumento de la concentración de
hierro, de especies reactivas de oxígeno y de peroxidantes dentro de
las neuronas (M.P. Mattson y col. Methods Cell Biol. 46, 187
(1995); Y. Goodman y col., Brain Res. 706, 328 (1996)).
El aumento de la concentración de hierro en las
células neuronales induce la formación de radicales hidroxilo
altamente reactivos. Un exceso de radicales libres de oxígeno
favorece la peroxidación de lípidos, de modo que se acumulan
peroxidantes en las neuronas. Se sabe que los radicales libres
acumulados en las células son la causa de las enfermedades
inflamatorias, por ejemplo la artritis; aterosclerosis; infarto
cardíaco; y enfermedades neurodegenerativas, por ejemplo la demencia
y las lesiones agudas y crónicas de tejidos y de órganos causadas
por la reperfusión isquémica o por endotoximas después de una
infección bacteriana.
Por ello se han efectuado intentos terapéuticos
de minimizar el deterioro o la muerte de las neuronas, incluida la
inhibición de la peroxidación de lípidos, de la formación de NO y de
especies reactivas de oxígeno inducidas por endotoxinas. Hasta el
presente se ha publicado que los antioxidantes alivian el deterioro
o la muerte de neuronas provocada por el aumento de la concentración
de hierro dentro de dichas neuronas. Se ha dedicado un gran empeño a
desarrollar compuestos farmacéuticos que sean capaces de prevenir el
deterioro neurológico atribuible a un estrés oxidante (Y. Zhang y
col., J. Cereb. Blood Flow Metab. 13, 378 (1993)).
Se ha publicado que la asfixia infantil (IA),
desencadenada por la deficiencia transitoria de abastecimiento de
oxígeno durante la entrega, se debe a la reducción de la producción
energética, al deterioro de la membrana celular provocado por el
radical libre de oxígeno, a la liberación de neutrotransmisores
excitantes, al cambio de la concentración intracelular de iones,
incluidos el calcio, el cinc, etc. La IA es un problema importante a
escala mundial, por la IA es grave y la probabilidad de mortalidad
es elevada (aproximadamente 1/3 de los casos) [C.F. Loid y col.,
Physiology and Behavior 68, 263-269 (2000)].
Además puede provocar secuelas de larga duración, por ejemplo
trastornos locomotores, trastornos de aprendizaje, epilepsia,
distonía, retraso mental y espasticidad.
Para proteger contra la lesión cerebral pueden
ser útiles las enzimas antioxidantes, el alopurinol, las vitaminas C
y E, los eliminadores de radicales libres, los inhibidores de los
neurotransmisores excitantes, los bloqueadores de canales de calcio,
por ejemplo la nimodipina y la flunaricina, los inhibidores de la
formación de NO, la terapia hiperglucémica e hipoglucémica, pero su
aplicación clínica es todavía limitada. Para tratar la asfixia
infantil de forma correcta se requiere por tanto una investigación
más intensa.
El glaucoma, una de las principales causas de la
ceguera, se define como una neuropatía óptica asociada a unos
cambios característicos del nervio óptico. En las personas humanas,
el nervio óptico consta de 1 millón de axones de neuronas cuyos
pericarias residen primariamente en la capa celular de ganglios y,
en menor grado, en la parte interior de la capa nuclear interior. El
aspecto excavado de la cabeza del nervio óptico en el glaucoma se
cree que se debe a la muerte y posterior pérdida de las células de
los ganglios y de sus axones [N.N. Osborne y col., Survey of
Ophthalmology 43, suplem. S102-S128 (1999)].
En caso de glaucoma, los agentes neuroprotectores pueden proteger
contra la muerte de las neuronas de la retina, en especial las
células ganglionares ya sea de modo directo, ya sea indirecto. Un
gran número de agentes, por ejemplo el antagonista del receptor
NMDA, los bloqueadores \beta, los antagonistas de calcio y los
antioxidantes pueden utilizarse para la protección las neuronas de
la retina contra la muerte inducida por la isquemia.
Aunque no se ha establecido claramente la
patogénesis de la neuropatía diabética, hay dos hipótesis que se han
propuesto para explicarla. Una es la anomalía metabólica y la otra
es la deficiencia de riego sanguíneo en el nervio periférico [K.
Naka y col., Diabetes Research and Clinical Practice 30,
153-162 (1995)]. Se halla en fase de ensayo clínico
la acetil-L-carnitina (ALC) que
estimula el metabolismo de los lípidos y mejora las respuestas
nociceptivas desequilibradas de las neuronas y la prosáptida que
libera factores neurotróficos. Continúa en la fase de ensayos
clínicos además la memantina que presenta buenos efectos sobre la
demencia vascular por regulación del receptor NMDA. Por
consiguiente, para tratar la neuropatía diabética pueden
desarrollarse agentes neuroprotectores que tengan una gran variedad
de mecanismos de acción.
La proporción de casos de cáncer dentro de las
enfermedades humanas está creciendo gradualmente. La angiogénesis o
formación de nuevos vasos sanguíneos se ha reconocido ya como el
proceso capital que indica el crecimiento y la metástasis de tumores
sólidos (Folkma J. y col., J. Biol. Chem. 267,
10931-10934 (1992)). La angiogénesis se controla por
parte de los inductores y de los inhibidores de angiogénesis. Cuando
se rompe el equilibrio entre ellos, es decir, cuando los inductores
de angiogénesis predominan sobre los inhibidores de angiogénesis,
entonces se forma un gran número de vasos sanguíneos nuevos. La
angiogénesis está íntimamente relacionada con varios fenómenos
fisiológicos, por ejemplo el desarrollo embrionario, la curación de
heridas, la inflamación crónica, los hemangiomas, la retinopatía
diabética, la artritis reumatoide, la psoriasis, las complicaciones
del SIDA y el crecimiento y la metástasis de tumores malignos
(Forkman J., Klagsbrun M., Science 235,
442-447 (1987)). La angiogénesis incluye una serie
de procesos, por ejemplo la migración, la proliferación y la
diferenciación de células endoteliales y es un requisito previo
importante del crecimiento y la metástasis del cáncer. En concreto,
dado que las células tumorales en expansión requieren la formación
de vasos sanguíneos desde las células hospedantes, los promotores de
angiogénesis derivados de tumores estimulan la inducción de la
angiogénesis en la masa tumoral. Después, los vasos sanguíneos
formados alrededor de los tumores malignos facilitan la metástasis
de las células tumorales, transportándolas a otros lugares. Por lo
tanto, la inhibición de la angiogénesis se traduce en la prevención
del crecimiento y de la metástasis del cáncer. Por ser uno de los
principales campos de investigación para desarrollar fármacos
anticancerosos se está prestando una atención especial a la búsqueda
de inductores de angiogénesis y de inhibidores de angiogénesis y al
estudio de sus mecanismos de acción.
Se ha constatado en este sentido que pueden
desempeñar el papel de inhibidores de la angiogénesis las proteínas,
por ejemplo la prostamina y los factores necróticos tumorales, los
factores derivados de tejidos cartilaginosos y los esteroides de
cortisona llamados angiostáticos y varios derivados de esteroides.
En concreto, la hidrocortisona despliega una actividad
antiangiogenética cuando interviene en el tratamiento junto con la
heparina (Lee A. y col., Science 221,
1185-1187 (1983); Crum. R y col., Science
230, 1375-1378 (1985)). Sin embargo, estos
compuestos tienen un problema potencial para tratar el cáncer con
eficacia, dicho problema estriba en su citotoxicidad.
Las intervenciones coronarias percutáneas (PCI)
desempeñan un papel importante en la gestión o control de la
estenosis de la arteria coronaria, estrechando la luz o diámetro
interior como resultado del crecimiento de una placa esclerótica de
la íntima (revestimiento interior) de un vaso, con una probabilidad
de éxito de más del 95%, pero estas intervenciones son complicadas
debido al significativo estrechamiento posterior de la arteria
(restenosis) en el 20-50% de los pacientes en un
período de 6 meses después de la intervención (Bult H., Tips
21, 274-279 (2000)). No se ha estudiado en
toda su extensión la biología de la restenosis, pero los mecanismos
celulares predominantes que contribuyen a la restenosis son la
trombosis, la migración y la proliferación de células vasculares de
los músculos lisos y la cicatrización adventicia. A diferencia de la
aterosclerosis, la restenosis no depende de la concentración o de la
composición de los lípidos aterogénicos del plasma.
Ha sido difícil encontrar terapias eficaces
contra la restenosis debido a los conocimientos incompletos sobre la
biología de la restenosis y la falta de modelos animales apropiados.
En los ensayos clínicos se ha demostrado en los últimos tiempos que
algunos tipos de fármacos, el antagonista de la glicoproteína
IIb/IIIa y el antioxidante probucol pueden ser beneficiosos (Bult
H., Tips 21, 274-279 (2000)). La restenosis
se caracteriza por una actividad proliferante intensa, por lo tanto
se está intentando desarrollar fármacos que reduzcan la
proliferación celular vascular de músculos lisos.
La investigación intensa de los inventores sobre
el desarrollo de compuestos que tengan las virtudes farmacológicas
mencionadas anteriormente ha dado como resultado que los derivados
de benzopiranil-guanidina representados por la
fórmula 1 tienen una actividad cardioprotectora y neuroprotectora
superior después de una reperfusión isquémica y una lesión
hipóxica. Los compuestos despliegan además varias eficacias
farmacológicas, incluida la protección de neuronas, prevención de
peroxidación de lípidos y formación de especies reactivas de
oxígeno, protección de la retina isquémica, mejora de las respuestas
nociceptivas desequilibradas en ratas diabéticas, inhibición de la
formación de NO y supresión de la angiogénesis y restenosis. Por lo
tanto, el compuesto de la presente invención puede ser útil para
prevenir y tratar varias enfermedades relacionadas con el sistema
cardiovascular, por ejemplo el infarto de miocardio y el fallo
cardíaco congestivo; la apoplejía; la lesión neuronal por ejemplo la
asfixia infantil, el glaucoma, la neuropatía diabética y el trauma
craneal; las enfermedades derivadas de los radicales libres de
oxígeno, por ejemplo las enfermedades neurodegenerativas y la
aterosclerosis; la angiogénesis, por ejemplo el cáncer y la
retinopatía diabética o la restenosis y también puede utilizarse
para proteger y preservar órganos, por ejemplo el corazón, los
riñones, el hígado y tejidos y proteger órganos en caso de cirugía
cardiovascular mayor.
Uno de los objetivos de la presente invención
consiste en proporcionar nuevos derivados de
benzopiranil-guanidina de la fórmula 1.
Otro objetivo de la presente invención es
proporcionar un proceso de obtención de los derivados de
benzopiranil-guanidina.
Otro objetivo de la presente invención consiste
en proporcionar un uso farmacéutico de los derivados de
benzopiranil-guanidina. La presente invención
proporciona en concreto el uso de los derivados de
benzopiranil-guanidina para la protección del
corazón y del cerebro contra la lesión de la isquemia y de la
hipoxia, la neuroprotección, la inhibición de la formación de NO, la
peroxidación de lípidos y la generación de especies reactivas de
oxígeno o la supresión de la angiogénesis y de la restenosis.
La presente invención proporciona derivados de
benzopiranil-guanidina representados por la
siguiente fórmula 1 y sus sales farmacéuticamente aceptables.
Fórmula
1
en la
que
R_{1} significa H, halógeno, CF_{3},
NO_{2}, CN, OR^{a}, O(C=O)R^{a}, COOR^{a},
NH_{2}, NHS(O)_{m}R^{a},
NH(C=O)R^{a} o S(O)_{m}R^{a};
R^{a} significa un grupo alquilo
C_{1}-C_{4} lineal o ramificado o un grupo
arilo; y m es un número entero de 0 a 2;
R_{2} significa un grupo alquilo
C_{1}-C_{4} lineal o ramificado;
R_{3} significa CH_{2}OR^{a},
R^{a} tiene el significado definido antes;
R^{b} y R^{c} con independencia entre sí significan en cada
caso un grupo alquilo C_{1}-C_{4} lineal o
ramificado; y Z significa un grupo alquilo
C_{1}-C_{5} lineal o ramificado;
R_{4} significa OH, H, halógeno, ONO_{2} u
O(C=O)R^{a}; y R^{a} tiene el significado definido
anteriormente; R_{5} y R_{6} con independencia entre sí
significan en cada caso H, halógeno, un grupo alquilo
C_{1}-C_{3} lineal o ramificado, OR^{a},
CX_{3}, NO_{2}, CO_{2}R^{a}, -(C=O)R^{a} o
SO_{3}R^{a}; R^{a} tiene el significado definido antes; X
significa halógeno y
n es un número entero de 0 a 2.
Y el * significa un centro quiral.
Con mayor preferencia, en la fórmula 1:
R_{1} significa NO_{2}, CN, NH_{2} o
S(O)_{m}R^{a}; R^{a} significa un grupo alquilo
C_{1}-C_{2} lineal o ramificado o un grupo
arilo; y m es un número entero de 0 a 2;
R_{2} significa CH_{3};
R_{3} significa
\vskip1.000000\baselineskip
R^{b} y R^{c} con independencia entre sí
significan en cada caso un grupo alquilo
C_{1}-C_{3} lineal o ramificado; y Z significa
un grupo alquilo C_{1}-C_{5} lineal o
ramificado;
R_{4} significa OH, H u
O(C=O)R^{a}; y R^{a} significa un grupo alquilo
C_{1}-C_{3} lineal o ramificado;
R_{5} y R_{6} con independencia entre sí
significan en cada caso H, halógeno, un grupo alquilo
C_{1}-C_{3} lineal o ramificado, OR^{a},
CX_{3} o NO_{2}; R^{a} significa un grupo alquilo
C_{1}-C_{3} lineal o ramificado; X significa
halógeno y
n es un número entero de 0 a 2.
La presente invención incluye a todos los
solvatos e hidratos que puedan obtenerse a partir de los derivados
de la benzopiranil-guanidina de la fórmula 1 además
de los derivados de benzopiranil-guanidina de la
fórmula 1 y sus sales farmacéuticamente aceptables.
La presente invención incluye a todos los
isómeros estereoquímicos separados, es decir, a los compuestos
diastereómeros puros y enantiómeros puros que tienen uno o varios
centros quirales en las posiciones 2, 3 y 4, además de las mezclas
racémicas y las mezclas de diastereómeros de los derivados de
benzopiranil-guanidina de la fórmula 1.
En caso de tener tres centros quirales en las
posiciones 2, 3 y 4, los derivados de
3,4-dihidrobenzopirano según la presente invención
se representan por los isómeros ópticos de las fórmulas (I_{1}),
(I_{2}), (I_{3}) y (I_{4}) (ver la siguiente
\hbox{fórmula 3)}.
Fórmula
3
en la que R_{1}, R_{2}, R_{3}, R_{4},
R_{5}, R_{6} y n tienen los significados definidos
anteriormente.
Los compuestos preferidos de la presente
invención son en especial los siguientes:
1) (2R, 3R,
4S)-N''ciano-N-(6-nitro-3,4-dihidro-3-hidroxi-2-metil-2-dimetoximetil-2H-benzopiran-4-il)-N'-(4-
clorofenil)guanidina;
clorofenil)guanidina;
2) (2R, 3S,
4R)-N''-ciano-N-(6-nitro-3,4-dihidro-3-hidroxi-2-metil-2-dimetoximetil-2H-benzopiran-4-il)-N'-(4-clorofenil)guanidina;
3) (2R, 3R,
4S)-N''-ciano-N-(6-nitro-3,4-dihidro-3-hidroxi-2-metil-2-dimetoximetil-2H-benzopiran-4-il)-N'-(3-clorofenil)guanidina;
4) (2R, 3S,
4R)-N''-ciano-N-(6-nitro-3,4-dihidro-3-hidroxi-2-metil-2-dimetoximetil-2H-benzopiran-4-il)-N'-(3-clorofenil)guanidina;
5) (2R, 3R,
4S)-N''-ciano-N-(6-nitro-3,4-dihidro-3-hidroxi-2-metil-2-dimetoximetil-2H-benzopiran-4-il)-N'-(4-nitrofenil)guanidina;
6) (2R, 3R,
4S)-N''-ciano-N-(6-nitro-3,4-dihidro-3-hidroxi-2-metil-2-dimetoximetil-2H-benzopiran-4-il)-N'-(3-trifluormetilfenil)guanidina;
7) (2R, 3S,
4R)-N''-ciano-N-(6-nitro-3,4-dihidro-3-hidroxi-2-metil-2-dimetoximetil-2H-benzopiran-4-il)-N'-(3-trifluormetilfenil)guanidina;
8) (2R, 3R,
4S)-N''-ciano-N-(6-nitro-3,4-dihidro-3-hidroxi-2-metil-2-dimetoximetil-2H-benzopiran-4-il)-N'-(4-metoxifenil)guanidina;
9) (2R, 3S,
4R)-N''-ciano-N-(6-nitro-3,4-dihidro-3-hidroxi-2-metil-2-dimetoximetil-2H-benzopiran-4-il)-N'-(4-metoxifenil)guanidina;
10) (2S, 3R,
4S)-N''-ciano-N-(6-nitro-3,4-dihidro-3-hidroxi-2-metil-2-dimetoximetil-2H-benzopiran-4-il)-N'-(4-clorofenil)guanidina;
11) (2S, 3S,
4R)-N''-ciano-N-(6-nitro-3,4-dihidro-3-hidroxi-2-metil-2-dimetoximetil-2H-benzopiran-4-il)-N'-(4-clorofenil)guanidina;
12) (2S, 3R,
4S)-N''-ciano-N-(6-nitro-3,4-dihidro-3-hidroxi-2-metil-2-dimetoximetil-2H-benzopiran-4-il)-N'-(3-clorofenil)guanidina;
13) (2S, 3S,
4R)-N''-ciano-N-(6-nitro-3,4-dihidro-3-hidroxi-2-metil-2-dimetoximetil-2H-benzopiran-4-il)-N'-(3-clorofenil)guanidina;
14) (2S, 3R,
4S)-N''-ciano-N-(6-nitro-3,4-dihidro-3-hidroxi-2-metil-2-dimetoximetil-2H-benzopiran-4-il)-N'-(3-trifluormetilfenil)guanidina;
15) (2S, 3S,
4R)-N''-ciano-N-(6-nitro-3,4-dihidro-3-hidroxi-2-metil-2-dimetoximetil-2H-benzopiran-4-il)-N'-(3-trifluormetilfenil)guanidina;
16) (2S, 3R,
4S)-N''-ciano-N-(6-nitro-3,4-dihidro-3-hidroxi-2-metil-2-dimetoximetil-2H-benzopiran-4-il)-N'-(4-metoxifenil)guanidina;
17) (2S, 3S,
4R)-N''-ciano-N-(6-nitro-3,4-dihidro-3-hidroxi-2-metil-2-dimetoximetil-2H-benzopiran-4-il)-N'-(4-metoxifenil)guanidina;
18) (2R, 3R,
4S)-N''-ciano-N-(6-nitro-3,4-dihidro-3-hidroxi-2-metil-2-dimetoximetil-2H-benzopiran-4-il)-N'-(4-metilfenil)guanidina;
19) (2R, 3S,
4R)-N''-ciano-N-(6-nitro-3,4-dihidro-3-hidroxi-2-metil-2-dimetoximetil-2H-benzopiran-4-il)-N'-(4-metilfenil)guanidina;
20) (2R, 3R,
4S)-N''-ciano-N-(6-nitro-3,4-dihidro-3-hidroxi-2-metil-2-dimetoximetil-2H-benzopiran-4-il)-N'-(4-metoxibencil)guanidina;
21) (2R, 3S,
4R)-N''-ciano-N-(6-nitro-3,4-dihidro-3-hidroxi-2-metil-2-dimetoximetil-2H-benzopiran-4-il)-N'-(4-metoxibencil)guanidina;
22) (2R, 3R,
4S)-N''-ciano-N-(6-nitro-3,4-dihidro-3-hidroxi-2-metil-2-dimetoximetil-2H-benzopiran-4-il)-N'-bencilguanidina;
23) (2R, 3S,
4R)-N''-ciano-N-(6-nitro-3,4-dihidro-3-hidroxi-2-metil-2-dimetoximetil-2H-benzopiran-4-il)-N'-bencilguanidina;
24) (2S, 3R,
4S)-N''-ciano-N-(6-nitro-3,4-dihidro-3-hidroxi-2-metil-2-dimetoximetil-2H-benzopiran-4-il)-N'-bencilguanidina;
25) (2S, 3S,
4R)-N''-ciano-N-(6-nitro-3,4-dihidro-3-hidroxi-2-metil-2-dimetoximetil-2H-benzopiran-4-il)-N'-bencilguanidina;
26) (2R, 3R,
4S)-N''-ciano-N-(3,4-dihidro-3-hidroxi-2-metil-2-dimetoximetil-2H-benzopiran-4-il)-N'-(4-clorofenil)guanidina;
27) (2R, 3S,
4R)-N''-ciano-N-(3,4-dihidro-3-hidroxi-2-metil-2-dimetoximetil-2H-benzopiran-4-il)-N'-(4-clorofenil)guanidina;
28) (2R, 3R,
4S)-N''-ciano-N-(6-nitro-3,4-dihidro-3-hidroxi-2-metil-2-hidroximetil-2H-benzopiran-4-il)-N'-(4-clorofenil)guanidina;
29) (2R, 3S,
4R)-N''-ciano-N-(6-nitro-3,4-dihidro-3-hidroxi-2-metil-2-hidroximetil-2H-benzopiran-4-il)-N'-(4-clorofenil)guanidina;
30) (2R, 3R,
4S)-N''-ciano-N-(6-nitro-3,4-dihidro-3-hidroxi-2-metil-2-metoximetil-2H-benzopiran-4-il)-N'-(4-
clorofenil)guanidina;
clorofenil)guanidina;
31) (2R, 3S,
4R)-N''-ciano-N-(6-nitro-3,4-dihidro-3-hidroxi-2-metil-2-metoximetil-2H-benzopiran-4-il)-N'-(4-
clorofenil)guanidina;
clorofenil)guanidina;
32) (2S, 3R,
4S)-N''-ciano-N-(6-nitro-3,4-dihidro-3-hidroxi-2-metil-2-dimetoximetil-2H-benzopiran-4-il)-N'-(2-clorofenil)guanidina;
33) (2S, 3S,
4R)-N''-ciano-N-(6-nitro-3,4-dihidro-3-hidroxi-2-metil-2-dimetoximetil-2H-benzopiran-4-il)-N'-(2-clorofenil)guanidina;
34) (2S, 3R,
4S)-N''-ciano-N-(6-nitro-3,4-dihidro-3-hidroxi-2-metil-2-dimetoximetil-2H-benzopiran-4-il)-N'-(2-trifluormetilfenil)guanidina;
35) (2S, 3S,
4R)-N''-ciano-N-(6-nitro-3,4-dihidro-3-hidroxi-2-metil-2-dimetoximetil-2H-benzopiran-4-il)-N'-(2-trifluormetilfenil)guanidina;
36) (2S, 3R,
4S)-N''-ciano-N-(6-nitro-3,4-dihidro-3-hidroxi-2-metil-2-dimetoximetil-2H-benzopiran-4-il)-N'-(2-clorobencil)guanidina;
37) (2S, 3S,
4R)-N''-ciano-N-(6-nitro-3,4-dihidro-3-hidroxi-2-metil-2-dimetoximetil-2H-benzopiran-4-il)-N'-(2-clorobencil)guanidina;
38) (2S, 3R,
4S)-N''-ciano-N-(6-nitro-3,4-dihidro-3-acetoxi-2-metil-2-dimetoximetil-2H-benzopiran-4-il)-N'-bencilguanidina;
39)
(2S)-N''-ciano-N-(6-nitro-2-metil-2-dimetoximetil-2H-benzopiran-4-il)-N'-bencilguanidina;
40) (2S, 3S,
4R)-N''-ciano-N-(6-amino-3,4-dihidro-3-hidroxi-2-metil-2-dimetoximetil-2H-benzopiran-4-il)-N'-bencilguanidina;
41) (2S, 3S,
4R)-N''-ciano-N-(6-acetoxiamino-3,4-dihidro-3-hidroxi-2-metil-2-dimetoximetil-2H-benzopiran-4-il)-N'-bencilguanidina;
42) (2S, 3S,
4R)-N''-ciano-N-(6-metanosulfonilamino-3,4-dihidro-3-hidroxi-2-metil-2-dimetoximetil-2H-benzopiran-4-il)-N'-bencilguanidina;
43) (2S, 3S,
4S)-N''-ciano-N-(6-ciano-3,4-dihidro-3-hidroxi-2-metil-2-dimetoximetil-2H-benzopiran-4-il)-N'-(4-clorofenil)guanidina;
44) (2S, 3R,
4S)-N''-ciano-N-(6-ciano-3,4-dihidro-3-hidroxi-2-metil-2-dimetoximetil-2H-benzopiran-4-il)-N'-(4-clorofenil)guanidina;
45) (2S, 3S,
4R)-N''-ciano-N-(6-ciano-3,4-dihidro-3-hidroxi-2-metil-2-dimetoximetil-2H-benzopiran-4-il)-N'-
bencilguanidina;
bencilguanidina;
46) (2S, 3R,
4S)-N''-ciano-N-(6-ciano-3,4-dihidro-3-hidroxi-2-metil-2-dimetoximetil-2H-benzopiran-4-il)-N'-
bencilguanidina;
bencilguanidina;
47) (2S, 3S,
4R)-N''-ciano-N-(6-bromo-3,4-dihidro-3-hidroxi-2-metil-2-dimetoximetil-2H-benzopiran-4-il)-N'-bencilguanidina;
48) (2S, 3S,
4R)-N''-ciano-N-(6-nitro-3,4-dihidro-3-hidroxi-2-metil-2-dimetoximetil-2H-benzopiran-4-il)-N'-(3,4-dimetoxibencil)guanidina;
49) (2S, 3S,
4R)-N''-ciano-N-(6-amino-3,4-dihidro-3-hidroxi-2-metil-2-dimetoximetil-2H-benzopiran-4-il)-N'-(3,4-dimetoxibencil)guanidina;
50) (2S, 3S,
4R)-N''-ciano-N-(6-nitro-3,4-dihidro-3-hidroxi-2-metil-2-dimetoximetil-2H-benzopiran-4-il)-N'-(4-metoxibencil)guanidina;
51) (2S, 3S,
4R)-N''-ciano-N-(6-amino-3,4-dihidro-3-hidroxi-2-metil-2-dimetoximetil-2H-benzopiran-4-il)-N'-(4-metoxibencil)guanidina;
52) (2S, 3S,
4R)-N''-ciano-N-(6-nitro-3,4-dihidro-3-hidroxi-2-metil-2-dimetoximetil-2H-benzopiran-4-il)-N'-(3-nitrobencil)guanidina;
53) (2S, 3S,
4R)-N''-ciano-N-(6-nitro-3,4-dihidro-3-hidroxi-2-metil-2-dimetoximetil-2H-benzopiran-4-il)-N'-(3-trifluormetilbencil)guanidina;
54) (2S, 3S,
4R)-N''-ciano-N-(6-amino-3,4-dihidro-3-hidroxi-2-metil-2-dimetoximetil-2H-benzopiran-4-il)-N'-(3-trifluormetilbencil)guanidina;
55) (2S, 3S,
4R)-N''-ciano-N-(6-metanosulfoniloxi-3,4-dihidro-3-hidroxi-2-metil-2-dimetoximetil-2H-benzopiran-4-il)-N'-bencilguanidina;
56) (2R, 3S,
4R)-N''-ciano-N-(6-metanosulfoniloxi-3,4-dihidro-3-hidroxi-2-metil-2-dimetoximetil-2H-benzopiran-4-il)-N'-bencilguanidina;
57) (2S, 3R,
4S)-N''-ciano-N-(6-amino-3,4-dihidro-3-hidroxi-2-metil-2-dimetoximetil-2H-benzopiran-4-il)-N'-bencilguanidina;
58) (2R, 3R,
4S)-N''-ciano-N-(6-amino-3,4-dihidro-3-hidroxi-2-metil-2-dimetoximetil-2H-benzopiran-4-il)-N'-bencilguanidina;
59) (2R, 3S,
4R)-N''-ciano-N-(6-amino-3,4-dihidro-3-hidroxi-2-metil-2-dimetoximetil-2H-benzopiran-4-il)-N'-bencilguanidina;
60) (2S, 3S,
4R)-N''-ciano-N-(6-nitro-3,4-dihidro-3-hidroxi-2-metil-2-([1,3]dioxolan-2-il)-2H-benzopiran-4-il)-N'-bencilguanidina;
61) (2S, 3S,
4R)-N''-ciano-N-(6-amino-3,4-dihidro-3-hidroxi-2-metil-2-([1,3]dioxolan-2-il)-2H-benzopiran-4-il)-N'-bencilguanidina;
62) (2S, 3S,
4R)-N''-ciano-N-(6-nitro-3,4-dihidro-3-hidroxi-2-metil-2-([1,3]dioxan-2-il)-2H-benzopiran-4-il)-N'-bencilguanidina;
63) (2S, 3S,
4R)-N''-ciano-N-(6-amino-3,4-dihidro-3-hidroxi-2-metil-2-([1,3]dioxan-2-il)-2H-benzopiran-4-il)-N'-bencilguanidina;
64) (2S, 3S,
4R)-N''-ciano-N-(6-nitro-3,4-dihidro-3-hidroxi-2-metil-2-([1,3]-5,5-dimetildioxan-2-il)-2H-benzopiran-4-il)-N'-bencilguanidina;
65) (2S, 3S,
4R)-N''-ciano-N-(6-amino-3,4-dihidro-3-hidroxi-2-metil-2-([1,3]-5,5-dimetildioxan-2-il)-2H-benzopiran-4-il)-N'-bencilguanidina;
66) (2S, 3S,
4R)-N''-ciano-N-(6-nitro-3,9-dihidro-3-hidroxi-2-metil-2-dietoximetil-2H-benzopiran-4-il)-N'-bencilguanidina;
67) (2S, 3S,
4R)-N''-ciano-N-(6-amino-3,4-dihidro-3-hidroxi-2-metil-2-dietoximetil-2H-benzopiran-4-il)-N'-bencilguanidina;
68) (2S, 3S,
4R)-N''-ciano-N-(6-metoxicarbonil-3,4-dihidro-3-hidroxi-2-metil-2-dimetoximetil-2H-benzopiran-4-il)-N'-bencilguanidina;
69) (2R, 3S,
4R)-N''-ciano-N-(6-metoxicarbonil-3,4-dihidro-3-hidroxi-2-metil-2-dimetoximetil-2H-benzopiran-4-il)-N'-bencilguanidina;
70) (3S,
4R)-N''-ciano-N-(8-nitro-3,4-dihidro-3-hidroxi-2-metil-2-dimetoximetil-2H-benzopiran-4-il)-N'-bencilguanidina;
71) (2S, 3S,
4R)-N''-ciano-N-(8-amino-3,4-dihidro-3-hidroxi-2-metil-2-dimetoximetil-2H-benzopiran-4-il)-N'-bencilguanidina
y
72) (2R, 3S,
4R)-N''-ciano-N-(8-amino-3,4-dihidro-3-hidroxi-2-metil-2-dimetoximetil-2H-benzopiran-4-il)-N'-bencilguanidina.
Los compuestos más preferidos de la presente
invención son los siguientes:
(2S, 3S,
4R)-N''-ciano-N-(6-amino-3,4-dihidro-3-hidroxi-2-metil-2-dimetoximetil-2H-benzopiran-4-il)-N'-bencilguanidina;
(2S, 3S,
4R)-N''-ciano-N-(6-nitro-3,4-dihidro-3-hidroxi-2-metil-2-dimetoximetil-2H-benzopiran-4-il)-N'-bencilguanidina
y
(2S, 3S,
4R)-N''-ciano-N-(6-nitro-3,4-dihidro-3-acetoxi-2-metil-2-dimetoximetil-2H-benzopiran-4-il)-N'-bencilguanidina.
Los compuestos de la fórmula 1 pueden utilizarse
en calidad de sales farmacéuticamente aceptables, derivadas de
ácidos libres farmacéutica o fisiológicamente aceptables. Estas
sales incluyen, pero no se limitan a las siguientes: sales de ácidos
inorgánicos, por ejemplo ácido clorhídrico, ácido bromhídrico, ácido
sulfúrico, ácido fosfórico, ácido estánnico, etc. y de ácidos
orgánicos, por ejemplo ácido cítrico, ácido acético, ácido láctico,
ácido maleico, ácido fumárico, ácido glucónico, ácido
metanosulfónico, ácido glicólico, ácido succínico, ácido tartárico,
ácido 4-toluenosulfónico, ácido galacturónico, ácido
embónico, ácido glutámico, ácido aspártico, etc.
Las sales de ácido de los compuestos según la
presente invención pueden obtenerse del modo habitual, por ejemplo
disolviendo el compuesto de la fórmula 1 en un exceso de ácido
acuoso y precipitando la sal en un disolvente orgánico miscible con
agua, por ejemplo el metanol, el etanol, la acetona o el
acetonitrilo. También es posible obtenerlas calentando cantidades
equivalentes de un compuesto de la fórmula 1 y un ácido en agua o un
alcohol, por ejemplo el monometiléter del glicol, y después
concentrando la mezcla por evaporación a sequedad o bien filtrando
con succión la sal precipitada.
Los compuestos de la fórmula 1 pueden presentarse
también en forma de sales farmacéuticamente aceptables de amonio, de
metales alcalinos o de metales alcalinotérreos. Las sales de metales
alcalinos o de metales alcalinotérreos de los compuestos de la
fórmula 1 pueden obtenerse por ejemplo disolviendo un compuesto de
la fórmula 1 en una cantidad equimolar de una solución de un
hidróxido de un metal alcalino o de un metal alcalinotérreo,
filtrando para separar los materiales no disueltos y concentrando el
líquido filtrado por evaporación a sequedad. Las sales sódica,
potásica o cálcica son farmacéuticamente idóneas. Las
correspondientes sales de plata pueden obtenerse por reacción de una
sal de metal alcalino o de metal alcalinotérreo con una sal idónea
de plata, por ejemplo el nitrato de plata.
La presente invención proporciona además un
proceso de obtención de derivados de
benzopiranil-guanidina de la fórmula 1.
La presente invención proporciona en especial
procesos de obtención de derivados de
benzopiranil-guanidina de la fórmula 1,
representados por el siguiente esquema 1 (método de obtención
I).
Esquema
1
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
en el que R_{1}, R_{2}, R_{3}, R_{4},
R_{5}, R_{6} y n tienen en cada caso los significados definidos
anteriormente.
La presente invención proporciona además procesos
de obtención de derivados de benzopiranil-guanidina
de la fórmula 1, representados por el siguiente esquema 2 (método de
obtención II).
\newpage
Esquema
2
en el que R_{1}, R_{2}, R_{3}, R_{4},
R_{5}, R_{6} y n tienen en cada caso los significados definidos
anteriormente.
Además, la presente invención proporciona
procesos de obtención de derivados de
benzopiranil-guanidina de la fórmula 1 empleando el
compuesto (I') obtenido en el esquema 1 o en el esquema 2,
representados por el siguiente esquema 3.
Esquema
3
en el que R_{1}, R_{2}, R_{3}, R_{4},
R_{5}, R_{6} y n tienen en cada caso los significados definidos
anteriormente.
Los sustituyentes de R_{1}, R_{2}, R_{3},
R_{4}, R_{5} y R_{6} pueden modificarse o bien puede formarse
un doble enlace 3,4 mediante la reacción representada en el anterior
esquema 3.
Los derivados de la fórmula 1 puede obtenerse por
separado en forma de isómeros ópticamente activos empleando como
material de partida el correspondiente isómero óptico.
En caso de utilizar como material de partida una
mezcla racémica, los derivados de la fórmula 1 pueden obtenerse en
forma de mezcla racémica y después se separa la mezcla racémica en
cada uno de los isómeros ópticos. Los isómeros ópticos pueden
separarse por la cromatografía habitual de columna quiral o por
recristalización.
Los compuestos de la fórmula 1 pueden
sintetizarse empleando reacciones y técnicas descritas seguidamente.
Las reacciones se llevan a cabo en un disolvente adecuado para los
reactivos y materiales empleados e idóneo para la transformación que
se pretende realizar.
Los compuestos aminoalcohol (III) empleados como
material de partida de los esquemas 1 ó 2 pueden obtenerse por la
reacción representada en el siguiente esquema 4.
Esquema
4
\vskip1.000000\baselineskip
en el que R_{1}, R_{2} y R_{3} tienen en
cada caso los significados definidos anteriormente, (OZ) significa
un grupo saliente y Hal significa un átomo de halógeno.
El método de obtención del compuesto epoxi (II)
representado en el anterior esquema 4 se describe con detalle en la
patente US-5 236 935 y en la patente
KR-096 546, propiedad de los inventores
presentes.
El compuesto epoxi (II) puede obtenerse también a
partir de derivados propaziléter (J. Med. Chem. 26, 1582
(1983)).
Los compuestos olefínicos (VIII) se presentan en
forma de enantiómeros (VIII_{1} y VIII_{2}) representados en la
fórmula 4.
Fórmula
4
\vskip1.000000\baselineskip
en la que R_{1}, R_{2} y R_{3} tienen en
cada caso los significados definidos
anteriormente.
Los compuestos olefínicos (VIII) pueden obtenerse
por separado en forma de compuesto olefínico (VIII_{1}) y
compuestos olefínico (VIII_{2}) ópticamente activos de la fórmula
4, respectivamente. El compuesto olefínico (VIII) puede obtenerse
por el método descrito en la solicitud de patente
KR-96-7399 de los inventores
presentes.
El siguiente esquema 5 representa el proceso
detallado de obtención del compuesto olefínico (VIII) a partir de un
compuesto alcohol (VII).
Esquema
5
en el que R_{1}, R_{2} y R_{3} tienen en
cada caso los significados definidos
anteriormente.
Los compuestos epoxi (II_{1}) y los compuestos
epoxi (II_{2}) pueden obtenerse a partir del compuesto
(VIII_{1}) y los compuestos epoxi (II_{3}) y los compuestos
epoxi (II_{4}) pueden obtenerse a partir del compuesto
(VIII_{2}) por el método representado en el siguiente esquema 6,
empleando como materiales de partida el compuesto (VIII_{1}) y el
compuesto (VIII_{2}) obtenidos en el esquema 5,
respectivamente.
\vskip1.000000\baselineskip
Esquema
6
\vskip1.000000\baselineskip
en el que R_{1}, R_{2} y R_{3} tienen en
cada caso los significados definidos
anteriormente.
Los compuestos epoxi (II_{1}) y (II_{2})
pueden separarse para obtener cada isómero óptico y todos los
compuestos epoxi separados o las mezclas de los mismos pueden
emplearse en la etapa siguiente. Pueden separarse también los
compuestos epoxi (II_{3}) y (II_{4}) y los compuestos epoxi
separados o las mezclas de los mismos pueden emplearse en la etapa
siguiente.
Los compuestos epoxi (II_{1}) y (II_{2}) y
los compuestos epoxi (II_{3}) y (II_{4}) pueden obtenerse a
partir de los compuestos olefínicos (VIII_{1}) y (VIII_{2}),
respectivamente, por el método de obtención descrito en la patente
US-5 236 935 y en la patente KR-096
546, propiedad de los inventores presentes.
Los isómeros ópticos (II_{1}), (II_{2}),
(II_{3}) y (II_{4}) de los compuestos epoxi pueden obtenerse a
partir de los compuestos olefínicos (VIII_{1}) y (VIII_{2}),
empleando como catalizadores de epoxidación sales de Mn(III)
(E.N. Jacobsen y col., Tetrahedron Lett. 38, 5055 (1991)). Si
se utiliza un catalizador saleno de (R,
R)-Mn(III), los compuestos epoxi (II_{1})
pueden obtenerse a partir de los compuestos olefínicos (VIII_{1})
y los compuestos epoxi (II_{3}) a partir de los compuestos
olefínicos (VIII_{2}). Si se utiliza un catalizador saleno de (S,
S)-Mn(III), los compuestos epoxi (II_{2})
se obtienen de los compuestos olefínicos (VIII_{1}) y los
compuestos epoxi (II_{4}) a partir de los compuestos olefínicos
(VIII_{2}). La epoxidación se realiza en una mezcla de cloruro de
metileno y agua, empleando como oxidante el NaOCl.
Los compuestos aminoalcohol (III) se obtienen por
reacción del compuesto epoxi (II) con amoníaco gaseoso (NH_{3}) o
hidróxido amónico (NH_{4}OH) en presencia de un disolvente idóneo,
según el anterior esquema 4. Son disolventes preferidos los
alcoholes, por ejemplo el metanol, el etanol, el isopropanol, etc.
La temperatura de reacción puede situarse entre 5ºC y el punto de
ebullición del disolvente empleado.
En caso de emplear como material de partida cada
uno de los compuestos epoxi (II_{1}), (II_{2}), (II_{3}) y
(II_{4}) pueden obtenerse los compuestos aminoalcohol
(III_{1}), (III_{2}), (III_{3}) y (III_{4}),
respectivamente. En caso de emplear como material de partida una
mezcla de (II_{1}) y (II_{2}), se obtiene una mezcla de
compuestos aminoalcohol (III_{1}) y (III_{2}). Y si se emplea
como material de partida una mezcla de (II_{3}) y (II_{4}), se
obtiene una mezcla de compuestos aminoalcohol (III_{3}) y
(III_{3}).
Fórmula
5
en la que R_{1}, R_{2} y R_{3} tienen en
cada caso los significados definidos
anteriormente.
Fórmula
6
en la que R_{1}, R_{2} y R_{3} tienen en
cada caso los significados definidos
anteriormente.
El método de obtención de los compuestos de la
fórmula 1 consta de la etapa de reacción de un compuesto
aminoalcohol (IiI) con un compuesto tiourea (IV) en presencia de un
agente condensante idóneo y de un disolvente apropiado. Mediante
esta reacción se obtiene el compuesto (I') que es un compuesto de la
fórmula 1, en la que R_{4} = OH.
Son ejemplos de tales agentes condensantes los
del tipo carbodiimida, por ejemplo el clorhidrato de la
1-[3-(dimetilamino)propil]-3-etilcarbodiimida
y la N,N'-diciclohexilcarbodiimida, etc. Se emplean
con mayor preferencia los agentes condensantes del tipo carbodiimida
soluble en agua.
Es preferible usar de uno a tres equivalentes del
agente condensante por cada equivalente del compuesto aminoalcohol
(III). También es preferible usar de uno a dos equivalentes del
compuesto tiourea (IV) por cada equivalente del compuesto
aminoalcohol (III).
Los disolventes preferidos son el cloruro de
metileno, el cloroformo, la dimetilformamida, el sulfóxido de
dimetilo, el tetrahidrofurano, el 1,2-dicloroetano,
el dioxano, etc.
La temperatura de reacción puede situarse entre 5
y 40ºC.
En caso de utilizar como material de partida cada
uno de los estereoisómeros del compuesto aminoalcohol (III), se
obtiene el producto con la misma configuración del material de
partida, respectivamente. Es decir, pueden obtenerse los compuestos
(I_{1}), (I_{2}), (I_{3}) y (I_{4}) de la fórmula 1 a partir
de los compuestos aminoalcohol (III_{1}), (III_{2}),
(III_{3}) y (III_{4}), respectivamente. En caso de utilizar como
material de partida una mezcla de compuestos aminoalcohol
(III_{1}) y (III_{2}), entonces se obtiene una mezcla de
compuestos (I_{1}) y (I_{2}). En caso de utilizar como material
de partida una mezcla de compuestos aminoalcohol (III_{3}) y
(III_{4}), entonces se obtiene una mezcla de compuestos (I_{3})
y (I_{4}). Se puede separar una mezcla de compuestos de la fórmula
1 para obtener los distintos isómeros ópticos separados. Los
isómeros ópticos pueden separarse por la cromatografía usual de
columna o por recristalización.
El compuesto tiourea (IV) empleado en la reacción
anterior puede obtenerse por reacción de un compuesto isocianato
(IX) con cianamida sódica (NaHNCN) en etanol del modo representado
en el siguiente esquema 7.
\vskip1.000000\baselineskip
Esquema
7
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
en el que R_{5}, R_{6} y n tienen en cada
caso el significado definido anteriormente.
Otro método de obtención de los compuestos de la
fórmula 1 consiste en:
1) la reacción de un compuesto aminoalcohol (III)
con cianocarbonimidato de difenilo (X) en presencia de una base para
obtener el compuesto (V) (etapa 1) y
2) la reacción del compuesto (V) con un compuesto
amina adecuado (VI) en un disolvente idóneo para obtener el
compuesto (I') (etapa 2).
Mediante esta reacción se obtiene el compuesto
(I') que es un compuesto de la fórmula 1, en la que R_{4} =
OH.
En la etapa 1 se emplean varias bases inorgánicas
y orgánicas. Los ejemplos de las bases inorgánicas incluyen el
CaCO_{3}, NaOH, KOH, Na_{2}CO_{3}, NaHCO_{3}, etc. Los
ejemplos de bases orgánicas incluyen el metóxido sódico
(CH_{3}ONa), el etóxido sódico (CH_{3}CH_{2}ONa), etc., el
acetato sódico (CH_{3}COONa), las sales metálicas de amonio, las
aminas bicíclicas, por ejemplo el
1,8-diazabiciclo[5.4.0]undec-7-eno
(DBU), el
1,5-diazabiciclo[4.3.0]non-5-eno
(DBN), etc., la trietilamina, la
N,N-diisopropiletilamina, la piridina, la lutidina,
la N,N-dimetilanilina, la
4-(dimetilamino)-piridina, el 1,4-
diazabiciclo[2.2.2]octano (DABCO), etc. Las aminas
terciarias que se emplean con preferencia especial son la
trietilamina, la N,N- diisopropiletilamina, la piridina, el
1,8-diazabiciclo[5.4.0]undec-6-eno,
la 4- (dimetilamino)-piridina, etc.
Es preferible el uso de uno a tres equivalentes
de base por cada equivalente del compuesto aminoalcohol (III). Y es
preferible el uso de uno a dos equivalentes de cianocarbonimidato de
difenilo (X) por cada equivalente del compuesto aminoalcohol
(III).
Los disolventes preferidos son los alcoholes, por
ejemplo etanol, isopropanol, etc., la dimetilformamida (DMF), el
sulfóxido de dimetilo, el cloroformo, etc.
La temperatura de reacción se mantiene con
preferencia entre 5ºC y el punto de ebullición del disolvente
empleado.
En la etapa 2 es preferible el uso de uno a cinco
equivalentes del compuesto amina (VI) por cada equivalente del
compuesto aminoalcohol (III).
Son ejemplos de disolventes para esta reacción
los alcoholes, por ejemplo el etanol, el isopropanol, etc., la
dimetilformamida, el sulfóxido de dimetilo, el cloroformo, el
cloruro de metileno, el tetrahidrofurano (THF), etc.
La temperatura de reacción se mantiene con
preferencia entre 5ºC y el punto de ebullición del disolvente
empleado.
La reacción de la etapa 2 puede llevarse a cabo
además en presencia de una base. Son ejemplos de tales bases los
mencionados anteriormente.
En caso de utilizar como material de partida cada
uno de los isómeros ópticos del compuesto aminoalcohol (III), el
producto (I') tiene la misma configuración del material de partida
empleado. En caso de utilizar como material de partida una mezcla de
compuestos aminoalcohol (III_{1}) y (III_{2}), entonces se
obtiene una mezcla de compuestos (I_{1}) y (I_{2}). En caso de
utilizar como material de partida una mezcla de compuestos
aminoalcohol (III_{3}) y (III_{4}), entonces se obtiene una
mezcla de compuestos (I_{3}) y (I_{4}). Se puede separar una
mezcla de isómeros ópticos para obtener los distintos isómeros
ópticos separados de los compuestos (I'). Los isómeros ópticos
pueden separarse por la cromatografía usual de columna o por
recristalización.
Los sustituyentes R_{1}, R_{2}, R_{3},
R_{4}, R_{5} o R_{6} pueden modificarse para obtener otros
grupos funcionales o bien puede formarse un doble enlace en la
posición 3,4 mediante la reacción del esquema 3. En esta reacción se
emplean como material de partida los compuestos (I'), que se han
obtenido con arreglo a los anteriores esquemas 1 ó 2.
El material de partida, los reactivos y las
condiciones de reacción dependerán de la estructura del producto a
obtener, es decir, de cuáles sean los sustituyentes R_{1},
R_{2}, R_{3}, R_{4}, R_{5} y R_{6} y de si debe haber un
doble enlace en la posición 3,4. Por lo tanto, la presente invención
incluye todos los tipos de reacción, reactivos y condiciones de
reacción que permiten la obtención de compuestos de la fórmula
1.
Seguidamente se describen con detalle diversos
procesos de obtención de compuestos de la fórmula 1 según el esquema
3. Sin embargo, la descripción de los procesos no deberá tomarse
como una limitación de la presente invención.
El grupo acetoxi puede introducirse en R_{4}
por reacción del compuesto (I') con anhídrido acético en un
disolvente idóneo y en presencia de un catalizador adecuado, del
modo representado en el siguiente esquema 8.
\vskip1.000000\baselineskip
Esquema
8
\vskip1.000000\baselineskip
en el que R_{1}, R_{2}, R_{3}, R_{4},
R_{5}, R_{6} y n tienen en cada caso los significados definidos
anteriormente.
Las bases preferidas son las mencionadas
anteriormente. Se emplean con preferencia especial la trietilamina,
la piridina o la N,N-diisopropiletilamina.
El catalizador preferido es la
4-(dimetilamino)piridina.
Es preferido el uso de uno a tres equivalentes de
base por cada equivalente del compuesto (I'). Y el uso de 0,05 a 0,5
equivalentes de catalizador por cada equivalente del compuesto
(I').
Los disolventes preferidos son el cloruro de
metileno, el cloroformo, el tetrahidrofurano, el acetonitrilo, etc.
La temperatura de reacción se sitúa con preferencia de 0 a 40ºC.
R_{4} está sustituido por un átomo de hidrógeno
y se forma un doble enlace en la posición 3,4 por reacción del
compuesto acetato (I_{a}) obtenido con arreglo al anterior esquema
8 con una base adecuada en un disolvente idóneo del modo
representado en el siguiente esquema 9.
Esquema
9
en el que R_{1}, R_{2}, R_{3}, R_{4},
R_{5}, R_{6} y n tienen en cada caso los significados definidos
anteriormente.
Las bases preferidas son las mencionadas antes.
Se emplea con preferencia especial el
1,8-diazabiciclo[5.4.0]undec-7-eno,
el
1,5-diazabiciclo[4.3.0]non-5-eno
o el
1,4-diazabiciclo[2.2.2]octano.
Es preferible el uso de uno a tres equivalentes
de la base por cada equivalente del compuesto de la fórmula
(I_{a}).
Los disolventes preferidos son el tolueno, el
benceno, el xileno, el dioxano, etc. La temperatura de reacción se
elige con preferencia entre 5ºC y el punto de ebullición del
disolvente.
El compuesto (I_{d}) de la fórmula 1, en la que
R_{1} es NH_{2}, puede obtenerse por reducción del compuesto
(I_{c}), en el que R_{1} = NO_{2}, del modo representado en el
siguiente esquema 10.
\vskip1.000000\baselineskip
Esquema
10
\vskip1.000000\baselineskip
en el que R_{2}, R_{3}, R_{5}, R_{6} y n
tienen en cada caso los significados definidos
anteriormente.
El grupo NO_{2} puede reducirse a grupo
NH_{2} por hidrogenación empleando catalizadores metálicos, por
ejemplo platino, paladio, paladio sobre carbón (Pd/C), níquel Raney,
etc. en un disolvente idóneo. Los disolventes preferidos son
alcoholes, por ejemplo metanol, etanol, etc. y acetato de etilo.
La reducción del grupo NO_{2} a grupo NH_{2}
puede llevarse a cabo además empleando un reductor, por ejemplo
NaBH_{4} en presencia de CuSO_{4}, Cu(OAc)_{2},
CoCl, SnCl_{2} o NiCl_{2}. Esta vez, el disolvente preferido es
una mezcla de agua y metanol y como temperatura de reacción es
preferida la temperatura ambiente.
El compuesto de la fórmula 1, en el que R_{1} =
NH(C=O)R^{a}, puede obtenerse por reacción del
compuesto (I_{d}), obtenido con arreglo al anterior esquema 10,
con cloruro de acilo o anhídrido de ácido en presencia de una
base.
Las bases preferidas son las mencionadas
anteriormente. Se emplean con preferencia especial las bases tales
como la trietilamina, la N,N-diisopropiletilamina,
la piridina o la 4- (dimetilamino)piridina. Los disolventes
preferidos son el cloruro de metileno, el cloroformo, el sulfóxido
de dimetilo, la dimetilformamida, el tetrahidrofurano y el
dioxano.
El compuesto de la fórmula 1, en la que R_{1} =
-NHS(O)_{m}R^{a}, puede obtenerse por reacción del
compuesto (I_{d}), obtenido con arreglo al esquema 10, con cloruro
de alquilsulfonilo o cloruro de arilsulfonilo en presencia de una
base.
Las bases preferidas se han mencionado
anteriormente. Se emplean con preferencia especial las bases tales
como la trietilamina, la N,N-diisopropiletilamina,
la piridina y la 4- (dimetilamino)piridina. Los disolventes
preferidos son el cloruro de metileno, el cloroformo, el sulfóxido
de dimetilo, la dimetilformamida, el tetrahidrofurano y el
dioxano.
La presente invención se refiere además a
composiciones farmacéuticas que como principio activo contienen los
derivados de benzopiranil-guanidina de la
reivindicación 1 o sus sales farmacéuticamente aceptables. La
presente invención proporciona en especial composiciones
farmacéuticas para proteger el corazón, proteger las células
neuronales o proteger de la lesión cerebral o proteger y preservar
órganos, inhibir la formación de NO y la peroxidación de lípidos o
suprimir la angiogénesis y la restenosis.
En los ensayos realizados con aorta aislada de
ratas, los compuestos de la presente invención muestran una
actividad vasorrelajante notablemente inferior a la de los agentes
que abren los canales K_{ATP}, por ejemplo la cromacalima o el
BMS-180448. Los agentes que abren los canales
K_{ATP} tienen propiedades cardioprotectoras porque ejercen sus
efectos en el corazón, mientras que aquellos tienen propiedades
vasorrelajantes por acción sobre los canales K_{ATP} situados en
el músculo liso. El efecto vasodilatador es innecesario,
probablemente contraindicado en caso de isquemia, debido al riesgo
que corre ya el tejido que se halla en perfusión. En otras palabras,
el efecto vasorrelajante de estos compuestos limitaría su utilidad
para tratar la isquemia de miocardio. Tal como se ha dicho antes,
los compuestos de la presente invención están prácticamente
desprovistos de actividad vasorrelajante, por lo cual su
selectividad cardíaca podría ofrecer un margen de seguridad más
amplio en calidad de cardioprotectores.
Por consiguiente se confirma la actividad
antiisquémica de los compuestos de la presente invención con una
mejora significativa de la selectividad cardíaca. En los modelos de
lesión isquémica de miocardio en ratas anestesiadas, los compuestos
de la presente invención despliegan una actividad antiisquémica
igual o superior a la del BMS-180448. Además, a
diferencia del BMS-180448, los compuestos de la
presente invención tienen una actividad vasorrelajante notablemente
baja y por ello son muy superiores a los fármacos convencionales en
calidad de cardioprotectores selectivos del corazón. Por otro lado,
en los modelos de lesión isquémica de miocardio en perros beagle
anestesiados, los compuestos de la invención reducen
considerablemente el tamaño de la zona de infarto en forma de
porcentaje del área en riesgo (% IZ/AAR), que es superior al
compuesto de referencia BMS-180448.
Tal como se ha descrito anteriormente, los
compuestos de la presente invención casi no despliegan actividad
vasodilatadora, pero ejercen una excelente actividad antiisquémica
en varios animales, de modo que pueden utilizarse para prevenir o
tratar las enfermedades relacionadas con la isquemia de miocardio,
por ejemplo la disfunción contráctil postisquémica, y para proteger
el corazón en caso de infarto de miocardio, angina de pecho y fallo
cardíaco congestivo.
Además, los compuestos de la presente invención
son capaces de proteger las neuronas. En concreto, los compuestos de
la presente invención protegen las neuronas de la lesión oxidante
provocada por el hierro en función de la dosis. Los compuestos de la
invención protegen además las células de la retina de la muerte en
caso de deterioro isquémico en función de la dosis y tienen efectos
neuroprotectores mejorando la MNCV (motor nerve conduction velocity)
desequilibrada y la respuesta nociceptiva empleando placas calientes
en ratas diabéticas. Y los compuestos de la presente invención
protegen las ratas recién nacidas de la lesión cerebral hipóxica,
disminuyendo el valor lípido/NAA
(N-acetil-aspartato) y lípido/Cr
(creatina) en los análisis por MRS (espectroscopía de resonancia
magnética) protónica. Los compuestos de la presente invención pueden
utilizarse además como neuroprotectores y pueden aplicarse incluso
en el tratamiento de trastornos neurodegenerativos provocados por la
apóptosis o necrosis de neuronas, por ejemplo en caso de apoplejía,
demencia cerebral, asfixia infantil, glaucoma, neuropatía diabética
y trauma
craneal.
craneal.
Los compuestos de la presente invención inhiben
además la peroxidación de lípidos inducida por hierro o cobre y la
oxidación de LDL (lipoproteínas de baja densidad) en las células
A7r5 (células de músculo liso de aorta de rata), cuyo efecto
antioxidante se hace más patente cuando se añade H_{2}O_{2}. Los
compuestos de la presente invención inhiben además la especie ROS
(reactive oxygen species) inducida por H_{2}O_{2} tanto en
células A7r5 como HUVEC (human umbilical vein endothelial cells) y
eliminan los radicales oxígeno en el ensayo ORAC (oxygen radical
absorbance capacity) empleando como generador de radicales el AAPH
(diclorhidrato de
2,2'-azobis(2-aminopropano)).
Por consiguiente, los compuestos de la presente invención pueden
utilizarse como antioxidantes contra la peroxidación de lípidos y
pueden aplicarse con eficacia para el tratamiento médico de
trastornos neurológicos provocados por la acumulación de especies de
radicales libres dentro de las neuronas, por ejemplo las
enfermedades neurodegenerativas (apoplejía y demencia), la
aterosclerosis y la inflamación.
Por otro lado, los compuestos de la presente
invención inhiben la formación de NO (óxido nítrico) inducida por
endotoxinas, por ejemplo la lipopolisacarina (LPS), en función de
la dosis. Por ello, los compuestos de la presente invención pueden
utilizarse como inhibidores de la producción de NO y pueden
aplicarse con eficacia en el tratamiento de enfermedades
inflamatorias, por ejemplo la artritis, el infarto de miocardio, la
arterioesclerosis y la demencia, provocadas por la lesión de tejidos
u órganos como resultado de la muerte celular apoptoica o necrótica
debida a la acumulación de NO dentro de las células.
Además, los compuestos de la presente invención
protegen con eficacia el cerebro contra la lesión por reperfusión
isquémica. Los compuestos de la presente invención tienen ventaja
sobre el compuesto de referencia MK801. Las ratas tratadas con MK801
presentan como efecto secundario una disminución de la motilidad,
mientras que las ratas tratadas con los compuestos de la presente
invención no acusan efectos secundarios significativos del tipo de
cambios de conducta. Por consiguiente, los compuestos de la presente
invención pueden utilizarse como agentes neuroprotectores contra el
deterioro cerebral por reperfusión isquémica y pueden aplicarse con
eficacia en el tratamiento de varias enfermedades causadas por la
lesión isquémica cerebral, por ejemplo la oclusión vascular
isquémica cerebral inducida por trombos.
En el ensayo de formación de nuevos vasos
sanguíneos inducida por la angiotensina II, los compuestos de la
presente invención inhiben con eficacia la angiogénesis. Los
compuestos de la presente invención son capaces en especial de
prevenir casi por completo la formación de nuevos vasos sanguíneos
de un modo dependiente de la dosis. Por lo tanto, los compuestos de
la presente invención pueden utilizarse como inhibidores de
angiogénesis y pueden emplearse de forma útil en el tratamiento
médico de varias enfermedades inducidas por la angiogénesis, por
ejemplo la artritis reumatoide, la psoriasis, las complicaciones del
SIDA y el cáncer.
Los compuestos de la presente invención suprimen
además de modo significativo la proliferación de células vasculares
de músculo liso por inhibición de la síntesis de DNA en los ensayos
de incorporación de timidina-[H^{3}]. Por ello, los compuestos de
la presente invención pueden utilizarse para prevenir y tratar la
restenosis, que aparece con frecuencia después de una intervención
coronaria percutánea.
Los compuestos de la presente invención pueden
utilizarse además para proteger órganos y tejidos que conviene
preservar, por ejemplo el corazón, el riñón, el hígado y para
proteger órganos en caso de cirugía cardiovascular mayor.
La presente invención incluye las formulaciones
farmacéuticas que, además de aditivos no tóxicos, inertes,
farmacéuticamente idóneos, contienen uno o varios principios
activos según la presente invención y los procesos de fabricación de
estas formulaciones.
La presente invención incluye además
formulaciones farmacéuticas en unidades de dosificación. La unidad
de dosificación de cada formulación, por ejemplo tabletas, tabletas
lacadas, cápsulas, píldoras, supositorios y viales, contienen por lo
menos un principio activo correspondiente a una fracción o un
múltiplo de la dosis individual. Por ejemplo, las unidades de
dosificación pueden contener 1, 2, 3 ó 4 veces o 1/2, 1/3 ó 1/4 de
los principios activos de una dosis individual. Una unidad de
dosificación contiene con preferencia una cantidad de principio
activo que se administra en una aplicación o roma o que corresponde
normalmente a la totalidad, a la mitad, a un tercio o a un cuarto de
la dosis diaria.
El vehículo o excipiente no tóxico, inerte,
farmacéuticamente idóneo, incluye diluyentes sólidos, semisólidos o
líquidos, cargas de relleno y aditivos de formulación de todo
tipo.
Las formulaciones farmacéuticas preferidas son
las tabletas, tabletas lacadas, cápsulas, píldoras, granulados,
supositorios, soluciones, suspensiones y emulsiones, pastas,
ungüentos, geles, cremas, lociones, pulverizadores y
nebulizadores.
Las tabletas, tabletas lacadas, cápsulas,
píldoras y granulados pueden contener más de un aditivo, aparte del
principio o principios activos, por ejemplo (a) cargas de relleno y
diluyentes, por ejemplo almidones, lactosa, sucrosa, glucosa, manita
y ácido silícico, (b) aglutinantes, por ejemplo
carboximetilcelulosa, alginatos, gelatina y polivinilpirrolidona,
(c) humectantes, por ejemplo glicerina, (d) desintegrantes, por
ejemplo goma agar, carbonato cálcico y carbonato sódico, (e) agentes
retardantes de solución, por ejemplo parafina, (f) acelerantes de
absorción, por ejemplo compuestos de amonio cuaternario, (g) agentes
humectantes, por ejemplo alcohol cetílico y monoestearato de
glicerina, (h) absorbentes, por ejemplo caolín y bentonita e (i)
lubricantes, por ejemplo talco, estearato cálcico, estearato
magnésico y polietilenglicoles sólidos o mezclas de las sustancias
incluidas en los apartados de (a) a (i).
Las tabletas, tabletas lacadas, cápsulas,
píldoras y granulados pueden suministrarse con el revestimiento y
cubierta habituales, que contienen eventualmente agentes que prestan
opacidad, y pueden ser también de una composición tal que liberen el
principio o principios activos solamente o con preferencia en una
parte determinada del tracto intestinal, si es conveniente de modo
retardado, son ejemplos de composiciones de recubrimiento que pueden
utilizarse las sustancias poliméricas y las ceras.
Si fuera conveniente, el principio o los
principios activos pueden estar presentes también en forma
microencapsulada en uno o varios de los excipientes mencionados
anteriormente.
Además del principio o principios activos, los
supositorios pueden contener los excipientes habituales, solubles o
insolubles en agua, por ejemplo polietilenglicoles, grasas, por
ejemplo grasa de cacao, y ésteres superiores (por ejemplo de un
alcohol C_{14} con un ácido graso C_{16}) o mezclas de estas
sustancias.
Además del principio o principios activos, los
ungüentos, pastas, cremas y geles pueden contener los excipientes
habituales, por ejemplo grasas animales o vegetales, ceras,
parafinas, almidón, tragacanto, derivados de celulosa,
polietilenglicoles, siliconas, bentonitas, ácido silícico, talco y
óxido de cinc o mezclas de estas sustancias.
Además del principio o principios activos, los
pulverizadores y nebulizadores pueden contener los excipientes
habituales, por ejemplo lactosa, talco, ácido silícico, hidróxido de
aluminio, silicato cálcico y poliamida en polvo o mezclas de estas
sustancias. Los nebulizadores pueden contener además los
propelentes habituales, por ejemplo hidrocarburos
clorofluorados.
Además del principio o principios activos, las
soluciones y emulsiones pueden contener los excipientes habituales,
por ejemplo disolventes, solubilizantes y emulsionantes, por ejemplo
agua, alcohol etílico, alcohol isopropílico, carbonato de etilo,
acetato de etilo, alcohol bencílico, benzoato de bencilo,
propilenglicol, 1,3-butilenglicol, dimetilformamida,
aceites, en especial aceite de algodón, aceite de avellana, aceite
de germen de maíz, aceite de oliva, aceite de ricino y aceite de
sésamo, glicerina, glicerina-formaldehído, alcohol
tetrahidrofurfurílico, polietilenglicoles y ésteres de ácidos grasos
con sorbita, o mezclas de estas sustancias.
Para la administración parenteral, las soluciones
pueden presentarse también en forma estéril que sea isotónica con la
sangre.
Además del principio o principios activos, las
suspensiones pueden contener los excipientes habituales, por
ejemplo diluyentes líquidos, por ejemplo agua, alcohol etílico y
propilenglicol, y agentes de suspensión, por ejemplo alcoholes
isoestearílicos etoxilados, poli(óxido de
etileno)-sorbita y ésteres sorbitano, celulosa
microcristalina, metahidróxido de aluminio, goma agar y tragacanto o
mezclas de estas sustancias.
Las formas de formulación mencionadas pueden
contener además agentes colorantes, conservantes y aditivos que
mejoren el olor y el sabor, por ejemplo esencia de menta y esencia
de eucalipto y edulcorantes, por ejemplo sacarina.
Los principios terapéuticamente activos deberían
estar presentes en las formulaciones farmacéuticas recién
mencionadas con preferencia en una concentración comprendida entre
el 0,1 y el 99,5, en especial entre el 0,5 y el 95% en peso de la
mezcla total.
Las formulaciones farmacéuticas recién
mencionadas pueden contener otros principios activos farmacéuticos,
además de los compuestos de la presente invención.
Las formulaciones farmacéuticas mencionadas antes
pueden fabricarse por métodos ya conocidos, por ejemplo por mezclado
del principio o principios activos con los excipientes.
Las formulaciones mencionadas pueden utilizarse
en personas humanas o en animales ya sea por vía oral, rectal,
parenteral (intravenosa, intramuscular y subcutánea), ya sea
intracisternal, intravaginal, intraperitoneal o local (nebulización,
pulverización, ungüento, gotas) para la terapia de infecciones de
espacios huecos y cavidades corporales. Las formulaciones idóneas
posibles son las soluciones inyectables, las soluciones y las
suspensiones para la terapia oral y los geles, las formulaciones de
infusión, las emulsiones, los ungüentos y las gotas, las
formulaciones oftalmológicas y dermatológicas, las sales de plata y
otras sales, las gotas óticas, los ungüentos oculares (colirios),
los polvos o soluciones pulverizables para el uso en terapia local.
En caso de animales, la ingestión puede realizarse también mediante
formulaciones idóneas para integrar en el pienso o en agua de
beber.
Los geles, los polvos, los polvos pulverizables,
las tabletas, las tabletas de liberación retardada, las premezclas,
los concentrados, los granulados, los comprimidos, los bolos, las
cápsulas, los aerosoles, los materiales nebulizados y los destinados
a inhalación pueden utilizarse también en personas humanas y en
animales. Los compuestos de la presente invención pueden
incorporarse además a otros materiales excipientes, por ejemplo
plásticos (cadena de plástico para la terapia local), colágeno o
cemento óseo.
En general se ha constatado que es ventajoso para
la medicina humana la administración del principio o principios
activos según la presente invención en una cantidad total de 0,1 a
100, con preferencia de 0,1 a 20 mg/kg de peso corporal cada 24
horas, si fuera conveniente en forma de varias dosis individuales,
para lograr los resultados apetecidos. Sin embargo, puede ser
necesario apartarse de las dosis mencionadas y hacerlo en concreto
en función de la naturaleza y del peso corporal del paciente a
tratar, la naturaleza y la gravedad de la enfermedad, la naturaleza
de la formulación y de la forma de administración del medicamento y
del período o intervalo dentro del cual se efectúa la
administración.
Por lo tanto, en algunos puede ser suficiente con
administrar una cantidad de principio activo inferior a la
mencionada antes, mientras que en otros casos deberá administrarse
una cantidad de principio activo mayor que la mencionada. La dosis
óptima de un caso particular y el modo de administración del
principio activo deberá decidirlos el facultativo sobre la base de
la experiencia en el ejercicio de su profesión.
La estructura molecular de los compuestos de la
presente invención se identifica por espectroscopía IR,
espectroscopía UV, espectroscopía RMN, espectroscopía de masas,
cromatografía de líquidos, difracción de rayos X, análisis de
rotación óptica y análisis elemental.
Los materiales de partida (III) de los esquemas 1
y 2 se obtienen por el método descrito en los siguientes ejemplos de
obtención.
Ejemplo de obtención
1
Etapa
1
A una solución de 75 g (0,28 moles) de
(2R)-6-nitro-2-metil-2-dimetoximetil-2H-1-benzopirano
en 1 l de acetona se le añade 1 l de agua. A esta mezcla se le
añaden 84 g (0,99 moles) de hidrogenocarbonato sódico y se agita la
mezcla durante 10 min. A esta mezcla se le añaden 174 g (0,28 moles)
de oxona y se agita la mezcla vigorosamente. A esta mezcla se le
añaden hidrogenocarbonato sódico y oxona tres veces más, cada 15
min. Se filtra la mezcla reaccionante, se elimina la acetona a
presión reducida y se extrae el residuo con acetato de etilo (500 ml
x 2). Se seca la fase orgánica con sulfato magnésico anhidro, se
filtra, se concentra y se purifica por cromatografía de columna a
través de gel de sílice (n-hexano: acetato de etilo
= 4:1), obteniéndose 76 g (rendimiento: 95%) del compuesto deseado
en forma de sólido blanco.
Etapa
2
Se disuelven 8,8 g del compuesto epoxi, obtenido
en la etapa 1, en 250 ml de etanol saturado de amoníaco y se agita
la mezcla reaccionante a temperatura ambiente durante 7 días. Se
elimina el disolvente y se purifica el residuo por cromatografía de
columna a través de gel de sílice (n-hexano: acetato
de etilo = 1:4), recuperándose 2,58 g del material de partida y
obteniéndose 5,6 g (rendimiento: 60%) del compuesto deseado en forma
de mezcla racémica.
Ejemplo de obtención
2
Etapa
1
A una solución de 5 g (19 mmoles) de
(2R)-6-nitro-2-metil-2-dimetoximetil-2H-1-benzopirano
en 100 ml de acetona se le añaden 100 ml de agua. A esta mezcla se
le añaden 5,6 g (66 mmoles) de hidrogenocarbonato sódico y se agita
la mezcla durante 10 min. A esta mezcla se le añaden 11,6 g (19
mmoles) de oxona y se agita la mezcla vigorosamente. A esta mezcla
se le añaden hidrogenocarbonato sódico y oxona tres veces más, cada
15 min. Se filtra la mezcla reaccionante, se elimina la acetona a
presión reducida y se extrae el residuo con acetato de etilo (100 ml
x 2). Se seca la fase orgánica con sulfato magnésico anhidro, se
filtra, se concentra y se purifica por cromatografía de columna a
través de gel de sílice (n-hexano: acetato de etilo
= 4:1), obteniéndose 5,1 g (rendimiento: 97%) del compuesto deseado
en forma de sólido blanco, como mezcla racémica.
\newpage
Etapa
2
Se disuelven 5,1 g del compuesto epoxi, obtenido
en la etapa 1, en 100 ml de etanol saturado de amoníaco y se agita
la mezcla reaccionante a temperatura ambiente durante 7 días. Se
elimina el disolvente y se purifica el residuo por cromatografía de
columna a través de gel de sílice (n-hexano:
acetato de etilo = 1:4), obteniéndose 4,4 g (rendimiento: 80%) del
compuesto deseado en forma de mezcla racémica.
Ejemplo de obtención
3
Etapa
1
A una solución de 400 mg (1,82 mmoles) de
(2R)-2-metil-2-dimetoximetil-2H-1-benzopirano
en 1 ml de DMSO se le añaden 82 \mul de agua destilada. Se enfría
la mezcla reaccionante a 0ºC y se le añaden lentamente 647 mg de
N-bromosuccinimida. Pasados 30 min se añade 1 ml de
agua y se extrae la mezcla con acetato de etilo. Se seca la capa
orgánica con sulfato magnésico anhidro, se filtra y se concentra a
presión reducida. Se disuelve el residuo en 1 ml de
dioxano-agua (3:1) y a esta mezcla se le añaden 146
mg de NaOH. Se agita la mezcla reaccionante a temperatura ambiente
durante 24 min y se extrae con acetato de etilo. Se seca la capa
orgánica con sulfato magnésico anhidro, se filtra y se concentra a
presión reducida. Se purifica el residuo por cromatografía de
columna a través de gel de sílice (n-hexano: acetato
de etilo = 10:1), obteniéndose 358 mg (rendimiento: 83%) del
compuesto deseado en forma de mezcla racémica.
Etapa
2
Se disuelven 560 mg (2,37 mmoles) del compuesto
epoxi, obtenido en la etapa 1, en 20 ml de etanol saturado de
amoníaco y se agita la mezcla reaccionante a temperatura ambiente
durante 7 días. Se elimina el disolvente y se purifica el residuo
por cromatografía de columna a través de gel de sílice
(n-hexano: acetato de etilo = 1:2), obteniéndose 340
mg (rendimiento: 57%) del compuesto deseado en forma de mezcla
racémica.
Ejemplo de obtención
4
Etapa
1
Se lleva a cabo la reacción con 708 mg (3,20
moles) de
(2R)-6-nitro-2-metil-2-hidroximetil-2H-1-benzopirano
como material de partida en lugar de
(2R)-6-nitro-2-metil-2-dimetoximetil-2H-1-benzopirano
por el mismo método descrito en la etapa 1 del ejemplo de obtención
1. Se purifica el residuo por cromatografía de columna a través de
gel de sílice (n-hexano: acetato de etilo 2:1),
obteniéndose 625 mg (rendimiento: 82%) del compuesto deseado en
forma de mezcla racémica.
Etapa
2
Se disuelven 625 mg (2,63 mmoles) del compuesto
epoxi obtenido en la etapa 1 en 10 ml de etanol saturado de amoníaco
y se agita la mezcla reaccionante a temperatura ambiente durante 7
días. Se elimina el disolvente y se purifica el residuo por
cromatografía de columna a través de gel de sílice
(n-hexano: acetato de etilo = 1:5), obteniéndose 328
mg (rendimiento: 49%) del compuesto deseado en forma de mezcla
racémica.
\newpage
Ejemplo de obtención
5
Etapa
1
Se lleva a cabo la reacción con 580 mg (2,47
moles) de
(2R)-6-nitro-2-metil-2-metoximetil-2H-1-benzopirano
como material de partida en lugar de
(2R)-6-nitro-2-metil-2-dimetoximetil-2H-1-benzopirano
por el mismo método descrito en la etapa 1 del ejemplo de obtención
1. Se purifica el residuo por cromatografía de columna a través de
gel de sílice (n-hexano: acetato de etilo 2:1),
obteniéndose 607 mg (rendimiento: 98%) del compuesto deseado en
forma de mezcla racémica.
Etapa
2
Se disuelven 607 mg (2,42 mmoles) del compuesto
epoxi obtenido en la etapa 1 en 10 ml de etanol saturado de amoníaco
y se agita la mezcla reaccionante a temperatura ambiente durante 7
días. Se elimina el disolvente y se purifica el residuo por
cromatografía de columna a través de gel de sílice
(n-hexano: acetato de etilo = 1:4), obteniéndose 345
mg (rendimiento: 53%) del compuesto deseado en forma de mezcla
racémica.
Ejemplo de obtención
6
La reacción se lleva a cabo con 1,2 g (4,90
mmoles) de
(2S)-6-ciano-2-metil-2-dimetoximetil-2H-1-benzopirano
como material de partida en lugar del
(2R)-6-nitro-2-metil-2-dimetoximetil-2H-1-benzopirano
por el método descrito en las etapas 1 y 2 del ejemplo de obtención
1. Se purifica el residuo por cromatografía de columna a través de
gel de sílice (n-hexano: acetato de etilo = 4:1),
obteniéndose 0,65 g (rendimiento: 48%) del compuesto deseado de
estereoquímica (2S, 3S, 4R).
Ejemplo de obtención
7
La reacción se lleva a cabo con arreglo al mismo
método que en el ejemplo de obtención 6. Se purifica el residuo por
cromatografía de columna a través de gel de sílice
(n-hexano: acetato de etilo = 4:1), obteniéndose
0,30 g (rendimiento: 22%) del compuesto deseado de estereoquímica
(2S, 3R, 4S).
Ejemplo de obtención
8
La reacción se lleva a cabo con 1,6 g (5,35
mmoles) de
(2S)-6-bromo-2-metil-2-dimetoximetil-2H-1-benzopirano
como material de partida en lugar del
(2R)-6-nitro-2-metil-2-dimetoximetil-2H-1-benzopirano
por el método descrito en las etapas 1 y 2 del ejemplo de obtención
1. Se purifica el residuo por cromatografía de columna a través de
gel de sílice (n-hexano: acetato de etilo = 1:4),
obteniéndose 1,28 g (rendimiento: 72%) del compuesto deseado de
estereoquímica (2S, 3S, 4R).
Ejemplo de obtención
9
La reacción se lleva a cabo con 2,52 g (8,45
mmoles) de
(2S)-6-metanosulfoniloxi-2-metil-2-dimetoximetil-2H-1-benzopirano
como material de partida en lugar del
(2R)-6-nitro-2-metil-2-dimetoximetil-2H-1-benzopirano
por el método descrito en las etapas 1 y 2 del ejemplo de obtención
1. Se purifica el residuo por cromatografía de columna a través de
gel de sílice (n-hexano: acetato de etilo = 1:5),
obteniéndose 1,74 g (rendimiento: 62%) del compuesto deseado de
estereoquímica (2S, 3S, 4R).
\newpage
Ejemplo de obtención
10
La reacción se lleva a cabo con 0,79 g (2,65
mmoles) de
(2R)-6-metanosulfoniloxi-2-metil-2-dimetoximetil-2H-1-benzopirano
como material de partida en lugar del
(2R)-6-nitro-2-metil-2-dimetoximetil-2H-1-benzopirano
por el método descrito en las etapas 1 y 2 del ejemplo de obtención
1. Se purifica el residuo por cromatografía de columna a través de
gel de sílice (n-hexano: acetato de etilo = 1:5),
obteniéndose 0,60 g (rendimiento: 68%) del compuesto deseado de
estereoquímica (2R, 3S, 4R).
Ejemplo de obtención
11
Etapa
1
Se disuelven 1 g (3,77 mmoles) de
(2S)-2-metil-2-dimetoximetil-6-nitro-2H-1-benzopirano,
0,63 ml (11,31 mmoles) de etilenglicol y 71,7 mg (0,377 moles) de
ácido p-toluenosulfónico en 20 ml de tolueno y se
mantiene la mezcla reaccionante en ebullición a reflujo durante 5
horas. Se lava la mezcla reaccionante con una solución acuosa
saturada de NaHCO_{3} y se extrae con agua y acetato de etilo. Se
seca la capa orgánica con sulfato magnésico anhidro, se filtra y se
concentra a presión reducida. Se purifica el residuo por
cromatografía de columna a través de gel de sílice
(n-hexano: acetato de etilo = 6:1), obteniéndose
0,93 g (rendimiento: 93%) del compuesto deseado.
RMN-H^{1} (CDCl_{3}, 200 MHz)
\delta = 1,48 (s, 3H), 3,91-3,97 (m, 4H), 4,95 (s,
1H), 5,73 (d, 1H), 6,49 (d, 1H), 6,83 (d, 1H), 7,86 (d, 1H), 8,01
(dd, 1H).
Etapa
2
En un matraz de una boca y 100 ml de capacidad se
vierten 25,6 ml (14,08 mmoles) de una solución acuosa 0,55 M de
NaOCl y 9,6 ml de una solución 0,05 M de Na_{2}HPO_{4} y se
enfría la mezcla a 0ºC. A la mezcla se le añaden 0,93 g (3,52
mmoles) del compuesto obtenido en la etapa 1 y 96,22 mg (0,176
mmoles) del catalizador de Jacobsen (S, S) en 7 ml de cloruro de
metileno. Se agita la mezcla reaccionante a temperatura ambiente
durante 8 horas y se filtra a través de un lecho de Celite para
separar el catalizador de Jacobsen. Se lava la capa de cloruro de
metileno con salmuera, se seca con Na_{2}SO_{4}, se filtra y se
concentra a presión reducida. Se purifica el residuo por
cromatografía de columna a través de gel de sílice
(n-hexano: acetato de etilo = 4:1), obteniéndose
470 mg (rendimiento: 48%) del compuesto deseado.
RMN-H^{1} (CDCl_{3}, 200 MHz)
\delta = 1,57 (s, 3H), 3,73 (d, 1H), 3,80-3,90 (m,
4H), 4,02 (d, 1H), 4,96 (s, 1H), 6,88 (d, 1H), 8,13 (dd, 1H), 8,29
(d, 1H).
Etapa
3
A una solución de 470 mg (1,68 mmoles) del
compuesto obtenido en la etapa 2 y disuelto en 15 ml de etanol se le
añaden 2,36 ml (16,3 mmoles) de una solución de NH_{4}OH al 25% y
se agita la mezcla reaccionante a 25ºC durante 5 días. Se elimina el
etanol a presión reducida. Se extrae el residuo con acetato de
etilo, se lava con salmuera, se seca con Na_{2}SO_{4}, se filtra
y se concentra a presión reducida. Se purifica el residuo por
cromatografía de columna a través de gel de sílice
(n-hexano: acetato de etilo = 1:3), obteniéndose 400
mg (rendimiento: 80%) del compuesto deseado.
Ejemplo de obtención
12
Etapa
1
Se lleva a cabo la reacción de 1 g (3,77 mmoles)
de
(2S)-2-metil-2-dimetoximetil-6-nitro-2H-1-benzopirano
con 2,73 ml de 1,3-propanodiol por el mismo método
descrito en la etapa 1 del ejemplo de obtención 11. Se purifica el
residuo por cromatografía de columna a través de gel de sílice
(n-hexano: acetato de etilo = 6:1), obteniéndose 1
g (rendimiento: 96%) del compuesto deseado.
Etapa
2
Se lleva a cabo la reacción por el mismo método
descrito en la etapa 2 del ejemplo de obtención 11, excepto que se
emplea como material de partida el compuesto obtenido en la anterior
etapa 1. Se purifica el residuo por cromatografía de columna a
través de gel de sílice (n-hexano: acetato de etilo
= 4:1), obteniéndose 0,57 g (rendimiento: 54%) del compuesto
deseado.
Etapa
3
Se lleva a cabo la reacción por el mismo método
descrito en la etapa 3 del ejemplo de obtención 11, excepto que como
material de partida se emplea el compuesto obtenido en la anterior
etapa 2. Se purifica el residuo por cromatografía de columna a
través de gel de sílice (n-hexano: acetato de etilo
= 1:3), obteniéndose 0,46 g (rendimiento: 76%) del compuesto
deseado.
Ejemplo de obtención
13
Etapa
1
Se lleva a cabo la reacción por el mismo método
descrito en la etapa 1 del ejemplo de obtención 11 excepto que como
material de partida se emplea 1 g (3,77 mmoles) de
(2S)-2-metil-2-dimetoximetil-6-nitro-2H-1-benzopirano
y 2,80 ml de
2,2-dimetil-1,3-propanodiol.
Se purifica el residuo por cromatografía de columna a través de gel
de sílice (n-hexano: acetato de etilo = 6:1),
obteniéndose 1,01 g (rendimiento: 88%) del compuesto deseado.
Etapa
2
La reacción se lleva a cabo por el mismo método
descrito en la etapa 2 del ejemplo de obtención 11, excepto en que
se emplea como material de partida el compuesto obtenido en la
anterior etapa 1. Se purifica el residuo por cromatografía de
columna a través de gel de sílice (n-hexano: acetato
de etilo = 4:1), obteniéndose 0,62 g (rendimiento: 58%) del
compuesto deseado).
Etapa
3
La reacción se lleva a cabo por el mismo método
descrito en la etapa 3 del ejemplo de obtención 11, excepto que como
material de partida se emplea el compuesto obtenido en la anterior
etapa 2. Se purifica el residuo por cromatografía de columna a
través de gel de sílice (n-hexano: acetato de etilo
= 1:3), obteniéndose 0,53 g (rendimiento: 82%) del compuesto
deseado.
Ejemplo de obtención
14
Etapa
1
Se lleva a cabo la reacción por el mismo método
descrito en la etapa 1 del ejemplo de obtención 11, excepto que como
material de partida se emplea 1 g (3,77 mmoles) de
(2S)-2-metil-2-dimetoximetil-6-nitro-2H-1-benzopirano
y 3,0 ml de etanol. Se purifica el residuo por cromatografía de
columna a través de gel de sílice (n-hexano: acetato
de etilo = 6:1), obteniéndose 1,01 g (rendimiento: 91%) del
compuesto deseado.
\newpage
Etapa
2
Se lleva a cabo la reacción por el mismo método
descrito en la etapa 2 del ejemplo de obtención 11, excepto que como
material de partida se emplea el compuesto obtenido en la anterior
etapa 1. Se purifica el residuo por cromatografía de columna a
través de gel de sílice (n-hexano: acetato de etilo
= 4:1), obteniéndose 0,71 g (rendimiento: 67%) del compuesto
deseado.
Etapa
3
Se lleva a cabo la reacción por el mismo método
descrito en la etapa 3 del ejemplo 11, excepto que como material de
partida se emplea el compuesto obtenido en la anterior etapa 2. Se
purifica el residuo por cromatografía de columna a través de gel de
sílice (n-hexano: acetato de etilo = 1:3),
obteniéndose 0,65 g (rendimiento: 86%) del compuesto deseado.
Ejemplo de obtención
15
Se lleva a cabo la reacción por el mismo método
descrito en las etapas 1 y 2 del ejemplo de obtención 1, excepto que
como material de partida se utilizan 1,41 g (5,32 mmoles) de
(2S)-2-metil-2-dimetoximetil-6-metoxicarbonil-2H-1-benzopirano.
Se purifica el residuo por cromatografía de columna a través de gel
de sílice (n-hexano: acetato de etilo = 1:4),
obteniéndose 0,86 g (rendimiento: 52%) del compuesto deseado.
Ejemplo de obtención
16
Se lleva a cabo la reacción por el mismo método
descrito en las etapas 1 y 2 del ejemplo de obtención 1, excepto que
como material de partida se utilizan 1,27 g (4,79 mmoles) de
(2R)-2-metil-2-dimetoximetil-6-metoxicarbonil-2H-1-benzopirano.
Se purifica el residuo por cromatografía de columna a través de gel
de sílice (n-hexano: acetato de etilo = 1:4),
obteniéndose 0,85 g (rendimiento: 57%) del compuesto deseado.
Ejemplo de obtención
17
Se lleva a cabo la reacción por el mismo método
descrito en las etapas 1 y 2 del ejemplo de obtención 1, excepto que
como material de partida se utilizan 1,82 g (6,86 mmoles) de
(2S)-2-metil-2-dimetoximetil-8-nitro-2H-1-benzopirano.
Se purifica el residuo por cromatografía de columna a través de gel
de sílice (n-hexano: acetato de etilo = 1:4),
obteniéndose 1,31 g (rendimiento: 64%) del compuesto deseado.
Los compuestos de la fórmula 1 pueden obtenerse
con arreglo a los ejemplos siguientes.
A una solución de 508 mg de
N-ciano-N'-(4-clorofenil)tiourea
sódica y 500 mg (1,68 mmoles) del compuesto aminoalcohol obtenido
en el ejemplo de obtención 1 disueltos en 5 ml de DMF se les añaden
418 mg del clorhidrato de la 1-[3-(dimetilamino)propil]-
2-etilcarbodiimida. Se agita la mezcla reaccionante
durante 5 horas a temperatura ambiente, se acidifica la mezcla por
adición de 10 ml de HCl 1N y se extrae con acetato de etilo (30 ml x
2). Se lava la capa orgánica con agua y con salmuera, se seca con
sulfato magnésico anhidro y se concentra a presión reducida. Se
purifica el residuo por cromatografía de columna a través de gel de
sílice (n-hexano: acetato de etilo = 1:1),
obteniéndose 260 mg (rendimiento: 33%) del compuesto deseado de
estereoquímica (2R, 3R, 4S).
RMN-H^{1}
(DMSO-d_{6}, 300 MHz) \delta = 1,35 (s, 3H),
3,36 (d, 6H), 3,85 (t, 1H), 4,59 (s, 1H), 5,10 (t, 1H), 5,97 (s,
1H), 6,93 (d,
La reacción se lleva a cabo por el mismo método
descrito en el ejemplo 1. Se purifica el residuo por cromatografía
de columna a través de gel de sílice (n-hexano:
acetato de etilo = 1:4), obteniéndose 200 mg (rendimiento: 25%) del
compuesto deseado de estereoquímica (2R, 3S, 4R).
RMN-H^{1}
(DMSO-d_{6}, 300 MHz) \delta = 1,23 (s, 3H),
3,42 (d, 6H), 4,07 (t, 1H), 4,48 (s, 1H), 4,99 (t, 1H), 5,80 (s,
1H), 6,96 (d, 1H), 7,36 (dd, 4H), 7,76 (s, 1H), 8,03 (s, 2H), 9,48
(s, 1H).
A una solución de 508 mg de
N-ciano-N'-(4-clorofenil)tiourea
sódica y 500 mg del compuesto aminoalcohol obtenido en el ejemplo
de obtención 1 disueltos en 5 ml de DMF se les añaden 418 mg del
clorhidrato de la
1-[3-(dimetilamino)propil]-2-
etilcarbodiimida. Se agita la mezcla reaccionante durante 6 horas a
temperatura ambiente, se acidifica la mezcla por adición de 10 ml de
HCl 1N y se extrae con acetato de etilo (30 ml x 2). Se lava la capa
orgánica con agua y con salmuera, se seca con sulfato magnésico
anhidro y se concentra a presión reducida. Se purifica el residuo
por cromatografía de columna a través de gel de sílice
(n-hexano: acetato de etilo = 1:1), obteniéndose 230
mg (rendimiento: 29%) del compuesto deseado de estereoquímica (2R,
3R, 4S).
RMN-H^{1}
(DMSO-d_{6}, 300 MHz) \delta = 1,35 (s, 3H),
3,38 (d, 6H), 3,88 (s, 3H), 4,59 (s, 1H), 5,11 (s, 1H), 5,97 (s,
1H), 6,94 (d, 1H), 7,28 (m, 4H), 7,79 (d, 1H), 8,04 (m, 2H), 9,49
(s, 1H).
La reacción se lleva a cabo por el mismo método
descrito en el ejemplo 3. Se purifica el residuo por cromatografía
de columna a través de gel de sílice (n-hexano:
acetato de etilo = 1:4), obteniéndose 200 mg (rendimiento: 25%) del
compuesto deseado de estereoquímica (2R, 3S, 4R).
RMN-H^{1}
(DMSO-d_{6}, 300 MHz) \delta = 1,23 (s, 3H),
3,42 (d, 5H), 4,08 (t, 1H), 4,49 (s, 1H), 4,99 (t, 1H), 6,98 (d,
1H), 7,30 (m, 4H), 7,91 (d, 1H), 8,04 (d, 2H), 9,6 (s, 1H).
A una solución de 532 mg de
N-ciano-N'-(4-nitrofenil)tiourea
sódica y 500 mg del compuesto aminoalcohol obtenido en el ejemplo
de obtención 1 disueltos en 5 ml de DMF se les añaden 418 mg del
clorhidrato de la
1-[3-(dimetilamino)propil]-2-etilcarbodiimida.
Se agita la mezcla reaccionante durante 6 horas a temperatura
ambiente, se acidifica la mezcla por adición de 10 ml de HCl 1N y se
extrae con acetato de etilo (30 ml x 2). Se lava la capa orgánica
con agua y con salmuera, se seca con sulfato magnésico anhidro y se
concentra a presión reducida. Se purifica el residuo por
cromatografía de columna a través de gel de sílice
(n-hexano: acetato de etilo = 1:1), obteniéndose 210
mg (rendimiento: 26%) del compuesto deseado de estereoquímica (2R,
3R, 4S).
RMN-H^{1}
(DMSO-d_{6}, 300 MHz) \delta = 1,36 (s, 3H),
3,38 (d, 6H), 3,88 (t, 1H), 4,60 (s, 1H), 5,12 (t, 1H), 6,2 (s, 1H),
6,97 (d, 1H), 7,48 (d, 1H), 8,04 (dd, 1H), 8,11 (s, 1H), 8,20 (d,
2H), 8,33 (d, 1H), 10,07 (s, 1H).
A una solución de 500 mg de
N-ciano-N'-(4-trifluormetilfenil)tiourea
sódica y 500 mg del compuesto aminoalcohol obtenido en el ejemplo
de obtención 1 disueltos en 5 ml de DMF se les añaden 418 mg del
clorhidrato de la
1-[3-(dimetilamino)propil]-2-etilcarbodiimida.
Se agita la mezcla reaccionante durante 5 horas a temperatura
ambiente, se acidifica la mezcla por adición de 10 ml de HCl 1N y se
extrae con acetato de etilo (30 ml x 2). Se lava la capa orgánica
con agua y con salmuera, se seca con sulfato magnésico anhidro y se
concentra a presión reducida. Se purifica el residuo por
cromatografía de columna a través de gel de sílice
(n-hexano: acetato de etilo = 1:1), obteniéndose 250
mg (rendimiento: 29%) del compuesto deseado de estereoquímica (2R,
3R, 4S).
RMN-H^{1}
(DMSO-d_{6}, 300 MHz) \delta = 1,34 (s, 3H),
3,38 (d, 6H), 3,38 (t, 1H), 4,59 (s, 1H), 5,10 (t, 1H), 6,0 (s, 1H),
6,94 (d, 1H), 7,52 (d, 1H), 7,57 (m, 3H), 7,86 (d, 1H), 8,02 (dd,
1H), 8,09 (s, 1H).
La reacción se lleva a cabo por el mismo método
descrito en el ejemplo 6. Se purifica el residuo por cromatografía
de columna a través de gel de sílice (n-hexano:
acetato de etilo = 1:1), obteniéndose 200 mg (rendimiento: 23%) del
compuesto deseado de estereoquímica (2R, 3S, 4R).
RMN-H^{1}
(DMSO-d_{6}, 300 MHz) \delta = 1,23 (s, 3H),
3,43 (d, 6H), 4,08 (t, 1H), 4,49 (s, 1H), 5,01 (t, 1H), 5,85 (s,
1H), 6,98 (d, 1H), 7,49 (d, 1H), 7,60 (m, 3H), 8,03 (m, 3H), 9,7 (s,
1H).
A una solución de 500 mg de
N-ciano-N'-(4-metoxifenil)tiourea
sódica y 500 mg del compuesto aminoalcohol obtenido en el ejemplo
de obtención 1 disueltos en 5 ml de DMF se les añaden 418 mg del
clorhidrato de la
1-[3-(dimetilamino)propil]-2-
etilcarbodiimida. Se agita la mezcla reaccionante durante 5 horas a
temperatura ambiente, se acidifica la mezcla por adición de 10 ml de
HCl 1N y se extrae con acetato de etilo (30 ml x 2). Se lava la capa
orgánica con agua y con salmuera, se seca con sulfato magnésico
anhidro y se concentra a presión reducida. Se purifica el residuo
por cromatografía a través de gel de sílice
(n-hexano: acetato de etilo = 1:1), obteniéndose 49
mg (rendimiento: 6%) del compuesto deseado de estereoquímica (2R,
3R, 4S).
RMN-H^{1}
(DMSO-d_{6}, 300 MHz) \delta = 1,24 (s, 3H),
3,35 (d, 6H), 3,70 (s, 3H), 4,08 (t, 1H), 4,45 (s, 1H), 5,64 (d,
1H), 5,78 (t, 1H), 6,93 (m,3H), 7,24 (d, 2H), 8,02 (d, 2H), 8,17 (s,
1H), 9,59 (s, 1H).
La reacción se lleva a cabo por el mismo método
descrito en el ejemplo 8. Se purifica el residuo por cromatografía a
través de gel de sílice (n-hexano: acetato de etilo
= 1:1), obteniéndose 190 mg (rendimiento: 24%) del compuesto deseado
de estereoquímica (2R, 3S, 4R).
RMN-H^{1}
(DMSO-d_{6}, 300 MHz) \delta = 1,33 (s, 3H),
3,38 (d, 6H), 3,72 (s, 3H), 3,87 (t, 1H), 4,58 (s, 1H), 5,10 (t,
1H), 5,88 (s, 1H), 6,91 (d, 3H), 7,20 (d, 3H), 7,97 (s, 1H), 9,14
(s, 1H).
A una solución de 508 mg de
N-ciano-N'-(4-clorofenil)tiourea
sódica y 500 mg del compuesto aminoalcohol obtenido en el ejemplo
de obtención 1 disueltos en 5 ml de DMF se les añaden 418 mg del
clorhidrato de la
1-[3-(dimetilamino)propil]-2-etilcarbodiimida.
Se agita la mezcla reaccionante durante 5 horas a temperatura
ambiente, se acidifica la mezcla por adición de 10 ml de HCl 1N y se
extrae con acetato de etilo (30 ml x 2). Se lava la capa orgánica
con agua y con salmuera, se seca con sulfato magnésico anhidro y se
concentra a presión reducida. Se purifica el residuo por
cromatografía a través de gel de sílice (n-hexano:
acetato de etilo = 1:1), obteniéndose 260 mg (rendimiento: 33%) del
compuesto deseado de estereoquímica (2S, 3R, 4S).
RMN-H^{1}
(DMSO-d_{6}, 300 MHz) \delta = 1,35 (s, 3H),
3,37 (d, 6H), 3,85 (t, 1H), 4,59 (s, 1H), 5,11 (t, 1H), 5,97 (s,
1H), 6,93 (d, 1H), 7,35 (dd, 4H), 7,63 (d, 1H), 8,01 (d, 2H), 9,44
(s, 1H).
La reacción se lleva a cabo por el mismo método
descrito en el ejemplo 10. Se purifica el residuo por cromatografía
a través de gel de sílice (n-hexano: acetato de
etilo = 1:1), obteniéndose 200 mg (rendimiento: 25%) del compuesto
deseado de estereoquímica (2S, 3S, 4R).
RMN-H^{1}
(DMSO-d_{6}, 300 MHz) \delta = 1,23 (s, 3H),
3,43 (d, 6H), 4,05 (t, 1H), 4,48 (s, 1H), 4,99 (t, 1H), 5,81 (s,
1H), 6,97 (d, 1H), 7,37 (dd, 4H), 7,76 (s, 1H), 8,03 (s, 2H), 9,49
(s, 1H).
La reacción se lleva a cabo por el mismo método
descrito en el ejemplo 10. Se purifica el residuo por cromatografía
a través de gel de sílice (n-hexano: acetato de
etilo = 1:1), obteniéndose 188 mg (rendimiento: 24%) del compuesto
deseado de estereoquímica (2S, 3R, 4S).
RMN-H^{1}
(DMSO-d_{6}, 300 MHz) \delta = 1,35 (s, 3H),
3,43 (d, 6H), 3,88 (t, 1H), 4,60 (s, 1H), 5,11 (t, 1H), 5,97 (s,
1H), 6,95 (d, 1H), 7,17 (d, 1H), 7,25 (d, 1H), 7,34 (d, 2H), 7,79
(d, 1H), 8,03 (m, 2H), 9,49 (s, 1H).
La reacción se lleva a cabo por el mismo método
descrito en el ejemplo 12. Se purifica el residuo por cromatografía
a través de gel de sílice (n-hexano: acetato de
etilo = 1:1), obteniéndose 270 mg (rendimiento: 34%) del compuesto
deseado de estereoquímica (2S, 3S, 4R).
RMN-H^{1}
(DMSO-d_{6}, 300 MHz) \delta = 1,18 (s, 3H),
3,43 (d, 6H), 4,09 (t, 1H), 4,49 (s, 1H), 5,00 (t, 1H), 5,85 (s,
1H), 6,98 (d, 1H), 7,29 (d, 1H), 7,37 (d, 1H), 7,40 (m, 2H), 7,91
(d, 1H), 8,05 (m, 2H).
La reacción se lleva a cabo por el mismo método
descrito en el ejemplo 10, excepto que se utilizan 582 mg de la
N-ciano-N'-(3-trifluormetilfenil)tiourea
sódica y 500 mg del compuesto aminoalcohol obtenido en el ejemplo de
obtención 2. Se purifica el residuo por cromatografía a través de
gel de sílice (n-hexano: acetato de etilo = 1:1),
obteniéndose 220 mg (rendimiento: 26%) del compuesto deseado de
estereoquímica (2S, 3R, 4S).
RMN-H^{1}
(DMSO-d_{6}, 300 MHz) \delta = 1,34 (s, 3H),
3,43 (d, 6H), 3,88 (t, 1H), 4,60 (s, 1H), 5,11 (t, 1H), 5,95 (s,
1H), 6,95 (d, 1H), 7,45 (d, 1H), 7,57 (m, 3H), 7,88 (d, 1H), 8,03
(dd, 1H), 8,10 (s, 1H), 9,62 (s, 1H).
La reacción se lleva a cabo por el mismo método
descrito en el ejemplo 14. Se purifica el residuo por cromatografía
a través de gel de sílice (n-hexano: acetato de
etilo = 1:1), obteniéndose 320 mg (rendimiento: 37%) del compuesto
deseado de estereoquímica (2S, 3S, 4R).
RMN-H^{1}
(DMSO-d_{6}, 300 MHz) \delta = 1,24 (s, 3H),
3,43 (d, 6H), 4,08 (t, 1H), 4,49 (s, 1H), 5,01 (t, 1H), 5,82 (s,
1H), 6,98 (d, 1H), 7,47 (d, 1H), 7,57 (m, 3H), 7,98 (d, 1H), 8,03
(m, 2H), 9,67 (s, 1H).
La reacción se lleva a cabo por el mismo método
descrito en el ejemplo 10, excepto que se utilizan 500 mg de
N-ciano-N'-(4-metoxifenil)tiourea
sódica y 500 mg del compuesto aminoalcohol obtenido en el ejemplo de
obtención 2. Se purifica el residuo por cromatografía a través de
gel de sílice (n-hexano: acetato de etilo = 1:1),
obteniéndose 170 mg (rendimiento: 21%) del compuesto deseado de
estereoquímica (2S, 3R, 4S).
RMN-H^{1}
(DMSO-d_{6}, 300 MHz) \delta = 1,33 (s, 3H),
3,36 (d, 6H), 3,72 (s, 3H), 3,86 (t, 1H), 4,58 (s, 1H), 5,09 (t,
1H), 5,88 (s, 1H), 6,91 (d, 3H), 7,20 (d, 3H), 7,97 (s, 1H), 8,00
(d, 1H).
La reacción se lleva a cabo por el mismo método
descrito en el ejemplo 16. Se purifica el residuo por cromatografía
a través de gel de sílice (n-hexano: acetato de
etilo = 1:1), obteniéndose 270 mg (rendimiento: 34%) del compuesto
deseado de estereoquímica (2R, 3S, 4R).
RMN-H^{1}
(DMSO-d_{6}, 300 MHz) \delta = 1,22 (s, 3H),
3,38 (d, 6H), 3,72 (s, 3H), 4,06 (t, 1H), 4,45 (s, 1H), 4,99 (t,
1H), 5,75 (s, 1H), 6,93 (t, 3H), 7,20 (d, 2H), 7,35 (s, 1H), 8,01
(s, 1H), 8,03 (d, 1H), 9,19 (s, 1H).
La reacción se lleva a cabo por el mismo método
descrito en el ejemplo 1, excepto que se utilizan 465 mg de
N-ciano-N'-(4-metilfenil)tiourea
sódica y 500 mg del compuesto aminoalcohol obtenido en el ejemplo de
obtención 2. Se purifica el residuo por cromatografía a través de
gel de sílice (n-hexano: acetato de etilo = 1:1),
obteniéndose 158 mg (rendimiento: 21%) del compuesto deseado de
estereoquímica (2R, 3R, 4S).
RMN-H^{1}
(DMSO-d_{6}, 300 MHz) \delta = 1,34 (s, 3H),
2,26 (s, 3H), 3,37 (d, 6H), 3,87 (s, 1H), 4,59 (s, 1H), 5,11 (t,
1H), 5,93 (s, 1H), 6,92 (d, 1H), 7,16 (s, 3H), 7,38 (d, 1H), 8,00
(1H, 2H), 9,24 (s, 1H).
La reacción se lleva a cabo por el mismo método
descrito en el ejemplo 18. Se purifica el residuo por cromatografía
a través de gel de sílice (n-hexano: acetato de
etilo = 1:1), obteniéndose 250 mg (rendimiento: 33%) del compuesto
deseado de estereoquímica (2R, 3S, 4R).
RMN-H^{1}
(DMSO-d_{6}, 300 MHz) \delta = 1,22 (s, 3H),
2,26 (s, 3H), 3,38 (d, 6H), 4,06 (t, 1H), 4,46 (s, 1H), 4,99 (t,
1H), 5,74 (s, 1H), 6,95 (d, 1H), 7,16 (s, 3H), 7,53 (s, 1H), 8,02
(d, 2H), 9,28 (s, 1H).
La reacción se lleva a cabo por el mismo método
descrito en el ejemplo 1, excepto que se utilizan 530 mg de
N-ciano-N'-(4-metoxibencil)tiourea
sódica y 500 mg del compuesto aminoalcohol obtenido en el ejemplo de
obtención 1. Se purifica el residuo por cromatografía a través de
gel de sílice (n-hexano: acetato de etilo = 1:1),
obteniéndose 134 mg (rendimiento: 16%) del compuesto deseado de
estereoquímica (2R, 3R, 4S).
RMN-H^{1} (CDCl_{3}, 300 MHz)
\delta = 1,47 (s, 3H), 3,51 (d, 6H), 3,77 (s, 3H), 3,80 (d, 2H),
4,44 (t, 1H), 4,56 (s, 1H), 5,32 (m, 1H), 6,06 (s, 1H), 6,40 (d,
1H), 6,90 (m, 3H), 7,12 (m, 2H), 7,30 (d, 1H), 8,00 (dd, 1H), 8,03
(s, 1H).
La reacción se lleva a cabo por el mismo método
descrito en el ejemplo 20. Se purifica el residuo por cromatografía
a través de gel de sílice (n-hexano: acetato de
etilo = 1:1), obteniéndose 140 mg (rendimiento: 17%) del compuesto
deseado de estereoquímica (2R, 3S, 4R).
RMN-H^{1} (CDCl_{3}, 300 MHz)
\delta = 1,32 (s, 3H), 3,49 (s, 6H), 3,58 (t, 1H), 3,77 (s, 3H),
4,04 (d, 1H), 4,41 (s, 1H), 4,65 (s, 2H), 6,35 (s, 1H), 6,88 (dd,
4H), 7,26 (d, 2H), 8,04 (dd, 1H), 8,08 (s, 1H).
La reacción se lleva a cabo por el mismo método
descrito en el ejemplo 1, excepto que se utilizan 465 mg de
N-ciano-N'-benciltiourea
sódica y 500 mg del compuesto aminoalcohol obtenido en el ejemplo
de obtención 1. Se purifica el residuo por cromatografía a través de
gel de sílice (n-hexano: acetato de etilo = 1:1),
obteniéndose 260 mg (rendimiento: 34%) del compuesto deseado de
estereoquímica (2R, 3R, 4S).
RMN-H^{1}
(DMSO-d_{6}, 300 MHz) \delta = 1,24 (s, 3H),
3,41 (m, 1H), 3,44 (d, 6H), 4,04 (m, 1H), 4,51 (s, 1H), 4,76 (s,
2H), 5,70 (s, 1H), 6,98 (d, 1H), 7,32 (m, 4H), 8,03 (m, 2H), 8,16
(s, 1H).
La reacción se lleva a cabo por el mismo método
descrito en el ejemplo 22. Se purifica el residuo por cromatografía
a través de gel de sílice (n-hexano: acetato de
etilo = 1:1), obteniéndose 200 mg (rendimiento: 26%) del compuesto
deseado de estereoquímica (2R, 3S, 4R).
RMN-H^{1}
(DMSO-d_{6}, 300 MHz) \delta = 1,26 (s, 3H),
3,36 (d, 6H), 3,44 (d, 1H), 3,87 (t, 1H), 4,44 (d, 2H), 4,56 (s,
1H), 5,02 (t, 1H), 5,86 (s, 1H), 6,94 (d, 1H), 7,29 (m, 4H), 7,75
(t, 1H), 7,93 (s, 1H), 7,99 (dd, 1H).
La reacción se lleva a cabo por el mismo método
descrito en el ejemplo 10, excepto que se utilizan 508 mg de
N-ciano-N'-benciltiourea
sódica y 500 mg del compuesto aminoalcohol obtenido en el ejemplo
de obtención 2. Se purifica el residuo por cromatografía a través de
gel de sílice (n-hexano: acetato de etilo = 1:1),
obteniéndose 170 mg (rendimiento: 22%) del compuesto deseado de
estereoquímica (2S, 3R, 4S).
RMN-H^{1} (CDCl_{3}, 300 MHz)
\delta = 1,27 (s, 3H), 3,48 (d, 6H), 3,5 (m, 1H), 4,02 (d, 1H),
4,48 (s, 1H), 4,75 (s, 2H), 6,0 (s, 1H), 6,72 (s, 1H), 6,87 (d, 1H),
7,30 (m, 5H), 8,0 (d, 1H), 8,02 (s, 1H).
La reacción se lleva a cabo por el mismo método
descrito en el ejemplo 24. Se purifica el residuo por cromatografía
a través de gel de sílice (n-hexano: acetato de
etilo = 1:1), obteniéndose 190 mg (rendimiento: 25%) del compuesto
deseado de estereoquímica (2S, 3S, 4R).
RMN-H^{1} (CDCl_{3}, 300 MHz)
\delta = 1,31 (s, 3H), 3,44 (d, 6H), 3,5 (m, 1H), 3,71 (d, 1H),
4,47 (s, 1H), 5,14 (m, 2H), 5,69 (s, 1H), 6,70 (s, 1H), 6,58 (d,
1H), 7,25 (m, 5H), 8,0 (d, 1H), 8,02 (s, 1H).
La reacción se lleva a cabo por el mismo método
descrito en el ejemplo 1, excepto que se utilizan 500 mg de
N-ciano-N'-(4-clorofenil)tiourea
sódica y 500 mg del compuesto aminoalcohol obtenido en el ejemplo
de obtención 3. Se purifica el residuo por cromatografía a través de
gel de sílice (n-hexano: acetato de etilo = 1:1),
obteniéndose 170 mg (rendimiento: 23%) del compuesto deseado de
estereoquímica (2R, 3R, 4S).
RMN-H^{1}
(DMSO-d_{6}, 300 MHz) \delta = 1,25 (s, 3H),
3,37 (d, 6H), 3,82 (t, 1H), 4,52 (s, 1H), 5,00 (t, 1H), 5,45 (s,
1H), 6,71 (d, 1H), 6,90 (t, 1H), 7,10 (m, 2H), 7,24 (d, 2H), 7,38
(d, 2H), 7,54 (d, 1H), 9,24 (s, 1H).
La reacción se lleva a cabo por el mismo método
descrito en el ejemplo 26. Se purifica el residuo por cromatografía
a través de gel de sílice (n-hexano: acetato de
etilo = 1:1), obteniéndose 190 mg (rendimiento: 26%) del compuesto
deseado de estereoquímica (2R, 3S, 4R).
RMN-H^{1}
(DMSO-d_{6}, 300 MHz) \delta = 1,16 (s, 3H),
3,40 (d, 6H), 4,01 (t, 1H), 4,43 (s, 1H), 4,92 (t, 1H), 5,48 (s,
1H), 6,72 (d, 1H), 6,90 (t, 1H), 7,15 (m, 3H), 7,31 (m, 4H), 7,67
(s, 1H), 9,29 (s, 1H).
La reacción se lleva a cabo por el mismo método
descrito en el ejemplo 1, excepto que se utilizan 289 mg de
N-ciano-N'-(4-clorofenil)tiourea
sódica y 210 mg del compuesto aminoalcohol obtenido en el ejemplo
de obtención 4. Se purifica el residuo por cromatografía a través de
gel de sílice (n-hexano: acetato de etilo = 1:1),
obteniéndose 40 mg (rendimiento: 11%) del compuesto deseado de
estereoquímica (2R, 3R, 4S).
RMN-H^{1}
(DMSO-d_{6}, 300 MHz) \delta = 1,35 (s, 3H), 3,5
(m, 1H), 3,75 (m, 1H), 4,95 (t, 1H), 5,2 (t, 1H), 6,0 (s, 1H), 6,97
(d, 1H), 7,4 (m, 4H), 7,7 (d, 1H), 8,0 (m, 2H), 9,51 (s, 1H).
La reacción se lleva a cabo por el mismo método
descrito en el ejemplo 28. Se purifica el residuo por cromatografía
a través de gel de sílice (n-hexano: acetato de
etilo = 1:1), obteniéndose 40 mg (rendimiento: 11%) del compuesto
deseado de estereoquímica (2R, 3S, 4R).
RMN-H^{1}
(DMSO-d_{6}, 300 MHz) \delta = 1,2 (s, 3H), 3,65
(m, 2H), 4,11 (t, 1H), 5,08 (t, 1H), 5,85 (s, 1H), 7,01 (d, 1H), 7,4
(m, 4H), 7,9 (d, 1H), 8,1 (d, 2H), 9,58 (s, 1H).
La reacción se lleva a cabo por el mismo método
descrito en el ejemplo 1, excepto que se utilizan 800 mg de
N-ciano-N'-(4-clorofenil)tiourea
sódica y 200 mg del compuesto aminoalcohol obtenido en el ejemplo
de obtención 5. Se purifica el residuo por cromatografía a través de
gel de sílice (n-hexano: acetato de etilo = 1:1),
obteniéndose 108 mg (rendimiento: 32%) del compuesto deseado de
estereoquímica (2R, 3R, 4S).
RMN-H^{1}
(DMSO-d_{6}, 300 MHz) \delta = 1,4 (s, 3H), 3,15
(s, 3H), 3,45 (d, 1H), 3,64 (d, 1H), 3,8 (t, 1H), 5,08 (t, 1H), 6,09
(s, 1H), 6,94 (d, 1H), 7,34 (dd, 4H), 7,64 (s, 1H), 8,01 (d, 2H),
9,5 (s, 1H).
La reacción se lleva a cabo por el mismo método
descrito en el ejemplo 30. Se purifica el residuo por cromatografía
a través de gel de sílice (n-hexano: acetato de
etilo = 1:1), obteniéndose 107 mg (rendimiento: 32%) del compuesto
deseado de estereoquímica (2R, 3S, 4R).
RMN-H^{1}
(DMSO-d_{6}, 300 MHz) \delta = 1,15 (s, 3H), 3,3
(s, 3H), 3,45 (d, 1H), 3,6 (d, 1H), 4,06 (t, 1H), 5,00 (t, 1H), 5,9
(s, 1H), 6,96 (d, 1H), 7,34 (dd, 4H), 7,8 (s, 1H), 8,0 (m, 2H), 7,48
(s, 1H).
La reacción se lleva a cabo por el mismo método
descrito en el ejemplo 10, excepto que se utilizan 508 mg de
N-ciano-N'-(2-clorofenil)tiourea
sódica y 500 mg del compuesto aminoalcohol obtenido en el ejemplo
de obtención 2. Se purifica el residuo por cromatografía a través de
gel de sílice (n-hexano: acetato de etilo = 1:1),
obteniéndose 188 mg (rendimiento: 24%) del compuesto deseado de
estereoquímica (2S, 3R, 4S).
RMN-H^{1}
(DMSO-d_{6}, 300 MHz) \delta = 1,35 (s, 3H),
3,43 (d, 6H), 3,88 (t, 1H), 4,60 (s, 1H), 5,11 (t, 1H), 5,97 (s,
1H), 6,95 (d, 1H), 7,17 (d, 1H), 7,25 (d, 1H), 7,34 (d, 2H), 7,79
(d, 1H), 8,03 (m, 2H), 9,49 (s, 1H).
La reacción se lleva a cabo por el mismo método
descrito en el ejemplo 32. Se purifica el residuo por cromatografía
a través de gel de sílice (n-hexano: acetato de
etilo = 1:1), obteniéndose 270 mg (rendimiento: 34%) del compuesto
deseado de estereoquímica (2S, 3S, 4R).
RMN-H^{1}
(DMSO-d_{6}, 300 MHz) \delta = 1,24 (s, 3H),
3,43 (d, 6H), 4,10 (t, 1H), 4,49 (s, 1H), 5,00 (s, 1H), 5,85 (s,
1H), 6,98 (d, 1H), 7,19 (d, 1H), 7,28 (d, 1H), 7,35 (m, 2H), 7,90
(d, 1H), 8,05 (d, 1H), 9,53 (s, 1H).
La reacción se lleva a cabo por el mismo método
descrito en el ejemplo 10, excepto que se utilizan 582 mg de
N-ciano-N'-(2-trifluormetilfenil)tiourea
sódica y 500 mg del compuesto aminoalcohol obtenido en el ejemplo de
obtención 2. Se purifica el residuo por cromatografía a través de
gel de sílice (n-hexano: acetato de etilo = 1:1),
obteniéndose 220 mg (rendimiento: 26%) del compuesto deseado de
estereoquímica (2S, 3R, 4S).
RMN-H^{1}
(DMSO-d_{6}, 300 MHz) \delta = 1,34 (s, 3H),
3,43 (d, 6H), 3,88 (t, 1H), 4,60 (s, 1H), 5,11 (t, 1H), 5,97 (s,
1H), 6,95 (d, 1H), 7,45 (d, 1H), 7,60 (m, 3H), 7,87 (d, 1H), 8,03
(dd, 1H), 8,10 (s, 1H), 9,62 (s, 1H).
La reacción se lleva a cabo por el mismo método
descrito en el ejemplo 34. Se purifica el residuo por cromatografía
a través de gel de sílice (n-hexano: acetato de
etilo = 1:1), obteniéndose 320 mg (rendimiento: 37%) del compuesto
deseado de estereoquímica (2S, 3S, 4R).
RMN-H^{1}
(DMSO-d_{6}, 300 MHz) \delta = 1,24 (s, 3H),
3,43 (d, 6H), 4,08 (t, 1H), 4,49 (s, 1H), 5,00 (s, 1H), 5,82 (s,
1H), 6,98 (d, 1H), 7,47 (d, 1H), 7,61 (dd, 3H), 8,03 (m, 3H), 9,67
(s, 1H).
La reacción se lleva a cabo por el mismo método
descrito en el ejemplo 10, excepto que se utilizan 540 mg de
N-ciano-N'-(2-clorobencil)tiourea
sódica y 500 mg del compuesto aminoalcohol obtenido en el ejemplo
de obtención 2. Se purifica el residuo por cromatografía a través de
gel de sílice (n-hexano: acetato de etilo = 1:1),
obteniéndose 73 mg (rendimiento: 9%) del compuesto deseado de
estereoquímica (2S, 3R, 4S).
RMN-H^{1}
(DMSO-d_{6}, 300 MHz) \delta = 1,36 (s, 3H),
3,47 (d, 6H), 3,68 (s, 1H), 4,13 (m, 1H), 4,39 (s, 1H), 4,52 (s,
2H), 5,57 (s, 1H), 6,6 (s, 1H), 6,88 (m, 1H), 7,25 (m, 6H), 8,01 (d,
1H), 8,16 (s, 1H).
La reacción se lleva a cabo por el mismo método
descrito en el ejemplo 36. Se purifica el residuo por cromatografía
a través de gel de sílice (n-hexano: acetato de
etilo = 1:1), obteniéndose 100 mg (rendimiento: 12%) del compuesto
deseado de estereoquímica (2S, 3S, 4R).
RMN-H^{1}
(DMSO-d_{6}, 300 MHz) \delta = 1,28 (s, 3H), 3,5
(d, 6H), 3,6 (s, 1H), 3,98 (d, 1H), 4,53 (m, 3H), 5,61 (d, 1H), 5,89
(t, 1H), 6,88 (d, 1H), 7,25 (m, 3H), 7,40 (d, 1H), 8,02 (m, 2H),
8,14 (s, 1H).
A una solución de 68 mg (0,15 mmoles) del
compuesto obtenido en el ejemplo 25 y disuelto en 3 ml de cloruro de
metileno se le añaden 21 \mul de anhídrido acético, 42 \mul de
trietilamina y 2 mg de DMAP
(4-dimetilaminopiridina). Se agita la mezcla
reaccionante a temperatura ambiente durante 5 horas, se le añaden 5
ml de agua y se extrae con acetato de etilo (10 ml x 2). Se lava la
fase orgánica con agua y con salmuera, se seca con sulfato magnésico
anhidro, se filtra y se concentra a presión reducida. Se purifica el
residuo por cromatografía a través de gel de sílice
(n-hexano: acetato de etilo = 1:1), obteniéndose 67
mg (rendimiento: 90%) del compuesto deseado.
RMN-H^{1}
(DMSO-d_{6}, 300 MHz) \delta = 1,3 (s, 3H), 1,25
(s, 1H), 2,1 (s, 3H), 3,3 (s, 3H), 3,5 (s, 3H), 4,35 (s, 1H), 4,52
(s, 2H), 5,25 (m, 1H), 5,32 (s, 1H), 6,98 (d, 2H), 7,38 (s, 5H),
8,15 (d, 2H).
A una solución de 54 mg (0,11 mmoles) del
compuesto obtenido en el ejemplo 38 y disuelto en 2 ml de tolueno se
le añaden 24 \mul (0,1628 moles) de DBU. Se agita la mezcla
reaccionante a temperatura ambiente durante 24 horas y se extrae con
acetato de etilo. Se seca la fase orgánica con sulfato magnésico, se
filtra y se concentra a presión reducida. Se purifica el residuo por
cromatografía a través de gel de sílice (n-hexano:
acetato de etilo = 1:1), obteniéndose 31 mg (rendimiento: 64%) del
compuesto deseado.
RMN-H^{1}
(DMSO-d_{6}, 300 MHz) \delta = 1,43 (s, 3H),
3,29 (s, 3H), 3,39 (s, 3H), 4,21 (s, 1H), 4,59 (d, 2H), 5,45 (s,
1H), 7,02 (d, 1H), 7,36 (m, 5H), 8,29 (dd, 2H), 8,82 (d, 1H).
A una solución de 1,11 g del compuesto obtenido
en el ejemplo 24 y disuelto en 20 ml de metanol se le añaden 10 ml
de una solución saturada de acetato cúprico. A esta mezcla se le
añaden lentamente 276 mg de borhidruro sódico. Se agita la mezcla
reaccionante a temperatura ambiente durante 3 horas, se le añaden 50
ml de agua y se extrae con 100 ml de acetato de etilo. Se seca la
fase orgánica con sulfato magnésico, se filtra y se concentra a
presión reducida. Se purifica el residuo por cromatografía a través
de gel de sílice (n-hexano: acetato de etilo =
1:3), obteniéndose 576 mg (rendimiento: 56%) del compuesto
deseado.
RMN-H^{1} (CDCl_{3}, 300 MHz)
\delta = 1,21 (s, 3H), 3,58 (s, 3H), 3,59 (s, 3H), 4,14 (d, 1H),
4,30 (s, 1H), 4,45 (d, 1H), 4,47 (d, 1H), 5,46 (d, 1H),
6,60-6,66 (m, 3H), 7,32-7,36 (m,
5H).
A una solución de 50 mg del compuesto obtenido en
el ejemplo 40 y disuelto en 2 ml de cloruro de metileno se le añaden
25 \mul de trietilamina y 10 \mul de cloruro de acetilo. Se
agita la mezcla reaccionante a temperatura ambiente durante 1 hora y
se extrae con 10 ml de agua y 20 ml de acetato de etilo. Se seca la
fase orgánica con sulfato magnésico, se filtra y se concentra a
presión reducida. Se purifica el residuo por cromatografía a través
de gel de sílice (n-hexano: acetato de etilo =
1:2), obteniéndose 51 mg (rendimiento: 92%) del compuesto
deseado.
RMN-H^{1}
(DMSO-d_{6}, 200 MHz) \delta = 1,15 (s, 3H),
1,96 (s, 3H), 3,38 (s, 3H), 3,51 (s, 3H), 3,98 (m, 2H), 4,30 (s,
1H), 4,38-4,49 (m, 2H), 5,22 (ancha s, 1H), 5,48
(ancha s, 1H), 6,64 (d, 1H), 7,31 (ancha s, 5H), 7,61 (ancha s, 1H),
7,94 (s, 1H), 9,76 (s, 1H).
A una solución de 91 mg del compuesto obtenido en
el ejemplo 40 y disuelto en 2 ml de cloruro de metileno se le añaden
45 \mul de trietilamina y 20 \mul de cloruro de metanosulfonilo.
Se agita la mezcla reaccionante a temperatura ambiente durante 2
horas y se extrae con 10 ml de agua y 20 ml de acetato de etilo. Se
seca la fase orgánica con sulfato magnésico, se filtra y se
concentra a presión reducida. Se purifica el residuo por
cromatografía a través de gel de sílice (n-hexano:
acetato de etilo = 1:2), obteniéndose 90 mg (rendimiento: 85%) del
compuesto deseado.
RMN-H^{1} (CDCl_{3}, 200 MHz)
\delta = 1,25 (s, 3H), 2,90 (s, 3H), 3,57 (s, 6H), 4,10 (d, 1H),
4,25 (d, 1H), 4,34 (s, 1H), 4,43 (d, 1H), 4,50 (d, 1H), 4,61 (t,
1H), 5,83 (d, 1H), 6,78 (d, 1H), 7,20-7,38 (m, 7H),
8,18 (ancha s, 1H).
A una solución de 100 mg de (2S, 3S,
4R)-6-ciano-2-metil-2-dimetoximetil-3-hidroxi-4-amino-3,4-dihidro-2H-1-benzopirano,
obtenido en el ejemplo de obtención 6 y disuelto en 3 ml de DMF, se
le añaden 92 mg de
N-ciano-N'-(4-clorofenil)tiourea
sódica y 89 mg de clorhidrato de
1-[3-(dimetilamino)propil-2-etilcarbodiimida.
Se agita la mezcla reaccionante a temperatura ambiente durante 6
horas, se acidifica por adición de 5 ml de HCl 1N y se extrae con 30
ml de acetato de etilo. Se seca la fase orgánica con sulfato
magnésico, se filtra y se concentra a presión reducida. Se purifica
el residuo por cromatografía a través de gel de sílice
(n-hexano: acetato de etilo = 1:1), obteniéndose 70
mg (rendimiento: 43%) del compuesto deseado de estereoquímica (2S,
3R, 4S).
RMN-H^{1} (CDCl_{3}, 200 MHz)
\delta = 1,36 (s, 3H), 3,49 (s, 3H), 3,53 (s, 3H), 3,58 (t, 1H),
4,34 (s, 1H), 4,99 (t, 1H), 5,62 (s, 1H), 6,86 (d, 1H),
7,25-7,55 (m, 5H), 7,69 (s, 1H).
La reacción se lleva a cabo por el método
descrito en el ejemplo 43, excepto que se emplean como material de
partida 99 mg (0,35 mmoles) del (2S, 3R,
4S)-6-ciano-2-metil-2-dimetoximetil-3-hidroxi-4-amino-3,4-dihidro-2H-1-benzopirano,
obtenido en el ejemplo de obtención 7. Se purifica el residuo por
cromatografía a través de gel de sílice (n-hexano:
acetato de etilo = 1:1), obteniéndose 68 mg (rendimiento: 42%) del
compuesto deseado.
RMN-H^{1} (CDCl_{3}, 200 MHz)
\delta = 1,50 (s, 3H), 3,44 (s, 3H), 3,48 (s, 3H), 3,66 (t, 1H),
4,43 (s, 1H), 5,24 (d, 2H), 6,84 (d, 1H), 7,27-7,44
(m, 4H), 7,55 (s, 1H), 8,53 (s, 1H).
Etapa
1
A una solución de 150 mg de (2S, 3S,
4R)-6-ciano-2-metil-2-dimetoximetil-3-hidroxi-4-amino-3,4-dihidro-2H-1-benzopirano,
obtenido en el ejemplo de obtención 6 y disuelto en 3 ml de
isopropanol-DMF (2:1), se le añaden 141 mg de
cianocarbonimidato de difenilo y 97 \mul de trietilamina. Se agita
la mezcla reaccionante a temperatura ambiente durante 18 horas y se
extrae con 10 ml de agua y 30 ml de acetato de etilo. Se seca la
fase orgánica con sulfato magnésico anhidro, se filtra y se
concentra a presión reducida. Se purifica el residuo por
cromatografía a través de gel de sílice (n-hexano:
acetato de etilo = 1:2), obteniéndose 182 mg (rendimiento: 80%) del
compuesto deseado.
Etapa
2
A una solución de 182 mg del compuesto obtenido
en la anterior etapa 1 y disueltos en 2 ml de DMF se le añaden 0,42
ml de bencilamina. Se agita la mezcla reaccionante a temperatura
ambiente durante 12 horas y se extrae con 20 ml de agua y 50 ml de
acetato de etilo. Se purifica el residuo por cromatografía a través
de gel de sílice (n-hexano : acetato de etilo =
1:2), obteniéndose 163 mg (rendimiento: 68%) del compuesto
deseado.
RMN-H^{1} (CDCl_{3}, 200 MHz)
\delta = 1,29 (s, 3H), 3,45 (s, 3H), 3,52 (s, 3H), 4,09 (t, 1H),
4,35 (s, 2H), 4,43 (d, 1H), 4,81 (t, 1H), 5,94 (s, 1H), 6,83 (d,
1H), 7,28-7,40 (m, 7H).
Se lleva a cabo la reacción por el mismo método
descrito en las etapas 1 y 2 del ejemplo 45, excepto que como
material de partida se emplean 150 mg del (2S, 3R,
4S)-6-ciano-2-metil-2-dimetoximetil-3-
hidroxi-4-amino-3,4-dihidro-2H-1-benzopirano
obtenido en el ejemplo de obtención 7. Se purifica el residuo por
cromatografía a través de gel de sílice (n-hexano:
acetato de etilo = 1:2), obteniéndose 160 mg (rendimiento: 69%) del
compuesto deseado.
RMN-H^{1} (CDCl_{3}, 200 MHz)
\delta = 1,35 (s, 3H), 3,43 (s, 3H), 3,44 (s, 3H), 3,75 (t, 1H),
3,82 (s, 2H), 4,47 (s, 1H), 5,05 (t, 1H), 5,60 (s, 1H), 6,81 (d,
1H), 7,20-7,40 (m, 7H).
Se lleva a cabo la reacción por el mismo método
descrito en las etapas 1 y 2 del ejemplo 45, excepto que como
material de partida se emplean 98 mg del (2S, 3S,
4R)-6-bromo-2-metil-2-dimetoximetil-3-hidroxi-4-amino-3,4-dihidro-2H-1-benzopirano
obtenido en el ejemplo de obtención 8. Se purifica el residuo por
cromatografía a través de gel de sílice (n-hexano:
acetato de etilo = 1:2), obteniéndose 86 mg (rendimiento: 83%) del
compuesto deseado.
RMN-H^{1} (CDCl_{3}) \delta
= 1,21 (s, 3H), 3,39 (s, 3H), 3,42 (s, 3H), 4,10 (d, 1H), 4,29 (s,
1H), 4,42 (dd, 2H), 4,65 (m, 2H), 5,61 (d, 1H),
7,20-7,40 (m, 4H).
Etapa
1
A una solución de 400 mg (1,34 mmoles) de (2S,
3S,
4R)-6-nitro-2-metil-2-dimetoximetil-2H-benzopirano,
disuelto en 3 ml de DMF, se le añaden 352 mg (1,48 mmoles) de
cianocarbonimidato de difenilo y 243 \mul (1,74 mmoles) de
trietilamina. Se agita la mezcla reaccionante a temperatura ambiente
durante 12 horas y se extrae con 20 ml de agua y 30 ml de acetato de
etilo. Se seca la fase orgánica con sulfato magnésico anhidro, se
filtra y se concentra a presión reducida. Se purifica el residuo por
cromatografía a través de gel de sílice (n-hexano:
acetato de etilo = 1:2), obteniéndose 498 mg (rendimiento: 84%) del
compuesto deseado.
Etapa
2
A una solución de 327 mg (0,74 mmoles) del
compuesto obtenido en la anterior etapa 1 y disuelto en 3 ml de DMF
se le añaden 371 mg (2,22 mmoles, 3 equiv.) de
(3,4-dimetoxibencil)amina. Se agita la
mezcla reaccionante a temperatura ambiente durante 12 horas y se
extrae con 20 ml de agua y 30 ml de acetato de etilo. Se purifica el
residuo por cromatografía a través de gel de sílice
(n-hexano: acetato de etilo = 1:2), obteniéndose 338
mg (rendimiento: 89%) del compuesto deseado.
RMN-H^{1} (CDCl_{3}, 200 MHz)
\delta = 1,33 (s, 3H), 3,53 (s, 3H), 3,57 (s, 3H), 3,86 (s, 3H),
3,87 (s, 3H), 4,14 (d, 1H), 4,38 (s, 1H), 4,24-4,50
(m, 2H), 4,82 (ancha t, 1H), 6,15 (s, 1H), 6,61 (t, 1H), 6,84 (m,
3H), 6,92 (d, 1H), 8,08 (dd, 1H), 8,35 (s, 1H).
A una solución de 209 mg (0,41 mmoles) del
compuesto obtenido en el ejemplo 48 y disuelto en 5 ml de metanol se
le añaden 0,5 ml (0,2 mmoles, 0,5 equiv.) de una solución acuosa 0,4
M de Cu(OAc)_{2}. A esta mezcla se le añaden
lentamente en 30 min 155 mg (4,1 mmoles, 10 equiv.) de borhidruro
sódico. Se agita la mezcla reaccionante a temperatura ambiente
durante 1 hora, se extrae con 10 ml de acetato de etilo y se filtra
para eliminar el sólido negro precipitado. A la solución filtrada se
le añaden 10 ml de una solución acuosa saturada de NaHCO_{3} y se
extrae con 30 ml de acetato de etilo. Se lava la capa orgánica con
salmuera, se seca con sulfato magnésico anhidro, se filtra y se
concentra a presión reducida. Se purifica el residuo por
cromatografía a través de gel de sílice (n-hexano:
acetato de etilo = 9:1), obteniéndose 169 mg (rendimiento: 85%) del
compuesto deseado.
RMN-H^{1} (CDCl_{3}, 200 MHz)
\delta = 1,20 (s, 3H), 3,57 (s, 6H), 3,87 (s, 6H), 4,29 (s, 1H),
4,04-4,12 (m, 2H), 4,32-4,58 (m,
2H), 5,46 (d, 1H), 6,50-6,69 (m, 3H), 6,84 (m, 3H),
7,26 (ancha s, 1H).
Se lleva a cabo la reacción por el mismo método
que se ha descrito en la etapa 2 del ejemplo 48, excepto que como
material de partida se emplean 360 mg del compuesto obtenido en la
etapa 1 del ejemplo 48 y 333 mg (2,43 mmoles) de
4-metoxibencilamina en lugar de
(3,4-dimetoxibencil)amina. Se purifica el
residuo por cromatografía a través de gel de sílice
(n-hexano: acetato de etilo = 1:2), obteniéndose 343
mg (rendimiento: 87%) del compuesto deseado.
RMN-H^{1} (CDCl_{3}, 200 MHz)
\delta = 1,47 (s, 3H), 3,51 (d, 6H), 3,77 (s, 3H), 3,80 (d, 2H),
4,44 (t, 1H), 4,56 (s, 1H), 5,32 (m, 1H), 6,06 (s, 1H), 6,40 (d,
1H), 6,90 (m, 3H), 7,12 (m, 2H), 7,30 (d, 1H), 8,00 (dd, 1H), 8,03
(s, 1H).
Se lleva a cabo la reacción por el mismo método
que se ha descrito en el ejemplo 49, excepto que como material de
partida se emplean 304 mg (0,62 mmoles) del compuesto obtenido en el
ejemplo 50. Se purifica el residuo por cromatografía a través de gel
de sílice (n-hexano: acetato de etilo = 1:4),
obteniéndose 241 mg (rendimiento: 85%) del compuesto deseado.
RMN-H^{1} (CDCl_{3}, 200 MHz)
\delta = 1,21 (s, 3H), 3,58 (s, 6H), 3,81 (s, 3H), 4,15 (d, 1H),
4,17 (d, 1H), 4,30 (s, 1H), 4,36-4,54 (m, 3H), 5,48
(d, 1H), 6,52-6,71 (m, 3H), 6,88 (d, 2H), 7,09
(ancha s, 1H), 7,24 (d, 2H).
Se lleva a cabo la reacción por el mismo método
de la etapa 2 del ejemplo 48, excepto que como material de partida
se emplean 358 mg (0,81 mmoles) del compuesto obtenido en la etapa 1
del ejemplo 48 y 458 mg (2,43 mmoles) de sal HCl de la
3-nitrobencilamina en lugar de la
(3,4-dimetoxibencil)amina. Se purifica el
residuo por cromatografía a través de gel de sílice
(n-hexano: acetato de etilo = 1:2), obteniéndose 302
mg (rendimiento: 74%) del compuesto deseado.
RMN-H^{1} (CDCl_{3}, 200 MHz)
\delta = 1,18 (s, 3H), 3,43 (d, 6H), 4,09 (t, 1H), 4,49 (s, 1H),
5,00 (t, 1H), 5,85 (s, 1H), 6,98 (d, 1H), 7,29 (d, 1H), 7,37 (d,
1H), 7,40 (m, 2H), 7,91 (d, 1H), 8,05 (m, 2H).
Se lleva a cabo la reacción por el mismo método
de la etapa 2 del ejemplo 48, excepto que como material de partida
se emplean 443 mg (1,0 mmol) del compuesto obtenido en la etapa 1
del ejemplo 48 y 525 mg (3,0 mmoles) de la
(3-trifluormetil)bencilamina en lugar de la
(3,4-dimetoxibencil)amina. Se purifica el
residuo por cromatografía a través de gel de sílice
(n-hexano: acetato de etilo = 1:2), obteniéndose 497
mg (rendimiento: 95%) del compuesto deseado.
RMN-H^{1} (CDCl_{3}, 200 MHz)
\delta = 1,33 (s, 3H), 3,55 (s, 3H), 3,59 (s, 3H), 4,19 (d, 1H),
4,38 (s, 1H), 4,40 (m, 1H), 4,54 (d, 1H), 4,78 (m, 1H), 6,48 (ancha
s, 1H), 6,84 (ancha s, 1H), 6,94 (d, 1H), 7,53 (m, 5H), 8,09 (dd,
1H), 8,56 (s, 1H).
Se lleva a cabo la reacción por el mismo método
descrito en el ejemplo 49, excepto que como material de partida se
emplean 278 mg (0,53 mmoles) del compuesto obtenido en el ejemplo
53. Se purifica el residuo por cromatografía a través de gel de
sílice (n-hexano: acetato de etilo = 1:4),
obteniéndose 192 mg (rendimiento: 73%) del compuesto deseado.
RMN-H^{1} (CDCl_{3}, 200 MHz)
\delta = 1,23 (s, 3H), 3,39 (s, 6H), 4,16 (d, 1H), 4,31 (s, 1H),
4,40-4,67 (m, 3H), 5,53 (d, 1H),
6,57-6,74 (m, 3H), 7,31 (ancha t, 1H),
7,46-7,59 (m, 5H).
Etapa
1
Se lleva a cabo la reacción por el mismo método
descrito en la etapa 1 del ejemplo 48, excepto que como material de
partida se emplean 58 mg (0,18 mmoles) del compuesto obtenido en el
ejemplo de obtención 9. Se purifica el residuo por cromatografía a
través de gel de sílice (n-hexano: acetato de etilo
= 1:2), obteniéndose 64 mg (rendimiento: 74%) del compuesto
deseado.
Etapa
2
La reacción se lleva a cabo por el mismo método
descrito en la etapa 2 del ejemplo 48, excepto que se emplean 64 mg
(0,13 mmoles) del compuesto obtenido en la anterior etapa 1 y 28
\mul (0,26 mmoles). Se purifica el residuo por cromatografía a
través de gel de sílice (n-hexano: acetato de etilo
= 1:1), obteniéndose 32 mg (rendimiento: 49%) del compuesto
deseado.
RMN-H^{1} (CDCl_{3}, 200 MHz)
\delta = 1,28 (s, 1H), 3,21 (s, 3H), 3,58 (s, 3H), 3,59 (s, 3H),
4,15 (m, 1H), 4,35 (s, 1H), 4,52 (m, 1H), 4,63 (m, 1H), 5,45 (d,
1H), 6,87 (d, 1H), 6,92 (ancha s, 1H), 7,20-7,42 (m,
6H).
Etapa
1
Se lleva a cabo la reacción por el mismo método
descrito en la etapa 1 del ejemplo 55, excepto que como material de
partida se emplean 63 mg (0,19 mmoles) del compuesto obtenido en el
ejemplo de obtención 10. Se purifica el residuo por cromatografía a
través de gel de sílice (n-hexano: acetato de etilo
= 1:2), obteniéndose 75 mg (rendimiento: 79%) del compuesto
deseado.
Etapa
2
La reacción se lleva a cabo por el mismo método
descrito en la etapa 2 del ejemplo 55, excepto que se emplean 75 mg
(0,15 mmoles) del compuesto obtenido en la anterior etapa 1 y 28
\mul (0,26 mmoles). Se purifica el residuo por cromatografía a
través de gel de sílice (n-hexano: acetato de etilo
= 1:2), obteniéndose 57 mg (rendimiento: 74%) del compuesto
deseado.
RMN-H^{1} (CDCl_{3}, 200 MHz)
\delta = 1,26 (s, 3H), 3,16 (s, 3H), 3,41 (s, 3H), 3,47 (s, 3H),
3,72 (d, 1H), 4,43 (s, 1H), 4,46 (d, 1H), 5,02 (t, 1H), 5,25 (d,
1H), 6,59 (t, 1H), 6,84 (d, 1H), 7,02-7,20 (m, 2H),
7,22-7,40 (m, 4H).
La reacción se lleva a cabo por el mismo método
descrito en el ejemplo 49 excepto que como material de partida se
emplean 884 mg (1,94 mmoles) del compuesto obtenido en el ejemplo
24. Se purifica el residuo por cromatografía a través de gel de
sílice (n-hexano: acetato de etilo = 1:3),
obteniéndose 3,13 mg (rendimiento: 38%) del compuesto deseado.
\newpage
RMN-H^{1} (CDCl_{3}, 500 MHz)
\delta = 1,41 (s, 3H), 1,75 (ancha s, 1H), 3,39 (s, 3H), 3,45 (s,
3H), 3,46 (d, 1H), 3,72 (d, 1H), 4,40 (s, 1H), 4,46 (d, 2H), 4,78
(d, 1H), 5,22 (m, 1H), 6,41 (m, 1H), 6,50 (m, 1H), 6,59 (d, 1H),
6,73 (m, 1H), 7,30-7,37 (m, 4H).
Se lleva a cabo la reacción por el mismo método
del ejemplo 49, excepto que como material de partida se emplean 1,2
g (2,7 mmol) del compuesto obtenido en el ejemplo 22. Se purifica el
residuo por cromatografía a través de gel de sílice
(n-hexano: acetato de etilo = 1:3), obteniéndose 547
mg (rendimiento: 48%) del compuesto deseado.
RMN-H^{1} (CDCl_{3}, 500 MHz)
\delta = 1,21 (s, 3H), 1,80 (ancha s, 2H), 3,57 (s, 3H), 3,58 (s,
3H), 4,10-4,13 (m, 1H), 4,20-4,38
(m, 1H), 4,31 (s, 1H), 4,48 (dd, 1H), 4,50 (dd, 1H), 5,60 (s, 1H),
6,58-6,79 (m, 2H), 7,28-7,37 (m,
6H).
Se lleva a cabo la reacción por el mismo método
del ejemplo 49, excepto que como material de partida se emplean 1,07
g (2,3 mmol) del compuesto obtenido en el ejemplo 23. Se purifica el
residuo por cromatografía a través de gel de sílice
(n-hexano: acetato de etilo = 1:2), obteniéndose 589
mg (rendimiento: 60%) del compuesto deseado.
RMN-H^{1} (CDCl_{3}, 500 MHz)
\delta = 1,41 (s, 3H), 1,75 (ancha s, 1H), 3,39 (s, 3H), 3,45 (s,
3H), 3,46 (d, 1H), 3,72 (d, 1H), 4,40 (s, 1H), 4,46 (d, 2H), 4,78
(d, 1H), 5,22 (m, 1H), 6,41 (m, 1H), 6,50 (m, 1H), 6,59 (d, 1H),
6,73 (m, 1H), 7,30-7,37 (m, 4H).
Etapa
1
Se lleva a cabo la reacción por el mismo método
de la etapa 1 del ejemplo 48, excepto que como material de partida
se emplean 400 mg (1,35 mmoles) del compuesto obtenido en el ejemplo
de obtención 11. Se purifica el residuo por cromatografía a través
de gel de sílice (n-hexano: acetato de etilo =
1:3), obteniéndose 400 mg (rendimiento: 67%) del compuesto
deseado.
RMN-H^{1} (CDCl_{3}, 200 MHz)
\delta = 1,40 (s, 3H), 3,2 (d, 1H), 3,81-3,92 (m,
4H), 4,69 (s, 1H), 5,15 (t, 1H), 6,98 (d, 1H),
7,15-7,42 (m, 5H), 8,12 (dd, 1H), 8,30 (d, 1H).
Etapa
2
Se lleva a cabo la reacción por el mismo método
de la etapa 2 del ejemplo 48 excepto que como material de partida se
emplean 400 mg (0,1 mmoles) del compuesto obtenido en la etapa 1
anterior y 0,3 ml (2,7 mmoles) de bencilamina en lugar de la
(3,4-dimetoxibencil)amina. Se purifica el
residuo por cromatografía a través de gel de sílice
(n-hexano : acetato de etilo = 1:2), obteniéndose
350 mg (rendimiento: 85%) del compuesto deseado.
RMN-H^{1} (CDCl_{3}, 200 MHz)
\delta = 1,35 (s, 3H), 3,95-4,15 (m, 4H), 4,49
(dd, 2H), 4,91 (t, 1H), 5,05 (s, 1H), 5,62 (s, 1H), 6,61 (t, 1H),
6,95 (d, 1H), 7,29-7,41 (m, 5H), 8,12 (dd, 1H), 8,21
(d, 1H).
Se lleva a cabo la reacción por el mismo método
del ejemplo 49, excepto que como material de partida se emplean 200
mg (0,44 mmoles) del compuesto obtenido en el ejemplo 60. Se
purifica el residuo por cromatografía a través de gel de sílice
(n-hexano: acetato de etilo = 1:3), obteniéndose 90
mg (rendimiento: 48%) del compuesto deseado.
RMN-H^{1} (CDCl_{3}, 200 MHz)
\delta = 1,24 (s, 3H), 3,92-4,14 (m, 4H), 4,45
(dd, 2H), 4,97 (s, 1H), 5,51 (d, 1H), 6,45-6,80 (m,
3H), 7,12 (s, 1H), 7,25-7,42 (m, 3H).
Etapa
1
Se lleva a cabo la reacción por el mismo método
de la etapa 1 del ejemplo 60, excepto que como material de partida
se emplean 700 mg (2,26 mmoles) del compuesto obtenido en el ejemplo
de obtención 12. Se purifica el residuo por cromatografía a través
de gel de sílice (n-hexano: acetato de etilo =
1:1), obteniéndose 840 mg (rendimiento: 83%) del compuesto
deseado.
Etapa
2
Se lleva a cabo la reacción por el mismo método
de la etapa 2 del ejemplo 48 excepto que como material de partida se
emplean 840 mg (1,85 mmoles) del compuesto obtenido en la etapa 1
anterior y 0,61 ml (5,56 mmoles) de bencilamina en lugar de la
(3,4-dimetoxibencil)amina. Se purifica el
residuo por cromatografía a través de gel de sílice
(n-hexano: acetato de etilo = 1:2), obteniéndose 750
mg (rendimiento: 87%) del compuesto deseado.
RMN-H^{1} (CDCl_{3}, 200 MHz)
\delta = 1,31 (s, 3H), 1,4-1,52 (m, 1H),
2,13-2,26 (m, 1H), 3,80-3,98 (m,
2H), 4,18-4,31 (m, 3H), 4,45 (dd, 2H), 4,75 (s, 1H),
4,81 (t, 1H), 5,81 (s, 1H), 6,75 (t, 1H), 6,96 (d, 1H),
7,28-7,40 (m, 5H), 8,1 (dd, 1H), 8,35 (d, 1H).
Se lleva a cabo la reacción por el mismo método
del ejemplo 49, excepto que como material de partida se emplean 350
mg (0,75 mmoles) del compuesto obtenido en el ejemplo 62. Se
purifica el residuo por cromatografía a través de gel de sílice
(n-hexano: acetato de etilo = 1:2), obteniéndose 278
mg (rendimiento: 85%) del compuesto deseado.
RMN-H^{1} (CDCl_{3}, 200 MHz)
\delta = 1,23 (s, 3H), 1,40-1,50 (m, 1H),
2,12-2,22 (m, 1H), 3,8-3,96 (m, 2H),
4,15-4,32 (m, 3H), 4,48 (dd, 2H), 4,70 (s, 1H), 5,41
(d, 1H), 6,52-6,71 (m, 3H), 7,15 (s, 1H),
7,30-7,39 (m, 5H).
Etapa
1
Se lleva a cabo la reacción por el mismo método
de la etapa 1 del ejemplo 60, excepto que como material de partida
se emplean 1,1 g (3,60 mmoles) del compuesto obtenido en el ejemplo
de obtención 13. Se purifica el residuo por cromatografía a través
de gel de sílice (n-hexano: acetato de etilo =
1:2), obteniéndose 1 g (rendimiento: 86%) del compuesto deseado.
Etapa
2
Se lleva a cabo la reacción por el mismo método
de la etapa 2 del ejemplo 48 excepto que como material de partida se
emplea 1 g (2,1 mmoles) del compuesto obtenido en la etapa 1
anterior. Se purifica el residuo por cromatografía a través de gel
de sílice (n-hexano: acetato de etilo = 1:2),
obteniéndose 900 mg (rendimiento: 87%) del compuesto deseado.
RMN-H^{1} (CDCl_{3}, 200 MHz)
\delta = 0,78 (s, 3H), 1,21 (s, 3H), 1,34 (s, 3H), 3,54 (dd, 2H),
3,76 (d, 2H), 4,20 (d, 2H), 4,44 (dd, 2H), 4,65 (s, 1H), 4,81 (t,
1H), 5,82 (s, 1H), 6,72 (t, 1H), 6,96 (d, 1H),
7,29-7,41 (m, 5H), 8,11 (dd, 1H), 8,38 (d, 1H).
Se lleva a cabo la reacción por el mismo método
del ejemplo 49 excepto que como material de partida se emplean 400
mg (0,81 mmoles) del compuesto obtenido en el ejemplo 64. Se
purifica el residuo por cromatografía a través de gel de sílice
(n-hexano: acetato de etilo = 1:3), obteniéndose 350
mg (rendimiento: 93%) del compuesto deseado.
RMN-H^{1} (CDCl_{3}, 200 MHz)
\delta = 0,79 (s, 3H), 1,21 (s, 3H), 1,27 (s, 3H), 3,51 (dd, 2H),
3,74 (d, 2H), 4,2 (d, 1H), 4,35 (d, 1H), 4,51 (dd, 2H), 4,61 (s,
1H), 4,73 (s, 1H), 5,44 (dd, 1H), 6,52-6,75 (m, 3H),
7,16 (s, 1H), 7,28-7,41 (m, 5H).
Etapa
1
Se lleva a cabo la reacción por el mismo método
de la etapa 1 del ejemplo 48 excepto que como material de partida se
emplean 234 mg (0,72 mmoles) del compuesto obtenido en el ejemplo de
obtención 14. Se purifica el residuo por cromatografía a través de
gel de sílice (n-hexano: acetato de etilo = 1:2),
obteniéndose 237 mg (rendimiento: 70%) del compuesto deseado.
Etapa
2
Se lleva a cabo la reacción por el mismo método
de la etapa 2 del ejemplo 48 excepto que como material de partida se
emplean 217 mg (0,46 mmoles) del compuesto obtenido en la anterior
etapa 1. Se purifica el residuo por cromatografía a través de gel de
sílice (n-hexano: acetato de etilo = 1:2),
obteniéndose 200 mg (rendimiento: 90%) del compuesto deseado.
RMN-H^{1} (CDCl_{3}, 200 MHz)
\delta = 1,29 (m, 9H), 3,74 (m, 5H), 4,20 (d, 1H), 4,50 (m, 3H),
4,83 (ancha s, 1H), 5,92 (m, 1H), 6,52 (m, 1H), 6,90 (d, 1H), 7,34
(m, 5H), 8,11 (dd, 1H), 8,30 (s, 1H).
Se lleva a cabo la reacción por el mismo método
del ejemplo 49 excepto que como material de partida se emplean 122
mg (0,25 mmoles) del compuesto obtenido en el ejemplo 66. Se
purifica el residuo por cromatografía a través de gel de sílice
(n-hexano: acetato de etilo = 1:3), obteniéndose 91
mg (rendimiento: 80%) del compuesto deseado.
RMN-H^{1} (CDCl_{3}, 200 MHz)
\delta = 1,25 (m, 9H), 3,78 (m, 4H), 4,18 (d, 1H), 4,30 (m, 4H),
5,53 (d, 1H), 6,68 (m, 3H), 7,18 (ancha, 1H), 7,36 (m, 5H).
Etapa
1
Se lleva a cabo la reacción por el mismo método
de la etapa 1 del ejemplo 48 excepto que como material de partida se
emplean 399 mg (1,28 mmoles) del compuesto obtenido en el ejemplo de
obtención 15. Se purifica el residuo por cromatografía a través de
gel de sílice (n-hexano: acetato de etilo = 1:2),
obteniéndose 397 mg (rendimiento: 68%) del compuesto deseado.
Etapa
2
Se lleva a cabo la reacción por el mismo método
de la etapa 2 del ejemplo 48 excepto que como material de partida se
emplean 397 mg (0,93 mmoles) del compuesto obtenido en la anterior
etapa 1 y 0,21 ml (1,98 mmoles) de bencilamina. Se purifica el
residuo por cromatografía a través de gel de sílice
(n-hexano: acetato de etilo = 1:2), obteniéndose 270
mg (rendimiento: 67%) del compuesto deseado.
RMN-H^{1} (CDCl_{3}, 200 MHz)
\delta = 1,21 (s, 3H), 3,55 (d, 6H), 3,86 (s, 3H), 4,13 (d, 1H),
4,17 (s, 1H), 4,48 (m, 2H), 5,77 (d, 1H), 6,83 (m, 1H), 6,85 (d,
1H), 7,33 (m, 4H), 7,93 (dd, 1H), 7,99 (s, 1H).
Etapa
1
Se lleva a cabo la reacción por el mismo método
de la etapa 1 del ejemplo 48 excepto que como material de partida se
emplean 121 mg (0,39 mmoles) del compuesto obtenido en el ejemplo de
obtención 16. Se purifica el residuo por cromatografía a través de
gel de sílice (n-hexano: acetato de etilo = 1:2),
obteniéndose 131 mg (rendimiento: 74%) del compuesto deseado.
Etapa
2
Se lleva a cabo la reacción por el mismo método
de la etapa 2 del ejemplo 48 excepto que como material de partida se
emplean 131 mg (0,31 mmoles) del compuesto obtenido en la anterior
etapa 1 y 60 \mul (0,61 mmoles) de bencilamina. Se purifica el
residuo por cromatografía a través de gel de sílice
(n-hexano: acetato de etilo = 1:2), obteniéndose 107
mg (rendimiento: 79%) del compuesto deseado.
RMN-H^{1} (CDCl_{3}, 200 MHz)
\delta = 1,26(s, 3H), 3,43 (d, 6H), 3,82 (d, 1H), 3,77 (s,
3H), 4,45 (s, 1H), 4,48 (m, 2H), 5,64 (d, 1H), 6,81 (m, 1H), 6,83
(d, 1H), 7,29 (m, 4H), 7,80 (dd, 1H), 7,84 (s, 1H).
Etapa
1
Se lleva a cabo la reacción por el mismo método
de la etapa 1 del ejemplo 48 excepto que como material de partida se
emplean 0,97 g (3,24 mmoles) del compuesto obtenido en el ejemplo de
obtención 17. Se purifica el residuo por cromatografía a través de
gel de sílice (n-hexano: acetato de etilo = 1:2),
obteniéndose 1,16 g (rendimiento: 81%) del compuesto deseado.
Etapa
2
Se lleva a cabo la reacción por el mismo método
de la etapa 2 del ejemplo 48 excepto que como material de partida se
emplean 1,16 g (2,6 mmoles) del compuesto obtenido en la anterior
etapa 1 y 0,85 ml (7,8 mmoles) de bencilamina. Se purifica el
residuo por cromatografía a través de gel de sílice
(n-hexano: acetato de etilo = 1:2),
obteniéndose
0,94 g (rendimiento: 79%) del compuesto deseado en forma de mezcla racémica de estereoquímica (2S, 3S, 4R) y (2R, 3S, 4R).
0,94 g (rendimiento: 79%) del compuesto deseado en forma de mezcla racémica de estereoquímica (2S, 3S, 4R) y (2R, 3S, 4R).
RMN-H^{1} (CDCl_{3}, 200 MHz)
\delta = 1,23 (s, 3H), 1,32 (s, 3H), 3,37-3,40 (s,
3H), 3,48 (s, 3H), 3,84-3,87 (d, 1H),
4,17-4,21 (d, 1H), 4,36-4,38 (d,
1H), 4,41-4,45 (d, 1H), 4,8 (t, 1H), 5,04 (t, 1H),
5,82 (d, 1H), 6,09 (d, 1H), 6,82-6,96 (m, 2H), 7,27
(s, 5H), 7,57-7,69 (q, 1H).
Se lleva a cabo la reacción por el mismo método
del ejemplo 49, excepto que como material de partida se emplean 298
mg (0,66 mmoles) de la mezcla racémica obtenida en el ejemplo 70. Se
purifica el residuo por cromatografía a través de gel de sílice
(n-hexano: acetato de etilo = 1:4), obteniéndose 117
mg (rendimiento: 42%) del compuesto deseado de estereoquímica (2S,
3S, 4R).
RMN-H^{1} (CDCl_{3}, 200 MHz)
\delta = 1,25 (s, 3H), 3,58 (s, 3H), 3,8 (s, 1H),
4,39-4,47 (m, 4H), 5,62 (d, 1H),
6,58-6,61 (d, 1H), 6,74-6,78 (d,
1H), 7,12 (s, 1H), 7,27-7,34 (m, 5H).
Se lleva a cabo la reacción por el mismo método
del ejemplo 49, excepto que como material de partida se emplean 298
mg (0,66 mmoles) de la mezcla racémica obtenida en el ejemplo 70. Se
purifica el residuo por cromatografía a través de gel de sílice
(n-hexano: acetato de etilo = 1:4), obteniéndose 106
mg (rendimiento: 38%) del compuesto deseado de estereoquímica (2R,
3S, 4R).
RMN-H^{1} (CDCl_{3}, 200 MHz)
\delta = 1,46 (s, 3H), 3,41 (s, 3H), 3,46 (s, 3H),
3,73-3,81 (m, 2H), 4,44 (s, 1H), 4,46 (s, 1H), 4,87
(m, 1H), 5,2 (m, 1H), 6,59-6,60 (d, 1H),
6,63-6,76 (t, 2H), 7,26-7,36 (m,
5H).
Los compuestos obtenidos en los ejemplos
anteriores se presentan en la tabla 1 en forma de lista.
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(Tabla pasa a página
siguiente)
Los siguientes ensayos se realizan con los
compuestos de la fórmula 1 para investigar sus propiedades
farmacológicas.
Ejemplo experimental
1
El experimento siguiente se realiza para
determinar si los compuestos de la fórmula 1 dilatan los vasos
sanguíneos.
Se golpean ratas Sprague-Dawley
(350-450 g, adquiridas del Experimental Animal Team
del Instituto de Investigación de Tecnología Química de Corea) en la
región occipital, quedando inconscientes, seguidamente se sacrifican
por dislocación cervical y se someten a toracotomía. Se extrae con
gran rapidez la arteria aorta torácica, se le quita el tejido
adiposo y se corta en anillos aórticos de 3 mm de anchura. Se frota
ligeramente la aorta con un bastoncito de algodón impregnado con
tampón de Krebs Henseleit modificado (solución salina fisiológica,
SSF) para sacar la capa epitelial de la misma. Se suspende el tejido
vascular en un baño de órganos que contiene un tampón fisiológico,
se deja que se equilibre en una tensión de reposo de 2 g y después
se deja en reposo a 37ºC durante 1 hora para que se estabilice con
un suministro de un carbógeno que contiene un 95% de O_{2} y un 5%
de CO_{2}.
A continuación se constriñe del tejido vascular
con fenilefrina 10^{-5} M y se lava varias veces con SSF. Este
procedimiento se repite varias veces para asegurar una reactividad
estable del músculo liso vascular frente a la
constricción/dilatación repetitivas.
Se utiliza además metoxamina 3 x 10^{-6} M para
inducir una constricción intensa del músculo liso vascular. Cuando
la vasoconstricción inducida por la metoxamina alcanza y mantiene su
máximo se añaden compuestos de ensayo y controles (sin compuestos de
ensayo) de forma acumulada a los baños de órganos en concentraciones
de 1, 3, 10 y 30 \muM con el fin de inducir la vasodilatación.
Como controles se emplean la cromacalima y el
BMS-180448 (compuestos de la fórmula química 2),
conocidos ambos por representar la primera generación de activadores
K_{ATP} de potentes efectos vasodilatadores y
cardioprotectores.
Después de la adición de los fármacos se calcula
el cambio en la constricción máxima inducida por la metoxamina para
poder trazar una curva de respuesta
concentración-dilatación. Mediante un análisis de
regresión lineal, se obtiene para cada fármaco el valor IC_{50},
que es la concentración de fármaco en la que el tejido vascular se
dilata un 50%. Los resultados se recogen en la siguiente tabla
2.
La cromacalima tiene una IC_{50} de 0,067
\muM y despliega un potente efecto dilatador en la aorta aislada
de rata, estrangulada con metoxamina (3 \muM), mientras que el
BMS-180 448 tiene una IC_{50} de 1,38 \muM, es
decir presenta una actividad vasodilatadora veinte veces menor que
la cromacalima. Por otro lado, los compuestos de la presente
invención se sitúan, en cuanto a IC_{50}, entre 9,78 \muM y más
de 30 \muM, de modo que sus efectos vasodilatadores son muy
pequeños, incluso menores que los de los controles, la cromacalima y
el BS-180448.
Cuando ejercen su acción sobre el K_{ATP}
presente en el corazón, los compuestos según la presente invención
despeñan un papel protector del corazón. Por otro lado, los
derivados de benzopiranil-guanidina que actúan sobre
el K_{ATP} presente en los vasos sanguíneos periféricos dilatan
dichos vasos sanguíneos, disminuyendo la presión sanguínea. Por
consiguiente, los compuestos de la presente invención tienen
efectos cardioprotectores en virtud de su baja actividad
vasodilatadora.
Tal como se ha ilustrado anteriormente, los
compuestos de la presente invención tienen una actividad dilatadora
de vasos sanguíneos tan baja que resultan mejorados en lo referente
a selectividad de función protectora cardíaca.
Ejemplo experimental
2
Con el fin de determinar si los compuestos de la
fórmula 1 protegen contra la isquemia cardíaca se realizan los
ensayos siguientes para determinar los efectos antiisquémicos de los
compuestos sobre las ratas.
Se anestesian ratas macho
(350-450 g, obtenidas del Equipo de Experimentos
Animales del Instituto de Investigación de Tecnología Química de
Corea) mediante inyección intraperitoneal de pentobarbital en una
dosis de 75 mg/kg. Se practica traqueotomía a las ratas, haciendo
que respiren artificialmente a razón de 60 respiraciones/min y con
un volumen respirado de 10 ml/kg. Se insertan cánulas en la vena
femoral y en la arteria femoral para la administración de fármacos y
para la medición de la presión sanguínea, respectivamente.
En los modelos de lesión isquémica de miocardio,
la temperatura corporal tiene una influencia importancia en los
resultados. Para evitar el cambio en la temperatura corporal se
inserta una sonda de medición de temperatura corporal en el recto de
cada rata y se mantiene la temperatura corporal constante en 37ºC
mediante una unidad de control homeotérmico de tipo manta
eléctrica.
Después, durante el ensayo, se realiza una
medición continua de la presión sanguínea arterial media y del
número de pulsaciones de las ratas. Para medir la presión sanguínea
se emplea un transductor de presión, por ejemplo el fabricado por la
empresa Grass Ins., MA, EE.UU., en concreto el modelo Statham P23XL.
El número de pulsaciones cardíacas se mide con un tacómetro, por
ejemplo el fabricado por Gould Inc., OH, EE.UU., en concreto el
modelo Biotachometer. Se registran además en continuo todos los
cambios que surgen mediante el registro gráfico Gould 2000,
fabricado por la empresa Gould Inc.
Se ocluye la arteria coronaria izquierda con
arreglo al método de Selye H., que se describe a continuación. Se
someten las ratas a una operación de toracotomía izquierda, con
abertura parcial del pecho y se presuriza la parte derecha del pecho
y con el dedo corazón de la mano izquierda se empuja el corazón
hacia el exterior. Inmediatamente después se cose con mucho cuidado
la arteria coronaria anterior descendente izquierda (que en lo
sucesivo se nombrará como LAD) empleando una aguja de sutura con
ligadura de seda 5-0, después se vuelve a colocar el
corazón en su sitio dentro de la cavidad torácica, mientras los dos
extremos de la ligadura quedan situados fuera. Los extremos opuestos
de la ligadura se pasan a través de un tubo de PE (PE 100, 2,5 cm) y
se dejan sueltos durante 20 min para que se estabilicen. A través de
la cánula insertada en la vena femoral se administran excipientes o
fármacos a las ratas, que se dejan en reposo durante 30 min con el
fin de deducir en grado suficiente las eficacias de los fármacos.
Como fármaco control se emplea el BMS-180448 y la
dosis de administración i.v. es de 0,3 mg/kg para todos los fármacos
experimentales de interés y para el fármaco de control.
A continuación se empuja hacia el corazón el tubo
de PE, que tiene las dos hebras de la ligadura que pasan por su
interior, y después se coloca en posición vertical empujando las
regiones terminales de la ligadura una contra otra con una pinza
hemostática, al tiempo que se presiona la arteria coronaria. Se deja
el tubo de PE en reposo durante 45 min para ocluir la arteria
coronaria, después se retira la pinza hemostática y después se deja
en reperfusión durante 90 min.
Después de la reoclusión de la arteria coronaria
con arreglo al procedimiento anterior se administran a las ratas 2
ml de azul de Evans al 1% por vía intravenosa. A continuación se
inyecta a las ratas un exceso de pentobarbital por vía intravenosa
para matarlas, después se les extrae el corazón y a continuación se
quita el ventrículo derecho y los dos atrios. Se corta el ventrículo
izquierdo en sentido horizontal con respecto al ápice del corazón,
obteniéndose 5 ó 6 lonchas que se pesan. De la superficie de cada
loncha se introducen imágenes mediante un aparato
Hi-scope en un ordenador provisto de un programa de
análisis de imágenes (Image Pro Plus). A partir de las imágenes
introducidas en el ordenador se mide el área de la región de tejido
con riego sanguíneo normal que aparece azul en el monitor del
ordenador y el área que aparece sin color. Se calcula el cociente
del área sin color con respecto al área total de cada loncha y se
multiplica por el peso de cada loncha para determinar el área de
riesgo (AAR) de cada loncha. Se suma el AAR obtenida en cada loncha
y el total de las AAR de todas las lonchas se divide por el peso
total del ventrículo izquierdo, obteniéndose el % de AAR, tal como
se indica en la siguiente fórmula matemática 1.
Fórmula matemática
1
% \ de \ AAR \ =
\frac{\Sigma \ AAR \ de \ cada \ loncha}{\text{peso total del
ventrículo
izquierdo}}
Por otro lado se incuban las lonchas de corazón a
37ºC durante 15 min en tampón fosfato de cloruro de
2,3,5-trifeniltetrazolio (TTC) (pH 7,4) y se fijan
durante 20-24 horas en una solución de formalina al
10%. Durante la fijación se reduce el cloruro de
2,3,5-trifeniltetrazolio a colorante formazano por
acción de la deshidrogenasa de miocardio y su cofactor NADH, de modo
que las regiones normales de tejido adquieren un color rojo
ladrillo. A diferencia de ello, las zonas infartadas del tejido son
deficientes en la deshidrogenasa y en su cofactor, de modo que no se
produce la reducción del 2,3,5-trifeniltetrazolio,
permitiendo que el color quede inalterado.
En función de si las regiones de tejido están
coloreadas con 2,3,5-trifeniltetrazolio, se realiza
una medición de las áreas de las zonas normales y de las zonas
infartadas de cada loncha de ventrículo. Se suman las áreas de cada
zona infartada de cada loncha y las sumas de zonas infartadas
resultantes se dividen por el peso total AAR o por el peso total del
ventrículo izquierdo para obtener el % de IZ, del modo indicado en
la siguiente fórmula matemática 2.
Fórmula matemática
2
IZ (%) = \frac{\Sigma \ área
\ de \ la \ región \ infartada \ de \ cada \ loncha}{\text{peso del
ventrículo total o del total
AAR}}
En este modelo experimental se constata que
algunos de los fármacos ensayados tienen una actividad antiisquémica
más potente a medida que el % de IZ disminuye. Los resultados se
recogen en la anterior tabla 2.
En el modelo de lesión isquémica de miocardio de
las ratas anestesiadas, según se observa en la tabla 2, el grupo al
que se administra solo el excipiente muestra una proporción entre
infarto de miocardio y área de riesgo (IZ/AAR) del 60,78%, que
indica una lesión seria del músculo miocardio. Cuando se mide un
grado de infarto de miocardio del 39,14%, el
BMS-180448 despliega una actividad antiisquémica
notable. Cuando se compara solamente el grado de infarto de
miocardio, los compuestos de la presente invención son similares o
mejores que el BMS-180448. Sin embargo, por el hecho
de que los compuestos de la presente invención tienen una actividad
vasodilatadora notablemente menor que el BMS-180448,
resultan muy superiores al fármaco convencional en actividad
antiisquémica selectiva del corazón. En especial el compuesto del
ejemplo 40 presenta una actividad vasodilatadora muy baja (IC_{50}
> 30 \muM), con un grado de infartos de miocardio bajo, del
orden del 30,25%, de modo que presenta una selectividad cardíaca
mucho mejor en cuanto a vasodilatación que el
BMS-180448. Además, los compuestos de la presente
invención no reducen la presión sanguínea. Por consiguiente, los
compuestos de la presente invención pueden utilizarse como agentes
para el tratamiento de las enfermedades isquémicas cardíacas gracias
a su excelente actividad protectora contra las enfermedades
cardiovasculares isquémicas.
Ejemplo experimental
3
Con el fin de determinar si los compuestos de la
fórmula 1 son protectores de corazones isquémicos de animales de
mayor tamaño se llevan a cabo ensayos para determinar los efectos
antiisquémicos de los compuestos en perros beagle del modo
siguiente. Los ensayos realizados con perros beagle se ajustan al
método de Grover y col. (G.J. Grover y col., J. Cardiovasc.
Pharmacol. 25, 40 (1995)).
Después de la anestesia por inyección intravenosa
de una dosis de pentobarbital de 35 mg/kg se administra además a los
perros beagle machos (8-12 kg) una dosis posterior
de pentobarbital de 3-4 mg/kg por la vena cefálica
derecha a lo largo de los ensayos, de modo que la anestesia se
mantenga constante. Para mantener la respiración durante el ensayo
se inserta un catéter traqueal en el tracto respiratorio de cada
perro beagle, después de lo cual se mantienen respirando con
respiración asistida, mediante un respirador por ejemplo el
fabricado por CWE Inc., PA, EE.UU., del modelo
SAR-830, mientras se mantiene la presión de CO_{2}
en 30-35 mm de Hg utilizando aire ambiental y
suministrando oxígeno. Cada hora se extraen 0,5 ml de sangre a
través del catéter insertado en la arteria femoral, que se utilizan
para medir la concentración de oxígeno en la sangre mediante un
aparato como el fabricado por Ciba-Corning, NA,
EE.UU., del modelo Blood Gas Analyser 280. Con el seguimiento de la
temperatura, medida en el recto, se mantiene constante la
temperatura corporal de los animales experimentales (38ºC)
controlando la temperatura de las mesas de laboratorio en las que
yacen los animales. Con el fin de medir la presión sanguínea y las
pulsaciones del corazón se inserta un catéter heparinizado en la
arteria femoral derecha. Para medir la presión sanguínea se utiliza
un transductor de presión, por ejemplo el fabricado por Grass Ins.,
MA. EE.UU., correspondiente al modelo Statham P23XL. Las pulsaciones
del corazón se miden con un tacómetro, por ejemplo el fabricado por
Gould Inc., OH, EE.UU., correspondiente al modelo Biotachometer. Se
registran además en continuo todos los cambios que surgen mediante
el registro gráfico Gould 2000, fabricado por la empresa Gould
Inc.
\newpage
Se practica una incisión en el quinto espacio
intercostal para abrir el tórax y se separa la LAD de los tejidos
que la envuelven. Se efectúa una ligadura de seda alrededor de la
LAD para ocluir después la LAD. La parte ascendente de la LAD de la
ligadura de seda se aísla de los tejidos adyacentes y se mide
cuantitativamente el flujo sanguíneo. Para ello se utiliza un
registro gráfico del tipo fabricado por MFE Ins., MA, EE.UU.,
correspondiente al modelo 1400 Thermal Chart Recorder. Empleando
registros gráficos polivalentes como el modelo 7E de Grass se
registra el electrocardiograma y se lee (toma II). Para efectuar la
infusión de los compuestos de interés a los perros beagle se inserta
un catéter en la vena cefálica izquierda y se fija. Después de la
operación, una vez se han estabilizado todos los parámetros, se
administran por vía intravenosa los compuestos a ensayar y los
excipientes.
Antes de la oclusión de la LAD se dividen los
animales experimentales en un grupo de control (PEG400) y un grupo
de administración de fármaco de ensayo (KR-31372, 50
\mug/kg/min). Diez minutos antes de la oclusión de la LAD se
empieza la infusión de los fármacos de ensayo por vía intravenosa.
La infusión de los fármacos de ensayo y del excipiente dura 40 min.
(dosis total 2 mg/kg, volumen total de PEG400: 4 ml o menos). Diez
min. después del inicio de la infusión se ocluye por completo la LAD
y pasado un período de 90 min se lleva a cabo la reperfusión para
mantener el riego coronario durante cinco horas. Pasadas 5 horas se
encanula la LAD para la reperfusión con una solución de Ringer a la
misma presión que la presión sanguínea.
Se inyecta en el atrio izquierdo una solución de
colorante azul-violeta (1 mg/kg, 10 mg/ml), después
de lo cual se somete el corazón a un choque eléctrico y se extrae.
Una vez extraídos los dos atrios, se cortan los ventrículos
transversalmente a 0,5 cm de distancia. Con una cámara digital se
toman fotografías de las secciones transversales de las lonchas de
ventrículo obtenidas. Para la medición del IZ se incuban las lonchas
de tejido a 37ºC durante 30 min en un tampón de fosfato de cloruro
de 2,3,5-trifeniltetrazolio al 1%, después se toman
fotografía de las secciones transversales con una cámara digital.
Con el programa analizador de imágenes (Image-Pro
Plus ver. 3.0.1, Media Cybernetics, Maryland, EE.UU.) se miden y
analizan las AAR y el IZ. El IZ se expresa en forma de porcentaje
con respecto a AAR (ver fórmula matemática 2). Los más valores bajos
de IZ indican efectos más potentes de los fármacos ensayados en el
modelo de perro beagle. Los resultados se indican en la anterior
tabla 2.
En los modelos de daño isquémico de miocardio de
perros beagle anestesiados, según se indica en la tabla 2, los
compuestos de la presente invención muestran valores
considerablemente menores de grado de infarto de miocardio en el
área de riesgo (AAR). En concreto, el grupo del excipiente
(disolvente) presenta un grado de infarto de miocardio con respecto
al área de riesgo (IZ/AAR) del 52,39%, que indica un daño grave en
el músculo miocardio. Al medirse un 38,02% en grado de infarto de
miocardio, el BMS-180448 presenta una buena
actividad antiisquémica. Por otro lado, cuando se administran los
compuestos de la presente invención, el grado de infarto de
miocardio disminuye hasta situarse en el 28,03% (compuesto del
ejemplo 24). Como es obvio, no se observa una reducción
significativa de la presión sanguínea después de administrar los
compuestos de la presente invención.
Tal como se ha descrito anteriormente, los
compuestos de la presente invención ejercen una excelente acción
antiisquémica en perros beagle, siendo dicha actividad
antiisquémica superior a la desplegada por el control
BMS-180448. Además, los compuestos de la presente
invención pueden utilizarse como agentes preventivos o curativos
contra las enfermedades relacionadas con los trastornos cardíacos
isquémicos.
Ejemplo experimental
4
Los ensayos siguientes se realizan para
determinar si los compuestos de la fórmula 1 evitan la muerte
neuronal inducida por el hierro.
Se aíslan neuronas corticales cerebrales de
cerebros de embriones de rata de 17-18 días de vida
y después se cultivan a 37ºC durante 7-9 días en un
incubador con un 5% de CO_{2}. Se lavan los cultivos de células
corticales dos veces con un medio esencial mínimo (MEM) para reducir
la concentración de suero al 0,2% y se tratan de forma previa
durante 30 min con 10 \muM y 30 \muM de cada uno de los
compuestos de ensayo. Para los ensayos se disuelven dichos
compuestos en DMSO y se diluyen en un medio. En este momento no se
permite que la concentración sea superior al 0,2%. En un grupo de
control se aplica únicamente el excipiente (vehículo).
Después del tratamiento previo con los compuestos
de ensayo o con el excipiente se añade FeSO_{4} hasta una
concentración final de 50 \muM y se mantienen los cultivos en un
incubador de CO_{2} durante 24 horas. Durante la incubación, la
muerte neuronal inducida por la toxicidad oxidante del hierro se
traduce en la liberación de lactato-deshidrogenasa
(LDH) al medio. La extensión del deterioro neuronal se evalúa
midiendo la cantidad de LDH secretada al medio. El efecto protector
de los compuestos de interés sobre las neuronas se evalúa calculando
el grado de reducción de la LDH en el grupo de tratamiento con
respecto al grupo de control. Los resultados se recogen en la
siguiente tabla 3.
Tal como se desprende de la tabla 3, los
compuestos de la presente invención protegen las neuronas del daño
causado por el hierro de modo dependiente de la dosis. El compuesto
del ejemplo 38 protege de la muerte neuronal en más del 56% incluso
en una concentración de 10 \muM. Además, el compuesto del ejemplo
40 presenta un grado de protección del 97% que demuestra que este
compuesto tiene una actividad protectora muy potente contra la
lesión neuronal inducida por el hierro.
Los compuestos de la presente invención muestran
excelentes efectos protectoras en las neuronas, por lo tanto pueden
utilizarse como agentes preventivos o curativos para el tratamiento
médico de los trastornos neurológicos provocados por el deterioro o
la muerte de las neuronas, por ejemplo la apoplejía cerebral y la
demencia así como para el tratamiento médico de enfermedades
inflamatorias, por ejemplo la artritis, el infarto cardíaco y la
lesión aguda/crónica de los tejidos.
Ejemplo experimental
5
Se realizan los ensayos siguientes con el fin de
determinar si los compuestos de la fórmula 1 evitan la peroxidación
de lípidos inducida por el hierro.
Se homogeneíza el cerebro de rata en un tampón
Krebs (15 mM de HEPES, 10 mM de glucosa, 140 mM de NaCl, 3,6 mM de
KCl, 1,5 mM de CaCl_{2}, 1,4 mM de KH_{2}PO_{4}, 0,7 mM de
MgCl_{2}, pH 7,4) y se utiliza el sobrenadante separado por
centrifugación a 12.000 rpm durante 10 min para los ensayos
posteriores. Se añade FeCl_{2} hasta una concentración final de
400 \muM al material homogeneizado de cerebro, que se deja en
reposo a 37ºC durante 30 min para facilitar la oxidación. Se añade
cada uno de los compuestos de ensayo en una concentración de 100
\muM y se utiliza el excipiente (vehículo) como control.
El hierro facilita la oxidación del homogeneizado
cerebral, produciendo el malonaldehído (MDA), un producto de
oxidación de lípidos. A continuación la peroxidación de lípidos se
determina por análisis cuantitativo del MDA. El efecto inhibidor de
los compuestos de ensayo con respecto a la peroxidación de lípidos
se evalúa calculando el grado de reducción del MDA de los compuestos
de ensayo frente al grado que presenta el grupo de control.
El análisis cuantitativo del MDA se lleva a cabo
por ejemplo haciendo reaccionar las muestras con ácido
2-tiobarbitúrico (TBA) y midiendo la absorbancia a
530 nm. Sin embargo, este método no es adecuado para tratar muestras
a gran escala porque incluye una etapa de ebullición. Por lo tanto
en este ensayo se ha utilizado el
N-metil-2-fenilindol
en lugar del TBA. En este caso, una molécula de MDA reacciona con
dos moléculas de
N-metil-2-fenilindol
para formar un cromógeno que presenta una absorbancia máxima en 586
nm y no requiere una etapa de ebullición. Para el análisis
cuantitativo del MDA se emplea el kit Bioxytech®
LPO-586. Los resultados se indican en la
siguiente
tabla 4a.
tabla 4a.
Tal como se desprende de la tabla 4a, los
compuestos de la presente invención evitan la peroxidación de
lípidos inducida por el hierro. En concreto, los compuestos de los
ejemplos 7, 32 y 40 despliegan una potente actividad inhibidora de
la peroxidación de lípidos inducida por el hierro, con efectos
inhibidores situados en el 70, 86 y 79%, respectivamente.
Se llevan a cabo los ensayos siguientes para
determinar si los compuestos de la fórmula 1 evitan la oxidación de
las LDL (lipoproteínas de baja densidad) inducida por el cobre.
Se disuelven LDL humanas (Sigma) en agua
destilada en una concentración de 1 mg/ml. Se dializan a 4ºC durante
18 h las LDL con tres cambios de solución tamponada con fosfato
antes de la oxidación para eliminar el EDTA
(etilendiamina-tetraacetato). Se incuban a 37ºC
durante 18 h las LDL libres de EDTA (100 \mug de proteínas LDL/ml)
en una solución tamponada con fosfato y exenta de EDTA en presencia
de CuSO_{4} (10 \muM), después de haber realizado un tratamiento
previo con los compuestos de ensayo o con tocoferol, cuyas
concentraciones finales son de 10^{-9}, 10^{-7} y 10^{-5} M.
Se incuba una muestra en blanco (sin CuSO_{4}) y se utiliza el
excipiente (vehículo) en el grupo de control. Se interrumpe la
oxidación a 4ºC por adición de EDTA (200 \muM).
El cobre (Cu^{+2}) facilita la oxidación de las
LDL, produciendo malonaldehído (MDA), por lo tanto se determina la
peroxidación de lípidos cuantificando el MDA del mismo modo que se
ha descrito en el apartado (1) del ejemplo 5. La cuantificación del
MDA se estima haciendo reaccionar las muestras con ácido
2-tiobarbitúrico (TBA) y midiendo la absorbancia a
530 nm. Como agente estándar se emplea el
1,1,3,3-tetrametoxipropano (Sigma) y se calcula la
cantidad de MDA en forma de nmoles de equivalentes de MDA por mg de
proteína. El efecto inhibidor de los compuestos de ensayo de la
peroxidación de lípidos se evalúa calculando el grado de reducción
del MDA de los compuestos de ensayo y comparándolo con el que
presenta el grupo de control. Los resultados se recogen en la
siguiente tabla 4b.
Tal como se desprende de la tabla 4b, el
compuesto del ejemplo 40 evita de modo significativo la oxidación de
las LDL inducida por el cobre, en una concentración de 10^{-7} y
de 10^{-5} M, que es similar a la del tocoferol.
Se realizan los ensayos siguientes para
determinar si los compuestos de la fórmula 1 evitan la oxidación de
las LDL (lipoproteínas de baja densidad) mediada por las A7r5.
Se cultivan células A7r5 (ATCC
CRL-1444, músculos lisos, aorta torácica, rata BDIX)
en placas de 24 hoyos, empleando el medio DMEM (medio Eagle
modificado con medio Dulbecco) suplementado con un 10% de FBS (suero
fetal bovino) inactivado por calor y un 1% de antibióticos. SE lavan
las células A7r5 confluentes con una solución tamponada con fosfato
y se añade DMEM con un 10% de FBS y un 1% de antibióticos en un
volumen total de 0,5 ml/hoyo. Se preincuban a 37ºC durante 30 min
las células (2 x 10^{5} células/ml) con o sin compuestos de ensayo
(10^{-6} - 10^{-4} M) o tocoferol (10^{-6} - 10^{-4} M). A
continuación se exponen las células A7r5 solas o las A7r5 más
H_{2}O_{2} (10^{-7} M) a las LDL (100 \mug/ml) durante 24
h.
Se evalúa el efecto inhibidor de los compuestos
de ensayo contra la peroxidación de lípidos calculando el grado de
reducción de MDA de los compuestos de ensayo frente al del grupo de
control según el método del apartado (2) del ejemplo 5. Los
resultados se indican en la siguiente tabla 4c.
Tal como se desprende de la tabla 4c, el
compuesto del ejemplo 40 y el tocoferol evitan de modo significativo
la oxidación de las LDL mediada por las A7r5 en todas las
concentraciones ensayadas. En especial, el compuesto del ejemplo 40
despliega una inhibición más significativa de la oxidación de las
LDL cuando se añade H_{2}O_{2}.
Con una actividad inhibidora excelente contra la
peroxidación de lípidos, según se ha visto en el ejemplo
experimental 5(1), (2) y (3) anteriores, los compuestos de la
presente invención pueden utilizarse para prevenir y tratar las
enfermedades neurodegenerativas, por ejemplo la apoplejía cerebral y
la demencia, las enfermedades inflamatorias, por ejemplo la
artritis, el infarto cardíaco y las lesiones agudas/crónicas de los
tejidos, que puedan ser debidas a la peroxidación de lípidos y su
acumulación en los tejidos.
Ejemplo experimental
6
Se realizan los ensayos siguientes con el fin de
determinar si los compuestos de la fórmula 1 inhiben la formación de
NO (óxido nítrico).
Se cultivan a 37ºC en un incubador del 5% de
CO_{2} empleando un medio RPMI1640 suplementado con un 10% de
suero fetal bovino (FBS) las células RAW264.7 (obtenidas de la
American Type Culture Collection), ATCC), que son una línea celular
de macrófago murino. Se recolectan las células RAW264.7 y se ajusta
la densidad celular a 5 x 10^{5}/ml con un medio RPMI suplementado
con un 0,5% de FBS y se depositan en las placas de 96 hoyos a razón
de 5 x 10^{4} células/hoyo, que seguidamente se cultivan en
incubador de CO_{2} durante 20 h. Una vez retirado el medio, las
células se someten a pretratamiento durante 1 hora con medio fresco
que contiene 33 \muM y 100 \muM de compuestos de ensayo. Se
disuelven los compuestos de ensayo en DMSO y se diluyen hasta la
concentración respectiva en el medio. Con el fin de minimizar el
efecto del DMSO en la formación de óxido nítrico por parte de las
células RAW264.7 en los hoyos, se procura que los medios contengan
DMSO en una concentración de 0,1% o menos.
Una vez finalizado el tratamiento previo de una
hora se añaden lipopolisacáridos (LPS, serotipo de E. coli
055:B5) para activar las células que, entonces, se mantienen en un
incubador de CO_{2} durante 24 horas. Como resultado de la
activación de las células RAW264.7 con LPS, se forma NO. El NO
liberado al medio tiene la forma de nitrito NO_{2}^{-} y se mide
cuantitativamente con el reactivo de Griess. Un control se trata
solamente con el excipiente (vehículo) en lugar de los compuestos de
ensayo. Empleando el patrón nitrito se constata que los fármacos de
ensayo por sí mismos no impiden la cuantificación del NO.
Los efectos inhibidores de los compuestos de
ensayo con respecto a la producción de NO se determinan en forma de
reducción de la cantidad de NO comparada con la del grupo de
control. Los resultados se indican en la siguiente tabla 5.
Tal como se indica en la tabla 5, los compuestos
de la presente invención muestran un comportamiento dependiente de
la dosis en la inhibición de la inducción de la producción de NO por
endotoxinas por ejemplo LPS. En especial, el compuesto del ejemplo
38 inhibe la producción de NO en un grado del 56% incluso en una
concentración tan baja como de 33 \muM. Además, 100 \muM de
compuestos de los ejemplos 7 y 32 tienen grados de inhibición de
hasta el 88% y 83%, respectivamente, indicando que los compuestos de
la presente invención ejercen una actividad inhibidora muy potente
contra la producción de NO inducida por la LPS.
Con una buena actividad inhibidora contra la
producción de NO, los compuestos de la presente invención pueden
utilizarse como agentes preventivos o curativos para el tratamiento
médico de trastornos neurológicos, tales como la apoplejía cerebral
y la demencia, que pueden deberse a la lesión o muerte neuronal
provocada por una cantidad grande de NO liberada y también para el
tratamiento médico de enfermedades inflamatorias, tales como la
artritis, el infarto cardíaco y la lesión aguda/crónica de
tejidos.
Ejemplo experimental
7
Los ensayos siguientes se realizan para
determinar si los compuestos de la fórmula 1 protegen contra la
lesión cerebral en caso de reperfusión isquémica cerebral.
Se anestesian ratas
Sprague-Dawley (350\pm50 g, Sam Yook Experimental
Animals Co., Corea) por inyección de pentobarbital sódico en una
dosis de 40 mg/kg, después de lo cual se inserta una cánula en la
vena y en la arteria femoral con PE-10 al tiempo que
se expone la arteria carótida izquierda. Cinco min. antes de la
operación se inyectan 20 \mug/kg de sulfato de heparina en la
cavidad peritoneal. Para la medición continua de la presión arterial
se inserta un dispositivo de medición de la presión sanguínea en la
arteria femoral. Se extraen 20 ml de sangre de la vena femoral para
reducir la presión sanguínea hasta 30 mm de Hg. Si la presión
sanguínea no se reduce hasta menos de 100 mm de Hg con la extracción
de 7 ml de sangre, se considera que las ratas tienen un tono
simpático alto. En tal caso, estas ratas no se excluyen de los
ensayos porque la presión sanguínea no puede reducirse a 30 mm de Hg
o, incluso cuando se logra reducir la presión sanguínea, las ratas
presentan una mortalidad elevada después de la operación.
Manteniendo la presión sanguínea en 30 mm de Hg,
se ocluye la arteria carótida izquierda expuesta durante 20 min con
una pinza de aneurismo para provocar la isquemia cerebral. A
continuación se quitan las pinzas carótidas y se reinfunde la sangre
extraída. Para minimizar la acidosis sistémica se reinfunde en las
ratas 5 ml de solución salina que contiene un 0,84% de bicarbonato
sódico (salina bicarbonatada). Durante la operación y el período de
recuperación se mantiene la temperatura corporal en 37\pm0,5ºC
mediante una alfombra térmica y bulbos de lámparas incandescentes.
Durante la recuperación de la operación, la temperatura corporal se
mantiene constante durante 2 horas o más. Una vez completada la
recuperación, las ratas se trasladan a un observatorio animal, que
se halla en condiciones homeostáticas en cuanto a temperatura
(27ºC), humedad (60%) y ciclo luminoso (12-12
horas).
Transcurridas 24 horas de la operación se
sacrifican las ratas con un andamio (cadalso) y se extrae
rápidamente el cerebro (3 min). Colocado sobre hielo, el cerebro se
corta en lonchas en seis secciones en forma de corona de 2 mm
mediante una matriz cerebral. Se tiñen a 37ºC durante 30 min las
secciones con una solución de un 2% de cloruro de
2,3,5-trifeniltetrazolio. Se toman fotografías de
las secciones teñidas, se revelan y se imprimen, se miden los
porcentajes de las áreas cerebrales infartadas con respecto a la
totalidad del cerebro y se analizan empleando un programa de
análisis por la imagen (Image-Pro Plus ver.
3.0.1).
30 min antes de la operación y 2, 4 y 16 horas
después de la oclusión de la arteria carótida se inyectan por vía
intraperitoneal los compuestos de ensayo en las ratas en una dosis
de 30 mg/kg. Para el control se inyecta el excipiente. Del compuesto
de referencia (MK801 (RBI, hidrogenomaleato de (5R,
10S)-(+)-5-metil-10,11-dihidro-5H-dibenzo[a,d]ciclohepteno-5,10-imina)
se administran 3 mg/kg en los mismos intervalos.
Los efectos protectores de los compuestos
ensayados en la lesión cerebral provocada por la reperfusión
isquémica cerebral se expresan en forma de porcentajes de reducción
de las áreas cerebrales infartadas, comparadas con las del grupo de
control. Los resultados se recogen en la siguiente tabla 6.
| *P<0,01 comparada con el grupo de control en el que se administra solamente el excipiente; DE = desviación |
| estándar. |
El grupo comparativo, en el que se administra a
las ratas solamente el MK801 en una dosis de 3 mg/kg, el área
infartada es del 29,8%, que se reduce en un 24,8% con respecto a la
del grupo de control. Por otro lado, en el grupo tratado con el
compuesto del ejemplo 40, el área infartada que se mide es del
23,0%, que se reduce en un 42,0% con respecto a la del grupo de
control. Además, el compuesto del ejemplo 40 es dos veces más eficaz
en cuanto a actividad protectora contra la lesión cerebral provocada
por la reperfusión isquémica cerebral que el compuesto convencional
MK801.
En el grupo tratado con MK801, las ratas
presentan un efecto secundario de baja motilidad, mientras que
cuando se les administra el compuesto del ejemplo 40, las ratas no
sufren ningún efecto secundario ni cambio de comportamiento, por
ejemplo ningún cambio de motilidad.
Por su excelente actividad protectora contra la
lesión cerebral inducida por la reperfusión isquémica, los
compuestos de la presente invención pueden utilizarse como agentes
preventivos o curativos para el tratamiento médico de trastornos
neurológicos, por ejemplo la apoplejía cerebral y la demencia, que
pueden ser debidas a la lesión cerebral, por ejemplo la oclusión
vascular cerebral inducida por trombos.
Ejemplo experimental
8
Se realizan los ensayos siguientes para
determinar si los compuestos de la fórmula 1 tienen efecto inhibidor
en la formación de nuevos vasos sanguíneos.
Como matriz para el crecimiento de vasos
sanguíneos se emplea una esponja de poliéster de dimensiones 5 mm x
12 mm de diámetro. Dentro de cada esponja se fija con un hilo un
tubo de polietileno de 5 mm de longitud. Se anestesian ratas
Sprague-Dawley por inyección intraperitoneal de
cloral hidratado en una dosis de 300 mg/kg. Se depila el pelo de la
rata de la región comprendida entre el cuello y el dorso y se
practica una incisión en las regiones depiladas en una longitud de
10 mm para asegurar un espacio hipodérmico suficiente para acomodar
la esponja. Después de insertada en el espacio hipodérmico se
asegura la esponja para que el tubo no se mueva. Excepto durante la
administración de los fármacos, el orificio del tubo se mantiene
cerrado con el fin de prevenir cualquier contaminación.
Se emplea angiotensina II para inducir la
angiogénesis. Para su aplicación se disuelve la angiotensina II en
una solución salina tamponada con fosfato (PBS). Se inyectan 50
\mul de una solución 100 nmolar. De igual manera, los compuestos
de la presente invención se disuelven en PBS y se inyectan en dosis
de 0,1, 0,3 y 1,0 mg/kg a través del tubo. En los grupos de control
se inyectan en las mismas dosis el excipiente PBS o la angiotensina
II sola. El efecto inhibidor de los compuestos de ensayo contra la
angiogénesis se mide pasados 7 días de la inyección.
El grado de angiogénesis en la esponja
trasplantada se determina por la corriente sanguínea midiendo la
eliminación del DTPA-Tc^{99m} (tecnecio-ácido
dietilentriaminapentaacético). Siete días después de la inyección de
los compuestos de ensayo se vuelven a anestesiar las ratas por
inyección intraperitoneal de cloral hidratado en una dosis de 30
mg/kg seguida por la inyección cuidadosa de 50 \mul de una
solución de DTPA-Tc^{99m} (0,5 mCi) en PBS
esterilizado a través del tubo. Se realiza la medición cuantitativa
del DTPA-Tc^{99m} durante 60 min. Mediante un
detector de centelleo de rayos gamma al tiempo que una cámara gamma,
por ejemplo una cámara gamma del tipo ADAC VERTEX/SOLUS, equipada
con una aparato de alta resolución y baja energía, se acciona para
obtener 60 fotografías de la esponja, cada una de las cuales
requiere 60 seg. La imagen continua obtenida se introduce en un
ordenador (Pegasus Sun Computer) para el análisis.
Se calcula la eliminación del
DTPA-Tc^{99m} con arreglo a la siguiente fórmula
matemática 3 y los resultados se recogen en la siguiente tabla
7a.
Fórmula matemática
3
eliminación \ de \
DTPA-Tc^{99m} \ (%) =\frac{radiactividad \ inicial -
radiactividad \ del \ 6^{o} \ minuto}{\text{radiactividad inicial}}
\ x \
100
- p.o. = por vía oral; A-II = angiotensina II
Tal como se desprende de los datos de la tabla
7a, la angiotensina II induce la formación de nuevos vasos
sanguíneos si se compara la eliminación de la
DTPA-Tc^{99m} entre el grupo de control al que se
administra PBS (30,3%) y el grupo de control al que se administra la
angiotensina II (44,71%). Cuando se administra en una dosis de 0,1
mg/kg, el compuesto del ejemplo 24 presenta una eliminación
DTPA-Tc^{99m} del 26,90%, lo cual demuestra
claramente el efecto inhibidor del compuesto contra la angiogénesis.
Además, la administración del compuesto del ejemplo 24 en dosis de
0,3 y 1,0 mg/kg se manifiesta en una eliminación de
DTPA-Tc^{99m} del 18,22% y del 3,38%,
respectivamente, que indican que el compuesto de la presente
invención inhibe la formación de nuevos vasos sanguíneos de un modo
dependiente de la dosis. En especial, una dosis de 1,0 mg/kg del
compuesto del ejemplo 24 se traduce en una supresión casi completa
de la angiogénesis inducida por la angiotensina II con una
eliminación del DTPA-Tc^{99m} muy baja, del orden
del 3,38%.
Se realizan los ensayos siguientes para
determinar si los compuestos de la fórmula 1 tienen efecto inhibidor
de la formación de nuevos vasos sanguíneos a nivel celular.
Se cultivan células HUVEC (Human umbilical vein
endothelial cells, ATCC CRL-1730) y se induce la
tubulogénesis en las células endoteliales vasculares colocándolas en
placas sobre una superficie de Matrigel durante varias horas. Se
comparan los efectos de formación de los compuestos de ensayo con
los de los grupos de control tratados con el excipiente (vehículo),
después se confirma indirectamente su actividad antiangiogénica
"in vitro". Los resultados se recogen en la tabla
7b.
Tal como se desprende de la tabla 7b, la
formación de tubos HUVEC se inhibe con una concentración de 10
\muM, y se inhibe fuertemente con una concentración de 100 \muM
de los compuestos de los ejemplos 2, 10, 40 y 52, de modo
dependiente de la dosis.
Por su excelente actividad inhibidora de la
angiogénesis, los compuestos de la presente invención pueden
aplicarse de modo útil en el tratamiento médico de varias
enfermedades inducidas por la angiogénesis, por ejemplo la artritis
reumatoide, la psoriasis, las complicaciones del SIDA, el cáncer, la
retinopatía diabética, etc.
Ejemplo experimental
9
Se llevan a cabo los ensayos siguientes para
determinar si los compuestos de la fórmula 1 inhiben la formación de
ROS intracelular inducida por H_{2}O_{2}.
La medición de la ROS intracelular (reactive
oxygen species) se realiza empleando el H_{2}DCFDA (diacetato de
2',7'-diclorodihidrofluoresceína, Molecular Probes,
Eugene, OR, EE.UU.). El H_{2}DCFDA es un compuesto no polar que se
difunde rápidamente en las células, en las que se hidroliza por
acción de la esterasa intracelular, dando lugar al derivado polar
H_{2}DCF (la 2',7'-diclorodihidrofluoresceína) que
no puede atravesar la membrana celular y por ello queda atrapado en
el interior de la célula. La H_{2}DCF tiene una fluorescencia
baja, pero se convierte en la DCF
(2',7'-diclorofluoresceína) de fluorescencia elevada
por acción de la ROS intracelular. Por consiguiente, la formación de
la ROS intracelular puede determinarse a partir de la cantidad de
DCF formada. Se emplean las células HUVEC (human umbilical vascular
endothelial cells) o las A7r5 (rat thoracic aorta smooth muscle
cells). Se cultivan las HUVEC en medio Kaighn's F12K suplementado
con un 10 % de FBS inactivado con calor, 0,1 mg/ml de heparina
sódica, 0,03-0,05 mg/ml de ECGS (endothelial cell
growth supplement) y un 1% de antibióticos y las células A7r5 se
cultivan en DMEM suplementado con un 10% de FBS inactivado con calor
y un 1% de antibióticos. Para determinar la ROS intracelular se
preincuban las células HUVEC o A7r5 durante 30 min en presencia de
los compuestos de ensayo (10^{-7}-10^{-5} M). A
continuación se estimulan las células con H_{2}O_{2} (10^{-6}
y 10^{-5} M durante 20 min) y seguidamente se incuban a 37ºC en
la oscuridad durante 2 h en tampón fosfato 50 mM (pH 7,4) que
contiene 5 \muM de H_{2}DCFDA. Se mide la cantidad de
fluorescencia DCF (excitación: 485 nm, emisión: 530 nm) mediante un
lector de fluorescencia de placas (FL600, Biotek Instruments). Se
recogen los resultados en la tabla 8.
Tal como se desprende de la tabla 8, el compuesto
del ejemplo 40 inhibe la especie ROS inducida por H_{2}O_{2} en
las células HUVEC, de modo similar o ligeramente superior al
tocoferol. El compuesto del ejemplo 24 inhibe por completo la ROS en
una concentración de 10^{-6} y de 10^{-5} M.
Por su excelente efecto antioxidante para inhibir
la formación de la ROS intracelular, los compuestos de la presente
invención pueden utilizarse para prevenir y tratar las enfermedades
neurodegenerativas, por ejemplo la apoplejía cerebral y la demencia;
las enfermedades inflamatorias, por ejemplo la artritis; la
aterosclerosis; el infarto cardíaco; y las lesiones agudas/crónicas
de tejidos que puedan atribuirse a la ROS.
Ejemplo experimental
10
Se realizan los ensayos siguientes para
determinar si los compuestos de la fórmula 1 elimina radicales de
oxígeno.
El ensayo ORAC (oxygen-radical
absorbance capacity) es un método "in vitro" que permite
evaluar la capacidad de absorción de radicales de un fármaco en un
entorno acuoso. El método emplea como proteína indicadora la
\beta-PE (\beta-ficoeritrina) y
como generador de radicales epoxi el AAPH (diclorhidrato de
2,2'-azobis-(2-amidinopropano)). Las
mezclas reaccionantes contienen los compuestos de ensayo (10
M^{-6} y 10^{-4} M), la \beta-PE (1,76 x
10^{-8} M) y el AAPH (3 x 10^{-3} M) en tampón fosfato 75 mM (pH
7,0). En placas de 24 hoyos se emplea un volumen final de 2 ml. Los
compuestos a ensayar se disuelven en primer lugar en acetona y
después se añaden a la mezcla reaccionante. Una vez añadido el APPH
se inicia la reacción a 37ºC y se mide la fluorescencia (excitación:
485 nm, emisión: 590 nm) cada 5 min empleando un lector de
fluorescencia (FL600, Biotek Instrument). Se calculan las unidades
ORAC en base al área situada debajo de la curva de fluorescencia de
la \beta-PE en presencia del compuesto de ensayo
por comparación con el área generada por 1 \muM de Trolox. 1
unidad ORAC significa la protección neta proporcionada por 1 \muM
de Trolox. Los resultados se recogen en la tabla 9.
De la tabla 9 se deduce que el compuesto del
ejemplo 40 presenta unidades ORAC 2 veces mayores que las del
tocoferol y del probucol en concentraciones de 10^{-6} y 10^{-4}
M en ambos casos, mostrando una excelente capacidad de absorción de
radicales.
Por su excelente efecto antioxidante para
eliminar radicales oxígeno, los compuestos de la presente invención
pueden utilizarse para prevenir y tratar enfermedades
neurodegenerativas, tales como la apoplejía cerebral y la demencia;
enfermedades inflamatorias, por ejemplo la artritis; aterosclerosis;
infarto cardíaco; y lesiones agudas/crónicas de tejidos que puedan
atribuirse a los radicales libres.
Ejemplo experimental
11
Se llevan a cabo los ensayos siguientes para
determinar si los compuestos de la fórmula 1 protegen a las células
de la retina contra la isquemia.
Se disuelven los compuestos a ensayar en DMSO
para preparar una solución patrón (100 mM) que se diluye con
solución salina fisiológica hasta una concentración de 100, 50 y 30
\muM. Los compuestos a ensayar se administran por inyección en el
humor vítreo 30 min antes de la isquemia.
Se anestesian ratas adultas con inyección i.p.
(intraperitoneal) de cloral hidratado (400 mg/kg), después se
tratan los ojos derechos con tropicamida al 1% para dilatar las
pupilas. Se eleva la presión intraocular (IOP) hasta
160-180 mm de Hg, es decir por encima de la presión
sanguínea normal (140 mm de Hg) insertando una cánula en la cámara
anterior conectada a un dispositivo de presión hidrostática. Se
confirma oftalmológicamente la interrupción del riego sanguíneo, la
IOP elevada se mantiene durante 30 min. 30 min después de la
isquemia se enuclean los dos ojos y se separa la retina,
determinándose la lesión celular de la misma. Se realiza el recuento
del número de células de la capa celular ganglionar (250 x 25
\mum) y de la capa intranuclear (150 x 25 \mum), después se
calcula en forma de % de células vivas con respecto a las existentes
en los ojos izquierdos no sometidos a operación, que se toman como
control normal o referencia. Los resultados se recogen en la tabla
10.
De la tabla 10 se deduce que el compuesto del
ejemplo 40 protege las neuronas tanto de la capa ganglionar como de
la capa intranuclear después de la isquemia de retina, de modo
dependiente de la dosis.
Por su excelente efecto protector para inhibir la
muerte celular neuronal isquémica de las capas ganglionar e
intranuclear de la retina, los compuestos de la presente invención
pueden utilizarse para tratar el glaucoma, neuropatía óptica que
puede deberse a la isquemia.
Ejemplo experimental
12
Los ensayos siguientes se llevan a cabo para
determinar si los compuestos de la fórmula 1 mejoran la MNCV
desequilibrada de ratas diabéticas.
Se induce la diabetes en ratas por inyección i.p.
(intraperitoneal) de estreptozocina (65 mg/kg), después se
disuelven los compuestos de ensayo en 2 ml de un medio (solución
salina fisiológica:etanol:Tween 80 = 8:1:1) y se administran una vez
al día. Se anestesian las ratas con halotano, después se expone el
nervio ciático para medir la MNCV. Se estimula el nervio en dos
puntos. Se inserta el primer electrodo de estímulo en el extremo
próximo y el segundo electrodo estimulante se inserta en la muesca
ciática. El electrodo coaxial en forma de aguja se inserta en el
músculo interdigital y después se induce el potencial de acción
muscular por estimulación de dos puntos. Se calcula la velocidad de
conducción dividiendo la distancia entre los dos puntos de estímulo
por la diferencia de latencia. Se emplea el ácido lipoico (100
mg/kg) para compararlo con el compuesto de la fórmula 1 en cuanto a
recuperación de la MNCV desequilibrada de ratas diabéticas. La
recuperación (%) de la MNCV se calcula con arreglo a la siguiente
fórmula matemática 4. Los resultados se recogen en la tabla 11.
Fórmula matemática
4
Recuperación \ (%) \
=\frac{\text{MNCV del grupo tratado - MNCV de ratas
diabéticas}}{\text{MNCV del grupo control - MNCV de ratas
diabéticas}} \ x \
100
De la tabla 11 se deduce que la MNCV de ratas
diabéticas disminuye de modo significativo frente al control
normal.
El tratamiento con ácido lipoico (100 mg/kg)
recupera por completo la MNCV de ratas diabéticas. La administración
del compuesto del ejemplo 40 (30 mg/kg) mejora significativamente la
MNCV de las ratas diabéticas.
Ejemplo experimental
13
Se realizan los ensayos siguientes para
determinar si los compuestos de la fórmula 1 mejoran la respuesta
nociceptiva desequilibrada de ratas diabéticas.
Con la placa caliente se determinan los efectos
de los compuestos de ensayo en la respuesta nociceptiva de las
ratas.
Se aplican los mismos métodos para inducir la
diabetes y para tratar las ratas con los compuestos de ensayo. Se
colocan las ratas sobre placas calientes (50ºC), seguidamente se
determinan las latencias de la acción nociceptiva, por ejemplo la
lamedura. Se calcula la recuperación (%) de las respuestas
nociceptivas en ratas diabéticas según la siguiente fórmula
matemática 5. Los resultados se recogen en la tabla 12.
Fórmula matemática
5:
Recuperación \ (%) \ =
\frac{\text{respuesta del grupo tratado - respuesta de control
diabético}}{\text{respuesta del control normal - respuesta del
control diabético}} \ x \
100
De la tabla 12 se deduce que el ácido lipoico
mejora de forma significativa la respuesta nociceptiva
desequilibrada de ratas diabéticas. Por el contrario, el compuesto
del ejemplo 40 recupera por complejo la respuesta nociceptiva
desequilibrada de ratas diabéticas en el ensayo de la placa
caliente.
Por su excelente actividad contra la MNCV y las
respuestas nociceptivas desequilibradas en ratas diabéticas, como
se ha podido constatar en los anteriores ejemplos experimentales 12
y 13 así como por el efecto antioxidante y de protección de células
neuronales, los compuestos de la presente invención pueden
utilizarse para prevenir y tratar la neuropatía diabética y los
trastornos periféricos de la diabetes.
Ejemplo experimental
14
Se realizan los ensayos siguientes para
determinar si los compuestos de la fórmula 1 protegen contra la
lesión cerebral hipóxica a ratas recién nacidas, empleando para ello
la espectroscopia RM (magnetic resonance spectrum).
Para estudiar la asfixia infantil se ha utilizado
con gran frecuencia el modelo de lesión cerebral hipóxica, focal, de
ratas recién nacidas, porque su madurez cerebral es similar a la de
los niños recién nacidos y porque es fácil obtener el número
suficiente de animales que se requiere para la determinación de los
efectos. Se ha publicado que el pico de lípidos en la ERM
(espectroscopía de resonancia magnética) aumenta en caso de lesión
celular neuronal isquémica debido a la destrucción de la membrana
celular, incluida la barrera hemato-encefálica [A.
Bizzi y col., Magnetic Resonance Imagin 14,
581-592 (1996)] y también la concentración de
lípidos y la hipoxia guardan una relación estrecha con la apóptosis
[Van der Toorn y col., Magnetic Resonance in Medicine 36,
914-922 (1996)]. El
N-acetilaspartato (NAA) y la creatina (Cr) son
marcadores de células neuronales. Se ha confirmado que el valor de
lípidos/NAA (N-acetilaspartato) y lípidos/Cr
(creatina) guardan relación con el cambio morfológico y la gravedad
de la apóptosis en caso de lesión cerebral hipóxica.
Se colocan las ratas recién nacidas (de menos de
7 días, 10-15 g) en una cámara hipóxica durante 2 h
para inducirles la hipoxia y los compuestos de ensayo se inyectan
por vía intraperitoneal 1 h antes de la hipoxia. La ERM protónica se
realiza 1 día después de la lesión cerebral, después se determina el
valor de lípidos/NAA y de lípidos/Cr.
De la tabla 13 se deduce que el compuesto del
ejemplo 40 reduce de modo significativo tanto el valor lípidos/NAA
como el valor lípidos/Cr, lo cual indica un efecto protector contra
la lesión cerebral. Por su excelente protección contra la lesión
cerebral hipóxica en ratas recién nacidas, los compuestos de la
presente invención pueden utilizarse para prevenir y tratar la
asfixia infantil.
Ejemplo experimental
15
Se efectúan los ensayos siguientes para
determinar si los compuestos de la fórmula 1 inhiben la
proliferación de células de músculo liso vascular.
Los efectos inhibidores de la proliferación
celular se evalúan midiendo la incorporación de la
timidina-[H^{3}] al DNA. Se cultivan células de músculo liso
aórtico de ratas en placas de 24 hoyos durante 3 días hasta casi
confluencia en DMEM que contiene un 10% de FBS, después se elimina
por lavado el DMEM que contiene FBS. Se cultivan de nuevo las
células en DMEM sin suero durante 48 h hasta inactividad. Se añaden
los compuestos a ensayar 15 min antes de la adición de la
angiotensina II (10^{-7} M), que estimula la proliferación
celular, después se incuban las células durante 72 h. Durante las 4
últimas horas de la incubación se añade la timidina-[H^{3}] (1
\muCi(ml). Se retira el medio radiactivo y se lavan las
células 3 veces con DMEM (3 x 1 ml) para eliminar los isótopos no
incorporados y se tratan con una solución acuosa de TCA (ácido
tricloroacético) al 15% por lo menos durante 2 horas, después se
añade una solución acuosa 0,2 N de NaOH (0,25 ml) durante 30 min. Se
filtran las muestras a través de un filtro de microfibras de vidrio
(GF/B, Whatmann) con vacío. Se lava el filtro 3 veces con 2 ml de
una solución acuosa de TCA al 5%, se efectúa el recuento de la
radiactividad incorporada al DNA mediante un contador de centelleo
del tipo Liquid Scintillation Counter (Packard,
TRI-CARB, 2100TR), después se calcula el % de
incorporación de la timidina-[H^{3}]. Los resultados se recogen en
la tabla 14.
De la tabla 14 se deduce que los compuestos de
los ejemplos 2, 5 y 7 inhiben de modo significativo la síntesis del
DNA, que indica menos del 60% de incorporación de
timidina-[H^{3}]. En especial el compuesto del ejemplo 7 conduce
a un bajo porcentaje de incorporación, situado en el 37,8%.
Por su excelente efecto inhibidor de la
proliferación de las células de músculo liso vascular, los
compuestos de la presente invención pueden utilizarse para prevenir
y tratar la restenosis que surge después de las intervenciones
coronarias percutáneas practicadas en caso de oclusión de la arteria
coronaria.
Ejemplo experimental
16
Se lleva a cabo este ensayo para confirmar la
toxicidad de los compuestos de la fórmula 1.
En este ensayo se emplean ratas SPF SD de seis
semanas de edad, asignándose dos ratas a cada grupo. Se suspenden en
metilcelulosa al 0,5% los compuestos de los ejemplos 1, 2, 3, 5, 7,
8, 9, 10, 13, 14, 15, 19, 22, 23, 24, 25, 26, 28, 29, 30, 31, 32,
33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 44, 46, 47, 48, 49, 51, 52, 57,
58, 60, 62, 64, 67, 68, 69, 71 y 72 y se administran por vía oral en
una sola dosis de 1 g/kg empleando una aguja de punta esférica. El
volumen dosificado es de 10 ml/kg. Después de la administración se
observan los animales por si presentan signos clínicos de toxicidad
o mortalidad y se anotan los cambios observados en su peso corporal.
Todos los animales que sobreviven al período de observación se
someten a una laparotomía con anestesia etérea y se recogen muestras
de sangre de la aorta abdominal para ensayos hematológicos y
análisis bioquímicos. Después del sacrificio de los animales se
practica la autopsia para efectuar una observación macroscópica de
los órganos y tejidos. Se extraen muestras de tejidos de órganos
vitales de la región macroscópica y se fijan en una solución de
formalina al 10% tamponada a pH neutro, después se realizan los
procedimientos estándar de histopatología y se examinan con el
microscopio. No se observan cambios significativos en los síntomas
clínicos, peso corporal y mortalidad. Tampoco en hematología,
parámetros químicos del suero ni observación macroscópica se
detectan cambios achacables a los fármacos. Por consiguiente,
ninguno de los compuestos ensayados produjo toxicidad en las ratas
en una dosis de 1 g/kg, determinándose que la dosis letal
(LD_{50}) por administración oral se sitúa por encima de 1 g/kg en
las ratas.
La presente invención se ha descrito de modo
ilustrativo y se supone que la terminología empleada pretende
describir y no limitar. A la luz de las enseñanzas anteriores son
posibles muchas modificaciones y variaciones de la presente
invención. Por lo tanto, se da por supuesto que dentro del alcance
de las reivindicaciones adjuntas puede practicarse también la
invención de un modo distinto al descrito en la memoria que
antecede.
Claims (18)
1. Derivados de
benzopiranil-guanidina representados por la
siguiente fórmula 1, sus isómeros estereoquímicos y sus sales
farmacéuticamente aceptables.
Fórmula
1
en la
que
R_{1} significa H, halógeno, CF_{3},
NO_{2}, CN, OR^{a}, O(C=O)R^{a}, COOR^{a},
NH_{2}, NHS(O)_{m}R^{a},
NH(C=O)R^{a} o S(O)_{m}R^{a};
R^{a} significa un grupo alquilo C_{1}-C_{4}
lineal o ramificado o un grupo arilo; y m es un número entero de 0
a 2;
R_{2} significa un grupo alquilo
C_{1}-C_{4} lineal o ramificado;
R_{3} significa CH_{2}OR^{a},
R^{a} tiene el significado definido antes;
R^{b} y R^{c} con independencia entre sí significan en cada
caso un grupo alquilo C_{1}-C_{4} lineal o
ramificado; y Z significa un grupo alquilo
C_{1}-C_{5} lineal o ramificado;
R_{4} significa OH, H, halógeno, ONO_{2} u
O(C=O)R^{a}; y R^{a} tiene el significado definido
anteriormente; R_{5} y R_{6} con independencia entre sí
significan en cada caso H, halógeno, un grupo alquilo
C_{1}-C_{3} lineal o ramificado, OR^{a},
CX_{3}, NO_{2}, CO_{2}R^{a}, -(C=O)R^{a} o
SO_{3}R^{a}; R^{a} tiene el significado definido antes; X
significa halógeno y
n es un número entero de 0 a 2.
2. Los derivados de
benzopiranil-guanidina, sus isómeros estereoquímicos
y sus sales farmacéuticamente aceptables según la reivindicación 1,
en los que
R_{1} significa NO_{2}, CN, NH_{2} o
S(O)_{m}R^{a}; R^{a} significa un grupo alquilo
C_{1}-C_{2} lineal o ramificado o un grupo
arilo; y m es un número entero de 0 a 2;
R_{2} significa CH_{3};
R_{3} significa
R^{b} y R^{c} con independencia entre sí
significan en cada caso un grupo alquilo
C_{1}-C_{3} lineal o ramificado; y Z significa
un grupo alquilo C_{1}-C_{5} lineal o
ramificado;
R_{4} significa OH, H u
O(C=O)R^{a}; y R^{a} significa un grupo alquilo
C_{1}-C_{3} lineal o ramificado;
R_{5} y R_{6} con independencia entre sí
significan en cada caso H, halógeno, un grupo alquilo
C_{1}-C_{3} lineal o ramificado, OR^{a},
CX_{3} o NO_{2}; R^{a} significa un grupo alquilo
C_{1}-C_{3} lineal o ramificado; X significa
halógeno y
n es un número entero de 0 a 2.
3. Los derivados de
benzopiranil-guanidina, sus isómeros estereoquímicos
y sus sales farmacéuticamente aceptables según la reivindicación 1,
en los que el compuesto de la fórmula 1 se elige del grupo formado
por:
1) (2R, 3R,
4S)-N''-ciano-N-(6-nitro-3,4-dihidro-3-hidroxi-2-metil-2-dimetoximetil-2H-benzopiran-4-il)-N'-(4-clorofenil)guanidina;
2) (2R, 3S,
4R)-N''-ciano-N-(6-nitro-3,4-dihidro-3-hidroxi-2-metil-2-dimetoximetil-2H-benzopiran-4-il)-N'-(4-clorofenil)guanidina;
3) (2R, 3R,
4S)-N''-ciano-N-(6-nitro-3,4-dihidro-3-hidroxi-2-metil-2-dimetoximetil-2H-benzopiran-4-il)-N'-(3-clorofenil)guanidina;
4) (2R, 3S,
4R)-N''-ciano-N-(6-nitro-3,4-dihidro-3-hidroxi-2-metil-2-dimetoximetil-2H-benzopiran-4-il)-N'-(3-clorofenil)guanidina;
5) (2R, 3R,
4S)-N''-ciano-N-(6-nitro-3,4-dihidro-3-hidroxi-2-metil-2-dimetoximetil-2H-benzopiran-4-il)-N'-(4-nitrofenil)guanidina;
6) (2R, 3R,
4S)-N''-ciano-N-(6-nitro-3,4-dihidro-3-hidroxi-2-metil-2-dimetoximetil-2H-benzopiran-4-il)-N'-(3-trifluormetilfenil)guanidina;
7) (2R, 3S,
4R)-N''-ciano-N-(6-nitro-3,4-dihidro-3-hidroxi-2-metil-2-dimetoximetil-2H-benzopiran-4-il)-N'-(3-trifluormetilfenil)guanidina;
8) (2R, 3R,
4S)-N''-ciano-N-(6-nitro-3,4-dihidro-3-hidroxi-2-metil-2-dimetoximetil-2H-benzopiran-4-il)-N'-(4-metoxifenil)guanidina;
9) (2R, 3S,
4R)-N''-ciano-N-(6-nitro-3,4-dihidro-3-hidroxi-2-metil-2-dimetoximetil-2H-benzopiran-4-il)-N'-(4-metoxifenil)guanidina;
10) (2S, 3R,
4S)-N''-ciano-N-(6-nitro-3,4-dihidro-3-hidroxi-2-metil-2-dimetoximetil-2H-benzopiran-4-il)-N'-(4-clorofenil)guanidina;
11) (2S, 3S,
4R)-N''-ciano-N-(6-nitro-3,4-dihidro-3-hidroxi-2-metil-2-dimetoximetil-2H-benzopiran-4-il)-N'-(4-clorofenil)guanidina;
12) (2S, 3R,
4S)-N''-ciano-N-(6-nitro-3,4-dihidro-3-hidroxi-2-metil-2-dimetoximetil-2H-benzopiran-4-il)-N'-(3-clorofenil)guanidina;
13) (2S, 3S,
4R)-N''-ciano-N-(6-nitro-3,4-dihidro-3-hidroxi-2-metil-2-dimetoximetil-2H-benzopiran-4-il)-N'-(3-clorofenil)guanidina;
14) (2S, 3R,
4S)-N''-ciano-N-(6-nitro-3,4-dihidro-3-hidroxi-2-metil-2-dimetoximetil-2H-benzopiran-4-il)-N'-(3-trifluormetilfenil)guanidina;
15) (2S, 3S,
4R)-N''-ciano-N-(6-nitro-3,4-dihidro-3-hidroxi-2-metil-2-dimetoximetil-2H-benzopiran-4-il)-N'-(3-trifluormetilfenil)guanidina;
16) (2S, 3R,
4S)-N''-ciano-N-(6-nitro-3,4-dihidro-3-hidroxi-2-metil-2-dimetoximetil-2H-benzopiran-4-il)-N'-(4-metoxifenil)guanidina;
17) (2S, 3S,
4R)-N''-ciano-N-(6-nitro-3,4-dihidro-3-hidroxi-2-metil-2-dimetoximetil-2H-benzopiran-4-il)-N'-(4-metoxifenil)guanidina;
18) (2R, 3R,
4S)-N''-ciano-N-(6-nitro-3,4-dihidro-3-hidroxi-2-metil-2-dimetoximetil-2H-benzopiran-4-il)-N'-(4-metilfenil)guanidina;
19) (2R, 3S,
4R)-N''-ciano-N-(6-nitro-3,4-dihidro-3-hidroxi-2-metil-2-dimetoximetil-2H-benzopiran-4-il)-N'-(4-metilfenil)guanidina;
20) (2R, 3R,
4S)-N''ciano-N-(6-nitro-3,4-dihidro-3-hidroxi-2-metil-2-dimetoximetil-2H-benzopiran-4-il)-N'-(4-metoxibencil)guanidina;
21) (2R, 3S,
4R)-N''-ciano-N-(6-nitro-3,4-dihidro-3-hidroxi-2-metil-2-dimetoximetil-2H-benzopiran-4-il)-N'-(4-metoxibencil)guanidina;
22) (2R, 3R,
4S)-N''-ciano-N-(6-nitro-3,4-dihidro-3-hidroxi-2-metil-2-dimetoximetil-2H-benzopiran-4-il)-N'-bencilguanidina;
23) (2R, 3S,
4R)-N''-ciano-N-(6-nitro-3,4-dihidro-3-hidroxi-2-metil-2-dimetoximetil-2H-benzopiran-4-il)-N'-bencilguanidina;
24) (2S, 3R,
4S)-N''-ciano-N-(6-nitro-3,4-dihidro-3-hidroxi-2-metil-2-dimetoximetil-2H-benzopiran-4-il)-N'-bencilguanidina;
25) (2S, 3S,
4R)-N''-ciano-N-(6-nitro-3,4-dihidro-3-hidroxi-2-metil-2-dimetoximetil-2H-benzopiran-4-il)-N'-bencilguanidina;
26) (2R, 3R,
4S)-N''-ciano-N-(3,4-dihidro-3-hidroxi-2-metil-2-dimetoximetil-2H-benzopiran-4-il)-N'-(4-clorofenil)guanidina;
27) (2R, 3S,
4R)-N''-ciano-N-(3,4-dihidro-3-hidroxi-2-metil-2-dimetoximetil-2H-benzopiran-4-il)-N'-(4-clorofenil)guanidina;
28) (2R, 3R,
4S)-N''-ciano-N-(6-nitro-3,4-dihidro-3-hidroxi-2-metil-2-hidroximetil-2H-benzopiran-4-il)-N'-(4-clorofenil)guanidina;
29) (2R, 3S,
4R)-N''-ciano-N-(6-nitro-3,4-dihidro-3-hidroxi-2-metil-2-hidroximetil-2H-benzopiran-4-il)-N'-(4-clorofenil)guanidina;
30) (2R, 3R,
4S)-N''-ciano-N-(6-nitro-3,4-dihidro-3-hidroxi-2-metil-2-metoximetil-2H-benzopiran-4-il)-N'-(4-
clorofenil)guanidina;
clorofenil)guanidina;
31) (2R, 3S,
4R)-N''-ciano-N-(6-nitro-3,4-dihidro-3-hidroxi-2-metil-2-metoximetil-2H-benzopiran-4-il)-N'-(4-
clorofenil)guanidina;
clorofenil)guanidina;
32) (2S, 3R,
4S)-N''-ciano-N-(6-nitro-3,4-dihidro-3-hidroxi-2-metil-2-dimetoximetil-2H-benzopiran-4-il)-N'-(2-clorofenil)guanidina;
33) (2S, 3S,
4R)-N''-ciano-N-(6-nitro-3,4-dihidro-3-hidroxi-2-metil-2-dimetoximetil-2H-benzopiran-4-il)-N'-(2-clorofenil)guanidina;
34) (2S, 3R,
4S)-N''-ciano-N-(6-nitro-3,4-dihidro-3-hidroxi-2-metil-2-dimetoximetil-2H-benzopiran-4-il)-N'-(2-trifluormetilfenil)guanidina;
35) (2S, 3S,
4R)-N''-ciano-N-(6-nitro-3,4-dihidro-3-hidroxi-2-metil-2-dimetoximetil-2H-benzopiran-4-il)-N'-(2-trifluormetilfenil)guanidina;
36) (2S, 3R,
4S)-N''-ciano-N-(6-nitro-3,4-dihidro-3-hidroxi-2-metil-2-dimetoximetil-2H-benzopiran-4-il)-N'-(2-clorobencil)guanidina;
37) (2S, 3S,
4R)-N''-ciano-N-(6-nitro-3,4-dihidro-3-hidroxi-2-metil-2-dimetoximetil-2H-benzopiran-4-il)-N'-(2-clorobencil)guanidina;
38) (2S, 3R,
4S)-N''-ciano-N-(6-nitro-3,4-dihidro-3-acetoxi-2-metil-2-dimetoximetil-2H-benzopiran-4-il)-N'-bencilguanidina;
39)
(2S)-N''-ciano-N-(6-nitro-2-metil-2-dimetoximetil-2H-benzopiran-4-il)-N'-bencilguanidina;
40) (2S, 3S,
4R)-N''-ciano-N-(6-amino-3,4-dihidro-3-hidroxi-2-metil-2-dimetoximetil-2H-benzopiran-4-il)-N'-bencilguanidina;
41) (2S, 3S,
4R)-N''-ciano-N-(6-acetoxiamino-3,4-dihidro-3-hidroxi-2-metil-2-dimetoximetil-2H-benzopiran-4-il)-N'-bencilguanidina;
42) (2S, 3S,
4R)-N''-ciano-N-(6-metanosulfonilamino-3,4-dihidro-3-hidroxi-2-metil-2-dimetoximetil-2H-benzopiran-4-il)-N'-bencilguanidina;
43) (2S, 3S,
4S)-N''-ciano-N-(6-ciano-3,4-dihidro-3-hidroxi-2-metil-2-dimetoximetil-2H-benzopiran-4-il)-N'-(4-clorofenil)guanidina;
44) (2S, 3R,
4S)-N''-ciano-N-(6-ciano-3,4-dihidro-3-hidroxi-2-metil-2-dimetoximetil-2H-benzopiran-4-il)-N'-(4-clorofenil)guanidina;
45) (2S, 3S,
4R)-N''-ciano-N-(6-ciano-3,4-dihidro-3-hidroxi-2-metil-2-dimetoximetil-2H-benzopiran-4-il)-N'-
bencilguanidina;
bencilguanidina;
46) (2S, 3R,
4S)-N''-ciano-N-(6-ciano-3,4-dihidro-3-hidroxi-2-metil-2-dimetoximetil-2H-benzopiran-9-il)-N'-
bencilguanidina;
bencilguanidina;
47) (2S, 3S,
4R)-N''-ciano-N-(6-bromo-3,4-dihidro-3-hidroxi-2-metil-2-dimetoximetil-2H-benzopiran-4-il)-N'-bencilguanidina;
48) (2S, 3S,
4R)-N''-ciano-N-(6-nitro-3,4-dihidro-3-hidroxi-2-metil-2-dimetoximetil-2H-benzopiran-4-il)-N'-
(3,4-dimetoxibencil)guanidina;
(3,4-dimetoxibencil)guanidina;
49) (2S, 3S,
4R)-N''-ciano-N-(6-amino-3,4-dihidro-3-hidroxi-2-metil-2-dimetoximetil-2H-benzopiran-4-il)-N'-(3,4-dimetoxibencil)guanidina;
50) (2S, 3S,
4R)-N''-ciano-N-(6-nitro-3,4-dihidro-3-hidroxi-2-metil-2-dimetoximetil-2H-benzopiran-4-il)-N'-(4-metoxibencil)guanidina;
51) (2S, 3S,
4R)-N''-ciano-N-(6-amino-3,4-dihidro-3-hidroxi-2-metil-2-dimetoximetil-2H-benzopiran-4-il)-N'-(4-metoxibencil)guanidina;
52) (2S, 3S,
4R)-N''-ciano-N-(6-nitro-3,4-dihidro-3-hidroxi-2-metil-2-dimetoximetil-2H-benzopiran-4-il)-N'-(3-nitrobencil)guanidina;
53) (2S, 3S,
4R)-N''-ciano-N-(6-nitro-3,4-dihidro-3-hidroxi-2-metil-2-dimetoximetil-2H-benzopiran-4-il)-N'-(3-trifluormetilbencil)guanidina;
54) (2S, 3S,
4R)-N''-ciano-N-(6-amino-3,4-dihidro-3-hidroxi-2-metil-2-dimetoximetil-2H-benzopiran-4-il)-N'-(3-trifluormetilbencil)guanidina;
55) (2S, 3S,
4R)-N''-ciano-N-(6-metanosulfoniloxi-3,4-dihidro-3-hidroxi-2-metil-2-dimetoximetil-2H-benzopiran-4-il)-N'-bencilguanidina;
56) (2R, 3S,
4R)-N''-ciano-N-(6-metanosulfoniloxi-3,4-dihidro-3-hidroxi-2-metil-2-dimetoximetil-2H-benzopiran-4-il)-N'-bencilguanidina;
57) (2S, 3R,
4S)-N''-ciano-N-(6-amino-3,4-dihidro-3-hidroxi-2-metil-2-dimetoximetil-2H-benzopiran-4-il)-N'-bencilguanidina;
58) (2R, 3R,
4S)-N''-ciano-N-(6-amino-3,9-dihidro-3-hidroxi-2-metil-2-dimetoximetil-2H-benzopiran-4-il)-N'-bencilguanidina;
59) (2R, 3S,
4R)-N''-ciano-N-(6-amino-3,4-dihidro-3-hidroxi-2-metil-2-dimetoximetil-2H-benzopiran-4-il)-N'-bencilguanidina;
60) (2S, 3S,
4R)-N''-ciano-N-(6-nitro-3,4-dihidro-3-hidroxi-2-metil-2-([1,3]dioxolan-2-il)-2H-benzopiran-4-il)-N'-bencilguanidina;
61) (2S, 3S,
4R)-N''-ciano-N-(6-amino-3,4-dihidro-3-hidroxi-2-metil-2-([1,3]dioxolan-2-il)-2H-benzopiran-4-il)-N'-bencilguanidina;
62) (2S, 3S,
4R)-N''-ciano-N-(6-nitro-3,4-dihidro-3-hidroxi-2-metil-2-([1,3]dioxan-2-il)-2H-benzopiran-4-il)-N'-bencilguanidina;
63) (2S, 3S,
4R)-N''-ciano-N-(6-amino-3,4-dihidro-3-hidroxi-2-metil-2-([1,3]dioxan-2-il)-2H-benzopiran-4-il)-N'-bencilguanidina;
64) (2S, 3S,
4R)-N''-ciano-N-(6-nitro-3,4-dihidro-3-hidroxi-2-metil-2-([1,3]-5,5-dimetildioxan-2-il)-2H-benzopiran-4-il)-N'-bencilguanidina;
65) (2S, 3S,
4R)-N''-ciano-N-(6-amino-3,4-dihidro-3-hidroxi-2-metil-2-([1,3]-5,5-dimetildioxan-2-il)-2H-benzopiran-4-il)-N'-bencilguanidina;
66) (2S, 3S,
4R)-N''-ciano-N-(6-nitro-3,4-dihidro-3-hidroxi-2-metil-2-dietoximetil-2H-benzopiran-4-il)-N'-bencilguanidina;
67) (2S, 3S,
4R)-N''-ciano-N-(6-amino-3,4-dihidro-3-hidroxi-2-metil-2-dietoximetil-2H-benzopiran-4-il)-N'-bencilguanidina;
68) (2S, 3S,
4R)-N''-ciano-N-(6-metoxicarbonil-3,4-dihidro-3-hidroxi-2-metil-2-dimetoximetil-2H-benzopiran-4-il)-N'-bencilguanidina;
69) (2R, 3S,
4R)-N''-ciano-N-(6-metoxicarbonil-3,4-dihidro-3-hidroxi-2-metil-2-dimetoximetil-2H-benzopiran-4-il)-N'-bencilguanidina;
70) (3S,
4R)-N''-ciano-N-(8-nitro-3,4-dihidro-3-hidroxi-2-metil-2-dimetoximetil-2H-benzopiran-4-il)-N'-bencilguanidina;
71) (2S, 3S,
4R)-N''-ciano-N-(8-amino-3,4-dihidro-3-hidroxi-2-metil-2-dimetoximetil-2H-benzopiran-4-il)-N'-bencilguanidina
y
72) (2R, 3S,
4R)-N''-ciano-N-(8-amino-3,4-dihidro-3-hidroxi-2-metil-2-dimetoximetil-2H-benzopiran-4-il)-N'-bencilguanidina.
4. Un procedimiento de obtención de derivados de
benzopiranil-guanidina según la reivindicación 1,
que consiste en una etapa de reacción de un compuesto aminoalcohol
(III) y un compuesto tiourea (IV) en presencia de un agente
condensante para obtener el compuesto (I').
Esquema
1
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
en el que R_{1}, R_{2}, R_{3}, R_{4},
R_{5}, R_{6} y n tienen los significados definidos
anteriormente.
5. El procedimiento según la reivindicación 4, en
el que el agente condensante se elige del grupo formado por los
agentes condensantes de tipo carbodiimida solubles en agua, formado
por el clorhidrato de la
1-[3-(dimetilamino)propil]-3-etilcarbodiimida
y la N,N-diciclohexilcarbodiimida.
6. El procedimiento según la reivindicación 4, en
el que el disolvente de la reacción se elige del grupo formado por
el cloruro de metileno, el cloroformo, la dimetilformamida y el
sulfóxido de dimetilo.
7. Un procedimiento de obtención de derivados de
benzopiranil-guanidina según la reivindicación 1,
que consta de las etapas siguientes:
1) la reacción de un compuesto aminoalcohol (III)
con cianocarbonimidato de difenilo (X) en presencia de una base para
obtener el compuesto (V) (etapa 1) y
2) la reacción del compuesto (V) con un compuesto
amina (VI) para obtener el compuesto (I') (etapa 2).
\newpage
Esquema
2
en el que R_{1}, R_{2}, R_{3}, R_{4},
R_{5}, R_{6} y n tienen los significados definidos
anteriormente.
8. El procedimiento según la reivindicación 7, en
el que la base de la etapa 1 se elige entre aminas terciarias,
incluidas la trietilamina, la
N,N-diisopropiletilamina, la piridina, el
1,8-diazabiciclo[5.9.0]undec-7-eno
y la 4-(dimetilamino)-piridina.
9. El proceso según la reivindicación 7, en el
que el disolvente de reacción de la etapa 1 o de la etapa 2 se elige
del grupo formado por alcoholes, incluidos el etanol y el
isopropanol; la dimetilformamida; el sulfóxido de dimetilo; y el
cloroformo.
10. Composiciones farmacéuticas para proteger el
corazón, que son farmacológicamente útiles para prevenir y tratar el
infarto de miocardio y el fallo cardíaco congestivo y la angina de
pecho, que como principio activo contienen los derivados de
benzopiranil-guanidina de la reivindicación 1 o sus
sales farmacéuticamente aceptables.
11. Composiciones farmacéuticas para inhibir la
peroxidación de lípidos, que contienen como principio activo los
derivados de benzopiranil-guanidina de la
reivindicación 1 o sus sales farmacéuticamente aceptables.
12. Composiciones farmacéuticas
farmacológicamente útiles para inhibir la generación de NO, que como
principio activo contienen los derivados de
benzopiranil-guanidina de la reivindicación 1 o sus
sales farmacéuticamente aceptables.
13. Composiciones farmacéuticas
farmacológicamente útiles para proteger contra la lesión cerebral
debida a la reperfusión isquémica cerebral, que como principio
activo contienen los derivados de
benzopiranil-guanidina de la reivindicación 1 o sus
sales farmacéuticamente aceptables.
14. Composiciones farmacéuticas
farmacológicamente útiles para el tratamiento del cáncer y de la
retinopatía diabética inhibiendo la angiogénesis, que como principio
activo contienen los derivados de
benzopiranil-guanidina de la reivindicación 1 o sus
sales farmacéuticamente aceptables.
15. Composiciones farmacéuticas
farmacológicamente útiles para la prevención y el tratamiento de
trastornos neurodegenerativos, incluida la enfermedad de Alzheimer y
la demencia senil, y la aterosclerosis, inhibiendo la peroxidación
de lípidos y las especies reactivas de oxígeno, que como principio
activo contienen los derivados de
benzopiranil-guanidina de la reivindicación 1 o sus
sales farmacéuticamente aceptables.
16. Composiciones farmacéuticas
farmacológicamente útiles para la prevención y el tratamiento de la
asfixia infantil, el glaucoma, la neuropatía diabética y el trauma
craneal, protegiendo las células neuronales, que como principio
activo contienen los derivados de
benzopiranil-guanidina de la reivindicación 1 o sus
sales farmacéuticamente aceptables.
17. Composiciones farmacéuticas
farmacológicamente útiles para la prevención y el tratamiento de la
restenosis, inhibiendo la proliferación celular, que como principio
activo contienen los derivados de
benzopiranil-guanidina de la reivindicación 1 o sus
sales farmacéuticamente aceptables.
18. Composiciones farmacéuticas para proteger
órganos vitales, tales como el corazón, los riñones, el hígado y los
tejidos y para proteger órganos en cirugía cardiovascular mayor, que
como principio activo contienen los derivados de
benzopiranil-guanidina de la reivindicación 1 o sus
sales farmacéuticamente aceptables.
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