ES2210802T3

ES2210802T3 - Composiciones que contienen lipidos y sus usos.

Info

Publication number: ES2210802T3
Application number: ES98940374T
Authority: ES
Inventors: Stephen Ronald Tonge; Brian John Tighe
Original assignee: Aston University
Current assignee: Aston University
Priority date: 1997-08-22
Filing date: 1998-08-24
Publication date: 2004-07-01
Anticipated expiration: 2018-08-24
Also published as: EP1007002A1; NZ502839A; WO1999009955A3; US6436905B1; AU8871498A; EP1007002B1; AU752508B2; CA2301711C; JP2001513544A; GB9717905D0; DE69819338D1; DE69819338T2; ATE252888T1; CA2301711A1; WO1999009955A2

Abstract

Una composición líquida que contiene lípidos, en la que un lípido polar formador de membrana está dispersado en un medio acuoso junto con un polímero anfipático sintético que interacciona con el lípido polar produciendo un complejo polímero/lípido, por lo que dicho polímero interacciona con el lípido polar, y lo solubiliza en el medio acuoso, mientras el pH está por debajo de un valor crítico solubilizante del lípido y mientras la temperatura está por encima de una temperatura de transición de fase predeterminada que depende del lípido polar en particular, siendo dicha composición de pH variable de forma que puede subirse el pH desde un valor inferior a dicho valor crítico solubilizante del lípido hasta un valor por encima de dicho valor crítico solubilizante del lípido, mediante la adición de un reactivo alcalino, y estando también caracterizado por la siguiente combinación de características: (a) la composición tiene el aspecto visual de una solución sustancialmente transparente; (b) elcomplejo polímero/lípido producido está en forma de partículas o conjuntos micelares no liposómicos de forma discoidal en los que el lípido polar forma un núcleo de bicapa; (c) el polímero anfipático sintético tiene una cadena principal lineal a lo largo de la cual grupos hidrófobos y grupos hidrófilos aniónicos están dispuestos uniformemente y es un copolímero, distinto de un copolímero de bloques, de un primer monómero que es un ácido dicarboxílico insaturado o un anhídrido del mismo, y un segundo monómero que es un compuesto monoenoico, estando dispuestos dichos primero y segundo monómeros en una relación alternante a lo largo de dicha cadena principal lineal, con la condición de que, si dicho segundo monómero es un alquil vinil éter, el grupo alcoxi del mismo está en el intervalo de alcoxi C3- C8, y (d) el número de de átomos de carbono en grupos laterales hidrófobos del polímero anfipático es igual o mayor que el número de átomos de carbono en la cadena principal del polímero.

Description

Composiciones que contienen lípidos y sus usos.

Campo de la invención

La presente invención se refiere principalmente al campo de la bioquímica y la medicina. Más en particular, se refiere a composiciones que contienen lípidos que, en un aspecto principal de la invención, proporcionan útiles agentes tensioactivos o solubilizantes para determinadas sustancias, en particular fármacos u otros materiales bioactivos, y pueden ser especialmente útiles para producir soluciones acuosas de sustancias que son solubles en lípidos pero tienen una escasa solubilidad en agua. Así, pueden ser usados como agentes de formulación y suministro para la formulación y/o el suministro, posiblemente el suministro específico para un sitio, de fármacos u otros materiales bioactivos en relación con el tratamiento terapéutico (o cosmético) de mamíferos. Estas composiciones que contienen lípidos proporcionan también agentes tensioactivos artificiales que tienen unas útiles aplicaciones terapéuticas en medicina, por ejemplo como agentes tensioactivos pulmonares ("surfactantes pulmonares") o como materiales tensioactivos de lubricación para su inclusión en formulaciones oculares u otras formulaciones lubricantes para uso médico. Sin embargo, las composiciones pueden tener otros usos y aplicaciones, en particular como agentes solubilizantes, en diferentes áreas de la bioquímica o la biotecnología, y en la industria alimentaria, por ejemplo.

Fundamento

Existe una constante necesidad de formulaciones de fármacos y/o agentes de suministro nuevos o mejorados, en particular, por ejemplo, en relación con la administración de fármacos activos que tienen una escasa solubilidad en agua. La mejora de los métodos de suministro de fármacos es también importante en lo que concierne al desarrollo de la terapia génica, cuando el fármaco que se ha de administrar o suministrar es DNA o RNA genético terapéutico o fragmentos de DNA/RNA que necesitan un vehículo portador para la protección y para facilitar la absorción por las células diana. También, existe la necesidad de agentes de suministro mejorados, para conseguir el suministro eficiente de otros fármacos sensibles o inestables, así como para conseguir el suministro eficiente de fármacos de escasa solubilidad en agua. Además, frecuentemente se da la necesidad de agentes solubilizantes eficientes y no tóxicos en otros campos, por ejemplo en las industrias de la alimentación y cosmética.

También se ha identificado la necesidad de agentes solubilizantes que puedan ser usados para solubilizar proteínas, especialmente proteínas receptoras de fármacos, por ejemplo dentro de membranas de fosfolípido, de manera que conserven su conformación original y permitan así determinar su estructura, p. ej. mediante espectroscopía de NMR. La dilucidación de su estructura de esta manera puede permitir diseñar agentes más eficaces para que interaccionen con tales receptores y actúen como fármacos potenciales. Algunas realizaciones de esta invención pueden contribuir a satisfacer estas diversas necesidades.

En relación con los tensioactivos pulmonares, como es bien sabido, para conseguir una función respiratoria y un intercambio gaseoso adecuados, todos los mamíferos segregan en sus pulmones un agente tensioactivo para controlar, durante la exhalación y la inhalación, la tensión superficial de la película de fluido que cubre la superficie respiratoria epitelial que forra los alvéolos. Los alvéolos forman, en efecto, una serie de minúsculos sacos interconectados, revestidos de fluido, dispuestos de forma que maximizan el área de la superficie para el intercambio gaseoso a través de una superficie fluido/aire. Sin embargo, esta disposición presenta un problema físico-químico potencial para el organismo, por cuanto los sacos alveolares son de una forma aproximada a la de pequeña burbujas sometidas a la ley de Laplace, por la que la presión gaseosa dentro de la burbuja es inversamente proporcional al radio o al diámetro, y es directamente proporcional a la tensón superficial del fluido de la capa límite. Así, a medida que un saco alveolar disminuye durante la exhalación, la presión en el mismo tenderá a aumentar y esto podría conducir a una disparidad de presiones. Sin embargo, la disparidad de presiones entre los alvéolos tendería a forzar al aire desde los sacos alveolares más pequeños a los más grandes, con el resultado de un colapso de los primeros. Si esta situación ocurriese in vivo, la subsiguiente expansión de los pulmones sería mucho más difícil y la totalidad del pulmón podría incluso colapsarse.

Para evitar estos problemas, los mamíferos producen un agente tensioactivo natural para reducir la tensión superficial de la película de fluido de las superficies alveolares cuando el área de la superficie se constriñe durante la exhalación. En cambio, la fuerza que se necesita par inflar los pulmones también se iguala. En ambos casos los pulmones pueden desinflarse e inflarse uniformemente con una variación en el tamaño terminal de los diferentes alvéolos. Este grado de control funcional se consigue reduciendo la tensión superficial en proporción directa a la reducción del área de la superficie, y esto se logra a su vez aumentando la concentración de agente tensioactivo por unidad de área de la superficie. El mecanismo es similar al empleado en una balanza de Langmuir, en la que la constricción de una monocapa insoluble exprime el agua fuera de la interfase minimizando así las fuerzas de cohesión entre las moléculas de agua que actúan "apretando" la superficie.

En los neonatos humanos, el agente tensioactivo pulmonar es sintetizado aproximadamente dos meses antes del término, permitiendo que los pulmones se inflen y que comience la respiración normal al nacer. Sin embargo, en los niños nacidos con una premadurez de más de dos meses, la cantidad de agente tensioactivo pulmonar puede reducirse en gran parte o desaparecer completamente, y esta situación impide que se inflen los pulmones, resultando el desarrollo del síndrome de distrés respiratorio (RDS: Respiratory Distress Syndrome) neonatal, que sigue siendo la causa más común de mortalidad neonatal.

El agente tensioactivo pulmonar endógeno consiste generalmente en un 90% (p/v) de lípido en combinación con un 10% de proteína. La fracción lipídica está constituida por hasta un 90% de fosfolípido, del cual el 80% es fosfatidilcolina (PC), con unos 40-45% en forma de éster de dipalmitoílo (DPPC) y el resto como PC monoenoica. El lípido contiene también normalmente un 10-15% de fosfatidilglicerol (PG) un 7-8% de colesterol.

En anteriores intentos de desarrollar agentes tensioactivos artificiales basados en fosfolípido usando solamente fosfolípidos, o mezclas lipídicas que simulan la composición en lípidos del agente tensioactivo pulmonar original, se encontró que tales agentes tensioactivos artificiales eran significativamente menos eficaces que el producto natural en cuanto al tratamiento del RDS. En particular, se encontró que los fosfolípidos usados solían fracasar en la absorción completa y diseminación en la interfase aire alveolar/fluido en ausencia de ciertas apoproteínas, denominadas proteínas tensioactivas ("proteínas surfactantes") que aparecen en el agente tensioactivo endógeno. Se cree que estas proteínas tensioactivas actúan modificando el conjunto de fosfolípidos y transportando a estos últimos desde las células T que revisten cada alvéolo a través de la subfase acuosa para formar una monocapa de lípido en la interfase con el aire.

Esta dificultad ha sido obviada en parte por la reciente introducción en la práctica clínica de agentes tensioactivos pulmonares artificiales para el tratamiento del RDS, basados en extractos de apoproteína de origen animal (véase la Tabla de Agentes Tensioactivos Comerciales, más adelante, y también la Tabla I al final de la presente descripción). Sin embargo, aunque este desarrollo ha revolucionado el tratamiento de este trastorno, puede tener por resultado un drástico aumento de los gastos sanitarios, ya que estos agentes tensioactivos pulmonares artificiales son generalmente muy caros, y también plantean serias cuestiones en cuanto a la adecuación de usar proteínas animales en el tratamiento de neonatos humanos.

Tabla de agentes tensioactivos pulmonares artificiales disponibles comercialmente

Nombre	Dosis/12 h/kg	Concentración de tensioactivo [%]	Relación de conc.
Exosurf^{\text{*}}	67,5 mg/5 ml	13,5 mg/ml [1,35]	1
Curosurf	120 mg/1,5 ml	80 mg/ml [8,0]	5,9
ALEC^{\text{*}}	100 mg/1,2 ml	83,3 mg/ml [8,33]	6,2
Survanta	200 mg/8 ml	25,0 mg/ml [2,5]	1,85
^{\text{*}} estos agentes tensioactivos pulmonares artificiales específicos no son particularmente eficaces y no
\hskip1mm contienen proteínas.

En consecuencia, existe la necesidad de un agente tensioactivo pulmonar artificial eficaz, que pueda ser producido económicamente a partir de materiales sintéticos, y la provisión de tal agente tensioactivo artificial representa un objeto de la presente invención. Se apreciará que las implicaciones de este trabajo en el desarrollo de un agente tensioactivo pulmonar artificial barato y eficaz pueden tener consecuencias en términos del número de individuos que podrían beneficiarse. Una estimación conservadora de la tasa de mortalidad que procede del síndrome de distrés respiratorio (RDS) sugeriría que, basándose en estadísticas publicadas ("Tasas de mortalidad infantil" del US Dept. Health and Human Services, 1992), hay globalmente unos 100.000 casos al año, principalmente en paises en desarrollo. Por tanto, un agente tensioactivo que pueda obtenerse económicamente puede tener una influencia significativa tanto sobre la tasa de supervivencia como en la posterior salud de un considerable número de niños de todo el mundo.

Aparte de la necesidad de agentes tensioactivos pulmonares artificiales, también se necesitan agentes tensioactivos aceptables farmacéuticamente para el tratamiento de otras condiciones médicas que afectan a superficies membranosas o mucosas, p. ej. agentes tensioactivos en película de lágrimas para uso ocular en el tratamiento del estado conocido como síndrome de "ojos secos", y agentes tensioactivos para lubricar o tratar las superficies de articulaciones en relación con estados artríticos. Existe también la necesidad de agentes tensioactivos lubricantes para lubricar las superficies de dispositivos médicos y prótesis, p. ej. articulaciones artificiales y lentes de contacto, que se instalan en el cuerpo humano o animal.

Sumario de la invención

En un aspecto, la presente invención proporciona una composición líquida que contiene lípidos, en la que un lípido polar formador de membrana está dispersado en un medio acuoso junto con un polímero anfipático sintético que interacciona con el lípido polar produciendo un complejo polímero/lípido, por lo que dicho polímero interacciona con el lípido polar, y lo solubiliza en el medio acuoso, mientras el pH esté por debajo de un valor crítico solubilizante del lípido y mientras la temperatura esté por encima de una temperatura de transición de fase predeterminada que depende del lípido polar en particular, siendo dicha composición de pH variable de forma que puede subirse el pH desde un valor inferior a dicho valor crítico solubilizante del lípido hasta un valor por encima de dicho valor crítico solubilizante del lípido, mediante la adición de un reactivo alcalino, y estando también caracterizado por la siguiente combinación de características:

(a): la composición tiene el aspecto visual de una solución sustancialmente transparente;

(b): el complejo polímero/lípido producido está en forma de partículas micelares no liposómicas o conjuntos de forma discoidal en los que el lípido polar forma un núcleo de bicapa;

(c): el polímero anfipático sintético tiene una cadena principal lineal a lo largo de la cual grupos hidrófobos y grupos hidrófilos aniónicos están dispuestos uniformemente y es un copolímero, distinto de un copolímero de bloques, de un primer monómero que es un ácido dicarboxílico insaturado o un anhídrido del mismo, y un segundo monómero que es un compuesto monoenoico, estando dispuestos dichos primero y segundo monómeros en una relación alternante a lo largo de dicha cadena principal lineal, sometido a la condición de que si dicho segundo monómero es un alquil vinil éter el grupo alcoxi del mismo está en el intervalo de alcoxi C_{3}-C_{8}, y

(d): el número de átomos de carbono en grupos laterales hidrófobos del polímero anfipático es igual o mayor que el número de átomos de carbono en la cadena principal del polímero.

En muchas realizaciones, las composiciones que contienen lípido de esta invención serán usadas o formuladas para ser usadas en terapia.

Así, desde otro aspecto, la invención también reside en el uso de una composición que contiene lípido como se definió anteriormente, para la elaboración de un preparado médico.

Desde otro aspecto la invención también proporciona una composición líquida que contiene lípido, en la que un lípido polar formador de membrana es dispersado en un medio acuoso junto con una sustancia diana soluble en lípidos, de escasa solubilidad en agua, y un polímero anfipático sintético que interacciona con el lípido polar produciendo un complejo polímero/lípido y solubiliza dicha sustancia diana y dicho lípido polar en el medio acuoso mientras el pH esté por debajo de un valor crítico solubilizante del lípido y mientras la temperatura esté por encima de una temperatura de transición de fase predeterminada que depende del lípido polar en particular, siendo dicha composición variable con el pH de forma que puede subirse el pH desde un valor inferior a dicho valor crítico solubilizante del lípido hasta un valor por encima de dicho valor crítico solubilizante del lípido, mediante la adición de una reactivo alcalino, y estando también caracterizado por la siguiente combinación de características:

(a): la composición tiene el aspecto visual de una solución sustancialmente transparente

(b): el complejo polímero/lípido producido está en forma de partículas micelares no liposomales o conjuntos de forma discoidal en los que el lípido polar forma un núcleo de bicapa;

(c): el polímero anfipático sintético tiene una cadena principal lineal a lo largo de la cual grupos hidrófobos y grupos hidrófilos aniónicos están dispuestos uniformemente, y se elige entre:

(i): un homopolímero de ácido policarboxílico en el que los grupos hidrófobos son grupos laterales colgantes, y

(ii): un copolímero, distinto de un copolímero de bloques, de un primer monómero que es un ácido dicarboxílico insaturado o un anhídrido del mismo, y un segundo monómero que es un compuesto monoenoico, estando dichos primero y segundo monómeros dispuestos en una relación alternante a lo largo de dicha cadena principal lineal, sometido a la condición de que si dicho segundo monómero es un alquil vinil éter el grupo alcoxi del mismo está en el intervalo de alcoxi C_{3}-C_{8}, y

En este caso la sustancia diana adicional soluble en lípido puede estar presente bien sea para ser suministrada (p. ej. suministro de fármaco) o bien, en el caso de una proteína soluble en lípido, para ayudar a dirigir la combinación lípido/polímero a tejidos concretos dentro del cuerpo, o en algunos casos para mantener la proteína en una conformación correcta para su análisis.

En realizaciones preferidas el lípido comprenderá normalmente un fosfolípido y el polímero anfipático sintético con el que está combinado tendrá un equilibrio de grupos hidrófobos y aniónicos hidrófilos dispuestos uniformemente a lo largo de una cadena principal lineal.

Un ejemplo de un polímero anfipático sintético solubilizante de lípido, que incluye tanto grupos hidrófobos como grupos hidrófilos aniónicos, que puede ser usado para llevar a cabo la invención es el homopolímero poli(ácido 2-etil acrílico) (PEAA) del que con anterioridad ha sido publicado que interacciona en soluciones acuosas a pH > 7 con fosfatidilcolinas tales como dilauroilfosfatidilcolina (DLPC) y dipalmitoilfosfatidilcolina (DPPC) para dar suspensiones de vesículas multilamelares que se aclaran cuando se baja el pH por debajo de un valor crítico de aproximadamente 6,5. Véanse, por ejemplo, K. Seki et al. (1984) "pH-Dependent Complexation of Poly(acrylic acid) Derivatives with Phospholipid Vesicle Membranes", Macromolecules, 17, 1692-1698, D.A. Tirrell et al. (1985) "pH Sensitisation of Phospholipid Vesicles via Complexation with Synthetic Poly(carboxilic acid)s", Ann. N. Y. Acad. Sci. 446, 237-248, y K. A. Borden et al. (1987) "Polyelectrolyte adsorption induces a vesicle-to-micelle transition in aqueous dispersions of dipalmitoylphosphatidylcholine", Polymer Preprints, 28, 284-285).

El efecto de solubilización descrito en la bibliografía citada fue atribuido a la rotura y reorganización de las estructuras de vesícula que acompañan cambios conformacionales que ocurren en el polímero al disminuir el pH, que conducen a la formación de complejos de lípido/polímero que producen pequeños conjuntos o partículas discoidales micelares. También se hicieron sugerencias en los trabajos anteriormente mencionados de que los materiales descritos podrían tener aplicaciones médicas útiles si se preparan de forma que las sustancias terapéuticas estén atrapadas en el interior de las vesículas, a causa de que, al administrar tales preparados en el curso del tratamiento médico, estas vesículas, conocidas como liposomas, se romperían y liberarían rápidamente su contenido al entrar en una región diana de pH bajo. Sin embargo, ha de observarse que estas propuestas se relacionaban solamente con el uso de composiciones que comprenden vesículas intactas o liposomas en cuyo interior está atrapado un fármaco u otro agente terapéutico soluble en agua, siendo usadas las propias vesículas o liposomas meramente como recipientes mecánicos. No se expresó ningún reconocimiento de valor alguno, para fines terapéuticos o de otra índole, de los complejos lípido/polímero de las partículas micelares o conjuntos producidos después de la rotura de los liposomas. Sin embargo, ahora se ha apreciado que tales complejos lípido/polímero pueden proporcionar por sí mismos composiciones útiles que tienen relación con características ventajosas de actividad superficial y/o solubilización, combinadas con unas favorables características de dimensiones pequeñas. Son estas propiedades hasta ahora no reconocidas, y las aplicaciones prácticas de las mismas, lo que se explota en la presente invención.

La expresión "lípido polar formador de membrana" se usa en el presente texto para denotar lípidos que tienen una porción de cabeza altamente polar fijada a una cola hidrófoba no polar, compuesta generalmente por un par de cadenas de hidrocarburo relativamente largas, de forma que en un medio acuoso las moléculas de lípido tienden a asociarse y formar estructuras de membrana en las interfases, posiblemente como monocapas o bicapas lipídicas.

En realizaciones preferidas, estos lípidos polares usados en relación con la invención serán normalmente fosfolípidos basados en glicerol en forma de derivados de ácido fosfatídico en los que el grupo éster de acilo no polares contienen entre 8 y 15 átomos de carbono. Estos grupos éster de acilo, sin embargo, se eligen preferentemente entre laurilo, palmitoílo y miristoílo, y la cabeza polar de la molécula será provista por el grupo fosfato con un sustituyente de colina, es decir, el lípido será una fosfatidilcolina. No obstante, en algunas realizaciones también es posible usar otros lípidos polares, especialmente fosfolípidos, basados en estructuras diferentes, por ejemplo esfingosina o una ceramida, a partir de la cual puede derivarse el fosfolípido esfingomielina.

Ha de puntualizarse que muchos de estos lípidos polares, especialmente fosfolípidos tales como fosfatidilcolinas, experimentan cambios transicionales de fase en medio acuoso a temperaturas predeterminadas a las que pueden cambiar de un estado relativamente ordenado a un estado relativamente desordenado. La dipalmitoilfosfatidilcolina (DPPC), por ejemplo, tiene una temperatura de transición térmica de fase principal (T_{m}) de aproximadamente 42ºC, aunque para la dilauroilfosfatidilcolina (DLPC) la temperatura de transición térmica de fase principal es de aproximadamente -2ºC por lo que está en una bicapa desordenada o fase cristalina líquida a temperatura ambiente.

Al llevar a cabo la invención, en vez de PEAA pueden usarse otros homopolímeros de vinilo similares de un derivado de ácido acrílico que tiene una cadena lateral hidrófoba, p. ej. ácido 2-propil acrílico, u otros polímeros de poli(ácido carboxílico) que tienen grupos laterales hidrófobos colgantes además de grupos hidrófilos aniónicos. Sin embargo, en realizaciones preferidas, el polímero anfipático solubilizante de lípidos sintético elegido será un copolímero como se definió anteriormente, especialmente un copolímero de vinilo alternante lineal formado por polimerización por adición de radicales libres de un ácido dicarboxílico insaturado, o un anhídrido o un monoéster de dicho ácido dicarboxílico insaturado, con un monómero o monómeros vinílicos monoenoicos en relación alternante.

El monómero o monómeros monoenoicos se elegirán generalmente entre indeno o naftaleno y compuestos de fórmula R-CH=CH_{2} en la que R es hidrógeno, alquilo C_{1}-C_{8}, alcoxi C_{3}-C_{6}, o es fenilo o bencilo que puede estar opcionalmente sustituido con un alquilo u otro grupo hidrófobo. En relación con el ácido dicarboxílico, que proporciona dicho primer monómero, generalmente será un compuesto de fórmula:

1

en la que R^{1} y R^{2} son cada uno de ellos independientemente hidrógeno o alquilo C_{1}-C_{9}, al menos uno de los grupos R^{3} y R^{4} es hidrógeno y el otro es hidrógeno o alquilo C_{2}-C_{9}, y la estructura del copolímero es tal que las unidades del segundo monómero se alternan con la unidades de ácido dicarboxílico o éster proporcionando una disposición regular de grupos laterales hidrófilos aniónicos colgantes y grupos laterales hidrófobos alternados, a lo largo de una cadena principal lineal, con la condición de que, si en el monómero de vinilo monoenoico anteriormente definido R es hidrógeno o es etoxi (alcoxi C_{2}), R^{3} y R^{4} en dicho segundo monómero no deben ser ambos hidrógeno. Normalmente, en realizaciones preferidas, R^{1} y R^{2} son ambos hidrógeno y tampoco los copolímeros que contienen monómero de alquil vinil éter con grupos alquilo de longitud mayor que siete átomos de carbono serán adecuados a causa de la baja solubilidad en agua. Como se ha indicado, el ácido dicarboxílico puede estar presentado en forma de su anhídrido.

También, al menos en realizaciones preferidas, el número de átomos de carbono en los grupos laterales hidrófobos del polímero o copolímero debe ser normalmente igual o mayor que el número de átomos de carbono en la cadena principal del polímero, y cuando está ionizado la relación de carga media por carbono de la cadena principal es menor o igual a la unidad.

Polímeros especialmente adecuados pueden formarse como copolímeros alternantes de ácido maleico (o el anhídrido del mismo) con estireno, indeno o un alquilo C_{1}-C_{4}, p. ej. metilo, estireno o indeno sustituidos, o con propil (o ispropil) o butil vinil éter. También es posible usar una mezcla de componentes de estireno, indeno o estireno o indeno alquilados y de alquil vinil éter. Varios copolímeros adecuados que pueden ser usados son disponibles comercialmente de Aldrich Chemical Co., p. ej. los comercializados bajo el número de catálogo 43.529-5 de Aldrich Chemical Co. (CAS Registry No. 25736-61-2). Los polímeros o copolímeros de calidad farmacéutica que pueden ser usados son disponibles de Kuraray Co. Ltd. de Japón.

En realizaciones preferidas, el polímero tendrá propiedades no tóxicas aceptables fisiológicamente o farmacéuticamente, y el peso molecular (medio numérico) o masa relativa del polímero estará generalmente dentro del intervalo de 2.000 a 20.000 daltons. Sin embargo, en algunos casos, a menos que la composición se haya de formular para inyección parenteral, el peso molecular puede ser más alto, p. ej. hasta 500.000 daltons, aunque normalmente el peso molecular no será mayor que 100.000 daltons, y preferentemente no será mayor que 50.000 daltons, como, por ejemplo, con poli(anhídrido maleico-butil vinil éter), que tiene un peso molecular medio numérico igual a 43 kDa aproximadamente. Sin embargo, el polímero no ha de estar en forma de "copolímero de bloques".

Ejemplos de pesos moleculares medios numéricos típicos de los polímeros usados en la puesta en práctica de esta invención, especialmente para solubilizar fármacos, son los siguientes:

Poli(anhídrido maleico-estireno)	7.000
Poli(anhídrido maleico-propil vinil éter)	5.500
Poli(anhídrido maleico-butil vinil éter)	43.300

El método concreto de síntesis usado para sintetizar los copolímeros de anhídrido maleico y estireno descritos en el presente texto implican una etapa de apagado de la mezcla de reacción después de un cierto intervalo y favorece la formación de copolímeros alternantes que es una característica esencial en la formación de una espiral con carácter anfipático de forma que una faceta es hidrófoba y otra es hidrófila. Esto no puede conseguirse generalmente en copolímeros que son "bloqueados" o producidos por otros medios, p. ej. en los copolímeros de poli(anhídrido maleico-estireno) suministrados por Sigma Chemical Co., St. Louis, Missuori, y comercializados como 50% de estireno (peso molecular medio numérico 350.000), o los comercializados por Scientific Polymer Products Inc. Ontario, Nueva York, como copolímeros de anhídrido maleico-estireno 50/50 con un peso molecular de 50.000.

En muchos casos, especialmente para aplicaciones farmacéuticas, el poli(anhídrido maleico-estireno) (PMAS) será un polímero preferido. Este polímero, de 14.000 daltons de peso molecular, se describe en la patente de EE.UU. nº 4.732.933 (Yamanouchi) y se usa ya en un preparado farmacéutico aprobado, conjugado con el agente antitumoral proteínico neocarcinoestatina, actuando el polímero de forma que aumenta tanto el peso molecular como el carácter lipófilo, dando así lugar a la acumulación del fármaco en ciertos tejidos diana. Esto conjugado de polímero y fármaco es conocido como SMANCS. El documento JP 01061424A describe una formulación farmacéutica de SMANCS, un conjugado de copolímero de estireno/ácido maleico unido a moléculas del fármaco neocarcinostatina, preparado mezclando una solución de SMANCS en tampón de carbonato amónico (pH 7,5 a 9,5) con una solución de un fosfolípido tal como yema de huevo también en tampón de carbonato amónico (pH 7,5 a 9,5) para formar una mezcla que, después de ser liofilizada para eliminar el agua, se dispersa en un medio oleoso de contraste no acuoso, para entonces proporcionar una dispersión clara y transparente del conjugado SMANCS en ella.

Para suministro de fármaco, los polímeros no degradables basados en vinilo tales como PMAS ofrecen una ventaja potencial sobre los polipéptidos sintéticos de estructura análoga o idéntica a la de apoproteínas por cuanto no serán rápidamente hidrolizados en el plasma sanguíneo, y por tanto será más probable que suministren cualquier fármaco en el sitio diana antes de la degradación de la micela y la pérdida de su contenido. Además, carecen del potencial alérgico o farmacológico de péptidos o proteínas no nativos.

Se cree que en medio acuoso, al menos sobre un margen de pH particular, los polímeros anfipáticos sintéticos solubilizantes especificados en la presente invención adoptarán generalmente una configuración helicoidal con los grupos laterales hidrófobos presentados a lo largo de una faceta y los grupos hidrófilos aniónicos presentados a lo largo de la faceta opuesta, y que interaccionan con el lípido en el medio acuoso para formar partículas o conjuntos micelares discoidales de dimensiones sub-liposómicas en las que el lípido forma un núcleo bicapa. En cualquier caso, se ha encontrado que estas partículas o conjuntos micelares en las composiciones de la presente invención, al menos cuando están recién preparadas, tienen un diámetro o dimensión transversal máximos de menos de 50 nm, bajo condiciones fisiológicas de temperatura y pH. Los tamaños de los conjuntos micelares discoidales parecen estar normalmente en el intervalo de 10 a 40 nm de diámetro, típicamente 20 nm, y 5-7 nm de espesor. Esto se compara favorablemente con las dimensiones de conjuntos micelares de lipoproteína que se encuentran en la naturaleza, tales como el sistema bien caracterizado entre apolipoforina III y dimiristoilfosfatidilcolina (DMPC) que ha sido identificado en insectos, en relación con el cual se ha publicado que las micelas tienen un diámetro de 18,5 \pm 2,0 nm y un espesor de 4,8 \pm 0,8 nm (véase Wientzek, M., Kay, C.M., Oikawa, K. y Ryan, R.O. (1994), "Binding of Insect Apolipophorin III to Dimyristoylphosphatidylcholine Vesicles", J. Biological Chem. 269 (6) 4605-4612). En comparación, los liposomas que contienen fosfolípido típicos usados actualmente en sistemas de suministro de fármacos tienen un diámetro de 50-1000 nm para vesículas unilamelares y de 400-3500 nm para vesículas multilamelares.

Las composiciones de acuerdo con la invención se prepararán generalmente mezclando el polímero y el lípido polar en un medio acuoso y ajustando el pH para efectuar la solubilización. Después, sobre todo si se requieren para administración a un mamífero y para uso médico, normalmente se volverá a ajustar el pH a un valor aceptable fisiológicamente.

En consecuencia, desde otro aspecto más, la invención proporciona un método para preparar una composición que contiene lípido como se especificó anteriormente en el presente texto, que comprende las etapas de mezclar los constituyentes en un medio acuoso a un pH por encima del valor solubilizante crítico, para formar una dispersión acuosa opaca o turbia, y después tratar la mezcla con un agente de acidificación para hacer descender el pH por debajo del valor solubilizante crítico, mientras la temperatura está por encima de dicha temperatura de transición de fase predeterminada, característica del lípido, de forma que el polímero anfipático solubiliza el lípido y hace que la suspensión se clarifique.

La invención proporciona también un método para solubilizar en un medio acuoso una sustancia diana soluble en lípido, que tiene una escasa solubilidad en agua, comprendiendo dicho método las etapas de mezclar en dicho medio acuoso dicha sustancia diana, un lípido polar formador de membrana, y un polímero anfipático sintético, a un pH por encima de un valor solubilizante crítico para formar una dispersión acuosa opaca o turbia, y después tratar la mezcla con un agente de acidificación para hacer descender el pH por debajo de dicho valor solubilizante crítico, mientras la temperatura está por encima de una temperatura de transición de fase predeterminada, característica del lípido, con lo que el polímero anfipático sintético interacciona con dicho lípido y lo solubiliza junto con dicha sustancia diana en el medio acuoso, para producir un complejo polímero/lípido en forma de partículas o conjuntos micelares no liposómicos de forma discoidal, en el que dicho polímero anfipático sintético tiene una cadena principal lineal a lo largo de la cual están dispuestos uniformemente grupos hidrófobos y grupos hidrófilos aniónicos, y se elige entre:

(ii): un copolímero, distinto de un copolímero de bloques, de un primer monómero que es un ácido dicarboxílico insaturado o un anhídrido del mismo, y un segundo monómero que es un compuesto monoenoico, estando dichos primero y segundo monómeros dispuestos en una relación alternante a lo largo de dicha cadena principal lineal, con la condición de que si dicho segundo monómero es un alquil vinil éter el grupo alcoxi del mismo está en el intervalo de alcoxi C_{3}-C_{8}.

También, de acuerdo con la invención, un método para preparar una composición que contiene lípido comprende las etapas de mezclar en un medio acuoso un lípido polar formador de membrana y un polímero anfipático sintético, a un pH por encima de un valor solubilizante crítico, para formar una dispersión acuosa opaca o turbia, y después tratar la mezcla con un agente de acidificación para hacer descender el pH por debajo de dicho valor crítico solubilizante del lípido, mientras la temperatura está por encima de dicha temperatura de transición de fase predeterminada, característica del lípido, con lo que el polímero anfipático sintético interacciona con dicho lípido y lo solubiliza para producir un complejo polímero/lípido en forma de partículas o conjuntos micelares no liposómicos de forma discoidal, en el que el lípido polar forma un núcleo bicapa, para clarificar la dispersión, en donde dicho polímero anfipático sintético tiene una cadena principal lineal a lo largo de la cual están dispuestos uniformemente grupos hidrófobos y grupos hidrófilos aniónicos, y se elige entre:

(ii): un copolímero, distinto de un copolímero de bloques, de un primer monómero que es un ácido dicarboxílico insaturado o un anhídrido del mismo, y un segundo monómero que es un compuesto monoenoico, estando dichos primero y segundo monómeros dispuestos en una relación alternante a lo largo de dicha cadena principal lineal, con la condición de que si dicho segundo monómero es un alquil vinil éter el grupo alcoxi del mismo está en el intervalo de alcoxi C_{3}-C_{8}, y en donde después de que se clarifica la dispersión se reduce la temperatura por debajo de dicha temperatura de transición de fase para estabilizar la solución, seguido por la etapa de tratar la solución con un reactivo alcalino para aumentar el pH y ajustarlo en un valor final por encima de dicho valor crítico solubilizante del lípido.

La temperatura de transición de fase predeterminada puede ser superior a 25ºC.

En general, antes de usarlas, las composiciones que contienen lípido de la presente invención se incorporarán en formulaciones constituidas para adaptarse al propósito y forma de uso en particular, o al modo de administración en el caso de aplicaciones farmacéuticas. Para preparar formulaciones para uso farmacéutico, las composiciones que contienen lípido pueden mezclarse con uno o más vehículos, aditivos, diluyentes o excipientes aceptables farmacéuticamente, y opcionalmente con cualquier otro ingrediente terapéutico que se desee. Tales formulaciones pueden prepararse por cualquiera de los métodos bien conocidos en la técnica farmacéutica, y pueden destinarse a administración por inhalación, tópica o parenteral (incluyendo intravenosa, intramuscular y subcutánea), por ejemplo. Las formulaciones adecuadas para administración parenteral comprenden convenientemente preparados acuosos estériles que, para inyección intravenosa, son preferentemente isotónicos con la sangre del receptor. Así, la invención incluye también las formulaciones farmacéuticas que comprenden composiciones de complejos lípido/polímero como se describen en el presente texto.

Se entenderá también que las composiciones que contienen lípido de la presente invención pueden convertirse en formas alternativas, p. ej. para almacenamiento y transporte, y en particular las composiciones pueden convertirse en un estado liofilizado, bien sea antes o después de ser incorporadas en una formulación farmacéutica o de otro tipo, a partir del cual pueden ser reconstituidas, si es necesario, cuando se necesiten para su uso. Todas estas formas alternativas se han de considerar dentro del alcance de la invención.

Como ya se ha indicado, aplicaciones particularmente importantes de la invención relacionadas con características tensioactivas ventajosas de las composiciones que contienen lípido descritas, residen en la provisión de formulaciones de agentes tensioactivos pulmonares para ser usadas en el tratamiento del síndrome de distrés respiratorio (RDS) y en la provisión de formulaciones oculares, p. ej. para el tratamiento del síndrome de ojos secos.

Otras importantes aplicaciones de la invención, relacionadas con las ventajosas propiedades solubilizantes de los complejos de lípido/polímero, incluyen el uso de las composiciones con el propósito de suministro de fármacos. En este caso el componente de lípido polar es preferentemente un fosfolípido y contiene un fármaco soluble en lípidos, p. ej. un esteroide, u otro agente terapéutico bioactivo, p. ej. un vector o plásmido que contiene DNA para terapia génica, con los que el complejo de polímero/fosfolípido está adaptado para ser usado como vehículo para suministro de fármacos.

En otro aspecto, la presente invención proporciona el uso de una composición líquida que contiene lípido en la elaboración de un medicamento para el tratamiento del síndrome de distrés respiratorio, comprendiendo dicha composición líquida que contiene lípido un lípido polar formador de membrana, dispersado en un medio acuoso, junto con un polímero anfipático sintético que interacciona con el lípido polar para producir un complejo polímero/lípido, por el que dicho polímero interacciona con el lípido polar en el medio acuoso y lo solubiliza, mientras el pH está por debajo de un valor crítico solubilizante del lípido y mientras la temperatura está por encima de una temperatura de transición de fase predeterminada dependiente del lípido polar en concreto, siendo dicha composición de pH variable de forma que el pH puede subir desde un valor inferior a dicho valor crítico solubilizante del lípido hasta un valor por encima de dicho valor crítico solubilizante del lípido, mediante la adición de un reactivo alcalino, y estando también caracterizado por la siguiente combinación de características:

(b): el complejo polímero/lípido producido está en forma de partículas o conjuntos micelares no liposomales de forma discoidal en los que el lípido polar forma un núcleo de bicapa;

(c): el polímero anfipático sintético tiene una cadena principal lineal a lo largo de la cual grupos hidrófobos y grupos hidrófilos aniónicos están dispuestos uniformemente y se elige entre:

(ii): un copolímero, distinto de un copolímero de bloques, de un primer monómero que es un ácido dicarboxílico insaturado o un anhídrido del mismo, y un segundo monómero que es un compuesto monoenoico, estando dichos primero y segundo monómeros dispuestos en una relación alternante a lo largo de dicha cadena principal lineal, con la condición de que si dicho segundo monómero es un alquil vinil éter el grupo alcoxi del mismo está en el intervalo de alcoxi C_{3}-C_{8}, y

También, desde otro aspecto más, la presente invención proporciona el uso de composiciones líquidas que contienen lípido en el elaboración de un medicamento para el tratamiento del ojo seco, comprendiendo dicha composición líquida que contiene lípido un lípido polar formador de membrana, dispersado en un medio acuoso, junto con un polímero anfipático sintético que interacciona con el lípido polar para producir un complejo polímero/lípido, por el que dicho polímero interacciona con el lípido polar en el medio acuoso y lo solubiliza, mientras el pH está por debajo de un valor crítico solubilizante del lípido y mientras la temperatura está por encima de una temperatura de transición de fase predeterminada dependiente del lípido polar en concreto, siendo dicha composición de pH variable de forma que el pH puede subir desde un valor inferior a dicho valor crítico solubilizante del lípido hasta un valor por encima de dicho valor crítico solubilizante del lípido, mediante la adición de un reactivo alcalino, y estando también caracterizado por la siguiente combinación de características:

(b): el complejo polímero/lípido producido está en forma de partículas micelares o conjuntos no liposomales de forma discoidal en los que el lípido polar forma un núcleo de bicapa;

De acuerdo con otro aspecto más de la presente invención, se proporciona una composición como se define en el presente texto, siendo dicha composición para uso en terapia.

En relación con el uso propuesto de las composiciones como agentes tensioactivos pulmonares, puede señalarse que durante un tiempo se han buscado polímeros sintéticos que tengan estructuras secundarias análogas a las de apoproteínas tensioactivas pulmonares nativas, con el fin de imitar la interacciones lípido/proteína encontradas en estas últimas. Sin embargo, es sorprendente que, aunque se han sintetizado varios polímeros con elementos estructurales similares, estos no han logrado manifestar un comportamiento funcional análogo al de las apoproteínas diana originales, pero por otra parte se ha encontrado que algunos copolímeros relativamente simples, tales como los descritos en relación con la presente invención y que no tienen una similitud estructural aparente, desempeñan una funcionalidad de una manera que se parece mucho a la de las apoproteínas nativas.

Recientemente ha surgido una visión bien clara en relación con la estructura macromolecular del agente tensioactivo pulmonar original, y los componentes activos del mismo han sido identificados como una estructura de bicapa consistente sobre todo en el fosfolípido, dipalmitoilfosfatidilcolina (DPPC), en asociación con dos apoproteínas principales llamadas SP-B y SP-C que parecen estar implicadas en la diseminación del lípido en la interfase aire/fluido.

De estas dos apoproteínas, el análisis de NMR multidimensional ha revelado que la SP-C tiene una estructura secundaria en forma de una hélice trasmembrana que está dipalmitoilada en un extremo y abarca la bicapa de fosfolípido proyectándose las cadenas de dipalmitoílo hacia fuera de forma que se hace hidrófoba a la interfase. Por otra parte, se cree que la apoproteína SP-B forma una hélice anfipática análoga a las estructuras helicoidales que se encuentran en lipoproteínas del suero y rodea segmentos o micelas discoidales de la bicapa de fosfolípido en forma de un anillo hidrófilo. La disposición contemplada es similar a la disposición ahora bien establecida descrita por Ryan, R.O. "Structural studies of lipoproteins and their apolipoprotein components", Biochem. Cell Biol. 74, 155-164 (1996) en relación con ciertas lipoproteínas del plasma, ilustrada en la Figura 1 del dibujo anexo.

En el desarrollo de las composiciones de la presente invención para ser usadas como agente tensioactivo pulmonar, el lípido polar, generalmente un fosfolípido, puede ser también asociado ventajosamente con un polímero sintético adicional, un polímero de poliamida anfipático sintético, que se adapta para simular la apoproteína transmembrana conocida como SP-C del agente tensioactivo pulmonar endógeno natural. Tal polímero de poliamida adicional puede ser poli(lisina etil éster adipamida) (PLETESA) que tiene una configuración helicoidal que cambia según esté en un medio polar o en un medio no polar.

Cuando las composiciones están destinadas para ser usadas como agentes tensioactivos pulmonares, la inclusión de ésteres hidrófobos adicionales diseñados para abarcar o extenderse por la bicapa lipídica de una manera algo análoga a la apoproteína SP-C del agente tensioactivo pulmonar natural puede ser ventajosa para ayudar a la orientación en las interfases aire/fluido de los complejos lípido/polímero de estas composiciones. Para este propósito puede usarse un éster de ácido graso, p. ej. lauril éster de ácido láurico.

En relación con otras composiciones que contienen lípidos descritas en la técnica anterior, puede hacerse observar además que el documento WO 9511700A describe una emulsión submicrométrica (SME) de agua-en-aceite para ser usada como coadyuvante de vacunas para aumentar la inmunogenicidad y mejorar la respuesta inmunitaria de los antígenos en vacunas. Las partículas submicrométricas de la emulsión tienen generalmente un núcleo lipídico hidrófobo no polar estabilizado con un agente tensioactivo anfifílico o no iónico. Como adición opcional puede incluirse un compuesto de fosfolípido como emulsionante, y también puede incluirse un polímero sintético tal como copolímero de poli(metilvinil éter/ácido maleico) para proporcionar propiedades bioadhesivas. También, el documento JP 5228358A se refiere a la producción de liposomas sensibles a la temperatura en la que liposomas de lípidos convencionales a una temperatura próxima a su punto de "enturbiamiento" tienen un compuesto de polímero superior, tal como un polímero de poli(ácido acrílico) sustituido con grupos hidrófobos, depositado sobre los mismos de forma que se genera una alteración de la película del liposoma, que permite la liberación, a una temperatura específica, de los materiales contenidos dentro del liposoma.

Descripción de ejemplos ilustrativos

Los ejemplos que siguen y la descripción de etapas en la preparación y uso de varias composiciones ejemplares que contienen complejos de polímero/fosfolípido sirven para ilustrar mejor la presente invención y permitirán que un experto en la técnica aprecie más fácilmente la naturaleza de la invención y la lleve a la práctica. Sin embargo, no han de ser considerados en modo alguno limitantes de dicha invención.

Ejemplo 1 Síntesis del polímero 1 - Preparación de copolímeros vinílicos de anhídrido maleico y de estireno o de alquil vinil éteres

En un procedimiento típico, los copolímeros vinílicos de anhídrido maleico y estireno o alquil vinil éteres se sintetizan en un matraz de resina bajo atmósfera de nitrógeno calentando a reflujo a 80ºC. Se disuelven 0,125 moles de cada monómero en 225 ml de una mezcla equimolar de tolueno y acetato de etilo, de calidad reactivo, y a esta mezcla (450 ml) se añade aproximadamente 1% en peso, o menos, de un iniciador tal como di-(4-terc-butil ciclohexil)peroxidicarbonato (0,25 g) o peróxido de benzoílo (0,4 g). La solución reaccionante resultante se vuelve turbia al formarse el polímero en el caso de poli(anhídrido maleico estireno) ya que este polímero es insoluble en el sistema de disolventes empleado. Se deja que prosiga la reacción durante diez minutos después de la primera aparición de polímero precipitado y se detiene apagándola en un baño de hielo. El polímero resultante se retira después mediante filtración, se calienta a reflujo con exceso de disolvente para eliminar cualquier monómero que no haya reaccionado, y finalmente se vuelve a filtrar, se lava en metanol y se seca bajo vacío.

Cuando el polímero es soluble en la mezcla de disolventes, como es el caso de polímeros que contienen alquil vinil éteres, se deja que la reacción proceda durante un tiempo entre treinta minutos y dos horas. Después se recupera el polímero por precipitación en dietil éter sobreenfriado y se recoge mediante filtración y se seca bajo vacío.

Al llevar a cabo la invención, pueden usarse copolímeros alternativos de anhídrido maleico y metil estireno, u otros compuestos de alquil estireno o indeno, en vez de anhídrido maleico/estireno.

Ejemplo 2 Formación de complejo micelar polímero/lípido

Las composiciones de complejo micelar polímero/lípido se forman hidratando una muestra del copolímero basado en ácido maleico del Ejemplo 1 a una concentración adecuada, bien sea en agua o en solución salina isotónica a un pH por encima de 7,0, y mezclándola mediante agitación mecánica con una muestra hidratada de un fosfolípido seleccionado, bien sea DPPC o DLPC, hasta que resulte una suspensión homogénea. Usando DPPC será necesario, desde luego, mantener la mezcla a una temperatura elevada por encima de la temperatura de transición de fase principal, p. ej. a aproximadamente 50ºC, en esta etapa. Después se baja el pH hasta que esté entre 3 y 5, punto en el cual la suspensión se aclara espontáneamente, indicando la formación de estructuras micelares de dimensiones más pequeñas que las de la longitud de onda de la luz visible.

La solución incolora clara y transparente resultante puede ser enfriada, si es necesario, p. ej. si está presente DPPC, y puede ser ajustada al pH deseado añadiendo hidróxido sódico (0,1 M) o bien ácido clorhídrico (0,1 M). Una vez obtenido el pH deseado, la solución puede liofilizarse para ser almacenada.

Un procedimiento similar es adoptado con sistemas de tres componentes en los que también se añade a la mezcla un éster de ácido graso, u otro polímero tal como PLETESA, o una sustancia a solubilizar y/o transportar en el componente lípido de los complejos micelares, antes de bajar el pH.

Ensayo

Para comprobar y ensayar las propiedades de las composiciones de complejos de polímero/fosfolípido de acuerdo con la invención, se prepararon varios ejemplos y los resultados de diversos ensayos de las características de la actividad superficial realizados para algunos de ellos se muestran en las Tablas que se exponen más adelante. Para facilitar la realización de experimentos a temperatura ambiente en vez de a una temperatura elevada, la mayoría de los complejos preparados y ensayados se basaron en el uso de dilaurilfosfatidilcolina (DLPC) como fosfolípido formador de membrana en vez de dipalmitoilfosfatidilcolina (DPPC), ya que a temperatura ambiente la DLPC está por encima de su temperatura de transición de fase en un estado cristalino líquido. Así, las moléculas de DLPC se ensamblan fácilmente en bicapas cuando se mezclan con los polímeros anfipáticos. Como ya se ha hecho observar, el uso de DPPC es necesario generalmente para reacciones y ensayos a realizar a temperatura mucho más elevada, por encima de su temperatura de transición de fase de aproximadamente 42ºC, aunque en el producto final podría ser preferible la DPPC debido a sus mejores características de actividad superficial o estabilidad.

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Los complejos que han sido preparados y ensayados incluyen varios complejos formados a partir de DPPC o DLPC y poli(ácido maleico estireno) (PMAS), poli(ácido maleico butil vinil éter) (PMBE) o poli(ácido maleico propil vinil éter) (PMPE).

Una de las más importantes propiedades de los complejos de polímero/fosfolípido de acuerdo con la invención, especialmente para su uso como agentes tensioactivos pulmonares artificiales, es la manera en la que la tensión superficial varía con cambios repetidos del área de la superficie, y un método de ensayo que se ha empleado es una técnica de burbuja pulsante que utiliza un surfactómetro de burbuja pulsante con consiste en una cámara de muestra, unidad pulsadora y dispositivo de registro de la presión. En un ejemplo particular, la cámara de muestra está constituida por un tubo capilar (diámetro interior 0,5 mm) introducido en un tubo de mayor diámetro (diámetro interior 1,5 mm). Este último se llena con el líquido de muestra y se conecta a una unidad pulsadora y un trasductor de presión. Se introduce aire a través del tubo capilar que actúa como vía respiratoria, formando una burbuja de aire dentro de la cámara de muestra. Esta burbuja sirve de alvéolo modelo. La columna de líquido dentro de la cámara de muestra sube y baja por medio de un pistón de pequeño diámetro conectado a un motor síncrono lo que permite que el área de la superficie se reduzca repetidamente al 50% de su volumen original. Las variaciones de presión dentro de la burbuja, durante cada ciclo de pulsación, se miden mediante un transductor y se combinan con los valores del volumen de burbuja para calcular los cambios de tensión superficial.

Esta técnica de burbuja pulsante simula hasta cierto punto la contracción y la expansión de los sacos alveolares en los pulmones y permite que la tensión superficial sea evaluada para los volúmenes mínimo y máximo de la burbuja, y permite observar y cuantificar el efecto de ciclos repetidos de expansión y compresión sobre la adsorción de componentes tensioactivos. Esta técnica ha sido usada como sistema modelo in vitro para ensayar la eficacia de agentes tensioactivos pulmonares sintéticos. Algunos resultados de ensayos realizados no solo sobre los complejos preparados de acuerdo con la invención, sino también sobre los fosfolípidos formadores de membrana usados y los propios polímeros, así como sobre agentes tensioactivos pulmonares disponibles comercialmente, se resumen en las Tablas al final de la presente memoria descriptiva.

Primero se realizaron experimentos testigo de tensiometría de burbuja pulsante, con las composiciones listadas en la Tabla II solas. Ninguno de los polímeros usados en estos experimentos de control, al ser ensayados en solución acuosa, mostró actividad superficial significativa. En cambio, se encontró que los agentes tensioactivos comerciales que contenían apoproteínas derivadas de animales, Curosurf™ y Survanta™, desarrollaban rápidamente tensiones superficiales excesivamente bajas después de periodos de pulsación relativamente cortos (5 minutos) como se muestra en la Tabla I.

Cuando se combinó PMAS con el fosfolípido DLPC en un sistema de dos componentes, se registraron valores bajos de tensión superficial al cabo de 5 minutos de pulsación a pH 4,9 (véase la Tabla III). También se obtuvieron valores de tensión superficial igualmente bajos con complejos de DLPC/PMBE, registrándose los valores más bajos al cabo de 5 minutos de pulsación cuando se usa DLPC al 2,5% ensayado a pH 4,17 con una relación de lípido/polímero de 10:1. También se observó una tensión superficial baja con los complejos tensioactivos de DLPC/PMPE cuando se ensayan a 2,5% en una relación 1:1 a pH 4,30, como también se muestra en la Tabla III, aunque se requirió un periodo de pulsación algo más largo. Resultados similares se muestran en la Tabla IV obtenidos con complejos tensioactivos de tres componentes. En la Tabla V se muestran otros resultados.

Estos resultados de las Tablas III, IV y V indican una elevada adecuación para el uso como agentes tensioactivos pulmonares artificiales. Puede hacerse énfasis sobre el hecho de que estos conjuntos sintéticos contrastan con los agentes tensioactivos pulmonares comerciales basados en proteínas derivadas de animales, para los cuales no se han definido hasta ahora las respuestas a largo plazo, potencialmente alérgicas.

Aplicaciones relacionadas con el suministro de fármacos

Los agentes tensioactivos sintéticos descritos tienen también la facultad de suministrar localmente en el pulmón fármacos convencionales, DNA o RNA o productos farmacéuticos de base génica, o a través de las membranas altamente permeables que revisten el pulmón profundo, en el sistema circulatorio sistémico. Las composiciones que contienen lípido, que contienen los conjuntos micelares discoidales descritos, pueden por tanto usarse para suministrar fármacos para el tratamiento de enfermedades pulmonares o para el transporte a la circulación sistémica para ser usados en el tratamiento de enfermedades sistémicas.

Alternativamente, formulaciones adecuadas de las composiciones descritas, que contienen los sistemas micelares de dimensiones sub-liposómicas, podrían ser inyectadas directamente en la circulación sistémica para suministrar o dirigir activamente a una diana fármacos contenidos dentro del núcleo de bicapa. Si estas composiciones se preparan usando el copolímero PMAS de peso molecular relativamente bajo, citado anteriormente en el presente texto, aunque este es no degradable como se ha puntualizado, ha sido previamente usado en medicina y es probable que sea excretado fácilmente a través de los riñones. En cuanto al fosfolípido DPPC, este es endógeno para el cuerpo y en cualquier caso es probable que se rompa con facilidad en el organismo sin provocar serios problemas.

Usando ya composiciones de acuerdo con la invención, algunas entidades de fármacos insolubles en agua han sido incorporadas con éxito en conjuntos micelares, y solubilizadas. Para permitir el direccionamiento específico para el sitio, es también posible incorporar adicionalmente ligandos biológicos (p. ej. anticuerpos, receptores) en los conjuntos micelares. Otros fármacos que tienen una escasa solubilidad en agua y que son posibles candidatos para la incorporación, solubilización y suministro en conjuntos micelares de fosfolípido de composiciones de la presente invención, incluyen taxol y quercetina. También es posible incorporar un plásmido de DNA en el núcleo de conjuntos micelares para ser usado en terapia génica y, además, es muy factible incorporar receptores CD4 durante la preparación. Tales receptores CD4 podrían sobresalir por encima del plano de la membrana de bicapa de los conjuntos micelares y permitir el direccionamiento activo a regiones celulares concretas.

Ejemplo 3

Un ejemplo del uso de complejos de fosfolípidos y polímeros anfipáticos de asociación en composiciones preparadas de acuerdo con la invención para el suministro de fármacos con potencial para dirigirse a áreas del cuerpo concretas, viene proporcionado por el éxito en la solubilización del agente anti-canceroso CB 1954 en un complejo de DLPC/PMAS a 1% de concentración.

En este Ejemplo, se prepara una formulación para solubilizar el fármaco citotóxico insoluble en agua CB 1954: 5-(aziridin-1-il)-2,4-dinitrobenzamida en una micela de DLPC/PMAS de la forma siguiente:

Se hidrata 1 ml de DLPC al 2% (20 mg) en agua de calidad para HPLC, y a esta solución se añade 1 mg de CB 1954. Después se agita la mezcla con 1 ml de una solución al 2% de PMAS (20 mg) a pH 6,2, para dar una concentración final en peso de 1% de DLPC, 0,05% de CB 1954 y 1% de PMAS en 2 ml, que forma una solución turbia. El pH de esta solución se baja a pH 3 y después se sube a pH 5,8, después de lo cual la solución se aclara y se ajusta a pH 7,0.

Ejemplo 4

Un ejemplo de la formulación de composiciones preparadas de acuerdo con la invención para el suministro dirigido de fármacos al pulmón o a la circulación sistémica, viene proporcionado por la siguiente formulación de corticosteroide:

DLPC	2,5%
PMAS	0,25%
Dexametasona	0,25%
hidroxibenzoato de metilo	0,3%
hidroxibenzoato de propilo	0,3%
cloruro sódico	0,8%
agua purificada	q.s.
pH	5,5

Ejemplo 5

Un ejemplo de la formulación potencial de composiciones preparadas de acuerdo con la invención, para el suministro de un fármaco fungicida, bien sea en una aplicación médica o no médica, lo proporciona la siguiente formulación fungicida:

DLPC	2,5%
PMAS	0,25%
anfotericina B	0,25%
hidroxibenzoato de metilo	0,3%
hidroxibenzoato de propilo	0,3%
cloruro sódico	0,8%
agua purificada	q.s.
pH	5,5

Otras aplicaciones

Aparte del suministro de fármacos, las formulaciones aceptables farmacéuticamente de las composiciones de acuerdo con la invención pueden usarse también para tratar o lubricar superficies de articulaciones lesionadas o enfermas, p. ej. por inyección intraarticular, y también pueden usarse para recubrir y tratar superficies de dispositivos médicos y prótesis, p. ej. articulaciones artificiales o lentes de contacto.

A título de ejemplo, a continuación se expone una formulación oftálmica u ocular típica, para tratar el síndrome de ojos secos, para recubrir lentes de contacto o para incorporar en productos para el mantenimiento de las lentes de contacto.

Ejemplo 6

DLPC	2,5%
PMAS	0,25%
hidroxibenzoato de metilo	0,3%
hidroxibenzoato de propilo	0,3%
cloruro sódico	0,8%
agua purificada	q.s.
pH	5,5

Otros ejemplos relacionados con las propiedades solubilizantes de las composiciones de acuerdo con la invención se exponen más adelante.

La capacidad solibilizante del sistema micelar de polímero/lípido puede ser más potenciada incorporando agentes tensioactivos adicionales. Esto puede ser especialmente útil cuando se solubilizan materiales excesivamente hidrófobos en los que la capacidad solubilizante del PMAS es insuficiente para formar una solución acuosa estable. En este caso la incorporación de agentes tensioactivos tales como copolímeros de bloques de poli(óxido de etileno)/poli(óxido de propileno) aceptables toxicológicamente (disponibles de BASF Corporation y comercializados bajo los nombres comerciales Pluronic y Tetronic), puede producir una notable mejora en la solubilización obtenida.

Ejemplo 7

Este representa un ejemplo de una formulación del tipo anterior y consiste en:

(a): Una mezcla de lípidos que contiene lecitina (diacil fosfatidilcolina) como la disponible de International Speciality Products ISP (USA) y comercializada bajo el nombre comercial ProLipid 141 (esta mezcla incluye también alcohol behenílico, alcoholes C_{12}-C_{16}, ácidos esteárico y palmítico y estearato de glicerilo, además de la lecitina), usada en la concentración de 0,1% (p/p);

(b): PMAS de Aldrich Chemical Co. (EE.UU), nº de cat. 43.529-5, usado en la concentración de 0,5% (p/p);

(c): Pluronic calidad L64 (BASF Corp.), usado en la concentración de 0,25% (p/p).

Esta formulación muestra una capacidad solubilizante limitada por encima de pH 7, pero al bajar el pH por debajo de un valor crítico de 3 a 4, en el cual tienen lugar cambios conformacionales dentro del PMAS, ocurre la solubilización del material hidrófobo. La presencia del copolímero Pluronic evita también la precipitación del PMAS a medida que baja el pH por debajo de 3, lo que indica cierto emulsionamiento del PMAS.

Puede hacerse observar que las composiciones de esta invención que contienen lípido polar formador de membrana, agente tensioactivo y un polímero anfipático sintético tal como poli(ácido maleico - estireno) (PMAS) pueden también ser incorporadas ventajosamente en mezclas de monómeros usadas para preparar hidrogeles, antes de su polimerización, para formar así una red polímera semi-interpenetrante o SIPN (Semi-Interpenetrating Polymer Network). Tales hidrófobos que contienen PMAS muestran un cambio en sus características superficiales al contacto con hidrófobos micelares ya que el polímero anfipático en la superficie parece reorientarse para exponer porciones hidrófobas de la molécula. Este efecto puede permitir que componentes de superficie sean adsorbidos selectivamente, p. ej. agentes tensioactivos simples, agentes tensioactivos poliméricos y mezclas hidrófobo/agente tensioactivo. En este último caso puede hacerse observar que los componentes de superficie reemplazan parcialmente al fosfolípido como agente formador de película.

Como se indicó anteriormente, las composiciones de acuerdo con la invención pueden tener también otras muchas aplicaciones útiles, especialmente en relación con la solubilización de sustancias solubles en lípidos que tienen una escasa solubilidad en agua, y la invención puede ser particularmente aplicable en este sentido en la industria cosmética y también en la industria alimentaria, en las que frecuentemente se encuentran problemas para disolver fosfolípidos de lecitina u otros lípidos anfipáticos y sustancias insolubles en agua, p. ej. en la fabricación de lociones, cremas, salsas y materiales de este tipo, de forma coloidal.

Los conjuntos micelares polímero/lípido descritos en el presente texto pueden ser usados también como plataforma para la incorporación de proteínas de membrana, receptoras o lipodiales, con el fin de mantener las proteínas dentro de un entorno de bicapa de fosfolípido fisiológicamente válido, en el que conservan su conformación original, al tiempo que las solubilizan en un entorno acuoso. En este entorno la estructura de tales proteínas puede ser determinada por métodos espectroscópicos tales como espectroscopía de NMR de protón. Esta ofrece una acusada ventaja sobre las técnicas en fase sólida existentes, que son considerablemente menos sensibles, y por ello permitirá una resolución estructural mejorada y un diseño más eficaz de moléculas de fármacos potenciales o la evaluación de la unión del fármaco.

TABLA II Testigos

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2

TABLA III Complejos fosfolípido/polímero DLPC-PMAS/PMBE/PMPE en sistemas de dos componentes

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3

TABLA IV Complejos fosfolípido/polímero DLPC-PMAS/LALE/PLETESA-PALMITAMIDA (PP) en sistemas de tres componentes

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Claims

1. Una composición líquida que contiene lípidos, en la que un lípido polar formador de membrana está dispersado en un medio acuoso junto con un polímero anfipático sintético que interacciona con el lípido polar produciendo un complejo polímero/lípido, por lo que dicho polímero interacciona con el lípido polar, y lo solubiliza en el medio acuoso, mientras el pH está por debajo de un valor crítico solubilizante del lípido y mientras la temperatura está por encima de una temperatura de transición de fase predeterminada que depende del lípido polar en particular, siendo dicha composición de pH variable de forma que puede subirse el pH desde un valor inferior a dicho valor crítico solubilizante del lípido hasta un valor por encima de dicho valor crítico solubilizante del lípido, mediante la adición de un reactivo alcalino, y estando también caracterizado por la siguiente combinación de características:

(b): el complejo polímero/lípido producido está en forma de partículas o conjuntos micelares no liposómicos de forma discoidal en los que el lípido polar forma un núcleo de bicapa;

(c): el polímero anfipático sintético tiene una cadena principal lineal a lo largo de la cual grupos hidrófobos y grupos hidrófilos aniónicos están dispuestos uniformemente y es un copolímero, distinto de un copolímero de bloques, de un primer monómero que es un ácido dicarboxílico insaturado o un anhídrido del mismo, y un segundo monómero que es un compuesto monoenoico, estando dispuestos dichos primero y segundo monómeros en una relación alternante a lo largo de dicha cadena principal lineal, con la condición de que, si dicho segundo monómero es un alquil vinil éter, el grupo alcoxi del mismo está en el intervalo de alcoxi C_{3}-C_{8}, y

2. Una composición líquida que contiene lípido, en la que un lípido polar formador de membrana es dispersado en un medio acuoso junto con una sustancia diana soluble en lípidos, de escasa solubilidad en agua, y un polímero anfipático sintético que interacciona con el lípido polar produciendo un complejo polímero/lípido y solubiliza dicha sustancia diana y dicho lípido polar en el medio acuoso mientras el pH está por debajo de un valor crítico solubilizante del lípido y mientras la temperatura está por encima de una temperatura de transición de fase predeterminada que depende del lípido polar en particular, siendo dicha composición variable con el pH de forma que puede subirse el pH desde un valor inferior a dicho valor crítico solubilizante del lípido hasta un valor por encima de dicho valor crítico solubilizante del lípido, mediante la adición de una reactivo alcalino, y estando también caracterizado por la siguiente combinación de características:

(ii): un copolímero, distinto de un copolímero de bloques, de un primer monómero que es un ácido dicarboxílico insaturado o un anhídrido del mismo, y un segundo monómero que es un compuesto monoenoico, estando dichos primero y segundo monómeros dispuestos en una relación alternante a lo largo de dicha cadena principal lineal, con la condición de que, si dicho segundo monómero es un alquil vinil éter, el grupo alcoxi del mismo está en el intervalo de alcoxi C_{3}-C_{8}, y

3. Una composición que contiene lípido según la reivindicación 2ª, en la que dicho polímero anfipático sintético es un homopolímero elegido entre poli(ácido 2-etil-acrílico)(PEAA) y poli(ácido 2-propil-acrílico) (PPAA).

4. Una composición que contiene lípido según las reivindicaciones 1ª o 2ª, en la que dicho segundo monómero de dicho copolímero es un compuesto de fórmula R-CH=CH_{2}, en la que R se elige entre hidrógeno, alquilo C_{1}-C_{8}, alcoxi C_{3}-C_{6}, fenilo, bencilo y fenilo o bencilo sustituidos con un alquilo u otro grupo hidrófobo.

5. Una composición que contiene lípido según la reivindicación 4ª, en la que el primer monómero de dicho copolímero es un ácido dicarboxílico que tiene la fórmula:

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en la que R^{1} y R^{2} son cada uno de ellos independientemente hidrógeno o alquilo C_{1}-C_{9}, uno de los grupos R^{3} y R^{4} es hidrógeno y el otro es hidrógeno o alquilo C_{2}-C_{9}, y en la que la estructura del copolímero es tal que las unidades del segundo monómero y las unidades unidades del primer monómero de ácido dicarboxíco o semiéster proporcionan una disposición regular de grupos laterales hidrófilos aniónicos colgantes y grupos laterales hidrófobos alternados, a lo largo de la cadena principal lineal, con la condición de que, si en dicho segundo monómero R es hidrógeno o es etoxi (alcoxi C_{2}), R^{3} y R^{4} en dicho primer monómero no son ambos hidrógeno.

6. Una composición que contiene lípido según la reivindicación 5ª, en la que R^{1} y R^{2} de dicho primer monómero son ambos hidrógeno y R de dicho segundo monómero, si es alquilo, contiene menos de ocho átomos de carbono.

7. Una composición que contiene lípido según una cualquiera de las reivindicaciones precedentes, en la que la relación de carga media por carbono de la cadena principal de dicho polímero anfipático cuando está ionizado es menor o igual a la unidad.

8. Una composición que contiene lípido según una cualquiera de las reivindicaciones precedentes, en la que dicho polímero anfipático sintético es un copolímero alternante de ácido maleico (o anhídrido del mismo) con estireno, indeno, un estireno o indeno sustituido con alquilo C_{1}-C_{4}, o con un alquil vinil éter elegido entre etil, propil, isopropil y butil vinil éter.

9. Una composición que contiene lípido según una cualquiera de las reivindicaciones precedentes, en la que dicho polímero anfipático sintético tiene un equilibrio de grupos hidrófobos y grupos hidrófilos aniónicos dispuestos uniformemente a lo largo de una cadena principal lineal.

10. Una composición que contiene lípido según una cualquiera de las reivindicaciones precedentes, en la que dicho lípido comprende un fosfolípido.

11. Una composición que contiene lípido según la reivindicación 10ª, en la que el fosfolípido es un derivado de ácido fosfatídico en el que los grupos éster de acilo no polares contienen de ocho a veinticinco átomos de carbono.

12. Una composición que contiene lípido según la reivindicación 11ª, en la que el fosfolípido es una fosfatidilcolina.

13. Una composición que contiene lípido según la reivindicación 11ª, en la que el fosfolípido se elige entre dipalmitoilfosfatidilcolina (DPPC), dilauroilfosfatidilcolina (DLPC) y dimiristoilfosfatidilcolina (DMPC).

14. Una composición que contiene lípido según una cualquiera de las reivindicaciones precedentes, en la que dicho polímero sintético tiene propiedades no tóxicas fisiológica y farmacéuticamente aceptables, adecuadas para su administración a mamíferos.

15. Una composición que contiene lípido según una cualquiera de las reivindicaciones precedentes, en la que el peso molecular (medio numérico) o la masa relativa del polímero sintético está en el intervalo de 2.000 a 500.000 daltons.

16. Una composición que contiene lípido según la reivindicación 15ª, en la que el peso molecular (medio numérico) o la masa relativa del polímero sintético es menor que 50.000 daltons.

17. Una composición que contiene lípido según una cualquiera de las reivindicaciones 8ª a 16ª, en la que dicho polímero sintético es un copolímero de poli(ácido maleico-estireno) (PMAS).

18. Una composición que contiene lípido según una cualquiera de las reivindicaciones precedentes, en la que las partículas o conjuntos micelares formados por el complejo polímero/lípido en el medio acuoso tienen un diámetro o una dimensión transversal máximos inferior a 50 nm bajo condiciones fisiológicas de temperatura y pH.

19. Una composición que contiene lípido según una cualquiera de las reivindicaciones precedentes, que incluye uno o más agentes tensioactivos adicionales que mejoran sus propiedades solubilizantes.

20. Una composición que contiene lípido según la reivindicación 2ª, en la que dicha sustancia diana soluble en lípido es un fármaco o un agente terapéutico bioactivo.

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21. Una composición que contiene lípido según una cualquiera de las reivindicaciones precedentes, incorporada en un formulación para uso farmacéutico en la cual la sustancia está mezclada con uno o más vehículos, aditivos, diluyentes o excipientes aceptables farmacéuticamente.

22. Una formulación para uso farmacéutico como se define en la reivindicación 21ª, que comprende un preparado acuoso estéril adecuado para administración parenteral.

23. Una formulación de agente tensioactivo pulmonar para su uso en el tratamiento del síndrome de distrés respiratorio, que comprende un lípido polar formador de membrana dispersado en un medio acuoso, junto con un polímero anfipático sintético que interacciona con el lípido polar para producir un complejo polímero/lípido, por el que dicho polímero interacciona con el lípido polar en el medio acuoso y lo solubiliza, mientras el pH está por debajo de un valor crítico solubilizante del lípido y mientras la temperatura está por encima de una temperatura de transición de fase predeterminada dependiente del lípido polar en concreto, siendo dicha composición de pH variable de forma que el pH puede subir desde un valor inferior a dicho valor crítico solubilizante del lípido hasta un valor por encima de dicho valor crítico solubilizante del lípido, mediante la adición de un reactivo alcalino, y estando también caracterizado por la siguiente combinación de características:

24. Una formulación farmacéutica ocular para ser usada en el tratamiento del ojo seco, que comprende un lípido polar formador de membrana, dispersado en un medio acuoso, junto con un polímero anfipático sintético que interacciona con el lípido polar para producir un complejo polímero/lípido, por el que dicho polímero interacciona con el lípido polar en el medio acuoso y lo solubiliza, mientras el pH está por debajo de un valor crítico solubilizante del lípido y mientras la temperatura está por encima de una temperatura de transición de fase predeterminada dependiente del lípido polar en concreto, siendo dicha composición de pH variable de forma que el pH puede subir desde un valor inferior a dicho valor crítico solubilizante del lípido hasta un valor por encima de dicho valor crítico solubilizante del lípido, mediante la adición de un reactivo alcalino, y estando también caracterizado por la siguiente combinación de características:

(b): el complejo polímero/lípido producido está en forma de partículas micelares o conjuntos no liposómicos de forma discoidal en los que el lípido polar forma un núcleo de bicapa;

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25. El uso de una composición líquida que contiene lípido en la elaboración de un medicamento para el tratamiento del síndrome de distrés respiratorio, comprendiendo dicha composición líquida que contiene lípido un lípido polar formador de membrana dispersado en un medio acuoso, junto con un polímero anfipático sintético que interacciona con el lípido polar para producir un complejo polímero/lípido, por el que dicho polímero interacciona con el lípido polar en el medio acuoso y lo solubiliza, mientras el pH está por debajo de un valor crítico solubilizante del lípido y mientras la temperatura está por encima de una temperatura de transición de fase predeterminada dependiente del lípido polar en concreto, siendo dicha composición de pH variable de forma que el pH puede subir desde un valor inferior a dicho valor crítico solubilizante del lípido hasta un valor por encima de dicho valor crítico solubilizante del lípido, mediante la adición de un reactivo alcalino, y estando también caracterizado por la siguiente combinación de características:

26. El uso de una composición líquida que contiene lípido en la elaboración de un medicamento para el tratamiento del ojo seco, comprendiendo dicha composición líquida que contiene lípido un lípido polar formador de membrana dispersado en un medio acuoso, junto con un polímero anfipático sintético que interacciona con el lípido polar para producir un complejo polímero/lípido, por el que dicho polímero interacciona con el lípido polar en el medio acuoso y lo solubiliza, mientras el pH está por debajo de un valor crítico solubilizante del lípido y mientras la temperatura está por encima de una temperatura de transición de fase predeterminada dependiente del lípido polar en concreto, siendo dicha composición de pH variable de forma que el pH puede subir desde un valor inferior a dicho valor crítico solubilizante del lípido hasta un valor por encima de dicho valor crítico solubilizante del lípido, mediante la adición de un reactivo alcalino, y estando también caracterizado por la siguiente combinación de características:

27. El uso de una composición que contiene lípido según una cualquiera de las reivindicaciones precedentes para la elaboración de un preparado médico.

28. El uso de una composición que contiene lípido según una cualquiera de las reivindicaciones precedentes para la elaboración de un preparado cosmético.

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29. El uso de una composición que contiene lípido según una cualquiera de las reivindicaciones precedentes para la elaboración de un hidrogel, antes de la polimerización de este último, para formar una red polímera semi- interpenetrante (SIPN).

30. Un hidrogel que contiene una red polímera semi-interpenetrante obtenible mediante el uso de una composición que contiene lípido según una cualquiera de las reivindicaciones precedentes.

31. Un método para preparar una composición que contiene lípido según cualquiera de las reivindicaciones precedentes, que comprende las etapas de mezclar los constituyentes en un medio acuoso a un pH por encima de dicho valor crítico solubilizante del lípido, para formar una dispersión acuosa opaca o turbia, y después tratar la mezcla con un agente de acidificación para hacer descender el pH por debajo de dicho valor crítico solubilizante, mientras la temperatura está por encima de dicha temperatura de transición de fase predeterminada, característica del lípido, de forma que el polímero anfipático sintético solubiliza el lípido y hace que la suspensión se clarifique.

32. Un método para preparar una composición que contiene lípido, comprendiendo dicho método las etapas de mezclar en un medio acuoso un lípido polar formador de membrana y un polímero anfipático sintético, a un pH por encima de un valor crítico solubilizante del lípido, para formar una dispersión acuosa opaca o turbia, y después tratar la mezcla con un agente de acidificación para hacer descender el pH por debajo de dicho valor crítico solubilizante del lípido, mientras la temperatura está por encima de una temperatura de transición de fase predeterminada, característica del lípido, de forma que el polímero anfipático sintético interacciona con dicho lípido y lo solubiliza para producir un complejo polímero/lípido en forma de partículas o conjuntos micelares no liposómicos de forma discoidal, en el que el lípido polar forma un núcleo de bicapa, y para clarificar la dispersión, en el que dicho polímero anfipático sintético tiene una cadena principal lineal a lo largo de la cual están dispuestos uniformemente grupos hidrófobos y grupos hidrófilos aniónicos, y se elige entre:

(ii): un copolímero, distinto de un copolímero de bloques, de un primer monómero que es un ácido dicarboxílico insaturado o un anhídrido del mismo, y un segundo monómero que es un compuesto monoenoico, estando dichos primero y segundo monómeros dispuestos en una relación alternante a lo largo de dicha cadena principal lineal, con la condición de que si dicho segundo monómero es un alquil vinil éter el grupo alcoxi del mismo está en el intervalo de alcoxi C_{3}-C_{8}, y en el que, después de que se clarifica la dispersión, se reduce la temperatura por debajo de dicha temperatura de transición de fase para estabilizar la solución, seguido por la etapa de tratar la solución con un reactivo alcalino para elevar el pH y ajustarlo en un valor final por encima de dicho valor crítico solubilizante del lípido.

33. Un método según la reivindicación 32ª, en el que dicha temperatura de transición de fase es mayor que 25ºC.

34. Un método para solubilizar en un medio acuoso una sustancia diana soluble en lípido, que tiene una escasa solubilidad en agua, comprendiendo dicho método las etapas de mezclar en dicho medio acuoso dicha sustancia diana, un lípido polar formador de membrana y un polímero anfipático sintético, a un pH por encima de un valor crítico solubilizante, para formar una dispersión acuosa opaca o turbia, y después tratar la mezcla con un agente de acidificación para hacer descender el pH por debajo de dicho valor crítico solubilizante del lípido, mientras la temperatura está por encima de una temperatura de transición de fase predeterminada, característica del lípido, de forma que dicho polímero anfipático sintético interacciona con dicho lípido y lo solubiliza junto dicha sustancia diana en el medio acuoso, para producir un complejo polímero/lípido en forma de partículas o conjuntos micelares no liposómicos de forma discoidal, en el que el lípido polar forma un núcleo de bicapa, y para clarificar la dispersión, en el que dicho polímero anfipático sintético tiene una cadena principal lineal a lo largo de la cual están dispuestos uniformemente grupos hidrófobos y grupos hidrófilos aniónicos, y se elige entre:

35. Una composición que contiene lípido según una cualquiera de las reivindicaciones precedentes, siendo dicha composición para ser usada en terapia.