ES2213775T3

ES2213775T3 - Metodos de lucha contra las enfermedades infecciosas utilizando bis-benzimidazol dicationicos.

Info

Publication number: ES2213775T3
Application number: ES96916817T
Authority: ES
Inventors: Christine C. Dykstra; John R. Perfect; David W. Boykin; W. David Wilson; Richard R. Tidwell
Original assignee: University of North Carolina at Chapel Hill; Georgia State University Research Foundation Inc; Duke University
Current assignee: University of North Carolina at Chapel Hill; Georgia State University Research Foundation Inc; Duke University
Priority date: 1995-06-07
Filing date: 1996-06-03
Publication date: 2004-09-01
Anticipated expiration: 2016-06-03
Also published as: US6046226A; EP0831832A1; AU5956696A; US5643935A; US5939440A; US6294565B1; US6156779A; US5972969A; WO1996040145A1; DE69631134T2; US5817687A; US6017941A; EP0831832A4; CA2223912A1; EP0831832B1; ATE256464T1; US5817686A; JPH11507036A; US5639755A; DE69631134D1

Abstract

LA PRESENTE INVENCION DESCRIBE PROCEDIMIENTOS PARA TRATAR CRYPTOCOCCUS NEOFORMANS Y CANDIDA ALBICANS EN UN SUJETO QUE NECESITE TAL TRATAMIENTO. LOS PROCEDIMIENTOS IMPLICAN LA ADMINISTRACION AL SUJETO DE UN BIS CANTIDAD EFICAZ PARA TRATAR LAS AFECCIONES.

Description

Métodos de lucha contra las enfermedades infecciosas utilizando bis-benzimizadol dicatiónicos.

La presente invención se llevó a cabo con el apoyo del Gobierno de los Estados Unidos de América bajo el Número de Concesión 1UO1-AI3363 de los National Institutes of Health. El Gobierno tiene ciertos derechos sobre esta invención.

Campo de la invención

La presente invención trata sobre métodos útiles para combatir enfermedades infecciosas.

En particular, esta invención trata sobre métodos para combatir enfermedades infecciosas utilizando compuestos bis-benzimidazol dicatiónicos.

Antecedentes de la invención

La necesidad de nuevos agentes antifúngicos es cada vez más pronunciada debido al incremento en el número de infecciones fúngicas que ocurren en pacientes inmunocomprometidos. Hay un incremento en la incidencia de infecciones fúngicas atribuido, por ejemplo, a la agresiva utilización de quimioterapia del cáncer, transplante de órganos, e infecciones oportunistas asociadas a los pacientes del síndrome de inmunodeficiencia adquirida (SIDA). Las infecciones fúngicas se encuentran entre las complicaciones más comunes del SIDA, así como de la quimioterapia del cáncer. Entre los principales patógenos fúngicos oportunistas que provocan micosis diseminadas en huéspedes inmunocomprometidos se incluyen Candida y Cryptococcus.

Los agentes antifúngicos utilizados en la actualidad para el tratamiento de micosis sistémicas se pueden clasificar dentro de la categoría de antibióticos poliénicos, entre los que se incluyen Amfotericina B, flucitosina y azoles sintéticos. Sin embargo, pueden haber importantes desventajas en la utilización de estos agentes, incluyendo una limitada eficacia y/o toxicidad. Por consiguiente, uno de los objetivos de la presente invención consiste en proporcionar nuevos compuestos útiles en el tratamiento de las infecciones fúngicas.

Breve exposición de la invención

En un primer aspecto, la presente invención trata sobre un método para el tratamiento de Cryptococcus neoformans utilizando un compuesto de Fórmula I:

1

en el cual:

R_{1} y R_{2} se seleccionan de forma independiente del grupo formado por H, alquilo inferior, alcoxialquilo, cicloalquilo, arilo, alquiloarilo, hidroxialquilo, aminoalquilo, o alquiloaminoalquilo, o R_{1} y R_{2} conjuntamente representan un alquilo C_{2} a C_{10}, hidroxialquilo, o alquileno, y R_{1} y R_{2} conjuntamente son:

2

en el cual n es un número de 1 a 3, y R_{10} es H o -CONHR_{11} NR_{15} R_{16} en el cual C_{11} es un alquilo inferior y R_{15} y R_{16} se seleccionan de forma independiente del grupo formado por H y un alquilo inferior; y

R_{3} es H, hidroxi, alquilo inferior, cicloalquilo, arilo, alquiloarilo, alcoxialquilo, hidroxicicloalquilo, alcoxicicloalcoxi, hidroxialquilo, aminoalquilo o alquiloaminoalquilo;

A es un grupo heterocíclico aromático de fórmula:

3

en el cual R_{4}, R_{5}, y R_{6} se seleccionan de forma independiente del grupo formado por H, alquilo inferior, halógeno, arilo, ariloalquilo, aminoalquilo, aminoarilo, oxialquilo, oxiarilo, o oxiariloalquilo;

o una de sus sales fisiológicamente aceptables.

En uno de los ejemplos de realización preferidos de la invención, R_{1} y R_{2} conjuntamente representan un alquileno C_{2} a C_{4}, y R_{3}, R_{4}, R_{5} y R_{6} son H. En un aspecto de este ejemplo de realización de la invención, R_{1} y R_{2} conjuntamente representan:

4

y R_{3} es H.

En otro aspecto de este ejemplo de realización de la invención, R_{1} y R_{2} conjuntamente representan:

5

y R_{3} es H.

En todavía otro ejemplo de realización preferido de la invención, cada uno de R_{1}, R_{2}, R_{3}, R_{4}, R_{5} y R_{6} son H.

En todavía otro ejemplo de realización preferido de la invención, cada uno de R_{1}, R_{3}, R_{4}, R_{5} y R_{6} son H, R_{2} es un alquilo inferior, preferiblemente isopropilo.

En todavía otro ejemplo de realización preferido de la invención, A es:

6

en el cual R_{4}, R_{5}, y R_{6} son cada uno H.

La presente invención proporciona además compuestos útiles para el tratamiento de C. neoformans. Los compuestos tienen la estructura correspondiente a la Fórmula (I), descrita anteriormente. Los compuestos actualmente preferidos de la Fórmula I incluyen, pero no están limitados a, 2,6-bis(5-(2-imidazolinil)-2-benzimidazolil]piridina; 2,6-bis[5-amidino-2-benzimidazoíl)piridina; 2,6-bis[5-(1,4,5,6-tetrahidro-2-pirimidinil) -2-benzimidazolil] piridina; y sus sales fisiológicamente aceptables.

Descripción detallada de la invención

Tal como se utiliza aquí, el término "alquilo inferior", hace referencia a un alquilo C1 a C6 lineal o ramificado, como por ejemplo metilo, etilo, propilo, butilo, isopropilo, sec-butilo, tert-butilo, butilo, pentilo, isopentilo, y hexilo. El término "cicloalquilo" tal como se utiliza aquí hace referencia a un alquilo cíclico C3 a C6, como ciclopropilo, ciclobutilo, ciclopentilo, y ciclohexilo. El término "arilo" tal como se utiliza aquí hace referencia a grupos cíclicos aromáticos C3 a C10 como fenil, naftilo, y similares, e incluye grupos arilo sustituídos, como el tolilo. El término "hidroxialquilo" tal como se utiliza aquí hace referencia a alquilos hidroxi-sustituídos ramificados o lineales C1 a C4, es decir, -CH_{2}OH, -(CH_{2})_{2} OH, etc. El término "aminoalquilo" tal como se utiliza aquí hace referencia a alquilos amino-sustituídos lineales o ramificados C1 a C4, en los cuales el término "amino" hace referencia al grupo NR'R'', en el cual R' y R'' se seleccionan independientemente de entre H o un alquilo inferior tal como se ha definido anteriormente, es decir, -NH_{2}, -NHCH_{3}, -N(CH_{3})_{2}, etc. El término "alcoxialquilo" tal como se utiliza aquí hace referencia a un grupo alcoxilo lineal o ramificado C1 a C6, como metoxi, etoxi, propiloxi, butiloxi, isopropiloxi, y t-butiloxi.

Tal como se ha hecho notar anteriormente, la presente invención es útil para tratar Cryptococcus neoformans en tanto que inhibe la aparición, crecimiento o propagación de la enfermedad, ocasiona una regresión de la enfermedad, cura la enfermedad, o mejora de alguna otra forma el bienestar general del sujeto afectado, o con riesgo de contraer la enfermedad.

Los sujetos a tratar son típicamente humanos, aunque la presente invención puede ser de utilidad para cualquier sujeto apropiado conocido por aquellos con experiencia en la técnica.

Tal como se ha hecho notar anteriormente, la presente invención proporciona formulaciones farmacéuticas que contienen los compuestos de Fórmula I mencionados anteriormente, o sus sales farmacéuticamente aceptables, en vehículos aceptables para el uso farmacéutico en administración con aerosol, oral, y parenteral tal como se describe a continuación con mayor detalle.

La dosis terapéuticamente efectiva de cualquier compuesto específico cuya utilización se encuentre dentro del alcance de la presente invención, variará ligeramente de compuesto a compuesto, paciente a paciente, y dependerá de la enfermedad del paciente y de la vía de administración. Como propuesta general, una dosis de 0.1 a 50 mg/kg tendrá eficacia terapéutica, y potencialmente pueden utilizarse dosis todavía más altas para su administración oral y/o con aerosol. La aparición de problemas de toxicidad al más alto nivel puede restringir las dosis intravenosas hasta un nivel inferior, de alrededor de 10 mg/kg, donde todos los pesos se han calculado sobre la base del peso de la base activa, incluyendo los casos en los que se utiliza una sal. Típicamente se utilizará una dosis desde 0.5 mg/kg hasta 5 mg/kg para la administración intravenosa o intramuscular. Puede emplearse una dosis desde 10 mg/kg hasta 50 mg/kg para su administración oral. La duración del tratamiento es usualmente una vez al día durante un período de dos a tres semanas o hasta que la infección por Cryptococcus neoformans esté esencialmente controlada. Pueden utilizarse dosis inferiores administradas en menor frecuencia para prevenir o reducir la incidencia de la recurrencia de la infección.

De acuerdo con la presente invención, un compuesto de Fórmula I, o una de sus sales aceptables para su uso en el ámbito farmacéutico, puede administrarse oralmente o mediante inhalación en forma sólida, o puede administrarse de forma intramuscular o intravenosa en forma de solución, suspensión, o emulsión. De forma alternativa, el compuesto o la sal también puede administrarse por inhalación, de forma intravenosa o intramuscular en forma de suspensión liposomal. Cuando se administran mediante inhalación, el compuesto o la sal deberían encontrarse en la forma de una multitud de partículas sólidas o pequeñas gotas con un tamaño de partícula de 0.5 a 5 \mum, preferiblemente de 1 a 2 \mum.

Además de tratar Crymtococcus neoformans, los compuestos de Fórmula I también son de utilidad en la profilaxis contra Cryptococcus neoformans en pacientes inmunocomprometidos, como los pacientes que padecen SIDA, que han tenido al menos un episodio de Cryptococcus neoformans pero que en el momento del tratamiento no muestran signos de infección. Como Cryptococcus neoformans es, en potencia, una enfermedad especialmente devastadora en los pacientes inmunocomprometidos, es preferible evitar la aparición de Cryptococcus neoformans que tratar la enfermedad una vez se ha convertido en sintomática. Por consiguiente, la presente invención trata de la profilaxis frente Cryptococcus neoformans comprendiendo la administración al paciente de una cantidad efectiva profilácticamente de un compuesto de Fórmula I o de una de sus sales aceptables para su uso en el ámbito farmacéutico. Las formas de administración del compuesto o la sal de acuerdo con este método pueden ser las mismas que las utilizadas para el propósito de tratar realmente al paciente que sufre de infección por Cryptococcus neoformans.

Otro aspecto útil adicional de la presente invención es la profilaxis incluso frente a un episodio inicial de infección por Cryptococcus neoformans en un paciente inmunocomprometido que nunca ha padecido un episodio de infección por Cryptococcus neoformans. A este respecto, un paciente que se ha diagnosticado como inmunocomprometido, como uno que padezca de SIDA o de ARC (complejo relacionado con el SIDA), incluso antes de la aparición de un episodio inicial de infección por Cryptococcus neoformans puede evitar o retrasar el sufrir la infección si se le ha administrado una cantidad efectiva profilácticamente de un compuesto de Fórmula I o una de sus sales aceptables para su uso en el ámbito farmacéutico. El compuesto o la sal pueden administrarse de la misma forma que en el tratamiento de pacientes que sufren de infección por Cryptococcus neoformans.

Las composiciones farmacéuticas contienen un compuesto de Fórmula I, o una de sus sales aceptables para su uso en el ámbito farmacéutico, en cualquier vehículo aceptable para su uso farmacéutico. Si se desea una solución, se escoge agua como vehículo para los compuestos o sales solubles en agua. Respecto a los compuestos o sales insolubles en agua, puede ser apropiado un vehículo orgánico, como glicerol, propilen-glicol, polietilen-glicol, o cualquiera de sus mezclas. En última instancia, el vehículo orgánico puede contener una cantidad sustancial de agua. En cualquier caso, la solución puede esterilizarse mediante cualquiera de los procedimientos adecuados, preferiblemente por filtración a través de un filtro de 0.22 micras. Posteriormente a la esterilización, la solución puede usarse para rellenar recipientes adecuados, como viales de vidrio depirogenado. Por descontado, el proceso de relleno se debería llevar a cabo mediante un procedimiento aséptico. Se pueden colocar cierres estériles en los viales y, si se desea, el contenido de los viales puede liofilizarse.

Además de los compuestos de Fórmula I o sus sales, las composiciones farmacéuticas pueden contener otros aditivos, como aditivos ajustadores del pH. En particular, los agentes ajustadores del pH de utilidad incluyen ácidos, como ácido clorhídrico, bases o neutralizadores, como lactato de sodio, acetato de sodio, fosfato de sodio, citrato de sodio, borato de sodio, o gluconato de sodio. Además, las composiciones pueden contener conservantes microbianos. Los conservantes microbianos de utilidad incluyen metiloparaben, propiloparaben, y alcohol bencílico. El conservante microbiano se utiliza típicamente cuando la formulación se coloca en un vial diseñado para un uso de multidosis. Por descontado, tal como se ha indicado, las composiciones farmacéuticas de la presente invención se pueden liofilizar utilizando las técnicas conocidas en este campo.

En todavía otro aspecto de la presente invención, se proporciona una composición inyectable, estable y estéril que contiene un compuesto de Fórmula I, o una de sus sales, en la forma de una dosis unitaria en un recipiente sellado. El compuesto o la sal se proporcionan en la forma de un liofilizado que se puede reconstituir con un vehículo apropiado para su uso farmacéutico para formar una composición líquida adecuada para su inyección en un ser humano. La forma de dosis unitaria típicamente contiene desde unos 10 mg hasta unos 10 gramos del compuesto o de la sal. Cuando el compuesto o la sal sean sustancialmente insolubles en agua, se puede emplear una cantidad suficiente de agente emulsionante que sea aceptable desde el punto de vista fisiológico para emulsionar el compuesto o la sal en el vehículo acuoso. Un agente emulsionante de utilidad es la fosfatidil colina.

Se pueden preparar otras composiciones farmacéuticas a partir de los compuestos insolubles en agua de Fórmula I, o de sus sales, como emulsiones de base acuosa. En tal caso, la composición contendrá una cantidad suficiente de un agente emulsionante aceptable para su uso farmacéutico para emulsionar la cantidad deseada del compuesto de Fórmula I o de su sal. Entre los agentes emulsionantes particularmente útiles se incluyen la fosfatidil colina y la lecitina.

Además, la presente invención proporciona formulaciones de liposomas de los compuestos de Fórmula I y de sus sales. La tecnología para crear suspensiones de liposomas es bien conocida en el campo de la técnica. Cuando el compuesto de Fórmula I o su sal es una sal soluble en agua, utilizando la tecnología de liposomas convencional, puede incorporarse en vesículas lipídicas. En tal caso, debido a la solubilidad en agua del compuesto o la sal, el compuesto o la sal penetrará de forma sustancial en el centro o núcleo hidrofílico de los liposomas. La capa lipídica empleada puede ser de cualquiera de las composiciones convencionales y puede contener colesterol o bien estar libre de colesterol. Cuando el compuesto o la sal de interés es insoluble en agua, empleando nuevamente la tecnología convencional de formación de liposomas, la sal puede hacerse penetrar de forma sustancial en la bicapa lipídica hidrofóbica que forma la estructura del liposoma. En cualquier caso, los liposomas que se fabrican pueden reducirse de tamaño, mediante la utilización de técnicas convencionales de sonicación y homogeneización.

Por supuesto, las formulaciones liposómicas que contienen los compuestos de Fórmula I o sus sales, pueden liofilizarse para fabricar un liofilizado que puede reconstituirse con un vehículo aceptable para su uso farmacéutico, como agua, para regenerar una suspensión liposómica.

También se proporcionan formulaciones farmacéuticas apropiadas para su administración en forma de aerosol por inhalación. Estas formulaciones contienen una solución o suspensión del compuesto deseado de Fórmula I o una de sus sales o una multitud de partículas del compuesto o la sal. La formulación deseada se puede colocar en una pequeña cámara y nebulizarse. La nebulización se puede llevar a cabo con aire comprimido o mediante energía ultrasónica para formar una multitud de pequeñas gotas líquidas o partículas sólidas que contengan el compuesto o las sales. Las pequeñas gotas líquidas o las partículas sólidas deberían tener un tamaño de partícula en el rango de 0.5 a 5 \mum. Las partículas sólidas se pueden obtener procesando el compuesto sólido de Fórmula I, o una de sus sales, en cualquiera de las formas apropiadas conocidas en el campo de la técnica, por ejemplo por micronización. De forma preferible, el tamaño de las partículas sólidas o de las pequeñas gotas será de 1 a 2 \mum. A este respecto, hay disponibles nebulizadores comerciales para alcanzar este propósito.

Preferiblemente, cuando la formulación farmacéutica apropiada para la administración en forma de aerosol se encuentre en forma líquida, la formulación contendrá un compuesto soluble en agua de Fórmula I o una de sus sales, en un vehículo que contenga agua. Puede haber presente un agente surfactante que disminuya la tensión superficial de la formulación lo suficiente para que resulte la formación de pequeñas gotas en el rango de tamaño deseado cuando se someta a nebulización.

Tal como se ha indicado, la presente invención proporciona compuestos y sales solubles en agua e insolubles en agua. Tal como se utiliza en la presente especificación, el término "soluble en agua" define cualquier composición que sea soluble en agua en una cantidad de alrededor de 50 mg/mL, o mayor. Además, tal como se utiliza en la presente especificación, el término "insoluble en agua" define cualquier composición que tenga una solubilidad en agua menor de unos 20 mg/mL. Para ciertas aplicaciones, pueden preferirse los compuestos o sales solubles mientras que para otras aplicaciones pueden preferirse los compuestos o sales insolubles en agua.

Algunos ejemplos de compuestos que ejemplifican la Fórmula (I) anterior incluyen, pero no están limitados a:

2,6-bis [5-(2-imidazolinil)-2-benzimidazolil] piridina;

2,6-bis (5-amidino-2-benzimidazoíl) piridina;

2,6-bis [5-(1,4,5,6-tetrahidro-2-pirimidinil)-2-benzimidazolil]piridina;

y sus sales fisiológicamente aceptables.

Tal como se ha indicado, los compuestos utilizados en la presente invención pueden estar presentes en la forma de sales aceptables desde el punto de vista farmacéutico. Tales sales incluyen las sales gluconato, lactato, acetato, tartarato, citrato, fosfato, borato, nitrato, sulfato, e hidrocloruro.

Los métodos para combatir Candida albicans mediante los compuestos de Fórmula I vista anteriormente se llevan a cabo esencialmente de la misma manera que se ha visto con anterioridad, y las formulaciones farmacéuticas de los compuestos de Fórmula I para combatir Candida albicans se preparan esencialmente de la misma forma que se ha visto anteriormente.

Los compuestos de la presente invención se pueden preparar de acuerdo con los métodos conocidos en el campo de la técnica, en particular a la luz de la revelación y los ejemplos que se muestran a continuación. De acuerdo con uno de los métodos, los compuestos de Fórmula I se pueden preparar mediante condensación de un compuesto heterocíclico (es decir, pirrol, piridina, furano, etc.) dicarboxaldehído (por ejemplo pirrol-2,5-dicarboxaldehído) apropiado, que se puede preparar tal como se enseña en T. Cresp, y otros, J. Chem. Soc. Perkins Tran. 1, 2961 (1973) con el compuesto diaminofenil apropiado (por ejemplo diaminobenzamidina preparada según T. Fairley, y otros, Med. Chem. 36, 1746 (1993). La reacción de condensación se puede llevar a cabo de acuerdo con el método de S. Kumar, y otros, Indian J. Chem 20B, 254 (1981).

Los compuestos diaminofenilo se pueden preparar, por ejemplo, por reducción de los grupos nitro del 3,4- dinitrobromobenceno para formar 3,4-diaminobromobenceno. La nitrilización de este compuesto al correspondiente 3,4-diaminonitrilebenceno se puede llevar a cabo haciendo reaccionar cianuro de cobre (I) con el 3,4-dinitrobromobenceno así preparado en DMF a reflujo de acuerdo con las técnicas convencionales. Ver, J. Spychala y otros, European J. Med. Chem. 29:363 (1994). Se puede convertir el nitrilo en un éster imidato mediante el método Pinner, de acuerdo con B. Das, y otros, J. Med. Chem. 20, 1219 (1977). El éster imidato se puede convertir en los compuestos de Fórmula (I), por ejemplo, mediante reacción con amonio o con el aminoalcano o diaminoalcano apropiado (como etilenediamina, propilenediamina, etc.), para formar un grupo amidino, un grupo imidazolinilo, un grupo 1,4,5,6-tetrahidro-2-pirimidinilo, respectivamente. El bis-nitrilo también se puede convertir en el compuesto bis-dicatiónico mediante la fusión del nitrilo directamente con la sal hidrocloruro de la diamina apropiada mediante termólisis. Esta técnica es particularmente útil para la preparación de compuestos en los cuales los grupos R_{1} y R_{2} forman conjuntamente un alquilo cíclico.

Los compuestos de Fórmula I anteriores también se pueden preparar preparando primero un intermedio apropiado, como 2,5-bis(5-bromo-2-bencimidazolil)pirrol mediante la condensación promovida por una base, por ejemplo, de 1-bromo-3,4-diaminobenceno y pirrol-2,5-dicarboxaldehído, de acuerdo con el método de S. Kumar, y otros, supra. El intermedio se puede obtener entonces por nitrilización seguida de la formación del éster imidato y la conversión en el correspondiente amidino tal como se ha descrito anteriormente.

Las sales de la presente invención se pueden preparar, en general, haciendo reaccionar dos equivalentes del compuesto base heterocíclico con el ácido deseado en solución. Una vez se ha completado la reacción, las sales de la disolución se hacen cristalizar por adición de una cantidad apropiada de disolvente en el cual la sal sea insoluble.

Los compuestos de la presente invención son útiles no sólo en los métodos para tratar Cryptococcus neoformans y Candida albicans sino también en los métodos para inhibir enzimas como la topoisomerasa. Los compuestos de Fórmula (I) son particularmente útiles para inhibir la topoisomerasa II. Ver, S. Doucc-Racy y otros, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 83:7152 (1986).

La presente invención se ilustrará adicionalmente a continuación mediante los siguientes ejemplos no limitantes, en los cuales "g" significa gramos, "mg" significa miligramos, "\mug" significa microgramos, "mmol" significa milimoles, "h" significa horas, "ml" significa mililitros, "M" significa molar, "mM" significa milimolar, "\muM" significa micromolar, "UV" significa ultravioleta, "HCl" significa cloruro de hidrógeno, "pf" significa punto de fusión, "HCN" significa ácido cianhídrico y "ºC" significa grados Celsius.

Para los siguientes ejemplos los puntos de fusión se midieron utilizando un aparato Thomas Hoover (Uni-Melt) para la medición del punto de fusión equipado con capilares, y no se han corregido. Los espectros de ^{1}H RMN y ^{13}C RMN se registraron utilizando un espectrómetro Varian GX400 y los desplazamientos químicos (d) se dan en ppm relativas a TMS a no ser que se especifique de otro modo. Los espectros de masas se registraron en un espectrómetro VG Instruments 70-SE (Georgia Institute of Technology, Atlanta, GA). Los espectros IR se registraron utilizando un equipo Michelson 100 (Bomem, Inc.). Los análisis elementales se obtuvieron de Atlantic Microlab Inc. (Norcross, GA) y se encuentran dentro de +0.4 de los valores teóricos. Todos los productos químicos y disolventes fueron adquiridos de Aldrich Chemical Co. o Fisher Scientific.

En los Ejemplos que se muestran a continuación, los compuestos se designan de la siguiente forma:

Compuesto Nº	Nombre
3	2,6-bis[5-(2-imdazolinil)-2-benzimidazolil)piridina
7	2,6-bis(5-amidino-2-benzimidazoíl)piridina
8	2,6-bis [5-(1,4,5,6-tetrahidro-2-pirimidinil)-2-benzimidazolil]piridina

Ejemplo 3 Preparación de 2,6-bis[5-(2-imidazolinil)-2-benzimidazolil]piridina

2,6-bis[5-(2-imidazolinil)-2-benzimidazolil]piridina (Compuesto 3). Se utilizó un protocolo similar al utilizado en los Ejemplos 1 y 2 anteriores para la condensación de 2,6-piridina carboxialdehído y 2-(3,4-diaminofenil) imidazolina para dar un rendimiento del 85% de un sólido. p.f. > 300ºC. ^{1}H NMR (DMSO-d_{6}) (4.05 (s, 8H, N-CH_{2}CH_{2}N), 7.96 (m, 4H, Ar-H), 8.30 (t, 1H, piridina), 8.49-8.51 (m, 4H, Ar-H), 10.71 (s, NH). Anal. (C_{25}H_{21}N_{9}\cdot3HCl\cdot3H_{2}O) C, H, N. MS: m/e 448 (M+1).

Ejemplo 7 Preparación de 2,6-bis(5-amidino-2-benzimidazoíl)piridina

2,6-bis(5-amidino-2-benzimidazoíl)piridina (Compuesto 7). Se utilizó un protocolo similar al descrito en los Ejemplos 1-6 anteriores para condensar 2,6-piridina dicarboxaldehído con 3,4-diaminobenzamidina para dar un 89% de un sólido, p.f. > 300ºC. ^{1}H NMR (DMSO-d_{6} ) (7.79 (dd, J=8.4 y 1.6 Hz, 2H, Ar-H), 7.94 (d, J=8.4 Hz, 2H, Ar-H), 8.28-8.34 (m, 3H, Ar-H), piridina), 8.51 (d, J=8Hz, 2H, piridina), 9.12, 9.45 (brs, brs, NH). Anal. (C_{21}H_{17}N_{9}\cdot3HCl\cdot2H_{2}O) C, H, N. MS: m/e 396 (M+1).

Ejemplo 8 Preparación de 2,6-bis[5-(1,4,5,6-tetrahidro-2-pirimidinil)-2-benzimidazolil] piridina

2,6-bis[5-(1,4,5,6-tetrahidro-2-pirimidinil)-2-benzimidazolil] piridina (Compuesto 8). Se utilizó un protocolo similar al descrito anteriormente en los Ejemplos 1-7 para condensar 2,6-piridina dicarboxialdehído con 2-(3,4-diaminofenil) tetrahidropirimidina para dar un 89% de rendimiento de un sólido, p.f. > 300ºC. ^{1}H NMR (DMSO-d_{6} ) (2.03 (m, 4H, CH_{2} ), 3 .54 (brs, 8H, CH_{2}N), 7.66 (d, J=8.4 Hz, 2H, Ar-H), 7.84 (d, J=8.4 Hz, 2H, Ar-H), 8.17 (s, 2H, Ar-H), 8.29 (t, 1H, piridina), 8.43 (d, J=8 Hz, 2H, piridina), 10.04 (s, NH). Anal. (C_{27}H_{25}N_{9}\cdot3HCl\cdot4H_{2}O) C; H, N. MS: m/e 476 (M+1).

Ejemplo 12 Actividad de los compuestos frente Cryptococcus neoformans y Candida albicans

La actividad de diversos compuestos de Fórmula I frente a Cryptococcus neoformans y Candida albicans se muestra en la Tabla 1. La actividad de los compuestos se evaluó utilizando un ensayo de inhibición del crecimiento celular fúngico in vitro convencional (prueba de sensibilidad antifúngica por dilución del caldo para levadura, documento propuesto estándar M27-P, validado por el National Committee for Clinical Laboratory Standards, 1992). Brevemente, este procedimiento de dilución del caldo utiliza medio RPMI, y un inóculo de 10^{4} células. Los tubos de control contienen solamente medio. Una vez se hubo determinado la concentración de inhibidor mínima mediante la técnica anterior, los tubos en los que no se detectó un crecimiento visible se subcultivaron para determinar la concentración de fungicida mínima utilizando el criterio de una supervivencia inferior al 0.01% del inóculo original. Se probaron dos organismos: (1) H99, un aislado clínico de C. neoformans que es totalmente susceptible a azoles y polienos in vitro e in vivo; y (2) A39, un aislado clínico de C. albicans que es totalmente susceptible a azoles y polienos.

La CFM (concentración de fungicida mínima) frente a estas dos importantes infecciones fúngicas asociadas al SIDA se muestran en la Tabla 1. Las CFMs se determinaron siguiendo el método de McGinnis.

TABLA 1

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Notas:

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Ejemplo 13 Medición de la unión de ácidos nucleicos

Se determinó la potencia de unión de ADN para cada uno de los compuestos, ya que trabajos anteriores habían determinado que la unión de moléculas dicatiónicas al ADN es un requisito previo para la actividad antimicrobiana. Ver, por ejemplo, Tidwell, R.R. et al., Antimicrob. Agents Chemother. 37, 1713-1716 (1993); Bell, C. A., et al., Antimicrob. Agents Chemother. 35, 1099- 1107 (1991). La unión al ADN de los compuestos se determinó mediante el cambio en las propiedades de fusión del ADN unido a los compuestos. El método está bien documentado y se considera un método estándar para la determinación de la fuerza de unión a ADN. Ver Cory, M. et al., J. Med. Chem. 25, 431-438 (1992). Brevemente, un espectrofotómetro de luz UV-visible equipado con un cambiador de cubeta se conectó a un microordenador que registraba la temperatura de la cubeta y los datos de absorbancia del ADN a 259 nm mientras la muestra se calentaba a un ritmo de 18ºC/h. Se utilizó ADN de timo de becerro con una absorbancia inicial de 0.3A_{259} . El punto medio de cada curva de desnaturalización se determinó después de seleccionar gráficamente en el ordenador la temperatura de la absorbancia inicial y final de cada curva en cada experimento. Cada experimento se realizó con ADN o ADN unido al compuesto experimental y el \DeltaT_{m} s se determinó a partir de la T_{m} del polinucleótido para cada experimento. Cuanto mayor es el cambio en el punto de fusión, más potente es la unión de las moléculas al ADN. Los resultados se presentan en la Tabla 1 mostrada anteriormente.

Claims

1. La utilización de un compuesto de Fórmula I:

9

donde:

R_{1} y R_{2} se seleccionan de forma independiente del grupo formado por H, alquilo C_{1}-C_{6}, alcoxialquilo, cicloalquilo, arilo, alquiloarilo, hidroxialquilo, aminoalquilo, o alquiloaminoalquilo, o R_{1} y R_{2} conjuntamente representan un alquilo C_{2} a C_{10}, hidroxialquilo, o alquileno o R_{1} y R_{2} conjuntamente son:

10

donde n es un número de 1 a 3, y R_{10} es H o - CONHR_{11}NR_{15}R_{16} donde R_{11} es un alquilo C_{1}-C_{6} y R_{15} y R_{16} se seleccionan de forma independiente del grupo formado por H y alquilo C_{1}-C_{6}; y

R_{3} es H, hidroxi, alquilo C_{1}-C_{6}, cicloalquilo, arilo, alquiloarilo, alcoxialquilo, hidroxicicloalquilo, alcoxicicloalcoxi, hidroxialquilo, aminoalquilo o alquiloaminoalquilo;

A es a grupo heterocíclico aromático de fórmula:

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donde R_{4}, R_{5}, y R_{6} se seleccionan de forma independiente del grupo formado por H, alquilo C_{1}-C_{6}, halógeno, arilo, ariloalquilo, aminoalquilo, aminoarilo, oxialquilo, oxiarilo, o oxiariloalquilo; o una de sus sales fisiológicamente aceptables, en la preparación de un medicamento para el tratamiento o la profilaxis de una infección por Cryptococcus neoformans.

2. La utilización de acuerdo con la Reivindicación 1, en la cual dicho medicamento se utiliza para el tratamiento de una infección por Cryptococcus neoformans.

3. La utilización de acuerdo con la Reivindicación 1, en la cual dicho medicamento se utiliza para la profilaxis de una infección por Cryptococcus neoformans.

4. La utilización de acuerdo con la Reivindicación 1, en la cual R_{1} y R_{2} conjuntamente representan un alquileno C_{2} a C_{4}, y R_{3} es H.

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5. La utilización de acuerdo con la Reivindicación 4, en la cual R_{1} y R_{2} conjuntamente representan

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6. La utilización de acuerdo con la Reivindicación 4, en la cual R_{1} y R_{2} conjuntamente representan

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7. La utilización de acuerdo con la Reivindicación 1, en la cual ambos R_{1}, R_{2}, y R_{3} son H.

8. La utilización de acuerdo con la Reivindicación 1, en la cual ambos R_{1} y R_{3} son H y R_{2} es un alquilo C_{1}-C_{6}.

9. La utilización de acuerdo con la Reivindicación 1, en la cual dicho compuesto se selecciona de entre el grupo formado por:

2,6-bis[5-(2-imidazolinil)-2-benzimidazolil]piridina;

2,6-bis(5-amidino-2-benzimidazoíl)piridina;

2,6-bis[5-(1,4,5,6-tetrahidro-2-pirimidinil)-2-benzimidazolil] piridina;

y sus sales fisiológicamente aceptables.