ES2215372T3 - Patron basado en un conjunto de plasmas sanguineos de mas de 200 pacientes sanos. - Google Patents

Patron basado en un conjunto de plasmas sanguineos de mas de 200 pacientes sanos.

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ES2215372T3
ES2215372T3 ES99870255T ES99870255T ES2215372T3 ES 2215372 T3 ES2215372 T3 ES 2215372T3 ES 99870255 T ES99870255 T ES 99870255T ES 99870255 T ES99870255 T ES 99870255T ES 2215372 T3 ES2215372 T3 ES 2215372T3
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Ruth Laub
Jean Duchateau
Mario Giambattista
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S C R L Department CENTRAL DE FRACTI
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Universite Libre de Bruxelles ULB
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S C R L Department CENTRAL DE FRACTI
Scrl Departement Central De Fractionnement de la Croix-Rouge
Universite Libre de Bruxelles ULB
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Abstract

Dispositivo de detección y/o de cuantificación del título de anticuerpos presentes en un líquido biológico de un paciente y que son específicos de una reacción relacionada con una infección por un microorganismo, específicos de una reacción auto-inmunológica o específicos de una alergia, caracterizado porque comprende como patrón una muestra biológica seleccionada a partir de un conjunto de plasmas sanguíneos de más de 200 individuos sanos.

Description

Patrón basado en un conjunto de plasmas sanguíneos de más de 200 pacientes sanos.
Objeto de la invención
La presente invención se refiere a un patrón incorporado en las pruebas de diagnóstico y/o de cuantificación de anticuerpos resultantes de una infección por un agente bacteriano o vírico o de una reacción auto-inmune o alérgica.
Estado de la técnica y antecedentes tecnológicos anteriores en los que se basa la invención
Los materiales y patrones de referencia en el ámbito biológico son preparaciones de sustancias que poseen una composición molecular compleja que interviene en los mecanismos de control de calidad, de diagnóstico y de investigación.
Para el diagnóstico de los agentes bacterianos responsables de distintas infecciones que afectan a los mamíferos, comprendido el hombre, se han propuesto diferentes procedimientos para obtener una referencia estandarizada en dicho diagnóstico.
Los organismos de reembolso de los gastos médicos (INAMI) especifican que una cuantificación de inmunoglobulinas en particular la de una hipogammaglobulinemia, se lleva a cabo cuando el contenido total en inmunoglobulinas es inferior al valor de la norma del laboratorio. Este valor de la norma debe calcularse como dos desviaciones estándar por debajo de la media medible relacionada con los controles por grupo de edad, o del 95% del intervalo de confianza de una población de control acoplada a la edad. En consecuencia, la caracterización en una prueba diagnóstica o de cuantificación de cierto tipo de anticuerpos dirigidos eventualmente contra un agente bacteriano, debe hacerse con relación a un patrón que está constituido por el valor de la norma del laboratorio. Por tanto, estas normas varían mucho de un laboratorio a otro, lo que puede falsear los resultados.
Quataert y col. ((Clinical and Diagnostic Laboratory Immunology Vol.2 No.5, págs 590-597 (Septiembre 1995)), describen un procedimiento de identificación de los anticuerpos específicos para cada uno de los serotipos de
S.pneumoniae. Sin embargo, el lote de referencia patrón propuesto se obtuvo a partir de un conjunto de 17 adultos vacunados con una preparación de vacuna, que pueden presentar entre ellos una varianza demasiado grande, y necesitará utilizar las extrapolaciones matemáticas particularmente complejas para el diagnóstico de esta infección bacteriana. Además, puede presentarse una reactividad cruzada entre los diversos antígenos capsulares de los distintos serotipos (Coughlin et al. Vaccine 16, nº 18, pág 1761-1767, 1998).
Los documentos EP 0 787 989 y US 5 798 267 muestran la preparación de un patrón mediante "la reunión" de 1.000 y 1.200 plasmas. Estos documentos no se refieren a anticuerpos.
Objetivos de la invención
La presente invención pretende proporcionar un patrón mejorado en los dispositivos de diagnóstico, que no adolezca de los inconvenientes del estado de la técnica, y que pueda ser utilizado para mejorar el diagnóstico, la cuantificación y/o el control de las reacciones inmunitarias que resultan de infecciones que afectan a los mamíferos, incluido el hombre, resultantes en particular de infecciones debidas a un agente bacteriano o vírico, o resultantes de una reacción auto-inmune o alérgica.
Un objetivo particular de la presente invención es proporcionar un patrón en dicho dispositivo de diagnóstico, que presente una concepción sencilla y poco costosa y que permita simplificar el diagnóstico de dichas infecciones sin necesitar la utilización de modificaciones de los protocolos operativos que se emplean habitualmente en los diagnósticos, y más particularmente, que no necesite utilizar extrapolaciones matemáticas complejas.
Elementos característicos de la invención
La presente invención se refiere a un dispositivo de diagnóstico y/o de cuantificación (incluido el de control o de seguimiento) de una reacción inmunológica caracterizada por la presencia de cierto tipo de anticuerpos, que puede estar relacionada con una infección tal como una bacteriana o vírica, o con una reacción de tipo auto-inmunitario o alérgica, en particular una alergia alimentaria, susceptible de afectar a un paciente, en particular un mamífero (incluido el hombre).
El dispositivo de la invención permite la detección y/o la cuantificación de los anticuerpos que se encuentran en un líquido biológico extraído de dicho paciente, tal como una muestra sanguínea de éste, dirigiéndose dichos anticuerpos contra el agente responsable de la infección o de partes de éste (en particular, el polisacárido C que se encuentra en la pared de las bacterias) o que son significativos de una reacción inmunitaria o alérgica, estando caracterizado el dispositivo de la invención porque incluye, como patrón, (que se denomina a continuación, igualmente "referencia" o "calibrador"), una muestra biológica que comprende un título definido de anticuerpos, seleccionada a partir de un conjunto (es decir, una mezcla) de plasmas sanguíneos obtenidos a partir de más de 200 pacientes o individuos sanos.
Se entiende por "paciente", cualquier mamífero incluido el hombre, susceptible de ser infectado por dicho microorganismo responsable de esta infección, o que presenta una reacción alérgica o auto-inmune, y susceptible de producir anticuerpos dirigidos específicamente contra dicho microorganismo, o susceptible de presentar anticuerpos relacionados con esta reacción auto-inmune o alérgica.
Se entiende por "paciente (o individuo) sano", un paciente que haya estado en contacto con dicho microorganismo responsable de dicha infección y que no presenta o que ya no presenta dicha infección. Por ejemplo, se entendería por "pacientes (o individuos) sanos" adultos sanos de una población expuesta, incluso de manera transitoria, a una infección bacteriana, en particular por Streptococcus pneumonia, y que posee anticuerpos de tipo anti-Streptococcus pneumonia. En consecuencia, una mezcla de plasmas o de sueros de pacientes (o individuos) sanos, es decir, que no presenten o teniendo una débil probabilidad de presentar dicha infección, puede servir de patrón.
Los inventores han hecho hincapié en que si la muestra biológica que se ha preparado a partir de dicho conjunto, es decir, una mezcla de plasmas llevada a cabo a partir de más de 200 pacientes, si el número de éstos excede preferentemente de 1000, 2000, o incluso de 5000, (la muestra) se caracterizará por una varianza muy débil (estadística) y podrá servir como patrón "universal" para los dispositivos de diagnóstico y/o de cuantificación, pues estarán caracterizados por una varianza muy débil, incluso si en dicho conjunto de plasmas, uno o varios de los pacientes o individuos sanos presentaban, en el momento de la donación de sangre, dicha infección que se busca caracterizar. En efecto, el título de estos anticuerpos con relación al número de anticuerpos seleccionados a partir de otros adultos caracterizados como pacientes o individuos sanos, no afectaría de forma significativa a las propiedades ventajosas del patrón de la invención.
Además, el patrón o calibrador de la invención puede prepararse ventajosamente a partir de un criosobrenadante de dicho conjunto de plasmas, que puede estar disponible fácilmente en una gran cantidad.
Dicho patrón permite no sólo un diagnóstico, sino igualmente una cuantificación (cálculo del título de anticuerpos), así como que el control (denominado igualmente "seguimiento") de dicha reacción inmunitaria. Este control es particularmente útil cuando se desea ver la evolución de una vacunación, respecto a un microorganismo responsable de una infección, o respecto un tratamiento anti-alérgico o destinado al tratamiento de una patología o de un síndrome auto-inmunitario.
El patrón o referencia de la invención, que estará constituido por un título definido de anticuerpos caracterizado por una débil varianza, es decir, por una diferencia significativa entre los tipos de anticuerpos, permite la fácil utilización de dicho patrón en un dispositivo de diagnóstico y/o de cuantificación sin necesidad de extrapolaciones ni de análisis matemáticos complejos y sin afectar a los procedimientos habituales de diagnóstico, de cuantificación y eventualmente de control, anteriormente mencionados. Dicho patrón puede utilizarse ventajosamente en cualquier tipo de dispositivo de diagnóstico o de cuantificación, en particular en cualquier tipo de equipo de diagnóstico y/o de cuantificación basado en las tecnologías ELISA tal como se describen a continuación, o de otras tecnologías de detección de anticuerpos tales como las tecnologías RIA o de hemaglutinación, y sobre cualquier tipo de soporte.
El dispositivo y el procedimiento de la invención pueden incluir igualmente un medio y una etapa que permitan una incubación previa de las muestras que van a ensayarse, preferentemente en presencia de polisacárido C, ventajosamente de alrededor de 2,5 \muM/ml de polisacárido C durante 30 minutos a 37ºC, para la dosificación de los anticuerpos capsulares en las distintas preparaciones de una prueba inmunoquímica, utilizando como antígenos inmovilizados preparaciones de antígenos polisacarídicos (por ejemplo, para el diagnóstico de Streptococcus pneumoniae).
El dispositivo de diagnóstico de la invención está particularmente adaptado para el diagnóstico, la cuantificación y/o el control de reacciones inmunitarias relacionadas con una reacción alérgica, en particular, para la detección, la cuantificación y/o el control de los anticuerpos de tipo IgG o IgE relacionados con una reacción alérgica, en particular las reacciones alérgicas alimentarias, para la detección de auto-anticuerpos en el caso de una reacción auto-inmune o para la detección, la cuantificación y/o el control de los anticuerpos dirigidos contra diferentes infecciones bacterianas o víricas, en particular las infecciones por cepas de Streptococcus pneumoniae, de Neiseria y de Hemophilus.
El objeto de la invención se describirá de forma detallada en el ejemplo de realización que se expone a continuación.
Figuras
La figura 1 representa la recta de calibración.
Ejemplo 1 Prueba inmuno-enzimática ELISA para la detección de anticuerpos anti-neumococos en el plasma, los conjuntos plasmáticos y los concentrados de inmunoglobulinas
La cepa de Streptococcus pneumonia constituye un huésped habitual de la flora oro-faríngea, cuya cápsula confiere la virulencia y la antigenicidad. Los anticuerpos dirigidos contra los antígenos polisacarídicos de la cápsula son protectores de la infección. La tasa de portadores de Streptococcus pneumoneia varía según la edad, la estación y el entorno infeccioso o no. Los neumococos son la causa principal de las neumonías adquiridas en las comunidades y el origen frecuente de otitis agudas del oído medio, de sinusitis y de faringitis. Se informa de que las neumonías, que están provocadas en la mayoría de los casos por neumococos, constituyen la quinta causa de muerte en los Estados Unidos. En Bélgica, la incidencia de las infecciones por neumococos es de 200.000 casos por año. La tasa de las cepas resistentes a los antibióticos crece constantemente, siendo resistentes a la tetraciclina el 12%, y el 21%, a la eritromicina. La tasa de mortalidad se ha estimado en 2.000 fallecimientos en un año, que parecen relacionados con los problemas de resistencia antibiótica.
Si los neumococos infectan a todos los individuos (70% de los portadores sanos), ciertas características predisponen a la infección neumocócica como la edad, las bronconeumopatías, los cánceres de las vías sero-digestivas superiores, el etilismo y el tabaquismo, así como la insuficiencia cardíaca. Las hipo-asplenias representan un factor de agravamiento cierto, así como las hemopatías que afectan particularmente a los niños de edades inferiores a 5
años.
La investigación de los anticuerpos anti-neumocócicos en el plasma y las fracciones derivadas mediante el equipo de diagnóstico de la invención, permite detectar los anticuerpos anti-polisacarídicos de la cápsula de los 23 serotipos más frecuentes (95% de las cepas aisladas en Bélgica). La prueba inmuno-enzimática ELISA descrita a continuación permite la dosificación cuantitativa de los anticuerpos anti-neumocócicos en el plasma o en una fracción plasmática sin tratamiento previo de la muestra plasmática recogida sobre anticoagulantes. Esta (la prueba) permite detectar los anticuerpos en los plasmas o fracciones plasmáticas que contienen pocos anticuerpos (concentración 1000 veces menor que la media que se ha encontrado en los individuos sanos), así como en los plasmas hiperhumanos obtenidos después de vacunación.
El dispositivo de la invención permite, pues, un control (o seguimiento) particularmente eficaz de una vacunación o de la evolución de una infección.
Preparación de las soluciones, diluciones y muestras
Solución A
Tampón PBS 10x concentrado
- 400 g NaCl
- 10 g KCl
- 72 g Na_{2}HPO_{4}
- 12 g KH_{2}PO_{4}
Llevar a 5 litros con agua mQ
Solución B
Solución de lavado (PBS 1x-Tween® 0,1%)
Las concentraciones finales son respectivamente de:
- 0,14 M NaCl
- 2,7 mM KCl
- 10 mM Na_{2} HPO_{4}
- 1,8 mM KH_{2}PO_{4}
- 0,1% Tween® 20
Para 1.000 ml de solución de trabajo, tomar:
- 100 ml de solución A
- 1 ml de Tween® 20
- 899 ml de agua mQ.
\newpage
Solución C
Tampón de dilución del anticuerpo marcado con peroxidasa
Solución C_{0}: solución stock de albúmina bovina a 5% Por 10 ml de solución
- 500 mg de BSA (Sigma)
Llevar a 10 ml final con agua mQ. La solución se almacena a 20ºC.
Solución C de trabajo
Para 10 ml de solución C:
- 1 ml de solución C_{0}
- 1 ml de solución A
- 8 ml de agua mQ
Solución D
Solución de saturación y de dilución de las muestras a dosificar
-
disolver 20 g de caseina (Merck) en 400 ml de agua mQ
-
calentar hasta 60ºC y ajustar regularmente el pH a 9,6 con NaOH 5 M.
-
mezclar calentando a 60ºC durante 2 horas con agitador magnético.
-
añadir 36 gramos de NaCl y 0,8 g de Thimerosal® (Merck)
-
añadir lentamente 1600 ml de agua mQ y 200 ml de Tris-HCl 20 mM, pH 6,6 (Merck)
-
ajustar el pH a 7,2-7,4 con HCl 1M o NaOH 1M
-
centrifugar la solución a 4500 rpm durante 1 h a 22ºC
-
dejar decantar y filtrar en Wattman®
-
congelar a -20ºC en frascos de 500 ml
-
filtrar utilizando Milli-Fil PF® 0,8 \mum (Millipore) y conservar a 4ºC.
La solución final es de 10 mM Tris; pH 7,2-7,4; 0,15 M NaCl; 0,02% de Thimerosal®; 0,5% de caseína.
Solución E
Solución de detención de la reacción
- H_{2}SO_{4}:2N
Preparación de las diluciones del calibrador
Un frasco de calibrador se reconstituye en 1 ml de caseína "preparada para utilización" (calibrador 1/1).
Ejemplos
Calibrador a 1/125: 16 \mul de calibrador 1/1 + 1984 \mul de caseína "lista para empleo"
Calibrador a 1/250: 400 \mul de calibrador 1/125 + 400 \mul de caseína "lista para empleo"
Calibrador a 1/500: 400 \mul de calibrador 1/250 + 400 \mul de caseía "lista para empleo"
Calibrador a 1/1000: 400 \mul de calibrador 1/500 + 400 \mul de caseína "lista para empleo"
Preparación de las distintas muestras que van a ensayarse Ejemplos
Muestra nº 1 a 1/250:tomar 8 \mul de muestra a ensayar + 1992 \mul de caseína.
Muestra nº 2 a 1/500: tomar 400 \mul de la muestra nº 1 + 400 \mul de caseína
Procedimiento A. Preparación de la solución Pneumovax® R^{23} para el "recubrimiento"
La concentración antigénica de la vacuna Pneumovax® R^{23} (Pasteur Mérieux MSD) es de 1,15 mg/ml. La concentración de trabajo es de 1 \mug/ml.
Para una placa (96 pocillos):
- 9,85 ml de agua mQ
- 1,15 ml de solución A
- 11 ml de solución de almacenamiento de Pneumovax® R^{23}.
Añadir mediante una multipipeta 100 \mul de la solución antigénica, a razón de 1 \mug/ml en cada pocillo.
Recubrir la placa con un adhesivo transparente.
Incubar 16 horas a 4ºC.
B. Lavado de la placa
Lavar 5 veces la microplaca con la solución B mediante un dispositivo de lavado de placas (NUNC® Immuno Wash 8).
Agitar la placa sobre un papel absorbente de forma que se seque al máximo.
C. Saturación de los lugares no específicos
Añadir 200 \mul de la solución D a cada pocillo mediante una multipipeta.
Recubrir la microplaca con un adhesivo transparente.
Incubar 30 minutos a temperatura ambiente
Eliminar la solución y secar al máximo la placa agitándola sobre un papel absorbente.
D. Incubación con la muestra que va a ensayarse
Durante la etapa de saturación (etapa C), preparar las diluciones de las distintas muestras que van a ensayarse.
D-1: Si la muestra a ensayar es un plasma
Todas las diluciones de las muestras que van a ensayarse se llevan a cabo en la solución D.
Para obtener una curva de calibración, es necesario:
-
reconstituir el patrón del conjunto de plasmas con 1 ml de agua mQ (mezclar 2 min en el vórtice)
-
preparar 250 \mul de plasma a partir del patrón del conjunto, diluído a 1/125; 1/250; 1/500 y 1/1000 en la solución D tal como se ha descrito anteriormente.
Para preparar las muestras que van a ensayarse, es necesario:
-
preparar 250 \mul de una dilución 1/250 y 1/500 de los plasmas que van a ensayarse, en la solución D.
-
añadir "por duplicado" 100 \mul de las distintas diluciones que van a ensayase (curva de calibración y muestra).
Para preparar los blancos (estas muestras no incluyen primeros anticuerpos), hace falta:
-
añadir igualmente en 4 pocillos 100 \mul de la solución D "por duplicado"
-
recubrir la placa con un adhesivo transparente y dejar que se incube 1 h a 37ºC.
D-2: Si la muestra que va a ensayarse es un concentrado de inmunoglobulinas
Proceder como se ha descrito anteriormente, preparando 250 \mul de una dilución del lote a 0,1; 0,05; 0,025 y 0,01 mg/ml en el tampón D.
E. Adición del antisuero de conejo marcado con peroxidasa (HRP) y dirigido específicamente contras las IgG humanas
-
lavar 5 veces la placa con la solución C.
-
añadir un segundo anticuerpo que es un antisuero de conejo anti-IgG humana marcado con peroxidasa.
Se puede utilizar especialmente un anticuerpo vendido por la firma Sigma con el número de referencia A8792 a una dilución de 1/60000 o un anticuerpo vendido por la firma Dako con el número de referencia P0214 una dilución 1/28000.
-
Añadir a cada pocillo 100 \mul de antisuero de conejo e incubar 30 minutos a 37ºC.
F. Revelado de las placas
El revelado de las placas se realiza añadiendo sustrato (TMB o 3,3'-3,5'-Terametilbencidina líquida de Sigma (ref: T8665)) que se lleva a temperatura ambiente.
- Lavar 5 veces la placa con la solución C
- Añadir 100 \mul de solución TMB en todos los pocillos
- Incubar durante 15 minutos a 37ºC
G. Detención de la reacción
La detención de la reacción se realiza añadiendo 100 \mul de H_{2}SO_{4} 0,5 N.
H. Medición espectrofotométrica
Leer la absorbancia a 450 nm dentro de los 15 minutos.
Cálculo del título en anticuerpos anti-neumocócicos A. Establecimiento de una recta de calibración y título en anticuerpos anti-neumocócicos
Por definición, una dilución de un patrón del conjunto de plasmas a 1/500, posee un título de 1.000 mU/ml de IgG antineumocócica.
Se representa gráficamente la absorbancia neta:
Od_{net} = Media \ de \ las \ Od_{medidas} - Media \ de \ las \ Od_{blancos}
obtenida para cada dilución del conjunto de plasmas en función del logaritmo del título anti-neumocócico correspondiente.
Mediante un programa de regresión lineal, se determina la ecuación de la recta de calibración.
B. Cálculo del título sobre las muestras desconocidas
Mediante la ecuación de la recta de calibración, se determina el título en mU/ml de los anticuerpos anti-neumocócicos presentes en las muestras desconocidas, teniendo en cuenta las diluciones utilizadas.
La tabla 1 representa el valor de las densidades obtenidas a 450 nm.
El título de cada una de las diluciones, se vuelve a calcular teniendo en cuenta el factor de dilución.
TABLA 1
1
La tabla 2 representa el valor de las densidades obtenidas en función de las UI/ml (escala logarítmica para el calibrador).
TABLA 2
Calibrador
Log mU/ml Densidad óptica neta
3,602 1,591
3,301 1,098
3,000 0,760
2,699 0,462
Los valores de las densidades ópticas medias, corregidas del b blanco, se grafican en función del título (escala semi-logarítmica).
El título de las muestras desconocidas se calcula mediante los parámetros de la recta de calibración (figura 1), según el procedimiento establecido a continuación:
1)
Ecuación de la recta de calibración: OD = a x (log mV/ml)-b; con a = 1,007, y b = 2,26
2)
Cálculo del título de una muestra desconocida: calcular el valor del log (Título). Log (Título) = (OD_{medida}^{-b})/a
3)
Título (mV/ml) = 10^{log(T\text{í}tulo)}
4)
Calcular el título medio de la muestra a las dos diluciones distintas utilizadas (1/250 y 1/500), sin dejar de contar con el factor de dilución.
Ejemplo 2 Especificidad de la prueba diagnóstica con respecto a los antígenos capsulares de S. pneumoniae
La respuesta inmunitaria dirigida contra los antígenos polisacarídicos de S. pneumoniae se manifiesta por la presencia de anticuerpos específicos de la pared y de la cápsula celulares y (Sorensen et al., 1995 Danish Medical Bulletin 42, p. 47-53). Estos dos tipos de anticuerpos pueden evidenciarse especialmente en los donadores sanos, los pacientes tratados o no mediante inmunoglobulinas, o vacunados mediante dichas inmunoglobulinas.
La determinación relativa de estos dos tipos de anticuerpos, puede revelarse importante especialmente para los anticuerpos anti-antigénicos capsulares, cuyo papel protector contra una infección futura se ha demostrado (Lee et al. 1997 Critical Reviews in Microbiology 23 (2), p 121-142).
Consecuentemente, el dispositivo de diagnóstico y/o de cuantificación de la invención puede utilizarse ventajosamente para asegurar el seguimiento de dichas infecciones.
Con el fin de distinguir los anticuerpos dirigidos contra el polisacárido C presente en la pared bacteriana y en la vacuna anti-neumocócica de los anticuerpos capsulares, se utiliza el polisacárido C (purificado por ejemplo a partir de cepas desprovistas de cápsula u obtenido mediante ingeniería genética) en una etapa preliminar para neutralizar los anticuerpos específicamente dirigidos contra este último.
Una incubación previa de las muestras que van a ensayarse, por ejemplo en presencia de 2,5 \muM/ml de polisacárido C durante 30 minutos, a 37ºC, permite dosificar los anticuerpos capsulares en las diferentes preparaciones en la prueba inmunoquímica, utilizando como antígenos inmovilizados preparaciones de antígenos polisacarídicos (por ejemplo, obtenidos a partir del producto Pneumovax®, o a partir de otras fuentes de antígenos).
En estas condiciones, la tasa de los anticuerpos capsulares con relación a los anticuerpos totales es del 50% aproximadamente en los conjuntos de plasma, del 80% en el patrón 89SF y del 10 al 90% en los donadores sanos.

Claims (11)

1. Dispositivo de detección y/o de cuantificación del título de anticuerpos presentes en un líquido biológico de un paciente y que son específicos de una reacción relacionada con una infección por un microorganismo, específicos de una reacción auto-inmunológica o específicos de una alergia, caracterizado porque comprende como patrón una muestra biológica seleccionada a partir de un conjunto de plasmas sanguíneos de más de 200 individuos sanos.
2. Dispositivo según la reivindicación 1, caracterizado porque la muestra biológica se selecciona a partir de un conjunto de plasmas sanguíneos de más de 1.000 individuos sanos.
3. Dispositivo según la reivindicación 2, caracterizado porque la muestra biológica se selecciona a partir de un conjunto de plasmas sanguíneos de más de 5.000 individuos sanos.
4. Dispositivo según cualquiera de las reivindicaciones anteriores, caracterizado porque constituye un estuche de diagnóstico y/o de cuantificación.
5. Dispositivo según cualquiera de las reivindicaciones anteriores, caracterizado porque dicho paciente es un paciente humano.
6. Dispositivo según cualquiera de las reivindicaciones anteriores, caracterizado porque el microorganismo es un agente infeccioso bacteriano.
7. Dispositivo según la reivindicación 6, caracterizado porque el agente infeccioso bacteriano es la cepa Streptococcus pneumoniae.
8. Dispositivo según la reivindicación 6, caracterizado porque el agente infeccioso bacteriano es una cepa de Neiseria.
9. Dispositivo según la reivindicación 6, caracterizado porque el agente infeccioso bacteriano es una cepa de Hemophilus.
10. Utilización del dispositivo según cualquiera de las reivindicaciones anteriores, para la detección y/o el seguimiento de una infección por un microorganismo.
11. Utilización según la reivindicación 10, caracterizada porque el microorganismo es un agente infeccioso bacteriano seleccionado de entre el grupo constituido por las cepas de Streptococcus pneumoniae, Neiseria y Hemophilus.
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