ES2217717T3

ES2217717T3 - Procedimiento para la obtencion del analogo de somatostatina octreotide.

Info

Publication number: ES2217717T3
Application number: ES99500012T
Authority: ES
Inventors: Francisco Javier Clemente Rodriguez; Berta Ponsati Obiols; Gemma Jodas Farres; Marc Canas Poblet
Original assignee: Lipotec SA
Current assignee: Lipotec SA
Priority date: 1998-01-29
Filing date: 1999-01-27
Publication date: 2004-11-01
Anticipated expiration: 2019-01-27
Also published as: EP0953577B1; ES2144357A1; US6346601B1; DE69915160T2; EP0953577A1; ES2144357B1; DE69915160D1

Abstract

LA INVENCION SE REFIERE A UN PROCEDIMIENTO DE OBTENCION DEL ANALOGO DE SOMATOSTATINA DENOMINADO OCTREOTIDO, MEDIANTE UNA SINTESIS EN FASE SOLIDA SOBRE SOPORTES POLIMERICOS, Y MEDIANTE INTERVENCION DE LOS GRUPOS PROTECTORES DE TIPO FMOC/TBU. DICHO PROCEDIMIENTO INCLUYE LA CONSTRUCCION DE UN PEPTIDO LINEAL DE 7 AMINOACIDOS: BOC - D - PHE - CYS(TRT) - PHE - D - TRP LYS(BOC)THR(TBU) - CYS(TRT) - CI - TRITIL - R, EN EL CUAL R ES UN POLIMERO; EL TRATAMIENTO DE LA PEPTIDIL - RESINA RESULTANTE CON ACIDO, PARA SEPARAR EL PEPTIDO DE LA RESINA; LA CICLIZACION DE LA ESTRUCTURA LINEAL OBTENIDA MEDIANTE REACCION CON IODO, ANTES O DESPUES DE LA INCORPORACION DEL RESIDUO DE TREONINOL AL EXTREMO CARBOXILO TERMINAL; INCORPORACION DEL RESIDUO DE TREONINOL EN SOLUCION DESPUES DEL PEPTIDO PROTEGIDO EN SU AMINOACIDO 7, CON O SIN EL PUENTE DISULFURO FORMADO; Y ELIMINAR LAS PROTECCIONES EN EL EXTREMO N - TERMINAL Y EN LAS CADENAS LATERALES, MEDIANTE UN TRATAMIENTO CON 70-95 % TFA, EN PRESENCIA DE CAPTADORES, PARAOBTENER OCTREOTIDO.

Description

Procedimiento para la obtención del análogo de somatostatina Octreotide.

Campo de la invención

La presente invención se relaciona con un procedimiento para la preparación del análogo de somatostatina Octreotide y sus sales farmacéuticamente aceptables formadas por adición de ácidos o bien complejos del mismo. Igualmente, la invención se relaciona con la preparación de compuestos intermedios útiles en la síntesis de Octreotide según la invención.

Fundamento de la invención

Aunque la somatostatina posee un potencial terapéutico muy amplio y se podría administrar en una gran diversidad de aplicaciones clínicas, su tiempo de vida medio en el plasma es extremadamente corto, lo cual reduce el número de aplicaciones posibles. Este inconveniente ha hecho que varios grupos de investigación se planteen el objetivo de desarrollar análogos de somatostatina más estables y más potentes. Uno de estos grupos realizó diversas pruebas con octapéptidos cíclicos. Uno de estos octapéptidos tuvo una actividad biológica excelente tanto in vitro como in vivo (Pless J., Metabolism, 41, 5-6 (1992)). Se trata del Octreotide. Su estructura se muestra a continuación:

1

La presencia de una D-fenilalanina en el extremo N-terminal y de un aminoalcohol en el extremo C-terminal, juntamente con el resto de D-triptófano y el puente disulfuro, hacen que la molécula sea muy resistente a la degradación metabólica. El Octreotide permite una incubación de 24 h en un medio agresivo como el jugo gástrico o en la mucosa intestinal.

El Octreotide inhibe la hormona de crecimiento durante un periodo de tiempo prolongado, inhibe en un grado menor la secreción de glucagón e inhibe únicamente de manera transitoria la secreción de insulina. Por tanto, es más selectivo que otros análogos de somatostatina en la regulación de los niveles de hormona de crecimiento en el cuerpo y, por tanto, actualmente está indicado en la acromegalia para controlar y reducir los niveles plasmáticos de dicha hormona. También se utiliza en el tratamiento de alteraciones celulares de origen endocrino gastroenteropancreático y de ciertos tipos de tumores.

Estado de la técnica

La primera preparación descrita de Octreotide es una síntesis clásica en solución (Bauer W., Pless J., (Sandoz), Eur. pat. Appl.29,579. Eidem U.S. pat 4,395,403 (1981,1983). Posteriormente se han descrito síntesis en fase sólida (Mergler et al, Alsina et al., Neugebauer). En todas ellas se pretende la formación de la cadena peptídica entera por síntesis en fase sólida, empezando la síntesis por el resto de treoninol. Esto obliga a la protección de este resto.

El primer autor (Mergler M., Hellstern H., Wirth W., Langer W., Gysi P. and Prikoszovich W., Peptides: Chemistry and Biology. Proceedings of the 12th American Peptide Symposium. Smith, J.A and Rivier J.E. Eds. ESCOM, Leiden, Poster 292 Presentation (1991).) describe un proceso sintético, usando una resina de aminometilo sobre la cual se incorpora el resto de treoninol con las dos funciones alcohol protegidas en forma de acetal. Realizan la síntesis siguiendo un esquema de protección Fmoc/tBu, formando el puente disulfuro sobre la resina por oxidación de los grupos tiol de los restos de cisteína previamente desprotegidos, y liberando y desprotegiendo el péptido con una mezcla del 20% de TFA/DCM.

A principios de 1997, Alsina J. y colaboradores (Alsina J., Chiva C., Ortiz M., Rabanal F., Giralt E and Albericio F., Tetrahedron Letters, 38, 883-886 (1997)) describieron la incorporación de un resto de treoninol con el grupo amino protegido por el grupo Boc y la cadena lateral protegida por un grupo Bzl, sobre resinas de carbonato activas. Después, la síntesis se continuó utilizando la estrategia Boc/Bzl. La formación del puente disulfuro se llevó a cabo directamente sobre la resina utilizando yodo, el péptido se escindió de la resina y sus grupos protectores de cadena lateral se retiraron simultáneamente con HF/anisol 9/1. En una ultima etapa, se retiró el grupo formilo con una solución de piperidina/DMF. Neugebauer (Neugebauer W., Lefevre M.R, Laprise R., Escher E., Peptides: Chemistry, Structure and Biology pp 1017 Marshal G.R and Rivier J.E. Eds. ESCOM, Leiden, (1990)) describió una síntesis lineal con un rendimiento de sólo un 7%.

Edwards et al. (Edwards B.W., Fields C.G, Anderson C.J, Pajeau T.S., Welch M.J., Fields G.B, J. Med. Chem. 37 3749-3757(1994) realizaron otro tipo de aproximación en fase sólida; sintetizaron paso a paso sobre resina el péptido D-Phe-Cys(Acm)-Phe-D-Trp(Boc)-Lys(Boc)-Thr(tBu)-Cys(Acm)-HMP-resina. Seguidamente procedieron a la formación del disulfuro sobre la resina y luego liberaron el péptido de la resina mediante una aminolisis con treoninol con un rendimiento total de sólo el 14%.

Todos estos procedimientos realizaron la formación del puente disulfuro sobre el péptido totalmente desprotegido o sobre la resina.

Resumen de la invención

Esta invención proporciona un procedimiento de obtención de Octreotide y sus sales de adición de ácido farmacéuticamente aceptables o complejos del mismo, por medio de síntesis en fase sólida sobre soportes poliméricos y con la intervención de grupos protectores del tipo Fmoc/tBu, caracterizado porque comprende las etapas de:

1): síntesis del péptido lineal de 7 aminoácidos

: Boc-D-Phe-Cys(Trt)-Phe-D-Trp-Lys(Boc)-Thr(tBu)-Cys(Trt)-Cl-tritil-R

: convenientemente protegido (en el cual las cisteínas están protegidas con el grupo tritilo, la lisina con un grupo Boc y la treonina con un grupo tBu) y anclado sobre una resina de tipo 2-cloro tritilo-R en donde R es un polímero insoluble en DCM y DMF, poliestireno reticulado y similares;

2): Rotura selectiva del enlace péptido-resina sin afectar ni a los grupos protectores del extremo amino terminal ni a los grupos protectores de las cadenas laterales de los aminoácidos trifuncionales; o bien

3a): Activación del grupo carboxi terminal del péptido protegido e incorporación del resto de treoninol sin ningún tipo de activación; y

4a): Ciclación por formación de un puente disulfuro por oxidación con iodo; o bien

3b): Ciclación por formación de un puente disulfuro por oxidación con iodo; y

4b): Activación del grupo carboxi terminal del péptido protegido con el puente disulfuro ya formado e incorporación del resto de treoninol sin ningún tipo de protección;

5): Desprotección de las cadenas laterales y del extremo amino terminal, y obtención de Octreotide.

6): Purificación del Octreotide bruto por HPLC preparativa.

El segundo método según esta invención queda resumido en el siguiente esquema:

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(Esquema pasa a página siguiente)

2

La diferencia básica con otros procedimientos ya descritos es que la introducción del treoninol se realiza sobre la estructura peptídica protegida (sin resina) que, convenientemente activada, conduce de forma cuantitativa y sin tener que hacer derivatizaciones o protecciones temporales sobre el treoninol, al precursor protegido de Octreotide que, a su vez, con un simple tratamiento ácido conduce al Octreotide con muy buenos rendimientos.

Descripción detallada de la invención

Más concretamente, la presente invención proporciona un procedimiento para la obtención de Octreotide basado en la síntesis en fase sólida con metodología de grupos protectores del tipo Fmoc/tBu sobre una resina de tipo 2-cloro tritilo y, el uso de Boc-D-Phe para el extremo amino terminal del fragmento 1-7 y la posterior incorporación del grupo treoninol tal cual.

La síntesis en fase sólida se lleva a cabo usando la resina cloruro de 2-cloro tritilo (Barlos et al. Tetrahedron Letters 30, 3943-3946 (1989), Barlos et al. Tetrahedron Letters 30, 3947-3950 (1989)) incorporando en primer lugar una Fmoc Cys(Trt). Este soporte, debido a su alto impedimento estérico, garantiza la incorporación del resto Fmoc-Cys(Trt) sin racemización durante el propio acoplamiento ni durante los posteriores tratamientos básicos con piperidina al 20% en DMF usados para retirar los grupos protectores Fmoc.

Construido el siguiente esqueleto peptídico (2-7):

Cys(Trt)-Phe-D-Trp-Lys(Boc)-Thr(tBu)-Cys(Trt)-2-Cl-tritil-resina

la presente invención añade al extremo N-terminal de la cadena peptídica Boc-D-Fenilalanina para obtener el esqueleto lineal de:

Boc-D-Phe-Cys(Trt)-D-Trp-Lys(Boc)-Thr(tBu)-Cys(Trt)-2-Cl-tritil-resina

Posteriormente, la peptidil-resina se somete a un proceso de escisión del fragmento peptídico protegido de la resina con ácido, preferiblemente con ácido acético, sin afectar ni a los grupos protectores del extremo amino terminal ni a los grupos protectores de las cadenas laterales de los aminoácidos trifuncionales. El producto resultante Boc-D-Phe-Cys(Trt)-Phe-D-Trp-Lys(Boc)-Thr(tBu)-Cys(Trt)-COOH se puede ciclar por formación de un enlace disulfuro con yodo en la misma solución y salida simultánea de los dos grupos tritilo (3a) y posterior incorporación del resto de treoninol (4a), o bien evaporando a sequedad y procediendo directamente a la incorporación del grupo treoninol por activación del carboxilo terminal (3b) y llevando a cabo posteriormente la oxidación sobre la secuencia entera.

El último paso es siempre la eliminación del grupo protector amino terminal de la D-fenilalanina (Boc), y los grupos protectores de las cadenas laterales de Thr (tBu) y Lys (Boc) por medio de un tratamiento con TFA al 70-95% en presencia de eliminadores.

El Octreotide bruto se purifica por HPLC y el conjunto de fracciones homogéneas se juntan y liofilizan, obteniéndose así el Octreotide en un estado de pureza del 99% y con un rendimiento de la etapa de purificación del 60%.

Aunque en un principio era de esperar que al realizar la activación del resto Cys C-terminal que se necesitaba acoplar al treoninol se obtendrían cantidades importantes de (D-Cys)-Octreotide, esta reacción procedió siempre con menos de un 1% de epimerización. En resumen, esta invención proporciona un procedimiento para la obtención de Octreotide nuevo y novedoso respecto a las estrategias sintéticas en referencia a los métodos ya existentes y mencionados en el estado de la técnica, con un rendimiento global de síntesis y purificación superior al 40%.

En este punto radica el éxito de la invención que supone un método claro y competitivo para la síntesis de Octreotide.

Las abreviaturas empleadas en esta descripción tienen los siguientes significados:

AcOH: ácido acético

Acm: acetamidometilo

Boc: terc-butoxicarbonilo

Cys: L-cisteína

Cis: L-hemicisteína

D-Phe: D-fenilalanina

D-Trp: D-Triptófano

DCM: diclorometano

DIEA: N,N'-diisopropiletilamina

DIPCDI: diisopropilcarbodiimida

DMF: N,N-dimetilformamida

Fmoc: 9-Fluorenilmetoxicarbonilo

HMP-resina: hidroximetilfenoxiacetil-resina

HOBT: N-hidroxibenzotriazol

HPLC: cromatografía líquida de alta resolución

Lys: L-Lisina

\mul: microlitros

\mumol: micromoles

tBu: terc-butilo

TFA: ácido trifluoroacético

TFE : trifluoroetanol

Thr: L-treonina

Throl: L-treoninol

Trt: tritilo

La invención se ilustrará a continuación con los siguientes ejemplos no limitativos:

Ejemplo 1 Incorporación del primer aminoácido. Obtención de Fmoc Cys-Cl-tritil-resina

La incorporación del resto de Fmoc-Cys(Trt)-OH sobre resina 2Cl-Trt se realiza con un exceso de 1 eq. de Fmoc Cys(Trt) y 2,5 eq. de DIEA.

Sobre 5 g de resina (f=1,28 mmol/g de resina, 6,4 mmol), se incorporan 2,93 g (5,0 mmol) de Fmoc-Cys(Trt) Se pesan en recipientes separados la resina y el aminoácido y se dejan secar bajo vacío con KOH un mínimo de 2 horas. Se prepara una disolución 1/1 de DIEA con DCM (seco sobre tamiz de 4\ring{A}). Se disuelve el aminoácido ya seco con DCM seco (sobre tamiz de 4\ring{A}) a una concentración de 0,1 g de resina/ml, añadiendo la mínima cantidad de DMF seca (sobre tamiz de 4\ring{A}) para completar la disolución. Sobre esta disolución transparente se añade 1/3 de la disolución de DIEA de 1,8 ml (12,5 mmol.) en 1,8 ml de DCM. Se homogeneiza bien y se añade sobre la resina seca. Se deja bajo agitación magnética fuerte durante 5 minutos y se añade el resto de DIEA a la reacción; la mezcla se deja reaccionar 40 minutos más. Seguidamente, se añaden 4 ml de MeOH seco y se dejan reaccionar durante 10 minutos después de los cuales se filtra la resina en una placa filtrante con llave y se procede a los lavados que se describen a continuación.

Paso	Reactivo	Repeticiones	Tiempo
1	DMF	3	1'
2	5% piperidina/(DMF/DCM)	1	10'
3	20% piperidina/DMF	1	15'
4	DMF	3	2'

Ejemplo 2 Incorporación de los diferentes aminoácidos. Obtención de Boc-D-Phe-Cys(Trt)-D-Trp-Lys(Boc)-Thr(tBu)-Cys(Trt)- Cl-tritil-resina

La incorporación de los aminoácidos se realiza siguiendo un programa de síntesis como el que se describe a continuación, utilizándose un exceso de 2,5 equivalentes de Fmoc-aminoácido, HOBt y DIPCDI. Posteriormente se realiza la desprotección del grupo Fmoc con el 20% de piperidina/DMF durante 1 min + 5 min.

Paso	Reactivo	Repeticiones	Tiempo
1*	DMF	5	1'
2*	pip/DMF 20%	1	1'
3*	pip/DMF 20%	1	5'
4*	DMF	5	1'
5*	Fmoc aa	---	+
6	HoBt	---	+
7	DIPCDI	---	40'
8	DMF	5	1'
[*para Thr]

Control por prueba de ninhidrina; si + volver a 5; si - seguir el paso 1 hacia el siguiente aminoácido

Los rendimientos al final de la síntesis son cuantitativos en la obtención de Boc-D-Phe-Cys(Trt)-Phe-D-Trp-Lys(Boc)-Thr(tBu)-Cys(Trt)-2Cl-tritilo-resina.

Ejemplo 3 Preparación de Boc-D-Phe-Cys(Trt)-Phe-D-Lys(Boc)-Thr(tBu)-Cys(Trt)

250 mg (113 \mumol) de Boc-D-Phe-Cys(Trt)-Phe-D-Trp-Lys(Boc)-Thr(tBu)-Cys(Trt)-2Cl-tritilo-resina se tratan con 6,36 ml de la mezcla 7/2/1 ó 5,5/0,5/4 de DCM/TFE/AcOH, durante 2 horas, bajo agitación magnética. Después, la suspensión se filtra y se lava con 0,2 ml, 0,2 ml y 0,2 ml de la mezcla 7/2/1 de DCM/TFE/AcOH. La solución se evapora (si no se quiere proceder a la oxidación) a sequedad a presión reducida y el sólido obtenido se lava con agua. El rendimiento es cuantitativo.

Ejemplo 4 Obtención de ciclo^{(2-7)}Boc-D-Phe-Cis-Phe-D-Trp-Lys(Boc)-Thr(tBu)-Cis-OH (Fragmento 1-7 oxidado)

250 mg (113 mmol) de Boc-D-Phe-Cys(Trt)-Phe-D-Trp-Lys(Boc)-Thr(tBu)-Cys(Trt)-COOH disueltos en 7 ml de la mezcla 7/2/1 de DCM/TFE/AcOH, se añaden lentamente sobre una disolución de 290 mg (1,13 mmol) de yodo de concentración 0,8 M en la mezcla 7/2/1 de DCM/TFE/AcOH. La reacción se deja evolucionar durante 15 minutos. Se añaden 4,3 ml de una disolución de Na_{2}S_{2}O_{7} 1 N para eliminar el exceso de yodo. La fase acuosa se extrae y se lava tres veces con 1 ml de DCM, el conjunto de las fases orgánicas se extrae con una solución de ácido cítrico y agua y se evapora a presión reducida hasta sequedad. El sólido obtenido se lava con la ayuda de una placa filtrante y agua. Los rendimientos oscilan entre el 85 y el 95%.

Ejemplo 5 Acoplamiento de ciclo^{(2-7)}Boc-D-Phe-Cis-Phe-D-Trp-Lys(Boc)-Thr(tBu)-Cis-OH (Fragmento 1-7 oxidado) con Throl

Sobre 250 mg (230 \mumol) de ^{(2-7)} Boc-D-Phe-Cis-Phe-D-Trp-Lys(Boc)-Thr(tBu)-Cis-OH (Fragmento 1-7 oxidado) se pesan 103 mg (690 \mumol) de HOBt y 72 mg (690 \mumol) de treoninol y se disuelven en 10 ml de DMF seca/DCM seco (1:1); bajo una enérgica agitación se añaden 111 \mul (690 \mumol) de DIPCDI. La mezcla se deja reaccionar durante 5 h a temperatura ambiente. Se evapora a sequedad hasta obtener un aceite, se añade agua, la mezcla se homogeneiza bien por ultrasonidos y se liofiliza. El acoplamiento es cuantitativo.

Ejemplo 6 Acoplamiento de Boc-D-Phe-Cys(Trt)-Phe-D-Trp-Lys(Boc)-Thr(tBu)-Cys(Trt)-OH (Fragmento 1-7 reducido) con Throl

Sobre 250 mg (149 \mumol) de ^{(2-7)} Boc-D-Phe-Cis-Phe-D-Trp-Lys(Boc)-Thr(tBu)-Cis-OH (Fragmento 1-7 oxidado) se pesan 67 mg (447 \mumol) de HOBt y 47 mg (447 \mumol) de treoninol y se disuelven en 10 ml de DMF seca/DCM seco (1:1); bajo una enérgica agitación se añaden 70 \mul (447 \mumol) de DIPCDI. La mezcla se deja reaccionar durante 5 h a temperatura ambiente. Se evapora a sequedad hasta obtener un aceite, se añade agua, la mezcla se homogeneiza bien por ultrasonidos y se liofiliza. El acoplamiento es cuantitativo.

Ejemplo 7 Acoplamiento de ciclo^{(2-7)}Boc-D-Phe-Cis-Phe-D-Trp-Lys(Boc)-Thr(tBu)-Cis-OH (Fragmento 1-7 oxidado) con la sal de HOBt del treoninol preformada

En este ejemplo se sigue el mismo procedimiento que el explicado en el ejemplo 5, pero utilizando en este caso la sal de HThrol^{+}OBt^{-} y DIPCDI, en DMF seca a una concentración de 25 mg/ml. La reacción se efectúa a 47ºC. El acoplamiento es cuantitativo.

Ejemplo 8 Acoplamiento de Boc-D-Phe-Cys(Trt)-Phe-D-Trp-Lys(Boc)-Thr(tBu)-Cys(Trt)-OH (Fragmento 1-7 reducido) con la sal de HOBt del treoninol preformada

En este ejemplo se sigue el mismo procedimiento que el explicado en el ejemplo 6 pero utilizando en este caso la sal de HThrol^{+}OBt^{-} y DIPCDI, en DMF seca a una concentración de 25 mg/ml. La reacción se lleva a cabo a 47ºC. El acoplamiento es cuantitativo.

Ejemplo 9 Oxidación de Boc-D-Phe-Cys(Trt)-Phe-D-Trp-Lys(Boc)-Thr(tBu)-Cys(Trt)-Throl. Obtención del ciclo^{(2-7)}Boc-D-Phe-Cis-Phe-D-Trp-Lys(Boc)-Thr(tBu)-Cis-Throl (Fragmento 1-8 oxidado)

250 mg (147 \mumol) de Boc-D-Phe-Cys(Trt)-Phe-D-Trp-Lys(Boc)-Thr(tBu)-Cys(Trt)-Throl disueltos en 8,26 ml de la mezcla 7/2/1 de DCM/TFE/AcOH, se añaden lentamente sobre una disolución de 290 mg (1,47 mmol) de yodo de concentración 0,8 M en la mezcla 7/2/1 de DCM/TFE/AcOH. La reacción se deja evolucionar durante 15 minutos. Se añaden 4,3 ml de una disolución de Na_{2}S_{2}O_{7} 1 N para eliminar el exceso de yodo. La fase acuosa se extrae y se lava tres veces con 1 ml de DCM, el conjunto de las fases orgánicas se extrae con una solución de ácido cítrico y agua y se evapora a presión reducida hasta sequedad. El sólido obtenido se lava con la ayuda de una placa filtrante y agua.

Ejemplo 10 Eliminación de los grupos protectores. Obtención de Octreotide

230 mmol del ciclo^{(2-7)}Boc-D-Phe-Cis-Phe-D-Trp-Lys(Boc)-Thr(tBu)-Cis-Throl (Fragmento 1-8 oxidado) obtenido en los ejemplos 5, 7 y 9 se tratan con 2 ml de TFA/H_{2}O (95:5) durante 5 horas a temperatura ambiente. Posteriormente, se deja caer el filtrado sobre 100 ml de éter dietílico seco y frío y el precipitado blanco que se obtiene se centrifuga de nuevo. El sólido se re-suspende en éter dietílico y se centrifuga nuevamente, repitiéndose la operación cinco veces más. El péptido bruto se purifica por HPLC preparativa al 25% de CH_{3}CN/H_{2}O con TFA al 0,01% en una columna Kromosil C_{8} 10 \mum 25x5 cm. El rendimiento final de producto con una pureza >99% supera el 40%.

Claims

1. Un procedimiento para la obtención de Octreotide y sus sales de adición de ácido farmacéuticamente aceptables o complejos del mismo, por medio de síntesis en fase sólida sobre soportes poliméricos y con intervención de grupos protectores del tipo Fmoc/tBu, que comprende las etapas de:

a): síntesis del péptido lineal de 7 aminoácidos Boc-D-Phe-Cys(Trt)-Phe-D-Trp-Lys(Boc)-Thr(tBu)-Cys(Trt)-Cl-tritil-Rb en donde Cys(Trt) es cisteína protegida con un grupo tritilo, Lys(Boc) es lisina protegida con un grupo Boc y Thr(tBu) es una treonina protegida por un grupo tBu, estando anclado dicho péptido sobre una resina de tipo 2-cloro tritilo-R en donde R es un polímero insoluble en DCM y DMF, tal como poliestireno reticulado;

b): tratamiento con ácido de la peptidil-resina resultante, para escindir el péptido de la resina, manteniendo en todo momento los demás grupos protectores para obtener Boc-D-Phe-Cys(Trt)-Phe-D-Trp-Lys(Boc)-Thr(tBu)-Cys(Trt)-COOH;

c): ciclación del péptido por medio de la formación de un enlace disulfuro por reacción con yodo;

d): desprotección de las cadenas laterales con 70-95% de TFA en presencia de eliminadores;

que comprende además una etapa e), realizada entre las etapas b) y c) o entre las etapas c) y d), consistiendo dicha etapa e) en la incorporación de un resto de treoninol en disolución en el extremo carboxi terminal del péptido.

2. Un procedimiento según la reivindicación 1, en donde el heptapéptido Boc-D-Phe-Cys(Trt)-Phe-D-Trp-Lys(Boc)-Thr(tBu)-Cys(Trt)-Cl-tritil-R se obtiene a partir de resina de 2-clorotritilo incorporando en una primera etapa el resto de Fmoc Cys(Trt) antes de la incorporación de los otros seis aminoácidos.

3. Un procedimiento según la reivindicación 1, en donde la etapa b), que es la escisión del péptido, se realiza por tratamiento con AcOH disuelto en una mezcla de TFE, MeOH y/o DCM, en diferentes proporciones.

4. Un procedimiento según la reivindicación 1, en donde el treoninol se incorpora antes de ciclar el péptido, por activación del grupo carboxilo del resto de cisteína.

5. Un procedimiento según la reivindicación 1, en donde el treoninol se incorpora después de ciclar el péptido, por activación del grupo carboxilo del resto de cisteína.