ES2224355T3 - Composiciones y articulos para reducir los efectos de la inflamacion. - Google Patents

Abstract

Un procedimiento para reducir o impedir los efectos de la inflamación provocados en el tejido lesionado, cuyo procedimiento comprende las etapas de: a) colocando el tejido lesionado, o tejido prelesionado, en contacto con un agente fotosensible capaz de penetrar en el tejido, resultando en el grado deseado de biodistribución en menos de una hora; y b) exponiendo el tejido así puesto en contacto a la luz que tiene una longitud de onda absorbida por el agente fotosensible durante un tiempo suficiente para reducir o impedir la inflamación del tejido expuesto, pero no tan largo como para causar necrosis o eritema del tejido expuesto, o una composición farmacéutica o un artículo para reducir o impedir los efectos de inflamación que surgen del tejido lesionado. La composición comprende: a) aproximadamente 1 µg/ml a aproximadamente 2mg/ml de un agente fotosensible capaz de penetrar en el tejido lesionado, o tejido prelesionado, que resulta en el grado deseado de biodistribución en menos de una hora; y b) un vehículo farmacéuticamente aceptable. El artículo comprende: a) un agente fotosensible capaz de penetrar en el tejido lesionado, o prelesionado, que resulta en el grado deseado de biodistribución en menos de una hora; y b) un aplicador absorbente.

Description

Composiciones y artículos para reducir los efectos de la inflamación.

Campo técnico

Esta invención se refiere generalmente al campo de los productos fármacoterapéuticos y a la utilización de la terapia fotodinámica ("PDT") para reducir o impedir la inflamación debida al tejido lesionado, bien por lesión intestinal, como por ejemplo quirúrgica, o por lesión por accidente, tales como desgarros en la piel, lesiones en las articulaciones y tendones y el tratamiento de víctimas de quemaduras. En una realización preferida, la invención se refiere a la utilización de la PDT "a bajas dosis" para tratar el tejido ocular en el que la inflamación es debida a la manipulación del tejido del ojo, especialmente cuando la inflamación presenta un factor complicador en la recuperación del paciente a partir de un procedimiento necesario. Las aplicaciones habituales incluyen la conjuntivitis y varios tipos de cirugía ocular o tratamiento con láser, tales como el trasplante y la cirugía de filtración ocular utilizada normalmente para tratar el glaucoma. En una realización particularmente preferida, la invención se refiere al aumento de la supervivencia a las ampollas por filtración para mejorar el resultado de la cirugía de filtración.

Antecedentes de la técnica Inflamación en general

Los cuatro puntos cardinales asociados normalmente a la inflamación son: (1) eritema, (2) edema, (3) calor y (4) dolor, siendo la pérdida de función de la parte afectada un quinto punto cardinal opcional. Aunque la lesión desencadena una serie compleja de sucesos, muchos de los cuales suceden simultáneamente y están interrelacionados en una variedad de formas, se sabe que los capilares participan de modo importante en la inducción de la inflamación. De hecho, la inflamación es uno de los mecanismos de defensa valiosos del cuerpo y se cree generalmente que consta de tres fases: la fase degenerativa, la fase vascular y la fase de cicatrización. Véase Klein, "Defense Reactions in Action", Immunology, The Science of Self-Nonself Discrimination, capítulo 14, 577-84 (1982).

Específicamente, en la fase degenerativa, las células afectadas, principalmente las células epidérmicas y los fibroblastos se llegan a hinchar, llegando a estar sus citoplasmas vacuolizados y sus núcleos se alargan y se fragmentan. Algunas de las plaquetas en los vasos sanguíneos dañados se descomponen y liberan serotonina y otros mediadores que actúan sobre las terminaciones del nervio simpático.

La fase vascular se caracteriza por cambios en los vasos sanguíneos, hidratación extendida y actividad de las denominadas células inflamatorias (granulocitos, particularmente neutrófilos, linfocitos, monocitos y macrófagos), y la eliminación de células degeneradas y deshechos celulares. La red capilar y las vénulas postcapilares se llegan a inundar, congestionar y atascar por la sangre en hiperemia activa. Debido a que también proliferan numerosos capilares, se observa el aspecto de enrojecimiento del tejido inflamado, algunas veces denominado "erupción". El aumento de la circulación sanguínea también da lugar a que la temperatura del área inflamada se acerque a la de la sangre aórtica más caliente, comparada con la del tejido normal circundante, dando la sensación de calor.

En el momento de la lesión, el tejido dañado libera sustancias conocidas por estar relacionadas con la histamina, denominadas sustancias H, que son una mezcla de histamina y serotonina, liberadas por los mastocitos del tejido disgregado. Las sustancias H producen un retraso activo en los vasos sanguíneos y las células endoteliales del vaso dilatado se separan una de la otra, produciendo solapamientos entre ellas al alargarse. El endotelio que reviste los vasos sanguíneos se llega a revestir gradualmente con leucocitos, forzando algo de fluido fuera del tejido circundante. El fluido rico en proteínas que se fuga del vaso en el tejido circundante produce el edema del tejido. La fuga de fluido también contiene sustancias que neutralizan las toxinas bacterianas y ayudan a la destrucción del agente que produce la inflamación.

Los leucocitos, particularmente los neutrófilos y los monocitos, se mueven sobre la pared del vaso sanguíneo hasta que encuentran un solapamiento adecuado a través del cual pueden emigrar dentro de las estructuras perivasculares y a los espacios del tejido. Los leucocitos atacan las células muertas y moribundas, digiriéndolas intracelularmente por fagocitosis o extracelularmente mediante las enzimas proteolíticas liberadas de sus lisosomas cuando ellas se mueren. Los estímulos para la liberación de leucocitos se cree que provienen del tejido deseado en forma de factores quimiopáticos.

Las plaquetas son otro tipo de célula profundamente afectada por la lesión del tejido. Poco después de la lesión, las plaquetas, solas o en grupos, se adhieren a las paredes del vaso. Simultáneamente, las fibras de fibrina comienzan a aparecer, formando una red fina que ayuda a atrapar a las células. El coágulo resultante acerca los bordes del tejido destruido conjuntamente.

La digestión intra- y extracelular del tejido necrótico por los neutrófilos y los monocitos produce un fluido que se combina con el material seroso que se está destruyendo en los vasos sanguíneos. Si se forma un absceso, la cavidad se recubre de una membrana pirógena que, en las heridas infectadas con bacterias, impide la diseminación y la multiplicación de los microorganismos patógenos en la sangre.

En las primeras dos fases del proceso inflamatorio, se destruye el cuerpo extraño, por ejemplo, si el cuerpo es un organismo, o se afloja el tejido alrededor, por ejemplo, si es una astilla. En la fase de cicatrización, la inflamación comienza a remitir; los vasos sanguíneos individuales y los modelos vasculares se vuelven normales de nuevo otra vez; y la curación de la herida comienza. Los tres principales sucesos en el proceso de restauración son (1) formación de nuevo tejido conectivo mediante proliferación de fibroblastos; (2) regeneración del epitelio; y (3) crecimiento de nuevos capilares.

Incluso antes que remita la inflamación, los fibroblastos comienzan a moverse en el área lesionada desde el tejido normal circundante, donde existen normalmente en estado latente. Emigran por un movimiento ameboide a lo largo de hebras de fibrina y se distribuyen en todo el área de cicatrización. Una vez fijadas en posición en el tejido lesionado, comienzan a sintetizar colágeno y segregan esta proteína, que se dispone en fibras. Las fibras se orientan con sus ejes longitudinales en la dirección de la tensión mayor. A medida que los haces de colágeno crecen en firmeza, los fibroblastos degeneran gradualmente y atacan estrechamente a los haces, y el área lesionada se transforma en tejido de cicatriz.

Simultáneamente a la formación del tejido de cicatriz, las células epidérmicas intactas en el borde de la herida comienzan a proliferar y a moverse, como una hoja, hacia el centro del área lesionada. A medida que remite la inflamación, aumenta la necesidad de un aporte directo de sangre y comienzan a desarrollarse nuevos vasos en la herida.

Es sabido que, observando la inflamación desde un punto de vista molecular, numerosos compuestos activos interactúan unos con otros de una forma compleja. Entre las células dañadas por la herida están los mastocitos, que liberan mediadores que desencadenan una fase precoz de vasodilatación, acompañada de la separación de células endoteliales y de exposición de las fibras de colágeno en la capa subendotelial. Las fibras en los solapamientos intercelulares que se forman en los vasos sanguíneos atrapan las plaquetas y desencadenan la liberación de mediadores de estas células.

Además de las plaquetas, las fibras de colágeno expuestas interactúan también con las proteínas del plasma que se filtran a través de los poros de la pared del vaso dilatado, incluyendo el factor desencadenante de la cascada de la coagulación sanguínea. Estas proteínas también inician la cascada de cinina-bradicinina, produciendo bradicinina, que llega a estar implicada en la vasodilatación, en el aumento de la permeabilidad de los vasos sanguíneos y en la quimiotaxia.

Un cuarto sistema molecular, la cascada de complemento, se puede activar por diversos estímulos: los vasos sanguíneos lesionados, las enzimas proteolíticas liberadas por las células dañadas, los componentes de la membrana de cualquier bacteria participante y los complejos antígeno-anticuerpo. Algunos de los componentes del complemento activado actúan como factores quimiopáticos, responsables de la entrada de leucocitos en el área inflamada. Otros facilitan la fagocitosis y participan en la lisis celular.

Inflamación ocular

El glaucoma es una enfermedad de los ojos en las que la presión intraocular elevada produce daños en la visión del individuo. En un ojo normal, se produce fluido mediante las células epiteliales del cuerpo ciliar, que está localizado alrededor de la circunferencia interna del iris (hacia el interior del globo del ojo). Las funciones de este fluido incluyen la alimentación de las células en el ojo y el mantenimiento de una presión positiva dentro del globo ocular, que es necesaria para mantener la correcta distribución espacial de las partes visuales necesarias para la formación de la imagen, similar a la estructura soporte de un cuerpo de cámara en una cámara fotográfica.

El fluido se elimina normalmente del ojo por filtración a través de la malla trabecular, cuerpo circular colocado en forma de circunferencia en el ángulo entre el iris y la córnea y la parte anterior del ojo. El fluido drena típicamente a través de los orificios microscópicos en la malla trabecular en el canal de Schlemm, y a continuación a través de los canales conectores que conducen el fluido dentro de las venas episclerales y fuera del ojo. En la patología del glaucoma, se reduce el efluente del fluido procedente del ojo, produciendo un aumento acentuado de la presión intraocular, daño a los tejidos internos del ojo y, eventualmente, la pérdida completa de visión.

El objetivo terapéutico en el tratamiento del glaucoma es siempre el mismo, es decir, reducir la presión intraocular, ya sea disminuyendo la producción de fluido o aumentando el drenaje o la "filtración" del fluido fuera del ojo. Aunque existen muchos medios para llevar a cabo este objetivo, la medicación se prueba siempre en primer lugar. Si la medicación no tiene éxito para controlar la presión intraocular elevada, se utilizan otras técnicas más agresivas, tales como el tratamiento con láser o la intervención quirúrgica.

Los procedimientos con láser incluyen la trabeculoplastia, en la que el láser se utiliza para quemar orificios en la malla trabecular. Las técnicas quirúrgicas incluyen (1) una trabeculotomía, que utiliza una sonda metálica o "trabeculotomo" para crear una abertura entre el canal del Schlemm y la cámara anterior del ojo para aproximadamente un tercio de la circunferencia del ángulo de drenaje normal; (2) una trabeculectomía, que implica cortar a través de la malla trabecular; y (3) una iridectomía que se refiere al corte de partes del iris. Una esclerostomía implica el corte a través de la esclerótica ya sea con un láser o con un instrumento quirúrgico. La trabeculectomía, iridectomía y esclerostomía están todas asociadas a la formación de una "ampolla"de filtración, una pequeña vesícula en la que el fluido ocular en exceso está derivado a un drenaje acelerado fuera del ojo.

La cirugía de filtración del glaucoma se recomienda normalmente para pacientes que presentan lesión progresiva glaucomatosa y para aquellos que, en su nivel corriente de presión ocular, están en riesgo significativo para la evolución de la enfermedad. Para los pacientes con daño grave, se mejora el pronóstico a largo plazo cuando la presión intraocular ("IOP") se puede reducir a menos de 20 mm Hg y se mantiene por debajo de este nivel. De este modo, en los pacientes con daño avanzado y presiones oculares por encima de 18 a 20 mm Hg, la cirugía de filtración está normalmente muy recomendada.

La cirugía generalmente está comprendida en una de las dos categorías: (1) procedimientos de espesor total o (procedimientos de fístula protegida). El procedimiento de fístula protegida más básico, implica típicamente las siguientes etapas de trabeculectomía:

a. retirar el párpado;

b. penetrar el limbo (tejido translúcido que representa la transición entre la esclerótica opaca y la córnea transparente del ojo) para producir una abertura en la cámara anterior (unida por el iris coloreado y la córnea transparente que cubre el iris) desde el exterior de la parte anterior del ojo;

c. en un punto bajo el iris, volver a despegar las capas externas de la conjuntiva y cortar un faldón triangular de esclerótica con la base del triángulo en el limbo;

d. introducir la cámara anterior desde la base del faldón triangular del esclerótica;

e. escindir una parte de la malla trabecular subyacente para formar una fístula o canal de conexión;

f. escindir una pequeña parte del iris a través de la fístula;

g. utilizar suturas para cerrar el faldón esclerótico;

h. suturar cerca de la conjuntiva; e

i. inyectar un fluido fisiológicamente aceptable, tal como una solución de sal básica ("BSS"), en la cámara anterior a través de la apertura exterior que penetra en el limbo, que fue realizada en la etapa d, para elevar la ampolla formada a lo largo del limbo, para confirmar que la fístula no está bloqueada y para confirmar que no existen fugas en la ampolla.

El procedimiento de espesor completo se diferencia en que se crea una apertura directa, sin el faldón esclerótico, para conectar la cámara anterior con el espacio subconjuntivo a través del limbo. Después que las capas externas de la conjuntiva se han vuelto a despegar, se crea la fístula por escleroctomía, (cortando un borde de tejido fuera de la esclerótica en el limbo), esclerostomía térmica (cortando un surco superficial en la esclerótica paralelo a la superficie del limbo), esclerostomía de láser o trepanación. Stewart, "Filtering surgery-Techniques and Operative Complications", Clinical Practice of Glaucoma, capítulo 10, 333-61 (1990).

Siguiendo la cirugía, se observa cuidadosamente sobre una base regular el estado de la ampolla de filtración. Inicialmente, la ampolla está normalmente bien elevada con respecto a la esclerótica. Muchos ojos presentan un área inicial de avascularidad en la conjuntiva el primer día después de la operación, normalmente alrededor de la zona de la fístula. El área avascular se identifica al indicar una pérdida localizada de capilares y vénulas. Sin embargo, cuando se examina la cámara anterior, una pequeña cantidad de enrojecimiento o erupción puede estar presente, indicando la inflamación. La IOP en la primera semana después de la operación es normalmente menor de 5 mm Hg, aunque puede estar comprendida en el intervalo de 6 a 10 mm Hg. Después del examen inicial, el paciente comienza normalmente con una combinación antibiótico-esteroide. Stewart "Postoperative Complications of Filtering Surgery", Clinical Practice of Glaucoma, capítulo 11, 363-90 (1990).

En la segunda a la cuarta semana después de la operación, la conjuntiva y la ampolla están menos inflamadas y la cámara anterior se vuelve "discreta" a medida que la cantidad de erupción remite. Asimismo, como resultado de la cicatrización, la ampolla normalmente se hace un poco más pequeña. Además, la ampolla generalmente continúa mostrando un área avascular que puede aumentar de tamaño. La IOP en la segunda a cuarta semana después de la operación normalmente aumenta hasta 10 mm Hg o por encima. Stewart, "Postoperative Complications of Filtering Surgery", Clinical Practice of Glaucoma, capítulo 11, 363-90 (1990).

Después de cuatro semanas de un curso postoperatorio sin complicaciones, la conjuntiva normalmente presenta poca o ninguna inflamación. La ampolla de buen funcionamiento mantiene de forma típica un área avascular que puede estar mínimamente o muy elevada de la esclerótica. Además, la IOP se debería estabilizar durante este periodo, en teoría entre 10 y 15 mm Hg. Los esteroides postoperatorios tópicos se disminuyen lentamente, según la cantidad de inflamación en la ampolla filtrante y en la cámara anterior. Si la ampolla permanece vascular e inflamada, se mantienen normalmente los esteroides y algunas veces incluso se aumentan, para acelerar la resolución de cualquier inflamación del segmento anterior, limitando de este modo la formación de cicatrices. Stewart, "Postoperative Complications of Filtering Surgery", Clinical Practice of Glaucoma, capítulo 11, 363-90 (1990).

Desgraciadamente, durante el periodo postoperatorio inicial después de la cirugía de filtración, un paciente puede padecer diversas complicaciones diferentes, una de las cuales es la insuficiencia de la ampolla. En muchos pacientes, la insuficiencia de la ampolla tiene lugar entre 1 a 6 meses después de la operación y la ampolla por último no puede controlar la presión ocular. Clínicamente, las ampollas de filtración que están funcionando mal son normalmente de pequeña extensión, se elevan poco y se vuelven al menos parcialmente vascularizadas y la IOP de nuevo llega a estar elevada por encima del intervalo normal. Stewart, "Postoperative Complications of Filtering Surgery", Clinical Practice of Glaucoma, capítulo 11, 363-90 (1990).

El éxito de la cirugía de filtración depende de cuánto tiempo después de la cirugía la ampolla permanece operativa. Los pacientes desarrollan de forma típica la insuficiencia de la ampolla a partir de un bloqueo en la zona de la fístula o a partir de la cicatrización en la interfase entre la conjuntiva y la esclerótica. Si se bloquea la zona de la fístula, se puede utilizar una de las diversas técnicas de terapia con láser o de las técnicas quirúrgicas convencionales. Desgraciadamente, sin embargo, incluso si la fístula se abre de este modo, el efluente acuoso puede estar limitado debido a la cicatrización de la ampolla previa en la esclerótica. Si estos procedimientos fracasan y la IOP del paciente no está controlada en la terapia médica máxima, puede ser necesario realizar otro procedimiento de filtración en una posición diferente. Si la fístula permanece abierta pero la ampolla es pequeña, el aumento de IOP probablemente haya resultado de la cicatrización de la conjuntiva y la esclerótica, que permanece la causa más corriente de insuficiencia de la ampolla. Stewart, "Postoperative Complications of Filtering Surgery", Clinical Practice of Glaucoma, capítulo 11, 363-90 (1990).

La manipulación de los tejidos del ojo, especialmente la conjuntiva, en cirugía de filtración produce necesariamente inflamación, y, eventualmente, cicatrización. En general, cuanto mayor es la manipulación, más corto es el periodo de supervivencia de la ampolla. Debido a que la cirugía de filtración en pacientes con alto riesgo de glaucoma produce con frecuencia insuficiencia como resultado de la cicatrización postoperatoria, los fibroblastos parece que desempeñan un papel crítico en este proceso. Katz et al., "Mitomycin C. versus 5-Fluorouracil in High-risk Glaucoma Filtering Surgery", Ophthalmology, 102:9, 1263-68 (1995). Una de las primeras razones de insuficiencia en la cirugía de filtración del glaucoma es la presencia de fibroblastos en el tejido conjuntivo, (Berlin et al., "The Role of Laser Sclerostomy in Glaucoma Surgery", Current Opinion in Ophthalmology, 6:102-114 (1995)), y cuando fracasa la operación, normalmente es porque ha existido proliferación de fibroblastos y cicatrización en el punto de filtración (Mora et al., "Trabeculectomy with Intraoperative Sponge 5-Fluorouracil", Ophthalmology, 103:963-70 (1996)).

En los denominados pacientes "de alto riesgo", en los que existe un alto porcentaje de insuficiencias de ampolla debido a la fibrosis, algunas veces es útil el tratamiento correspondiente a la cirugía para extender la supervivencia de la ampolla de filtración. Muchas técnicas se han ideado para reducir la inflamación y la cicatrización, prolongando de este modo la función de la ampolla filtrante creada en la cirugía de filtración, tal como un simple masaje digital del ojo sobre una base periódica durante aproximadamente cuatro semanas después de la cirugía.

Se han probado también las técnicas farmacológicas para limitar la cicatrización inhibiendo la respuesta inflamatoria e impidiendo la formación del colágeno en etapas específicas a lo largo de su vía sintética. Los corticosteroides se utilizan con frecuencia, ya sea por vía tópica en forma de gotas o inyectados por vía subconjuntiva, para ayudar a impedir la cicatrización de la ampolla inhibiendo la respuesta inflamatoria y la proliferación de fibroblastos. Stewart, "Filtering surgery-Techniques and Operative Complications", Clinical Practice of Glaucoma, capítulo 10, 333-61 (1990). Normalmente, se continúan los esteroides tópicos para minimizar la cicatrización hasta que se resuelva la inflamación del segmento anterior. Stewart, "Postoperative Complications of Filtering Surgery", Clinical Practice of Glaucoma, capítulo 11, 363-90 (1990). Un programa de tratamiento típico debería indicar la utilización postoperatoria por vía tópica cada tres horas con disminución rápida durante 20 días o así. Araujo et al., "A Ten-Year Follow-Up on a Prospective, Randomiced Trial of Post-operative Corticoesteroids after Trabeculectomy", Ophthalmology, 102:1753-59 (1995).

5-Fluorouracil ("5-Fu") es un análogo de pirimidina fluorado con actividad antimetabólica (inhibidor competitivo de timidilato sintetasa), que también ejerce un efecto antifibrótico al disminuir la proliferación de fibroblastos, impidiendo de este modo la cicatrización de la ampolla de filtración. Típicamente, se ha utilizado 5-Fu en casos con pronósticos quirúrgicos escasos. A los dos años, 5-Fu ha presentado un éxito en la cirugía de filtración entre el 60 y el 70%. 5-Fu normalmente se administra mediante una serie de inyecciones subconjuntivas.

Sin embargo, además del inconveniente y la incomodidad de frecuentes y repetidas inyecciones postoperatorias, numerosas complicaciones serias se han descrito con 5-Fu subconjuntivo, incluyendo defectos epiteliales, cicatrización subepitelial, ulceraciones córneas, fugas en la herida conjuntiva, fugas de la ampolla, hemorragia supracoroidea, desprendimiento de retina y endoftalmitis. Por lo tanto, aunque 5-Fu puede prolongar la vida de la ampolla, la frecuencia de los defectos epiteliales de la córnea, la cicatrización y la vascularización es también alta debido a la toxicidad general de este agente. Stewart, "Filtering surgery-Techniques and Operative Complications", Clinical Practice of Glaucoma, capítulo 10, 333-61 (1990). Véase también Khaw et al., "Five-minute Treatments with Fluorouracil, Floxuridine, and Mitomycin Have Long-term Effects on Human Tenon's Capsule Fibroglasts", Arch. Ophthalmol., 110:1150-54 (1992); Kupin et al., "Adjunctive Mitomycin C in Primary Trabeculectomy in Phakic Eyes", Am. J. of Ophthalmology 119:30-39 (1995); y Katz et al., "Mitonycin C. versus 5-Fluorouracil in High-risk Glaucoma Filtering Surgery", Ophthalmology, 102:9, 1263-69 (1995). Véase también Kay et al. "Delivery of Antifibroblast Agents as Adjuncts to Filtration Surgery-Part II: Delivery of 5-Fluorouracil and Bleomycin in a Collagen Implant: Pilot Study in the Rabbit", Ophthalmic Surg. 17:796-801 (1986); y Khaw et al., "Effects of Inoperative 5-Fluorouracil or Mitomycin C on Glaucoma Filtration Surgery in the Rabbit", Ophthalmology, 100:367-72 (1993).

Algunos escritores han descrito que el edema corneal debido a la exposición intraocular involuntaria podría evitarse mediante la utilización de una baja concentración, p. ej., 0,5 mL de 100 mg/mL de 5-Fu, en las inyecciones subconjuntivas habituales. Chalfin et al., "Corneal Endothelial Toxic Effect Secondary to Fluorouracil Needle Bled Revision", Arch. Ophthalmol., 113:1093-94 (1993). Otros han indicado que la utilización de 5-Fu debe hacerse más segura y más eficaz por administración intraoperatoria utilizando una esponja empapada con 50 mg/mL del compuesto y dejando la esponja en contacto con el punto de la ampolla durante un corto periodo de tiempo. Sin embargo, incluso entonces, las inyecciones postoperatorias suplementarias son necesarias en algunos casos y sus inyecciones están asociadas todavía a una frecuencia indeseablemente elevada de daño epitelial en la córnea.

El azúcar desoxirribosa del fluorouracilo, floxuridina, es aproximadamente 100 veces tan potente como el fluorouracilo en la inhibición a largo plazo de los fibroblastos oculares y de este modo se puede administrar en una dosis única. Sin embargo, la diferencia entre lo que produce la muerte celular, más bien que la inhibición, es relativamente pequeña. Por consiguiente, la utilización de floxuridina es susceptible de peligro de exposición de los tejidos normales a dosis relativamente altas de materiales potencialmente citotóxicos. Khaw et al., "Five-minute Treatments with Fluorouracil, Floxuridine, and Mitomycin Have Long-term Effects on Human Tenon's Capsule Fibroglasts", Arch. Ophthalmol., 110:1150-54 (1992).

Efectos similares se han indicado con mitomicina o mitomicina C ("MMC"). Debido a que es mucho más potente que 5-Fu, MMC se puede también administrar en una aplicación intraoperatoria única, típicamente con un tiempo de contacto de aproximadamente uno a cinco minutos, seguido de irrigación copiosa. MMC es un agente antiproliferante de alquilación aislado del filtrado de la fermentación de una especie particular de Streptomyces. Es un antibiótico anti-fibrótico, antineoplásico que impide la cicatrización de las ampollas de filtración inhibiendo la proliferación de fibroblastos. Es efectivo normalmente para reducir la fibrosis subconjuntiva postoperatoria y, de este modo, tiende a prolongar el tiempo de supervivencia de las ampollas de filtración y a reducir la IOP.

Sin embargo, MMC es también citocida a altas concentraciones y produce hipotonía ocular indeseable (IOP menor de 5 ó 6 mm Hg) como mucho en 1/3 de los pacientes tratados con éste. Otros efectos secundarios indeseables incluyen las pérdidas en la herida conjuntiva, desprendimientos de coroides y maculopatía hipotónica, con una probabilidad de pérdidas de la ampolla de principio a fin de alrededor del 25%. Véase Khaw et al., "Five-minute Treatments with Fluorouracil, Floxuridine, and Mitomycin Have Long-term Effects on Human Tenon's Capsule Fibroglasts", Arch. Ophthalmol., 110:1150-54 (1992); Zacharia et al., "Ocular Hypotony after Trabeculectomy with Mitomycin C", An. J. of Ophthalmology, 116:314-26 (1993); Kupin et al., "Adjunctive Mitomycin C in Primary Trabeculectomy in Phakic Eyes", Am. J. of Ophthalmology 119:30-39 (1995); Katz et al., "Mitomycin C versus 5-Fluorouracil in High-risk Glaucoma Filtering Surgery", Ophthalmology, 102:9, 1263-69 (1995); Shin et al., "Adjunctive Subconjunctival Mitomycin C in Glaucoma Triple Procedure", Ophthalmology, 102:10,1550-58 (1995); Nouri-Mahdavi et al., "Outcomes of Trabeculectomy for Primary Open-angle Glaucoma", Ophthalmology-102:12, 1760-69 (1995); y Mora et al., "Trabeculectomy with Intraoperative Sponge 5-Fluorouracil", Ophthalmology, 103:963-70 (1996). Un grupo de investigadores incluso describieron un aumento de la frecuencia de escleritis, que implica dolor grave y enrojecimiento de la esclerótica, después del tratamiento tópico con MMC durante la trabeculectomía. Fourman, "Scleritis after Glaucoma Filtering Surgery with Mitomycin C", Ophthalmology, 102:10, 1569-71 (1995). Véase también Liang et al., "Comparison of Mitomycin C and 5-Flurorouracil on Filtration Surgery Success in Rabbit Eyes", J. Glaucoma 1:87-93 (1992).

Otros científicos han descrito la utilización de la esclerotomía con láser junto con 5-Fu o MMC. Aunque la utilización de 5-Fu administrado después del tratamiento de láser durante un periodo de dos semanas fue descrita como exitosa por Berlin et al., "The Role of Laser Sclerostomy in Glaucoma Surgery", Current Opinion in Ophthalmology, 6:11,102-114 (1995), se sugirió que la utilización de MMC administrada por numerosos canales diferentes (inyección subconjuntiva, espuma de gel subconjutiva, gotas tópicas o mediante esponjas absorbentes), junto con tratamiento con láser, podría ser incluso más eficaz. Sin embargo, se indicaron también las complicaciones habituales, es decir, toxicidad en la córnea, pérdida en la herida, hipotonía crónica, desprendimiento de coroides y maculopatía hipotónica.

Se han utilizado beta-aminopropionitrito ("BAPN") y D-penicilamina para inhibir la reticulación de las fibras de colágeno, que pueden ayudar a mantener el colágeno en un estado inmaduro después de la cirugía de filtración, y, por consiguiente, limitar la cicatrización de la ampolla. Un informe inicial que utiliza la pomada de BAPN tópica después de la operación observó que mantiene la IOP por debajo de 22 mm Hg en el 74% de los pacientes. Sin embargo, los estudios en animales utilizando tanto BAPN como D-penicilamina presentaron solamente potencia limitada. Stewart, "Filtering surgery-Techniques and Operative Complications", Clinical Practice of Glaucoma, capítulo 10, 333-61 (1990).

Para una exposición de bleomicina, véase Khaw et al., "Effects of Inoperative 5-Fluorouracil or Mitomycin C on Glaucoma Filtration Surgery in the Rabbit", Ophthalmology, 100:367-372 (1993). Para una exposición de polímeros impregnados con el arabinocida citosina, véase Lee et al., "Effects of Cytosine Arabinoside-Impregnated Bioerodible Polymers on Glaucoma Filtration Surgery in Rabbits", J. Glaucoma, 2:96-100 (1993).

Terapia fotodinámica

La terapia fotodinámica ("PDT") es conocida como un tratamiento aprobado del cáncer que se puede utilizar para muchos fines, tales como el tratamiento de tumores sólidos (p. ej. patente U.S. nº 4.932.934 y nº 5.283.255); la alteración de las dianas sanguíneas tales como las células leucémicas, las células inmunorreactivas, solicitud en trámite con la presente nº de serie 07/889.707; nº 08/309.509, nº 08/374.158 y nº 08/174.211) y microorganismos no deseados (patente U.S. nº 5.360.734); la prevención de resterosis (patente U.S. nº 5.422.362); el diagnóstico y tratamiento de determinados trastornos oculares neovasculares (solicitud en trámite con la presente nº de serie 08/209.473, nº 08/390.591 y nº 08/613.420); la eliminación de la placa aterosclerótica (solicitud en trámite con la presente nº de serie 08/663.890); y la prevención del rechazo del trasplante (solicitud en trámite con la presente nºde serie 08/371.707).

PDT implica la aplicación local o generalizada de un agente fotosensible absorbente de luz, normalmente un derivado de porfirina, que se acumula selectivamente en los tejidos diana. En el momento de la irradiación con luz visible de una longitud de onda de activación, se producen especies de oxígeno reactivo en las células que contienen el fotosensibilizante, que favorece la muerte celular. Por ejemplo, en el tratamiento de tumores, el proceso de fotosensibilización se cree que da lugar al oxígeno con singlete, derivado activado del oxígeno molecular, que puede reaccionar de forma oxidante con numerosos puntos específicos en las células y tejidos. Como consecuencia, las células tumorales experimentan daños irreversibles en niveles subcelulares, especialmente en la membrana celular y los mitocondrias. La destrucción del tumor in vivo es el resultado de una interacción compleja de múltiples factores que afectan al armazón del tejido conectivo que soporta físicamente el estroma de un tumor y el tejido vascular que alimenta el tumor. Zhou, "Mechanisms of Tumor Necrosis Induced by Photodynamic Therapy", J. of Photochem. and Photobiol., B:Biology, 3,299-318 (1989).

Es evidente que los fotosensibilizantes se absorben preferencialemente y se acumulan en el tejido tumoral y que PDT produce alguna necrosis de células tumorales de estroma de forma selectiva y directa. Sin embargo, la lesión vascular y la posterior anoxia de las células tumorales están también implicadas en el proceso de necrotización del tumor inducido por PDT. En particular en este último caso, la necrosis del tumor inducida por PDT se ha considerado el resultado de una reacción inflamatoria aguda con cambios fisicoquímicos en la pared vascular. La reducción rápida en el aporte de sangre, así como el comienzo del edema inflamatorio en el tumor, conduce a la hipoxia o incluso anoxia de las células neoplásicas fotolesionadas, que eventualmente experimentan necrosis. El proceso de daño general se multiplica por la liberación de sustancias vasoactivas o de destrucción del tejido tales como histamina, proteasas y fosfatasas ácidas procedentes de macrofitos y neutrófilos fotodañados en el estroma tumoral, que están también asociadas a procesos inflamatorios. Zhou, "Mechanisms of Tumor Necrosis Induced by Photodynamic Therapy", J. of Photochem. and Photobiol., B:Biology, 3,299-318 (1989).

Se ha reconocido que la fase inflamatoria aguda normalmente inducida por PDT en los protocolos aprobados del tratamiento de cáncer es una espada de doble filo. El estudio de los modelos tumorales experimentales ha demostrado que, después de administrar PDT, un exudado rico en proteínas y lípidos neutros se infiltra en el espacio extracelular y se acumula frente a una "pared" de células vitales perinecróticas ("células hipóxicas"), que se pegaban contra los "espectros" de las células necróticas. Desde una perspectiva de tratamiento positivo de cáncer, el exudado inflamatorio puede ayudar a administrar fotosensibilizantes unidos a la proteína en las áreas internas del tumor que si no sería difícil de alcanzar. Por otra parte, este flujo de exudado inflamatorio puede además aportar oxígeno y nutrientes y de este modo ayudar a nutrir las células comprometidas en los procesos de curación de la herida. Por lo tanto, la aparición de un estado inflamatorio asociado a PDT ha sido reconocido un hecho vital que con frecuencia complica el tratamiento de tumores cancerosos. Freitas, "Inflammation and Photodynamic Therapy", J. Photochem. and Photobiol., B:Biology, 8:340-41 (1991).

Se ha realizado algún trabajo con PDT para conseguir un efecto de antifibrosis en conexión con la cirugía de filtración del glaucoma utilizando etil etiopurpurina de estaño ("SnET2") como agente fotosensible. Específicamente los conejos que recibieron inyecciones subconjuntivas de SnET2 experimentaron cirugía de filtración seguida de irradiación de luz postoperatoria. Hill et al., "Photodynamic Therapy with Tin Ethyl Ethiopurpurin as an Alternative Anti-fibrotic Treatment Following Glaucoma Filtering Surgery", Photochem. Photobiol., 61 supl., 68 S, TPM-E9 (1995); y Hill et al., "Photodynamic Therapy (PDT) for Anti-fibrosis in a Rabbit Model of Filtration Surgery", Investigative Ophthalmology and Visual Science, 36:4, S 877 (1995). Sin embargo en este trabajo preliminar, los autores no describen ningún dato de control y, por lo tanto, es difícil determinar cuánto prolonga actualmente el tratamiento de Hill et al. la supervivencia de la ampolla de filtración sobre las ampollas no tratadas.

Además, Hill et al. expone que transcurrieron más de tres horas después de la inyección del agente fotosensible antes que tuviera lugar la cirugía y la etapa de irradiación, lo que habría permitido suficiente tiempo para que el fotosensibilizante sea absorbido por los tejidos asociados a la lesión, pero también habría permitido al agente fotosensibilizante extenderse en otras áreas no diana del ojo. Debido a que los autores describen que se produjeron áreas grandes, transitorias de conjuntiva avascular, no estando limitada la zona avascular a la ampolla de filtración hasta 4 semanas completas después de la cirugía, es evidente que grandes áreas indeseables del ojo están afectadas por el tratamiento. En vista del bien conocido efecto necrótico potencialmente destructivo de PDT en otras aplicaciones, es necesaria la reducción o prevención de la inflamación de tal modo que el grado y alcance de la actividad farmacológica se puedan controlar de forma fiable.

Exposición de la invención

Sorprendentemente, se ha descubierto que, con la selección apropiada de un agente fotosensibilizante que es absorbido rápidamente por los tejidos lesionados, pero no tóxico en ausencia de luz, PDT puede tener un efecto antiinflamatorio predecible y beneficioso que es útil incluso para tejidos delicados tales como el área del ojo. Esto es un descubrimiento particularmente sorprendente en vista de las enseñanzas en el pasado que PDT ha sido responsable de producir actualmente respuestas inflamatorias, teniendo más bien la capacidad para reducirlas o impedirlas.

Específicamente, se ha descubierto ahora que los efectos del aumento de la inflamación del tejido lesionado se pueden reducir o impedir a baja dosis de PDT.

Específicamente, la invención se refiere a la utilización de un agente fotosensibilizante capaz de penetrar dentro del tejido, para la preparación de un medicamento para reducir o impedir dicha inflamación, en un procedimiento que comprende las etapas de:

a.

Poner en contacto el tejido lesionado o el tejido prelesionado, con el agente fotosensibilizante, de modo que penetre en dicho tejido; y

b.

Exponer el tejido puesto en contacto a luz que tiene una longitud de onda absorbida por el agente fotosensibilizante durante un tiempo suficiente para reducir o prevenir la inflamación en el tejido expuesto, pero no tan prolongado que produzca necrosis o eritema del tejido lesionado expuesto.

El procedimiento de la invención es particularmente ventajoso cuando el tejido lesionado es muy sensible a la lesión o inflamación posterior, tal como en el tejido ocular, porque los fotosensibilizantes apropiados no son, es sí mismos, antiproliferantes en efecto o citotóxicos para los tejidos delicados en ausencia de irradiación de activación. Además, debido a que los agentes más fotosensibilizantes no son tóxicos al tejido humano a menos que sean activados por la luz y debido a que el agente fotosensibilizante de la invención es capaz de penetrar en el tejido lesionado de forma relativamente rápida, el grado de actividad farmacológica se controla fácilmente tanto por la extensión de la irradiación como por la extensión del contacto físico con el fotosensibilizante o su concentración, p. ej. en el torrente sanguíneo, en el momento de la irradiación. Por consiguiente, el efecto terapéutico de la invención se regula más fácilmente que las conocidas técnicas antifibróticas farmacológicas.

En otra realización, la invención se refiere a la utilización de una composición que comprende:

a.

desde 1 \mug/mL hasta 2 mg/mL de un agente fotosensibilizante capaz de penetrar en el tejido, y;

b.

un excipiente farmacéuticamente aceptable, para la preparación de un medicamento para reducir o prevenir los efectos de la inflamación que aparecen en el tejido ocular lesionado.

Breve descripción de los dibujos

La Figura 1 es un gráfico que presenta el porcentaje de supervivencia de la ampolla de filtración de conejos en cada uno de los cuatro grupos.

La Figura 2 es un gráfico que presenta las diferencias entre los grupos con respecto a la extensión de la ampolla en cada día de examen hasta 12 días después de la operación.

La Figura 3 es un gráfico que presenta las diferencias entre los grupos con respecto a la altura de la ampolla en cada día de examen hasta 12 días después de la operación.

La Figura 4 es un gráfico que presenta las diferencias en el eritema conjuntivo sobre la ampolla de filtración en cada día de examen hasta 12 días después de la operación.

La Figura 5 presenta las fórmulas de las porfirinas verdes típicas útiles en los métodos, composiciones y artículos de la invención.

La Figura 6 presenta la estructura de cuatro compuestos de tipo PDT particularmente útiles como agentes fotosensibilizantes de la invención.

Descripción detallada de la invención

El término "inflamación" en esta solicitud se refiere a la serie de cambios que suceden en un cuerpo vivo después de una lesión. La lesión puede ser producida por agentes físicos, tales como calor o frío excesivos, presión, irradiación ultravioleta o ionizante, cortes o abrasiones; por una amplia variedad de sustancias químicas inorgánicas y orgánicas; o por agentes biológicos tales como virus, bacterias y otros parásitos.

Agente fotosensibilizante

Un "agente fotosensibilizante" es un compuesto químico que, cuando se expone a luz de una longitud de onda capaz de ser absorbida por el fotosensibilizante, absorbe energía de la luz para producir el efecto fisiológico deseado, p. ej. un efecto antiinflamatorio comprobado. El agente fotosensibilizante para su utilización según la presente invención tiene preferentemente un espectro de absorción que está comprendido dentro del intervalo de longitudes de onda entre 350 mm y 1200 mm, cuyo espectro de absorción puede estar dimensionado con la penetración deseada de una manera conocida por sí misma, preferentemente entre aproximadamente 400 y 900 mm y, más preferentemente, entre 600 y 800 mm. De forma típica, el agente de fotosensibilización absorbe luz de al menos alguna de las longitudes de onda en la parte visible del espectro electromagnético.

Otra propiedad de los fotosensibilizantees en general que es de particular importancia en la práctica de la presente invención es una ausencia relativa de toxicidad para las células en ausencia del efecto fotoquímico y la eliminación fácil de los tejidos en ausencia de una interacción específica con la diana entre determinadas células y el fotosensibilizante.

Para su utilización según la invención el fotosensibilizante puede ser cualquier agente fotosensibilizante adecuado para la terapia fotodinámica ("PDT") que sea capaz de penetrar en el tejido lesionado que se ha de tratar y producir el grado deseado de biodistribución en menos de una hora. Si este criterio lo reúne un candidato fotosensibilizante potencial se puede determinar fácil y rápidamente mediante la prueba sencilla siguiente:

1.

Preparar células cultivadas vivas (preferentemente a partir de un cultivo desarrollado en suspensión; cualquier línea celular es adecuada).

2.

Añadir el fotosensibilizante que se está probando a las células en concentraciones de 1 a 3 \mug/mL, en presencia de suero al 10%.

3.

Eliminar el fármaco fotosensibilizante en exceso por centrifugación después de varios periodos de incubación (p. ej., 5, 15, 30 y 60 minutos).

4.

Lavar las células con solución salina tamponada con fosfato y lisarlas por congelación-descongelación.

5.

Determinar la concentración de un fotosensibilizante probado en los lisados celulares por fluorescencia frente a patrones apropiados.

Un grupo de fotosensibilizantees particularmente potente incluye las porfirinas verdes, que se describen con detalle en Levy et al., patente U.S. nº 5.171.749 concedida el 15 de diciembre de 1992. El término "porfirinas verdes" se refiere a los derivados de porfirina obtenidos haciendo reaccionar un núcleo de porfirina con un alquino en una reacción de tipo Diels-Alder para obtener una monohidrobenzoporfirina. De forma típica, las porfirinas verdes se seleccionan de un grupo de derivados de porfirinas obtenidos mediante reacciones de Diels-Alder de derivados de acetileno con protoporfirina en condiciones que favorezcan la reacción en solamente uno de los dos conjugados disponibles, estructuras de dieno no aromáticas presentes en los sistemas con anillo de protoporfirina IX (anillos A y B).

En la Figura 6 se muestran varias estructuras de porfirinas verdes típicas. La reacción de Diels-Alder produce inicialmente la formación de un ciclohexadieno denominado en esta memoria "hidrobenzo" fusionado al anillo pirrólico A o B, tal como se muestra en las fórmulas 1 y 2 de la Figura 6. La estructuración del sistema Y en el anillo de hexadieno produce la formación de los compuestos de fórmulas 3 y 4 y la reducción proporcionaría compuestos de fórmulas 5 y 6. Por razones prácticas, sin embargo, los compuestos de fórmulas 5 y 6 se preparan preferentemente realizando la reacción de Diels-Alder expuesta anteriormente estando sustituida la correspondiente olefina por el compuesto de acetileno habitual, produciendo de este modo una versión más reducida de la estructura con anillo de porfirina resultante. Estos compuestos se presentan en las fórmulas 1 a 6 ocupando el hidrógeno los nitrógenos del anillo interno. Sin embargo, debe entenderse que se pueden utilizar también las formas metaladas, en las que un catión reemplaza uno o varios de estos hidrógenos. La preparación de los compuestos de porfirina verde útiles en esta invención, se describe con detalle en la patente U.S. nº 5.095.030.

Por comodidad, se utiliza generalmente una abreviatura del término derivado de hidromonobenzoporfirina "BPD" para referirse a los compuestos de las fórmulas 3 y 4 de la Figura 5. Los compuestos de las fórmulas 3 y 4 y sus mezclas se prefieren particularmente.

Como se muestra en la Figura 5, R_{1}, R_{2}, R_{3} y R_{4} son sustituyentes que no interfieren, que no afectan de forma apreciable la actividad del compuesto en la invención. Más específicamente, el término "sustituyentes que no interfieren" se utiliza para referirse a los sustituyentes que no destruyen la capacidad de la porfirina verde para actuar como fotosensibilizantes capaces de ser absorbidos por el tejido lesionado para ofrecer un efecto farmacológico en menos de una hora. Para los compuestos de las figuras 5 y 6, generalmente, R_{1} y R_{2} son cada uno, independientemente, sustituyentes que ceden electrones o cualquier otro sustituyente activador que sea donante de electrones suficientemente para aumentar la velocidad de la reacción de Diels-Alder que puede proceder tanto con anillos A como B pero, preferentemente, tiene lugar sólo en un anillo. Ejemplos de grupos R_{1} y R_{2} adecuados incluyen carbalcoxi (2-6C), alquil (1-6C) sulfonilo o aril (6-10C) sulfonilo, arilo (6-10C), ciano y -CONR^{5}CO-, en el que R^{5} es arilo (6-10C) o alquilo (1-6). Uno de R^{1} y R^{2} puede ser también hidrógeno, con tal que el otro sea un sustituyente donador de electrones de suficiente intensidad para facilitar la reacción de Diels-Alder. Más frecuentemente, R^{1} y R^{2} son grupos carbalcoxi, preferentemente carboxiésteres de metilo o etilo. Los compuestos preferidos son aquellos en los que R^{1} y R^{2} son iguales y son carbalcoxi, particularmente carboetoxi.

Tal como se utiliza en esta memoria, el término "carboxi" es, como se define convencionalmente, -COOH, mientras que "carbalcoxi" representa -COOR, en el que R es alguilo. "Carbalcoxialquilo" se refiere al sustituyente -R'-COOH, en el que R' es alquileno. "Carbalcoxialquilo" se refiere a -R'-COOR, en el que R' es alquileno y R es alquilo o alcanol. "Alquilo" representa generalmente un grupo hidrocarbilo con cadena lineal o ramificada saturado de 1 a 6 átomos de carbono, tales como metilo, n-hexilo, 2-metilpentilo, t-butilo, n-propilo y así sucesivamente. "Alquileno" es igual que "alquilo" excepto que el grupo es bivalente en lugar de polivalente. "Arilo" representa un grupo cíclico aromático, tal como fenilo, lactilo, piridilo y similares. El grupo arilo en los compuestos para utilización según la invención está opcionalmente sustituido con 1 a 3 sustituyentes, que se pueden seleccionar independientemente del grupo que consta de halo, tales como flúor, cloro, bromo o yodo; alquilo inferior (1-4C); y alcoxi inferior (1-4C). Los grupos "arilo" o "alquilsulfamilo" tienen la forma -SO_{3}R, en la que R es alquilo o arilo, tal como se definió anteriormente.

R^{3} es independientemente un grupo \omega-carboxialquilo (2-6C) o una de sus sales, amidas, ésteres o acilhidrazonas, o es alquilo (1-6C). Preferentemente, R^{3}es 2-carboxietilo o su éster de alquilo o de alcanol, y R^{4} es vinilo. La mayoría de estas realizaciones, sin embargo, se prefieren debido a la disponibilidad de las porfirinas naturales, estando más bien bajo mandato de consideraciones de eficacia biológica. Como se muestra en la Figura 5, los aductos formados por la reacción de R^{1}-C\equivC-R^{2} con un sistema de anillo de protoporfirina-IX (en el que R^{3} es una forma protegida de 2-carboxietilo, tal como 2-carbometoxietilo o 2-carboetoxietilo y R^{4} es -CH=CH_{2}) son compuestos de las fórmulas 1 y 2. Los compuestos de fórmula 1 proceden de la adición del anillo A y los compuestos fórmula 2 proceden de la adición del anillo B.

Los materiales de partida convenientes para los compuestos de porfirina verde para su utilización según la invención incluyen las porfirinas naturales, en las que R^{3} es -CH_{2}CH_{2}COOH, -CH_{2}CHRCONR_{2} o -CH_{2}CHRCOOR, en las que R es alquilo (1-6C) o alcanol (1-6C). Sin embargo, la naturaleza exacta de R^{3}, a menos que contenga un enlace x conjugado con el anillo con enlace \pi, normalmente no es importante para la evolución de la reacción de Diels-Alder o para la eficacia del producto resultante. R^{3} puede ser de este modo uno cualquiera de una variedad amplia de grupos tales como, por ejemplo, alquilo inferior (1,4C); y \omega-carboxialquilo (2-6C) y sus ésteres y amidas. El sustituyente R^{3} también puede estar sustituido con un grupo hidroxi; halógeno, tales como flúor, cloro, bromo o yodo; o con otros sustituyentes no reactivos.

Cuando R^{3} es -CH_{2}CHR-COOR, se ha observado que presenta ventajas hidrolizar, o hidrolizar parcialmente, el grupo carboxi esterificado. Típicamente, la hidrólisis en la posición R^{3} tiene lugar de forma conveniente a una velocidad mucho más rápida que la de los grupos éster de R^{1} o R^{2}. Además, las características de solubilidad y biodistribución de los compuestos resultantes son más deseables que las de la forma no hidrolizada. La hidrólisis produce los productos de diácido o monoácido (o sus sales).

En los compuestos de fórmulas 1 y 2, R^{4} normalmente es -CH=CH_{2}, al menos inicialmente, pero este grupo vinilo deriva fácilmente en otras formas de realización de R^{4} por la adición, u oxidación del anillo de vinilo sustituyente del anillo B o A en la fórmula 1 ó 2 respectivamente. De este modo, R^{4} puede ser cualquiera de una amplia variedad de sustituyentes que son consecuentes con los formados mediante una fácil reacción de adición. Por ejemplo, un reactivo de adición ejemplar puede ser de la forma HX, en la que H se añade al carbono adyacente al anillo para proporcionar una posición R^{4} que tiene la fórmula:

---

\delm{C}{\delm{\para}{X}}

HCH_{3}

Por lo tanto, en una realización, uno de los sustituyentes añadido es un hidrógeno y el otro se selecciona del grupo que consta de hidrógeno, halo, tales como flúor, cloro, bromo o yodo; hidroxi; alcoxi inferior; amino; amida; sulfhidrilo; o un organosulfuro. Por ejemplo, la adición de agua de Markovnikov proporciona una estructura sustituyente análoga al sistema de anillo de hematoporfirina en el anillo adecuado. El grupo vinilo se puede también oxidar para obtener, como sustituyente en la posición R^{4}, -CH_{2}OH, -CHO o -COOH o sus sales o ésteres. La adición o productos de adición se pueden también sustituir si los sustituyentes añadidos son grupos funcionales salientes. Por ejemplo, cuando Br es un sustituyente, puede sustituirse por dichos grupos tales como -OH, -OR, en la que OR es alquilo (1-6C) tal como se describió anteriormente, halo, -NH_{2}, -NHR, -NR_{2} y similares.

Por lo tanto, en general, R^{4} representa cualquiera de los sustituyentes en los que el grupo vinilo -CH=CH_{2} se transforma fácilmente por escisión o adición, y los sustituyentes adicionales formados por la reacción de grupos adecuados salientes con grupos adicionales. Preferentemente, sin embargo, R^{4} es vinilo (-CH=CH_{2}); -CHOR^{4'}, en el que R^{4'} es H o alquilo (1-6C), opcionalmente sustituido con un sustituyente hidrófilo tales como -CH_{2}OH; -CHO; -COOR^{4'}, tales como COOH o -COOCH_{3}; -CH(OR^{4'})CH_{3}, tales como -CH(OH)CH_{3} o -CH(OCH_{3})CH_{3}; -CH(OR^{4'})CH_{2}OR^{4'}; -CH(OH)CH_{2}OH; -CH(SR^{4'})CH_{3} tal como -CH(SCH_{3})CH_{3} y su disulfuro; -CH(NR^{4'})CH_{3}; -CH(CN)CH_{3}; -CH(bromuro de piridinio)CH_{3}; -CH(COOR^{4'})CH_{3}; -CH(COOCR^{4'})CH_{3}; -CH_{2}(halo)CH_{3}, tales como -CHBrCH_{3}; o
-CH(halo)CH_{2}(halo). Como alternativa, R^{4} puede ser un grupo orgánico de menos de 12 átomos de carbono procedente de la derivación directa o indirecta de vinilo. O R^{4} puede proporcionar sistemas adicionales de anillo de porfirina o relacionados con porfirina, tal como un grupo que contiene de 1 a 3 núcleos de tipo tetrapirrol de fórmula -L-P, como se define más adelante. Estos compuestos en los que R^{4} es -CH=CH_{2}, -CH(OH)CH_{3}, -CH(halo)CH_{3} o se prefiere un grupo que contiene 1 a 3 núcleos de tipo tetrapirrol de fórmula -L-P, definido más adelante.

Tal como se utiliza en esta memoria, el término "núcleo de tipo tetrapirrol" representa un sistema de cuatro anillos de estructura:

8

o una de sus sales, ésteres, amidas o acilhidrazonas, que está muy conjugada. Incluye el sistema de porfirina, que es en efecto un sistema completamente conjugado. El sistema clorino, que es en efecto una forma dihidro de la porfirina; y el sistema clorino reducido, que es una forma tetrahidro del sistema de porfirina conjugado. Cuando se especifica "porfirina", está indicado el sistema completamente conjugado. Las porfirinas verdes son efectivamente una forma dihidro del sistema de porfirina.

En una realización, el sustituyente R^{4} incluye al menos un núcleo adicional de tipo tetrapirrol. Los compuestos resultantes para su utilización según la invención son dímeros u oligómeros en los que al menos uno de los sistemas con anillo de tipo tetrapirrol es una porfirina verde. El enlace entre el grupo de porfirina verde en la posición R^{4}a un sistema con anillo de tipo tetrapirrol adicional puede ser mediante un enlace éter, amina o vinilo. Los sistemas con anillo de porfirina tienen dos posiciones sustituyentes disponibles (en ambos anillos A y B) correspondientes a R^{4} que se pueden derivar además, como se explica a continuación.

Cuando R^{4} es "-L-P", -L- se selecciona del grupo que consta de:

(a) ---

\delm{C}{\delm{\para}{CH _{3} }}

H---O---

\delm{C}{\delm{\para}{CH _{3} }}

H---,

(b) ---

\delm{C}{\delm{\para}{CH _{3} }}

HNH

\delm{C}{\delm{\para}{CH _{3} }}

H---,

(c) ---CH=CH---

\delm{C}{\delm{\para}{CH _{3} }}

H---,

(d) ---

\delm{C}{\delm{\para}{CH _{3} }}

H---CH=CH---,

(e) =CH---

\delm{C}{\delm{\dpara}{OCH _{3} }}

---CH---, y

(f) ---CH---

\delm{C}{\delm{\dpara}{\hskip-0.62cmCH _{3} O}}

---CH=

y P es una estructura de porfirina o una segunda porfirina verde de las fórmulas 1 a 6 mostradas en la Figura 5, excepto que cualquier segundo grupo R^{4} está reemplazado por L anteriormente.

Debe entenderse que, cuando -L- es de fórmula (e) o (f) mostrados anteriormente, el sistema con anillo al que se une el doble enlace tendrá un sistema de resonancia correspondiente a

9

en el anillo al que se une el doble enlace, como se muestra).

Las hidro-monobenzoporfirinas que proceden directamente de la reacción de Diels-Alder descrita anteriormente se pueden isomerizar también con los compuestos BPD de fórmula 3 y 4 de la Figura 5. Las representaciones de los compuestos 3 y 4 en la Figura 5 no muestran la posición relativa del grupo metilo exocíclico (anillo A de fórmula 3 y anillo B de fórmula 4) con respecto al sustituyente R^{2}. Uno de los dos isómeros está disponible. Los compuestos de fórmulas 3 y 4 son particularmente preferidos en los métodos y composiciones de la invención.

Además, los productos de Diels-Alder se podrían reducir de forma selectiva mediante tratamiento con hidrógeno en presencia de un catalizador, (tal como paladio sobre carbón vegetal) para dar los análogos con anillo saturado, mostrados como fórmulas 5 y 6 en la Figura 5, que corresponde a los respectivos productos de Diels-Alder de los anillos A y B. Sin embargo, tal como se explicó anteriormente, la práctica más común es realizar la reacción de Diels-Alder partiendo de un material de partida de olefinas, en lugar del material de partida habitual de acetileno, para conseguir una forma más reducida del sistema con anillo de porfirina resultante. La descripción indicada anteriormente con respecto a los compuestos de fórmulas 1 y 2 se refiere a la derivación por transformación del sustituyente de vinilo (R^{4}) restante y con respecto a la variabilidad de R^{3} aplica también a los compuestos de fórmula 3, 4, 5 y 6.

Las realizaciones preferidas de la porfirinas verdes para su utilización según la invención son aquellas en las que el producto de Diels-Alder está reestructurado y parcialmente hidrolizado. Aún más preferidos son los compuestos de fórmulas 3 y 4 (BPD) en los que los grupos carbalcoxi en las posiciones R^{3} también se han hidrolizado o parcialmente hidrolizado. Los compuestos para su utilización según la invención que contienen -COOH se pueden preparar como ácido libre o en forma de sales con bases orgánicas o inorgánicas.

La Figura 6 presenta cuatro compuestos particularmente preferidos para su utilización según la invención abarcados por las fórmulas 3 y 4, que se denominan en conjunto derivados de benzoporfirina, es decir, BPD-DA, BPD-DB, BPD-MA y BPD-MB. Éstas son formas hidrolizadas o parcialmente hidrolizadas de los productos reestructurados de fórmula 3 y 4, en los que se han hidrolizado uno o ambos grupos carboxilo protegidos de R^{3}. Los grupos éster en R^{1} y R^{2} se hidrolizan de forma relativamente lenta, de modo que la transformación en las formas mostradas en la Figura 6 se efectúa fácilmente. La porfirina verde más preferida de estos compuestos es BPD-MA.

En la Figura 6, R^{3} es -CH_{2}CH_{2}COOR^{3'} en el que R^{3'} varía según el compuesto individual. Específicamente, en BPD-DA, R^{1} y R^{2} son carbalcoxi, R^{3'} es hidrógeno y la derivación está en el anillo A. BPD-DB es el compuesto correspondiente con la derivación en el anillo B. BPD-MA representa la forma parcialmente hidrolizada de BPD-DA, y BPD-MB representa la forma parcialmente hidrolizada de BPD-DB. De este modo, en estos últimos compuestos, R^{1} y R^{2} son carbalcoxi; un R^{3'} es hidrógeno y el otro R^{3'} es alquilo (1-6C).

Los compuestos de fórmula BPD-MA y BPD-MB pueden ser homogéneos, en los que solamente el carbalcoxietilo del anillo C o solamente el carbalcoxietilo del anillo D estarían hidrolizados, o pueden ser mezclas de los hidrolizados sustituyentes de los anillos C y D. Además, las mezclas de dos o más de BPD-MA, -MD, -DA y -DB cualquiera se pueden utilizar en la invención.

Obsérvese que muchos de los compuestos de la Figura 5 contienen al menos un centro quiral y, por lo tanto, pueden existir como isómeros opcionales. El método de la invención puede utilizar compuestos que tienen ambas configuraciones de carbonos quirales, si los compuestos se suministran como aislados de un esteroisómero único o son mezcla de enantiómeros y/o diastereómeros. La separación de las mezclas de diastereoisómeros se puede efectuar por cualquier medio convencional. Las mezcla de enantiómeros pueden estar separadas por cualquiera de las técnicas habituales, tales como haciéndolas reaccionar con preparaciones ópticamente activas y separando los diastereoisómeros resultantes.

Debería observarse además que los productos de la reacción pueden ser mezclas no separadas de adiciones a los anillos A y B, p. ej., mezclas de fórmula 1 y 2 ó 3 y 4 ó 5 y 6. Las formas separadas, p. ej., la fórmula 3 sola o la 4 sola, o las mezclas en cualquier proporción, se pueden utilizar en la invención.

Además todavía, se pueden utilizar las formas diméricas de porfirina verde y las formas multiméricas o diméricas de combinaciones de porfirina verde/porfirina para absorber más luz en una base molar. Los dímeros y los compuestos oligoméricos para su utilización según la invención se pueden preparar utilizando reacciones análogas a las de la dimerización y oligomerización de las porfirinas por sí mismas. Las porfirinas verdes o los enlaces porfirina verde/porfirina se puede preparar directamente, o se pueden acoplar las porfirinas, seguido de una reacción de Diels-Alder de uno de los dos o ambos porfirinas terminales para transformarlas en las correspondientes porfirinas verdes.

Composición farmacéutica

Típicamente, el agente fotosensibilizante para su utilización según la invención se formula en una composición farmacéutica mezclando el agente fotosensibilizante típicamente a temperatura ambiente, pH apropiado y el grado de pureza deseado, con uno o más excipientes fisiológicamente aceptables, es decir, excipientes que no sean tóxicos para los receptores a las dosis y concentraciones empleadas. Las composiciones adecuadas incluyen las apropiadas para administración generalizada o tópica, incluyendo las preparaciones para inyección, administración a través de las mucosas o administración transdérmica.

La composición para su utilización según la invención comprende preferentemente aproximadamente 1 \mug/mL a aproximadamente 2 mg/mL de agente fotosensibilizante, dependiendo principalmente del modo de administración. Para administración tópica, se utilizan preferentemente desde aproximadamente 0,1 a aproximadamente 2,0 mg/mL. Para administración generalizada, p. ej. inyección intravenosa, la concentración de agente fotosensibilizante varía preferentemente desde aproximadamente 0,3 a aproximadamente 0,5 mg/mL.

Preferentemente, el agente fotosensibilizante se administra en una composición farmacéutica líquida, gel o sólida gelatinosa, ya sea solo con agua o junto con otros excipientes farmacéuticamente aceptables, tales como los que se describen en Remington's Pharmaceutical Sciences, Mack Publishing Co. Easton Pensilvania (Gennaro, ed. 1990). Cuando es líquida, la composición farmacéutica que contiene el fotosensibilizante puede ser una suspensión o una emulsión. En particular, las formulaciones liposómicas o lipófilas son con frecuencia deseables. El agente fotosensibilizante para su utilización según la invención puede estar incluido dentro de liposomas, unido a su superficie o ambos. Los métodos adecuados para preparar liposomas son bien conocidos en la técnica. La inclusión de compuestos de porfirina verde en dicha preparación se describe, por ejemplo, en Allison et al. , patente U.S. nº 5.214.036 concedida el 25 de mayo de 1993 y Desai et al., solicitud pendiente de trámite con la presente serie nº 08/489.850 presentada el 13 de junio de 1995. Si se utilizan suspensiones o emulsiones, los excipientes adecuados incluyen agua, solución salina, dextrosa, glicerol y similares. Estas composiciones farmacéuticas pueden también contener cantidades menores de sustancias auxiliares no tóxicas, tales como agentes humectantes o emulsionantes, antioxidantes, agentes tamponantes de pH y similares.

El pH de la formulación depende principalmente de la utilización particular y de la concentración del fotosensibilizante, pero preferentemente oscila desde aproximadamente 3 hasta aproximadamente 8. Preferentemente, el fotosensibilizante se mantiene a un pH neutro (p. ej., aproximadamente 6,5 a aproximadamente 7,5) para impedir su adherencia a los recipientes en los que se coloca, tal como sucede a valores de pH que se acercan a niveles fisiológicos y para asegurar la activación del fotosensibilizante. Por lo tanto, la formulación de un fotosensibilizante en una solución de electrolito que contiene un tampón salino equilibrado a pH 6,5, pero que no contiene suero bovino fetal ("FBS"), es una realización adecuada. La razón por la que se omite el FBS es porque contiene componentes antigénicos que podrían agravar una reacción inflamatoria. Si el agente fotosensibilizante se adhiere a los recipientes en los que se está manteniendo la composición farmacéutica que lo contiene, puede añadirse opcionalmente un ingrediente no antigénico apropiado, tal como suero de albúmina humana, en una cantidad que no interfiera con el agente fotosensibilizante que se adhiere al tejido lesionado que se está tratando.

El agente fotosensibilizante se puede combinar con uno o más agentes inmunosupresores para aumentar el efecto antiinflamatorio en el tejido lesionado. El término "agente inmunosupresor", tal como se utiliza en esta memoria se refiere a sustancias que actúan para suprimir o enmascarar las respuestas a los linfocitos T. Éste incluiría sustancias que suprimen la producción de citocina, que disminuyen o suprimen la expresión del auto-antígeno o que enmascaran los antígenos de MHC.

Ejemplos de tales agentes que incluyen pirimidinas 2-amino-6-aril-5 sustituidas; azatioprina o ciclofosfamida; bromocriptina; glutaraldehído; anticuerpos anti-idiotípicos para antígenos de MHC; ciclosporina A; uno o más esteroides, preferentemente corticosteroides y glucocorticosteroides tales como prednisona, metilprednisolona y dexametasona; anticuerpos anti-interferón-gamma; anticuerpos del factor alfa de la necrosis antitumoral; anticuerpos del factor beta de la necrosis antitumoral; anticuerpos de anti-interleucina-2; anticuerpos del receptor de anticitocina, tales como anticuerpos del receptor de anti-IL-2; globulina anti-linfocito heteróloga; anticuerpos de pan-T, preferentemente anticuerpos monoclonales de OKT-3; anticuerpos contra CD4; estreptocinasa; estreptodomasa; o ARN o ADN procedentes del huésped.

El agente inmunosupresor puede complementarse o utilizarse en combinación en la misma dosis que el agente fotosensibilizante o en una dosis reducida, y se puede administrar simultáneamente o por separado, de forma generalizada o localmente. La cantidad eficaz de dichos agentes se somete a un gran discernimiento terapéutico y depende de la cantidad de agente fotosensibilizante presente en la formulación, del tipo de lesión, del tipo de agente inmunosupresor, del punto de administración, del método de administración, del programa de administración, de otros factores expuestos anteriormente y de otros factores conocidos por los especialistas. Sin embargo, la cantidad de agente inmunosupresor apropiado para utilizar en la invención es típicamente inferior a la aconsejable normalmente para el tratamiento de tejidos lesionados similares.

Cuando se utiliza un agente inmunosupresor, se puede administrar por cualquier medio adecuado, incluyendo el tratamiento parenteral y, si se desea, para tratamiento inmunosupresor local, en el interior de la lesión, es decir por vía tópica en los tejidos lesionados. Las infusiones parenterales incluyen la administración intramuscular, intravenosa, intraarterial, intraperitoneal, subcutánea y subconjuntiva.

Si la composición farmacéutica para su utilización según la invención se ha de aplicar por vía tópica, por ejemplo, si se ha de aplicar en el tejido lesionado, puede ser preferible utilizar una solución viscosa, tal como un gel, mejor que una solución no viscosa. El gel se puede preparar, por ejemplo, mezclando una solución del agente fotosensibilizante deseado con un agente gelificante, tal como un polisacárido, preferentemente un polisacárido soluble en agua, p. ej., ácido hialurónico, almidones y derivados de celulosa (tales como metilcelulosa, hidroxietilcelulosa y carboximetilcelulosa). Cuando está presente un polisacárido en una formulación de gel, la cantidad normalmente presente está comprendida en el intervalo de aproximadamente 1 a 90% en peso de gel, más preferentemente aproximadamente 1 a 20%. Ejemplos de otros polisacáridos adecuados con este objeto y una determinación de la solubilidad de los polisacáridos se halla en el documento EP 267.017 publicado el 11 de mayo de 1988.

Ejemplos de tensioactivos adecuados incluyen los tensioactivos poloxámeros, que representan una serie de moléculas que son copolímeros del bloque de óxido de etileno y óxido de propileno, ya sean solos o mezclados con un fosfolípido tal como lecitina de huevo. Otro ejemplo de una emulsión comercialmente disponible en Green Cross es Fluosol-DA al 20%, que contiene perfluorodecalina y perfluorotripropilamina emulsionada con el tensioactivo poloxámero, Pluronic F-68. La emulsión perfluoroquímica y sus efectos en los mamíferos se describen con más detalle en Bollands et al., J. Pharm. Pharmacol., 39:1021-24 (1987).

La composición farmacéutica para su utilización según la invención está preferentemente esterilizada. La esterilización se realiza fácilmente por filtración estéril a través de membranas de 0,2 micras. Una vez formulada y esterilizada, la composición puede no ser estable a la desnaturalización oxidante. Sin embargo, las formulaciones liofilizadas para redisolución, por ejemplo, conteniendo BPD, son adecuadas para el almacenamiento.

Modos de poner en contacto el tejido con el fotosensibilizante

La reducción o producción de la inflamación según la presente invención se efectúa de una manera relativamente directa poniendo en contacto el tejido lesionado (o el tejido que se ha de lesionar o que está lesionado) con el agente fotosensibilizante en condiciones que permiten la formación de una fuerte asociación entre el agente fotosensibilizante y el tejido diana, mientras se minimiza la concentración de fotosensibilizante y, en la medida que sea practicable, localizando el área de contacto del tejido diana lesionado. Preferentemente, la etapa de contacto (a) es al menos de cinco minutos.

Cuando las células que se han de proteger de la inflamación están contenidas dentro un animal vivo, sano, el fotosensibilizante se puede administrar por vía local o por vía generalizada. El agente fotosensibilizante se puede administrar mediante inyección con tal de que el modo particular de inyección permita la eliminación rápida del fotosensibilizante del cuerpo. Por ejemplo, sería adecuada la inyección intravenosa. Como alternativa, el fotosensibilizante se puede aplicar por vía tópica o por vía enteral, p. ej. aplicando o pulverizando sobre la superficie del tejido que se ha de tratar, o mediante parches o implantes, que se pueden separar típicamente a la conclusión de un tiempo de contacto predeterminado del fotosensibilizante.

Cuando los tejidos diana que se han de proteger de la inflamación son tejidos oculares delicados, se prefiere la administración tópica externa debido a la naturaleza localizada de contacto con el ojo que se puede conseguir con la administración tópica, que produce un margen mayor de seguridad. En una realización especialmente preferida, el fotosensibilizante para utilización según la invención se aplica con el artículo de la invención, que comprende el fotosensibilizante y un aplicador absorbente. El aplicador absorbente comprende cualquier material absorbente que sea estéril o sea capaz de esterilizarse, que libere fácilmente los fotosensibilizantes en contacto con los tejidos lesionados y no reaccione químicamente con el agente fotosensibilizante. Preferentemente el material absorbente es también económico y está disponible. Ejemplos de aplicadores absorbentes adecuados incluyen las esponjas empapables en fármaco y tramas flexibles que no se deshilan. Una esponja empapable en fármaco, tal como una célula Weck, es el aplicador absorbente preferido. Cuando se utiliza dicho aplicador, está preferentemente saturado con la composición farmacéutica para la utilización según la invención y se aplica en forma tópica a los tejidos diana durante o poco después de la aparición de la lesión, p. ej., durante un procedimiento quirúrgico.

La etapa de contacto puede tener lugar a una amplia variedad de temperaturas, evitando únicamente aquellas temperaturas que aumenten lo bastante para desnaturalizar o si no afectar de forma perjudicial al tejido lesionado y aquellas temperaturas lo bastante bajas para minimizar la absorción celular del fotosensibilizante. Preferentemente, la etapa de contacto tiene lugar a una temperatura comprendida en el intervalo de 5ºC a 40ºC, preferentemente de 15ºC a 37ºC y, más preferentemente, a temperatura ambiente.

Dosificación

En el procedimiento de la invención, se administra al paciente una cantidad de agente fotosensibilizante o una mezcla de agentes fotosensibilizantes, en una o varias dosis. Los agentes fotosensibilizantes para su utilización según la invención se dosifican de una forma coherente con la buena práctica médica, teniendo en cuenta la naturaleza de la inflamación que se ha de evitar o reducir, la especie y el estado médico del paciente, la presencia de cualquier otro fármaco en el cuerpo del paciente, la pureza y la forma química del fotosensibilizante, el modo de administración, la velocidad y el grado de absorción esperado y otros factores conocidos por los especialistas. Una cantidad terapéuticamente eficaz de fotosensibilizante es una cantidad que es eficaz para reducir de forma significativa, en el momento de la exposición a la luz, la proliferación de fibroblastos, mejorando de este modo la respuesta inflamatoria y los efectos indeseables que pueden estar asociados a la inflamación, tales como el aumento de vascularidad y/o la formación del tejido de la cicatriz.

La dosis de agente fotosensibilizante variará con el tejido diana y, si se administra por vía intravenosa o de forma generalizada, estará limitada por el peso y el nivel óptimo de sangre del animal. Las cantidades generalizadas adecuadas por dosis típicamente son menores de aproximadamente 1,0 mg/kg de peso corporal, preferentemente en el intervalo de aproximadamente 0,25 a 0,75 mg/kg por dosis y, más preferentemente, 0,15 a 0,50 mg/kg por dosis. Típicamente, la dosis de agente fotosensibilizante es menor de 0,50 mg/kg. Una dosis generalizada de BPD como fotosensibilizante excedería de 0,3 mg/kg únicamente en circunstancias no habituales. Estos intervalos de dosis se pretende que sean sugestivos y no deberían ser considerados necesariamente como limitativos, ya que también variarán las reacciones individuales de determinados pacientes.

Dependiendo del agente fotosensibilizante y del modo de administración, se puede establecer un nivel sanguíneo generalizado óptimo equivalente, pero es difícil de hacerlo porque el fotosensibilizante se elimina con preferencia muy rápidamente. Por lo tanto, puede existir una diferencia drástica entre la concentración de fotosensibilizante en el torrente sanguíneo en el momento de la infección y la concentración en el momento del tratamiento con la luz. Por ejemplo, la concentración de BPD en el momento de la inyección intravenosa puede oscilar aproximadamente de 1 a 10 mg/mL, mientras que, en el momento de la exposición a la luz, puede estar comprendido únicamente en el intervalo de 0,5 a 0,05 \mug/mL. Si es por administración tópica, ningún fotosensibilizante es típicamente detectable en la sangre.

Cuando se administra por vía tópica o de forma generalizada, la dosis se describe mejor desde el punto de vista de la concentración de la composición y la duración del tiempo de contacto con el tejido diana. Un intervalo generalmente eficaz de concentraciones para el agente fotosensibilizante está comprendido entre 0,1 y 10 mg/mL, preferentemente entre 0,1 y 5 mg/mL y, más preferentemente entre 0,25 y 2,0 mg/mL. Típicamente, la concentración de agente fotosensibilizante es de 2 mg/mL o menos. El contacto implica de forma adecuada aplicar la composición a una o más superficies del tejido lesionado con la composición farmacéutica de la invención. El contacto tópico con el fotosensibilizante tiene lugar generalmente durante al menos 1 minuto, preferentemente en cinco minutos, y aún más preferentemente desde aproximadamente uno a dos minutos. El tiempo de contacto depende de factores tales como la concentración de agente fotosensibilizante en la composición, el tejido que se ha de tratar en el tipo determinado de composición.

Después de un tiempo de contacto predeterminado con el fotosensibilizante, se elimina el fotosensibilizante en exceso preferentemente del área de tratamiento antes de la etapa (b) del procedimiento definido anteriormente. Si el fotosensibilizante se está administrando de forma generalizada, el fotosensibilizante se selecciona para tener, no solamente características farmacocinéticas rápidas, sino también susceptibilidad a la eliminación rápida del cuerpo. Si el fotosensibilizante se está administrando por vía tópica, el exceso se elimina preferentemente irrigando o arrastrando con un fluido químicamente inerte, fisiológicamente aceptable, tal como una solución salina normal o BSS equilibrada, o lavando con agua o algún otro disolvente. De nuevo, no se pretende que estos protocolos sean limitativos en vista de la amplia variación permitida en el diseño del protocolo.

Después de la etapa de poner en contacto el tejido lesionado o el tejido prelesionado, con una composición que contiene el fotosensibilizante para su utilización según la invención, el tejido se somete a exposición a la luz que tiene una longitud de onda que es absorbida por el agente fotosensibilizante y conduce a la reducción o prevención de la inflamación. El término "PDT a baja dosis" en esta solicitud se refiere a una dosis que no produce daño celular evidente, necrosis o eritema, sino que presenta únicamente un efecto antiinflamatorio. Debido a que la dosis de PDT total depende de una combinación de la dosis de agente fotosensibilizante y de la dosis de la luz que irradia, el PDT a baja dosis se puede administrar en combinaciones de dosis de fotosensibilizante relativamente altas y dosis de luz bajas o, por otra parte, combinaciones de dosis de fotosensibilizante relativamente bajas y dosis de luz alta. Esta última combinación de fotosensibilizante bajo/luz alta se puede también conseguir administrando una dosis relativamente alta de fotosensibilizante, seguida de un periodo de "incubación" inusualmente prolongado antes de que se irradie con la luz. Por consiguiente, una amplia variedad de condiciones, que producen todas una dosis relativamente baja de PDT total, sería adecuada para su utilización según la invención.

Asimismo, una amplia variedad de diferentes combinaciones de dosis de fotosensibilizante, tiempos de contacto y formas de administración son adecuadas. Sin embargo, las siguientes pautas rápidas pueden ser útiles. El contacto breve (menos de una hora) con dosis elevadas de fotosensibilizante, p. ej. 2 mg/mL aplicado por vía tópica, serían equivalentes generalmente a una dosis baja de fotosensibilizante, p. ej. 0,15 mg/kg administrada por vía intravenosa. Sin embargo, aún después de una dosis alta de fotosensibilizante administrada por vía intravenosa, la irradiación retardante con luz un tiempo después, p. ej. más de tres horas, después de la administración del agente fotosensibilizante puede también producir PDT a baja dosis porque, si el fotosensibilizante es capaz de eliminación rápida, muy poco de éste puede estar todavía presente en los tejidos después de tres horas.

Ejemplos específicos de "PDT a baja dosis" incluirían:

\bullet

Aplicación tópica o inyección localizada menor de 2 mg/mL de un fotosensibilizante derivado de benzoporfirina ("BPD"), que se deja en contacto con el tejido diana menos de diez minutos;

\bullet

Administración intravenosa menor de 0,15 mg/kg de un BPD con irradiación en cualquier momento después de la administración del BPD; o

\bullet

Administración intravenosa de 0,15 a 0,50 mg/kg de BPD con irradiación más de 6 horas después de la administración de BPD;

acoplado con irradiación en las siguientes condiciones:

\bullet

Menos de 15 J/PM^{2} aplicado entre 0 y 3 horas después de la administración del fotosensibilizante, con preferencia aproximadamente 7 a 12 J/PM^{2}; o

\bullet

Hasta 100 J/PM^{2} aplicado después de seis horas después de la administración del fotosensibilizante.

Preferentemente, la dosis de luz en la etapa b) de exposición definida anteriormente es menor de 100 J/PM^{2}. Más preferentemente, el tiempo en que la etapa a) y la etapa b) de exposición definida anteriormente es mayor de seis horas y la dosis de luz durante dicha etapa b) de exposición es de 15 a 100 J/PM^{2}.

Durante la etapa de irradiación, se puede utilizar cualquier luz que absorba el fotosensibilizante que sea apropiada para su utilización en el tejido lesionado, p. ej. desde 360 a 850 nm, dependiendo del fotosensibilizante y según la profundidad de penetración en el tejido deseada, preferentemente desde 400 a 700 nm. Para aplicaciones antiinflamatorias generales, se puede utilizar luz de la zona visible del espectro electromagnético, p. ej., luz roja, luz azul o incluso luz UVA. Es aceptable la luz que tiene una longitud de onda menor de 400 nm, pero no preferida debido a los efectos potencialmente dañinos de la luz UVA. También es aceptable luz con una longitud de onda mayor de 700 nm, pero no particularmente preferida porque es difícil de ver, haciendo de este modo el control visual de la irradiación casi imposible. Para aplicaciones oculares, se prefiere la luz roja porque ésta elimina cualquier efecto potencialmente perjudicial procedente de los intervalos espectrales azul y UVA en la retina sensible del ojo.

Un ejemplo de procedimiento particularmente preferido que se utiliza durante la cirugía de filtración es el siguiente:

1.

Saturar una esponja empapada en fármaco con una dispersión acuosa de 2 mg/mL de BPD liposómico;

2.

Colocar la esponja saturada con BPD en contacto con el tejido que se ha de tratar durante dos minutos.

3.

Eliminar el BPD en exceso lavando con cantidades copiosas de solución salina esterilizada o solución salina equilibrada; y

4.

Exponer el tejido tratado con BPD a aproximadamente 7 a 12 J/PM^{2} de luz.

Ningún protocolo exclusivo parece ser deseable actualmente para todos los casos. Sin embargo, los protocolos típicos incluirán bien un tratamiento único o un tratamiento inicial seguido opcionalmente de 1 a 4 tratamientos adicionales. Los tratamientos locales con administración tópica de fotosensibilizante se pueden repetir cada 3 ó 4 días. Sin embargo, con la administración generalizada de fotosensibilizante, los tratamientos repetidos se espacian generalmente aproximadamente una semana, o más, para evitar cualquier efecto indeseable de acumulación de fotosensibilizante en exceso.

Los ejemplos siguientes pretenden ilustrar, pero no limitar la invención.

Ejemplos Ejemplo 1 Dosificación de luz

Se realizó la cirugía de filtración en un ojo en seis conejos normales. Se saturó una esponja de células Weck con una solución acuosa de 2 mg/mL de fotosensibilizante anillo A monoácido derivado de benzoporfirina BPD-MA, conocido también como "BPD-porfirina verde"). Durante la cirugía, se utilizó célula Weck saturada para aplicar BPD-MA por vía tópica durante dos minutos a la esclerótica y la conjuntiva en el campo quirúrgico. Después de lavar el fármaco en exceso con BSS, tanto la esclerótica como la conjuntiva se expusieron a la luz roja que tiene una longitud de onda de aproximadamente 690 nm, que se administró mediante un diodo emisor de luz ("LED") colocado a una distancia de aproximadamente 1 cm del tejido que se ha de irradiar. Cada uno de los seis conejos utilizados en este experimento recibieron una dosis diferente de luz, específicamente, 0, 3, 6, 12, 18 y 24 J/PM^{2} durante un periodo de tiempo de 30 segundos a 4 minutos. Los conejos tratados se siguieron durante 11 a 12 días después de la cirugía determinando la altura de la ampolla de filtración, la vascularidad de la ampolla (indicadora de inflamación) y la reducción de la presión intraocular ("IOP"). Los datos obtenidos el día 5 y el día 1 se presentan a continuación en las Tablas 1A y 1B respectivamente.

TABLA 1A Resultados de BPD-MA piloto para la dosificación de la luz 5 días después de la operación

10

TABLA 1B Resultados de BPD-MA piloto para la dosificación de la luz 11 días después de la operación

11

Los resultados indicaron que la mayor supervivencia de la ampolla de filtración fue en los ojos tratados con luz en un intervalo medio de dosis, es decir, dosis relativamente bajas de fármaco y luz, ("PDT a baja dosis"). Los datos indicaron que se necesitaba un determinado nivel de PDT, pero que las dosis mayores fueron generalmente menos eficaces que las menores. La combinación del tiempo de incubación breve con BPD y la dosificación baja de luz de 12 J/cm^{2} no era de esperar que produjera mucho daño a las células tratadas. No obstante, el tratamiento tuvo una acción farmacológica definitiva. La supervivencia de la ampolla se asoció a la falta de inflamación, indicada por avascularidad y una ampolla de color pálido.

Por otra parte, con dosis demasiado bajas o demasiado altas, se redujo la altura de la ampolla y la cantidad de presión intraocular reducida. La insuficiencia de la ampolla se asoció a la inflamación.

Las ampollas de filtración correspondientes se presentan en la Figura 1.

Ejemplo 2 Periodos de administración de PDT

El fotosensibilizante utilizado en el ejemplo se preparó de la forma siguiente: un derivado de benzoporfirina formulado de forma liposómica, anillo A monoácido, BPD-MA o BPD-porfirina verde fue suministrado por QLT PhotoTherapeutics, Inc. En forma de polvo liofilizado y se redisolvió con agua destilada esterilizada poco antes de su utilización. Se utilizó el BPD redisuelto en 1,98 mg/mL para saturar el corte final de 3 mm de una célula Weck. En los grupos de referencia la célula Weck se saturó con solución salina básica ("BSS").

El día 0, se realizó la cirugía de filtración de todo el espesor en un ojo seleccionado al azar en 48 conejos, 12 en cada uno de los cuatro grupos. En cada conejo, el otro ojo sin tratar sirvió de referencia. El procedimiento de filtración se realizó de la forma siguiente: cada animal se anestesió con una mezcla de cetamina y xilazina. Se utilizó un espéculo de cable para separar los párpados. Se creó un faldón conjuntivo de fondo de saco en el cuadrante superior del nasal o en el superior del temporal. Después de la creación del faldón de fondo de saco, la célula Weck saturada con BPD-MA (o placebo BSS) se colocó en la esclerótica posterior al limbo en el que se había de crear la fístula. Se cubrió la conjuntiva sobre la célula Weck. La célula Weck descansó de este modo entre la conjuntiva y la esclerótica, poniéndose además en contacto con la epiesclerótica y la capsula de Tenon, durante dos minutos. Se eliminó a continuación la célula Weck y se irrigó el área con BSS. Los instrumentos y los guantes se enjuagaron también antes de entrar en contacto con el ojo y se utilizó trépano de 1,0 mm para introducirse en la cámara anterior.

El faldón conjuntivo se aseguró a continuación al limbo utilizando dos suturas de vicrilo de 7-0. Inmediatamente después de la cirugía, cada conejo presentaba una exposición de dos minutos de luz con una longitud de onda de 690 nm, con el foco de luz utilizado en el Ejemplo 1 (Quantum Devices, Inc.) que se colocó 1 cm del ojo. El foco de luz se utilizó a una emisión máxima (100 W/cm^{2}), que proporcionó una dosis total de aproximadamente 7,2 J.

Se colocó a continuación una gota de tobramicina en cada ojo después de la cirugía. Se instilaron tobramicina y acetato de prednisolona en ambos ojos cuatro veces al día durante una semana después de la cirugía.

El ojo de referencia recibió el mismo fotosensibilizante e irradiación por vía subconjuntiva que el ojo de la cirugía, pero sin que se crease una fístula. El ojo de referencia se utilizó para probar la toxicidad y como base para detectar una disminución de la IOP para el ojo de la cirugía. El periodo en el que se aplico BPD-MA se varió de la forma siguiente:

Grupo 1: durante la cirugía, tratamiento con		placebo;
\hskip2cm 48 horas después de la cirugía, tratamiento con placebo;
Grupo 2: durante la cirugía, tratamiento con		BPD;
\hskip2cm 48 horas después de la cirugía, tratamiento con placebo;
Grupo 3: durante la cirugía, tratamiento con		placebo;
\hskip2cm 48 horas después de la cirugía, tratamiento con BPD;
Grupo 4: durante la cirugía, tratamiento con		BPD; y
\hskip2cm 48 horas después de la cirugía, tratamiento con BPD;

El tratamiento con BPD a las 48 horas después de la cirugía consistió en la aplicación del corte terminal de 3 mm de una célula Weck saturada con una solución acuosa de 2 mg/mL de BPD-MA (o placebo) depositada sobre la conjuntiva sobre la ampolla de filtración durante dos minutos, seguido de lavado del fotosensibilizante en exceso y exposición a la luz roja de LED con una longitud de onda de 688 nm durante un minuto.

Después de la operación el día 0 y cada dos días después de la cirugía, se examinaron los ratones con biomicroscopía con lámpara de corte para evaluar la amplitud de la ampolla de filtración, la altura de la ampolla de filtración, el eritema conjuntivo sobre la ampolla, la erupción de la célula de la cámara anterior y la profundidad de la cámara anterior. Oftalmotonometría de aplanamiento para medir IOP después de la anestesia tópica. Se realizó también una evaluación de la molestia ocular subjetiva para determinar el confort animal y los hábitos de alimentación, según la escala de graduación mostrada a continuación:

0:

comportamiento normal

1:

agitación de la cabeza, basculación de la cabeza, estrabismo en los ojos

2:

frotes en el ojo

3:

creación de daño/automutilación (con las uñas)

Se evaluó la supervivencia de la ampolla por la amplitud y la altura de la ampolla y por IOP, en comparación con el ojo de referencia. Se determinó el grado de respuesta inflamatoria por el eritema durante la ampolla de filtración y se puntuó en una escala de 0 a 3. Se terminó con los conejos cuando se notó la insuficiencia de la ampolla, es decir, cuando la presión intraocular en el ojo de la cirugía igualó a la del ojo de referencia y la ampolla de filtración estaba plana.

El gráfico de la Figura 2 presenta el porcentaje de supervivencia de la ampolla de filtración de los conejos en cada uno de los cuatro grupos evaluados en este estudio. Los tiempos de supervivencia medios (\pm SD) fueron:

Grupo 1: 10,3 \pm 8 días;

Grupo 2: 23,8 \pm 12 días;

Grupo 3: 10,1 \pm 9 días;

Grupo 4: 23,2 \pm 8 días;

Se observó una diferencia estadística entre la mayoría de los grupos (P <0,001), pero no entre los Grupos 2 y 4 (T <
0,05). El tratamiento con BPD y luz durante la cirugía (Grupos 2 y 4) produjo una supervivencia prolongada de la ampolla en comparación con el placebo de referencia (Grupo 1) o con el tratamiento solamente a las 48 horas después de la cirugía (Grupo 3). El segundo tratamiento con BPD y luz a las 48 horas (Grupo 4) no parecía tener ningún efecto adicional. Se utilizó una prueba de Kruskal-Wallis para análisis no paramétrico para evaluar las diferencias en el tiempo de supervivencia de las ampollas de filtración entre los grupos.

Se evaluó IOP mediante una prueba ANOVA y se observó una tendencia hacia un IOP inferior cuando se administró BPD en la operación (P=0,057). Sin embargo, debido a los problemas con el tononómetro utilizado para medir IOP en los conejos, los parámetros más fiables fueron la amplitud (Figura 3) y la altura (Figura 4) de la ampolla, ambos indicaban la eficacia del tratamiento con PDT a baja dosis durante la cirugía. La medición del eritema sobre la ampolla (mostrada en la Figura 5) indicó una respuesta inflamatoria mayor en los Grupos 1 y 3, en los que las ampollas eran insuficientes al principio después de la cirugía. En las Figuras 3, 4 y 5 se observó una diferencia estadística entre los Grupos (P=0,001). La altura y la amplitud de la ampolla, así como otras características de la lámpara de corte, se analizaron mediante una prueba de la ji al cuadrado. Se utilizó un Cox Proportional Hazard Model para evaluar los parámetros que predecían de la forma más exacta la supervivencia de la ampolla de filtración en cada día de examen.

Cuando se comparan con los estudios previos en conejos en los que se ha investigado las medicinas complementarias para la trabeculectomía, tal como se presenta a continuación en la Tabla 2, los resultados demostraron que BPD prolongaba la supervivencia de la ampolla de filtración en comparación con las referencias normales, ARA-A y 5-fluorouracilo.

TABLA 2 Supervivencia de la ampolla de filtración

12

13

14

Los resultados también demostraron que BPD prolongaba la vida de la ampolla de filtración en los conejos más que algunos conejos que recibieron mitomicina C. El periodo de supervivencia medio de los estudios con mitomicina C fue más prolongado, y esto es consecuente con la hipótesis de que clínicamente PDT causaría menos sobrefiltración que mitomicina C pero tiene una facilidad similar de aplicación con mayor seguridad.

Los datos indicaban claramente que la mayor supervivencia de la ampolla no estaba asociada a eritema o únicamente a eritema mínimo y, por lo tanto, con reducción de la respuesta inflamatoria. Los datos también sugerían que el tratamiento con BPD y luz, a intervalos relativamente bajos de dosis, evitaban el desarrollo de la inflamación, especialmente cuando se administraba durante la cirugía.

Los casos adversos fueron pocos y no específicamente relacionados en la utilización del fotosensibilizante. Se observó un coágulo de fibrina en los primeros cuatro días en seis conejos, tres de los cuales estaban en el Grupo 2 y tres en el Grupo 3. En cada caso, la fibrina se resolvió sin secuelas al final de la primera semana. Un conejo murió el día 0, lo que se creyó que era una complicación de la anestesia. No se describió ningún otro caso adverso.

El día 7, un conejo de cada grupo y, después de la insuficiencia de la ampolla, dos conejos de cada grupo, se sacrificaron para experimentar análisis histológico y microscópico electrónico de transmisión ("TEM"). Se realizó la evaluación histológica después de fijar en primer lugar los ojos del cadáver con formalina neutra tamponada al 10%. Se trataron los ojos, se seccionaron y a continuación se tiñeron con hematoxilina y eosina, así como con Tricromo de Masson. Las muestras fueron examinadas de forma enmascarada por un observador independiente.

Se realizó la microscopía de transmisión electrónica fijando las muestras de tejido en glutaraldehído al 2,5% con cacodilato al 0,1 M conteniendo 7% de sacarosa. Los tejidos se fijaron después durante una hora con tetróxido de osmio al 2% y se deshidrataron mediante concentraciones escalonadas de alcohol hasta etanol al 100%. Se infiltraron a continuación bloques de tejido de 2 x 5 mm con resina epoxi catalizada. Se cortaron secciones gruesas (0,5 \mum), se tiñeron con toluidina azul y se examinaron al microscopio óptico para determinar las áreas apropiadas. Se cortó a continuación una sección fina (80 nm), se recogió sobre varillas de cobre y se tiñó con acetato de uranilo y citrato de plomo para la evaluación TEM. Se utilizó un microscopio electrónico de transmisión Hitachi H7000 para examinar estas secciones.

Un microscopio óptico el día 7 después de la operación en las ampollas de filtración que recibió BPD en lugar de placebo, en la cirugía demostró que los fibroblastos y una respuesta linfocítica suave estaban presentes en el conejo que recibió un placebo tanto el día 0 como el día 2. Además, el día 7, estos ojos demostraban alguna proliferación vascular y nueva deposición de colágeno.

En cambio, el conejo que recibió solamente BPD el día 2 (Grupo 3), presentaba canales linfáticos aumentados además de los fibroblastos, pero no proliferación vascular. En ambos ojos que recibieron BPD en la cirugía, la ampolla de filtración se observó que presentaba una respuesta linfocítica suave. Sin embargo, no se observaron fibroblastos, aumento vascular o aumento del canal linfocítico. Al final de estudio, (tres semanas después de la operación), en las fístulas del ojo, que habían recibido BPD, sólo se observaron unos pocos linfocitos y ninguna proliferación de vasos sanguíneos en la fístula.

En los Grupos 2 y 4, tanto el día 7 como en el sacrificio, se observó un epitelio adelgazado. Sin embargo, se pensó que esto era debido a la ampolla elevada y a la destrucción asociada de la carga de lágrima, en oposición al efecto tóxico del tratamiento con PDT.

En el ojo de referencia, no se observaron diferencias entre los ojos tratados con placebo y BPD en el examen ocular del segmento anterior, indicando una falta de toxicidad de la invención clínicamente (P>0,005). Además, los análisis histológicos y por el microscopio electrónico de transmisión no demostraron ninguna prueba de toxicidad o de inflamación aparte del punto de inflamación, ya sea en el ojo de la cirugía o de referencia. Por lo tanto, no se observó ninguna toxicidad en BPD clínica, histológicamente o por el microscopio electrónico de transmisión.

Claims (19)

1. Utilización de un agente fotosensibilizante capaz de penetrar dentro del tejido, para la preparación de un medicamento para reducir o impedir los efectos de la inflamación que aparecen en el tejido cuando está lesionado, en un método que comprende las etapas de:

a)

Poner en contacto el tejido lesionado o el tejido prelesionado, con el agente fotosensibilizante, de modo que penetre en dicho tejido; y

b)

Exponer el tejido puesto en contacto con luz que tiene una longitud de onda absorbida por el agente fotosensibilizante durante un tiempo suficiente para reducir o impedir la inflamación en el tejido expuesto, pero no tan prolongado que produzca necrosis o eritema del tejido lesionado expuesto.

2. Utilización según la reivindicación 1, en la que el contacto de la etapa a) es durante menos de cinco minutos.

3. Utilización según cualquier reivindicación anterior, en la que entre dicha etapa a) y dicha etapa b), se elimina el agente fotosensibilizante en exceso en contacto con el tejido lesionado.

4. Utilización según la reivindicación 3, en la que dicha eliminación se realiza arrastrando el agente fotosensibilizante con solución salina esterilizada o una solución salina equilibrada.

5. Utilización según la reivindicación 1, en la que al menos algunas de las longitudes de onda de la luz están en la zona visible del espectro electromagnético.

6. Utilización según cualquier reivindicación anterior, en la que la dosis de luz durante dicha etapa b) de exposición es menos de 100 J/cm^{2}.

7. Utilización según cualquier reivindicación anterior, en la que el tiempo entre dicha etapa a) y dicha etapa b) de exposición está entre cero y tres horas, y la dosis de luz durante dicha etapa b) de exposición es menos de 15 J/cm^{2}.

8. Utilización según la reivindicación 7, en la que la dosis de luz durante dicha etapa b) de exposición es aproximadamente 7 a 12 J/cm^{2}.

9. Utilización según cualquier reivindicación anterior, en la que el tiempo entre dicha etapa a) y dicha etapa b) de exposición es mayor de seis horas, y la dosis de luz durante dicha etapa b) de exposición es de 15 a 100 J/cm^{2}.

10. Utilización de una composición que comprende:

a)

desde 1 \mug/mL hasta 2 mg/mL de un agente fotosensibilizante capaz de penetrar en el tejido, y;

b)

un excipiente farmacéuticamente aceptable, para la preparación de un medicamento para reducir o prevenir los efectos de la inflamación que aparecen en el tejido ocular lesionado.

11. Utilización según la reivindicación 1, en el que el tejido es el tejido ocular.

12. Utilización según la reivindicación 1 o la reivindicación 10, en la que el agente fotosensibilizante comprende uno o más compuestos de monohidrobenzoporfirina.

13. Utilización según la reivindicación 12, en la que el agente fotosensibilizante comprende BPD-MA.

14. Utilización según la reivindicación 1 o la reivindicación 10, en la que el medicamento se formula para aplicación tópica.

15. Utilización según la reivindicación 14, en la que la aplicación tópica es mediante una esponja empapada en fármaco.

16. Utilización según la reivindicación 1 o la reivindicación 10, en la que el agente fotosensibilizante está en forma de una solución que tiene una concentración de 2 mg/mL o menos.

17. Utilización según la reivindicación 1 o la reivindicación 10, en la que el medicamento se formula para administración generalizada.

18. Utilización según la reivindicación 17, en la que la dosis de agente fotosensibilizante es menos de 0,50 mg/kg.

19. Utilización según la reivindicación 1 o la reivindicación 10, en la que el agente fotosensibilizante absorbe luz de al menos alguna de las longitudes de onda en la zona visible del espectro electromagnético.