ES2224627T3 - El uso de dominios aislados de colageno tipo iv para modificar interacciones celulares y tisulares. - Google Patents
El uso de dominios aislados de colageno tipo iv para modificar interacciones celulares y tisulares.Info
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Abstract
Un método in vitro para inhibir la angiogénesis en un tumor o un tejido animal, que comprende poner en contacto el tumor o el tejido animal con una cantidad eficaz para inhibir la angiogénesis de una composición que comprende uno o más monómeros de cadena NC1 de colágeno tipo IV seleccionados del grupo que consiste en monómeros de cadena NC1 2 y 6.
Description
El uso de dominios aislados de colágeno tipo IV
para modificar interacciones celulares y tisulares.
Esta invención se refiere a métodos in
vitro, a composiciones farmacéuticas y a su uso en la
preparación de un medicamento para inhibir la angiogénesis, el
crecimiento de tumores y la metástasis e interacciones de células
endoteliales con la matriz extracelular.
La angiogénesis, el proceso de formación de
nuevos vasos sanguíneos, juega unpapel importante en procesos
fisiológicos tales como el desarrollo embrionario y postnatal así
como en la reparación de heridas. La formación de vasos sanguíneos
también puede estar inducida por procesos patológicos que implican
inflamación (por ejemplo, retinopatía diabética y artritis) o
neoplasia (por ejemplo, cáncer) (Folkman, 1985, Perspect, Biol.
Med, 29, 10). La neovascularización es regulada por factores de
crecimiento angiogénicos secretados por células tumorales o
normales así como la composición de la matriz extracelular y por la
actividad de enzimas endoteliales (Nicosia y Ottinetti, 1990, Lab.
Invest, 63, 115).
Durante las fases iniciales de la angiogénesis,
aparecen brotes de células endoteliales a través de huecos en la
membrana basal de vasos sanguíneos preexistentes (Nicosia y
Ottinetti, 1990, previamente; Schoefl, 1963, Virehous Arch. Pathol.
Anat. 337, 97-141; Ausprunk y Folkman, 1977,
Microvasc. Res. 14, 53-65; Paku y Paweletz, 1991,
Lab. Invest. 63, 334-346). A medida que se forman
nuevos vasos, su membrana basal sufre cambios estructurales y de
composición complejos que se cree que afectan a la respuesta
angiogénica (Nicosia y otros, 1994, Exp. Biology, 164,
197-206). Modelos de cultivo planos previos han
mostrado que las moléculas de la membrana basal modulan la unión, la
migración y la proliferación y el comportamiento organizativo de
las células endoteliales (Nicosia y otros, 1994, previamente).
Estudios más recientes con modelos de cultivo aórticos
tridimensionales que simulan más estrechamente condiciones
angiogénicas durante la curación de heridas in vivo sugieren
que la membrana basal es un regulador dinámico de la angiogénesis
cuya función varía de acuerdo con sus componentes moleculares
(Nicosia, 1994, previamente).
Una característica común de todo el crecimiento
de tumores sólidos es el requisito de un suministro de sangre. Por
lo tanto, numerosos laboratorios se han dirigido a desarrollar
compuestos antiangiogénicos basados en factores de crecimiento y
sus receptores. Aunque este sistema ha conducido a algún éxito, el
número de factores de crecimiento que se sabe que juega un papel en
la angiogénesis es grande. Por lo tanto, existe la posibilidad de
que antagonistas de factores de crecimiento puedan tener un uso
sólo limitado para tratar el cáncer ya que los tumores y las
células inflamatorias asociadas probablemente producen una amplia
variedad de factores que pueden inducir la angiogénesis.
A este respecto, podría esperarse que una
estrategia que se dirige a una característica común de la
angiogénesis, tal como la adhesión de células endoteliales a la
matriz extracelular (ECM), tenga un profundo impacto fisiológico
sobre el crecimiento de tumores en seres humanos. Esta noción está
apoyada por el hecho de que agonistas de receptores de la adhesión
celular a ECM específicos, tales como integrinas \alphav\beta3
y \alphav\beta5, pueden bloquear la angiogénesis. Por otra
parte, la integrina \alphav\beta3 se expresa lo más
predominantemente en células endoteliales y del músculo liso
activadas con citoquinas y se ha observado que se requiere para la
angiogénesis. (Varner y otros, Cell Adhesion and Communication
3:367-374 (1995); Brooks y otros, Science
264:569-571 (1994)). Basándose en estos hallazgos,
un nuevo sistema potencialmente potente para la terapia
antiangiogénica podría ser dirigirse específicamente a dominios
reguladores críticos dentro de distintos compuestos de la ECM.
La membrana basal (lámina basal) es una matriz
extracelular (ECM) similar a una hoja que es un componente básico de
todos los tejidos. La lámina basal proporciona la
compartimentalización de tejidos y actúa como un filtro para
substancias que viajan entre compartimentos de tejidos.
Típicamente, la lámina basal se encuentra estrechamente asociada
con un epitelio o endotelio en todos los tejidos de un animal,
incluyendo los vasos y los capilares sanguíneos. Los componentes de
la lámina basal son secretados por células y a continuación se
autoensamblan para formar una red extracelular intrincada. La
formación de la lámina basal biológicamente activa es importante
para el desarrollo y la diferenciación de las células
asociadas.
Se ha observado que el colágeno tipo IV es un
componente estructural principal de las membranas basales. La forma
protómera del colágeno tipo IV se forma como un heterotrímero
formado por un número de diferentes cadenas subunitarias llamadas
\alpha1(IV) a \alpha6(IV). Hasta ahora, se han
identificado seis cadenas \alpha genéticamente distintas
pertenecientes a dos clases con homología extensa, y su abundancia
relativa se ha demostrado que es específica para el tejido. El
heterotrímero de colágeno tipo IV se caracteriza por tres dominios
estructurales distintos: el dominio no colagenoso (NC1) en el
extremo carboxilo; el dominio colagenoso helicoidal triple en la
región media y el dominio colagenoso 7S en el extremo amino.
(Martin y otros, 1988, Adv. Protein Chem. 39:1-50;
Gunwar y otros, 1991, J. Biol. Chem.
266:14088-14094).
US 5.691.182 se refiere a métodos para inhibir la
formación de la membrana de la lámina basal en el desarrollo celular
o tisular, en donde la célula o el tejido se pone en contacto con
una mezcla de colágeno \alpha1(IV) y \alpha2(IV).
Además, Han y otros (1997) J. of Biol. Chem. (1997)
272:20395-401, describen que el péptido
\alpha3(IV)185-203 promueve la
adhesión de células de melanoma humano e inhibe su
proliferación.
La capacidad de expresión de dominios NC1
\alpha(IV) recombinantes proporciona la oportunidad de
estudiar el efecto de dominios específicos sobre muchos procesos
biológicos, tales como la angiogénesis, la metástasis tumoral, la
unión de células a membranas basales y el ensamblaje de moléculas
de colágeno Tipo IV.
La presente invención proporciona métodos in
vitro, composiciones farmacéuticas y su uso en la preparación
de un medicamento para inhibir la angiogénesis, el crecimiento y la
metástasis tumorales y la interacción de células endoteliales con
la matriz extracelular. Este método in vitro comprende poner
en contacto el tumor o el tejido animal con uno o más monómeros de
cadena \alpha NC1 de colágeno tipo IV seleccionados del grupo que
consiste en los monómeros de cadena NC1 \alpha2 y \alpha6; las
composiciones farmacéuticas comprenden uno o más monómeros de cadena
\alpha NC1 de colágeno tipo IV seleccionados del grupo que
consiste en los monómeros de cadena \alpha2 o \alpha6 y un
portador farmacéuticamente aceptable. Por otra parte, la invención
se refiere al uso de uno o más monómeros de cadena \alpha2 o
\alpha6 de colágeno tipo IV para la preparación de una
composición farmacéutica para inhibir el crecimiento o la metástasis
tumorales y una enfermedad mediada por angiogénesis. Adicionalmente,
la invención se refiere al uso de un monómero de cadena \alpha3
NC1 de colágeno tipo IV para la preparación de una composición
farmacéutica para tratar una enfermedad o un estado mediados por
angiogénesis en un mamífero, en donde la enfermedad o el estado
mediados por angiogénesis se seleccionan del grupo que consiste en
retinopatía diabética, artritis reumatoide, neovascularización
retinal, neovascularización coroidal, degeneración macular,
neovascularización corneal, retinopatía del prematuro, rechazo de
injertos corneales, glaucoma neovascular, fibroplasia retrolental,
queratoconjuntivitis epidérmica, deficiencia de Vitamina A, uso
excesivo de lentes de contacto, queratitis atópica, queratitis
límbica superior, queratitis seca por pterigión, síndrome de
Sjogren, acné rosácea, filectenulosis, sífilis, infecciones por
micobacterias, degeneración de lípidos, quemaduras químicas,
úlceras bacterianas, úlceras fúngicas, infecciones por herpes
simple, infecciones por herpes zóster, infecciones protozoarias,
sarcoma de Kaposi, úlcera de Mooren, degeneración marginal de
Terrien, queratolisis marginal, trauma, lupus sistémico,
poliarteritis, sarcoidosis de Wegener, escleritis, enfermedad de
Stevens-Johnson, queratotomía radial, anemia de
células falciformes, sarcoide, pseudoxantoma elástico, enfermedad
de Paget, oclusión venosa, oclusión arterial, enfermedad obstructiva
de la carótida, uveitis crónica, vitritis crónica, enfermedad de
Lyme, enfermedad de Eales, enfermedad de Bechet, miopía, fosetas
papilares, enfermedad de Stargart, planitis del disco ciliar,
separación retinal crónica, síndromes de hiperviscosidad,
toxoplasmosis, complicaciones postlaséricas, proliferación anormal
de tejido fibrovascular, hemangiomas, síndrome de
Osler-Weber-Rendu, síndrome de
inmunodeficiencia adquirida, enfermedad neovascular ocular,
osteoartritis, inflamación crónica, enfermedad de Crohn, colitis
ulcerativa, psoriasis, aterosclerosis y penfigoide.
La figura 1 ilustra el efecto de los dominios NC1
(Hexámero) y 7S de colágeno Tipo IV a una concentración de 50
\mug/ml sobre la angiogénesis a partir de cultivos orgánicos de
aorta torácica de ratón.
La figura 2 ilustra los efectos del dominio 7S de
colágeno Tipo IV sobre la angiogénesis a partir de cultivos
orgánicos de aorta torácica de ratón. Las concentraciones de
dominio empleadas en este experimento eran 0 \mug/ml (control);
0,5 \mug/ml; 5 \mug/ml y 50 \mug/ml.
La figura 3 ilustra los efectos del dominio NC1
(Hexámero) de colágeno Tipo IV sobre la angiogénesis a partir de
cultivos orgánicos de aorta torácica de ratón. Las concentraciones
de dominio empleadas en este experimento eran 0 \mug/ml
(control); 0,5 \mug/ml, 5 \mug/ml y 50 \mug/ml.
La figura 4 son fotografías de segmentos de aorta
torácica de ratón embebidos en Matrigel (matriz de membrana basal
EHS, Coolaborative Biomedical Products, Bedford, MA) en 5 días de
cultivo. El espécimen de control (0 \mug/ml de dominios NC1
(Hexámero) y 7S) exhibía crecimiento de microvasos a partir del
tejido cultivado en la matriz (figura 4A). En contraste, se exhibía
angiogénesis en especímenes cultivados con 50 \mug/ml de dominio
7S (figura 4B) y dominio NC1 (Hexámero) (figura 4C).
La figura 5 es una representación gráfica de
datos que demuestran el efecto in vivo de la inyección IV de
monómero de colágeno tipo IV (\alpha1) recombinante sobre la
angiogénesis usando implantes de fibrina en ratas.
La figura 6 es una representación gráfica de
datos que demuestran que los monómeros NC1 (\alpha1) y
(\alpha2) recombinantes inhiben el incremento inducido por Bfgf
en el índice angiogénico in vivo.
La figura 7 es una representación gráfica de
datos que demuestran el efecto de respuesta con la dosis de monómero
NC1 (\alpha2) recombinante sobre el incremento inducido por bFGF
en puntos de ramificación de vasos sanguíneos totales in
vivo.
La figura 8 es una representación gráfica de
datos que demuestran el efecto de respuesta con la dosis de monómero
NC1 (\alpha2) recombinante sobre el incremento inducido por bFGF
en el índice angiogénico in vivo.
La figura 9 es una representación gráfica de
datos que demuestran el efecto de respuesta con la dosis de monómero
NC1 (\alpha2) recombinante sobre el incremento inducido por bFGF
en puntos de ramificación de vasos sanguíneos totales in
vivo.
La figura 10 es una representación gráfica de
datos que demuestran el efecto de monómeros NC1 (\alpha1) y
(\alpha2) recombinantes sobre el peso medio de un tumor de
melanoma CS-1 in vivo.
La figura 11 es una representación gráfica de
datos que demuestran el efecto de respuesta con la dosis de
monómeros NC1 (\alpha2) recombinante sobre el peso medio de tumor
de melanoma CS-1 in vivo.
La figura 12 es una representación gráfica de
datos que demuestran el efecto de monómeros NC1 (\alpha1),
(\alpha2) y (\alpha4) recombinantes sobre el peso medio de un
tumor HT1080 in vivo.
La figura 13 es una representación gráfica de
datos que demuestran el efecto de monómeros NC1 (\alpha1),
(\alpha2), (\alpha3) y (\alpha5) recombinantes sobre el peso
medio de tumor HEP-3 in vivo.
La figura 14 es una representación gráfica de
datos que demuestran la adhesión de células endoteliales humanas a
monómeros \alpha NC1 inmovilizados.
La figura 15 es una representación gráfica de
datos que demuestran el efecto de monómeros NC1 (\alpha1) y
(\alpha2) solubles sobre la adhesión de células endoteliales
humanas a colágeno tipo IV pepsinizado.
La figura 16 es una representación gráfica de
datos que demuestran el efecto de monómeros NC1 recombinantes
aislados sobre la migración de células endoteliales humanas in
vitro.
La figura 17 A-F proporciona la
secuencia de cada monómero de cadena \alpha de colágeno tipo
IV.
Dentro de esta solicitud, a no ser que se indique
otra cosa, las técnicas utilizadas pueden encontrarse en cualquiera
de varias referencias bien conocidas tales como: (Molecular
Cloning: A Laboratory Manual (Sambrook y otros, 1989, Cold
Spring Harbor Laboratory Press), Gene Expression Technology
(Methods in Enzymology, Vol. 185, editado por D. Goeddel, 1991.
Academic Press, San Diego, CA), "Guide to Protein
Purification" en Methods in Enzymology (M.P. Deutshcer,
ed., (1990) Academic Press, Inc.); PCR Protocols: A Guide to
Methods and Applications (Innis y otros, 1990. Academic Press,
San Diego, CA), Culture of Animal Cells: A Manual of Basic
Technique, 2ª Ed. (R.I. Freshney. 1987. Liss, Inc. Nueva York,
NY), y Gene Transfer and Expression Protocols, pp.
109-128, ed. E.J. Murray, The Humana Press Inc.,
Clifton, N.J.).
Según se usa aquí, el término dominio de colágeno
Tipo IV abarca el grupo de moléculas que incluyen el dominio NC1 no
colagenoso (Hexámero) y los dominios colagenosos 7S, así como
monómeros de cadena \alpha NC1.
La invención abarca métodos in vitro para
usar monómeros \alpha (es decir: \alpha2 y \alpha6) NC1 de
colágeno Tipo IV, composiciones farmacéuticas que comprenden dichos
monómeros \alpha NC1 y el uso de uno o más de dichos monómeros
para la preparación de una composición farmacéutica. Estos
monómeros se definen para incluir tales monómeros aislados de
cualquier organismo multicelular o producidos a través de expresión
de proteínas recombinantes a partir de un gen que codifica tal
monómero de cualquier organismo multicelular, y también para
abarcar diversas modificaciones, adiciones y/o supresiones de tales
monómeros.
En un aspecto, la presente invención proporciona
métodos in vitro para inhibir la angiogénesis en un tejido
animal, que comprenden poner en contacto el tumor o el tejido
animal con una cantidad eficaz para inhibir la angiogénesis de una
composición que comprende uno o más monómeros de cadena \alpha
NC1 de colágeno tipo IV seleccionados del grupo que consiste en
monómeros de cadena NC1 \alpha2 y \alpha6.
En otro aspecto, la presente invención
proporciona usos de uno o más monómeros de cadena \alpha NC1 del
colágeno tipo IV para la preparación de una composición
farmacéutica para inhibir el crecimiento de tumores en tejido, en
donde el tumor o el tejido se pone en contacto con una cantidad
eficaz para inhibir el crecimiento tumoral de una composición que
comprende uno o más monómeros de cadena \alpha NC1 de colágeno
tipo IV seleccionados de grupo que consiste en monómeros de cadena
NC1 \alpha2 y \alpha6.
En otro aspecto, la presente invención
proporciona usos de uno o más monómeros de cadena \alpha NC1 del
colágeno tipo IV para la preparación de una composición
farmacéutica para inhibir la metástasis tumoral en tejido, en donde
el tumor o el tejido se pone en contacto con una cantidad eficaz
para inhibir el crecimiento tumoral de una composición que
comprende uno o más monómeros de cadena \alpha NC1 de colágeno
tipo IV seleccionados de grupo que consiste en monómeros de cadena
NC1 \alpha2 y \alpha6.
En un aspecto adicional, la presente invención
proporciona métodos in vitro para inhibir interacciones de
células endoteliales con la matriz extracelular en tejido, que
comprenden poner en contacto el tumor o el tejido con una cantidad
eficaz para inhibir interacciones de células endoteliales con la
matriz extracelular de una composición polipeptídica que comprende
uno o más monómeros de cadena \alpha NC1 de colágeno tipo IV
aislados, seleccionados del grupo que consiste en monómeros de
cadena NC1 \alpha2 y \alpha6.
Adicionalmente, la invención proporciona
composiciones farmacéuticas que comprenden uno o más monómeros de
cadena \alpha NC1 de colágeno tipo IV seleccionados del grupo que
consiste en monómeros de cadena \alpha2 o \alpha6, y un
portador farmacéuticamente aceptable.
Por otra parte, la invención abarca usos de uno o
más monómeros de cadena \alpha NC1 de colágeno tipo IV para la
preparación de una composición farmacéutica para tratar una
enfermedad o un estado mediados por angiogénesis en un mamífero, en
donde el monómero se selecciona del grupo que consiste en monómeros
de cadena \alpha2 o \alpha6.
Un aspecto adicional de la invención se refiere a
usos de un monómero de cadena \alpha3 NC1 de colágeno tipo IV para
la preparación de una composición farmacéutica para tratar una
enfermedad o un estado mediados por angiogénesis en un mamífero, en
donde la enfermedad o el estado mediados por angiogénesis se
seleccionan del grupo que consiste en retinopatía diabética,
artritis reumatoide, neovascularización retinal, neovascularización
coroidal, degeneración macular, neovascularización corneal,
retinopatía del prematuro, rechazo de injertos corneales, glaucoma
neovascular, fibroplasia retrolental, queratoconjuntivitis
epidérmica, deficiencia de Vitamina A, uso excesivo de lentes de
contacto, queratitis atópica, queratitis límbica superior,
queratitis seca por pterigión, síndrome de Sjogren, acné rosácea,
filectenulosis, sífilis, infecciones por micobacterias,
degeneración de lípidos, quemaduras químicas, úlceras bacterianas,
úlceras fúngicas, infecciones por herpes simple, infecciones por
herpes zóster, infecciones protozoarias, sarcoma de Kaposi, úlcera
de Mooren, degeneración marginal de Terrien, queratolisis marginal,
trauma, lupus sistémico, poliarteritis, sarcoidosis de Wegener,
escleritis, enfermedad de Stevens-Johnson,
queratotomía radial, anemia de células falciformes, sarcoide,
pseudoxantoma elástico, enfermedad de Paget, oclusión venosa,
oclusión arterial, enfermedad obstructiva de la carótida, uveitis
crónica, vitritis crónica, enfermedad de Lyme, enfermedad de Eales,
enfermedad de Bechet, miopía, fosetas papilares, enfermedad de
Stargart, planitis del disco ciliar, separación retinal crónica,
síndromes de hiperviscosidad, toxoplasmosis, complicaciones
postlaséricas, proliferación anormal de tejido fibrovascular,
hemangiomas, síndrome de
Osler-Weber-Rendu, síndrome de
inmunodeficiencia adquirida, enfermedad neovascular ocular,
osteoartritis, inflamación crónica, enfermedad de Crohn, colitis
ulcerativa, psoriasis, aterosclerosis y penfigoide.
El dominio que codifica NC1 de cada uno de los
seis cDNAs de cadena \alpha se ha clonado en un vector para
expresión de proteínas recombinantes según se describe previamente
(Sado y otros, Kidney Intl. 53:664-671 (1998),
incorporado aquí mediante referencia en su totalidad). Los vectores
se usan para transfectar establemente células 293 de riñón humano,
que producen la proteína recombinante. El DNA y las secuencias de
aminoácidos deducidas de los monómeros de cadena alfa de colágeno
tipo IV recombinantes producidos según se describe se muestran en la
figura 17A-F. Los 17 primeros aminoácidos
corresponden a una secuencia de señal BM40 (que se segmenta de la
proteína madura), para facilitar la secreción de proteínas. Todas
las proteínas secretadas (es decir: proteínas maduras) empiezan con
la secuencia APLA seguida por la marca de afinidad, DYKDDDDK, en el
extremo amino. Esta marca facilita la purificación y la
identificación del material y no interfiere con la actividad
biológica del monómero de cadena \alpha NC1 recombinante.
Los monómeros de cadena \alpha NC1 de colágeno
tipo IV pueden producirse mediante cualquier método conocido en la
técnica, incluyendo usar tecnología de DNA recombinante o
tecnología de síntesis bioquímica de péptidos, o aislando los
dominios NC1 de fuentes animales, tales como de fuentes de membrana
basal tales como la cápsula del cristalino bovino y los glomérulos
del riñón bovino. (Peczon y otros, Exp. Eye Res.
30:155-165 (1980); Langeveid y otros, J. Biol. Chem.
y otros 263:10481-10488 (1988); Gunwar y otros, J.
Biol. Chem. 266:14088-14094
(1991)).
(1991)).
Al poner en práctica la invención, el intervalo
de cantidades o dosificaciones de monómeros de cadena \alpha NC1
de colágeno tipo IV empleado es uno que inhibe eficazmente la
angiogénesis, el crecimiento tumoral, la metástasis tumoral y/o las
interacciones de células endoteliales-matriz
extracelular. Una cantidad inhibidora de monómeros de cadena
\alpha NC1 que puede emplearse varía generalmente entre
aproximadamente 0,01 \mug/kg de peso corporal y aproximadamente 10
mg/kg de peso corporal, variando preferiblemente entre
aproximadamente 0,05 \mug/kg y aproximadamente 5 mg/kg de peso
corporal.
Los monómeros de cadena \alpha NC1 pueden
administrarse mediante cualquier ruta adecuada, incluyendo
oralmente, parenteralmente, mediante un aerosol de inhalación,
rectalmente o tópicamente en formulaciones unitarias de dosificación
que contienen portadores, adyuvantes y vehículos farmacéuticamente
aceptables convencionales. El término parenteral, según se usa
aquí, incluye, subcutáneo, intravenoso, intraarterial,
intramuscular, intraesternal, intratendinoso, intraespinal,
intracraneal, intratorácico, técnicas de infusión o
intraperitonealmente. En modalidades preferidas, los monómeros de
cadena \alpha NC1 se administran intravenosamente o
subcutáneamente.
Los monómeros de cadena \alpha NC1 pueden
elaborarse en una forma sólida (incluyendo gránulos, polvos o
supositorios) o en una forma líquida (por ejemplo, soluciones,
suspensiones o emulsiones). Los monómeros de cadena \alpha NC1 de
la invención pueden aplicarse en una variedad de soluciones.
Soluciones adecuadas para usar de acuerdo con la invención son
estériles, disuelven suficientes cantidades de los monómeros de
cadena \alpha NC1 y no son perjudiciales para la aplicación
propuesta.
Los monómeros de cadena \alpha NC1 pueden
someterse a operaciones farmacéuticas convencionales tales como
esterilización y/o pueden contener adyuvantes convencionales, tales
como conservantes, estabilizantes, agentes humectantes,
emulsionantes, tampones, etc.
Para la administración, los monómeros de cadena
\alpha NC1 se combinan habitualmente con uno o más adyuvantes
apropiados para la ruta de administración indicada. Los compuestos
pueden mezclarse con lactosa, sacarosa, polvo de almidón, ésteres
celulósicos de ácidos alcanoicos, ácido esteárico, talco, estearato
magnésico, óxido magnésico, sales sódicas y cálcicas de ácidos
fosfórico y sulfúrico, goma arábiga, gelatina, alginato sódico,
polivinilpirrolidina y/o poli(alcohol vinílico), y formarse
como tabletas o encapsularse para una administración convencional.
Alternativamente, los compuestos de esta invención pueden
disolverse en solución salina, agua, polietilenglicol,
propilenglicol, soluciones coloidales de carboximetilcelulosa,
etanol, aceite de maíz, aceite de cacahuete, aceite de semillas de
algodón, aceite de sésamo, goma de tragacanto y/o diversos
tampones. Otros adyuvantes y modos de administración son bien
conocidos en la técnica farmacéutica. El portador o diluyente puede
incluir material retardador, tal como monoestearato de glicerilo o
diestearato de glicerilo solo o con una cera, u otros materiales
bien conocidos en la técnica.
La presente invención puede entenderse mejor con
referencia a los ejemplos adjuntos que se proponen con propósitos de
ilustración solo y no debe considerarse que limiten el alcance de
la invención, según se define por las reivindicaciones
adjuntas.
Los ejemplos dirigidos a monómero de cadena
\alpha1 NC1 de colágeno tipo IV solo tienen propósitos
ilustrativos.
Con modificaciones, se utilizaron dos
procedimientos de Nicosia y Ottinetti (1990), previamente, y
Nicosia y otros (1994), previamente, para los experimentos
diseñados para probar el efecto del colágeno tipo IV sobre la
angiogénesis bajo condiciones in vitro. El modelo se ha
usado para estudiar los efectos de factores del crecimiento y
moléculas de la matriz extracelular sobre la respuesta angiogénica y
emplea cultivos de anillos aórticos en geles de colágeno
tridimensionales bajo condiciones libres de suero. Estos
experimentos se esbozan más adelante.
Los experimentos se realizaron con ratones macho
Swiss Webster de 1-3 meses de edad. Después de la
anestesia, la aorta torácica se extirpó bajo condiciones asépticas
y se transfirió a medio de crecimiento estéril MCDB 131 (Clonetics,
San Diego, CA) que contenía antibióticos. La grasa se separó por
disección de la aorta y se obtuvieron de aproximadamente seis a
ocho segmentos torácicos de 1 mm de cada espécimen. Los segmentos se
transfirieron a placas de cultivo tisular de 48 pocillos. Los
pocillos de estas placas se estratificaron con 100 microlitros de
MATRIGEL® (membrana basal EHS, Collaborative Biomedical Products,
Bedford, MA) antes de la transferencia de los segmentos aórticos. El
MATRIGEL® se diluyó 1:1 con medio de crecimiento MCDB 131 antes de
usar. Los segmentos se centraron en los pocillos y se pusieron a
continuación sobre los especímenes 100 microlitros adicionales de
MATRIGEL®. Los segmentos aórticos se embebieron por lo tanto en la
matriz de la membrana basal. Cada pocillo recibió a continuación
300 microlitros de medio de crecimiento MCDB 131. Las placas se
pusieron en una incubadora mantenida a 37ºC con CO_{2} al 5%. Los
especímenes se observaron diariamente durante un período de 7 días.
Se contaron microvasos que crecían recientemente usando un
microscopio de fase invertida en diversos momentos durante el
período de cultivo, pero los datos se expresan a los 3 y 5 días de
cultivo. Para probar el efecto del colágeno Tipo IV sobre la
angiogénesis, se mezclaron dominios en concentraciones conocidas con
el Matrigel y con el medio de crecimiento MCDB 131. El medio de
crecimiento MCDB 131 reciente (más y menos dominios de colágeno) se
cambió cada 3 días.
Después de establecer el transcurso del tiempo de
la angiogénesis bajo condiciones de control (MATRIGEL® más medio de
crecimiento MCDB 131), se realizaron experimentos usando diversas
concentraciones de dominios NC1 (hexámero) y 7S de colágeno Tipo IV
(aislado de cristalino bovino). Los datos representan el análisis
de al menos tres especímenes por condición experimental. En el
primer experimento (Figura 1), el análisis indicaba que a una
concentración de 50 \mug/ml, el dominio NC1 y el dominio 7S
inhibían significativamente la angiogénesis según se controlaba a
los 3 y 5 días de cultivo. En el segundo experimento, se analizaron
diversas concentraciones de estos dominios. Según se indica en la
figura 3, el dominio 7S a 50 \mug/ml inhibía significativamente
de nuevo la angiogénesis a los 3 y 5 días. La inhibición se reducía
a concentraciones de 5 y 0,5 \mug/ml. Según se indica en la figura
2, el dominio NC1 era menos eficaz para bloquear la angiogénesis en
comparación con el observado en el primer experimento (figura 1),
aunque todavía era eficaz. Además, en comparación con el dominio
7S, no existía una correlación entre la concentración y la acción
inhibidora.
Las figuras 4A-C son fotografías
de segmentos de aorta torácica en ratón embebidos en MATRIGEL®
(matriz de membrana basal EHS, Collaborative Biomedical Products,
Bedford, MA) a los 5 días de cultivo en presencia o ausencia de 50
\mug/ml de dominios de colágeno Tipo IV. El espécimen de control
(sin dominios) exhibía crecimiento de microvasos a partir del
tejido cultivado dentro de la matriz (figura 4A). En contraste, se
observó inhibición de la angiogénesis en tejidos cultivados en
presencia de 50 \mug/ml de dominio 7S (figura 4B) y NC1
(hexámero) (figura 4C).
Se inyectó intravenosamente monómero (\alpha3)
NC1 de colágeno tipo IV humano recombinante (Sado y otros, Kidney
International 53:664-671 (1998)) en ratas Fisher
344 que contenían implantes de fibrina colocados quirúrgicamente
subcutáneamente, una versión modificada del método descrito por
Dvorak y otros (Lab. Invest. 57(6): 673-686
(1987)). Los implantes se retiraron a continuación y se analizaron
directamente usando un microscopio invertido. El análisis implicaba
contar un número de vasos sanguíneos que habían crecido dentro de
la fibrina en el grupo de control y experimental.
Brevemente, 4 implantes de fibrina se implantaron
quirúrgicamente subcutáneamente en ratas Fisher 344 (2 lados
dorsales y 2 ventrales). El peso medio de las ratas era
aproximadamente 125 gramos. A estas ratas (EXP) se les administraron
inyecciones en la vena de la cola de control (fibrina sola), 100
\mul de 100 \mug/ml de dominio 7S de colágeno tipo IV
(aproximadamente 0,80 mg/kg de peso corporal), 100 \mul de 100
\mug/ml de hexámero de colágeno tipo IV (aproximadamente 0,80
mg/kg de peso corporal) o monómero (\alpha3) NC1 de colágeno tipo
IV recombinante en una concentración de 1,26 mg/ml en PBS (120
\mug de proteína o aproximadamente 0,96 mg/kg de peso corporal) y
a 3 ratas (C) se les administraron 100 \mul de inyecciones de PBS
en la vena de la cola. Se administraron inyecciones de proteína
recombinante un día sí y uno no durante cinco dosis. El esquema de
inyecciones era como sigue:
Día 1: (día del implante) inyección y extracción
de muestra de sangre (EXP y C)
Día 3: Inyección (EXP y C)
Día 5: Inyección y extracción de muestra de
sangre (EXP y C)
Día 7: Inyección (EXP y C)
Día 9: Inyección y extracción de muestra de
sangre (EXP y C)
Día 11: Extracción y fijación de implantes
(reserva de la muestra de sangre) (EXP y C)
Los resultados de un experimento eran como
sigue:
| Control (fibrina sola) | aproximadamente 66 BV |
| Dominio 7S de colágeno de cristalino tipo IV (100 \mug/ml) | Nada |
| Hexámero de colágeno de cristalino tipo IV (100 \mug/ml) | Nada |
| Monómero (\alpha3) | Nada |
Los resultados se muestran como el número medio
de vasos sanguíneos por implante. Los resultados de este estudio
demuestran que los dominios aislados de colágeno tipo IV,
incluyendo el monómero \alpha3, pueden inhibir significativamente
el crecimiento capilar en el modelo de implante de coágulos de
fibrina in vivo. En experimentos subsiguientes, se observó
ocasionalmente que el efecto inhibidor se atenuaba con el tiempo,
sugiriendo que dosis superiores o inyecciones más frecuentes podían
ser incluso más eficaces.
Se efectuó un experimento similar usando monómero
(\alpha1) NC1 de colágeno tipo IV humano recombinante (100 \mul
de una solución de 1 \mug/ml; aproximadamente 0,80 mg/kg de peso
corporal) y comparando el número de vasos sanguíneos que habían
crecido en la fibrina el día 11 de tratamiento con relación al grupo
de control. Se analizaron tres ratas por grupo teniendo cada rata 4
implantes. Estos experimentos demostraban que la administración del
monómero \alpha1 inhibían significativamente el crecimiento
capilar en el modelo de implantes de coágulos de fibrina in
vivo
(figura 5).
(figura 5).
Se probaron a continuación los efectos de la
administración sistémica de monómeros de cadena \alpha NC1
solubles en el ensayo de angiogénesis en la CAM en embriones de
pollo.
Se indujo la angiogénesis en las CAMs de
embriones de pollo de 10 días de edad con bFGF según se describe
(Brooks y otros, Cell 92:391-400 (1998)).
Veinticuatro horas más tarde los embriones fueron tratados
sistémicamente con diversas concentraciones de monómeros de cadena
\alpha NC1 recombinantes, en un volumen total de 10 \mul de
solución salina tamponada con fosfato (PBS) estéril. Dos días más
tarde los embriones fueron sacrificados y los discos filtrantes y
los tejidos de CAM retirados. La angiogénesis se cuantificó
contando el número de puntos de ramificación de vasos sanguíneos
angiogénicos en el área confinada del disco filtrante. El Índice
Angiogénico se define como el número de puntos de ramificación a
partir del tratamiento experimental menos el tratamiento de
control.
En experimentos iniciales, los dominios NC1
\alpha1 o \alpha2 recombinantes se inyectaron en una
concentración de 50 \mug por embrión. A esta concentración, se
observó que los dominios NC1 eran altamente tóxicos según se
demostraba por más de 90% de muerte celular de los embriones. Sin
embargo, a dosis inferiores eran bien tolerados y mostraban una
actividad antiangiogénica potente. Se efectuó un total de 6
experimentos de angiogénesis individuales con los dominios NC1. Sin
embargo, en dos experimentos, la inducción con bFGF era baja,
haciendo difícil interpretar los resultados. El dominio \alpha2
NC1 parece ser más constante y potente que el dominio \alpha1 NC1
para inhibir la angiogénesis. De hecho, la administración sistémica
de 30 \mug de \alpha2 NC1 inhibía constantemente la
angiogénesis en más de 90% (figuras 6-9), según se
medía por la inhibición del incremento inducido por bFGF en el
índice angiogénico del número medio de puntos de ramificación de
los vasos sanguíneos. En contraste, el dominio \alpha1 NC1
mostraba una actividad inhibidora variable (0%-50%) a lo largo de
los experimentos.
Puesto que el crecimiento de todos los tumores
sólidos depende de la angiogénesis para proporcionar nutrientes
para su expansión continua, los reactivos que tienen la capacidad
de inhibir la angiogénesis pueden inhibir significativamente el
crecimiento tumoral. Por lo tanto, se probaron los efectos de
dominios NC1 recombinantes de colágeno tipo IV con respecto a sus
efectos sobre el crecimiento tumoral in vivo.
Para probar los efectos de dominios NC1 sobre el
crecimiento tumoral in vivo, se utilizó el ensayo de
crecimiento tumoral en embriones de pollo. Brevemente, suspensiones
de células simples de 3 tipos de tumores distintos se aplicaron a
la CAM de embriones de pollo de 10 días de edad. Los tumores
incluían células de melanoma CS-1 (5 x 10^{6}),
células de fibrosarcoma humano HT1080 (4 x 10^{5}) y células de
carcinoma epidermoide humano Hep-3 (2 x 10^{5}).
Los embriones fueron inyectados sistémicamente con concentraciones
variables de monómeros de cadena \alpha NC1 24 horas más tarde. A
continuación se dejó que los embriones se incubaran durante un total
de 7 días, momento en el cual fueron sacrificados. Los tumores
resultantes se extirparon y los pesos en húmedo se determinaron. Se
efectuó un total de 6 ensayos de crecimiento tumoral con los 3 tipos
de tumores distintos. Una sola inyección de 10 \mug de dominio
NC1 \alpha2 inhibía el crecimiento tumoral de melanoma CS1 en
aproximadamente 70% con relación al control (figura 10). En
experimentos similares, se completaron las curvas de respuesta a la
dosis con tumores CS-1. La administración sistémica
de \alpha2 NC1 daba como resultado una inhibición dependiente de
la dosis de crecimiento tumoral de melanoma CS-1
in vivo con una inhibición máxima después de una sola dosis
a 30 \mug (figura 11). La administración sistémica de \alpha1
NC1 también inhibía el crecimiento tumoral de CS-1
pero era variable y en algunos experimentos no inhibía el
crecimiento tumoral (véase la figura 10). En experimentos similares,
\alpha2 NC1 inhibía el crecimiento tumoral de fibrosarcoma humano
HT1080 en aproximadamente 50% después de una sola inyección
sistémica de 30 \mug, mientras que \alpha1 y \alpha4 NC1 no
tenían efecto (figura 12). Finalmente, la administración sistémica
de \alpha2 (30,0 \mug) y \alpha3 NC1 inhibía el crecimiento
tumoral de carcinoma epidermoide humano Hep-3 en
aproximadamente 40% y 60%, respectivamente, y \alpha1 inhibía el
crecimiento tumoral de Hep-3 en aproximadamente 30%,
mientras que el dominio \alpha5 NC1 no inhibía el crecimiento
tumoral (figura 13).
Se concluye a partir de estos estudios in
vivo que el crecimiento tumoral puede inhibirse mediante
monómeros de cadena \alpha NC1 aislados. Estas moléculas pueden
así usarse solas o para complementar el uso de agentes antitumorales
existentes, al proporcionar una terapia antitumoral mejorada y más
eficaz.
Para que se formen nuevos vasos sanguíneos, las
células endoteliales deben tener la capacidad de adherirse y migrar
a través de la ECM. Por otra parte, esta interacción células
endoteliales-ECM puede facilitar casos de
transducción de señales requeridos para la formación de nuevos
vasos sanguíneos. Por lo tanto, puesto que el colágeno tipo IV es
una proteína de la ECM que se sabe que apoya la adhesión celular, se
probó la capacidad de los dominios NC1 para apoyar la unión de
células endoteliales.
Se revistieron placas de microvaloración con 25
\mug/ml de dominios NC1 purificados seguido por incubación con
albúmina de suero bovino (BSA) al 1% para bloquear interacciones no
específicas. A continuación, se dejó que células endoteliales
humanas (ECV304) se unieran a los dominios NC1 inmovilizados
durante 1 hora. Las células no adherentes se retiraron mediante
lavado y las células unidas se cuantificaron midiendo la densidad
óptica (D.O.) de violeta cristal eluido de células unidas. Las
barras de datos representan la media +/- el error estándar de la
D.O. de pocillos por triplicado.
Los dominios \alpha2, \alpha3 y \alpha6 NC1
inmovilizados apoyaban la adhesión de células endoteliales mientras
que los dominios \alpha1, \alpha4 y \alpha5 NC1 promovían
poca adhesión celular, si es que lo hacían (figura 14). \alpha1
(a1) y \alpha2 (a2) NC1 solubles inhibían la adhesión de células
endoteliales a colágeno tipo IV pepsinizado en aproximadamente 50%
(figura 15).
Tomados juntos, estos hallazgos demuestran que
los dominios NC1 recombinantes aislados de las cadenas \alpha1,
\alpha2, \alpha3 y \alpha6 de colágeno tipo IV pueden mediar
la adhesión de células endoteliales humanas y/o inhibir la adhesión
de células endoteliales a proteínas de la ECM in vitro, y
sugieren que la potente actividad antiangiogénica y antitumoral de
los dominios NC1 aislados se debe a la interrupción de la
interacción de células endoteliales con la matriz extracelular que
es necesaria para la angiogénesis.
Los procesos celulares invasivos tales como la
angiogénesis y la metástasis tumoral también requieren movilidad
celular. Así, se evaluó la capacidad de dominios NC1 aislados para
apoyar la migración de células endoteliales humanas in vitro.
Estos experimentos se efectuaron esencialmente de acuerdo con los
métodos de Brooks y otros, J. Clin. Invest.
99:1390-1398 (1997).
Los resultados indican que los dominios
\alpha2, \alpha3 y \alpha6 NC1 pueden apoyar la migración de
células endoteliales humanas in vitro, mientras que los
dominios \alpha1, \alpha4 y \alpha5 mostraban poca capacidad,
si mostraban alguna, para apoyar la migración de células
endoteliales (figura 16).
Los estudios previos indicaban que dominios
específicos de colágeno tipo IV pueden promover la migración de
células in vitro. Así, se evaluó la capacidad de dominios
NC1 para apoyar la migración de células endoteliales in
vivo.
El hexámero del dominio NC1 \alpha (IV),
aislado mediante la digestión enzimática de la membrana basal de la
cápsula del cristalino bovino mediante procedimientos conocidos
(Pezcon y otros, Exp. Eye Res. 30:155-165 (1980)),
se probó en el modelo de tumor metastático pulmonar de ratón de
Lewis usando un procedimiento estándar que se considera que es un
buen modelo tanto de la metástasis como de la angiogénesis de
tumores pulmonares. (Véanse, por ejemplo, Teicher y otros,
Anticancer Res. 18:2567-2573 (1998); Guibaud y
otros, Anticancer Drugs 8:276-282 (1997); Anderson y
otros, Cancer Res. 56:715-718 (1996)).
Cada estudio consistía en un grupo de control no
tratado y seis grupos de tratamiento. Había 10 animales por grupo de
tratamiento con 40 ratones en el control. En cada estudio, todo el
tratamiento se administró intravenosamente una vez cada dos días
durante 7 dosis partiendo de un día después de la inoculación del
tumor. Las dosificaciones del hexámero NC1 \alpha (IV) eran 100
\mug/ratón o 200 \mug/ratón. En el estudio pulmonar de Lewis,
el inóculo de células tumorales era 1 x 10^{6} células viables.
Todos los animales se pesaron dos veces a la semana a lo largo del
estudio. Partiendo de un día después del último tratamiento, 5
ratones fueron sacrificados periódicamente de cada grupo de control
para medir la carga de tumor pulmonar. El experimento se terminó el
día 14 cuando los pulmones de los animales de control tenían
suficiente masa tumoral para proporcionar una evaluación
significativa. En ese momento, los pulmones de todos los animales
restantes se extirparon, se pesaron y el número de focos tumorales
mayores que 2 mm de diámetro se contó. Los datos resultantes
mostraban que ambas dosificaciones de hexámero NC1 \alpha (IV)
reducían significativamente el número de metástasis pulmonares
visibles (Prueba de la Suma de Rangos de
Mann-Whitney, p < 0,05), con 8 metástasis
pulmonares visibles en el control, frente a 5 (100 \mug/ratón) y 4
(200 \mug/ratón), y la dosificación de 100 \mug/ratón reducía
los pesos pulmonares desde una mediana de 520 mg en los controles
hasta una mediana de 462 mg en la parte experimental, mientras que
el peso pulmonar medio de los ratones tratados con 200 \mug/ratón
era 620 mg.
Otros estudios in vivo demostraban que la
metástasis de células tumorales al pulmón puede reducirse en 50% o
más usando inyecciones intravenosas de los dominios de colágeno
Tipo IV en xenoinjertos de melanoma B16 murino y melanoma A375SM
humano. Por otra parte, la inyección del hexámero NC1 también
reducía significativamente el número de tumores pulmonares en
estudios de tumores pulmonares de Lewis separados.
Se concluye a partir de todos los estudios
previos que la angiogénesis, el crecimiento y la metástasis
tumorales y la adhesión de células endoteliales a la ECM pueden
inhibirse mediante dominios recombinantes aislados de colágeno tipo
IV. La presente invención es así ampliamente aplicable a una
variedad de usos e incluye la inhibición de la angiogénesis y el
tratamiento de enfermedades y estados con angiogénesis no deseada
concomitante, tales como tumores sólidos y transportados por la
sangre, incluyendo, pero no limitados a, melanomas, carcinomas,
sarcomas, rhabdomiosarcoma, retinoblastoma, sarcoma de Ewing,
neuroblastoma, osteosarcoma y leucemia.
La invención es aplicable además al tratamiento
de enfermedades y estados no tumorigénicos con angiogénesis no
deseada concomitante, incluyendo, pero no limitados a, retinopatía
diabética, artritis reumatoide, neovascularización retinal,
neovascularización coroidal, degeneración macular,
neovascularización corneal, retinopatía del prematuro, rechazo de
injertos corneales, glaucoma neovascular, fibroplasia retrolental,
queratoconjuntivitis epidérmica, deficiencia de Vitamina A, uso
excesivo de lentes de contacto, queratitis atópica, queratitis
límbica superior, queratitis seca por pterigión, síndrome de
Sjogren, acné rosácea, filectenulosis, sífilis, infecciones por
micobacterias, degeneración de lípidos, quemaduras químicas, úlceras
bacterianas, úlceras fúngicas, infecciones por herpes simple,
infecciones por herpes zóster, infecciones protozoarias, sarcoma de
Kaposi, úlcera de Mooren, degeneración marginal de Terrien,
queratolisis marginal, trauma, lupus sistémico, poliarteritis,
sarcoidosis de Wegener, escleritis, enfermedad de
Stevens-Johnson, queratotomía radial, anemia de
células falciformes, sarcoide, pseudoxantoma elástico, enfermedad
de Paget, oclusión venosa, oclusión arterial, enfermedad
obstructiva de la carótida, uveitis crónica, vitritis crónica,
enfermedad de Lyme, enfermedad de Eales, enfermedad de Bechet,
miopía, fosetas papilares, enfermedad de Stargart, planitis del
disco ciliar, separación retinal crónica, síndromes de
hiperviscosidad, toxoplasmosis, complicaciones postlaséricas,
proliferación anormal de tejido fibrovascular, hemangiomas,
síndrome de Osler-Weber-Rendu,
síndrome de inmunodeficiencia adquirida, enfermedad neovascular
ocular, osteoartritis, inflamación crónica, enfermedad de Crohn,
colitis ulcerativa, psoriasis, aterosclerosis y penfigoide. Véase
la Patente de EE.UU. Nº 5.712.291.
La invención también es ampliamente aplicable a
la inhibición de crecimiento y la metástasis tumorales, la
reducción de la formación de tejido cicatrizal, la reducción de
complicaciones debidas a adhesión celular en trasplantes de órganos
y la inhibición de la adhesión y la movilidad de linfocitos.
Claims (17)
1. Un método in vitro para inhibir la
angiogénesis en un tumor o un tejido animal, que comprende poner en
contacto el tumor o el tejido animal con una cantidad eficaz para
inhibir la angiogénesis de una composición que comprende uno o más
monómeros de cadena \alpha NC1 de colágeno tipo IV seleccionados
del grupo que consiste en monómeros de cadena NC1 \alpha2 y
\alpha6.
2. Un método in vitro para inhibir la
interacción de células endoteliales con la matriz extracelular en
un tumor animal o un tejido animal que comprende poner en contacto
el tumor o el tejido animal con una cantidad eficaz para inhibir la
interacción de células endoteliales con la matriz extracelular de
una composición que comprende uno o más monómeros de cadena
\alpha NC1 de colágeno tipo IV seleccionados del grupo que
consiste en monómeros de cadena NC1 \alpha2 y \alpha6.
3. El método de acuerdo con la reivindicación 1 ó
2, en el que el monómero de cadena \alpha NC1 es el monómero de
cadena NC1 \alpha2.
4. El método de acuerdo con la reivindicación 1 ó
2, en el que el monómero de cadena \alpha NC1 es el monómero de
cadena NC1 \alpha6.
5. Una composición farmacéutica que comprende
a) uno o más monómeros de cadena \alpha NC1 de
colágeno tipo IV seleccionados del grupo que consiste en los
monómeros de cadena i) \alpha2 o ii) \alpha6; y
b) un portador farmacéuticamente aceptable.
6. La composición farmacéutica de acuerdo con la
reivindicación 5, en la que el monómero NC1 de colágeno tipo IV
está presente en una cantidad eficaz para inhibir la
angiogénesis.
7. La composición farmacéutica de acuerdo con la
reivindicación 6, en la que el monómero NC1 de colágeno tipo IV
está presente en una dosificación de entre 0,01 \mug/kg de peso
corporal y 10 \mug/kg de peso corporal.
8. La composición farmacéutica de acuerdo con la
reivindicación 7, en la que el monómero NC1 de colágeno tipo IV
está presente en una dosificación de entre 0,05 \mug/kg de peso
corporal y 5 mg/kg de peso corporal.
9. Uso de uno o más monómeros de cadena \alpha
NC1 de colágeno tipo IV para la preparación de una composición
farmacéutica para inhibir el crecimiento o la metástasis tumorales,
en el que el monómero se selecciona del grupo que consiste en los
monómeros de cadena i) \alpha2 o ii) \alpha6.
10. Uso de uno o más monómeros de cadena \alpha
NC1 de colágeno tipo IV para la preparación de una composición
farmacéutica para tratar una enfermedad o un estado mediados por
angiogénesis en un mamífero, en el que el monómero se selecciona
del grupo que consiste en los monómeros de cadena i) \alpha2 o ii)
\alpha6.
11. El uso de acuerdo con la reivindicación 10,
en el que la enfermedad o el estado mediados por angiogénesis se
seleccionan del grupo que consiste en tumores sólidos y
transportados por sangre, retinopatía diabética, artritis
reumatoide, neovascularización retinal, neovascularización coroidal,
degeneración macular, neovascularización corneal, retinopatía del
prematuro, rechazo de injertos corneales, glaucoma neovascular,
fibroplasia retrolental, queratoconjuntivitis epidérmica,
deficiencia de Vitamina A, uso excesivo de lentes de contacto,
queratitis atópica, queratitis límbica superior, queratitis seca
por pterigión, síndrome de Sjogren, acné rosácea, filectenulosis,
sífilis, infecciones por micobacterias, degeneración de lípidos,
quemaduras químicas, úlceras bacterianas, úlceras fúngicas,
infecciones por herpes simple, infecciones por herpes zóster,
infecciones protozoarias, sarcoma de Kaposi, úlcera de Mooren,
degeneración marginal de Terrien, queratolisis marginal, trauma,
lupus sistémico, poliarteritis, sarcoidosis de Wegener, escleritis,
enfermedad de Stevens-Johnson, queratotomía radial,
anemia de células falciformes, sarcoide, pseudoxantoma elástico,
enfermedad de Paget, oclusión venosa, oclusión arterial, enfermedad
obstructiva de la carótida, uveitis crónica, vitritis crónica,
enfermedad de Lyme, enfermedad de Eales, enfermedad de Bechet,
miopía, fosetas papilares, enfermedad de Stargart, planitis del
disco ciliar, separación retinal crónica, síndromes de
hiperviscosidad, toxoplasmosis, complicaciones postlaséricas,
proliferación anormal de tejido fibrovascular, hemangiomas,
síndrome de Osler-Weber-Rendu,
síndrome de inmunodeficiencia adquirida, enfermedad neovascular
ocular, osteoartritis, inflamación crónica, enfermedad de Crohn,
colitis ulcerativa, psoriasis, aterosclerosis y penfigoide.
12. El uso de acuerdo con la reivindicación 11,
en el que la enfermedad o el estado mediados por angiogénesis se
seleccionan del grupo que consiste en tumores sólidos y tumores
transportados por la sangre.
13. El uso de monómero de cadena \alpha3 NC1 de
colágeno tipo IV para la preparación de una composición farmacéutica
para tratar una enfermedad o un estado mediados por angiogénesis en
un mamífero, en donde la enfermedad o el estado mediados por
angiogénesis se seleccionan del grupo que consiste en retinopatía
diabética, artritis reumatoide, neovascularización retinal,
neovascularización coroidal, degeneración macular,
neovascularización corneal, retinopatía del prematuro, rechazo de
injertos corneales, glaucoma neovascular, fibroplasia retrolental,
queratoconjuntivitis epidérmica, deficiencia de Vitamina A, uso
excesivo de lentes de contacto, queratitis atópica, queratitis
límbica superior, queratitis seca por pterigión, síndrome de
Sjogren, acné rosácea, filectenulosis, sífilis, infecciones por
micobacterias, degeneración de lípidos, quemaduras químicas,
úlceras bacterianas, úlceras fúngicas, infecciones por herpes
simple, infecciones por herpes zóster, infecciones protozoarias,
sarcoma de Kaposi, úlcera de Mooren, degeneración marginal de
Terrien, queratolisis marginal, trauma, lupus sistémico,
poliarteritis, sarcoidosis de Wegener, escleritis, enfermedad de
Stevens-Johnson, queratotomía radial, anemia de
células falciformes, sarcoide, pseudoxantoma elástico, enfermedad de
Paget, oclusión venosa, oclusión arterial, enfermedad obstructiva
de la carótida, uveitis crónica, vitritis crónica, enfermedad de
Lyme, enfermedad de Eales, enfermedad de Bechet, miopía, fosetas
papilares, enfermedad de Stargart, planitis del disco ciliar,
separación retinal crónica, síndromes de hiperviscosidad,
toxoplasmosis, complicaciones postlaséricas, proliferación anormal
de tejido fibrovascular, hemangiomas, síndrome de
Osler-Weber-Rendu, síndrome de
inmunodeficiencia adquirida, enfermedad neovascular ocular,
osteoartritis, inflamación crónica, enfermedad de Crohn, colitis
ulcerativa, psoriasis, aterosclerosis y penfigoide.
14. La composición farmacéutica de acuerdo con
una cualquiera de las reivindicaciones 5-8, en la
que el monómero de cadena NC1 de colágeno tipo IV es \alpha2.
15. La composición farmacéutica de acuerdo con
una cualquiera de las reivindicaciones 5-8, en la
que el monómero de cadena NC1 de colágeno tipo IV es \alpha6.
16. El uso de las reivindicaciones
9-12, en el que el monómero es \alpha2.
17. El uso de las reivindicaciones
9-12, en el que el monómero es \alpha6.
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|---|---|---|---|
| US7978398P | 1998-03-27 | 1998-03-27 | |
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