ES2232827T3 - Composicion que contiene un material genetico. - Google Patents
Composicion que contiene un material genetico.Info
- Publication number
- ES2232827T3 ES2232827T3 ES95930018T ES95930018T ES2232827T3 ES 2232827 T3 ES2232827 T3 ES 2232827T3 ES 95930018 T ES95930018 T ES 95930018T ES 95930018 T ES95930018 T ES 95930018T ES 2232827 T3 ES2232827 T3 ES 2232827T3
- Authority
- ES
- Spain
- Prior art keywords
- gene
- composition
- genes
- transport
- fetus
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Expired - Lifetime
Links
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K48/00—Medicinal preparations containing genetic material which is inserted into cells of the living body to treat genetic diseases; Gene therapy
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
- Saccharide Compounds (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Confectionery (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
Abstract
COMPOSICION QUE CONTIENE MATERIAL GENETICO QUE INCLUYE GENES Y UN TRANSPORTADOR QUE PUEDE TRANSFERIR ESTOS DESDE EL CUERPO MATERNO A LAS CELULAS FETALES. LA COMPOSICION, CUANDO SE ADMINISTRA AL CUERPO MATERNO, SIRVE PARA PREVENIR EL NACIMIENTO DE NIÑOS QUE SUFRAN BORRADO GENICO Y PARA CURAR EL BORRADO GENICO DURANTE LA GESTACION. ES TAMBIEN POSIBLE DIRIGIR UN EXPERIMENTO ANIMAL PARA INTRODUCIR GENES DESCONOCIDOS EN UN ESTADO EMBRIONARIO Y CLARIFICAR LA FUNCION QUE DESEMPE¥AN EN EL DESARROLLO. LA COMPOSICION PUEDE UTILIZARSE TAMBIEN PARA LA CRIA DE ANIMALES, INDUSTRIA DE ANIMALES Y GANADO.
Description
Composición que contiene un material
genético.
La presente invención se refiere al uso de una
composición que contiene un gen, y más particularmente al uso de una
composición que contiene un gen para introducir un gen en fetos
llevado por sus madres preñadas para expresar el gen. La invención
también se refiere a una medicina para introducir un gen en un feto
incluyendo los de animales experimentales, reses y animales
industriales.
En años recientes, se han desarrollado diversos
métodos para introducir directamente genes foráneos en cuerpos de
animales o humanos con la esperanza de aplicarlos a la terapia
génica para tratar enfermedades causadas por anormalidades
genómicas.
Las enfermedades causadas por anormalidades
génicas congénitas tal como la deficiencia génica congénita se
tratan preferiblemente en la etapa prenatal. Con respecto a la
introducción de genes en los sujetos prenatales, la microinyección
en el huevo fertilizado en animales experimentales es el único
método que está actualmente disponible [Palmitter, R.D. &
Brinster, R.L.: Annu. Rev. Genet., 20, 465-499
(1986)].
Aunque el método de la microinyección aplicado al
huevo fertilizado abrió el camino para la introducción de genes en
la etapa embrionaria temprana, aun no se han desarrollado medios
para introducir genes foráneos en fetos. Además, el método de la
microinyección no se puede aplicar a la terapia génica de fetos en
el caso del embarazo humano.
Por consiguiente, un objetivo de la presente
invención es desarrollar un método para introducir genes foráneos en
fetos en una etapa de desarrollo, y otro objetivo de la invención es
proporcionar una composición que contiene un gen para usar en un
método tal.
Los inventores presentes llevaron a cabo diversos
estudios sobre medios para administrar los genes deseados a fetos a
través del cuerpo de su madre, y como resultado encontraron que
cuando los genes se administran a la madre junto con un medio de
transporte específico, pueden pasar a través de la membrana basal
placentaria, que sirve como una barrera sanguínea entre el feto y el
cuerpo de su madre, y que el gen se puede introducir en las células
fetales para expresarse in situ, llevando a la realización de
la invención.
Por consiguiente, la presente invención
proporciona el uso de una composición que contiene un gen según la
reivindicación 1.
La presente invención también proporciona una
medicina según la reivindicación 3. Adicionalmente, la
reivindicación 6 proporciona el uso de una
di-C_{10-20} alquilamida
glicilespermina.
La Fig. 1 muestra los resultados del análisis por
transferencia tipo Southern del ADN genómico de un feto y del hígado
materno después de la administración de la composición de la
presente invención.
La Fig. 2 muestra los resultados del análisis por
transferencia tipo Southern del ADN genómico de un feto y del hígado
materno después de la administración de un gen foráneo solo.
La Fig. 3 muestra los resultados del análisis por
transferencia tipo Southern del ADN genómico de un feto cuando la
composición se administra en los días 3, 6, 9, 12 y 15
post-coito.
La Fig. 4 muestra los resultados del análisis por
transferencia tipo Southern del ADN genómico extraído de un feto de
ratón, un ratón recién nacido y un ratón joven de un mes de edad
cuando la composición de la presente invención se administró a los
cuerpos de sus madres en el día 9 post-coito.
La Fig. 5 muestra los resultados del análisis por
transferencia tipo Southern del ADN genómico extraído de órganos del
ratón joven de un mes de edad mostrado en la Fig. 4.
La Fig. 6 muestra los resultados del análisis por
transferencia tipo Southern del ARN extraído de un feto de ratón y
de un ratón recién nacido cuando la composición de la presente
invención se administró a los cuerpos de sus madres en el día 9
post-coito.
La Fig. 7 muestra la actividad CAT
(colina-acetiltransferasa) de las proteínas
extraídas de un ratón y de un ratón recién nacido a los que se les
había introducido el gen SV40-CAT.
La Fig. 8 muestra los perfiles histoquímicos
obtenidos por tinción con X-gal, expresión de
\beta-actina-lacZ que se ha
introducido en los fetos administrando la composición de la presente
invención a sus madres en el día 8,5 post-coito.
La Fig. 9 muestra láminas de tejidos de fetos de
ratones en los que se expresa el
\beta-actina-lacZ que se había
introducido.
La Fig. 10 es una gráfica que muestra numero de
plaquetas de un ratón de dos semanas de edad y de su madre a la que
se le había introducido el gen
SR-\alpha-HST-1
(en los que la sangre se recogió del corazón).
La Fig. 11 es una gráfica que muestra número de
plaquetas de un ratón de tres semanas de edad y de su madre a la que
se le había introducido el gen
SR-\alpha-HST-1
(en los que la sangre se recogió de la vena orbital).
La Fig. 12 es una gráfica que muestra la
concentración de la proteína HST-1 en los sueros de
ratones de tres semanas de edad y de su madre a la que se le había
introducido el gen
SR-\alpha-HST-1.
En la presente invención, el término "medio de
transporte" se usa para referirse a sustancias que ayudan a que
el gen sea transportado a las células diana. El medio de transporte
usado en la presente invención es capaz de introducir genes desde el
cuerpo de la madre a las células de su feto. Más detalladamente, el
medio de transporte puede introducir genes en las células fetales
cuando se administra al cuerpo preñado que lleva el feto. El medio
de transporte es diC_{10-}C_{20} alquilamida glicilespermina. Se
prefiere particularmente dioctadecilamida glicilespermina.
Los genes usados en la presente invención no se
limitan particularmente siempre que se puedan usar en enfermedades
que se tratan o evitan preferiblemente durante la etapa fetal, o que
se puedan usar para la introducción de genes con el propósito de
criar animales industriales tales como animales para experimentación
y reses, así como animales de compañía.
Por ejemplo, cuando se ha confirmado que un feto
carece de un cierto gen o cuando está claro que un feto carece de un
cierto gen por su historia familiar, se pueden usar tales genes en
la presente invención. Además, también se pueden usar los genes para
tratar enfermedades congénitas que los fetos padecen.
La relación entre las enfermedades genéticas
congénitas y los genes deficientes que las producen se muestra en la
siguiente tabla.
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
(Tabla pasa a página
siguiente)
Además, la composición y el método de la presente
invención se pueden usar en modelos de introducción de genes
aplicándolos a animales con enfermedades genéticas espontáneas o
animales knockout (animales a los que se les ha forzado a tener
artificialmente disfunciones génicas). Además, en el tratamiento de
la hepatitis viral o de tumores malignos infantiles,
oligonucleótidos antisentido que suprimen los productos de genes
virales en presencia de hepatitis viral (A, B, o C) y otros
oligonucleótidos antisentido que reprimen la expresión de oncogenes
que generan tumores malignos infantiles tales como los tumores de
Wilm y neuroblastoma y genes que causan otras enfermedades.
Como ejemplos de genes que se introducen en
cuerpos de animales, tenemos (1) genes para producir productos
farmacéuticos en cuerpos animales, (2) genes para mejorar la calidad
de la carne, constitución física, piel, leche de animales, (3)
materiales génicos para estudiar la función de un gen suprimiendo o
introduciendo el gen en un animal vivíparo, y (4) materiales génicos
para restablecer la expresión del gen en un animal con deficiencia
génica que provoca la muerte fetal en el útero.
Los fetos incluyen los de mamíferos excepto
humanos tales como perros, bovinos, caballos, cabras, ovejas, monos,
gatos, cerdos, ratones, y ratas, así como los de humanos.
La forma de los genes que se ha de usar no se
limita particularmente. Sin embargo, los plásmidos que están
constituidos de manera que expresen los genes son particularmente
preferidos en vista de la facilidad de introducción y expresión. Es
más preferible una combinación de un activador fuerte y/o un
potenciador y un gen debido a que se promueve la expresión. Si se
usan activadores sumamente específicos de órganos, también puede ser
posible un llamado enfoque a órgano en el que los genes se expresan
en un órgano específico.
En la composición de la presente invención que
contiene el gen, pueden estar presentes un gen y un medio de
transporte en forma de una mezcla. Alternativamente, pueden estar
presentes en la forma en la que se mezclen un medio de transporte,
que está en estado de miscela, y un gen. Además, se pueden mezclar
un medio de transporte que ha formado un liposoma y un gen. Si un
medio de transporte ha formado un liposoma, es preferible que los
genes estén presentes en el interior del liposoma, en su membrana, o
en la superficie de la membrana. Ejemplos de métodos para formar
liposomas incluyen movimiento en torbellino, sonicación, evaporación
en fase reversa, liofilización, humidificación, métodos que usan
polioles, métodos mecánico-químicos, métodos de
disolución de lípidos y secado por pulverización. Cuando se preparan
los liposomas, se pueden añadir como componentes constituyentes de
la membrana fosfolípidos tales como
dimiristoil-fosfatidil-gliceroles,
fosfatidil-colinas,
fosfatidil-etanolaminas,
fosfatidil-inositoles, ácido fosfatídico, etc.,
colesteroles, \alpha-tocoferoles, fosfatos de
dicetilo y estearilaminas.
La proporción de un gen y un medio de trasporte
varía dependiendo de su identidad. En general, se prefiere que el
medio de transporte se incorpore en una cantidad de
1-100 nmol y particularmente 5-10
nmol por \mug de ADN.
La composición de la presente invención se
administra preferiblemente por inyección a un cuerpo preñado, y en
particular preferiblemente por inyección arterial o inyección
intravenosa. Además, la composición se puede administrar mediante un
catéter en el vaso sanguíneo de la madre. El tiempo para la
administración no se limita particularmente si es durante la preñez.
Sin embargo, se prefiere particularmente que la composición se
administre durante el periodo organogénico.
La composición de la presente invención, después
de administrarla al cuerpo materno, pasa a través de la membrana
basal de la placenta, después al cordón umbilical, y finalmente al
feto, introduciendo así los genes en las células fetales. Se ha
confirmado que los genes así introducidos están presentes y se
expresan en las células del recién nacido después de la
transferencia.
Por consiguiente, la composición de la presente
invención es útil en experimentos de introducción de genes en fetos,
y en la prevención y tratamiento de la deficiencia génica en fetos.
También, la composición es útil en la cría de animales industriales
y animales domésticos.
La presente invención se describirá a
continuación en mayor detalle por medio de ejemplos, que no se
deberían interpretar como limitantes de la invención.
Se usó un plásmido de
SV40-cloranfenicol acetiltransferasa (CAT) [4752bp,
producto de Promega].
Se usó dioctadecilamida glicilespermina (DOGS)
[Proc. Natl. Acad. Sci. USA 86 (1989) página 6983] (Transfectum,
producto de Biosepra Inc.).
A 133 \mug de un plásmido
SV40-CAT, se añadieron 250 \mul de una disolución
de NaCl 0,3M para preparar un disolución del plásmido.
Separadamente, se añadieron 20 \mul de etanol del 96% a 500 \mug
de DOGS y se incubó a temperatura ambiente durante 5 minutos. A la
disolución resultante se le añadieron 180 \mul de agua purificada
para preparar la disolución de DOGS. A una disolución que contenía
200 \mul de la disolución de DOGS y 250 \mul de agua purificada,
se le añadió la disolución del plásmido. La mezcla se agitó
mecánicamente en un mezclador vortex para obtener la composición de
la presente invención.
i) La composición preparada como se describió
anteriormente se inyectó en la vena de la cola de cada ratón hembra
preñada (peso corporal: aproximadamente 30 g, Charles River Co.) en
el día 9,5 post-coito (P.C.). Siete días después (en
el día 16,5 P.C.), se sacó el hígado materno. También se aisló el
feto por sección cesárea. Se extrajo el ADN genómico del hígado y
del feto, y se sometió a análisis por transferencia tipo Southern
para detectar la presencia de los genes CAT. Se recogió el ADN
genómico de acuerdo con el procedimiento descrito en Proc. Natl.
Acd. Sci. USA 83, 4993-4997 (1986). Se separaron por
electroforesis en gel de agarosa al 1% el ADN que se había digerido
completamente con la enzima de restricción Sa1I y aquel que no se
había digerido, y después se transfirieron sobre membrana de
Hybond-N+ nylon (producto de Amersham). Las manchas
se hibridaron usando un fragmento de SV40-CAT
marcado con ^{32}P (1908 bP, fragmento de Hind III) como una
sonda. Se detectaron bandas específicas en un autoradiograma.
Como resultado, se confirmó que un gen foráneo,
el plásmido SV40-CAT, se introdujo en las células
fetales como se muestra en la Fig. 1.
En la Fig. 1, las líneas 1 y 2 son de ADN
genómico procedente de los plásmidos SV40-CAT de
control (33 pg), las líneas 3 y 4 proceden de hígados maternos sin
tratar, las líneas 5 y 6 proceden de fetos sin tratar, las líneas 7
y 8 proceden de hígados maternos a los que se les administró la
composición de la presente invención, y las líneas 9 y 10 proceden
de fetos tratados.
ii) Los resultados que se muestran en la Fig. 2
se obtuvieron en un experimento en el que un solo plásmido
SV40-CAT se administró a ratones preñadas de una
manera parecida a la descrita anteriormente en i) sin mezclarlo con
un medio de transporte. A partir de la Fig. 2, es evidente que los
plásmidos SV40-CAT no se pudieron introducir
eficazmente en las células fetales en ausencia de un medio de
transporte. En la Fig. 2, las líneas 1 y 2 son de ADN genómico
procedente de los plásmidos SV40-CAT de control (33
pg), las líneas 3 y 4 proceden de hígados maternos a los que se les
administró solo plásmidos, y las líneas 5 y 6 proceden de sus
fetos.
iii) La Fig. 3 muestra los resultados obtenidos
en un experimento parecido al anterior i) en el que la composición
se administró a diferentes tiempos. A partir de la Fig. 3, es
evidente que prácticamente no se introdujeron genes cuando la
composición se administró durante un periodo desde el día 3 al día
6 P.C., que los genes llegaron a introducirse después de
aproximadamente el día 9 P.C., y que la eficacia en la introducción
de los genes fue mayor alrededor del día 9 P.C. En la Fig. 3, las
líneas 1 y 2 son de ADN genómico procedente de los plásmidos
SV40-CAT de control (33 pg), las líneas 3 y 4
proceden de fetos a los que se les introdujo el gen el día 3 P.C.,
las líneas 5 y 6 proceden de los del día 6 P.C., las líneas 7 y 8
proceden de los del día 9 P.C., las líneas 9 y 10 proceden de los
del día 12 P.C., y las líneas 11 y 12 proceden de los del día 15
P.C.
De una manera parecida a la descrita en el
Ejemplo 1, la composición de la presente invención obtenida en el
Ejemplo 1 (3) se administró a ratones en el día 9 P.C. El ADN
genómico se extrajo de los fetos en el día 16,5 P.C. de ratones
recién nacidos y de ratones de un mes de edad. Se llevó a cabo
análisis por transferencia tipo Southern.
Como resultado, se confirmó que estaban presente
los genes introducidos en todos los casos como se muestra en la Fig.
4. En la Fig. 4, las líneas 1 y 2 son de ADN genómico procedente de
los plásmidos SV40-CAT de control (33 pg), las
líneas 3 y 4 proceden de fetos del día 16,5 P.C., las líneas 5 y 6
proceden de ratones recién nacidos, las líneas 7 y 8 proceden de
ratones de un mes de edad. A continuación, el ADN genómico se
extrajo de una variedad de órganos de los ratones de un mes de edad
y se sometió a análisis por transferencia en ranura. Se encontró que
los genes se habían introducido en diversos órganos. En la Fig. 5,
la línea 1 es de ADN genómico procedente del cerebro, la línea 2 es
procedente de la glándula tiroides, la línea 3 es procedente del
timo, la línea 4 es procedente del corazón, la línea 5 es procedente
del pulmón, la línea 6 es procedente del hígado, la línea 7 es
procedente del bazo, la línea 8 es procedente del páncreas, la línea
9 es procedente del riñón, la línea 10 es procedente del intestino
delgado, la línea 11 es procedente del útero, y la línea 12 es
procedente del músculo.
Se confirmó la expresión del gen
SV40-CAT introducido como se ha descrito en el
Ejemplo 1-i) por análisis por transferencia tipo
Northern.
Brevemente, se extrajo el ARN de la totalidad de
los cuerpos de los fetos o ratones recién nacidos a los que se les
había introducido los genes de una manera parecida a la descrita en
el Ejemplo 1-i) usando isogen (producto de
Nippongene). El ARN (20 \mug) se separó por electroforesis en gel
de agarosa al 1%, y después se transfirió sobre una membrana de
nitrocelulosa (membrana de celulosa Nitroplus, producto de Micron
Separations Inc.). Se llevó a cabo la hibridación de una manera
parecida a la descrita en el Ejemplo 1, usando un fragmento de
SV40-CAT marcado con ^{32}P como una sonda. Como
resultado, se encontró transcripción a partir del gen introducido
al ARN en todos los fetos y ratones neonatos. En la Fig. 6, la línea
1 representa fetos sin tratar, la línea 2 representa fetos a los que
se les había introducido el gen, y la línea 3 representa ratones
recién nacidos a los que se les había introducido el gen.
A continuación, se extrajeron muestras de
proteínas procedentes de la totalidad de los cuerpos de los fetos y
ratones recién nacidos a los que se había introducido el gen como se
describe en el Ejemplo 1-i), y se ensayaron para la
expresión del gen foráneo, es decir, la actividad enzimática de CAT.
Brevemente, la cantidad de proteína en cada muestra se hizo igual
entre si, y las muestras se sometieron a un tratamiento térmico a
60ºC durante 5 minutos con el fin de desactivar el factor inhibidor
intrínseco de CAT. La actividad de CAT se ensayó por medios
conocidos (Zhu, N., Liggitt, D., Liu, Y. & Debs, R., Science
261, 209-211 (1993); y Gorman, C.M., Moffat, L.F.
& Howard, B.H., Mol. Cell. Biol. 2, 1044-1051
(1982)). La actividad enzimática se midió añadiendo 200 nmol de
acetil coenzima A a la cantidad final de 150 \mul de cloranfenicol
marcada con 0,1 \muCi de ^{14}C (55 mCi/mol).
Como resultado, la expresión del gen introducido
se confirmó en todos los fetos y ratones recién nacidos, lo que
demuestra que se había introducido la proteína CAT. En la Fig. 7, la
línea 1 representa fetos sin tratar, la línea 2 representa fetos a
los que se les había introducido el gen foráneo, la línea 3
representa ratones recién nacidos a los que se les había introducido
el gen foráneo, y la línea 4 representa el CAT control de 0,2 \muU
de CAT como control.
Como un plásmido a introducir, se usó un plásmido
lacZ que contenía un activador de \beta-actina de
pollo (Sakura, H. et al., Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 86,
5758-5762 (1989). Se preparó una composición según
la presente invención de manera parecida a la descrita en el Ejemplo
1(3) usando 133 \mug de un plásmido lacZ y 400 nmol de
DOGS.
La composición así obtenida se inyectó en la vena
de la cola de cada ratón hembra preñada en el día 8,5 P.C. para
introducir el gen. El feto se aisló en el día 10,5 P.C. Se empleó un
método de Cheng para detectar la actividad de
\beta-actin-lacZ por tinción con
X-gal (Cheng, T.C., Wallace, M.C., Merlie, J.P.
& Olsow, E.N., Science 261, 215-218 (1993)). Las
láminas congeladas se prepararon después de que el feto teñido se
hubiese empapado en disolución salina tamponada con fosfato a 4ºC
que contenía 20% de sacarosa y 0,2% de dextrosa. Las láminas
continuas se cortaron a un grosos de 30 \mum, y se seleccionaron
las láminas adecuadas para contra-tinción con rojo
nuclear rápido. Se observaron los perfiles de las láminas.
Los resultados de la tinción total de los cuerpos
de los ratones a los que se les había introducido el gen se
muestran en la Fig. 8, y los resultados de la tinción de las láminas
se muestran en la Fig. 9. Como se muestra en estas figuras, la
actividad de \beta-actin-lacZ se
expresó ampliamente en diversos órganos de los fetos. En la Fig. 8,
a-e muestran fetos a los que se había introducido el
gen, y f muestra un feto control sin tratar. En la Fig. 9, g muestra
una lámina del cuerpo completo del corte de un feto en la dirección
longitudinal, h muestra una lámina del corte frontal del cuerpo
completo del corte de un feto a través del corazón, i muestra una
lámina de la vesícula óptica derecha (ampliada), j muestra una
lámina del brote pancreático (ampliada), k muestra una lámina del
brote del miembro delantero izquierdo (ampliada), FB indica el
cerebro anterior, H indica el corazón, MT indica los túbulos
mesonéfricos, Nc indica el notocordio, IRS indica el espacio
intra-retiniano, PB indica el brote pancreático, D
indica la orientación dorsal, y V indica la orientación ventral.
Como gen que se ha de introducir, se usó un gen
HST-1. Para usarlo, se compuso el vector de
expresión recombinante que contenía HST-1, cADN y
activador SR-\alpha, y se administró a un cuerpo
preñado. Se estudiaron los ratones descendientes en relación a si se
había expresado el gen HST-1. Puesto que se sabe que
el efecto del gen HST-1 es aumentar el número de
plaquetas, se determinó la presencia o ausencia de expresión
contando el número de plaquetas.
Se usó un plásmido de expresión que contenía un
gen HST-1 ligado con un activador
SR-\alpha.
Se repitió el procedimiento del Ejemplo
1(3) excepto que se usaron 133 \mug del gen
SR-\alpha-HST-1.
Se inyectó la composición preparada como se
describió anteriormente en la vena de la cola de cada ratón hembra
preñada en el día 10,5 P.C. para introducir el gen. Se midió el
número de plaquetas de los ratones descendientes en la semana 2 y la
semana 3 después de su nacimiento. Al mismo tiempo, también se midió
el número de plaquetas de sus madres. Los resultados se muestran en
la Figuras 10 y 11. La Figura 10 muestra los resultados de la sangre
recogida del corazón, y la Fig. 11 muestra los de la sangre recogida
de la vena orbital.
A partir de estos resultados, está claro que el
número de plaquetas de los jóvenes ratones a los que se les
introdujo el gen HST-1 era mayor que el de los
ratones de control. Esto demuestra que el gen HST-1
se introdujo en los jóvenes ratones y que el gen se expresó en los
ratones.
Se midió la proteína HST-1 en
suero de ratones de tres semanas de edad por la prueba ELISA.
Brevemente, se llevó a cabo la prueba ELISA, usando 50 \mul de
suero recogido de cada uno de los ratones de tres semanas de edad
por métodos conocidos, para medir la cantidad de proteína
HST-1 (proc. Natl. Acad. Sci. USA, vol. 91, páginas
12368-12372, diciembre 1944). Los resultados se
muestran en la Fig. 12. Los datos en la Fig. 12 muestran que se
detectó la proteína HST-1 en la sangre de los
jóvenes ratones nacidos a cuyas madres se le introdujo el gen
HST-1.
Cuando la composición de la presente invención se
administra a un cuerpo preñado, se puede tratar la deficiencia
génica durante la preñez. En experimentos con animales, cuando un
gen desconocido se introduce en animales durante su etapa
embrionaria, se puede estudiar la función del gen en ontogénesis.
Además, se puede usar la composición para producir sustancias
fisiológicamente activas tales como productos farmacéuticos en
cuerpos de animales o aumentar la producción de tales sustancias.
Así, es posible criar animales mejorando su constitución física,
calidad de la carne, leche o pieles.
Claims (6)
1. Uso de una composición que contiene un gen que
comprende
- (a)
- un gen y
- (b)
- di-C_{10-20}alquilamida glicilespermina como un medio de transporte capaz de transportar el gen desde el cuerpo materno a las células fetales,
para la fabricación de una medicina
administrada a un cuerpo
preñado
- -
- para la prevención y el tratamiento de una deficiencia génica de un feto, o
- -
- para la crianza de animales no humanos
con la condición de que se excluyan
los procedimientos para modificar la identidad genética de la línea
germinativa de los seres humanos y los procedimientos para modificar
la identidad genética de los animales que es probable que les cause
sufrimiento sin beneficio medico sustancial al hombre o
animal.
2. El uso según la reivindicación 1, en el que el
medio de transporte es dioctadecilamida glicilespermina.
3. Una medicina para inyectar en un cuerpo
preñado que lleva un feto para transportar un gen desde el cuerpo
preñado a las células fetales, comprendiendo dicha medicina
- (a)
- un gen y
- (b)
- di-C_{10-20}alquilamida glicilespermina como un medio de transporte capaz de transportar el gen desde el cuerpo materno a las células fetales,
en el que el medio de transporte
está contenido en una cantidad de 1 a 100 nmol por \mug de
ADN.
4. La medicina según la reivindicación 3, que se
obtiene mezclando una disolución que contiene el gen y una
disolución que contiene dioctadecilamida glicilespermina y agitando
con agitación mecánica.
5. La medicina según la reivindicación 3 ó 4 en
la que la diC_{10}-C_{20} alquilamida
glicilespermina es dioctadecilamida glicilespermina.
6. Uso de
di-C_{10-20} alquilamida
glicilespermina para la fabricación de una medicina según una
cualquiera de las reivindicaciones 3 a 5.
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP24946994 | 1994-10-14 | ||
| JP24946994 | 1994-10-14 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| ES2232827T3 true ES2232827T3 (es) | 2005-06-01 |
Family
ID=17193428
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| ES95930018T Expired - Lifetime ES2232827T3 (es) | 1994-10-14 | 1995-08-31 | Composicion que contiene un material genetico. |
Country Status (14)
| Country | Link |
|---|---|
| US (2) | US6060081A (es) |
| EP (1) | EP0782862B1 (es) |
| JP (1) | JP3887017B2 (es) |
| CN (1) | CN1166788A (es) |
| AT (1) | ATE280589T1 (es) |
| AU (1) | AU710583B2 (es) |
| BR (1) | BR9509512A (es) |
| CA (1) | CA2202529A1 (es) |
| DE (1) | DE69533701T2 (es) |
| DK (1) | DK0782862T3 (es) |
| ES (1) | ES2232827T3 (es) |
| NZ (2) | NZ334479A (es) |
| PT (1) | PT782862E (es) |
| WO (1) | WO1996011713A1 (es) |
Families Citing this family (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP1939287B1 (en) * | 2005-08-12 | 2016-11-23 | Fuso Pharmaceutical Industries, Ltd. | Gene transfer method specific to trophectodermal cell |
| EP2004821A4 (en) * | 2006-03-23 | 2009-03-25 | Univ Michigan | COMPOSITIONS AND METHOD FOR PRODUCING TRANSGENERED ANIMALS |
| US20090235373A1 (en) * | 2007-02-08 | 2009-09-17 | The Regents Of The University Of Michigan | Method of delivery of nucleic acids to a developing embryo |
| CN105561337B (zh) * | 2014-10-28 | 2020-06-26 | 江苏命码生物科技有限公司 | 胎盘通透性小rna及其应用 |
Family Cites Families (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| FR2645866B1 (fr) * | 1989-04-17 | 1991-07-05 | Centre Nat Rech Scient | Nouvelles lipopolyamines, leur preparation et leur emploi |
| WO1995002698A1 (en) * | 1993-07-12 | 1995-01-26 | Life Technologies, Inc. | Composition and methods for transfecting eukaryotic cells |
| FR2714830B1 (fr) * | 1994-01-10 | 1996-03-22 | Rhone Poulenc Rorer Sa | Composition contenant des acides nucléiques, préparation et utilisations. |
| US5928944A (en) * | 1994-02-04 | 1999-07-27 | The United States Of America As Represented By The Department Of Health And Human Services | Method of adenoviral-medicated cell transfection |
-
1995
- 1995-08-31 NZ NZ334479A patent/NZ334479A/xx unknown
- 1995-08-31 CN CN95195651A patent/CN1166788A/zh active Pending
- 1995-08-31 ES ES95930018T patent/ES2232827T3/es not_active Expired - Lifetime
- 1995-08-31 BR BR9509512A patent/BR9509512A/pt not_active Application Discontinuation
- 1995-08-31 US US08/817,093 patent/US6060081A/en not_active Expired - Fee Related
- 1995-08-31 AT AT95930018T patent/ATE280589T1/de not_active IP Right Cessation
- 1995-08-31 EP EP95930018A patent/EP0782862B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1995-08-31 CA CA002202529A patent/CA2202529A1/en not_active Abandoned
- 1995-08-31 JP JP51308596A patent/JP3887017B2/ja not_active Expired - Fee Related
- 1995-08-31 PT PT95930018T patent/PT782862E/pt unknown
- 1995-08-31 DK DK95930018T patent/DK0782862T3/da active
- 1995-08-31 WO PCT/JP1995/001734 patent/WO1996011713A1/ja not_active Ceased
- 1995-08-31 AU AU33547/95A patent/AU710583B2/en not_active Ceased
- 1995-08-31 NZ NZ291892A patent/NZ291892A/en unknown
- 1995-08-31 DE DE69533701T patent/DE69533701T2/de not_active Expired - Fee Related
-
1999
- 1999-12-30 US US09/475,086 patent/US6471990B1/en not_active Expired - Fee Related
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN1166788A (zh) | 1997-12-03 |
| NZ334479A (en) | 2000-10-27 |
| WO1996011713A1 (fr) | 1996-04-25 |
| NZ291892A (en) | 1999-04-29 |
| MX9702725A (es) | 1997-07-31 |
| EP0782862A1 (en) | 1997-07-09 |
| DK0782862T3 (da) | 2005-01-03 |
| AU710583B2 (en) | 1999-09-23 |
| EP0782862A4 (en) | 2001-07-18 |
| US6060081A (en) | 2000-05-09 |
| DE69533701D1 (de) | 2004-12-02 |
| PT782862E (pt) | 2005-02-28 |
| US6471990B1 (en) | 2002-10-29 |
| AU3354795A (en) | 1996-05-06 |
| DE69533701T2 (de) | 2005-04-07 |
| JP3887017B2 (ja) | 2007-02-28 |
| CA2202529A1 (en) | 1996-04-25 |
| ATE280589T1 (de) | 2004-11-15 |
| BR9509512A (pt) | 1997-12-30 |
| EP0782862B1 (en) | 2004-10-27 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Tsukamoto et al. | Gene transfer and expression in progeny after intravenous DNA injection into pregnant mice | |
| Dai et al. | Gene therapy via primary myoblasts: long-term expression of factor IX protein following transplantation in vivo. | |
| Magram et al. | Developmental regulation of a cloned adult β-globin gene in transgenic mice | |
| Khillan et al. | Transgenic mice that express a mini-gene version of the human gene for type I procollagen (COL1A1) develop a phenotype resembling a lethal form of osteogenesis imperfecta. | |
| Enver et al. | The human beta-globin locus activation region alters the developmental fate of a human fetal globin gene in transgenic mice. | |
| Braun et al. | Targeted inactivation of the muscle regulatory gene Myf-5 results in abnormal rib development and perinatal death | |
| Goeman et al. | Molecular imaging of nuclear factor-Y transcriptional activity maps proliferation sites in live animals | |
| US6087554A (en) | Transgenic animals for the determination of agents which stimulate or repress epidermal hyperproliferation and hair growth | |
| Maschio et al. | Transgenic mice carrying the guinea-pig α-lactalbumin gene transcribe milk protein genes in their sebaceous glands during lactation | |
| ES2232827T3 (es) | Composicion que contiene un material genetico. | |
| Poole | Dermal-epidermal interactions and the action of alleles at the agouti locus in the mouse | |
| Faust et al. | Differential activity of the-2.7 kb chicken lysozyme enhancer in macrophages of different ontogenic origins is regulated by C/EBP and PU. 1 transcription factors | |
| JPWO1996011713A1 (ja) | 遺伝子物質含有組成物 | |
| Asante et al. | Tissue specific expression of an α-skeletal actin-lacZ fusion gene during development in transgenic mice | |
| JP2002512021A (ja) | トランスジェニックヒツジから得られるヒト胆汁酸塩−刺激リパーゼ（ｂｓｓｌ） | |
| KR100408429B1 (ko) | 유즙 중에 인간 과립구 콜로니 자극인자를 생산하는형질전환 흑염소 | |
| Gardmo et al. | In vivo transfection of rat liver discloses binding sites conveying GH-dependent and female-specific gene expression | |
| HUANG et al. | A conserved GATA motif in a tissue-specific DNase I hypersensitive site of the cardiac α-myosin heavy chain gene | |
| MXPA97002725A (es) | Composiciones que contiene gen | |
| CN116058335A (zh) | 一种自发强直性脊柱炎模型的构建方法和应用 | |
| Yoon et al. | Successful gene transfer in fish | |
| Rottmann et al. | Tissue specific expression of hepatitis B surface antigen in mice following liposome—mediated gene transfer into blastocysts | |
| Wilmut | Methods for genetic modification in farm animals and humans: present procedures and future opportunities | |
| Marx | The 23-million-dollar quest pays off | |
| Susi | Synthesis and fate of glycoprotein in rat oral mucosa as observed by light and electron microscopic radioautography with L-fucose-H3 |