ES2235320T3 - Composicion farmaceutica que comprende liposomas liofilizados que encapsulan un principio activo que es muy insoluble en agua, y procedimiento para la preparacion de dicha composicion. - Google Patents
Composicion farmaceutica que comprende liposomas liofilizados que encapsulan un principio activo que es muy insoluble en agua, y procedimiento para la preparacion de dicha composicion.Info
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Abstract
Se presenta una composición liofilizada que comprende trehalosa y liposomas lípidos en la cual se ha incorporado un principio biológicamente activo, que se caracteriza en que el principio biológicamente activo es altamente insoluble en agua, la relación de peso de trehalosa/lípido es = 1,5, y toda la trehalosa se añade al exterior de los liposomas ya formados antes de la liofilización.
Description
Composición farmacéutica que comprende liposomas
liofilizados que encapsulan un principio activo que es muy insoluble
en agua, y procedimiento para la preparación de dicha
composición.
La invención se refiere a una composición
farmacéutica que comprende liposomas liofilizados que encapsulan un
principio biológicamente activo que es muy insoluble en agua, y un
procedimiento para la preparación de dicha composición.
Más particularmente, la invención se refiere a
una composición farmacéutica que comprende liposomas
liofiliza-
dos que encapsulan un principio biológicamente activo que es muy insoluble en agua y que es estable a lo largo del
tiempo.
dos que encapsulan un principio biológicamente activo que es muy insoluble en agua y que es estable a lo largo del
tiempo.
A lo largo de la presente descripción y en las
reivindicaciones, el término "muy insoluble en agua" se usa
para describir todos aquellos compuestos que presentan una
solubilidad en agua en agua \leq0,01% (p/v).
Es conocido que el uso de liposomas en los
tratamientos médicos se ha visto frenado por las dificultades para
encontrar preparaciones farmacéuticas que fueran suficientemente
estables tanto durante la liofilización como a lo largo del tiempo.
Dichas dificultades consisten, sobre todo, en la preparación de
liposomas que ni estallen ni se agrupen. En otras palabras, los
liposomas deben mantenerse enteros e independientes entre sí.
La integridad estructural de los liposomas
también resulta particularmente importante en el caso en que el
principio activo sea muy insoluble en agua. De hecho, el estallido
de los liposomas durante la liofilización y/o durante la
conservación no impide que los principios activos solubles en agua,
entren en la solución cuando la solución acuosa de liposomas se
reconstituye antes de su administración al paciente añadiendo una
solución fisiológica. Por otro lado, en el caso del estallido de los
liposomas que contienen unos principios activos que son muy
insolubles en agua la reconstitución del liofilizado da lugar a una
solución que comprende menos principio activo del necesario. Cuanto
mayor sea la cantidad de liposomas que hayan estallado, mayor será
la diferencia entre la cantidad teórica y la cantidad real de
principio activo que haya en la solución.
En el documento
US-A-4.857.319 se describe un
procedimiento de liofilización de liposomas que comprenden un
principio biológicamente activo soluble en agua. Este documento
describe la liofilización de liposomas que presentan preferentemente
un tamaño medio comprendido aproximadamente entre 50 y 100 nm, con
la adición, como agente conservante, de un disacárido sólo en el
interior (con el contenido encapsulado del liposoma), o sólo en el
exterior, o tanto en el interior como en el exterior. La relación
entre pesos de disacáridos/lípidos está comprendida entre 0,1:1 y
4:1. Preferiblemente, el disacárido es trehalosa. La fase de
congelación se realiza a la temperatura del nitrógeno líquido
(-195,8ºC).
En la patente mencionada anteriormente se
evaluaron las características de estabilidad durante la
liofilización a través de la medición de la retención del principio
activo encapsulado en los liposomas después de la reconstitución del
liofilizado mediante rehidratación.
En la Tabla 2 de la patente mencionada
anteriormente se demuestra que la retención es alta (99%-100%)
únicamente cuando la relación entre trehalosa/lípido es mayor de
1,76 y la trehalosa se encuentra presente tanto en el interior como
en el exterior de los liposomas. Cuando dicha relación es igual a
0,11 y a 0,19, la retención es igual al 22% y al 49%,
respectivamente, incluso si la trehalosa se encuentra presente tanto
en el interior como en el exterior de los liposomas. Por el
contrario, cuando la trehalosa se encuentra presente sólo en el
exterior la cantidad de principio activo retenido se reduce
drásticamente, incluso en el caso de cantidades muy grandes de
trehalosa. De hecho, con una relación trehalosa/lípido de 3,9 la
cantidad retenida es sólo del 26%.
No obstante, los resultados mencionados
anteriormente no son reproducibles cuando el principio
biológicamente activo es muy insoluble en agua. De hecho, cuando se
añade trehalosa durante la preparación de los liposomas para
encapsular en su interior las vesículas lipídicas se obtiene una
solución no homogénea y no extruíble (Preparaciones para las
comparaciones 1 y 2).
Sorprendentemente, se ha descubierto que los
liposomas que comprenden un principio biológicamente activo que sea
muy insoluble en agua se mantienen sustancialmente enteros durante
la liofilización únicamente cuando se añade trehalosa en cantidades
pequeñas a los liposomas antes de la liofilización, y dicha
liofilización se efectúa cuando se realiza la fase de congelación a
una temperatura comprendida entre -5º y -70ºC.
Un objetivo de la presente invención proporcionar
una composición liofilizada que comprende trehalosa y liposomas
lipídicos, en la que se ha incorporado el principio biológicamente
activo, caracterizado porque el principio biológicamente activo es
muy insoluble en agua, la relación trehalosa/lípido es de \leq1,5,
y toda la trehalosa se añadió en el exterior de los liposomas que ya
se habían formado antes de la liofilización.
Después de la reconstitución mediante
rehidratación, dicha composición conserva en la solución más del 95%
del principio biológicamente activo que es muy insoluble en agua
(Ejemplos 1, 2 y 3).
Los ejemplos típicos de los principios
biológicamente activos que son muy insolubles en agua son
lonidamina, melatonina, ciclosporina A y bindarit.
Los lípidos de la composición de liposomas que se
van a someter al procedimiento de liofilización según la invención
se seleccionan preferiblemente de entre el grupo constituido por
fosfoglicéridos, glicéridos, diglicéridos, triglicéridos,
fosfolípidos, y lípidos galactosil y glicosil, colesterol y sus
derivados, esfingolípidos y sus mezclas. Preferiblemente, los
lípidos son fosfolípidos. A su vez, la relación de peso
trehalosa/lípidos preferiblemente se encuentra entre 1:2 y 1:1.
El tamaño medio de los liposomas puede estar
comprendido entre 50 y 250 nm. Preferiblemente, entre 50 y
\hbox{100 nm.}
Un segundo objetivo de la invención consiste en
un procedimiento de liofilización que se caracteriza porque:
1) se añaden entre 0,2 a 1,5 partes en peso de
trehalosa por cada parte de peso de los lípidos en una composición
acuosa de liposomas en la que el tamaño medio de los liposomas está
comprendido entre 50 y 250 nm, comprendiendo dichos liposomas un
principio biológicamente activo que es muy insoluble en agua,
2) dicha composición se enfría mediante una placa
de enfriamiento del liofilizador hasta una temperatura comprendida
entre -5º y -70ºC, a una velocidad de enfriamiento comprendida entre
0,5º y 2ºC/min;
3) una vez que se alcanza la temperatura de
congelación predeterminada, dicha composición se conserva a dicha
temperatura durante un periodo comprendido entre 2 y 5 horas;
4) se aplica un vacío comprendido entre 5 x
10^{-1} y 8 x 10^{-2} milibares, dejando la temperatura de la
placa de en-
friamiento en la temperatura de enfriamiento definida en el punto 2) durante un periodo comprendido entre 2 y 5 horas;
friamiento en la temperatura de enfriamiento definida en el punto 2) durante un periodo comprendido entre 2 y 5 horas;
5) la temperatura de la placa de enfriamiento se
lleva hasta -15ºC, manteniéndose así hasta que se ha eliminado el
agua completamente.
Las condiciones de funcionamiento preferidas son
las siguientes:
Fase
2
Temperatura de congelación: -20º a -30ºC
Velocidad de enfriamiento: 0,77ºC/min.
Fase
3
Tiempo:3 horas
Fase
4
Vacío: 6 x 10,2 milibares
Fase
5
a) Cuando la temperatura de congelación (Fase 2)
es inferior a -15ºC, la temperatura de la placa de enfriamiento se
aumenta hasta -15ºC a una velocidad comprendida entre 0,5º y 2ºC y
la liofilización tiene lugar durante 20 horas, a continuación la
temperatura de la placa de enfriamiento se lleva hasta -10ºC, y
después de una hora hasta +5ºC, y se produce la liofilización
durante 16 horas.
b) Cuando la temperatura de congelación (Fase 2)
es mayor o igual a -15ºC, la liofilización continúa durante 20
horas, después de lo cual la temperatura de la placa de enfriamiento
se lleva hasta +5ºC y la liofilización se produce durante 16
horas.
Una composición de liposomas particularmente
preferida según la invención comprende:
| Componente | % (p/p) | |
| Fosfatidilcolina | 94 | |
| Lisofosfatldilcolina | 3 | |
| N-acil-etanolamina | 1 | |
| Fosfatidiletanolamina | 0,1 | |
| Triglicéridos | 1 | |
| Ácidos grasos libres | 0,75 | |
| DL-\alpha-tocoferol | 0,15 |
Típicamente, la composición farmacéutica acuosa
de liposomas de la invención se prepara mediante
a) la dispersión del principio biológicamente
activo que es muy insoluble en agua en lípidos a una temperatura
comprendida entre 20º y 30ºC;
b) la suspensión de dicha dispersión en la fase
acuosa;
c) el reposo de dicha suspensión a temperatura
ambiente durante un periodo comprendido entre 0 y 48 horas;
d) el calentamiento hasta entre 30º y 75ºC
durante un periodo de 10 a 40 minutos;
e) la congelación hasta entre -150º y -200ºC;
f) la repetición de las fases d) y e) por lo
menos dos veces y no más de 8 veces;
g) la filtración a través de una membrana de
filtración con un tamaño de poros comprendido entre 500 y 1000 nm de
diámetro;
h) la extrusión a través de una membrana con unos
poros de entre 50 y 400 nm de diámetro, y simultáneamente
i) la eliminación del principio activo que no ha
quedado atrapado.
La duración de la fase c) depende de la cantidad
del principio activo muy insoluble en agua que se desee que quede
atrapada en los liposomas. Un experto en la materia, por tanto, no
tendrá dificultades para determinar mediante algunos sencillos
experimentos rutinarios el tiempo adecuado para cada tipo de
composición de principio activo y lipo-
somas.
somas.
Preferiblemente, la fase acuosa comprende entre
0,05% y 0,9% (p/v) de una solución acuosa de cloruro sódico.
Típicamente, la cantidad de lípidos usados está comprendida entre
0,01 y 0,4 partes en peso por cada parte en peso de solución acuosa.
A su vez, la cantidad del principio activo en general se encuentra
entre 0,01 y 0,3 partes en peso por cada parte en peso de los
lípidos.
En general, la extrusión se efectúa usando un gas
de extrusión, ya sea aire comprimido o un gas inerte elegido entre
el grupo que comprende nitrógeno, helio y argón. Preferiblemente, el
helio es el gas inerte. La presión de la fase de extrusión está
comprendida preferiblemente entre 500 y 5500 kPa, y la temperatura
preferiblemente está comprendida entre 20º y 75ºC, aún más
preferiblemente entre 40º y 65ºC. Los ejemplos típicos de los
extrusores adecuados son de tipo Lipex Biomembranes Thermobarrel
Extruder, o el Emulsiflex CC Avestin con membrana Costar^{TM} de
policarbonato con poros de entre 50 y 600 nm de diámetro.
Procediendo tal como se ha descrito
anteriormente, se obtienen composiciones acuosas de liposomas que
contienen aproximadamente 8 mg/ml de melatonina, 3,8 mg/ml de
lonidamina, 1 mg/ml de ciclosporina A y 4 mg/ml de bindarit frente a
una solubilidad en agua de 3 x 10^{-3} mg/ml (lonidamina), 1 x
10^{-1} mg/ml (bindarit) y, prácticamente, la insolubilidad
absoluta de melatonina (G.S. Shida et al. "J. Pineal
Res," 1994, 16, 198-201) y de ciclosporina
A ["insoluble en agua", monografía de ciclosporina A en
"Analytical Profiles of Drug Substances", 16,
163,
(1987)].
(1987)].
Los ejemplos siguientes servirán para ilustrar la
presente invención pero no la limitarán en modo alguno.
Composición
I
Se preparó una composición de liposomas que
comprende un principio biológicamente activo que es muy insoluble en
agua como se describe a continuación,
Se dispersaron 100 mg de melatonina en 1 g de
fosfolípidos a 30ºC durante 10 minutos mediante un homgenizador tipo
Ultraturrax^{TM}. Inmediatamente a continuación dicha dispersión
se suspendió en 10 ml de una solución acuosa 0,9% (p/v) de cloruro
sódico mediante el mencionado homogenizador y después se calentó en
un baño de agua a 55ºC durante 20 minutos.
La suspensión así obtenida se sometió al
siguiente ciclo de enfriamiento y calentamiento:
- enfriamiento en nitrógeno líquido durante 1
minuto,
- calentamiento a 55ºC hasta la fluidificación
completa de los fosfolípidos.
Dicho ciclo se repitió 6 veces.
La suspensión se hizo pasar dos veces a través de
un filtro de 0,6 \mum usando un dispositivo Lipex
Biomembranes.
De esta manera se obtuvo una suspensión
"Multilamellar Large Vesicle" (MLV) que se sometió a 6 ciclos
de extrusión continua usando un extrusor de tipo Lipox Biomembranes
Thermobarrel de 10 ml con filtros de policarbonato de 0,1 \mum
Costar^{TM} a 55ºC, usando helio como gas de extrusión a una
presión entre 1000 y 4800 kPa.
Composición
II
Procedimos como se describe para la Composición
I, usando 2 g de fosfolípidos y 50 mg de lonidamina en lugar de 1 g
de fosfolípidos y 100 mg de melatonina.
Composición
III
Procedimos como se describe para la Composición
I, usando 2 g de fosfolípidos y 200 mg de melatonina en lugar de 1 g
de fosfolípidos y 100 mg de melatonina.
Composición
IV
Procedimos como se describe para la Composición
II, excepto que la extrusión se realizó a través de una membrana de
policarbonato de 0,2 \mum en lugar de una membrana de
policarbonato de 0,1 \mum.
Composición
V
Se dispersaron 30 mg de ciclosporina A en 2 g de
fosfolípidos a 30ºC durante 10 minutos mediante un homogenizador de
tipo Ultraturrax^{TM}. Inmediatamente a continuación dicha
dispersión se suspendió en una solución acuosa 0,9% (p/v) de cloruro
sódico mediante el mencionado homogenizador, y se dejó reposar a
temperatura ambiente durante 24 horas. Después, la suspensión
obtenida se calentó en un baño de agua a 65ºC durante 20
minutos.
La suspensión así obtenida se sometió al
siguiente ciclo de enfriamiento y calentamiento:
- enfriamiento en nitrógeno líquido durante 1
minuto,
- calentamiento a 65ºC hasta la fluidificación
completa de los fosfolípidos.
Dicho ciclo se repitió 6 veces.
La suspensión se hizo pasar dos veces a través de
un filtro de 0,6 \mum usando un dispositivo Lipex
Biomembranes.
De esta manera se obtuvo una suspensión
"Multilamellar Large Vesicle" (MLV) que se sometió a 6 ciclos
de extrusión continua usando un extrusor de tipo Lipox Biomembranes
Thermobarrel de 10 ml con filtros de policarbonato de 0,1 \mum
Costar^{TM} a 65ºC, usando helio como gas de extrusión a una
presión entre 1000 y 4800 kPa.
Composición
VI
Procedimos según se describe para la Composición
1, usando 2 g de fosfolípidos y 50 mg de bindarit en lugar de 1 g de
fosfolípidos y 100 mg de melatonina.
Composición
1A
Se dispersaron 100 mg de melatonina y 1 g de
trehalosa en 1 g de fosfolípidos a 30ºC durante 10 minutos mediante
un homogenizador tipo Ultraturrax^{TM}. Inmediatamente a
continuación dicha dispersión se suspendió en 10 ml de una solución
acuosa 0,9% (p/v) de cloruro sódico mediante el mencionado
homogenizador y después se calentó en un baño de agua a 55ºC durante
20 minutos.
La suspensión así obtenida se sometió al
siguiente ciclo de enfriamiento y calentamiento:
- enfriamiento en nitrógeno líquido durante 1
minuto,
- calentamiento a 55ºC hasta la fluidificación
completa de los fosfolípidos.
El ciclo mencionado se repitió 6 veces.
La suspensión se hizo pasar dos veces a través de
un filtro de 0,6 \mum usando un dispositivo Lipex
Biomembranes.
De esta manera, se obtuvo una masa muy densa. El
intento de extruirla mediante un extrusor de tipo Lipox Biomembranes
Thermobarrel de 10 ml con filtros de policarbonato Costar^{TM} de
0,1 \mum a 55ºC usando helio como gas de extrusión a una presión
entre 1000 y 4800 kPa no tuvo éxito.
Composición
1B
Procedimos como se describe en la Composición 1 A
precedente, excepto que se omitió la melatonina. Se obtuvo una
suspensión "Multilamellar Large Vesicle" (MLV) que se volvió
perfectamente extruíble mediante un extrusor de tipo Lipox
Biomembranes Thermobarrel de 10 ml con filtros de policarbonato de
0,1 \mum Costar^{TM} a 55ºC, usando helio como gas de extrusión
a una presión entre 1000 y 4800 kPa.
Composición
2A
Procedimos como se describe a propósito de la
Composición para comparación 1A, excepto por el hecho de que se
usaron 2 g de fosfolípidos en lugar de 1 g.
También en este caso se obtuvo una masa densa no
extruíble.
Composición
2B
Procedimos tal como se describe para la
Composición para Comparación 1B precedente, excepto que se usaron 2
g de fosfolípidos en lugar de 1.
En este caso también se obtuvo una suspensión de
MLV perfectamente extruíble.
La Composición II se dividió en alícuotas de 1 ml
y a cada una de ellas se añadió trehalosa según la relación de peso
entre trehalosa/lípidos que se indica en la Tabla 1/1.
La liofilización se realizó en un liofilizador en
placa, de la forma siguiente:
1) enfriamiento a -25ºC a una velocidad de
0,77ºC/min;
2) mantenimiento de dicha temperatura (-25ºC)
durante 3 horas,
3) aplicación del vacío (6 x 10^{-2} milibares)
y mantenimiento de dicha temperatura (-25ºC) durante 2 horas;
4) calentamiento hasta -15ºC durante 20 horas
bajo un vacío de 6 x 10^{-2} milibares,
5) calentamiento hasta -10ºC durante 2 horas bajo
un vacío de 6 x 10^{-2} milibares,
6) calentamiento hasta +5ºC durante 20 horas bajo
un vacío de 6 x 10^{-2} milibares,
7) bloqueo del vacío;
8) introducción de aire.
El liofilizado (1 ml) se rehidrató con 1 ml de
agua destilada y se mantuvo a temperatura ambiente durante 30
minutos para permitir la reconstrucción eficiente de los
liposomas.
Se diluyeron de nuevo 0,5 ml de dicha solución
con 10 ml de solución salina fisiológica para medir el tamaño medio
de los liposomas con el dispositivo NICOMP 370.
En la Tabla 1/1 se muestran los resultados
obtenidos.
A partir de la Tabla 1/1 se puede apreciar que la
ausencia de trehalosa entraña un cierto grado de fusión de los
liposomas, que se pone de manifiesto por el incremento de su tamaño
medio. Sorprendentemente, el aumento de la cantidad de trehalosa
(trehalosa/lípidos 2:1) también provoca un cierto grado de fusión
con el consecuente incremento del tamaño medio.
También se han obtenido resultados similares con
la Composición IV.
El tamaño medio de los liposomas y la cantidad de
lonidamina se determinaron a partir de un cierto número de muestras,
preparadas en fresco según se describe anteriormente. A
continuación, las muestras se reintrodujeron en el refrigerador a
5ºC y se tomaron muestras en los intervalos dados, rehidratándose
para determinar la cantidad del principio activo y el tamaño medio
de los liposomas. Los resultados así obtenidos se muestran en la
Tabla 1/2.
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\vskip1.000000\baselineskip
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(Tabla pasa a página
siguiente)
EJEMPLO 2
La composición III se liofilizó según se describe
en el Ejemplo 1 anterior, y se determinó el tamaño medio de los
liposomas antes y después de la liofilización (Tabla 2/1), así como
el tamaño medio de los liposomas y la cantidad de melatonina en las
preparaciones recientes y en los que se conservan a 5ºC, según se
describe en el Ejemplo mencionado anteriormente (Tabla 2/2)
Se obtuvieron resultados similares con la
Composición 1.
La Composición VI se liofilizó como se describe
en el Ejemplo 1 anterior, y se determinaron el tamaño medio de los
liposomas antes y después de la liofilización (Tabla 3/1), así como
el tamaño medio de los liposomas y la cantidad de bindarit en las
preparaciones recientes y en los que se conservan a 5ºC, según se
describe en el Ejemplo mencionado anteriormente (Tabla 3/2).
Ejemplo para comparación
1
La composición II se dividió en alícuotas de 1 ml
y se añadió trehalosa a cada una de ellas según la relación en peso
de trehalosa/lípidos que se muestra en la Tabla comparativa 1.
La composición se congeló a la temperatura del
nitrógeno líquido (-195,8ºC) y se liofilizó durante 20 horas, sin
control externo de la temperatura.
El liofilizado (1 ml) se rehidrató con 1 ml de
agua destilada y se mantuvo a temperatura ambiente durante 2
horas.
Se diluyeron de nuevo 0,5 ml de dicha solución
con 10 ml de solución salina fisiológica para medir el tamaño medio
de los liposomas con un dispositivo NICOMP 370.
Los resultados obtenidos se muestran en la Tabla
comparativa 1 a continuación.
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
(Tabla pasa a página
siguiente)
A partir de la Tabla comparativa 1 se puede
observar que cuando se realiza la liofilización a la temperatura del
nitrógeno líquido, tanto en ausencia de trehalosa como en presencia
de trehalosa en las relaciones que se muestran en la Tabla anterior,
tiene lugar un cierto grado de fusión de los liposomas, que se pone
de manifiesto por el incremento de su tamaño medio. Además, los
datos anteriores indican que cuando se realiza la liofilización a la
temperatura del nitrógeno líquido, la evolución de la propia
liofilización (para preparaciones de la misma composición) no
siempre reproduce los mismos resultados.
Claims (12)
1. Composición liofilizada que comprende
trehalosa y liposomas lipídicos en los que se ha incorporado un
principio biológicamente activo, caracterizada porque el
principio biológicamente activo presenta una solubilidad en agua
\leq0,01% (p/v), la relación en peso entre trehalosa/lípidos es
\leq 1,5, y toda la trehalosa se añadió en el exterior de los
liposomas ya formados antes de la liofilización.
2. Composición liofilizada según la
reivindicación 1, caracterizada porque el principio
biológicamente activo que presenta una solubilidad en agua
\leq0,01% (p/v) se selecciona de entre el grupo constituido por
lonidamina, melatonina, ciclosporina A y bindarit.
3. Composición liofilizada según la
reivindicación 1 ó 2, caracterizada porque los lípidos se
seleccionan de entre el grupo constituido por fosfoglicéridos,
glicéridos, diglicéridos, triglicéridos, fosfolípidos, lípidos
galactosil y glucosil, colesterol y sus derivados, esfingolípidos y
sus mezclas.
4. Composición liofilizada según la
reivindicación 3, caracterizada porque los lípidos son
fosfolípidos.
5. Composición liofilizada según cualquiera de
las reivindicaciones 1 a 4, caracterizada porque la relación
en peso trehalosa/lípidos está comprendida entre 1:2 y 1:1.
6. Composición liofilizada según cualquiera de
las reivindicaciones 1 a 5, caracterizada porque el tamaño
medio de los liposomas está comprendido entre 50 y 250 nm.
7. Composición liofilizada según la
reivindicación 6, caracterizada porque el tamaño medio de los
liposomas está comprendido entre 50 y 100 nm.
8. Procedimiento para la liofilización de una
composición que comprende trehalosa y liposomas lipídicos, en la que
se ha incorporado un principio biológicamente activo
caracterizado porque:
- a)
- se añaden entre 0,2 y 1,5 partes en peso de trehalosa por cada parte en peso de lípidos de una composición acuosa de liposomas en la que el tamaño medio de los liposomas está comprendido entre 50 y 250 nm, comprendiendo dichos liposomas un principio biológicamente activo que presenta una solubilidad en agua \leq0,01% (p/v);
- b)
- dicha composición se enfría mediante una placa de enfriamiento del liofilizador hasta una temperatura comprendida entre -5º y -70ºC, a una velocidad de enfriamiento comprendida entre 0,5º y 2ºC/min;
- c)
- una vez que se ha alcanzado la temperatura de congelación predeterminada, dicha composición se conserva a dicha temperatura durante un periodo comprendido entre 2 y 5 horas;
- d)
- se aplica un vacío comprendido de entre 5 x 10^{-1} y 8 x 10^{-2} milibares, dejando la temperatura de la placa de enfriamiento a la temperatura de enfriamiento que se define en el punto b) durante un periodo comprendido entre 2 y 5 horas;
- e)
- la temperatura de la placa de enfriamiento se lleva hasta -15ºC, y se mantiene así hasta que se ha eliminado completamente el agua.
9. Procedimiento de liofilización según la
reivindicación 8, caracterizado porque en la Fase b) la
temperatura de congelación está comprendida entre -20º y -30ºC.
10. Procedimiento de liofilización según la
reivindicación 8 ó 9, caracterizado porque en la Fase b) la
velocidad de enfriamiento es de 0,77ºC/min.
11. Procedimiento de liofilización según
cualquiera de las reivindicaciones 8 a 10, caracterizado
porque en la Fase c) la duración es de 3 horas.
12. Procedimiento de liofilización según
cualquiera de las reivindicaciones 8 a 11, caracterizado
porque en la Fase d) el vacío es de 6 x 10^{-2} milibares.
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