ES2239014T3 - Tensioactivos de polihidroxidiamina y su uso en transferencia genica. - Google Patents

Tensioactivos de polihidroxidiamina y su uso en transferencia genica.

Info

Publication number
ES2239014T3
ES2239014T3 ES00942195T ES00942195T ES2239014T3 ES 2239014 T3 ES2239014 T3 ES 2239014T3 ES 00942195 T ES00942195 T ES 00942195T ES 00942195 T ES00942195 T ES 00942195T ES 2239014 T3 ES2239014 T3 ES 2239014T3
Authority
ES
Spain
Prior art keywords
carbon
sugar
use according
groups
chain
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Expired - Lifetime
Application number
ES00942195T
Other languages
English (en)
Inventor
Patrick c/o GlaxoSmithKline CAMILLERI
Jan Bernard Frederick Nicolaas Engberts
Matthew Leigh Fielden
Andreas c/o GlaxoSmithKline KREMER
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
SmithKline Beecham Ltd
Rijksuniversiteit Groningen
Original Assignee
SmithKline Beecham Ltd
Rijksuniversiteit Groningen
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by SmithKline Beecham Ltd, Rijksuniversiteit Groningen filed Critical SmithKline Beecham Ltd
Application granted granted Critical
Publication of ES2239014T3 publication Critical patent/ES2239014T3/es
Anticipated expiration legal-status Critical
Expired - Lifetime legal-status Critical Current

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
    • C07C215/00—Compounds containing amino and hydroxy groups bound to the same carbon skeleton
    • C07C215/02—Compounds containing amino and hydroxy groups bound to the same carbon skeleton having hydroxy groups and amino groups bound to acyclic carbon atoms of the same carbon skeleton
    • C07C215/04—Compounds containing amino and hydroxy groups bound to the same carbon skeleton having hydroxy groups and amino groups bound to acyclic carbon atoms of the same carbon skeleton the carbon skeleton being saturated
    • C07C215/06—Compounds containing amino and hydroxy groups bound to the same carbon skeleton having hydroxy groups and amino groups bound to acyclic carbon atoms of the same carbon skeleton the carbon skeleton being saturated and acyclic
    • C07C215/10—Compounds containing amino and hydroxy groups bound to the same carbon skeleton having hydroxy groups and amino groups bound to acyclic carbon atoms of the same carbon skeleton the carbon skeleton being saturated and acyclic with one amino group and at least two hydroxy groups bound to the carbon skeleton
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/87—Introduction of foreign genetic material using processes not otherwise provided for, e.g. co-transformation

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Plant Pathology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Saccharide Compounds (AREA)
  • Medicinal Preparation (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Emulsifying, Dispersing, Foam-Producing Or Wetting Agents (AREA)
  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
  • Polymers With Sulfur, Phosphorus Or Metals In The Main Chain (AREA)
  • Transition And Organic Metals Composition Catalysts For Addition Polymerization (AREA)

Abstract

Uso de compuestos tensioactivos basados en azúcares que tienen la fórmula general (I): (I) en la que Y1 e Y2, que pueden ser iguales o diferentes, son grupos azúcar; R1 y R2, que pueden ser iguales o diferentes, se seleccionan de: a) hidrógeno; b) grupo alquilo-C(1-24); c) grupo alquil-C(1-24)-carboxi; o d) una cadena de carbono de 2 a 24 átomos de carbono que tiene uno o múltiples dobles enlaces carbono/carbono; y n es de 1 a 10; o una sal, preferentemente una sal farmacéuticamente aceptable, del mismo, para facilitar la transferencia de polinucleótidos de ADN o ARN, o análogos de los mismos, al interior de una célula eucariota o procariota in vitro.

Description

Tensioactivos de polihidroxidiamina y su uso en transferencia génica.
Esta invención se refiere a nuevos usos para compuestos tensioactivos basados en hidratos de carbono. Estos usos incluyen facilitar la transferencia de compuestos hacia el interior de las células para el suministro de fármacos, y facilitar la transferencia de oligonucleótidos y polinucleótidos hacia el interior de las células para estudios de expresión génica o terapia génica. La invención se refiere, asimismo, a nuevos compuestos tensioactivos basados en hidratos de carbono y a métodos para su producción.
Los tensioactivos son sustancias que afectan de manera importante a las propiedades superficiales de un líquido, incluso a concentraciones bajas. Por ejemplo, los tensioactivos reducirán, de forma significativa, la tensión superficial cuando se les disuelve en agua o soluciones acuosas, y reducirán la tensión interfacial entre dos líquidos o entre un líquido y un sólido. Esta propiedad de las moléculas tensioactivas ha sido extensamente estudiada en la industria, en particular en las industrias de detergentes y del petróleo. En los años 1970, se comunicó una nueva clase de molécula tensioactiva, que se distingue por dos cadenas hidrófobas con cabezas polares, unidas por un puente hidrófobo (Deinega, Y et al., Kolloidn. Zh. 36, 649, 1974). Estas moléculas, que se han denominado "gemelas" ("gemini") (Menger, FR y Littau, CA, J. Am. Chem. Soc., 113, 1451, 1991), poseen propiedades muy deseables con respecto a sus equivalentes mónomeros. Por ejemplo, son altamente eficaces para reducir la tensión interfacial entre aceite y líquidos basados en agua, y tienen una concentración micelar crítica muy baja. Recientemente, Pestman et al. han dado a conocer la síntesis y caracterización de tensioactivos gemelos no iónicos, basados en hidratos de carbono (Pestman, JM et al., Langmuir, 13, 6857-6860, 1997).
Los tensioactivos catiónicos se han utilizado, entre otros aspectos, para la transfección de polinucleótidos hacia el interior de células en cultivo, y existen ejemplos de agentes de este tipo disponibles para los científicos que intervienen en tecnologías genéticas (por ejemplo, el reactivo Tfx®-50, para la transfección de células eucariotas, disponible en Promega Corp., WI, EE.UU.).
El suministro eficaz de ADN a células in vivo, tanto para terapia génica como para terapia antisentido, ha sido un objetivo importante durante algunos años. Se ha prestado mucha atención al uso de virus como vehículos de suministro, por ejemplo, adenovirus para células epiteliales en las vías respiratorias, con el fin de llevar a cabo una terapia génica correctora de la fibrosis quística (CF). Sin embargo, a pesar de ciertas pruebas de éxito en la transferencia de genes en pacientes con CF, la vía de los adenovirus exhibe problemas debido a efectos secundarios inflamatorios y a una limitada expresión transitoria del gen transferido. Se han investigado varios métodos alternativos para el suministro de genes in vivo, incluidos los estudios en los que se han utilizado tensioactivos catiónicos. Gao, X et al. (1995), Gene Ther. 2, 710-722, demostraron la viabilidad de este método con un gen humano normal para la regulación de la conductancia transmembranosa CF (CFTR) en el epitelio respiratorio de ratones CF, utilizando lípidos catiónicos portadores de amina. Este grupo realizó el seguimiento con un ensayo de terapia génica de CF liposómica que, aun cuando sólo tuvo éxito parcial, demostró el potencial de este método en seres humanos (Caplen, NJ et al., Nature Medicine, 1, 39-46, 1995). Más recientemente, otros grupos han investigado el potencial de otros lípidos catiónicos para el suministro de genes, por ejemplo, derivados del colesterol (Oudrhiri, N et al., Proc. Natl. Acad. Sci. 94, 1651-1656, 1997). Este estudio limitado demostró la capacidad de estos compuestos basados en colesterol para facilitar la transferencia de genes hacia las células epiteliales, tanto in vitro como in vivo, apoyando, de esta forma, la validez de este método general.
Estos y otros estudios demuestran que en este nuevo campo de investigación existe la necesidad continua de desarrollar nuevas moléculas tensioactivas de baja toxicidad para facilitar la transferencia efectiva de polinucleótidos hacia el interior de las células, tanto in vitro, para la transfección en la experimentación basada en células, como in vivo, para la terapia génica y tratamientos antisentido. La presente invención pretende superar las dificultades que exhiben los compuestos existentes.
La invención se refiere al uso de compuestos tensioactivos basados en hidratos de carbono, que tienen la fórmula general (I):
1
en la que Y_{1} e Y_{2}, que pueden ser iguales o diferentes, son grupos azúcar;
R_{1} y R_{2}, que pueden ser iguales o diferentes, se seleccionan de:
a)
hidrógeno;
b)
grupo alquilo-C_{(1-24)};
c)
grupo alquil-C_{(1-24)}-carboxi; o
d)
una cadena de carbono de 2 a 24 átomos de carbono, que tiene uno o múltiples dobles enlaces carbono/carbono,
y n es de 1 a 10;
o una sal, preferentemente una sal farmacéuticamente aceptable, del mismo para facilitar la transferencia de polinucleótidos de ADN o ARN, o análogos de los mismos, a una célula eucariota o procariota in vitro.
Preferentemente, el compuesto es simétrico, es decir, los grupos R_{1} y R_{2} son iguales, e Y_{1} e Y_{2} son iguales. La simetría molecular permite hacer referencia a estos compuestos como tensioactivos "gemelos".
Los grupos Y_{1} e Y_{2} son azúcares, unidos al nitrógeno a través de un enlace de imina reducida. Estos azúcares incluyen monosacáridos tales como glucosa y fructosa, disacáridos tales como lactosa, y azúcares más complejos, por ejemplo, azúcares basados en la celulosa.
En una realización particularmente preferida, Y_{1} e Y_{2} son glucosa; los compuestos poseen la estructura general de la fórmula (II):
2
en la que Glu es glucosa en forma de cadena abierta (glucitol), unida a través de C-1 (carbono de aldehído), y R_{1}, R_{2} y n son como se han definido anteriormente.
En una realización preferida adicional, R_{1} y R_{2} son grupos alquilo, con una longitud de cadena de C_{(10-20)}, muy preferentemente C_{(12-18)}, y n es entre 2 y 8, muy preferentemente 4 ó 6.
En todavía una realización preferida adicional, R_{1} y R_{2} son cadenas de carbono C_{(12-24)}, preferentemente C_{(16-20)}, y, de forma muy preferida, cadenas de carbono C_{18}, que poseen una o múltiples dobles enlaces carbono/carbono.
Estos compuestos son nuevos y forman parte de la presente invención.
La presente invención muestra el hallazgo sorprendente de que los tensioactivos basados en hidratos de carbono son agentes altamente eficaces para facilitar la transfección de polinucleótidos hacia el interior de las células.
Los compuestos de la fórmula (I) en los que R_{1} y R_{2} no son, ambos, grupos alquil-C_{(1-24)}-carboxilo, son nuevos. En consecuencia, en un aspecto adicional, la presente invención proporciona compuestos de la fórmula (I) en los que uno de R_{1} o R_{2} es un grupo alquilo de longitud de cadena C_{(1-24)}, y el otro es un grupo alquil-C_{(1-24)}-carboxi.
Los compuestos de la presente invención se pueden preparar a partir de materiales de partida fácilmente disponibles, usando química de síntesis bien conocida para los expertos. Un procedimiento general para preparar compuestos tensioactivos basados en hidratos de carbono comprende la adición de grupos hidrato de carbono a los extremos amina de un compuesto alquil-diamina. A continuación, se presenta u esquema general (esquema 1) para la síntesis de los compuestos basados en azúcares de la invención, ilustrado para compuestos basados en glucosa:
\newpage
Esquema 1
3
separación del carbono por filtración
evaporación del disolvente
desprotonación, utilizando intercambio iónico en EtOH/MeOH
recristalización a partir de EtOH, MeOH o acetonitrilo
Para R_{1} = alquil-C_{(1-24)}-carboxi, la segunda etapa será la formación de un enlace amida, usando un agente de acilación adecuado, por ejemplo, un derivado activado del ácido correspondiente.
Preferentemente, el esquema para la síntesis de los compuestos basados en azúcares de la invención, ilustrado para compuestos basados en glucosa, es como se muestra en el esquema 2:
\newpage
Esquema 2
4
En un aspecto adicional, los compuestos de la invención que comprenden cadenas de carbono de 2 a 24 átomos de carbono y que poseen uno o múltiples dobles enlaces carbono/carbono, se pueden preparar de acuerdo con el esquema 3 (Figura 3), según el ejemplo del compuesto de oleílo-C_{18}. El experto puede utilizar esta información para diseñar procedimientos análogos para la preparación de otros compuestos que comprenden cadenas de carbono de 2 a 24 átomos de carbono, y que poseen uno o múltiples dobles enlaces carbono/carbono.
Los procedimientos anteriormente descritos son para la síntesis de tensioactivos simétricos basados en hidratos de carbono, es decir, "gemelos". Los tensioactivos no simétricos, basados en hidratos de carbono, de la invención se pueden preparar mediante la introducción de una asimetría, por ejemplo, en las aminas primarias de la diamina, utilizando diferentes grupos protectores.
En un aspecto adicional, los compuestos tensioactivos basados en hidratos de carbono se usan para facilitar la transferencia de oligonucleótidos y polinucleótidos a las células para lograr un efecto de anulación antisentido, para terapia génica e inmunización genética (para la generación de anticuerpos), en organismos completos. En una realización preferida adicional, los compuestos tensioactivos basados en hidratos de carbono se usan para facilitar la transfección de polinucleótidos a células en cultivo cuando es necesaria dicha transfección en, por ejemplo, estudios de expresión génica y experimentos de control antisentido, entre otros. Los polinucleótidos se pueden mezclar con los compuestos, agregarlos a las células e incubarlos para permitir la captación de polinucleótidos. Tras incubación adicional, es posible analizar en las células el rasgo fenotípico proporcionado por el ADN transfectado, o se puede determinar el nivel de ARNm expresado a partir de dicho ADN por transferencia de Northern, o utilizando métodos de cuantificación basados en PCR, por ejemplo, el método Taqman® (Perkin Elmer, Connecticut, EE.UU.). Los compuestos de la invención ofrecen una mejora importante, típicamente de entre 3 y 6 veces, de la eficacia de la captación celular de ADN en células en cultivo, en comparación con los compuestos de la técnica anterior. En el proceso de transfección, los compuestos "gemelos" se pueden usar en combinación con uno o múltiples suplementos para aumentar la eficacia de la transfección. Estos suplementos se pueden seleccionar, por ejemplo, de:
(i)
un vehículo neutro, por ejemplo, dioleil-fosfatidil-etanolamina (DOPE) (Farhood, H. et al., (1985), Biochim. Biophys. Acta, 1235 289);
(ii)
un reactivo complejante, por ejemplo, el reactivo PLUS disponible en el comercio (Life Technologies Inc., Maryland, EE.UU.), o péptidos tales como péptidos de polilisina o poliornitina, o péptidos que comprenden principal, pero no exclusivamente, aminoácidos básicos tales como lisina, ornitina y/o arginina.
Los compuestos de la invención son de utilidad para la transferencia de material genético en terapia génica.
Todavía un aspecto adicional de la invención se refiere a métodos para efectuar el suministro de compuestos farmacológicos no basados en nucleótidos al interior de las células in vitro, usando los compuestos de la invención.
En un aspecto adicional, la invención se refiere a métodos para facilitar la transferencia de un polinucleótido o un compuesto antiinfeccioso a un organismo procariota o eucariota para ser utilizado en terapia antiinfecciosa.
Se ofrecen las siguientes definiciones para facilitar la comprensión de determinadas expresiones frecuentemente utilizadas en este documento.
"Polinucleótido" se refiere, en general, a cualquier polirribonucleótido o polidesoxirribonucleótido, que puede ser ARN o ADN no modificado, o ARN o ADN modificado. "Polinucleótidos" incluyen, sin limitación, ADN de cadena sencilla o doble, ADN que es una mezcla de regiones de cadena sencilla y doble, ARN de cadena sencilla y doble, y ARN que es una mezcla de regiones de cadena sencilla y doble, moléculas híbridas que comprenden ADN y ARN que pueden ser de cadena sencilla o, más típicamente, de cadena doble, o una mezcla de regiones de cadena sencilla y doble. Además, "polinucleótido" se refiere a regiones de cadena triple que comprenden ARN o ADN, o tanto ARN como ADN. El término polinucleótido incluye, igualmente, ADN o ARN que contienen una o múltiples bases modificadas, y ADN o ARN con estructuras básicas modificadas con fines de estabilidad o por otros motivos. Bases "modificadas" incluyen, por ejemplo, bases tritiladas y bases inusuales tales como inosina. Se han efectuado diversas modificaciones del ADN y del ARN; de esta forma, "polinucleótido" comprende formas química, enzimática o metabólicamente modificadas de polinucleótidos hallados típicamente en la naturaleza, así como las formas químicas de ADN y ARN características de virus y células. "Polinucleótido" abarca, igualmente, polinucleótidos relativamente cortos, a los que a menudo se designa como oligonucleótidos.
"Transfección" se refiere a la introducción de polinucleótidos en el interior de células en cultivo, utilizando métodos que implican la modificación de la membrana celular por medios químicos o físicos. Estos métodos se describen, por ejemplo, en Sambrook et al., MOLECULAR CLONING: A LABORATORY MANUAL, 2ª ed., Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, N.Y. (1989). Los polinucleótidos pueden ser lineales o circulares, de cadena sencilla o doble, y pueden incluir elementos que controlan la replicación del polinucleótido, o la expresión de genes homólogos o heterólogos que pueden comprender parte del polinucleótido.
A continuación, la invención se describirá por medio de los siguientes Ejemplos.
Ejemplo 1 Transfección de un plasmidio recombinante que expresa luciferasa en células en cultivo, utilizando compuestos tensioactivos basados en hidratos de carbono
Se sintetizaron compuestos tensioactivos basados en hidratos de carbono, con la estructura general de la fórmula (II)
\vskip1.000000\baselineskip
5
de acuerdo con el método anteriormente descrito. Se prepararon los siguientes compuestos:
Compuesto nº R_{1}-n-R_{2}
GS_G_1: 16-6-16
GS_G_2: 18-6-18 (cadenas oleil)-R insaturadas)
GS_G_3: 12-6-12
GS_G_4: 14-6-14
GS_G_5: 14-4-14
GS_G_6: 16-4-16
GS_G_7: 12-4-12
GS_G_8: 18-4-18
GS_G_9: 18-6-18
Los estudios de transfección se llevaron a cabo usando la línea de células adherentes CHO-K1 (Puck et al., 1958). El medio completo consistió en medio MEM-alfa suplementado con suero bovino fetal al 10% en volumen y 1x de L-Glutamina. Todos los medios y suplementos proceden de Life Technologies.
Se generaron líneas celulares transfectadas estables que expresan \beta-galactosidasa por co-transfección del plasmidio Vector de Control de pSV-\beta-galactosidasa (Promega) con el plasmidio Selecta Vecta-Neo (R&D Systems), en una relación de 10:1. Tras la selección G418 (Life Technologies) (0,8 mg ml^{-1}), se analizó en las líneas celulares candidatas la actividad de \beta-galactosidasa (Ensayo de Gen Informador \beta-Gal, quimio-luminiscente; Roche Diagnostics).
Transfección de gen in vitro
Las células se sembraron en placas de 96 pocillos (Beckton Dickinson), 16-18 horas antes de la transfección, en una densidad aproximada de 1 x 10^{4} células por pocillo. Para la transfección, se incubaron 64 ng del plasmidio del gen informador de luciferasa, pGL3-Vector de Control (Promega) por pocillo, con diversas concentraciones de los compuestos gemelos basados en hidratos de carbono. Después de 30 minutos de incubación a temperatura ambiente, se agregó medio Opti-MEM® (Life Technologies) a la mezcla de transfección, y la solución se depositó sobre las células (volumen final por pocillo: 100 \mul). Después de una incubación de 3 horas o durante la noche a 37ºC, se sustituyó la solución de transfección por medio completo, y las células se siguieron incubando a 37ºC. Los ensayos con gen informador se llevaron a cabo de acuerdo con las directrices del fabricante (Roche Diagnostics) durante aproximadamente 48 horas después de la transfección. Se midió la luminiscencia en un Contador de Escintilación y Luminiscencia de Microplaca Packard TopCount NXT. A efectos de normalización, se midió la actividad de \beta-galactosidasa (Ensayo del Gen Informador \beta-Gal, quimio-luminiscente; Roche Diagnostics), y se calculó la actividad de luciferasa por actividad de \beta-galactosidasa. Los resultados se muestran en las Figuras 1 y 2.
Ejemplo 2 Eficacia de transfección de GS_G_2 en presencia y ausencia de suero bovino fetal (FCS)
GS_G_2 se preparó de la forma anteriormente descrita y se utilizó en experimentos para estudiar la eficacia de transfección del compuesto, según se describe en el Ejemplo 1. Se llevaron a cabo dos experimentos, en ambos el compuesto se ensayó a 4 \muM, 8 \muM, 10 \muM, 20 \muM y 30 \mum, tanto en presencia como en ausencia de reactivo PLUS. En el primer experimento, las células CHO-K1 se incubaron durante la noche sin suero bovino fetal (FCS), y en el segundo, las células CHO-K1 se incubaron durante la noche en presencia de FCS. Los resultados mostraron que la preincubación con suero bovino fetal no tuvo efecto alguno sobre la eficacia de transfección del compuesto GS_G_2. Este resultado fue sorprendente, dado que es bien sabido en la técnica que el suero reduce la eficacia de transfección. La presencia o ausencia de reactivo PLUS careció de efectos importantes sobre la eficacia de transfección en ambos experimentos.
Breve descripción de los dibujos
Fig. 1. Transfección de células CHO-K1 (transfectadas de forma estable con beta-galactosidasa) con compuestos gemelos basados en hidratos de carbono GS-G-3, GS-G-4, GS-G-5, GS-G-6, GS-G-7, GS-G-8 y GS-G-9. Las concentraciones de los compuestos en \muM se muestran en el eje x. Las barras representan las cps (cuentas por segundo) medias de 8 experimentos \pm el error estándar de la media.
Fig. 2. Transfección de células CHO-K1 (transfectadas de forma estable con beta-galactosidasa) con el compuesto gemelo basado en hidratos de carbono GS-G-1. Las concentraciones del compuesto en \muM se muestran en el eje x. Las barras representan las cps (cuentas por segundo) medias de 8 experimentos \pm el error estándar de la media.
Fig. 3. El esquema 3 muestra un procedimiento general para la preparación de un compuesto oleílico de la invención.

Claims (13)

1. Uso de compuestos tensioactivos basados en azúcares que tienen la fórmula general (I):
6
en la que Y_{1} e Y_{2}, que pueden ser iguales o diferentes, son grupos azúcar;
R_{1} y R_{2}, que pueden ser iguales o diferentes, se seleccionan de:
a)
hidrógeno;
b)
grupo alquilo-C_{(1-24)};
c)
grupo alquil-C_{(1-24)}-carboxi; o
d)
una cadena de carbono de 2 a 24 átomos de carbono que tiene uno o múltiples dobles enlaces carbono/carbono;
y n es de 1 a 10;
o una sal, preferentemente una sal farmacéuticamente aceptable, del mismo,
para facilitar la transferencia de polinucleótidos de ADN o ARN, o análogos de los mismos, al interior de una célula eucariota o procariota in vitro.
2. Uso según la reivindicación 1, en el que R_{1} y R_{2} son grupos alquilo con una longitud de cadena C_{(10-20)}, y n es entre 2 y 8.
3. Uso según la reivindicación 2, en el que R_{1} y R_{2} son grupos alquilo con una longitud de cadena C_{(12-18)}, y n es 4 ó 6.
4. Uso según la reivindicación 1, en el que R_{1} y R_{2} son cadenas de carbono de 2 a 24 átomos de carbono que tienen uno o múltiples dobles enlaces carbono/carbono.
5. Uso según la reivindicación 4, en el que las cadenas de carbono tienen 18 átomos de carbono.
6. Uso según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5, en el que el compuesto tensioactivo basado en azúcares es simétrico, es decir, los grupos R_{1} y R_{2} son iguales, e Y_{1} e Y_{2} son iguales.
7. Uso según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6, en el que los polinucleótidos se transfieren al interior de las células para conseguir un efecto de anulación antisentido.
8. Uso según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6, en el que los polinucleótidos se transfieren al interior de las células para inmunización genética (para la generación de anticuerpos) en organismos enteros.
9. Un compuesto tensioactivo basado en azúcares, que tiene la fórmula general (I):
7
en la que Y_{1} e Y_{2}, que pueden ser iguales o diferentes, son grupos azúcar;
R_{1} y R_{2}, que pueden ser iguales o diferentes, se seleccionan de:
a)
grupos alquilo con una longitud de cadena C_{(10-20)}, o
b)
cadenas de carbono de 2 a 24 átomos de carbono, que tienen uno o múltiples dobles enlaces carbono/carbono;
y n es entre 2 y 8;
o una sal, preferentemente una sal farmacéuticamente aceptable, del mismo.
10. Un compuesto tensioactivo basado en azúcares según la reivindicación 9, en el que R_{1} y R_{2} son grupos alquilo con una longitud de cadena C_{(12-18)}, y n es 4 ó 6.
11. Un compuesto tensioactivo basado en azúcares según la reivindicación 9 ó 10, en el que el compuesto tensioactivo basado en azúcares es un compuesto gemelo en el que R_{1} y R_{2} son iguales, e Y_{1} e Y_{2} son iguales.
12. Un compuesto tensioactivo basado en azúcares según la reivindicación 11, que tiene la fórmula (II):
8
en la que Glu es glucosa en forma de cadena abierta (glucitol).
13. Un compuesto tensioactivo basado en azúcares según la reivindicación 9, en el que la cadena de carbonos que tiene uno o múltiples dobles enlaces carbono/carbono tiene 18 átomos de carbono.
ES00942195T 1999-06-16 2000-06-16 Tensioactivos de polihidroxidiamina y su uso en transferencia genica. Expired - Lifetime ES2239014T3 (es)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
GBGB9914085.7A GB9914085D0 (en) 1999-06-16 1999-06-16 New use
GB9914085 1999-06-16

Publications (1)

Publication Number Publication Date
ES2239014T3 true ES2239014T3 (es) 2005-09-16

Family

ID=10855503

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
ES00942195T Expired - Lifetime ES2239014T3 (es) 1999-06-16 2000-06-16 Tensioactivos de polihidroxidiamina y su uso en transferencia genica.

Country Status (9)

Country Link
US (1) US7005300B1 (es)
EP (1) EP1185502B1 (es)
JP (1) JP4794788B2 (es)
AT (1) ATE291007T1 (es)
AU (1) AU5690500A (es)
DE (1) DE60018738T2 (es)
ES (1) ES2239014T3 (es)
GB (1) GB9914085D0 (es)
WO (1) WO2000076954A1 (es)

Families Citing this family (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2005039642A1 (en) * 2003-10-24 2005-05-06 University Of Saskatchewan Dna delivery with gemini cationic surfactants
CN107670583B (zh) * 2017-10-10 2019-04-30 合肥工业大学 一种葡萄糖基双子非离子表面活性剂、两性表面活性剂及其合成方法
CN107673987B (zh) * 2017-10-10 2019-05-03 合肥工业大学 葡萄糖基双子非离子表面活性剂及其合成方法
CN110523539A (zh) * 2019-08-14 2019-12-03 江西理工大学 一种新型表面活性剂在铝土矿反浮选上的应用方法
CN115078739B (zh) * 2022-08-22 2022-11-22 上海执诚生物科技有限公司 一种检测载脂蛋白a1的试剂盒及其应用

Family Cites Families (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5674908A (en) * 1993-12-20 1997-10-07 Life Technologies, Inc. Highly packed polycationic ammonium, sulfonium and phosphonium lipids
US5837533A (en) * 1994-09-28 1998-11-17 American Home Products Corporation Complexes comprising a nucleic acid bound to a cationic polyamine having an endosome disruption agent
WO1997042819A1 (en) * 1996-05-13 1997-11-20 Alberto Haces Cationic lipids for transfection of negatively charged or neutral molecules into living cells
NZ512244A (en) * 1998-11-12 2003-12-19 Invitrogen Corp Polycationic transfection reagents for introducing anions into a cell

Also Published As

Publication number Publication date
DE60018738T2 (de) 2006-02-02
JP2003502307A (ja) 2003-01-21
WO2000076954A1 (en) 2000-12-21
DE60018738D1 (de) 2005-04-21
EP1185502B1 (en) 2005-03-16
US7005300B1 (en) 2006-02-28
EP1185502A1 (en) 2002-03-13
ATE291007T1 (de) 2005-04-15
JP4794788B2 (ja) 2011-10-19
AU5690500A (en) 2001-01-02
GB9914085D0 (en) 1999-08-18

Similar Documents

Publication Publication Date Title
ES2949172T3 (es) Método de encapsulamiento de un ácido nucleico en un hospedante de nanopartículas lipídicas
CA2079814C (en) Cationic lipids for intracellular delivery of biologically active molecules
JP5042863B2 (ja) 生物学的に活性な分子をデリバリーするための脂質ナノ粒子系組成物および方法
EP2349210B1 (en) Processes and compositions for liposomal and efficient delivery of gene silencing therapeutics
CN114507195A (zh) 一种脂质化合物、包含其的组合物及应用
AU729288B2 (en) Composition and method for delivery of nucleic acids
JP2010519203A (ja) 生物活性分子の活性を強化するための組成物及び方法
CA2682161A1 (en) Compositions and methods for inhibiting expression of a gene from ebola virus
ES2239014T3 (es) Tensioactivos de polihidroxidiamina y su uso en transferencia genica.
ES2278618T3 (es) Compuestos tensioactivos a base de espermina:peptidos.
CN121889370A (zh) 用于将核酸递送至真核细胞的脂质
TW201726614A (zh) 作為陽離子性脂質之化合物
US7297712B2 (en) Cationic amphiphiles for intracellular delivery of therapeutic molecules and its composition, process and method of treatment
EP1492876B1 (en) Cationic amphiphiles for intracellular delivery of therapeutic molecules, composition, process and use thereof
CN119285518A (zh) 脂质及其应用