ES2239134T3 - Inhibidores de trombina. - Google Patents

Inhibidores de trombina.

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ES2239134T3
ES2239134T3 ES01925739T ES01925739T ES2239134T3 ES 2239134 T3 ES2239134 T3 ES 2239134T3 ES 01925739 T ES01925739 T ES 01925739T ES 01925739 T ES01925739 T ES 01925739T ES 2239134 T3 ES2239134 T3 ES 2239134T3
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Danijel Kikelj
Lucija Peterlin
Petra Marinko
Matej Breznik
Mojca Stregnar
Bakija Alenka Trampuz
Marjana Fortuna
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Univerza Ljubljana v Fakulteta za Farmazijo
Lek Pharmaceuticals and Chemical Co dd
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Abstract

Las composiciones farmacéuticas que constituyen el objeto de la invención aquí descrita se pueden formular como formulaciones inyectables u orales. Además del ingrediente activo, las mismas contienen diferentes aditivos estándar en función del uso contemplado. Las composiciones farmacéuticas se preparan de acuerdo con procedimientos estándar. La dosificación, la frecuencia y modo de uso dependerán de diversos factores, dependiendo también del ingrediente activo individual y de sus propiedades farmacocinéticas y del estado del paciente. Estas composiciones pueden incluir opcionalmente agentes trombolíticos, anticoagulantes y agentes antiplaquetas. Los compuestos descritos en la presente invención tienen uno o más centros estereogénicos en donde la configuración absoluta es R o S, y pueden estar presentes en forma de racematos, mezclas racémicas, enantiómeros puros, mezclas de diastereomeros o en forma de diastereomeros puros. Los compuestos heterocíclicos de partida para la preparación de los compuestos, que constituyen el objeto de la presente invención, se preparan como se indica en los esquemas I y II o de acuerdo con los métodos descritos en la bibliografía al respecto.

Description

Inhibidores de trombina.
Campo técnico
La invención pertenece al campo de la industria farmacéutica y se refiere a nuevos derivados heterocíclicos de dipéptidos y miméticos de dipéptidos en forma de una mezcla de diastereomeros y en forma de diastereomeros puros, a métodos para su preparación y a composiciones farmacéuticas que contienen tales derivados. Los nuevos derivados heterocíclicos de dipéptidos y miméticos de dipéptidos son inhibidores de trombina y otras serina proteasas que pueden jugar un papel en la coagulación de la sangre y que pueden tener actividad anticoagulante en mamífe-
ros.
Problema técnico
Las heparinas y cumarinas que predominantemente se emplean para la inhibición de la coagulación in vivo, tienen un número de efectos desfavorables e inesperados. La heparina se emplea parenteralmente y actúa potenciando el efecto de inhibición del inhibidor fisiológico de trombina: antitrombina endógena III. La cantidad de antitrombina III en plasma puede variar en gran medida y la inhibición de la trombina unida no es factible por vía del mecanismo indirecto descrito. El tratamiento con heparinas puede resultar ineficaz. Las heparinas tienen pobre biodisponibilidad y un estrecho campo terapéutico. Las cumarinas inhiben la síntesis de trombina al bloquear la \gamma-carboxilación de glutamato en la síntesis de protrombina y factores VII, IX y X. Por tanto, el efecto se puede retardar durante algunos días. El tratamiento con cumarinas deberá ser controlado regularmente mediante ensayos de coagulación. Debido a los inconvenientes de las heparinas y cumarinas en la terapia anticoagulante, existe la necesidad de disponer de nuevas sustancias con un inicio rápido del efecto anticoagulante independiente de antitrombina III y que también puedan ser eficaces en la administración oral. Los inhibidores de trombina de bajo peso molecular están adquiriendo al parecer una importancia cada vez mayor en este campo.
Estado de la técnica
La serina proteasa, trombina, es una enzima clave en los procesos de la coagulación sanguínea y, de este modo, en el desarrollo de trombosis. Su principal acción es la de convertir fibrinógenos soluble en fibrina insoluble que forma una matriz mecánica para el coagulo en desarrollo. Además, fortalece mecánicamente al coágulo al activar el factor XIII que se enlaza covalentemente a monómeros de fibrina y estimula la agregación de plaquetas. Mediante un mecanismo de realimentación positiva por vía de la activación de los factores V y VIII, aumenta la concentración de trombina en el sitio del daño. Con el papel anterior jugado en la hemostasis, la trombina se ha convertido en una molécula diana en la investigación de nuevos anticoagulantes (Sanderson P.E.J., Naylor-Olsen A.M. Curr. Med. Chem. 1998, 5, 289-304; Menear K. Curr. Med. Chem. 1998, 5, 4578-468; Breznik M., Peèar S. Farm. vestn. 1997, 48, 545-560; Sanderson P.E.J. Med. Res. Rev. 1999, 19, 179-197).
El sitio activo de trombina con la triada catalítica característica (Asp 189, His 57, Ser 195) puede dividirse en tres áreas de unión: la cavidad S1 que proporciona la especificidad de la enzima por la parte básica de la molécula inhibidora (P1), el área hidrófoba S2 que evita el acceso de los inhibidores y del sustrato al sitio activo y un área hidrófoba S3 más grande (Bode W., Mayr I., Baumann U. et al. The EMBO Journal 1998, 8, 3467-3475).
En base al conocimiento de la estructura cristalina de la trombina, se han desarrollado ahora varios inhibidores de bajo peso molecular que actúan en el sitio activo de la trombina. Un inhibidor de trombina ideal deberá tener buena biodisponibilidad, una larga vida media y ser adecuado para administración oral. La consecución de estos objetivos está limitada por un grupo guanidina o amidina básico, presente en muchos inhibidores de trombi a conocidos o por un grupo electrófilo reactivo, presente en inhibidores electrófilos de trombina, por ejemplo, efegatran, PPACK. Un criterio importante a la hora de diseñar inhibidores de trombina es también la selectividad a otras serina proteasas, tales como tripsina, factor Xa, uroquinasa, activador de plasminógeno tisular y plasmita (Kimball S.D. Current Pharmaceutical Design 1995, 1, 441-468; Das J., Kimball S.D. Bioorg. Med. Chem. 1995, 3, 999-1007).
Los inhibidores de bajo peso molecular del sitio activo de la trombina mimetizan una secuencia tripéptida D-Phe-Pro-Arg del sustrato de fibrinógeno natural. La primera fase del desarrollo son inhibidores irreversibles que reaccionan covalentemente con Ser 195 en el sitio activo. PPACK es un prototipo de este tipo de inhibidor. A pesar del hecho de que los inhibidores de este tipo son muy eficaces, como consecuencia de una alta reactividad los mismos son potencialmente tóxicos y de baja selectividad, y su uso es contestable. Argatroban es el primer inhibidor reversible altamente eficaz y selectivo disponible en el mercado en Japón y en USA (Novastan® y Slonnon®). En Europa, se encuentra en fase de pruebas clínicas. Hasta la fecha se ha sintetizado un gran número de inhibidores reversibles activos, estructuralmente diferentes, con grupos básicos hidrófilos, que tienen una baja biodisponibilidad después de la administración oral (Menear K. Curr. Med. Chem. 1998, 5, 457-468).
Mediante la modificación extensiva de la parte P1 de los inhibidores de trombina, principalmente sustituyendo los grupos guanidina o amidina básicos con grupos neutros o débilmente básicos, se puede aumentar su biodisponibilidad. Los grupos más grandes en esta parte de la molécula conducen a una mayor selectividad de los inhibidores para trombina dado que, en comparación con la mayoría de otras serina proteasas, la trombina tiene una cavidad S1 relativamente grande. La selectividad de los inhibidores de trombina es estimada en general con respecto a su capacidad para inhibir tripsina la cual, por forma y tamaño del sitio activo, es la más relacionada estrechamente con trombina y tiene una cavidad S1 más pequeña. La modificación de las otras partes de la molécula (P2 y P3), especialmente la sustitución de los enlaces éster y amida puede aumentar adicionalmente la estabilidad de los inhibidores de trombina en el cuerpo. Dichos inhibidores de trombina son menos sensibles a proteasas no específicas y a hidrólisis y, en consecuencia, aumenta su vida media. (Menear K. Curr. Med. Chem. 1998, 5, 457-468; Tucker T.J., Brady S.F., Lumma W.C. et al. J. Med. Chem. 1998, 41, 3210-3219).
Descripción
La invención se refiere a nuevos compuestos de fórmula general (I)
(I)D-CO-B-A-Het
\vskip1.000000\baselineskip
en donde
Het se elige entre:
\vskip1.000000\baselineskip
200
201
R^{1}
se elige entre H y NH_{2} y
R^{2}
se elige entre H y NH_{2},
A:
- un grupo -CONH- o -CH_{2}NH- enlazado a Het por el fragmento NH,
\quad
- un grupo -CONHCH_{2}- o -CH_{2}NHCH_{2}- enlazado a Het por el fragmento CH_{2},
\quad
- un grupo -CH_{2}NHCONH-, -CH_{2}NHCH_{2}CONH- o -CH_{2}NHCOCH_{2}NH- enlazado a Het por el fragmento NH,
\quad
- un grupo -CH_{2}NHCONHCH_{2}-, -CH_{2}NHCH_{2}CONHCH_{2}- o -CH_{2}NHCOCH_{2}NHCH_{2}- enlazado a Het por el fragmento CH_{2},
B
se elige entre las siguientes estructuras:
7
en donde:
Z
es CH_{2}, S o CH-OH
R^{3}
es H, alquilo C_{1}-C_{4} lineal o ramificado, cicloalquilo C_{3}-C_{7},
R^{4}
es H, alquilo C_{1}-C_{4} lineal o ramificado, cicloalquilo C_{3}-C_{7}.
En compuestos preferidos (2.1) Z es CH_{2}.
D es de la estructura general:
\vskip1.000000\baselineskip
8
\vskip1.000000\baselineskip
en donde R^{d} es H, CH_{2}OH, CH_{2}SH o un grupo
\vskip1.000000\baselineskip
9
en donde
R^{a} y R^{b} se eligen independientemente entre los siguientes grupos:
- H,
- alquilo C_{1}-C_{4} lineal o ramificado que puede estar sustituido con cicloalquilo C_{3}-C_{7} o con 1 a 9 átomos de halógeno seleccionados entre F, Cl, Br, I,
- cicloalquilo C_{3}-C_{7},
- bicicloalquilo C_{9}-C_{10},
- un anillo heterocíclico monocíclico de 5 a 7 miembros, saturado o insaturado, estable, o un anillo heterocíclico bicíclico de 8 a 10 miembros que, además de átomos de carbono, contiene de 1 a 3 heteroátomos seleccionados entre N, O y S en donde N o S puede estar oxidado o N puede estar cuaternizado,
- arilo (por ejemplo, fenilo, naftilo) que puede estar insustituido u opcionalmente sustituido en cualquier posición con uno o dos sustituyentes elegidos entre alquilo C_{1-4}, alcoxi C_{1-4}, halógeno o hidroxi. En compuestos preferidos, R^{a} puede ser fenilo, diclorofenilo, por ejemplo 3,4-diclorofenilo o ciclohexilo, y R^{b} puede ser H. Alternativamente, R^{a} y R^{b} pueden ser independientemente fenilo o ciclohexilo.
En compuestos preferidos, R^{d} puede ser un grupo 3.0.1.
R^{c} se elige entre los grupos:
- NH_{2},
- NH(CH_{2})_{n}CH_{3},
en donde n es 0, 1, 2 ó 3,
- NH(CH_{2})_{m}OH,
en donde m es 2, 3 ó 4,
- NH(CH_{2})_{k}COOH,
en donde k es 1, 2 ó 3,
- NH(CH_{2})_{n}COOR^{5},
en donde n es 0, 1, 2 ó 3 y R^{5} representa alquilo C_{1-4} lineal o ramificado,
- NH(CH_{2})_{k}CONR^{6}R^{7},
en donde k es 1, 2 ó 3 y R^{6} y R^{7} son independientemente H o alquilo C_{1-4} lineal o ramificado, o bien R^{6} y R^{7} juntos son -(CH_{2})_{4-5}-, -(CH_{2})_{2}O(CH_{2})_{2}- o -(CH_{2})_{2} NH(CH_{2})_{2}-,
- NHO_{2}S(CH_{2})_{n}-W,
en donde n es 0, 1, 2 ó 3,
\quad
W representa fenilo, naftilo, un anillo heterocíclico monocíclico de 5 ó 6 miembros saturado o insaturado o un anillo heterocíclico bicíclico de 8 a 10 miembros saturado o insaturado que contiene de 1 a 3 heteroátomos seleccionados entre N, O o S en donde N o S pueden estar oxidados o N puede estar cuaternizado; estando cada anillo opcionalmente sustituido por uno o más sustituyentes elegidos entre alquilo C_{1-4}, alcoxi C_{1-4}, amino, ciano, halógeno o hidroxi,
N[O_{2}S(CH_{2})_{n}-W][CH_{2})_{k}COOH]
en donde n es 0, 1, 2 ó 3 y en donde k es 1, 2 ó 3,
- NH(CH_{2})_{k}NH_{2},
en donde k es 1, 2 ó 3,
- NHC(Ph)_{3},
- N[COOR']_{2}
en donde R' es alquilo C_{1-4}, preferentemente CMe_{3}.
En compuestos preferidos, R^{c} es NH_{2}, NHCOOR (en donde R es alquilo C_{1-4}, preferentemente CMe_{3} o bencilo), -NHSO_{2}(CH_{2})_{0-2}-W (en donde R es fenilo, bencilo o naftilo), alquilo (en particular Me, Et, bencilo o CPh_{3}), -NH(CH_{2})_{k}COOH o N[SO_{2}(CH_{2})_{0-2}-W][(CH_{2})_{1-2}COOH] o -NH(CH_{2})_{1-3}NH_{2}.
En los compuestos antes mencionados, se pueden emplear sales de amino-derivados, por ejemplo, sales hidrocloruro.
La invención se refiere también a las sales farmacéuticamente aceptables de los compuestos de fórmula (I) con actividad anticoagulante y a composiciones farmacéuticas que contienen tales sales. La invención se refiere también a procedimientos para la preparación de compuestos de fórmula general (I).
Los nuevos compuestos son inhibidores de trombina y se pueden emplear por vía oral y parenteral. Son útiles para inhibir trombina y la formación de fibrina y también para prevenir e inhibir la formación de trombos en el hombre y otros mamíferos. Se emplean en cirugía cardiovascular, para el tratamiento de coagulación intravascular diseminada en tromboembolismo, hemodiálisis, angina de pecho inestable, enfermedad hisquémica cerebral y como alternativa a heparina en pacientes con trombocitopenia inducida por heparina.
En infarto de miocardio agudo, los nuevos compuestos se pueden emplear como un auxiliar a la terapia trombolítica.
Las composiciones farmacéuticas que constituyen el objeto de la invención aquí descrita se pueden formular como formulaciones inyectables u orales. Además del ingrediente activo, las mismas contienen diferentes aditivos estándar en función del uso contemplado. Las composiciones farmacéuticas se preparan de acuerdo con procedimientos estándar. La dosificación, la frecuencia y modo de uso dependerán de diversos factores, dependiendo también del ingrediente activo individual y de sus propiedades farmacocinéticas y del estado del paciente. Estas composiciones pueden incluir opcionalmente agentes trombolíticos, anticoagulantes y agentes antiplaquetas.
Los compuestos descritos en la presente invención tienen uno o más centros estereogénicos en donde la configuración absoluta es R o S, y pueden estar presentes en forma de racematos, mezclas racémicas, enantiómeros puros, mezclas de diastereomeros o en forma de diastereomeros puros.
Los compuestos heterocíclicos de partida para la preparación de los compuestos, que constituyen el objeto de la presente invención, se preparan como se indica en los esquemas I y II o de acuerdo con los métodos descritos en la bibliografía al respecto.
\newpage
Esquema I
\vskip1.000000\baselineskip
10
El 5-amino-4,5,6,7-tetrahidro-2H-indazol (6) se prepara de acuerdo con el procedimiento descrito en la bibliografía (Bach N.J., Komfeld E.C., Jones N.D. et al. J. Med. Chem. 1980, 23, 481). La 2,6-diamino-5,6,7,8-tetrahidroquinazolina (5) se prepara por ciclocondensación de la enaminocetona adecuada (2) (Bach N.J., Komfeld E.C., Jones N.D. et al. J. Med. Chem. 1980, 23, 481) con hidrocloruro de guanidina en presencia de etóxido sódico y posterior hidrólisis alcalina. La 2,4,6-triammino-5,6,7,8-tetrahidroquinazolina (3) se prepara por ciclocondensación de cianoguanidina y N-(4-oxociclohexil)acetamida (1) de acuerdo con el procedimiento descrito en los artículos: Modest E.J., Chatterjee S., Protopapa H.K. J. Am. Chem. Soc. 1965, 87, 1837) en Gangjee A., Zaveri N., Queener S.F. et al. J. Heterocycl. Chem. 1995, 32, 243) y posterior hidrólisis alcalina. El 2,6-diamino-4,5,6,7-tetrahidro-1,3-benzotiazol (4) se prepara a partir de N-(4-oxociclohexil)acetamida (1) después de bromación y ciclación con tiourea, e hidrólisis en ácido bromhídrico (Schneider C.S., Mierau J. J. Med. Chem. 1987, 30, 494-498; Griss G., Schneider C., Hurnaus R. et al DE 3447075). El 2,7-diamino-4,5,6,7-tetrahidro-1,3-benzotiazol se prepara por reducción de la oxima adecuada, la cual se prepara a partir de 2-amino-4,5,6,7-tetrahidro-1,3-benzotiazol-7-ona después de reacción con hidrocloruro de hidroxilamina como se describe, por ejemplo, en: Becker D.P., Flynn D.L. Synthesis 1992, 1080-1082. La 2-amino-4,5,6,7-tetrahidro-1,3-benzotiazol-7-ona se prepara a partir de 1,3-ciclohexanodiona por bromación y posterior ciclación con tiourea de acuerdo con el procedimiento descrito en la patente (Yoo H.Y., Cheng K.J., Chai J.P. et al. WO97/03076). Los compuestos 2,4,5-triamino-5,6,7,8-tetrahidroquinazolina, 2,5-diamino-5,6,7,8-tetrahidroquinazolina, 4-amino-4,5,6,7-tetrahidro-2H-indazol y 4-amino-4,5,6,7-tetrahidro-2H-isoindol se preparan a partir de 1,3-ciclohexanodiona y un reactivo adecuado para la ciclación de acuerdo con procedimientos análogos descritos en los artículos: Bach N.J., Komfeld E.C., Jones N.D. et al. J. Med. Chem. 1980, 23, 481; Modest E.J., Chatterjee S., Protopapa H.K. J. Am. Chem. Soc. 1965, 87, 1837; Gangjee A., Zaveri N., Queener S.F. et al. J. Heterocycl. Chem. 1995, 32, 243 y posterior conversión del grupo ceto al grupo amino, por ejemplo, por aminación reductiva (Abdel-Magid A.F., Carson K.G., Harris B.D. et al. J. Org. Chem. 1996, 61, 3849).
El 2,4-diamino-4,5,6,7-tetrahidro-1,3-benzotiazol se prepara a partir de 2-amino-4,5,6,7-tetrahidro-1,3-benzotiazol-4-ona con amoniaco en presencia de un catalizador de acuerdo con un procedimiento análogo descrito en la patente (Schönwald K., Meyer Th., Eishold K.W. DE 2845857). La preparación de 2-amino-4,5,6,7-tetrahidro-1,3-benzotiazol-4-ona a partir de 1-amino-ciclohexen-3-ona con rodamina se describe en los artículos: Schmitz E., Striegler H. J. Prakt. Chem. 1971, 1125-1130 y Schmitz E., Striegler H. J. Prakt. Chem. 1970, 359-365. Alternativamente, se puede proceder también a partir de 2-azidociclohexanol que, mediante reducción, acetilación de los grupos amino e hidroxi, hidrólisis selectiva del grupo éster y oxidación, realizada por ejemplo con CrO_{3} según un procedimiento análogo descrito en: Curtin D.Y., Schmukler S. J. Am. Chem. Soc. 1955, 77, 1105, se convierte a 2-acetamidociclohexanona, y esta última, después de bromación, ciclación con tiourea e hidrólisis, se convierte a 2,4-diamino-4,5,6,7-tetrahidro-1,3-benzotiazol. Después de la ciclación de 2-acetamidodiciclohexanona con reactivos adecuados, de acuerdo con procedimientos análogos descritos en los artículos: Bach N.J., Komfeld E.C., Jones N.D. et al. J. Med. Chem. 1980, 23, 481; Modest E.J., Chatterjee S., Protopapa H.K. J. Am. Chem. Soc. 1965, 87, 1837; Gangjee A., Zaveri N., Queener S.F. et al. J. Heterocycl. Chem. 1995, 32, 243 y posterior hidrólisis, se obtienen los compuestos 2,4,8-triamino-5,6,7,8-tetrahidroquinazolina, 2,8-diamino-5,6,7,8-tetrahidroquinazolina, 7-amino-4,5,6,7-tetrahidro-2H-indazol y 7-amino-4,5,6,7-tetrahidro-2H-isoindol.
El 2,6-diamino-1,3-benzotiazol se prepara por reducción de 2-amino-6-nitro-1,3-benzotiazol de acuerdo con los procedimientos descritos en: Hays S.J., Rice M.J., Ortwine D.F. et al. J. Pharm. Sci. 1994, 83, 1425-1432 y Abdelaal S.M., Kong S.B., Bauer L. J. Heterocycl. Chem. 1992, 29, 1069-1076.
El 2,5-diamino-4,5,6,7-tetrahidro-1H-bencimidazol se prepara a partir de N-(4-oxociclohexil)-acetamida y N-acetilguanidina de acuerdo con el procedimiento descrito para la preparación de 2-aminoimidazoles (Little T.L., Webber S.E. J. Org. Chem. 1994, 59, 7299-7305) y posterior hidrólisis del grupo acetamida. De acuerdo con un procedimiento análogo, se prepara 2,4-diamino-4,5,6,7-tetrahidro-1H-bencimidazol a partir de N-(2-oxociclohexil)-acetamida.
El 2,6-diamino-4,5,6,7-tetrahidro-1,3-benzoxazol se prepara a partir de N-(4-oxociclohexil)-acetamida por ciclación con tiourea según el procedimiento descrito para la síntesis de 2-amino-4,5,6,7-tetrahidro-1,3-benzoxazol (Nayer H., Giudicelli R., Menin J. Bull. Soc. Chim. 1967, 2040-2043) y posterior hidrólisis del grupo acetamida. Según el procedimiento análogo, se prepara 2,4-diamino-4,5,6,7-tetrahidro-1,3-benzoxaol a partir de N-(2-oxociclohexil)-acetamida.
A partir de ciclopentano-1,3-diona, monoetilenacetal de ciclopentano-1,3-diona y N-(3-oxociclopentil)acetamida según procedimientos análogos como los descritos anteriormente, se preparan los amino-derivados de 6,7-dihidro-5H-ciclopenta[d]pirimidina, 1,4,5,6-tetrahidrociclopenta[d]imidazol, 5,6-dihidro-4H-ciclopenta[d][1,3]-tiazol, 5,6-dihidro-4H-ciclopenta[d][1,3]-oxazol, 2,4,5,6-tetrahidrociclopenta[c]pirrol y 2,4,5,6-tetrahidrociclopenta[c]pirazol.
Como se muestra en el esquema II, se prepara (1,4-dioxoespiro[4.5]decan-8-il)metanamina a partir de monoetilenacetal de 1,4-ciclohexanodiona (Becker D.P., Flynn D.L. Synthesis, 1992, 1080) y, después de la acetilación con acetan hidruro y separación de la protección cetal, se convierte entonces con DMFDMA a la enaminocetona (8). La 6-(aminometil)-5,6,7,8-tetrahidro-2-quinazolinamina (9) se prepara por ciclocondensación de la enaminocetona (8) con hidrocloruro de guanidina y posterior hidrólisis alcalina. A partir de la enaminocetona adecuada (8), según procedimientos análogos como los descritos en el artículo de Bach N.J., Komfeld E.C., Jones N.D. et al. J. Med. Chem. 1980, 23, 481, se preparan 4,5,6,7-tetrahidro-2H-isoindol-5-ilmetanamina (10) y 4,5,6,7-tetrahidro-2H-indazol-5-ilmetanamina (11). La 6-(aminometil)-5,6,7,8-tetrahidro-2,4-quinazolindiamina (13) se prepara por ciclocondensación de cianoguanidina con N-[(4-oxociclohexil)metil]acetamida (7) según el procedimiento análogo descrito en: Modest E.J., Chatterjee S., Protopapa H.K. J. Am. Chem. Soc. 1965, 87, 1837; Gangjee A., Zaveri N., Queener S.F. et al. J. Heterocycl. Chem. 1995, 32, 243, y posterior hidrólisis alcalina.
Esquema II
11
Mediante bromación y ciclación de N-[(4-oxociclohexil)metil]acetamida (7) con tiourea, se prepara 6-(aminometil)-4,5,6,7-tetrahidro-1,3-benzotiazol-2-amina (12). La 4-(aminometil)-4,5,6,7-tetrahidro-1,3-benzotiazol-2-amina se prepara según el procedimiento análogo descrito en el artículo de Maillard J., Delaunay P., Langlois M. et al. Eur. J. Med. Chem. 1984, 19, 457-460 a partir de 2-oxociclohexanocarboxilato de etilo, el cual se somete primero a bromación y ciclación con tiourea. El 2-amino-4,5,6,7-tetrahidro-1,3-benzotiazol-4-carboxilato de etilo generado se reduce al alcohol adecuado, el cual es tosigado entonces en el grupo hidroxilo y, después de la reacción con amoniaco, se prepara 4-(aminometil)-4,5,6,7-tetrahidro-1,3-benzotiazol-2-amina. Empleando los procedimientos anteriormente descritos, a partir de 2-oxociclohexanocarboxilato de etilo, se pueden preparar 4,5,6,7-tetrahidro-2H-isoindol-7-ilmetanamina, 4,5,6,7-tetrahidro-2H-indazol-7-ilmetanamina, 8-(aminometil)-5,6,7,8-tetrahidro-2,4-quinazolindiamina y 8-(aminometil)-5,6,7,8-tetrahidro-2-quinazolinamina.
A partir de ciclopentano-1,3-diona, monoetilenacetal de ciclopentano-1,3-diona y N-(3-oxociclopentil)acetamida, según procedimientos análogos a los descritos anteriormente y mostrados en el esquema II, se preparan aminometil-derivados de 6,7-dihidro-5H-ciclopenta[d]pirimidina, 1,4,5,6-tetrahidrociclopenta[d]-imidazol, 5,6-dihidro-4H-ciclopenta[d][1,3]-tiazol, 5,6-dihidro-4H-ciclopenta[d][1,3]-oxazol, 2,4,5,6-tetrahidrociclopenta[c]pirrol y 2,4,5,6-tetrahidrociclopenta[c]pirazol.
Esquema III
12
A partir de 1-bencil-4-piperidinona, de acuerdo con los procedimientos de ciclación mostrados en el esquema I, seguido por separación del grupo bencilo por hidrogenación catalítica, se preparan 5,6,7,8-tetrahidropirido[4,3-d]pirimidinas sustituidas (14, R^{1} = NH_{2}, R^{2} = NH_{2}; 15, R^{1} = NH_{2}, R^{2} = H), enlazadas al grupo A por la posición 6; 4,5,6,7-tetrahidro[1,3]tiazol[4,5-c]piridina sustituida (16, X = S, R^{1} = H o NH_{2}); 4,5,6,7-tetrahidro-3H-imidazo[4,5-c]piridina sustituida (17, X = NH, R^{1} = H o NH_{2});4,5,6,7-tetrahidro-[1,3]oxazol[4,5-c]piridina sustituida (18, X = O, R^{1} = H o NH_{2}); 4,5,6,7-tetrahidro-2H-pirazol[4,3-c]piridina (19, Y = NH); y 4,5,6,7-tetrahidro-2H-pirrol[3,4-c]piridina (20, Y = CH) (Esquema III).
Esquema IV
13
Se preparan 4,6-quinazolindiamina (21) y 2,4,6-quinazolintriamina (22) de acuerdo con el método descrito en la bibliografía (Victory P., Borrell J.I., Vidal-Ferran A., Montenegro E., Jimeno M.L. Heterocycles 1993, 36, 2273-2279; Yan S.J., Weinstock L.T., Cheng C.C. J. Heterocycl. Chem. 1979, 16, 541-544 (Esquema IV). Según el mismo método, se preparan 4,7-quinazolindiamina y 2,4,7-quinazolintriamina a partir de 2-amino-4-nitro-benzonitrilo [Houben-Weyl: Hetarenes IV: Vol. E 9b/parte 2. 4th ed., Thieme, Stuttgart, New York (1998), p. 1-192].
Se preparan 6-(aminometil)-4-quinazolinamina, 7-(aminometil)-4-quinazolinamina, 6-(aminometil)-2-quinazolinamina, 7-(aminometil)-2-quinazolinamina, 6-(aminometil)-2,4-quinazolindiamina y 7-(aminometil)-2,4-quinazolindiamina a partir de 6-(bromometil)-4-cloroquinazolina, 7-(bromometil)-4-cloroquinazolina, 6-(bromometil)-2-cloroquinazolina, 7-(bromometil)-2-cloroquinazolina, 6-(bromometil)-2,4-dicloroquinazolina o 7-(bromometil)-2,4-dicloroquinazolina y amoniaco en disolventes polares a presión y temperatura elevadas. Dichas 6-bromometil- y 7-bromometilcloroquinazolinas se preparan por bromación de 6-metil-4-cloroquinazolina, 6-metil-2-cloroquinazolina, 7-metil-4-cloroquinazolina, 7-metil-2-cloroquinazolina, 6-metil-2,4-dicloroquinazolina y 7-metil-2,4-dicloroquinazolina, por ejemplo, como se describe para la preparación de 6-bromometil-4-cloroquinazolina en la solicitud de patente EP 566226. La preparación de imidazo[1,2-]piridina-6-ilmetanamina se describe en la solicitud de patente WO9961442.
Los compuestos de fórmula general (I), en donde A representa el grupo -CONH- enlazado a Het con el fragmento NH o el grupo -CONHCH_{2}- enlazado a Het con el fragmento CH_{2} se preparan por condensación del fragmento B que tiene un grupo protector P o el fragmento D-CO enlazado al átomo de N y el grupo COOH enlazado al carbono (que en la mayoría de los casos es un centro estereogénico) adyacente a nitrógeno y enlazado con el fragmento Het-NH_{2} o Het-CH_{2}NH_{2} (Esquema V, Esquema VI). Cuando un grupo protector P está enlazado al átomo de N del fragmento B, después de la condensación se separa el grupo protector y el compuesto obtenido se condensa con el fragmento D-COOH (Esquema VI). Para la condensación, en ambos ejemplos, se pueden emplear reactivos convencionales para la formación del enlace péptido tal como, por ejemplo, diciclohexilcarbodiimida, 1-(3-dimetilaminopropil)-3-etilcarbodiimida (EDC), difenilfosforilazida, cloroformatos de alquilo, etc (véase, por ejemplo, Bodanszky M., Bodanszky A. The Practice of Peptide Synthesis, Springer, Berlin, 1994). Para la separación de grupos protectores, se pueden emplear procedimientos convencionales como los descritos, por ejemplo, en los libros: (Green T.W. Protective groups in organic synthesis, John Wiley & Sons, New York, 1980; Kocienski P.J. Protecting groups, Thieme Verlag, Stuttgart, 1994).
Esquema V
\vskip1.000000\baselineskip
D-CO-B(COOH) + H_{2}N-(CH_{2})_{n}-Het \longrightarrow D-CO-B-CO-NH-(CH_{2})_{n}-Het
\hskip7cm n=0,1
\vskip1.000000\baselineskip
Esquema VI
14
El fragmento B-A-Het, en donde A es el grupo -CH_{2}NH- enlazado a Het con el fragmento NH o A es el grupo -CH_{2}NHCH_{2}- enlazado a Het con el fragmento CH_{2}, se prepara por aminación reductiva de aldehídos B-CHO en donde un grupo protector adecuado está enlazado al átomo de N (la preparación de estos compuestos se describe, por ejemplo, en el artículo de Avenell K.Y., Boyfield I., Hadley M.S. et al. Bioorg. Med. Chem. Lett. 1999, 9, 2715), el cual se introduce y se separa, una vez finalizada la reacción, de acuerdo con el método tradicionalmente usado en este campo técnico (Green T.W. Protective groups in organic synthesis, John Wiley & Sons, New York, 1980; Kocienski P.J. Protecting groups, Thieme Verlag, Stuttgart, 1994), con aminas Het-NH_{2} o HetCH_{2}NH_{2}. La aminación reductiva es una reacción bien conocida descrita, por ejemplo, en los artículos: Lane C.F., Synthesis 1975, 135; Abdel-Magid A.F., Carson K.G., Harris B.D. et al. J. Org. Chem. 1996, 61, 3849).
El fragmento B-A-Het en donde A es el grupo -CH_{2}NHCONH- enlazado a Het con el fragmento -NH- como se prepara a partir del aldehído B-CHO (en donde un grupo protector adecuado P está enlazado a N y se introduce y se separa, una vez finalizada la reacción, de acuerdo con los métodos tradicionalmente usados en este campo técnico) para someterse entonces a aminación reductiva con acetato amónico, como ya se ha descrito, y luego conversión de la amina obtenida con cloroformato de etilo, lo cual se efectúa de acuerdo con el procedimiento análogo descrito en el libro: Bodanszky M., Bodanszky A. The Practice of Peptide Synthesis, Springer, Berlin, 1994, 92-93. Se obtiene un compuesto del tipo P-B-CH_{2}NHCOOEt que está enlazado a Het-NH_{2} por el procedimiento convencional. El fragmento B-A-Het, en donde A es el grupo -CH_{2}NHCH_{2}CONH-enlazado a Het con el fragmento -NH-, se prepara de acuerdo con el procedimiento análogo pero en lugar de cloroformato de etilo, se utiliza bromoacetato de etilo. En el caso de que A sea un grupo -CH_{2}NHCOCH_{2}NH- enlazado a Het con el fragmento -NH-, primero se realiza la reacción entre Het-NH_{2} y bromoacetato de etilo de acuerdo con procedimientos convencionales, y luego el éster obtenido Het-NH-CH_{2}COOEt se convierte a un compuesto B-CH_{2}NHCOCH_{2}NHHet empleando un compuesto B-CH_{2}NH_{2}, obtenido según el procedimiento anteriormente descrito. Los fragmentos B-A-Het en donde A representa el grupo -CH_{2}NHCONHCH_{2}-, -CH_{2}NHCH_{2}CONHCH_{2}-, -CH_{2}NHCOCH_{2}NHCH_{2}-, enlazado a Het por el fragmento -CH_{2}-, se preparan de acuerdo con procedimientos análogos pero en lugar de Het-NH_{2} se emplea Het-CH_{2}NH_{2}.
Los compuestos del tipo NH(R^{3})CH(R^{4})COOR, que sirven para introducir el fragmento B, se preparan por aminación reductiva de aldehídos o cetonas con ésteres de aminoácidos empleando cianoborohidruro sódico (Stanton J.L., Gruenfeld N., Babiarz J.E. et al. J. Med. Chem. 1983, 26, 1967) o triacetoxiborohidruro sódico (Abdel-Magid A.F., Carson K.G., Harris B.D. et al. J. Org. Chem. 1996, 61, 3849-3862). Cuando R en el tipo anterior de compuestos representa un grupo alquilo o bencilo, se pueden obtener los ácidos adecuados por hidrólisis alcalina o por hidrogenación catalítica.
Los compuestos del tipo D-COOH, en donde R^{a}, R^{b} y R^{d} en la fórmula (I) tienen el significado ya indicado y R^{c} representa el grupo -NHO_{2}S(CH_{2})_{n}-W, se preparan por reacción de aminoácidos adecuados y apropiadamente protegidos con cloruros de sulfonilo W-(CH_{2})_{n}-SO_{2}Cl de acuerdo con el método descrito, por ejemplo, en el artículo de FENA D.M., Gardell S.J., Lewis S.D. et al. J. Med. Chem. 1997, 40, 3726.
Los compuestos del tipo D-COOH, en donde R^{a}, R^{b} y R^{d} en la fórmula (I) tienen el significado ya indicado y R^{c} representa el grupo N[O_{2}S(CH_{2})_{n}-W][(CH_{2})_{k}COOH], se preparan por alquilación de sulfonamidas W-(CH_{2})_{n}-SO_{2}NHCH(R^{d})COOH descritas en el párrafo anterior, con haloácidos X-(CH_{2})_{n}-COOH o ésteres de los mismos (si se emplean ésteres, después de la alquilación deberá efectuarse una hidrólisis alcalina).
Los compuestos del tipo D-COOH, en donde R^{a}, R^{b} y R^{d} en la fórmula (I) tienen los significados ya indicados y R^{c} representa uno de los grupos
- NH(CH_{2})_{n}CH_{3},
- NH(CH_{2})_{m}OH,
- NH(CH_{2})_{k}COOH,
- NH(CH_{2})_{n}COOR^{5},
- NH(CH_{2})_{k}CONR^{6}R^{7},
- NH(CH_{2})_{k}NH_{2},
- NHC(Ph)_{3}
en donde k, m, n, R^{5}, R^{6} y R^{7} se definen como anteriormente, se prepara por alquilación de aminoácidos con haluros de alquilo convencionales, haluros de \omega-hidroxialquilo adecuadamente protegidos, haluros de \omega-aminoalquilo adecuadamente protegidos o halocarboxilatos de de alquilo. Los grupos protectores pueden ser separados de los productos obtenidos empleando métodos en general conocidos (Green T.W. Protective groups in organic synthesis, John Wiley & Sons, New York, 1980; Kocienski P.J. Protecting groups, Thieme Verlag, Stuttgart, 1994) y de manera similar, empleando métodos convencionales para la hidrólisis de ésteres, formación del enlace péptido o aminolisis de ésteres, los compuestos en donde R^{c} representa NH(CH_{2})_{n}COOR^{5} se pueden convertir a ácidos [R^{c} = NH(CH_{2})_{k}COOH] y amidas [R^{c} = NH(CH_{2})_{n}CONR^{6}R^{7}].
Las sales farmacéuticamente aceptables de los compuestos de fórmula I se preparan por tratamiento de los compuestos I con ácidos o bases en disolventes orgánicos adecuados tradicionalmente usados en este campo técnico.
Ensayos in vitro para determinar la inhibición de proteinasas Ensayos de coagulación
El efecto anticoagulante de los inhibidores de trombina se midió mediante ensayos del tiempo de trombina (TT), tiempo de tromboplastina parcial activado (aPTT) y tiempo de protrombina (PT). Los inhibidores de añadieron a plasma humano normal en un intervalo de concentraciones y se anotó la coagulación en un coagulómetro automatizado (Fibrintimer, Dade/Behring). En cada ensayo se determinó la concentración de inhibidor que doblaba el tiempo de coagulación.
1. Tiempo de trombina (TT) a) Principio del método
En una muestra de plasma, la trombina convierte fibrinógeno en fibrina y se forma el coágulo. Se midió el tiempo para la formación del coágulo. El tiempo de trombina se prolonga debido a trastornos en la polimerización de fibrina o como consecuencia de la presencia de inhibidores de trombina.
b) Reactivos
Trombina (Reactivo de Trombina para Ensayos, 1,5 IU/ml, Dade/Behring): se disolvió trombina bovina liofilizada en 5 ml de HEPES (25 mmol/l, pH 7,4). El reactivo se calentó a 37ºC antes del ensayo.
Plasma normal reunido: se recogió sangre venosa de 11 voluntarios aparentemente sanos (1 parte de solución de citrato sódico 0,11 mol/l con 9 partes de sangre) y se centrifugó inmediatamente a 2.000 x g durante 30 minutos a 4ºC. El plasma fue retirado, reunido y guardado en partes alícuotas a -70ºC hasta su empleo.
Inhibidores: se disolvieron en DMSO (solución madre 10 mM) y se diluyeron con agua destilada hasta obtener las soluciones de trabajo (concentración más alta: 100 \muM).
c) Método
Los inhibidores (solución de trabajo 10 \mul, concentraciones de 2,5 \muM a 100 \muM) y el plasma reunido (90 \mul) fueron incubados a 37ºC durante 5 minutos y luego se añadió trombina (200 \mul). Se midió la formación de coágulo en un coagulómetro por duplicado.
2. Tiempo de tromboplastina parcial activada (aPTT) a) Principio del método
La incubación de plasma con la cantidad óptima de fosfolípidos y un activador de la superficie conduce a la activación de factores de la vía de coagulación intrínseca. La adición de iones calcio dispara el proceso de coagulación. Se midió el tiempo para la formación de coágulo de fibrina. Se utilizó aPTT como un ensayo de determinación de trastornos de la coagulación de la vía de coagulación intrínseca. Esta se prolongó debido al déficit de factores intrínsecos de la coagulación o debido a la presencia de inhibidores.
b) Reactivos
Pathromtin SL (Dade/Behring): partículas de dióxido de silicio, fosfolípidos vegetales, cloruro sódico (2,4 g/l), Hepes (14,3 g/l, pH 7,6), azida sódica (<1 g/l). El reactivo se utilizó a temperatura ambiente (15-25 C).
Solución de cloruro cálcico: 0,025 mol/l, calentada a 37ºC.
Plasma reunido normal: se recogió sangre de la vena de 11 voluntarios aparentemente sanos (1 parte solución de citrato sódico 0,11 mol/l con 9 partes de sangre) y se centrifugó inmediatamente a 2.000 x g durante 30 minutos a 4ºC. El plasma fue retirado, reunido y guardado en partes alícuotas a -70ºC hasta su empleo.
Inhibidores: se disolvieron en DMSO (solución madre 10 mM) y se diluyeron con agua destilada hasta obtener las soluciones de trabajo (concentración más alta: 100 \muM).
c) Método
El inhibidor (solución de trabajo 10 \mul, concentraciones de 5 \muM a 100 \muM) y el plasma reunido (90 \mul) se incubaron a 37ºC durante 5 minutos. Se añadió Pathromtin (100 \mul) y la muestra se incubó durante otros 2 minutos a 37ºC. La adición de cloruro cálcico (100 \mul) disparó el proceso de coagulación y se detectó la formación de coágulo por medio de un coagulómetro por duplicado.
3. Tiempo de protrombina (PT) a) Principio del método
Se añadió una cantidad óptima de tromboplastina y calcio a la muestra de plasma y se midió el tiempo para la formación de coágulo de fibrina. El PT es un ensayo sensible y rápido para determinar los trastornos de coagulación de la vía extrínseca. Resulta muy adecuado para la inducción y control de la terapia anticoagulante oral, para el diagnóstico de deficiencias genéticas o adquiridas en factores de coagulación y para verificar el comportamiento de síntesis del hígado en enfermedades hepáticas. El PT se prolonga debido a déficit de factores extrínsecos de la coagulación o debido a la presencia de inhibidores.
b) Reactivos
Tromboplastina (Thromborel S, Dade/Behring): se disolvió en 4 ml de agua destilada. El reactivo estaba a 37ºC antes de su uso al menos durante 30 minutos.
Plasma reunido normal: se recogió venosa de 11 voluntarios aparentemente sanos (1 parte de solución de citrato sódico 0,11 mol/l con 9 partes de sangre) y se centrifugó de manera inmediata a 2.000 x g durante 30 minutos a 4ºC. El plasma fue retirado, reunido y guardado en partes alícuotas a -70ºC hasta su empleo.
Inhibidores: se disolvieron en DMSO (solución madre 10 mM) y se diluyeron con agua destilada hasta obtener las soluciones de trabajo (concentración más elevada: 100 \muM).
c) Método
El inhibidor (10 \mul de solución de trabajo, concentraciones de 5 \muM a 100 \muM) y plasma reunido (90 \mul) se incubaron a 37ºC durante 5 minutos y luego se añadió Thromborel S (200 \mul). La formación de coágulos se midió con un coagulómetro por duplicado.
Análisis enzimático
El efecto inhibidor de enzimas de los compuestos puede ser identificado por determinación de la constante de inhibición Ki. Esta representa el grado de disociación del complejo enzima-inhibidor. Una constante de disociación baja representa una alta potencia del inhibidor. La Ki se puede determinar durante la reacción de la enzima con un sustrato cromógeno específico que, bajo hidrólisis por la enzima, desarrolla color. El tiempo de reacción se registra mediante espectrofotometría y se calcula Ki a partir de los parámetros cinéticos (Vmax, Km, velocidad de reacción).
1. Determinación de Ki de trombina a) Principio del método
Mediante la determinación de Ki fue evaluada la capacidad de un compuesto para actuar como inhibidor de la actividad catalítica de trombina humana.
b) Reactivos
Tampón: HBSA, pH 7,5 (10 mM Hepes, 150 mM NaCl, 0,1% p/v albúmina de suero bovino).
Sustrato (S-2238: H-D-Phe-Pip-Arg-pNA HCl, 25 mg; Chromogenix): se disolvió en agua destilada a una concentración de 1 mM. (Km es 2,6 \muM).
Trombina humana (308 NIH; Sigma): se disolvió en salina para obtener una solución madre de 20 NIH/ml.
Inhibidores: se disolvieron en DMSO (solución madre 10 mM) y se diluyeron con agua destilada hasta obtener soluciones de trabajo (la concentración final más elevada de DMSO fue de 3%).
c) Método
Una mezcla de 50 \mul de tampón, 50 \mul de inhibidor en agua (concentración final: 10 a 100 \muM) y 50 \mul de trombina (0,5 NIH U/ml f.c.) se incubó durante 15 minutos a temperatura ambiente. La reacción se inició con 50 \mul de S-2238 (20 \muM o 40 \muM f.c.) y se midió la absorbancia de cada muestra a 405 nm (a 25ºC) por triplicado cada 10 segundos durante un periodo de 15 minutos, empleando un lector de placas de microvaloración (Tecan Sunrise).
La actividad de trombina fue determinada a partir del cambio de absorbancia en la parte lineal del gráfico de velocidad. La Ki se calculó de acuerdo con Cheng y Prussof (Biochem Pharmacol, 1973) en donde Ki es IC_{50}/(1+S/Km). La Km para el sustrato se determinó bajo las condiciones de ensayo con al menos 6 concentraciones de sustrato que varían alrededor de Km y se calculó con la curva del programa de regresión no lineal.
2. Determinación de la Ki de tripsina a) Principio
La capacidad de un compuesto para actuar como inhibidor de la actividad catalítica de tripsina fue evaluada por determinación de la Ki.
b) Reactivos
Tampón: HBSA, pH 7,5 (10 mM Hepes, 150 mM NaCl, 0,1% p/v albúmina de suero bovino)
Sustrato (S-222: N-benzoil-Ile-Glu-Gly-Arg-pNA HCl, 25 mg; Chromogenix): se disolvió en agua destilada a una concentración de 2 mM. (Km es 21 \muM).
Tripsina (6000 E/mg prot.; Sigma): se disolvió en agua destilada para obtener una solución madre de 300 E/ml.
Inhibidores: se disolvieron en DMSO (solución madre 10 mM) y se diluyeron con agua destilada hasta obtener la solución de trabajo (la concentración final más elevada del DMSO fue de 10%).
c) Método
Se incubaron durante 15 minutos, a temperatura ambiente, 50 \mul de tampón, 50 \mul de compuesto de ensayo en agua (concentraciones finales de 50 a 300 \muM) y 50 \mul de tripsina (3 mE/ml f.c.). La reacción se inició con 50 \mul de S-222 (50 \muM o 100 \muM f.c.) y se midió la absorbancia de cada muestra a 405 nm (a 25ºC) por triplicado cada 10 segundos durante un periodo de 15 minutos, empleando un lector de placas de microvaloración (Tecan Sunrise).
La actividad de tripsina se determinó a partir del cambio de absorbancia en la parte lineal del gráfico de velocidad. La Ki se calculó de acuerdo con Cheng y Prussof (Biochem Pharmacol, 1973) en donde Ki es IC_{50}/(1+S/Km). La Km para el sustrato se determinó bajo las condiciones del ensayo con al menos 6 concentraciones de sustrato que varían alrededor de Km y se calculó con la curva del programa de regresión no lineal.
3. Selectividad a trombina
Mediante el uso de otra serina proteasa de tipo tripsina con el sustrato cromógeno adecuado, se determinó la selectividad de inhibidores con respecto a trombina. La selectividad de un inhibidor se expresa como una relación de Ki para tripsina a Ki para trombina.
La invención se describe adicionalmente por medio de los siguientes ejemplos, los cuales no deberán ser considerados de modo alguno como limitativos.
Ejemplo 1 (2S)-2-({(2R)-2-[(bencilsulfonil)amino]-3-fenilpropanoil}amino)propanoato de metilo
15
A una solución de N-(bencilsulfonil)-D-Phe-OH (1,56 g, 5,0 mmol) e hidrocloruro de éster metílico de L-Ala (0,628 g, 4,5 mmol) en 11 ml de DMF, se añadió HOBt (0,770 g, 5,0 mmol). El pH de la solución se ajustó con N-metilmorfolina a 8, seguido por adición de EDC (0,978 g, 5,0 mmol). La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante la noche. Se evaporó el disolvente y al residuo se añadieron EtOAc y una solución saturada de NaHCO_{3}. La capa orgánica se lavó con salmuera, se secó sobre MgSO_{4}, se filtró y el disolvente se evaporó bajo presión reducida para obtener 1,73 g de un sólido amarillo (95%).
IR(KBr): \nu=3281, 2952, 1736, 1648, 1543, 1456, 1317, 1221, 1151, 1125, 952, 790, 749, 698, 548 cm^{-1}.
MS (El): m/z (%) 405 (MH-, 47), 91 (100).
^{1}H-NMR (300 MHz, DMSO-d_{6}): \delta 1,19 (d, 3H, J=7,16 Hz, AlaCH_{3}), 2,80 (2,92) (ABX_{system}, 2H, J_{AB}=13,56, J_{AX}=9,04, J_{BX}=6,03, PheCH_{2}), 3,58 (s, 3H, COOCH_{3}), 4,01 (AB_{system}, 2H, J_{AB}=13,56 Hz, CH_{2}Ph), 4,15-4,36 (m, 2H, AlaCH, PheCH), 7,19-7,35 (m, 10H, 2 Ph), 7,67 (d, 1H, J= 9,04 Hz, NH), 8,61 (d, 1H, J= 7,16 Hz, NH).
Ejemplo 2 Ácido (2S)-2-({(2R)-2-[(bencilsulfonil)amino]-3-fenilpropanoil}amino)propanoico
16
Se disolvió N-(bencilsulfonil)-D-Phe-L-Ala-OMe (1,70 g, 4,21 mmol) en 100 ml de MeOH/H_{2}O (1/1) y se añadieron gota a gota 2,5 ml de solución 2,2 M de LiOH para ajustar el pH en 12-13. Después de agitar durante la noche, el pH de la mezcla de reacción se ajustó a 7, empleando solución diluida de KHSO_{4}. Se evaporó el metanol y la fase acuosa residual se acidificó con KHSO_{4} a pH = 2, se extrajo con acetato de etilo, se lavó con salmuera, se secó sobre Na_{2}SO_{4}, se filtró y se evaporó bajo presión reducida. El procedimiento proporcionó 0,950 g de un sólido de color amarillo débil (58%).
IR (KBr): \nu= 3321, 2930, 1734, 1654, 1541, 1497, 1456, 1321, 1152, 1031. 950, 783. 747, 699, 621, 543 cm^{-1}.
MS (El): m/z (%) 391 (M^{+}, 100).
^{1}H-NMR (300 MHz, DMSO-d_{6}): \delta 1,15-1,21 (m, 3H, AlaCH_{3}), 2,80 (2,91) (ABX_{system}, 2H, J_{AX}=9,04, J_{BX}=6,03, J_{AB}=13,56, PheCH_{2}), 4,03 (AB_{system}, 2H, J_{AB}=13,56 Hz, CH_{2}Ph), 4,17-4,35 (m, 2H, AlaCH, PheCH), 7,20-7,33 (m,10H, 2 Ph), 7,65 (d, J=9,04 Hz, 1H, NH), 8,50 (d, J= 7,53 Hz, 1H, NH), 12,62 (s, 1H, COOH).
Ejemplo 3 (2S)-1-[2-(tritilamino)acetil]2-pirrolidincarboxilato de metilo
17
A una solución de N-(tritil)-Gly (3,11 g, 10 mmol) y L-Pro-OMe (1,16 g, 9,0 mmol) en 22,5 ml de DMF se añadió HOBt (1,55 g, 10 mmol). Se utilizó N-metilmorfolina para ajustar el pH de la solución a 8, seguido por la adición de EDC (1,96 g, 10,0 mmol). La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante la noche. Se evaporó el disolvente y al residuo se añadieron acetato de etilo y solución saturada de NaHCO_{3}. La capa orgánica se lavó con salmuera, se secó sobre MgSO_{4}, se filtró y el disolvente se separó bajo presión reducida. El procedimiento proporcionó 3,81 g de un sólido blanco (91%).
MS (El): m/z (%) 428 (M^{+}, 65), 243 (100).
^{1}H-NMR (300 MHz, DMSO-d_{6}): \delta 1,70-2,15 (2*m, 4H, ProCH_{2}\beta, ProCH_{2}\gamma), 2,90-3,40 (2*m, 4H, GlyCH_{2}, ProCH_{2}\delta), 3,59 (s, 3H, CH_{3}), 4,1-4,17 (m, 1H, ProCH\alpha), 7,19-7,42 (m, 16H, 3xPh (tritilo), GlyNH).
\text{*} confórmeros cis/trans
Ejemplo 4 Ácido (2S)-1-[2-(tritilamino)acetil]-2-pirrolidincarboxílico
\vskip1.000000\baselineskip
18
Se disolvió N-(tritil)-Gly-L-Pro-OMe (3,0 g, 7,0 mmol) en 2000 ml de MeOH y se añadieron 10 ml de agua y 4,1 ml de 2,2 M LiOH gota a gota para ajustar el pH en 12-13. Después de agitar durante la noche, el pH de la mezcla de reacción se ajustó a 7 con solución diluida de KHSO_{4}. Se evaporó el metanol bajo presión reducida y la fase acuosa se acidificó con KHSO_{4} a pH=5, se extrajo con acetato de etilo, se lavó con salmuera, se secó sobre Na_{2}SO_{4}, se filtró y se evaporó bajo presión reducida, para proporcionar 2,41 g de un sólido blanco cristalino (83%).
Punto de fusión: 80-83ºC.
IR (KBr): \nu= 3416, 3057, 1734, 1645, 1447, 1194, 1034, 751, 703 cm^{-1}
MS: m/z (%) 413 (MH^{+} 58), 243 (100).
^{1}H-NMR (300 MHz, DMSO-d_{6}): \delta 1,90-2,15 (2*m, 4H, ProCH_{2}\beta, ProCH_{2}\gamma), 2,8-3,4 (2*m, 4H, GlyCH_{2}, ProCH_{2}\delta), 4,1-4,17 (m, 1H, ProCH\alpha), 7,19-7,42 (m, 16H, 3xPh (tritilo), GlyNH).
Ejemplo 5 (\pm)-5,6,7,8-tetrahidro-2,6-quinazolindiamina
\vskip1.000000\baselineskip
19
1. Preparación de (\pm)-N-(2-amino-5,6,7,8-tetrahidro-6-quinazolil)acetamida
A una solución de etóxido sódico (0,437 g, 19 mmoles) en 50 ml de etanol absoluto, se añadió hidrocloruro de guanidina (1,82 g, 19 mmoles). Después de agitar durante 30 minutos, se añadió una solución de N-[3-[(dimetilamino)metiliden]-4-oxociclohexil]acetamida (4,0 g, 19 mmoles) en etanol absoluto y la mezcla de reacción se sometió a reflujo bajo una atmósfera de argón durante 3 horas. El sólido separado se recogió por filtración para proporcionar 3,38 g (87%) de compuesto sólido blanco.
Punto de fusión: 256-258ºC,
IR (KBr): \nu= 3398, 3319, 3212, 3050, 2944, 1647, 1625, 1596, 1558, 1477, 1456 1375, 1287,1192, 1099, 1047, 868, 793 cm^{-1}.
MS (FAB): m/z (%) 207 (MH^ 40), 147 (100).
^{1}H-NMR (300 MHz, DMSO-d_{6}): \delta 1,60-1,73 (m, 1H, CH_{2}), 1-80 (s, 3H, NHCOCH_{3}), 1,83-1,94 (m, 1H, CH_{2}), 2,33-2,41 (m, 1H, CH_{2}), 2,60-2,77 (m, 3H, CH_{2}, CH_{2}), 3,82-3,96 (m, 1H, 6-CH), 6,24 (s, 2H, 2-NH_{2}), 7,88 (d, 1H, J=6,78 Hz, NHCO), 7,93 (s, 1H, 4-CH).
Análisis para C_{10}H_{14}N_{4}O:
Calculado: 58,24% C, 6,84% H, 27,18% N.
Encontrado: 57,88% c, 6,77% H, 26,91% N.
2. Preparación de (\pm)-5,6,7,8-tetrahidro-2,6-quinazolindiamina
Una solución de N-(2-amino-5,6,7,8-tetrahidro-6-quinazolinil)-acetamida (3,0 g, 14,6 mmoles) e hidróxido sódico (30 g, 0,75 moles) en una mezcla de agua (30 ml) y metanol (90 ml) se sometió a reflujo durante 16 horas. Se añadió agua y la mezcla se extrajo con diclorometano. El extracto orgánico se lavó con salmuera, se secó sobre sulfato sódico y el disolvente se evaporó bajo presión reducida para dar 1,40 g (58%) de sólido blanco.
Punto de fusión: 178-181ºC
IR (KBr): \nu = 3412, 1652, 1602, 1558, 1487, 1428, 1362, 1258, 1209, 1103, 1060, 1013, 952, 805, 786, 752, 719 cm^{-1}.
MS (El): m/z (%) 164(M^{+},100).
^{1}H-NMR (300 MHz, DMSO-d_{6}): \delta 1,41-1,55 (m, 1H, CH_{2}), 1,80-1,92 (m, 1H, CH_{2}), 2,16-2,24 (m, 1H, CHz), 2,53-2,69 (m, 3H, CH_{2}, CH_{2}), 2,91-3,02 (m, 1H, G-CH), 6,18 (s, 2H, 2-NH_{2}), 7,90 (s, 1H, 4-CH).
Análisis para C_{8}H_{11}N_{4}:
Calculado: 58,51% C, 7,37% H, 34,12% N.
Encontrado: 59,09% c, 7,11% H, 33,91% N.
Ejemplo 6 (2S)-N-(2-amino-5,6,7,8-tetrahidro-6-quinazolinil)-1-{(2R)-2-[(bencilsulfonil)amino]-3-fenilpropanoil}-2-pirrolidincarboxamida
20
A una solución de N-(bencilsulfonil)-D-Phe-L-Pro-OH (219 mg, 0,53 mmol) y 2,6-diamino-5,6,7,8-tetrahidroquinazolina (82 mg, 0,50 mmol) en 1,1 ml de DMF se añadió HOBt (80 mg, 0,53 mmol). El pH de la solución se ajustó a 8 con N-metilmorfolina (papel de pH húmedo) y luego se añadió EDC (101 mg, 0,53 mmol) y la mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante la noche. Se añadió acetato de etilo (30 ml) y la fase orgánica se lavó con NaHCO_{3} (3 x 10 ml), salmuera (3 x 10 ml) y se secó sobre MgSO_{4}. El disolvente se evaporó bajo presión reducida y el producto se purificó adicionalmente por cromatografía en columna sobre Florisil empleando CHCl_{3}/3-5% MeOH como eluyente, para proporcionar 245 mg (87%) del compuesto del título como un sólido blanco.
Punto de fusión: 117-120ºC.
IR (KBr): \nu = 3442, 1636, 1557, 1456, 1318, 1200, 1152, 1125, 945, 784, 699, 545 cm^{-1}.
MS (FAB): m/z (%) 563 (MH^{+}, 53).
Ejemplo 7 (1R)-2-((2S)-2-{[(2-amino-5,6,7,8-tetrahidro-6-quinazolinil)amino]carbonil}pirrolidinil)-1-bencil-2-oxoetilcarbamato de terc-butilo
21
El compuesto del título se preparó a partir de Boc-D-Phe-L-Pro-OH y 2,6-diamino-5,6,7,8-tetrahidroquinazolina de acuerdo con el procedimiento descrito en el ejemplo 6. El producto se obtuvo como un sólido blanco.
Rendimiento: 77%
Punto de fusión: 110-113ºC.
IR (KBr): \nu = 3477, 1648, 1541, 1457, 1367, 1252, 1166, 750, 701 cm^{-1}.
MS (FAB): m/z (%) 509 (MH^{+}, 31).
Ejemplo 8 Dihidrocloruro de (2S)-1-[(2R)-2-amino-3-fenilpropanoil]-N-(2-amino-5,6,7,8-tetrahidro-6-quinazolinil)-2-pirrolidincarboxamida
22
Se burbujeó gas de HCl durante 50 minutos a través de una solución de (1R)-2-((2S)-2-{[(2-amino-5,6,7,8-tetrahidro-6-quinazolinil)amino]carbonil}pirrolidinil)-1-bencil-2-oxietilcarbamato de terc-butilo (240 mg, 0,47 mmol) en 15 ml de ácido acético anhidro a temperatura ambiente. El ácido acético se evaporó bajo presión reducida y el residuo se trituró varias veces con éter dietílico para proporcionar 141 mg (62%) del compuesto del título como un sólido blanco.
Punto de fusión: 205-208ºC.
IR (KBr): \nu = 3421, 1654, 1541, 1456, 1362, 1202, 948, 764, 704 cm^{-1}.
MS (FAB): m/z (%) 409 (MH^{+}, 37).
Ejemplo 9 (2S)-1-{(2R)-2-[(bencilsulfonil)amino]3-fenilpropanoil}-N-(4,5,6,7-tetrahidro-2H-indazol-5-il)-2-pirrolidincarboxamida
23
El compuesto del título se obtuvo como un sólido blanco a partir de N-(bencilsulfonil)-D-Phe-L-Pro-OH e hidrocloruro de 5-amino-4,5,6,7-tetrahidro-2H-indazol empleando el procedimiento del ejemplo 6.
Rendimiento: 78%
Punto de fusión: 114-116ºC.
IR (KBr): \nu = 3482, 1651, 1541, 1456, 1318, 1154, 955, 700, 544 cm^{-1}.
MS (FAB): m/z (%) 536 (MH^{+}, 49).
Ejemplo 10 (1R)-1-bencil-2-oxo-2-{(2S)-2-[(4,5,6,7-tetrahidro-2H-indazol-5-ilamino)carbonil]pirrolidinil}etilcarbamato de terc-butilo
24
El compuesto del título se preparó a partir de Boc-D-Phe-L-Pro-OH y dihidrocloruro de 5-amino-4,5,6,7-tetrahidro-2H-indazol empleando el procedimiento del ejemplo 6 y se obtuvo como un sólido blanco.
Rendimiento: 80%
Punto de fusión: 108-110ºC.
IR (KBr): \nu = 3464, 1636, 1540, 1456, 1367, 1252, 1165, 1089, 957, 749, 702 cm^{-1}.
MS (FAB): m/z (%) 482 (MH^{+}, 66).
Ejemplo 11 Dihidrocloruro de (2S)-1-[(2R)-2-amino-3-fenilpropanoil]-N-(4,5,6,7-tetrahidro-2H-indazol-5-il)-pirrolidincarboxamida
25
El compuesto del título se preparó a partir de (1R)-1-bencil-2-oxo-2-{(2S)-2-[(4,5,6,7-tetrahidro-2H-indazol-5-ilamino)carbonil]pirrolidinil}etilcarbamato de terc-butilo empleando el procedimiento del ejemplo 8 y se obtuvo como un sólido blanco.
Rendimiento: 77%
Punto de fusión: 203-206ºC.
IR (KBr): \nu = 3417, 1639, 1453, 1362, 1199, 1083, 919, 761, 703 cm^{-1}.
MS (FAB): m/z (%) 382 (MH^{+}, 100).
Ejemplo 12 (2S)-N-[(2-amino-5,6,7,8-tetrahidro-6-quinazolinil)metil]-1-{(2R)-2-[(bencilsulfonil)amino]-3-fenilpropanoil}-2-pirrolidincarboxamida
26
El compuesto del título se preparó a partir de N-(bencilsulfonil)-D-Phe-L-Pro-OH y 6-(aminometil)-5,6,7,8-tetrahidro-2-quinazolinamina empleando el procedimiento del ejemplo 6 y se obtuvo como un sólido blanco.
Rendimiento: 87%
Punto de fusión: 118-121ºC.
IR (KBr): \nu = 3464, 1636, 1558, 1541, 1318, 1125, 952, 699 cm^{-1}.
MS (FAB): m/z (%) 577 (MH^{+}, 47).
Ejemplo 13 (1S)-2-((2S)-2-{[(2-amino-5,6,7,8-tetrahidro-6-quinazolinil)amino]carbonil}pirrolidinil)-1-benzhidril-2-oxoetilcarbamato de terc-butilo
27
El compuesto del título se preparó a partir de Boc-L-3,3-(Ph)_{2}-Ala-L-Pro-OH y 2,6-diamino-5,6,7,8-tetrahidroquinazolina empleando el procedimiento del ejemplo 6 y se obtuvo como un sólido blanco.
Rendimiento: 98%
Punto de fusión: 127-130ºC.
IR (KBr): \nu = 3418, 1649, 1541, 1457, 1367, 1250, 1166, 864, 752, 701 cm^{-1}.
MS (FAB): m/z (%) 585 (MH^{+}, 52).
Ejemplo 14 (1R)-2-((2S)-2-{[(2-amino-5,6,7,8-tetrahidro-6-quinazolinil)amino]carbonil}pirrolidinil)-1-(3,4-diclorobencil)-2-oxoetilcarbamato de terc-butilo
28
El compuesto del título se preparó a partir de Boc-L-3,4-Cl_{2}-Phe-L-Pro-OH y 2,6-diamino-5,6,7,8-tetrahidroquinazolina empleando el procedimiento del ejemplo 6 y se obtuvo como un sólido blanco.
Rendimiento: 94%
Punto de fusión: 114-117ºC.
IR (KBr): \nu = 3447, 2977, 1648, 1557, 1472, 1251, 1165, 1029, 667 cm^{-1}.
MS (FAB): m/z (%) 577 (MH^{+}, 95).
Ejemplo 15 (1S)-1-benzhidril-2-oxo-2-{(2S)-2-[(4,5,6,7-tetrahidro-2H-indazol-5-ilamino)carbonil]pirrolidinil}etilcarbamato de terc-butilo
29
El compuesto del título se preparó a partir de Boc-L-3,3-(Ph)_{2}-Ala-L-Pro-OH y dihidrocloruro de 5-amino-4,5,6,7-tetrahidro-2-indazol empleando el procedimiento del ejemplo 6 y se obtuvo como un sólido blanco.
Rendimiento: 73%
Punto de fusión: 127-130ºC.
IR (KBr): \nu = 3448, 1649, 1540, 1454, 1367, 1250, 1166, 1092, 957, 861, 751, 701 cm^{-1}.
MS (FAB): m/z (%) 558 (MH^{+}, 60).
Ejemplo 16 (1R)-1-(3,4-diclorobencil)-2-oxo-2-{(2S)-2-[(4,5,6,7-tetrahidro-2H-indazol-5-ilamino)carbonil]pirrolidinil}etil- carbamato de terc-butilo
30
El compuesto del título se preparó a partir de Boc-D-3,4-Cl_{2}-Phe-L-Pro-OH y dihidrocloruro de 5-amino-4,5,6,7-tetrahidro-2-indazol empleando el procedimiento del ejemplo 6 y se obtuvo como un sólido blanco.
Rendimiento: 54%
Punto de fusión: 116-119ºC.
IR (KBr): \nu = 3419, 2976, 1648, 1540, 1455, 1367, 1251, 1165, 1029, 957, 753, 599 cm^{-1}.
MS (FAB): m/z (%) 550 (MH^{+}, 40).
Ejemplo 17 Dihidrocloruro de (2S)-1-[(2S)-2-amino-3,3-difenilpropanoil]-N-(2-amino-5,6,7,8-tetrahidro-6-quinazolinil)-2-pirrolidincarboxamida
31
El compuesto del título se preparó a partir de (1S)-2-((2S)-2-{[(2-amino-5,6,7,8-tetrahidro-6-quinazolinil)amino]carbonil}pirrolidinil)-1-benzhidril-2-oxoetilcarbamato de terc-butilo empleando el procedimiento del ejemplo 8 y se obtuvo como un sólido blanco.
Rendimiento: 98%
Punto de fusión: 212-215ºC.
IR (KBr): \nu = 3415, 1645, 1558, 1456, 1397, 1161, 617 cm^{-1}.
MS (FAB): m/z (%) 485 (MH^{+}, 64).
Ejemplo 18 Dihidrocloruro de (2S)-1-[(2R)-2-amino-3-(3,4-diclorofenil)propanoil]-N-(2-amino-5,6,7,8-tetrahidro-6-quinazolinil)-2-pirrolidincarboxamida
32
El compuesto del título se preparó a partir de (1R)-2-((2S)-2-{[(2-amino-5,6,7,8-tetrahidro-6-quinazolinil)-amino]carbonil}pirrolidinil)-1-(3,4-diclorobencil)-2-oxoetilcarbamato de terc-butilo empleando el procedimiento del ejemplo 8 y se obtuvo como un sólido blanco.
Rendimiento: 93%
Punto de fusión: 201-204ºC.
IR (KBr): \nu = 3417, 1650, 1541, 1472, 1396, 1241, 1032, 828, 593 cm^{-1}.
MS (FAB): m/z (%) 477 (MH^{+}, 50).
Ejemplo 19 Dihidrocloruro de (2S)-1-[(2S)-2-amino-3,3-difenilpropanoil]-N-(4,5,6,7-tetrahidro-2H-indazol-5-il)-2-pirrolidincarboxamida
33
El compuesto del título se preparó a partir de (1S)-1-benzhidril-2-oxo-2-{(2S)-2-[(4,5,6,7-tetrahidro-2H-indazol-5-ilamino)carbonil]pirrolidinil}-etilcarbamato de terc-butilo empleando el procedimiento del ejemplo 8 y se obtuvo como un sólido blanco.
Rendimiento: 95%
Punto de fusión: 195-198ºC.
IR (KBr): \nu = 3415, 2930, 1649, 1541, 1453, 1341, 1237, 1084, 753, 704 cm^{-1}.
MS (FAB): m/z (%) 458 (MH^{+}, 87).
Ejemplo 20 Dihidrocloruro de (2S)-1-[(2R)-2-amino-3-(3,4-diclorofenil)propanoil]-N-(4,5,6,7-tetrahidro-2H-indazol-5-il)-2-pirrolidincarboxamida
34
El compuesto del título se preparó a partir de (1R)-1-(3,4-diclorobencil)-2-oxo-2-{(2S)-2-[(4,5,6,7-tetrahidro-2H-indazol-5-ilamino)carbonil]pirrolidinil}-etilcarbamato de terc-butilo empleando el procedimiento del ejemplo 8 y se obtuvo como un sólido blanco.
Rendimiento: 80%
Punto de fusión: 199-202ºC.
IR (KBr): \nu = 3417, 1645, 1541, 1472, 1263, 1134, 1032, 598 cm^{-1}.
MS (FAB): m/z (%) 450 (MH^{+}, 39).
Ejemplo 21 (2S)-N-(2-amino-5,6,7,8-tetrahidro-6-quinazolinil)-1-{(2R)-2-[(bencilsulfonil)amino]-3-ciclohexilpropanoil}-2-pirrolidincarboxamida
35
El compuesto del título se preparó a partir de N-(bencilsulfonil)-D-(ciclohexil-Ala)-L-Pro-OH y 5,6,7,8-tetrahidro-2,6-quinazolindiamina empleando el procedimiento del ejemplo 6 y se obtuvo como un sólido blanco.
Rendimiento: 53%
Punto de fusión: 114-117ºC.
IR (KBr): \nu = 3415, 2925, 1641, 1541, 1457, 1149, 615 cm^{-1}.
MS (FAB): m/z (%) 569 (MH^{+}, 55).
Ejemplo 22 (2S)-1-{(2R)-2-[(bencilsulfonil)amino]-3-ciclohexilpropanoil}-N-(4,5,6,7-tetrahidro-2H-indazol-5-il)-2-pirrolidincarboxamida
36
El compuesto del título se preparó a partir de N-(bencilsulfonil)-D-(ciclohexil-Ala)-L-Pro-OH y dihidrocloruro de 5-amino-4,5,6,7-tetrahidro-2H-indazol empleando el procedimiento del ejemplo 6 y se obtuvo como un sólido blanco.
Rendimiento: 81%
Punto de fusión: 106-109ºC.
IR (KBr): \nu = 3429, 2925, 2851, 1642, 1544, 1448, 1319, 1154, 954, 786, 698, 545 cm^{-1}.
MS (FAB): m/z (%) 542 (MH^{+}, 46).
Ejemplo 23 (1R)-2-((2S)-2-{[(2-amino-5,6,7,8-tetrahidro-6-quinazolinil)amino]carbonil}pirrolidinil)-1-benzhidril-2-oxoetilcarbamato de terc-butilo
37
El compuesto del título se preparó a partir de Boc-D-3,3-(Ph)_{2}-ala-L-Pr-OH y 2,6-diamino-5,6,7,8-tetrahidroquinazolina empleando el procedimiento del ejemplo 6 y se obtuvo como un sólido blanco.
Rendimiento: 81%
Punto de fusión: 128-131ºC.
IR (KBr): \nu = 3414, 2974, 1639, 1548, 1452, 1366, 1253, 1166, 1017, 864, 755, 701, 604 cm^{-1}.
MS (FAB): m/z (%) 585 (MH^{+}, 94).
Ejemplo 24 Dihidrocloruro de (2S)-1-[(2R)-2-amino-3,3-difenilpropanoil]-N-(2-amino-5,6,7,8-tetrahidro-6-quinazolinil)2-pirrolidincarboxamida
38
El compuesto del título se preparó a partir de (1R)-2-((2S)-2-{[(2-amino-5,6,7,8-tetrahidro-6-quinazolinil)amino]carbonil}pirrolidinil)-1-benzhidril-2-oxoetilcarbamato de terc-butilo empleando el procedimiento del ejemplo 8 y se obtuvo como un sólido blanco.
Rendimiento: 86%
Punto de fusión: 199-202ºC.
IR (KBr): \nu = 3274, 1655, 1527, 1449, 1350, 1244, 1102, 917, 755, 704, 595 cm^{-1}.
MS (FAB): m/z (%) 485 (MH^{+}, 100).
Ejemplo 25 (1R)-2-((2S)-2-{[(2-amino-4,5,6,7-tetrahidro-1,3-benzotiazol-6-il)amino]carbonil}pirrolidinil)-1-bencil-2-oxoetilcarbamato de terc-butilo
\vskip1.000000\baselineskip
39
A una solución de Boc-D-Phe-L-Pro-OH (580 mg, 1,60 mmol) y dihidrobromuro de 4,5,6,7-tetrahidro-1,3-benzotiazol-2,6-diamina (482 mg, 1,46 mmol) en 3,7 ml de N,N-dimetilformamida se añadieron HOBt (247 mg, 1,60 mmol). Se utilizó N-metilmorfolina para ajustar el pH de la solución en 8 y se añadió EDC (313 mg, 1,60 mmol). La mezcla de reacción se agitó durante la noche, se evaporó el disolvente en vacío y el residuo se distribuyó entre EtOAc y solución saturada de NaHCO_{3}. La capa orgánica se lavó con salmuera, se secó con MgSO_{4}, se filtró y el disolvente se evaporó bajo presión reducida. El producto en bruto fue purificado por cromatografía en columna (gel de sílice, CHCl_{3}/MeOH=9/1) para proporcionar 480 mg de un sólido cristalino de color marrón débil (64%).
Punto de fusión: 120-123ºC.
IR (KBr): \nu = 3418, 2975, 1646, 1523, 1448, 1367, 1252, 1167, 860, 752, 702 cm^{-1}.
MS (FAB): m/z (%) 514 (MH^{+}, 59/2,50), 70 (100).
Ejemplo 26 Dihidrocloruro de (2S)-1-[(2R)-2-amino-3-fenilpropanoil]-N-(2-amino-4,5,6,7-tetrahidro-1,3-benzotiazol-6-il)-2-pirrolidincarboxamida
40
Se burbujeó gas de HCl durante 50 minutos a través de una solución de N-(2-amino-4,5,6,7-tetrahidro-1,3-benzotiazol-6-il)-N'-Boc-D-fenilalanil-L-prolinamida (360 mg, 0,70 mmol) en 10 ml de ácido acético anhidro a temperatura ambiente. El ácido acético se evaporó bajo presión reducida y el residuo se trituró varias veces con éter dietílico para proporcionar 280 mg del compuesto del título como un sólido de color amarillo débil (82%).
Punto de fusión: 225-228ºC.
IR (KBr): \nu = 3418, 2970, 1643, 1538, 1454, 1361, 1202, 762, 704 cm^{-1}.
MS (FAB): m/z (%) 414 (MH^{+}, 100).
Ejemplo 27 (2S)-N-(2-amino-4,5,6,7-tetrahidro-1,3-benzotiazol-6-il)-1-{(2R)-2-[(bencilsulfonil)amino]-3-fenilpropanoil}-2-pirrolidincarboxamida
41
El compuesto se preparó a partir de N-(bencilsulfonil)-D-Phe-L-Pro-OH y dihidrobromuro de 4,5,6,7-tetrahidro-1,3-benzotiazol-2,6-diamina empleando el procedimiento del ejemplo 25. El producto se obtuvo como un sólido de color amarillo débil.
Rendimiento: 49%
Punto de fusión: 126-129ºC.
IR (KBr): \nu = 3362, 3192, 2926, 1646, 1522, 1454, 1315, 1152, 1124, 944, 751, 698, 547 cm^{-1}.
MS (EI): m/z (%) 567 (M^{+}, 27), 371 (100).
MS (FAB): m/z (%) 568 (MH^{+}, 100).
MS (HR): calcd. C_{28}H_{33}N_{5}O_{4}S_{2}: 567.197399; encontrado 567.195929.
Ejemplo 28 (2S)-N-(2-amino-4,5,6,7-tetrahidro-1,3-benzotiazol-6-il)-1-{(2R)-2-[(bencilsulfonil)amino]-3-ciclohexilpropanoil}-2-pirrolidincarboxamida
\vskip1.000000\baselineskip
42
El compuesto se preparó a partir de N-bencilsulfonil-(\beta-ciclohexil)-D-Ala-L-Pro-OH y dihidrobromuro de 4,5,6,7-tetrahidro-1,3-benzotiazol-2,6-diamina empleando el procedimiento del ejemplo 25. El producto se obtuvo como un sólido cristalino de color marrón débil.
Rendimiento: 54%
Punto de fusión: 127-130ºC.
IR (KBr): \nu = 3357, 2924, 2848, 1638, 1523, 1448, 1311, 1125, 754, 697, 546 cm^{-1}.
MS: m/z (%) 574 (MH^{+}, 100).
Ejemplo 29 (2S)-N-(2-amino-4,5,6,7-tetrahidro-1,3-benzotiazol-6-il)-1-[(2R)-2-[(bencilsulfonil)amino]-3-(3,4-diclorofenil)propanoil]-2-pirrolidincarboxamida
\vskip1.000000\baselineskip
43
El compuesto se preparó a partir de N-bencilsulfonil-(3,4-dicloro)-D-Phe-L-Pro-OH y dihidrobromuro de 4,5,6,7-tetrahidro-1,3-benzotiazol-2,6-diamina empleando el procedimiento del ejemplo 25. El producto se obtuvo como un sólido blanco.
Rendimiento: 15%
IR (KBr): \nu = 3326, 1654, 1522, 1448, 1317, 1152, 1128, 1031, 697, 544 cm^{-1}.
MS (FAB): m/z (%) 636 (MH^{+}, 100).
Ejemplo 30 (2S)-N-(2-amino-4,5,6,7-tetrahidro-1,3-benzotiazol-6-il)-1-{(2R)-2-[(2-naftilsulfonil)amino]-3-fenilpropanoil}-2-pirrolidincarboxamida
\vskip1.000000\baselineskip
44
A una solución de dihidrocloruro de (2S)-1-[(2R)-2-amino-3-fenilpropanoil]-N-(2-amino-4,5,6,7-tetrahidro-1,3-benzotiazol-6-il)-2-pirrolidincarboxamida (0,38 mmol, 185 mg) en 6 ml de diclorometano bajo una atmósfera de argón, se añadió cloruro de 2-naftalensulfonilo (0,38 mmol, 84 mg) y luego trietilamina (1,52 mmol, 0,21 ml). La mezcla se agitó a 0ºC durante 1 hora y luego durante la noche a temperatura ambiente. Se evaporó el diclorometano, se disolvió el residuo en acetato de etilo, se añadió diclorometano, tras lo cual la solución se extrajo con agua, se lavó con solución saturada de NaHCO y con salmuera. La fase orgánica se secó sobre MgSO_{4}, se filtró y se evaporó bajo presión reducida. El producto fue purificado por cromatografía en columna sobre gel de sílice empleando CHCl_{3}/MeOH = 9/1 como eluyente para proporcionar 70 mg de un sólido caso blanco (31%).
Punto de fusión: 128-131ºC.
IR (KBr): \nu = 3363, 1637, 1522, 1438, 1308, 1153, 1074, 962, 861, 816, 750, 656, 547, 479 cm^{-1}.
MS (FAB): m/z (%) 604 (MH^{+}, 100).
Ejemplo 31 (2R)-N-{2-[(2-amino-4,5,6,7-tetrahidro-1,3-benzotiazol-6-il)amino]-2-oxoetil}-2-[(bencilsulfonil)amino]-3-fenilpropanamida
45
El compuesto del título se preparó a partir de N-(bencilsulfonil)-d-Phe-Gly-OH y dihidrobromuro de 4,5,6,7-tetrahidro-1,3-benzotiazol-2,6-diamina de acuerdo con el procedimiento del ejemplo 25 y se obtuvo como un sólido blanco.
Rendimiento: 37%.
Punto de fusión: 119-122ºC.
IR (KBr): \nu = 3346, 2926, 1655, 1522, 1455, 1371, 1314, 1233, 1126, 956, 750, 698, 543, 487 cm^{-1}.
MS (FAB): m/z (%) 528 (MH^{+}, 88), 91 (100).
Ejemplo 32 (2R)-N-{(2S)-2-[(2-amino-4,5,6,7-tetrahidro-1,3-benzotiazol-6-il)amino]-1-metil-2-oxoetil}-2-[(bencilsulfonil)amino]-3-fenilpropanamida
46
El compuesto del título se preparó a partir de N-(bencilsulfonil)-D-Phe-L-Ala-OH y dihidrobromuro de 4,5,6,7-tetrahidro-1,3-benzotiazol-2,6-diamina de acuerdo con el procedimiento del ejemplo 25 y se obtuvo como un sólido blanco.
Rendimiento: 37%
Punto de fusión: 122-125ºC.
IR (KBr): \nu = 3314, 3200, 2929, 1654, 1523, 1455, 1371, 1315, 1231, 1152, 1126, 952, 750, 698, 545 cm^{-1}.
MS (FAB): m/z (%) 542 (MH^{+}, 100).
Ejemplo 33 (2S)-N-(2-amino-4,5,6,7-tetrahidro-1,3-benzotiazol-6-il)-1-[2-(tritilamino)acetil]-2-pirrolidincarboxamida
\vskip1.000000\baselineskip
47
El compuesto del título se preparó a partir de ácido (2S)-1-[2-(tritilamino)acetil]-2-pirrolidincarbóxico y dihidrobromuro de 4,5,6,7-tetrahidro-1,3-benzotiazol-2,6-diamina de acuerdo con el procedimiento descrito en el ejemplo 25 y se obtuvo como un sólido cristalino de color amarillo débil.
Rendimiento: 37%
Punto de fusión: 125-128ºC.
IR (KBr): \nu = 3410, 2926, 1660, 1640, 1529, 1444, 1411, 1306, 1206, 1031, 901, 748, 104, 535 cm^{-1}.
MS (FAB): m/z (%) 566 (MH^{+}, 66/10), 243 (100).
Ejemplo 34 (1R)-2-((2S)-2-{[(2-amino-4,5,6,7-tetrahidro-1,3-benzotiazol-6-il)amino]carbonil}pirrolidinil)-1-(3,4-diclorobencil)-2-oxoetilcarbamato de terc-butilo
\vskip1.000000\baselineskip
48
El compuesto del título se preparó a partir de Boc-D-3,4-Cl_{2}-Phe-L-Pro-OH y dihidrobromuro de 4,5,6,7-tetrahidro-1,3-benzotiazol-2,6-diamina de acuerdo con el procedimiento del ejemplo 25 y se obtuvo como un sólido de color amarillo débil.
Rendimiento: 77%
Punto de fusión: 116-119ºC.
IR (KBr): \nu = 3409, 2977, 1637, 1529, 1444, 1367, 1250, 1165, 1029, 753, 679 cm^{-1}.
MS (FAB): m/z (%) 582 (MH^{+}, 49), 70 (100).
Ejemplo 35 (1S)-2-((2S)-2-{[(2-amino-4,5,6,7-tetrahidro-1,3-benzotiazol-6-il)amino]carbonil}pirrilidinil)-1-benzhidril-2-oxoetilcarbamato de terc-butilo
49
El compuesto del título se preparó a partir de Boc-D-3,3-(Ph)_{2}-Ala-L-Pro-OH y dihidrobromuro de 4,5,6,7-tetrahidro-1,3-benzotiazol-2,6-diamina de acuerdo con el procedimiento del ejemplo 25 y se obtuvo como un sólido de color amarillo débil.
Rendimiento: 62%
Punto de fusión: 127-130ºC.
IR (KBr): \nu = 3305, 2977, 1634, 1526, 1443, 1368, 1249, 1165, 1018, 862, 753, 700 cm^{-1}.
MS (FAB): m/z (%) 590 (MH^{+}, 35), 70 (100).
Ejemplo 36 Dihidrocloruro de (2S)-1-[(2R)-2-amino-3-(3,4-diclorofenil)propanoil]-N-(2-amino-4,5,6,7-tetrahidro-1,3-benzotiazol-6-il)-2-pirrolidincarboxamida
50
El compuesto del título se preparó a partir de (1R)-2-((2S)-2-{[(2-amino-4,5,6,7-tetrahidro-1,3-benzotiazol-6-il)amino]carbonil}pirrolidinil-1-(3,4-diclorobencil)-2-oxoetilcarbamato de terc-butilo de acuerdo con el procedimiento del ejemplo 26. El producto se obtuvo como un sólido de color amarillo débil.
Rendimiento: 96%
Punto de fusión: 166-169ºC.
IR (KBr): \nu = 2973, 1643, 1469, 1358, 1261, 1132, 878, 826, 713, 586 cm^{-1}.
MS (FAB): m/z (%) 482 (MH^{+}, 100).
Ejemplo 37 Dihidrocloruro de (2S)-1-[(2S)-2-amino-3,3-difenilpropanoil]-N-(2-amino-4,5,6,7-tetrahidro-1,3-benzotiazol-6-il)-2-pirrolidincarboxamida
51
El compuesto del título se preparó a partir de (1S)-2-((2S)-2-{[(2-amino-4,5,6,7-tetrahidro-1,3-benzotiazol-6-il)amino]carbonil}pirrolidinil)-1-benzhidril-2-oxoetilcarbamato de terc-butilo de acuerdo con el procedimiento del ejemplo 26. El producto se obtuvo como un sólido casi blanco.
Rendimiento: 97%
Punto de fusión: 155-158ºC.
IR (KBr): \nu = 3390, 2974, 1641, 1449, 1347, 1242, 1112, 913, 753, 704 cm^{-1}.
MS (FAB): m/z (%) 490 (MH^{+}, 73), 149 (100).
Ejemplo 38
(Ejemplo de referencia al margen del alcance de la invención)
(2S)-N-(2-amino-1,3-benzotiazol-6-il)-1-{(2R)-2-[(bencilsulfonil)amino]-3-fenilpropanoil}-2-pirrolidincarboxamida
52
El compuesto del título se preparó a partir de N-(bencilsulfonil)-d-Phe-OH y dihidrocloruro de (2S)-N-(2-amino-1,3-benzotiazol-6-il)-2-pirrolidincarboxamida de acuerdo con el procedimiento del ejemplo 25 y se obtuvo como un sólido cristalino de color amarillo débil.
Rendimiento: 33%
Punto de fusión: 130-133ºC.
IR (KBr): \nu = 3314, 1637, 1526, 1466, 1407, 1307, 1227, 1150, 1123, 934, 819, 748, 698, 544, 488 cm^{-1}.
MS (FAB): m/z (%) 564 (MH^{+}, 100).
Ejemplo 39
(Ejemplo de referencia al margen del alcance de la invención)
(2R)-N-{2-[(2-amino-1,3-benzotiazol-6-il)amino]-2-oxoetil}-2-[(bencilsulfonil)amino]-3-fenilpropanamida
53
El compuesto del título se preparó a partir de N-(bencilsulfonil)-d-Phe-OH y dihidrocloruro de 2-amino-N-(2-amino-1,3-benzotiazol-6-il)acetamida de acuerdo con el procedimiento del ejemplo 25 y se obtuvo como un sólido de color amarillo intenso.
Rendimiento: 29%
Punto de fusión: 127-130ºC.
IR (KBr): \nu = 3351, 1639, 1530, 1466, 1408, 1307, 1123, 958, 818, 697, 539 cm^{-1}.
MS (FAB): m/z (%) 524 (MH^{+}, 100).
Ejemplo 40
(Ejemplo de referencia)
(2S)-2-{[(4-amino-6-quinazolinil)amino]carbonil}-1-pirrolidincarboxilato de fenilmetilo
54
A una solución enfriada de Z-L-Pro-OH (1,61 g, 7,5 mmol) en 6 ml de N,N-dimetilformamida, se añadieron cloroformato de etilo (0,79 ml, 8,25 mmol) y trietilamina (1,15 ml, 8,25 mmol). Una vez formado el anhídrido mixto se añadió 4,6-quinazolindiamina (1,2 g, 7,5 mmol) y la solución se agitó durante 12 horas. Se evaporó N,N-dimetilformamida en vacío. El aceite parduzco residual se purificó por cromatografía en columna empleando CHCl_{3}/MeOH (9/1) como eluyente.
Rendimiento: 47%
^{1}H-NMR (300 MHz, DMSO-d_{6}): \delta 1,93-1,97; 2,09-2,27 (2*m, 4H, ProCH_{2}\beta, ProCH_{2}\gamma), 3,46-3,52 (m, 2H, ProCH_{2}\delta), 4,40-4,46 (m, 1H, ProCH\alpha), 4,95-5,15 (m(2*AB-system), 2H, (Z)PhCH_{2})^{*}, 7,07-7,15; 7,23-7,40; 7,50-7,80; 8,30-8,39 (4*m, 11H, (Z)PhCH-(2-6), QuinCH-(2,5,7,8), QuinNH_{2}-4), 10,28 (s, 1H, QuinNHCO).
\text{*}confórmeros cis/trans
Análisis para C_{21}H_{21}N_{5}O_{3}*2,25 H_{2}O:
Calculado: 58,40% C, 5,38% H, 16,22% N.
Encontrado: 58,29% C, 5,88% H, 15,98% N.
Ejemplo 41
(Ejemplo de referencia)
(2S)-N-(4-amino-6-quinazolinil)-2-pirrolidincarboxamida
55
Se disolvió (2S)-2-{[(4-amino-6-quinazolinil)amino]carbonil}-1-pirrolidincarboxilato de fenilmetilo (1,97 g, 5 mmol) en 100 ml de metanol. Se añadió Pd-C al 10% (0,2 g) y la mezcla se hidrogenó a 40 psi (2,76 bar) aproximadamente. Una vez separado el catalizador por filtración, el disolvente se evaporó para proporcionar un aceite amarillento.
MS (EI) m/z (%) 257 (M^{+}, 50), 70 (100).
MS (HR): Calcd. C_{13}H_{15}N_{5}O: 257.127660; Encontrado: 257.127060.
^{1}H-NMR (300 MHz, DMSO-d_{6}): \delta 1,60-1,70; 1,80-1,90; 2,00-2,15 (3*m, 4H, ProCH_{2}\beta, ProCH_{2}\gamma), 2,90-3,00; 3,54-3,55 (2*m, 2H, ProCH_{2}\delta), 3,70-3,80 (m, 1H, ProCH\alpha), 7,37 (s, 2H, QinNH_{2}-4), 7,63 (d, 1H, J=9,0 Hz, QuinCH-8), 8,12 (dd, 1H, J_{1}=9,0 Hz, J_{2}=2,2 Hz, QuinCH-7), 8,24 (d, 1H, J=2,2 Hz, QuinCH-5), 8,31 (s, 1H, QuinCH-2), 10,18 (s, 1H, QuinNHCO).
Análisis para C_{13}H_{15}N_{5}O*H_{2}O*MeOH:
Calculado: 54,71% C, 6,89% H, 22,79% N.
Encontrado: 54,72% C, 6,77% H, 22,79% N.
Ejemplo 42
(Ejemplo de referencia)
(2S)-N-(4-amino-6-quinazolinil)-1-{2-[(trifenilmetil)amino]acetil}-2-pirrolidincarboxamida
56
Se disolvieron N-tritilglicina (1,58 g, 5,0 mmol) y (2S)-N-(4-amino-6-quinazolinil)-2-pirrolidincarboxamida (1,15 g, 4,5 mmol) en 11 ml de N,N-dimetilformamida y se enfrió a 0ºC. Se añadió HOBt (0,770 g, 5,0 mmol) y el pH se ajustó en 8 con N-metilmorfolina. Después de 10 minutos, se añadió EDC (0,978 g, 5,0 mmol) y la mezcla se agitó durante 12 horas. El disolvente se evaporó y el producto en bruto se purificó por cromatografía en columna empleando cloroformo/metanol (9/1) como eluyente.
Rendimiento:42%.
PF>250ºC.
MS (El): m/z (%) 557 (MH^{+} 25/10), 243 (100).
MS (FAB): m/z (%) 556 (M^{+} 20/400).
^{1}H-MMR (300 MHz, DMSO-d_{6}): \delta 1,75-2,05 (2* 4H, ProCH2\beta, ProCH_{2}\gamma), 2,85-3,20; 3,40-3,50; 4,20-4,45, (7*m, 5H, ProCH_{2}\delta, ProCH\alpha, GlyCH_{2}), 7,00-7,40 (4*m, 16H, 3*(tritil)PhCH-(2-6), QuinCH-5), 7,50-7,66 (2*s+2*d (J=9,0 Hz), 3H; QuinCH-8, QuinNH2-4), 7,73 (dd, 1H, J_{1}=9,0 Hz, J_{2}=2,2 Hz, QuinCH-7), 8,28(8,30) (2*s, 1H, QuinCH-2), 8,33-8,35 (m, 1H, GlyNH), 10,17(10,19) (2*s, 1H, QuinNHCO).
\text{*} confórmeros cis/trans
Ejemplo 43
(Ejemplo de referencia)
2-[(4-amino-6-quinazolinil)amino]-2-oxoetilcarbamato de 1,1-dimetiletilo
57
El producto se preparó a partir de BOC-Cly-OH y 4,6-quinazolindiamina empelando el procedimiento descrito en el ejemplo 40.
Rendimiento: 50%.
IR (KBr): \nu = 3336, 2977, 1700, 1575, 1540, 1510, 1367, 1164 cm-^{1},
MS(El): m/z (%)317(M^{+},25), 160(100).
MS (FAB): m/z (%) 318 (MH^{+}, 70).
MS (HR): Calcd. C_{15}H_{19}N_{5}O_{3}: 317.148790; Encontrado: 317.148909.
^{1}H-MMR (300 MHz, DMSO-d_{6}): \delta 1,38-1,40 (2*s, 9H, (CH_{3})_{3}), 3,78 (d, 2H, J=6,2 Hz, GlyCH_{2}), 7,07 (t, 1H, J=6,2 Hz, GlyNH), 7,60 (s, 2H, QuinNH_{2}-4), 7,64 (d, 1H, J=9,0 Hz, QuinCH-8), 7,75-7,80 (dd, 1H, QuinCH-7), 8,31 (s, 1H; QuinCH-2), 8,33 (d, 1H, J=1,7 Hz, QuinCH-5), 10,11 (s, 1H, QuinNHCO).
Ejemplo 44
(Ejemplo de referencia)
Dihidrocloruro de 2-amino-N-(4-amino-6-quinazolinil)acetamida
58
Se disolvió 2-[(4-amino-6-quinazolinil)amino]-2-oxoetilcarbamato de 1,1-dimetiletilo (0,5 g, 1,58 mmol) en 30 ml de ácido acético y se pasó gas de HCl a través de la solución hasta que la cromatografía por láser fino indicó una conversión cuantitativa. Se evaporó el ácido acético en vacío y el producto en bruto se trituró con éter para obtener un rendimiento cuantitativo de un sólido de color amarillo pálido.
IR (KBr): \nu = 3458, 1646, 1490, 1244 cm-^{1},
MS (FAB): m/z (%) 218 (MH^{+}, 100).
^{1}H-MMR (300 MHz, DMSO-d_{6}): \delta 3,90 (d, 2H, J=5 Hz, GlyCH_{2}), 7,90 (d, 1H, J=9,0 Hz, QuinCH-8), 8,14 (dd, 1H, J_{1}=9,0 Hz, J_{2}=1,9 Hz, QuinCH-7), 8,39 (s, 2H, QuinNH_{2}-4), 8,33 (d, 1H, J=1,9 Hz, QuinCH-5), 8,76 (s, 1H, QuinCH-2), 9,70 (s, 1H, GlyNH), 9,93 (s, 1H, GlyNH), 11,45 (s, 1H, QuinNHCO).
Ejemplo 45
(Ejemplo de referencia)
2,4,6-quinazolintriamina
59
A una solución de carbonato de guanidina (0,9 g, 5,0 mmol) en 30 ml de metanol se añadió sodio (0,24 g, 10,4 mmol) y la mezcla se calentó bajo reflujo durante 30 minutos. El carbonato sódico precipitado se separó por filtración y se lavó con metanol. Se añadió 2-amino-5-nitrobenzonitrilo (0,88 g, 5,4 mmol) a la solución metabólica la cual se calentó entonces bajo reflujo durante 24 horas más. El disolvente se evaporó y la 6-nitro-2,4-quinazolindiamina en bruto se sometió a hidrogenación catalítica como se ha descrito en el ejemplo 41.
Rendimiento: 45%.
PF: > 250ºC.
MS: m/z (%) 175 (MH^{+}, 100).
^{1}H-MMR (300 MHz, DMSO-d_{6}): \delta 4,75 (s, 1H, QuinNH_{2}-2), 5,44 (s, 2H, QuinNH_{2}-6), 6,83 (s, 2H, QuinNH_{2}-4), 6,95-7,03 (m, 3H, QuinCH-(5,7,8)).
Ejemplo 46
(Ejemplo de referencia)
(1R)-2-({2-[(2,4-diamino-6-quinazolinil)amino]2-oxoetil}amino)-2-oxo-1-(fenilmetil)etilcarbamato de 1,1-dimetiletilo
60
El producto se preparó por condensación de BOC-D-Phe-OH y 2-amino-N-(2,4-diamino-6-quinazolinil)acetamida empleando el procedimiento descrito en el ejemplo 42.
Rendimiento: 40%.
IR (KBr): \nu = 3458, 1648, 1570, 1389, 1242 cm-^{1},
MS: m/z (%) 480 (MH^{+}, 65).
^{1}H-MMR (300 MHz, DMSO-d_{6}): \delta 1,20-1,31 (m, 9H, (CH_{3})_{3}), 2,73-3,31 (m(Abx), 2H, PheCH_{2}), 3,95 (d, 2H, J=5,2 Hz, GlyCH_{2}), 4,16-4,23 (m, 1H, PheCH), 7,00-7,72 (3*m, 9H, PheNH, QuinCH-(5,7,8), (Phe)PhCH-(2-6)); 8,38-8,42 (m, 1H, GlyNH), 10,11 (s, 1H, QuinNHCO).
Ejemplo 47
(Ejemplo de referencia)
Hidrocloruro de (2R)-2-amino-N-{2-[(2,4-diamino-6-quinazolinil)amino]-2-oxoetil}-3-fenilpropanamida
\vskip1.000000\baselineskip
61
El producto se preparó a partir de (1R)-2-({2-[(2,4-diamino-6-quinazolinil)-amino]-2-oxoetil}amino)-2-oxo-1-(fenilmetil)etilcarbamato de 1,1-dimetiletilo empleando el procedimiento descrito en el ejemplo 44.
IR (KBr): \nu = 3382, 3085, 1702, 1601, 1489, 1394, 1311, 1219 cm-^{1},
MS: m/z (%) 380 (MH^{+}, 80).
^{1}H-MMR (300 MHz, DMSO-d_{6}): \delta 3,03-3,23 (m(Abx), 2H, PheCH_{2}), 3,99-4,06 (m, 2H, GlyCH_{2}), 4,13-4,18 (m, 1H, PheCH), 7,27-7,33 (m, 5H, (Phe)PhCH-(2,6)), 7,44 (d, 1H, J=9,0 Hz, QuinCH-8), 7,70 (s, 2H, QuinNH_{2}-4), 7,88-7,91 (m, 1H, QuinCH-7), 8,39 (m, 1H, QuinCH-5), 8,77 (s, 2H, QuinNH_{2}-2), 9,07-9,11 (m, 1H, GlyNH), 10,45 (s, 1H, QuinNHCO).
Ejemplo 48
(Ejemplo de referencia)
(2S)-2-{[(2,4-diamino-6-quinazolinil)amino]carbonil}-1-pirrolidincarboxilato de fenilmetilo
\vskip1.000000\baselineskip
62
El producto se preparó a partir de 2,4,6-quinazolintriamina y cloroformato de bencilo de acuerdo con el procedimiento descrito en el ejemplo 40.
IR (KBr): \nu = 3418, 1654, 1560, 1425, 1358, 967 cm-^{1},
MS (EI): m/z (%) 406 (MH^{+}, 35), 91 (100).
MS (FAB): m/z (%) 407 (MH^{+}, 100):
\newpage
Ejemplo 49
(Ejemplo de referencia)
N-(2,4-diamino-6-quinazolinil)-2[(2S)-1-((2R)-3-fenil-2-{[(fenilmetil)sulfonil]amino}propanoil)pirrolidinil]acetamida
\vskip1.000000\baselineskip
63
\vskip1.000000\baselineskip
Preparado a partir de ácido (2R)-2-[(bencilsulfonil)amino]3-fenilpropanoico y (2S)-N-(2,4-diamino-6-quinazolinil)-2-pirrolidincarboxamida empleando el procedimiento descrito en el ejemplo 42.
MS (FAB): m/z (%) 574 (MH^{+}, 100).
^{1}H-NMR* (300 MHz. DMSO-d_{6}): \delta 1,50-2,60 (6*m, 4H, 1-ProCH_{2}\gamma(1,6), 2-ProCH_{2}\gamma(1,9), 3-ProCH_{2}\beta(1,9), 4-ProCH_{2}\beta(2,2), 5-ProCH_{2}\gamma(2,3), 6-ProCH_{2}\beta(2,6)), 2,70-3,50 (5*m (2*AB_{system}), 4H, 7-PheCH_{2}(2,7), 8-PheCH_{2}(2,8), 9-PheCH_{2}(2,8), 10-ProCH_{2}\delta(2,9), 11-PheCH_{2}(3,0), 12-ProCH_{2}\delta(3,5)), 3,6-4,9 (9*m (3*AB_{system}), 4H, CH_{2}SO_{2}(1)(3,6-3,8), 13-PheCH(3,9), 14-PheCH(4,0), CH_{2}SO_{2}(2)(4,0-4,1), 15-ProCH\alpha(4,1), CH_{2}SO_{2}(3)(4,1-4,3), 16-PheCH(4,2), 17-ProCH\alpha(4,3), 18-ProCH\alpha(4,9)), 6,65 (bs, 2H, QuinNH_{2}-2), 7,15-7,83 (3*m, 11H, (Phe)PhCH-(2-6), (BzS02)PhCH-(2-6), PheNH), 7,16 (d, ^{\sim}1H, J=9 Hz, QuinCH-8)*, 7,59 (dd, ^{\sim}1H, Ji=9 Hz, J2=2 Hz, QuinCH-7)^{#} 7,65 (bs, 2H, QuinNH_{2}-4), 8,11(8,39)^{#} (d, 1H, J=2Hz, QuinCH-5), 9,89(10,53)^{#} (s, 1H, QuinNHCO).
\text{*} confórmeros cis/trans
^{13}C NMR (75 MHz, DMSO-d_{6}): \delta 24,9, 30,1, 47,6, 56,7, 56,9, 58,9, 59,4, 60,9, 110,3, 111,2, 115,2, 119,5, 124,5, 127,1, 127,7, 128,7, 128,9, 129,1, 130,3, 130,4, 131,0, 131,5, 131,6, 131,8, 133,7, 137,4, 138,7, 158,1, 163,3, 170,7, 171,0.
DEPT135 (75 MHz, DMSO-d_{6}): \delta CH_{2}: 24,9, 30,1, 47,6, 58,9, 59,4; CH: 56,7, 60,9, 115,2, 127,1, 127,7, 128,7, 128,9, 129,1, 130,3, 130,4, 131,0, 131,5, 131,6, 131,8.
HMQC-correlaciones seleccionadas
64
\newpage
COSYGS-correlaciones seleccionadas
65
Ejemplo 50
(Ejemplo de referencia)
N-(4-amino-6-quinazolinil)-2-((2S)-1-{(2R)-2-[(bencilsulfonil)amino]-3-fenilpropanoil}pirrolidinil)acetamida
\vskip1.000000\baselineskip
66
\vskip1.000000\baselineskip
Preparado a partir de ácido (2R)-2-[(bencilsulfonil)amino]-3-fenilpropanoico y (2S)-N-(4-amino-6-quinazolinil)-2-pirrolidincarboxamida empleando el procedimiento descrito en el ejemplo 42.
MS (FAB): m/z (%) 559 (MH^{+}, 100).
^{1}H-NMR* (300 MHz. DMSO-d_{6}): \delta 1,55-1,65 (m, 1H, 1-ProCH_{2}\gamma(1,6)), 1,85-1,95 (m, 3H, 2-ProCH_{2}\gamma (1,9), ProCH_{2}\beta), 2,85-3,10 (m, 3H, PheCH_{2}, 1-ProCH_{2}\delta(3,0)), 3,55-4,35 (3*m(2*AB_{system}), 4H, 2-ProCH_{2}\delta (3,6), CH_{2}SO_{2}(1)(3,6-3,8), CH_{2}SO_{2} (2)(4,22 (AB_{system}, J_{AB}=13,7), 1-PheCH(4,0), 2-PheCH(4,3)), 4,35-4,90 (m, 1H, 1-ProCH\alpha(4,3), 2-ProCH\alpha(4,9)), 6,90-8,48 (5*m, 11H, (Phe)PhCH-(2-6), (B_{2}SO_{2})PhCH-(2-6), PheNH), 7,47 (bs, 2H, QuinNH_{2}-4), 7,54(7,71)^{#} (d, 1H, J=9 Hz, QuinCH-8), 7,77 (dd, 1H, J_{1}=9 Hz, J_{2}=2,1 Hz, QuinCH-7)^{#}, 8,25(8,48)^{#} (d, 1H, J=2,1 Hz, QuinCH-5), 8,28 (s, 1H, QuinCH-2), 10,08(10,70)^{#}(s, 1H, QuinNHCO).
\text{*} confórmeros cis/trans
^{13}C NMR (75 MHz, DMSO-d_{6}): \delta 25,0, 30,1, 39,1, 47,6, 56,7, 59,5, 58,9, 60,9, 65,8, 113,3, 115,2, 127,6, 127,7, 128,7, 128,8, 129,0, 129,1, 130,3, 131,0, 131,5, 131,5, 131,8, 136,5, 137,4, 147,2, 155,1, 162,1, 170,7,171,2.
DEPT135 (75 MHz, DMSO-d_{6}): \delta CHz: 25,0, 30,1, 39,1, 47,6, 59,4; CH: 56,7, 60,9, 113,3, 127,6, 127,7, 128,7, 128,8, 129,0,129,1, 130,3, 131,5, 131,8, 155,1.
\newpage
HMQC-correlaciones seleccionadas
67
Ejemplo 51
(Ejemplo de referencia)
(2S)-2-{[(2-amino-1,3-benzotiazol-6-il)amino]carbonil}-1-pirrolidincarboxilato de terc-butilo
68
A una solución enfriada de Boc-L-Pro-OH (7,5 mmol, 1,61 g) en 6 ml de N,N-dimetilformamida, se añadieron cloroformato de etilo (8,25 mmol, 0,79 ml) y trietilamina (8,25 mmol, 1,15 ml). Una vez formado el anhídrido mixto, se añadió 1,3-benzotiazol-2,6-diamina (7,5 mmol, 1,24 g) y la solución se agitó en el baño de hielo durante 12 horas. La N,N-dimetilformamida se evaporó en vacío para proporcionar un aceite de color parduzco, el cual se trituró con éter dietílico para suministrar un sólido de color parduzco (2,21 g, 81%).
IR (KBr): \nu = 3303, 2974, 1672, 1531, 1472, 1411, 1230, 1159, 1124, 816 cm^{-1}.
MS (FAB): m/z (%) 363 (MH^{+}, 85), (100).
Ejemplo 52
(Ejemplo de referencia)
Dihidrocloruro de (2S)-N-(2-amino-1,3-benzotiazol-6-il)-2-pirrolidincarboxamida
69
Se burbujeó gas de HCl durante 50 minutos a través de una solución de (2S)-2-{[(2-amino-1,3-benzotiazol-6-il)amino]carbonil}-1-pirrolidincarboxilato de terc-butilo (2,21 g, 6,1 mmol) en 6 ml de ácido acético anhidro a temperatura ambiente. El ácido acético se evaporó bajo presión reducida y el residuo se trituró varias veces con éter dietílico y se secó sobre NaOH para proporcionar 1,35 g (54%) del compuesto del título como un sólido de color parduzco.
IR (KBr): \nu = 2978, 1696, 1654, 1596, 1560, 1489, 1319, 1233, 838, 669 cm^{-1}.
MS (FAB): m/z (%) 262 (MH^{+}, 9), 70 (100).
Ejemplo 53
(Ejemplo de referencia)
2-[(2-amino-1,3-benzotiazol-6-il)amino]-2-oxoetilcarbamato de terc-butilo
70
El compuesto del título se preparó a partir de Boc-Gly-OH y 1,3-benzotiatol-2,6-diamina de acuerdo con el procedimiento del ejemplo 51. El producto se obtuvo como un sólido amarillo.
Rendimiento: 20%.
IR (KBr): \nu = 3303, 2974, 1672, 1531, 1472, 1230, 1159, 1124, 816 cm^{-1}.
MS (FAB): m/z (%) 323 (MH^{+}, 100).
Ejemplo 54
(Ejemplo de referencia)
Dihidrocloruro de 2-amino-N-(2-amino-1,3-benzotiazol-6-il)acetamida
71
El compuesto del título se preparó a partir de 2-[(2-amino-1,3-benzotiazol-6-il)amino]-2-oxoetilcarbamato de terc-butilo de acuerdo con el procedimiento del ejemplo 51; el producto se obtuvo como un sólido amarillo débil.
Rendimiento: 80%.
Punto de fusión: 189-192ºC
IR (KBr): \nu = 3240, 3050, 1697, 1647, 1596, 1560, 1491, 1439, 1318, 1237, 946, 836, 670 cm^{-1}.
MS (FAB): m/z (%) 223 (MH^{+}, 100).
Ejemplo 55 (1R)-1-benzhidril-2-oxo-2-{(2S)-2-[(4,5,6,7-tetrahidro-2H-indazol-5-ilamino)carbonil]pirrolidinil}etilcarbamato de terc-butilo
72
El compuesto del título se preparó a partir de Boc-D-3,3-(Ph)_{2}-Ala-L-Pro-OH y dihidrocloruro de 5-amino-4,5,6,7-tetrahidro-2H-indazol empleando el procedimiento del ejemplo 6 y se obtuvo como un sólido blanco.
Rendimiento: 44%
Punto de fusión: 119-122ºC.
IR (KBr): \nu = 3292, 2933, 1654, 1528, 1450, 1367, 1252, 1178, 755, 702 cm^{-1}.
MS (FAB): m/z (%) 557 (MH^{+}, 34).
Ejemplo 56 Dihidrocloruro de (2S)-1-[(2R)-2-amino-3,3-difenilpropanoil]-N-(4,5,6,7-tetrahidro-2H-indazol-5-il)-2-pirrolidincarboxamida
73
El compuesto del título se preparó a partir de (1R)-1-benzhidril-2-oxo-2-{(2S)-2-[(4,5,6,7-tetrahidro-2H-indazol-5-ilamino)carbonil]pirrolidinil}etilcarbamato de terc-butilo empleando el procedimiento del ejemplo 8 y se obtuvo como un sólido cristalino blanco.
Rendimiento: 99%
Punto de fusión: 190-193ºC.
IR (KBr): \nu = 2930, 1716, 1652, 1538, 1450, 1345, 1242, 1084, 919, 754, 704 cm^{-1}.
MS (FAB): m/z (%) 458 (MH^{+}, 100).
Ejemplo 57 (2S)-N-[(2-amino-5,6,7,8-tetrahidro-6-quinazolinil)metil]-1-{(2R)-2-[(bencilsulfonil)amino]-3-ciclohexilpropanoil}-2-pirrolidincarboxamida
74
El compuesto del título se preparó a partir de N-(bencilsulfonil)-D-(ciclohexil-Ala)-L-Pro-OH y 6-(aminometil)-5,6,7,8-tetrahidro-2-quinazolinamina empleando el procedimiento del ejemplo 6 y se obtuvo como un sólido blanco.
Rendimiento: 39%
Punto de fusión: 118-121ºC.
IR (KBr): \nu = 3336, 3212, 2923, 2850, 1642, 1557, 1450, 1319, 1146, 752, 698, 545 cm^{-1}.
MS (FAB): m/z (%) 583 (MH^{+}, 92).
Ejemplo 58 (2S)-1-{(2R)-2-[(bencilsulfonil)amino]-3-ciclohexilpropanoil}-N-(4,5,6,7-tetrahidro-2H-indazol-5-ilmetil)-2-pirrolidincarboxamida
75
El compuesto del título se preparó a partir de N-(bencilsulfonil)-D-(ciclohexil-Ala)-L-Pro-OH y dihidrocloruro de 4,5,6,7-tetrahidro-2H-indazol-5-ilmetanamina empleando el procedimiento del ejemplo 6 y se obtuvo como un sólido blanco.
Rendimiento: 46%
Punto de fusión: 100-103ºC.
IR (KBr): \nu = 3372, 2923, 2850, 1655, 1543, 1448, 1321, 1154, 953, 784, 698, 544 cm^{-1}.
MS (FAB): m/z (%) 556 (MH^{+}, 35).
Ejemplo 59 (1R)-1-(3,4-diclorobencil)-2-oxo-2-((2S)-2-{[(4,5,6,7-tetrahidro-2H-indazol-5-ilmetil)amino]carbonil}pirrolidinil)etilcarbamato de terc-butilo
76
El compuesto del título se preparó a partir de Boc-D-3,4-Cl_{2}-Phe-L-Pro-OH y dihidrocloruro de 4,5,6,7-tetrahidro-2H-indazol-5-ilmetanamina empleando el procedimiento del ejemplo 6 y se obtuvo como un sólido blanco.
Rendimiento: 42%
Punto de fusión: 100-103ºC.
IR (KBr): \nu = 3310, 2930, 1662, 1542, 1441, 1366, 1252, 1167, 956, 754 cm^{-1}.
MS (FAB): m/z (%) 564 (MH^{+}, 44).
Ejemplo 60 Dihidrocloruro de (2S)-1-[(2R)-2-amino-3-(3,4-diclorofenil)propanoil]-N-(4,5,6,7-tetrahidro-2H-indazol-5-ilmetil)-2-pirrolidincarboxamida
77
El compuesto del título se preparó a partir de (1R)-1-(3,4-diclorobencil)-2-oxo-2-((2S)-2-{[(4,5,6,7-tetrahidro-2H-indazol-5-ilmetil)amino]carbonil}pirrolidinil)etilcarbamato de terc-butilo empleando el procedimiento del ejemplo 8 y se obtuvo como un sólido cristalino blanco.
Rendimiento: 73%
Punto de fusión: 145-148ºC.
IR (KBr): \nu = 3424, 2930, 1724, 1655, 1468, 1383, 1264, 1131, 1032, 829, 664 cm^{-1}.
MS (FAB): m/z (%) 464 (MH^{+}, 62).
Ejemplo 61 (1R)-2-[(2S)-2-({[(2-amino-5,6,7,8-tetrahidro-6-quinazolinil)metil]amino}carbonil)pirrolidinil]-1-(3,4-diclorobencil)-2-oxoetilcarbamato de terc-butilo
78
El compuesto del título se preparó a partir de Boc-D-3,4-Cl_{2}-Phe-L-Pro-OH y 6-(aminometil)-5,6,7,8-tetrahidro-2-quinazolinamina empleando el procedimiento del ejemplo 6 y se obtuvo como un sólido blanco.
Rendimiento: 49%
Punto de fusión: 110-113ºC.
IR (KBr): \nu = 3338, 2978, 1654, 1560, 1471, 1251, 1161, 1030, 752, 682 cm^{-1}.
MS (FAB): m/z (%) 591 (MH^{+}, 74).
Ejemplo 62 Dihidrocloruro de (2S)-1-[(2R)-2-amino-3-(3,4-diclorofenil)propanoil]-N-[(2-amino-5,6,7,8-tetrahidro-6-quinazolinil)metil]-2-pirrolidincarboxamida
79
El compuesto del título se preparó a partir de (1R)-2-[(2S)-2-({[(2-amino-5,6,7,8-tetrahidro-6-quinazolinil)metil]amino}carbonil)pirrolidinil]-1-(3,4-diclorobencil)-2-oxoetilcarbamato de terc-butilo empleando el procedimiento del ejemplo 8 y se obtuvo como un sólido cristalino blanco.
Rendimiento: 74%
Punto de fusión: 169-172ºC.
IR (KBr): \nu = 3410, 1655, 1545, 1468, 1363, 1205, 1130, 1032, 833, 663 cm^{-1}.
MS (FAB): m/z (%) 491 (MH^{+}, 50).
Ejemplo 63 (2s)-1-{(2R)-2-[(bencilsulfonil)amino]-3-ciclohexilpropanoil}-N-(4,5,6,7-tetrahidro-2H-isoindol-5-il)-2-pirrolidincarboxamida
80
El compuesto del título se preparó a partir de N-(bencilsulfonil)-D-(ciclohexil-Ala)-L-Pro-OH y 4,5,6,7-tetrahidro-2H-isoindol-5-amina empleando el procedimiento del ejemplo 6 y se obtuvo como un sólido blanco.
Rendimiento: 37%
Punto de fusión: 106-109ºC.
IR (KBr): \nu = 3385, 2922, 2851, 1654, 1542, 1448, 1320, 1127, 780, 699, 542 cm^{-1}.
MS (FAB): m/z (%) 541 (MH^{+}, 14).
Ejemplo 64 (1R)-1-benzhidril-2-oxo-2-((2S)-2-{[(4,5,6,7-tetrahidro-2H-indazol-5-ilmetil)amino]carbonil}pirrolidinil)etilcarbamato de terc-butilo
81
El compuesto del título se preparó a partir de Boc-D-3,3-(Ph)_{2}-Ala-L-Pro-OH y dihidrocloruro de 4,5,6,7-tetrahidro-2H-indazol-5-ilmetanamina empleando el procedimiento del ejemplo 6 y se obtuvo como un sólido blanco.
Rendimiento: 74%
Punto de fusión: 113-116ºC.
IR (KBr): \nu = 3352, 2927, 1654, 1540, 1438, 1367, 1166, 702 cm^{-1}.
MS (FAB): m/z (%) 572 (MH^{+}, 35).
Ejemplo 65 Dihidrocloruro de (2S)-1-[(2R)-2-amino-3,3-difenilpropanoil]-N-(4,5,6,7-tetrahidro-2H-indazol-5-ilmetil)-2-pirrolidincarboxamida
82
El compuesto del título se preparó a partir de (1R)-1-benzhidril-2-oxo-2-((2S)-2-{[(4,5,6,7-tetrahidro-2H-indazol-5-ilmetil)amino]carbonil}pirrolidinil)etilcarbamato de terc-butilo empleando el procedimiento del ejemplo 8 y se obtuvo como un sólido cristalino blanco.
Rendimiento: 90%
Punto de fusión: 156-159ºC.
IR (KBr): \nu = 3442, 2928, 1743, 1654, 1448, 1342, 1155, 754, 704 cm^{-1}.
Ejemplo 66 Dihidrocloruro de ácido 2-{[(1R)-1-(ciclohexilmetil)-2-oxo-2-((2s)-2-{[(4,5,6,7-tetrahidro-2-indazol-5-ilmetil)amino]carbonil}pirrolidinil)etil]amino}acético
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83
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1. Preparación de 2-{(terc-butoxicarbonil)[(1R)-1-(ciclohexilmetil)-2-oxo-2-((2S)-2-{[(4,5,6,7-tetrahidro-2H-indazol-5-ilmetil)amino]carbonil}pirrolidinil)etil]amino}acetato de terc-butilo
El compuesto del título se preparó a partir de ácido (2S)-1-((2R)-2-{(terc-butoxicarbonil)[2-(terc-butoxi)-2-oxoetil]amino}-3-ciclohexilpropanoil)-2-pirrolidincarboxílico y dihidrocloruro de 4,5,6,7-tetrahidro-2-H-indazol-5-ilmetanamina empleando el procedimiento del ejemplo 6 y se obtuvo como un sólido blanco.
2. Preparación de dihidrocloruro de ácido 2-{[(1R)-1-(ciclohexilmetil)-2-oxo-2-((2s)-2-{[(4,5,6,7-tetrahidro-2H-indazol-5-ilmetil)amino]carbonil}pirrolidinil)etil]amino}acético
El compuesto del título se preparó a partir de 2-{(terc-butoxicarbonil)[(1R)-1-(ciclohexilmetil)-2-oxo-2-((2s)-2-{[(4,5,6,7-tetrahidro-2H-indazol-5-ilmetil)amino]carbonil}pirrolidinil)etil]amino}acetato de terc-butilo empleando el procedimiento del ejemplo 8 y se obtuvo como un sólido cristalino blanco.
Rendimiento: 91%
Punto de fusión: 144-147ºC.
IR (KBr): \nu = 3424, 2924, 1738, 1652, 1554, 1446, 1236 cm^{-1}.
MS (FAB): m/z (%) 460 (MH^{+}, 80).
Ejemplo 67 (1R)-2-[(2S)-2-({[(2-amino-5,6,7,8-tetrahidro-6-quinazolinil)metil]amino}carbonil)pirrolidinil]-1-benzhidril-2-oxoetilcarbamato de terc-butilo
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84
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El compuesto del título se preparó a partir de Boc-D-3,3-(Ph)_{2}-Ala-L-Pro-OH y 6-(aminometil)-5,6,7,8-tetrahidro-2-quinazolinamina empleando el procedimiento del ejemplo 6 y se obtuvo como un sólido blanco.
Rendimiento: 44%
Punto de fusión: 127-130ºC.
IR (KBr): \nu = 3341, 2929, 1653, 1558, 1456, 1366, 1166, 1017, 755, 702 cm^{-1}.
MS (EI): m/z (%) 598 (M, 51).
Ejemplo 68 Dihidrocloruro de (2S)-1-[(2R)-2-amino-3,3-difenilpropanoil]-N-[(2-amino-5,6,7,8-tetrahidro-6-quinazolinil)metil]-2-pirrolidincarboxamida
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85
\newpage
El compuesto del título se preparó a partir de (1R)-2-[(2s)-2-({[(2-amino-5,6,7,8-tetrahidro-6-quinazolinil)metil]amino}carbonil)pirrolidinil]-1-benzhidril-2-oxoetilcarbamato de terc-butilo empleando el procedimiento del ejemplo 8 y se obtuvo como un sólido cristalino blanco.
Rendimiento: 98%
Punto de fusión: 166-168ºC.
IR (KBr): \nu = 3305, 2926, 1654, 1449, 1357, 1188, 1004, 756, 704 cm^{-1}.
MS (FAB): m/z (%) 499 (MH^{+}, 55).
Ejemplo 69 (2S)-N-[(2-amino-4,5,6,7-tetrahidro-1,3-benzotiazol-6-il)metil]-1-{(2R)-2-[(bencilsulfonil)amino]-3-ciclohexilpropanoil}-2-pirrolidincarboxamida
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86
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El compuesto del título se preparó a partir de N-(bencilsulfonil)-D-(ciclohexil-Ala)-L-Pro-OH y dihidrobromuro de 4,5,6,7-tetrahidro-1,3-benzotiazol-2,6-diamina de acuerdo con el procedimiento del ejemplo 25 y se obtuvo como un sólido de color amarillo débil.
Rendimiento: 77%
Punto de fusión: 203-205ºC.
IR (KBr): \nu = 3356, 2924, 1648, 1523, 1444, 1311, 1141, 783, 699, 546 cm^{-1}.
MS (FAB): m/z (%) 588 (MH^{+}, 100).
Ejemplo 70 2-[[(1R)-2-((2S)-2-{[(2-amino-4,5,6,7-tetrahidro-1,3-benzotiazol-6-il)amino]carbonil}pirrolidinil)-1-(ciclohexil- metil)-2-oxoetil](terc-butoxicarbonil)amino]acetato de terc-butilo
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87
\newpage
El compuesto del título se preparó a partir de ácido (2s)-1-((2r)-2-{(terc-butoxicarbonil)[2-(terc-butoxi)-2-oxoetil]amino}-3-ciclohexilpropanoil)-2-pirrolidincarboxílico y dihidrobromuro de 4,5,6,7-tetrahidro-1,3-benzotiazol-2,6-diamina de acuerdo con el procedimiento del ejemplo 25 y se obtuvo como un sólido blanco.
Rendimiento: 65%
Punto de fusión: 95-101ºC.
IR (KBr): \nu = 3318, 2978, 2927, 2852, 1750, 1698, 1646, 1529, 1447, 1368, 1228, 1158 cm^{-1}.
MS (FAB): m/z (%) 634 (MH^{+}, 100).
Ejemplo 71 Dihidrocloruro de ácido 2-{[(1R)-2-((2S)-2-{[(2-amino-4,5,6,7-tetrahidro-1,3-benzotiazol-6-il)amino]carbonil}pi- rrolidinil)-1-(ciclohexilmetil)-2-oxoetil]amino}acético
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88
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El compuesto del título se preparó a partir de 2-[[(1R)-2-((2S)-2-{[(2-amino-4,5,6,7-tetrahidro-1,3-benzotiazol-6-il)amino]carbonil}pirrolidinil)-1-(ciclohexilmetil)-2-oxoetil](terc-butoxicarbonil)amino]acetato de terc-butilo de acuerdo con el procedimiento del ejemplo 26, como un sólido cristalino blanco.
Rendimiento: 91%
Punto de fusión: 180-182ºC.
IR (KBr): \nu = 2929, 2288, 1742, 1639, 1548, 1448, 1227, 1116, 880, 710 cm^{-1}.
MS (FAB): m/z (%) 478 (MH^{+}, 100).
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(Tabla pasa a página siguiente)
Ejemplo 72 Resultados del ensayo biológico de compuestos seleccionados
89

Claims (13)

1. Compuestos de fórmula general (I)
(I)D-CO-B-A-Het
en donde
Het representa un grupo seleccionado entre las siguientes fórmulas:
90
91
en donde X es S, NH u O,
92
en donde Y es N o CH,
93
94
en donde X es NH, O o S,
95
en donde Y es N o CH,
R^{1} y R^{2} representan independientemente H o NH_{2};
A representa
\quad
- un grupo -CONH- o -CH_{2}NH- enlazado a Het por el fragmento NH,
\quad
- un grupo -CONHCH_{2}- o -CH_{2}NHCH_{2}- enlazado a Het por el fragmento CH_{2},
\quad
- un grupo -CH_{2}NHCONH-, -CH_{2}NHCH_{2}CONH- o -CH_{2}NHCOCH_{2}NH- enlazado a Het por el fragmento NH,
\quad
- un grupo -CH_{2}NHCONHCH_{2}-, -CH_{2}NHCH_{2}CONHCH_{2}- o -CH_{2}NHCOCH_{2}NHCH_{2}- enlazado a Het por el fragmento CH_{2},
B
se elige entre las siguientes estructuras:
96
en donde:
Z
es CH_{2}, S o CH-OH
R^{3}
es H, alquilo C_{1}-C_{4} lineal o ramificado, cicloalquilo C_{3}-C_{7},
R^{4}
es H, alquilo C_{1}-C_{4} lineal o ramificado, cicloalquilo C_{3}-C_{7};
D representa un grupo
97
en donde R^{d} es H, CH_{2}OH, CH_{2}SH o un grupo
98
en donde
R^{a} y R^{b} se eligen independientemente entre los siguientes grupos:
- H,
- alquilo C_{1}-C_{4} lineal o ramificado que puede estar sustituido con cicloalquilo C_{3}-C_{7} o con 1 a 9 átomos de halógeno seleccionados entre F, Cl, Br, I,
- cicloalquilo C_{3}-C_{7},
- bicicloalquilo C_{9}-C_{10},
- un anillo heterocíclico monocíclico de 5 a 7 miembros, saturado o insaturado, estable, o un anillo heterocíclico bicíclico de 8 a 10 miembros que, además de átomos de carbono, contiene de 1 a 3 heteroátomos seleccionados entre N, O y S en donde N o S puede estar oxidado o N puede estar cuaternizado,
- arilo (por ejemplo, fenilo, naftilo) que puede estar insustituido u opcionalmente sustituido en cualquier posición con uno o dos sustituyentes elegidos entre alquilo C_{1-4}, alcoxi C_{1-4}, halógeno o hidroxi,
R^{c} se elige entre los grupos:
- NH_{2},
- NH(CH_{2})_{n}CH_{3},
en donde n es 0, 1, 2 ó 3,
- NH(CH_{2})_{m}OH,
en donde m es 2, 3 ó 4,
- NH(CH_{2})_{k}COOH,
en donde k es 1, 2 ó 3,
- NH(CH_{2})_{n}COOR^{5},
en donde n es 0, 1, 2 ó 3 y R^{5} representa alquilo C_{1-4} lineal o ramificado,
- NH(CH_{2})_{k}CONR^{6}R^{7},
en donde k es 1, 2 ó 3 y R^{6} y R^{7} son independientemente H o alquilo C_{1-4} lineal o ramificado, o bien R^{6} y R^{7} juntos son -(CH_{2})_{4-5}-, -(CH_{2})_{2}O(CH_{2})_{2}- o -(CH_{2})_{2} NH(CH_{2})_{2}-,
- NHO_{2}S(CH_{2})_{n}-W,
en donde n es 0, 1, 2 ó 3,
\quad
representa fenilo, naftilo, un anillo heterocíclico monocíclico de 5 ó 6 miembros saturado o insaturado o un anillo heterocíclico bicíclico de 8 a 10 miembros saturado o insaturado que contiene de 1 a 3 heteroátomos seleccionados entre N, O o S en donde N o S pueden estar oxidados o N puede estar cuaternizado; estando cada anillo opcionalmente sustituido por uno o más sustituyentes elegidos entre alquilo C_{1-4}, alcoxi C_{1-4}, amino, ciano, halógeno o hidroxi,
N[O_{2}S(CH_{2})_{n}-W][(CH_{2})_{k}COOH]
en donde n es 0, 1, 2 ó 3 y en donde k es 1, 2 ó 3,
- NH(CH_{2})_{k}NH_{2},
en donde k es 1, 2 ó 3,
- NHC(Ph)_{3},
en forma de diastereomeros puros o de una mezcla de diastereomeros o sus sales farmacéuticamente aceptables con actividad anticoagulante.
2. Un compuesto según la reivindicación 1 de fórmula (I) en donde HET representa un grupo seleccionado entre las fórmulas 1.1, 1.4, 1.6.
3. Un compuesto según cualquiera de las reivindicaciones anteriores en donde A representa un grupo seleccionado entre -CONH- o -CH_{2}NH- enlazado a Het por el fragmento NH, -CONHCH_{2}- o -CH_{2}NHCH_{2}- enlazado a Het por el fragmento CH_{2}.
4. Un compuesto según cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en donde B representa un grupo seleccionado entre las fórmulas: 2.1 (Z es CH_{2} o S), 2.2 ó 2.3 (R^{3} es H, cicloalquilo C_{3}-C_{7}, R^{4} es H o alquilo C_{1}-C_{4} ramificado).
5. Un compuesto según cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en donde D representa un grupo seleccionado entre la fórmula 3.1 (en donde R^{d} es H o 3.0.1, en donde R^{a} puede ser fenilo, diclorofenilo, por ejemplo, 3,4-diclorofenilo, o ciclohexilo y R^{b} es H, o en donde R^{a} y R^{b} son ambos fenilo o ciclohexilo).
6. Un compuesto según la reivindicación 1, en donde dicho compuesto se elige del grupo consistente en:
(2S)-N-(2-amino-5,6,7,8-tetrahidro-6-quinazolinil)-1-{(2R)-2-[(bencilsulfonil)amino]-3-fenilpropanoil}-2-pirrolidincarboxamida
(1R)-2-((2S)-2-{[(2-amino-5,6,7,8-tetrahidro-6-quinazolinil)amino]carbonil}pirrolidinil)-1-bencil-2-oxoetilcarbamato de terc-butilo
Dihidrocloruro de (2S)-1-[(2R)-2-amino-3-fenilpropanoil]-N-(2-amino-5,6,7,8-tetrahidro-6-quinazolinil)-2-pirrolidincarboxamida
(2S)-1-{(2R)-2-[(bencilsulfonil)amino]3-fenilpropanoil}-N-(4,5,6,7-tetrahidro-2H-indazol-5-il)-2-pirrolidincarboxamida
(1R)-1-bencil-2-oxo-2-{(2S)-2-[(4,5,6,7-tetrahidro-2H-indazol-5-ilamino)carbonil]pirrolidinil}etilcarbamato de terc-butilo
Dihidrocloruro de (2S)-1-[(2R)-2-amino-3-fenilpropanoil]-N-(4,5,6,7-tetrahidro-2H-indazol-5-il)-pirrolidincarboxamida
(2S)-N-[(2-amino-5,6,7,8-tetrahidro-6-quinazolinil)metil]-1-{(2R)-2-[(bencilsulfonil)amino]-3-fenilpropanoil}-2-pirrolidincarboxamida
(1S)-2-((2S)-2-{[(2-amino-5,6,7,8-tetrahidro-6-quinazolinil)amino]carbonil}pirrolidinil)-1-benzhidril-2-oxoetilcarbamato de terc-butilo
(1R)-2-((2S)-2-{[(2-amino-5,6,7,8-tetrahidro-6-quinazolinil)amino]carbonil}pirrolidinil)-1-(3,4-diclorobencil)-2-oxoetilcarbamato de terc-butilo
(1S)-1-benzhidril-2-oxo-2-{(2S)-2-[(4,5,6,7-tetrahidro-2H-indazol-5-ilamino)carbonil]pirrolidinil}etilcarbamato de terc-butilo
(1R)-1-(3,4-diclorobencil)-2-oxo-2-{(2S)-2-[(4,5,6,7-tetrahidro-2H-indazol-5-ilamino)carbonil]pirrolidinil}e-
tilcarbamato de terc-butilo
Dihidrocloruro de (2S)-1-[(2S)-2-amino-3,3-difenilpropanoil]-N-(2-amino-5,6,7,8-tetrahidro-6-quinazolinil)-2-pirrolidincarboxamida
Dihidrocloruro de (2S)-1-[(2R)-2-amino-3-(3,4-diclorofenil)propanoil]-N-(2-amino-5,6,7,8-tetrahidro-6-quinazolinil)-2-pirrolidincarboxamida
Dihidrocloruro de (2S)-1-[(2S)-2-amino-3,3-difenilpropanoil]-N-(4,5,6,7-tetrahidro-2H-indazol-5-il)-2-pirrolidincarboxamida
Dihidrocloruro de (2S)-1-[(2R)-2-amino-3-(3,4-diclorofenil)propanoil]-N-(4,5,6,7-tetrahidro-2H-indazol-5-il)-2-pirrolidincarboxamida
(2S)-N-(2-amino-5,6,7,8-tetrahidro-6-quinazolinil)-1-{(2R)-2-[(bencilsulfonil)amino]-3-ciclohexilpropanoil}-2-pirrolidincarboxamida
(2S)-1-{(2R)-2-[(bencilsulfonil)amino]-3-ciclohexilpropanoil}-N-(4,5,6,7-tetrahidro-2H-indazol-5-il)-2-pirrolidincarboxamida
(1R)-2-((2S)-2-{[(2-amino-5,6,7,8-tetrahidro-6-quinazolinil)amino]carbonil}pirrolidinil)-1-benzhidril-2-oxoetilcarbamato de terc-butilo
Dihidrocloruro de (2S)-1-[(2R)-2-amino-3,3-difenilpropanoil]-N-(2-amino-5,6,7,8-tetrahidro-6-quinazolinil)2-pirrolidincarboxamida
(1R)-2-((2S)-2-{[(2-amino-4,5,6,7-tetrahidro-1,3-benzotiazol-6-il)amino]carbonil}pirrolidinil)-1-bencil-2-oxoetilcarbamato de terc-butilo
Dihidrocloruro de (2S)-1-[(2R)-2-amino-3-fenilpropanoil]-N-(2-amino-4,5,6,7-tetrahidro-1,3-benzotiazol-6-il)-2-pirrolidincarboxamida
(2S)-N-(2-amino-4,5,6,7-tetrahidro-1,3-benzotiazol-6-il)-1-{(2R)-2-[(bencilsulfonil)amino]-3-fenilpropanoil}-2-pirrolidincarboxamida
(2S)-N-(2-amino-4,5,6,7-tetrahidro-1,3-benzotiazol-6-il)-1-{(2R)-2-[(bencilsulfonil)amino]-3-ciclohexilpropanoil}-2-pirrolidincarboxamida
(2S)-N-(2-amino-4,5,6,7-tetrahidro-1,3-benzotiazol-6-il)-1-[(2R)-2-[(bencilsulfonil)amino]-3-(3,4-diclorofenil)propanoil]-2-pirrolidincarboxamida
(2S)-N-(2-amino-4,5,6,7-tetrahidro-1,3-benzotiazol-6-il)-1-{(2R)-2-[(2-naftilsulfonil)amino]-3-fenilpropanoil}-2-pirrolidincarboxamida
(2R)-N-{2-[(2-amino-4,5,6,7-tetrahidro-1,3-benzotiazol-6-il)amino]-2-oxoetil}-2-[(bencilsulfonil)amino]-3-fenilpropanamida
(2R)-N-{(2S)-2-[(2-amino-4,5,6,7-tetrahidro-1,3-benzotiazol-6-il)amino]-1-metil-2-oxoetil}-2-[(bencilsulfonil)amino]-3-fenilpropanamida
(2S)-N-(2-amino-4,5,6,7-tetrahidro-1,3-benzotiazol-6-il)-1-[2-(tritilamino)acetil]-2-pirrolidincarboxamida
(1R)-2-((2S)-2-{[(2-amino-4,5,6,7-tetrahidro-1,3-benzotiazol-6-il)amino]carbonil}pirrolidinil)-1-(3,4-diclorobencil)-2-oxoetilcarbamato de terc-butilo
(1S)-2-((2S)-2-{[(2-amino-4,5,6,7-tetrahidro-1,3-benzotiazol-6-il)amino]carbonil}pirrilidinil)-1-benzhidril-2-oxoetilcarbamato de terc-butilo
Dihidrocloruro de (2S)-1-[(2R)-2-amino-3-(3,4-diclorofenil)propanoil]-N-(2-amino-4,5,6,7-tetrahidro-1,3-benzotiazol-6-il)-2-pirrolidincarboxamida
Dihidrocloruro de (2S)-1-[(2S)-2-amino-3,3-difenilpropanoil]-N-(2-amino-4,5,6,7-tetrahidro-1,3-benzotiazol-6-il)-2-pirrolidincarboxamida
(1R)-1-benzhidril-2-oxo-2-{(2S)-2-[(4,5,6,7-tetrahidro-2H-indazol-5-ilamino)carbonil]pirrolidinil}etilcarbamato de terc-butilo
Dihidrocloruro de (2S)-1-[(2R)-2-amino-3,3-difenilpropanoil]-N-(4,5,6,7-tetrahidro-2H-indazol-5-il)-2-pirrolidincarboxamida
(2S)-N-[(2-amino-5,6,7,8-tetrahidro-6-quinazolinil)metil]-1-{(2R)-2-[(bencilsulfonil)amino]-3-ciclohexilpropanoil}-2-pirrolidincarboxamida
(2S)-1-{(2R)-2-[(bencilsulfonil)amino]-3-ciclohexilpropanoil}-N-(4,5,6,7-tetrahidro-2H-indazol-5-ilmetil)-2-pirrolidincarboxamida
(1R)-1-(3,4-diclorobencil)-2-oxo-2-((2S)-2-{[(4,5,6,7-tetrahidro-2H-indazol-5-ilmetil)amino]carbonil}pirro-
lidinil)etilcarbamato de terc-butilo
Dihidrocloruro de (2S)-1-[(2R)-2-amino-3-(3,4-diclorofenil)propanoil]-N-(4,5,6,7-tetrahidro-2H-indazol-5-ilmetil)-2-pirrolidincarboxamida
(1R)-2-[(2S)-2-({[(2-amino-5,6,7,8-tetrahidro-6-quinazolinil)metil]amino}carbonil)pirrolidinil]-1-(3,4-diclorobencil)-2-oxoetilcarbamato de terc-butilo
Dihidrocloruro de (2S)-1-[(2R)-2-amino-3-(3,4-diclorofenil)propanoil]-N-[(2-amino-5,6,7,8-tetrahidro-6-quinazolinil)metil]-2-pirrolidincarboxamida
(2s)-1-{(2R)-2-[(bencilsulfonil)amino]-3-ciclohexilpropanoil}-N-(4,5,6,7-tetrahidro-2H-isoindol-5-il)-2-pirrolidincarboxamida
(1R)-1-benzhidril-2-oxo-2-((2S)-2-{[(4,5,6,7-tetrahidro-2H-indazol-5-ilmetil)amino]carbonil}pirrolidinil)etilcarbamato de terc-butilo
Dihidrocloruro de (2S)-1-[(2R)-2-amino-3,3-difenilpropanoil]-N-(4,5,6,7-tetrahidro-2H-indazol-5-ilmetil)-2-pirrolidincarboxamida
Dihidrocloruro de ácido 2-{[(1R)-1-(ciclohexilmetil)-2-oxo-2-((2s)-2-{[(4,5,6,7-tetrahidro-2-indazol-5-ilmetil)amino]carbonil}pirrolidinil)etil]amino}acético
(1R)-2-[(2S)-2-({[(2-amino-5,6,7,8-tetrahidro-6-quinazolinil)metil]amino}carbonil)pirrolidinil]-1-benzhidril-2-oxoetilcarbamato de terc-butilo
Dihidrocloruro de (2S)-1-[(2R)-2-amino-3,3-difenilpropanoil]-N-[(2-amino-5,6,7,8-tetrahidro-6-quinazolinil)metil]-2-pirrolidincarboxamida
(2S)-N-[(2-amino-4,5,6,7-tetrahidro-1,3-benzotiazol-6-il)metil]-1-{(2R)-2-[(bencilsulfonil)amino]-3-ciclohexilpropanoil}-2-pirrolidincarboxamida
2-[[(1R)-2-((2S)-2-{[(2-amino-4,5,6,7-tetrahidro-1,3-benzotiazol-6-il)amino]carbonil}pirrolidinil)-1-(ciclo-
hexilmetil)-2-oxoetil](terc-butoxicarbonil)amino]acetato de terc-butilo
Dihidrocloruro de ácido 2-{[(1R)_2-((2S)-2-{[(2-amino-4,5,6,7-tetrahidro-1,3-benzotiazol-6-il)amino]carbonil}pirrolidinil)-1-(ciclohexilmetil)-2-oxoetil]amino}acético
7. Un compuesto según cualquiera de las reivindicaciones anteriores para su uso como una sustancia terapéuticamente eficaz.
8. Procedimiento para la preparación de compuestos según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6, caracterizado porque:
\bullet Cuando A es un grupo -CONH- enlazado a Het por el fragmento -NH- o A es el grupo -CONHCH_{2}- enlazado a Het por el fragmento -CH_{2}-, el fragmento B (que tiene un grupo protector o fragmento D-CO enlazado al átomo de N y el grupo COOH enlazado al átomo de C adyacente al nitrógeno) se condensa con el compuesto Het-NH_{2} o Het-CH_{2}NH_{2} y, cuando un grupo protector está enlazado a N del fragmento B, se separa dicho grupo protector, después de la condensación, y el fragmento obtenido se condensa con un grupo d-COOH.
\bullet Cuando A es el grupo -CH_{2}NH- enlazado a Het por el fragmento -NH- o un grupo -CH_{2}NHCH_{2}- enlazado a Het por el fragmento -CH_{2}-, se someten a aminación reductiva aldehídos que portan un grupo protector adecuado P enlazado a N, con aminas Het-NH_{2} o HetCH_{2}NH_{2}, para preparar el fragmento P-B-CH_{2}NH-Het o el fragmento P-B-CH_{2}NHCH_{2}-Het y, después de la separación del grupo protector P, el compuesto obtenido se condensa con el fragmento D-COOH.
\bullet Cuando A es el grupo -CH_{2}NHCONH- enlazado a Het por el fragmento -NH-, a partir del aldehído B-CHO, en donde un grupo protector adecuado P está enlazado a N, que ha sido introducido y que se separa una vez finalizada la reacción, por aminación reductiva con acetato amónico y posterior conversión de la amina obtenida con cloroformato de etilo, se obtiene un compuesto del tipo P-B-CH_{2}NHCOOEt el cual se condensa con Het-NH_{2} y, después de la desprotección, el fragmento B-CH_{2}NHCOHN-Het se condensa con D-COOH.
\bullet Cuando A es un grupo -CH_{2}NHCONHCH_{2}- enlazado a Het por el fragmento -CH_{2}, a partir del aldehído b-CHO, en donde un grupo protector adecuado P está enlazado a N, por aminación reductiva con acetato amónico y posterior conversión de la amina obtenida con cloroformato de etilo, se obtiene un compuesto del tipo P-B-CH_{2}NHCOOEt el cual se condensa con Het-CH_{2}NH_{2} y, después de la desprotección, el fragmento B-CH_{2}NHCOHNCH_{2}-Het se condensa con D-COOH.
\bullet Cuando A es un grupo -CH_{2}NHCH_{2}CONH- enlazado a Het por el fragmento -NH-, a partir del aldehído B-CHO, en donde un grupo protector adecuado P está enlazado a N, por aminación reductiva con acetato amónico y posterior conversión de la amina obtenida con bromoacetato de etilo, se obtiene un compuesto del tipo P-B-CH_{2}NHCH_{2}COOEt el cual se condensa con Het-NH_{2} y, después de la desprotección, el fragmento B-CH_{2}NHCOHN-Het se condensa con el fragmento D-COOH.
\bullet Cuando A es un grupo -CH_{2}NHCH_{2}CONHCH_{2}- enlazado a Het por el fragmento -CONHCH_{2}-, a partir del aldehído B-CHO, en donde un grupo protector adecuado P está enlazado a N, por aminación reductiva con acetato amónico y posterior conversión de la amina obtenida con bromoacetato de etilo, se obtiene un compuesto del tipo P-B-CH_{2}NHCH_{2}COOEt el cual se condensa con Het-CH_{2}NH_{2} y, después de la desprotección, el fragmento B-CH_{2}NHCH_{2}COHNCH_{2}-Het se condensa con el fragmento D-COOH.
\bullet Cuando A es un grupo -CH_{2}NHCOCH_{2}NH- enlazado a Het por el fragmento -NH-, se efectúa la reacción entre Het-NH_{2} y bromoacetato de etilo, tras lo cual el compuesto HetNHCH_{2}COOEt obtenido se convierte al compuesto B-CH_{2}NHCOCH_{2}NHHet empleando el compuesto B-CH_{2}NH_{2}.
\bullet Cuando A es un grupo -CH_{2}NHCOCH_{2}NHCH_{2}- enlazado a Het por el fragmento -CH_{2}NHCH_{2}-, se efectúa la reacción entre Het-CH_{2}NH_{2} y bromoacetato de etilo, tras lo cual el compuesto HetCH_{2}NHCH_{2}COOEt obtenido se convierte a B-CH_{2}NHCOCH_{2}NHCH_{2}Het empleando el compuesto B-CH_{2}NH_{2} y luego el fragmento B-CH_{2}NHCOCH_{2}NHCH_{2}-Het se condensa con el fragmento D-COOH.
9. Uso de un compuesto según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6 en la preparación de un medicamento para inhibir trombina, inhibir la formación de fibrina y para inhibir y prevenir la formación de trombos.
10. Uso de un compuesto según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6 en la preparación de un medicamento para el tratamiento y prevención de trombosis venosa, para la prevención de embolismos pulmonares en pacientes de corazón, para la prevención de la oclusión que sigue a la angioplastia y para la prevención de la coagulación de la sangre en circuitos extracorpóreos y en hemodiálisis.
11. Una composición farmacéutica que comprende una cantidad terapéuticamente eficaz de un compuesto según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6 y sustancias auxiliares farmacéuticamente aceptables.
12. Uso de una composición farmacéutica según la reivindicación 11 en la preparación de un medicamento para inhibir trombina en el hombre u otros mamíferos.
13. Uso de la composición farmacéutica según la reivindicación 11 en la preparación de un medicamento para inhibir la formación de fibrina en el hombre y en otros mamíferos.
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