ES2239632T3

ES2239632T3 - Derivado de piridazino-quinolina y metodo para el tratamiento del dolor.

Info

Publication number: ES2239632T3
Application number: ES00987935T
Authority: ES
Inventors: Thomas Michael Bare; Dean Gordon Brown; Megan Murphy; Rebecca Ann Urbanek; Wenhua Xiao
Original assignee: AstraZeneca AB
Current assignee: AstraZeneca AB
Priority date: 1999-12-23
Filing date: 2000-12-19
Publication date: 2005-10-01
Anticipated expiration: 2020-12-19
Also published as: CA2394888A1; NO20022984D0; DE60019807T2; HUP0300313A2; BG106831A; AU2420301A; HK1048811B; CZ20022177A3; CZ296877B6; WO2001047927A1; BR0016654A; PT1244662E; RU2234507C2; CN1411459A; EP1244662B1; NO20022984L; CN1188413C; AU779703B2; SK8792002A3; IL150208A0

Abstract

Ahora se ha descubierto que cierto compuesto, que muestra la propiedad de unirse al sitio de glicina del receptor de NMDA, tiene utilidad para el alivio del dolor, y particularmente para el alivio del dolor neuropático. Por lo tanto, en un aspecto, la invención proporciona un compuesto, 7-cloro-4-hidroxi-2-(2-cloro-4-metilfenil)-1, 2, 5, 10-tetrahidropiridazino[4, 5-b]quinolin-1, 10-diona, según el diagrama estructural I En otro aspecto, la invención proporciona un método para el tratamiento de dolor usando un compuesto según el diagrama estructural I, comprendiendo el método administrar una cantidad eficaz del compuesto que alivia el dolor. En otra realización, el método comprende administrar una cantidad eficaz, que alivia el dolor, del compuesto según el diagrama estructural I, en forma de una composición farmacéutica que comprende un compuesto según el diagrama estructural I como ingrediente activo, junto con uno o más aditivos farmacéuticamente aceptables. En una realización adicional,el método comprende unir el compuesto de la invención al sitio de glicina del receptor de NMDA de un animal de sangre caliente, tal como un ser humano, para inhibir beneficiosamente la actividad del receptor de NMDA. Otro aspecto de la invención es un método para obtener el compuesto según el diagrama estructural I. Aún otros aspectos de la invención son composiciones farmacéuticas que contienen el compuesto según el diagrama estructural I, y el uso del compuesto según el diagrama estructural I para la preparación de medicamentos y composiciones farmacéuticas.

Description

Derivado de piridazino-quinolina y método para el tratamiento del dolor.

Esta invención se refiere al tratamiento o prevención del dolor o nocirrecepción.

Técnica relacionada

El dolor es una experiencia sensitiva distinta de las sensaciones de tacto, presión, calor y frío. A menudo es descrito por los que lo sufren mediante términos tales como brillante, lento pero no intenso, doliente, punzante, cortante o abrasador, y generalmente se considera que incluye tanto la sensación original como la reacción a esa sensación. Este abanico de sensaciones, así como la variación en la percepción del dolor por individuos diferentes, hace difícil una definición precisa del dolor, no obstante muchas personas sufren dolor fuerte y continuo.

El dolor que está provocado por el daño a estructuras nerviosas a menudo se manifiesta como una supersensibilidad nerviosa o hiperalgesia, y se denomina dolor "neuropático". El dolor también puede estar "causado" por la estimulación de receptores nocirreceptivos, y se puede transmitir a lo largo de todas las rutas nerviosas intactas: tal dolor se denomina dolor "nocirreceptivo".

El nivel de estimulación al cual se percibe el dolor se denomina como el "umbral de dolor". Los analgésicos son agentes farmacéuticos que alivian el dolor, elevando el umbral de dolor sin pérdida de conciencia. Después de la administración de un fármaco analgésico es necesario un estímulo de mayor intensidad o de duración más prolongada antes de que se experimente dolor. En una persona que sufre hiperalgesia, un fármaco analgésico puede tener un efecto antihiperalgésico. En contraste con los analgésicos, los agentes tales como los anestésicos locales bloquean la transmisión en las fibras nerviosas periféricas, bloqueando de ese modo el conocimiento del dolor. Por otro lado, los anestésicos generales reducen el conocimiento del dolor, produciendo una pérdida de conciencia.

Se ha informado que los antagonistas de taquiquinina inducen la antinocirrecepción en animales, lo cual se cree que es análogo a la analgesia en el hombre (Maggi et al., J. Auton. Pharmacol. (1993) 13, 23-93). En particular, los antagonistas del receptor NK-1 no peptídicos han demostrado que producen tal analgesia. Por ejemplo, el antagonista RP 67.580 del receptor de NK-1 produjo analgesia con una potencia comparable a la de la morfina (Garret et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA (1993) 88, 10208-10212).

El documento WO 95/11244 describe compuestos de piridazindiona útiles para el tratamiento de apoplejías y trastornos neurológicos. El documento WO 95/11244 describe los ensayos A hasta D. El ensayo A, conocido como el ensayo de unión a glicina, es un modelo de unión in vitro, mientras que los ensayos B, C y D son todos ensayos in vivo para la apoplejía.

Los analgésicos opioides son una clase bien probada de agentes analgésicos, con acciones similares a la morfina. Los analgésicos opioides sintéticos y semisintéticos son derivados de cinco clases químicas de compuestos: fenantrenos, fenilheptilaminas, fenilpiperidinas, morfinanos y benzomorfanos. Farmacológicamente, estos compuestos tienen diversas actividades: de este modo, algunos son agonistas fuertes en los receptores de opioides (por ejemplo, morfina); otros son agonistas moderados a suaves (por ejemplo, codeína); aún otros muestran actividad agonista y antagonista mixta (por ejemplo, nalbufina); y todavía otros son agonistas parciales (por ejemplo, nalorfina). Mientras que un agonista parcial de opioides, tal como nalorfina (el análogo N-alquílico de la morfina), antagonizará los efectos analgésicos de la morfina, puede ser un analgésico potente por derecho propio cuando se administra solo.

De todos los analgésicos opioides, la morfina sigue siendo el más ampliamente usado, pero, además de sus propiedades terapéuticas, tiene un número de inconvenientes que incluyen la depresión respiratoria, la disminución de la movilidad gastrointestinal (dando como resultado estreñimiento), nauseas y vómitos. La tolerancia y la dependencia física también limitan los usos clínicos de compuestos opioides.

La aspirina y otros compuestos de salicilato se usan frecuentemente en el tratamiento para interrumpir la amplificación del proceso inflamatorio en enfermedades reumatoides y en la artritis, y alivian temporalmente el dolor. Otros compuestos farmacéuticos usados para estos fines incluyen derivados del ácido fenilpropiónico, tales como ibuprofeno y naproxeno, sulindaco, fenilbutazona, corticosteroides, antimaláricos tales como cloroquina y sulfato de hidroxicloroquina, y fenematos (J. Hosp. Pharm., 36:622 (mayo 1979)). Sin embargo, estos compuestos son ineficaces para el dolor neuropático.

Las terapias disponibles para el dolor también tienen inconvenientes. Algunos agentes terapéuticos requieren el uso prolongado antes de que se experimente un efecto por parte del paciente. Otros fármacos existentes tienen efectos secundarios serios en ciertos pacientes, y éstos se deben monitorizar cuidadosamente para asegurarse de que ninguno de los efecto secundarios sea una amenaza innecesaria. La mayoría de los fármacos existentes proporciona sólo un alivio temporal del dolor, y se deben tomar de forma consistente diaria o semanalmente. Con la progresión de la enfermedad, a menudo aumenta la cantidad de medicación necesaria para aliviar el dolor, aumentando de este modo el potencial de los efectos secundarios adversos.

Los receptores de NMDA se definen por la unión de N-metil-D-aspartato (NMDA), y comprenden un complejo de receptor/canal iónico, con varios dominios de unión identificados diferentes. El propio NMDA es una molécula estructuralmente similar al glutamato (Glu) que se une al sitio de unión del glutamato y que es muy selectivo y potente activando el receptor de NMDA (Watkins (1987); Olney (1989)).

Se conocen muchos compuestos que se unen al sitio de unión de NMDA/Glu (por ejemplo, CPP, DCPP-eno, CGP 40116, CGP 37849, CGS 19755, NPC 12626, NPC 17742, D-AP5, D-AP7, CGP 39551, CGP-43487, MDL-100.452, LY-274614, LY-233536, y LY233053). Otros compuestos, denominados como antagonistas no competitivos de NMDA, se unen en otros sitios en el complejo del receptor de NMDA (los ejemplos son fenciclidina, dizocilpina, quetamina, tiletamina, CNS 1102, dextrometorfano, memantina, ácido quinurénico, CNQX, DNQX, 6,7-DCQX, 6,7-DCHQC, R(+)-HA-966, ácido 7-cloro-quinurénico, 5,7-DCKA, ácido 5-yodo-7-cloro-quinurénico, MDL-28.469, MDL-100.748, MDL-29.951, L-689.560, L-687.414, ACPC, ACPCM, ACPCE, arcaína, dietilentriamina, 1,10-diaminodecano, 1,12-diaminododecano, ifenprodilo, y SL-82.0715). Estos compuesto se han estudiado intensamente por Rogawski (1992) y Massieu et al., (1993), y en los artículos citados allí.

Además de su función fisiológica, el glutamato (Glu) puede neurotóxico. La neurotoxicidad del Glu se denomina como "excitotoxicidad" debido a que la acción neurotóxica de Glu, al igual que sus acciones beneficiosas, está mediada por un proceso excitador (Olney (1990); Choi (1992)). Normalmente, cuando se libera Glu en un receptor sináptico, se une sólo transitoriamente, y después se elimina rápidamente del receptor mediante un proceso que lo transporta nuevamente a la célula. En ciertas condiciones anormales, que incluyen apolejía, epilepsia y trauma del SNC, fracasa la captación de Glu y el Glu se acumula en el receptor, dando como resultado una excitación persistente de la actividad electroquímica, lo que conduce a la muerte de neuronas que tengan receptores de Glu. Muchas neuronas en el SNC tienen receptores de Glu, de forma que la excitotoxicidad puede provocar una cantidad enorme de daño al SNC.

Se puede producir lesión aguda por excitotoxicidad como resultado de sucesos isquémicos, sucesos hipóxicos, trauma cerebral o de la médula espinal, ciertos tipos de envenenamiento alimentario que implican un veneno excitotóxico tal como ácido domoico, y degeneración neuronal mediada por ataques, que puede resultar de la actividad de ataques epilépticos persistentes (estado epiléptico). Una gran cantidad de signos ha implicado al receptor de NMDA como un subtipo de receptor a través del cual el Glu media una cantidad sustancial de lesión del SNC, y está bien probado que los antagonistas de NMDA son eficaces protegiendo a las neuronas del SNC frente a la degeneración excitotóxica en estos síndromes de lesión aguda del SNC (Choi (1988); Olney (1990)).

Además del daño neuronal provocado por ataques agudos, la activación excesiva de los receptores de Glu también puede contribuir a procesos neurodegenerativos más graduales, conduciendo a la muerte celular en diversas enfermedades neurodegenerativas crónicas, incluyendo la enfermedad de Alzheimer, la esclerosis lateral amiotrófica, demencia por SIDA, enfermedad de Parkinson y enfermedad de Huntington (Olney (1990)). Generalmente, se considera que los antagonistas de NMDA pueden ser útiles en el manejo terapéutico de tales enfermedades crónicas.

En la década de 1980 se descubrió que el PCP (también conocido como "polvo de ángel") actúa en un "sitio de reconocimiento de PCP" en el canal iónico del receptor de NMDA/Glu. El PCP actúa como un antagonista no competitivo que bloquea el flujo de iones a través del canal iónico de NMDA. Más recientemente, se ha hecho evidente que los fármacos que actúan en el sitio de PCP como antagonistas no competitivos de NMDA tienen la probabilidad de producir efectos secundarios psicoticomiméticos. Además, ahora se reconoce que ciertos antagonistas competitivos y no competitivos de NMDA pueden provocar efectos patomorfológicos similares en cerebro de rata (Olney et al., (1991); Hargreaves et al., (1993)). Tales compuestos también tienen efectos psicoticomiméticos en seres humanos (Kristensen et al., (1992); Herrling (1994); Grotta (1994)).

El sitio de unión de la glicina, del complejo del receptor de NMDA, es distinguible de los sitios de unión de Glu y de PCP. También, recientemente se ha descubierto que los receptores de NMDA aparecen como varios subtipos que están caracterizados por propiedades diferenciales del sitio de unión de glicina del receptor. En las patentes U.S. 5.604.227, 5.733.910, 5.599.814, 5.593.133, 5.744.471, 5.837.705 y 6.103.721, se han descrito muchos compuestos que se unen en el sitio de glicina del receptor de NMDA, útiles para el tratamiento de apoplejía y de patologías neuro-
degenarivas.

Sumario de la invención

Ahora se ha descubierto que cierto compuesto, que muestra la propiedad de unirse al sitio de glicina del receptor de NMDA, tiene utilidad para el alivio del dolor, y particularmente para el alivio del dolor neuropático.

Por lo tanto, en un aspecto, la invención proporciona un compuesto, 7-cloro-4-hidroxi-2-(2-cloro-4-metilfenil)-1,2,5,10-tetrahidropiridazino[4,5-b]quinolin-1,10-diona, según el diagrama estructural I

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En otro aspecto, la invención proporciona un método para el tratamiento de dolor usando un compuesto según el diagrama estructural I, comprendiendo el método administrar una cantidad eficaz del compuesto que alivia el dolor.

En otra realización, el método comprende administrar una cantidad eficaz, que alivia el dolor, del compuesto según el diagrama estructural I, en forma de una composición farmacéutica que comprende un compuesto según el diagrama estructural I como ingrediente activo, junto con uno o más aditivos farmacéuticamente aceptables.

En una realización adicional, el método comprende unir el compuesto de la invención al sitio de glicina del receptor de NMDA de un animal de sangre caliente, tal como un ser humano, para inhibir beneficiosamente la actividad del receptor de NMDA.

Otro aspecto de la invención es un método para obtener el compuesto según el diagrama estructural I.

Aún otros aspectos de la invención son composiciones farmacéuticas que contienen el compuesto según el diagrama estructural I, y el uso del compuesto según el diagrama estructural I para la preparación de medicamentos y composiciones farmacéuticas.

Descripción detallada de la invención

La invención proporciona un compuesto, 7-cloro-4-hidroxi-2-(2-cloro-4-metilfenil)-1,2,5,10-tetrahidro-piridazino[4,5-b]quinolin-1,10-diona, sales farmacéuticamente aceptables del mismo, métodos para obtener el compuesto y sus sales, composiciones farmacéuticas que contienen el compuesto o sales del mismo, y métodos para usar el compuesto, las sales y las composiciones farmacéuticas.

Las sales adecuadas farmacéuticamente aceptables de los compuestos de la invención incluyen sales de adición de ácidos, tales como metanosulfonato, fumarato, hidrocloruro, hidrobromuro, citrato, tris(hidroximetil)aminometano, maleato, y sales formadas con ácido fosfórico y ácido sulfúrico. En otras realizaciones, las sales adecuadas son sales de bases tales como sales de metales alcalinos, por ejemplo sodio, sales de metales alcalino-térreos, por ejemplo calcio o magnesio, sales de aminas orgánicas, por ejemplo trietilamina, morfolina, N-metilpiperidina, N-etilpiperidina, procaína, dibencilamina, colina, N,N-dibenciletilamina, o aminoácidos tales como lisina.

Para el uso del compuesto de la invención, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, para el tratamiento terapéutico del dolor, que puede incluir el tratamiento profiláctico, en mamíferos, que pueden ser humanos, el compuesto se puede formular como una composición farmacéutica, según la práctica farmacéutica estándar.

Las composiciones farmacéuticas adecuadas, que contienen un compuesto de la invención, se pueden administrar en formas convencionales, por ejemplo mediante administración oral, tópica, parenteral, bucal, nasal, vaginal, o rectal, o mediante inhalación. Para estos fines, un compuesto de la invención se puede formular por medios conocidos en la técnica en forma de, por ejemplo, comprimidos, cápsulas, disoluciones acuosas u oleosas, suspensiones, emulsiones, cremas, ungüentos, geles, pulverizaciones nasales, supositorios, polvos finalmente divididos, o aerosoles para inhalación, y, para uso parenteral (que incluye intravenoso, intramuscular o por infusión), disoluciones o suspensiones acuosas u oleosas estériles, o emulsiones estériles. Una ruta preferida de administración es la oral mediante comprimido o cápsula.

Además de un compuesto de la presente invención, una composición farmacéutica de esta invención también puede contener uno o más agentes farmacológicamente activos, o tal composición farmacéutica se puede coadministrar simultánea o secuencialmente con uno o más agentes farmacológicamente activos.

Las composiciones farmacéuticas de esta invención normalmente se administrarán de forma que la persona reciba una dosis diaria eficaz que alivie el dolor. La dosis diaria se puede administrar en dosis divididas, según sea necesario, dependiendo la cantidad precisa del compuesto recibido, y la ruta de administración, del peso, de la edad y del sexo del paciente tratado, y de la enfermedad particular tratada, según principios conocidos en la técnica. Un régimen preferido de dosificación es una vez al día.

Una realización adicional de la invención proporciona una composición farmacéutica que contiene un compuesto de la invención como se define aquí, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en asociación con un aditivo farmacéuticamente aceptable, tal como un excipiente o un vehículo.

Aún otra realización de la invención proporciona el uso del compuesto de la invención, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, para uso en la preparación de un medicamento para el tratamiento del dolor.

Definiciones

Generalmente, en los métodos, procedimientos y ejemplos descritos aquí:

: las concentraciones se llevaron a cabo mediante evaporación giratoria a vacío;

: las operaciones se llevaron a cabo a temperatura ambiente, esto es, en el intervalo de 18-26ºC, y en atmósfera de nitrógeno;

: la cromatografía en columna (mediante el procedimiento ultrarrápido) se llevó a cabo sobre sílice Kieselgel de Merck (art. 9385), excepto que se establezca de otro modo;

: los rendimientos se dan sólo para ilustración, y no son necesariamente los máximos obtenibles;

: la estructura de los productos finales de la fórmula I se confirmó generalmente mediante técnicas espectrales de RMN y de masas; los espectros de resonancia magnética de protón se determinaron en DMSO-d_{6}, excepto que se establezca de otro modo, usando un espectrómetro Varian Gemini 2000 que funciona a una intensidad de campo de 300 MHz; los desplazamientos químicos se dan en partes por millón, campo abajo de tetrametilsilano como patrón interno (escala \delta), y las multiplicidades de los picos se muestran de esta manera: s, singlete; bs, singlete ancho; d, doblete; AB o dd, doblete de dobletes; t, triplete; dt, doblete de tripletes; m, multiplete; bm, multiplete ancho; los datos espectrales de masas mediante bombardeo con átomos rápidos (FAB) se obtuvieron usando un espectrómetro Platform (suministrado por Micromass) que funciona en electropulverización y, cuando sea apropiado, se recogieron los datos de ión positivo o los datos de ión negativo; en esta solicitud, se da (M+H)^{+};

: los intermedios generalmente no se caracterizaron de forma completa, y la pureza se determinó en general mediante análisis de espectro de masas (MS) o de RMN.

Las siguientes abreviaturas y definiciones, cuando se usaron, tienen los significados a continuación:

CDCl_{3} es cloroformo deuterado;

CMC es meto-p-toluenosulfonato de 1-ciclohexil-3-(2-morfolinoetil)carbodiimida;

DCM es diclorometano;

DCU es diciclohexilurea;

DHC es 1,3-diciclohexilcarbodiimida;

DMAP es 4-(dimetilamino)piridina;

DMF es N,N-dimetilformamida;

DMSO es dimetilsulfóxido;

m/s es espectroscopia de masas;

NMP es N-metilpirrolidinona;

RMN es resonancia magnética nuclear;

p.o. es por boca;

THF es tetrahidrofurano, y

t.i.d. es tres veces al día.

Los ejemplos y ensayos descritos aquí están destinados a ilustrar pero no a limitar la invención.

Ejemplos Ejemplo 1

El compuesto de la invención, 7-cloro-4-hidroxi-2-(2-cloro-4-metilfenil)-1,2,5,10-tetrahidropiridazino[4,5-b]-quinolin-1,10-diona, se puede preparar según el siguiente procedimiento:

Hidrocloruro de 2-cloro-4-metilfenilhidrazina

Se enfrió hasta -5ºC (temperatura interna) una suspensión de 2-cloro-4-metilanilina (10,1 ml, 11,63 g, 82,1 mmoles) en 64 ml de agua y 60 ml de HCl 12 N, y se agitó con un agitador mecánico. Se añadió una disolución de nitrito de sodio (8,26 g, 119,7 mmoles) en 56 ml de agua, durante 30 minutos. La disolución se puso más clara, pero quedó algo de sólido. La mezcla se agitó a -5ºC durante 20 minutos, y después se enfrió hasta -10ºC. Se añadió gota a gotauna disolución de cloruro de estaño (II) dihidratado (53,60 g, 237,6 mmoles), en 36 ml de HCl 12 N, durante 30 minutos, mientras se mantiene una temperatura interna de -5 hasta -10ºC. La mezcla marrón rosácea resultante se agitó a -5 hasta -10ºC durante 2 horas, y después se filtró en frío a través de un embudo de vidrio fritado previamente enfriado. Los sólidos recogidos se lavaron con etanol al 1% frío en éter (100 ml), seguido de éter frío (500 ml), y se secaron al aire durante 30 minutos. Después de secar a vacío, el producto deseado se obtuvo como un sólido cristalino amarillo muy pálido (7,76 g, 49%). RMN ^{1}H \delta (300 MHz, CDCl_{3}) \delta 10,09 (bs, 2H), 7,89 (s, 1H), 7,25 (d, 1H, J_{m} = 1,2 Hz), 7,13 (dd, 1H, J_{o}= 8,4 Hz, J_{m} = 1,2 Hz), 7,02 (d, 1H, J_{o}= 8,4 Hz), 2,24 (s, 3H); MS (CI) m/z 157/159.

(Terc-butoxi)-N-[(2-cloro-4-metilfenil)amino]carboxamida

Se agitó durante 10 minutos una suspensión de hidrocloruro de 2-cloro-4-metilfenilhidrazina (7,74 g, 40,09 mmoles) en 95 ml de NaHCO_{3} acuoso saturado, y después se trató con K_{2}CO_{3} sólido (9,45 g, 68,37 mmoles). La suspensión amarilla clara fina resultante se agitó durante 10 minutos. Se añadió una disolución de dicarbonato de di-t-butilo (12,97 g, 46,12 mmoles) en 195 ml de THF, durante 5 minutos, y la mezcla bifásica resultante se agitó vigorosamente durante 3 horas. La mezcla de reacción se repartió, y la capa acuosa se extrajo con éter (5 x 25 ml). Las capas orgánicas combinadas se lavaron con agua destilada (2 x 75 ml), se secaron sobre MgSO_{4}, y se concentraron a presión reducida. El secado a vacío dio un aceite naranja claro (14,07 g). El material se purificó mediante cromatografía ultrarrápida sobre gel de sílice, usando éter:hexanos 10:90 como eluyente. El producto se obtuvo como un aceite amarillo claro, que solidificó al dejar reposar (9,92 g, 96%). RMN ^{1}H (300 MHz, CDCl_{3}) \delta 8,88 (s, 1H), 7,15 (s, 1H), 7,09 (d, 1H, J_{m}= 1,2 Hz), 6,97 (d, 1H, J_{o}= 8,1 Hz), 6,64 (d, 1H, J_{o}= 8,1 Hz), 2,18 (s, 3H), 1,41 (s, 9H); MS (CI) m/z 279/281.

7-Cloro-4-hidroxiquinolin-2,3-dicarboxilato de dimetilo

Una mezcla agitada de 2-amino-4-clorobenzoato de metilo (2,50 g, 13,5 mmoles) y acetilendicarboxilato de dimetilo (2,05 g, 14,4 mmoles), en terc-butanol (22 ml), se puso a reflujo durante 7 horas en un atmósfera de nitrógeno. Después de añadir acetilendicarboxilato de dimetilo adicional (1,16 g, 8,13 mmoles), y de poner a reflujo otras 2,5 horas, la mezcla de reacción se dejó enfriar hasta la temperatura ambiente, y se añadió terc-butóxido de potasio (1,56 g, 13,9 mmoles) de una sola vez. Se formó un precipitado, y la mezcla resultante se puso a reflujo durante 1,5 horas. La mezcla se enfrió hasta temperatura ambiente, y se filtró para separar los sólidos, que se lavaron con terc-butanol y éter. Los sólidos se disolvieron en agua, y se acidificaron con ácido sulfúrico 1 N para formar un precipitado. La mezcla resultante se extrajo con cloruro de metileno, y los extractos combinados se lavaron con salmuera y con agua, se secaron sobre MgSO_{4}, se filtraron y se concentraron para dar un sólido verde. La recristalizacion de este material en metanol proporcionó el compuesto del título (1,15 g, 47%) como un sólido blanquecino, p.f. 232-233ºC; MS (CI):296 (M+H). Análisis para C_{13}H_{10}ClNO_{5}: Calc.: C, 52,81; H, 3,41; N, 4,74; Encontrado: C, 52,75; H, 3,47; N, 4,69.

Ácido 3-carbometoxi-7-cloro-4-hidroxiquinolin-2-carboxílico

Se añadió una disolución acuosa de hidróxido sódico (0,27 g, 6,75 mmoles) a una suspensión agitada de 7-cloro-4-hidroxiquinolin-2,3-dicarboxilato de dimetilo (1,0 g, 3,38 mmoles) en agua (20 ml). La suspensión se disolvió con la adición. La mezcla de reacción se calentó hasta 60ºC durante 1 hora. Después de este tiempo, la reacción se enfrió hasta temperatura ambiente, y se acidificó con ácido clorhídrico concentrado. El producto se extrajo entonces en éter dietílico y acetato de etilo. Los extractos orgánicos se secaron sobre MgSO_{4}, se filtraron y se concentraron a vacío, para proporcionar el compuesto del título como un sólido (900 mg). Este material se purificó mediante recristalización, empleando un sistema de codisolventes de acetato de etilo/hexano, para proporcionar el compuesto del título (571 mg, 60%) como un sólido blanco, p.f. 296ºC (descomp.); MS (CI) = 238 (M+H). Análisis para C_{12}H_{8}NO_{5}Cl, 0,45 CH_{3}CO_{2}CH_{2}CH_{3}. 0,10 H_{2}O: Calc.: C, 51,30; H, 3,68; N, 4,34, Encontrado: C, 51,28; H, 3,62; N 3,97 RMN ^{1}H 8,22 (d, J = 8,7 Hz, 1H), 7,92 (d, J = 1,8 Hz, 1H), 7,28 (dd, J = 8,7, 1,8 Hz, 1H), 3,90 (s, 3H).

3-Carbometoxi-2-pirrolidinocarbamida-7-cloro-4-hidroxiquinolina

Se añadió diciclohexilcarbodiimida (1,65 g, 8,0 mmoles) y pirrolidina (0,596 g, 8,4 mmoles) a una suspensión de ácido 3-carbometoxi-7-cloro-4-hidroxiquinolin-2-carboxílico (2,25 g, 8,0 mmoles) en THF (20 ml) a temperatura ambiente, en una atmósfera de N_{2}. La reacción se agitó a temperatura ambiente durante 15 horas, después de lo cual la urea como subproducto se eliminó vía filtración. El producto deseado se purificó vía cromatografía ultrarrápida en columna, empleando 5% de metanol en cloroformo, para proporcionar el compuesto del título (2,52 g, 94,3%) como un sólido de color bronce; p.f. = 215ºC; MS (CI): 335 (M+H), 300 MHz RMN ^{1}H (DMSO-d_{6}): 8,12 (d, J = 8,7 Hz, 1H), 7,60 (d, 1H, J = 1,8 Hz), 7,47 (dd, 1H, J = 8,8, 2,0 Hz), 3,69 (s, 3H), 3,40-3,49 (m, 2H), 3,27-3,33 (m, 2H), 1,80-1,96 (m, 4H).

Ácido 7-cloro-4-oxo-2-(pirrolidinilcarbonil)hidroquinolin-3-carboxílico

Se añadió gota a gota una disolución (20 ml) de hidróxido potásico acuoso (882 mg, 15,75 mmoles) a una suspensión de 3-carbometoxi-2-pirrolidinocarbamida-7-cloro-4-hidroxiquinolina (2,52 g, 7,5 mmoles) en agua desionizada (40 ml). Después de terminar la adición, la reacción se calentó hasta 60ºC. Después de 3 horas, la reacción se filtró para eliminar una pequeña cantidad de material insoluble. El filtrado se acidificó entonces hasta pH = 1, lo que produjo un precipitado blanco. El sólido se aisló mediante filtración a vacío, se lavó con agua y se secó a 30ºC a vacío durante 16 horas. Esto proporcionó el compuesto del título (1,5 g, 64%) como un sólido blanco, p.f. = 225-8ºC; MS (CI): 321 (M+H), 300 MHz RMN ^{1}H (DMSO-d_{6}): 8,28 (d, J = 8,8 Hz, 1H), 7,77 (s, 1H), 7,64 (d, 1H, J = 8,7), 3,52-3,57 (m, 2H), 3,17-3,19 (m, 2H), 1,83-1,98 (m, 4H).

N-[(terc-butoxi)carbonilamino][7-cloro-4-oxo-2-(pirrolidinilcarbonil) (3-hidroquinolil)]-N-(2-cloro-4-metilfenil)carboxamida

Se añadió meto-p-toluenosulfonato de 1-ciclohexil-3-(2-morfolinoetil)carbodiimida (CMC, 34,89 g, 82,37 mmoles) a una suspensión agitada de ácido 7-cloro-4-oxo-2-(pirrolidinilcarbonil)hidroquinolin-3-carboxílico (14,57 g, 45,43 mmoles) en THF anhidro (300 ml), en nitrógeno. La suspensión blanca se puso inmediatamente amarillo brillante. Se añadió (terc-butoxi)-N-[(2-cloro-4-metilfenil)amino]-carboxamida (13,89 g, 54,10 mmoles), como un sólido, seguido de 50 ml de THF anhidro. La mezcla de reacción amarilla brillante se agitó a temperatura ambiente durante 22 horas. Se añadió a la mezcla de reacción una segunda porción de CMC (16,77 g, 39,59 mmoles). Después de 2,5 horas a temperatura ambiente, la reacción se calentó a 60ºC durante 5,5 horas. Después de enfriar hasta temperatura ambiente, la mezcla de reacción se filtró, y los sólidos recogidos se lavaron con THF. El filtrado y los lavados se concentraron y se secaron a vacío para dar una espuma amarilla clara. El material se disolvió en cloruro de metileno (400 ml), se lavó con agua destilada (2 x 150 ml), y se extrajo con NaHCO_{3} al 10% (2 x 500 ml). La capa orgánica se secó sobre Na_{2}SO_{4}, se concentró y se secó a vacío para dar una espuma bronceada clara. El material se purificó mediante cromatografía ultrarrápida sobre gel de sílice, usando un gradiente de 95:5 hasta 85:15 de cloroformo:metanol como eluyente, para dar 15,42 g (61%) del producto deseado como un sólido blanco. RMN ^{1}H (300 MHz, DMSO-d_{6}) \delta 13,03 (bs, 1H), 9,19 (bs, 1H), 8,25 (d, 1H, J_{o}= 8,7 Hz), 7,68 (d, 1H, J_{m} = 1,8 Hz), 7,54 (dd, 1H, J_{o}= 8,7 Hz, J_{m}= 1,8 Hz), 7,50 (d, 1H, J_{m} = 1,8 Hz), 7,45 (d, 1H, J_{o} = 7,8 Hz), 6,81 (d, 1H, J_{o}= 7,8 Hz), 3,47 (m, 4H), 2,34 (s, 3H), 1,90 (m, 4H), 1,40 (s, 9H); MS (-Cl) m/z 559/561.

7-Cloro-4-hidroxi-2-(2-cloro-4-metilfenil)-1,2,5,10-tetrahidropiridazino[4,5-b]quinolin-1,10-diona

Se añadió lentamente ácido metanosulfónico (120,0 ml, 184,9 mmoles) a una suspensión agitada de N-[(terc-butoxi)carbonilamino][7-cloro-4-oxo-2-(pirrolidinil-carbonil) (3-hidroquinolil)]-N-(2-cloro-4-metilfenil)-carboxamida (21,16 g, 37,82 mmoles) en 900 ml de THF anhidro, en nitrógeno. La disolución amarilla oscura resultante se agitó a temperatura ambiente durante 18 horas. La disolución se vertió en 7 l de agua, se agitó 3 horas, y se filtró para dar un sólido amarillo claro. El sólido se sometió a ultrasonidos en metanol, se aisló mediante filtración, y se secó a vacío (30 mm) a 40ºC para dar el producto como un sólido blanco (12,93 g, 88%). RMN ^{1}H (300 MHz, DMSO-d_{6}) \delta 12,90 (bs, 1H), 12,10 (bs, 1H), 8,16 (d, 1H, J_{o}= 8,7 Hz), 8,07 (d, 1H, J_{m}= 1,8 Hz), 7,47 (dd, 1H, J_{o}= 8,7 Hz, J_{m} = 1,8 Hz), 7,47 (d, 1H, J_{m}= 1,2 Hz), 7,42 (d, 1H, J_{o}= 8,1 Hz), 7,29 (dd, 1H, J_{o}= 8,1 Hz, J_{m} = 1,2 Hz), 2,38 (s, 3H); MS (Cl) m/z 388/390/392. Calc. para C_{18}H_{11}Cl_{2}N_{3}O_{3}:C, 55,69; H, 2,86; N, 10,82. Encontrado C, 55,78; H, 2,89; N, 10,79.

Ejemplo 2 Sal de colina de la 7-cloro-4-hidroxi-2-(2-cloro-4-metilfenil)-1,2,5,10-tetrahidropiridazino[4,5-b]quinolin-1,10-diona

Una suspensión de 7-cloro-4-hidroxi-2-(2-cloro-4-metilfenil)-1,2,5,10-tetrahidropiridazino[4,5-b]quinolin-1,10-diona (753 mg, 1,94 mmoles) en metanol (50 ml) se trató con hidróxido de colina (550 ml de una disolución al 45% en metanol, 1,94 mmoles). La mayoría de los sólidos se disolvieron inmediatamente, y la mezcla se sometió a ultrasonidos durante 10 min. para disolver el resto. La disolución se filtró a través de un filtro de jeringa de nailon de 0,2 micrómetros. La disolución se redujo mediante evaporación giratoria hasta 1,01 g (> 100%) de sólido amarillo. El sólido se recristalizó en etanol a reflujo (25 ml), y la disolución se dejó cristalizar lentamente y sin agitación. Después de alrededor de 2 h, los cristales se recogieron mediante filtración a vacío. El sólido amarillo se secó al aire para dar (696 mg, 73%) del compuesto del título, que se recristalizó en etanol a reflujo (20 ml). Se dejó que los sólidos se formaran durante 16 h, y se rascaron suavemente del matraz y se recogieron mediante filtración a vacío, y se lavaron con etanol (2 x 3 ml) para dar 500 mg del compuesto del título, que al secar a 13,33 Pa (100 mTorr) a 30ºC, durante tres días, proporcionó 480 mg del compuesto del título (50%), p.f. 239,5-240,5ºC (descomp.); RMN ^{1}H (300 MHz, DMSO-d_{6}) \delta 8,12-8,09 (2H, m); 7,34-7,17 (4H, m); 3,86-3,80 (2H, m); 3,39 (2H, t, J = 5,25 Hz); 3,09 (9H, s); 2,35 (3H, s); Calc. para C_{18}H_{10}N_{3}O_{3}Cl_{2}\cdot1,0 C_{5}H_{14}NO\cdot0,6 H_{2}O: C, 55,01; H, 5,06; N, 11,16; Encontrado, C, 55,04, 54,75; H, 4,86, 4,86; N, 11,05, 11,07.

Ensayos de función biológica

Ensayo A

Inhibición de la unión de [^{3}H]-MDL105.519

Membranas de cerebro de rata: Las membranas de cerebro de rata usadas en los experimentos se obtuvieron de Analytical Biological Services Inc., y se prepararon sustancialmente según el método de B.M. Baron et al., J. Pharmacol. Exp. Ther. 250, 162 (1989). De forma breve, se homogeneizó tejido cerebral reciente, que incluye corteza cerebral e hipocampo, procedente de ratas Sprague Dawley macho, en 0,32 M de sacarosa, y se centrífugo a baja velocidad para separar las membranas celulares de los otros componentes celulares. Las membranas se lavaron entonces 3 veces usando agua desionizada, seguido del tratamiento con 0,04% de Triton X-100. Finalmente, las membranas se lavaron seis veces en 50 mM de tampón de Tris-citrato, pH 7,4, y se congelaron a -80ºC hasta su uso.

El [^{3}H]MDL105.519 (72 Ci/mmol) se adquirió de Amersham. El MDL105.519 frío se adquirió de Sigma/RBI. Los ensayos de unión se realizaron sustancialmente según el protocolo de B.M. Baron et al., J. Pharmacol. Exp. Ther. 279, 62 (1996), según lo siguiente. En el día del experimento, las membranas de cerebro se descongelaron a temperatura ambiente, y se suspendieron en 50 mM de tampón de Tris-acetato, pH 7,4 ("TAB"). Para la unión de competición, se usaron 75 microgramos por mililitro de proteína (usando el colorante BioRad). Los experimentos se llevaron a cabo usando placas de 96 pocillos. Las membranas se incubaron con 20 \mul de compuestos de diversas concentraciones y 1,2 nM de [^{3}H]MDL105.519 durante 30 minutos a temperatura ambiente en un volumen total de 250 \mul. La unión no específica se determinó usando 100 \muM de MDL105.519 no marcado radioactivamente. El MDL105.519 no marcado radioactivamente y los compuestos se disolvieron como disoluciones madre 12,5 mM en DMSO. La concentración final de DMSO en cada pocillo se mantuvo por debajo de 1%, concentración la cual se encontró que no altera los resultados de la unión. Después de la incubación, el [^{3}H]MDL105.519 no unido se eliminó por filtración sobre placas de GF/B de Unifilter, usando una cosechadora Packard. Los filtros se lavaron cuatro veces con TAB enfriado en hielo (total de 1,2 ml de tampón). Las placas se secaron toda la noche a temperatura ambiente, y la radioactividad unida se midió en un Packard TopCount después de la adición de 45 \mul por pocillo de MICROSCINT O. La potencia de un compuesto se expresa como Ki, y los resultados se calcularon usando hoja de datos de Microsoft Excel y un programa de ordenador GraphPad Prizm.

Membranas de cerebro humano: Las membranas de cerebro humano se obtuvieron de Analytical Biological Services Inc., y los ensayos se realizaron como se describe para las membranas de rata.

Ensayo B

Ensayo de formalina

El ensayo de formalina estudia los efectos inhibidores de los compuestos administrados oralmente sobre los comportamientos nocirreceptivos inducidos por la formalina, en ratas (D. Dubuisson et al., Pain 4, 161-174 (1977); H. Wheeler-Aceto et al., Psychopharmacology 104, 35-44 (1991); T.J. Coderre et al., Pain 54, 43-50 (1993)). En el ensayo, se detectan dos fases distintas de comportamientos inducidos por formalina. Una respuesta de primera fase, provocada por la nocirrecepción aguda al producto químico nocivo (formalina) inyectado en la pata, ocurre entre 0 y 5 minutos. Le sigue un período de calma entre 5 y 15 minutos después de la inyección. Tras el período de calma, se produce una respuesta de segunda fase, provocada por la sensibilización de las neuronas centrales en el asta posterior de la médula espinal, después de 15 minutos y que dura hasta 60 minutos. La sensibilización central aumenta el aporte aferente nocivo que provoca un dolor concentrado más fuerte que se transmite al cerebro. La inhibición de la respuesta de segunda fase indica un mecanismo de la acción del fármaco relacionado con la columna vertebral.

El procedimiento para el ensayo de la formalina es el siguiente: se colocan ratas macho en una cámara de plexiglass, y se les observa durante 30-45 minutos para observar su actividad de punto de partida. Se tratan previamente múltiples grupos de animales con el vehículo o con dosis diferentes de un compuesto de ensayo. La dosificación a los animales se realiza 3 horas antes de la inyección de formalina en una pata trasera (bajo la piel dorsal), con 0,05 ml de formalina al 1% estéril. Se puntúa y se registra el número de retrocesos de la pata (respuestas) durante la primera fase (0-5 min.) y la segunda fase (20-35 min.). La respuesta del retroceso se calcula como porcentaje de inhibición comparado con la puntuación media de un grupo de control con disolución salina. La ED_{50} es la dosis de compuesto que produce una inhibición del 50% de la respuesta nocirreceptiva.

\dotable{\tabskip\tabcolsep#\hfil\+\hfil#\hfil\tabskip0ptplus1fil\dddarstrut\cr}{
 \+ (número de respuestas en el grupo del vehículo -\cr  \+ número
de respuestas en el grupo del compuesto)\cr  % de inhibición de
respuesta nocirreceptiva = 100 x \+
---------------------------------------------------------------\cr 
\+ (número de respuestas en el grupo del
vehículo)\cr}

Se usó la prueba de la t de Student para el análisis estadístico, para determinar la significación de los efectos de los compuestos. Los compuestos se consideran activos basándose en su capacidad para inhibir las respuestas de retroceso.

\newpage

Ensayo C

Modelo de dolor neuropático (lesión por constricción crónica)

El ensayo de lesión por constricción crónica ("CCI") sirve de modelo para el dolor neuropático asociado con lesiones de nervios que pueden surgir directamente de trauma y compresión, o indirectamente debido a una amplia variedad de enfermedades tales como infección, cáncer, patologías metabólicas, toxinas, deficiencias nutricionales, disfunción inmunológica, y cambios musculoesqueléticos. En el modelo, se produce en las ratas una hiperalgesia periférica unilateral, mediante ligación de nervios (G. J. Bennett et al., Pain 33, 87-107 (1988)).

Según el procedimiento, se anestesiaron ratas Sprague-Dawley (250-350 g) con pentobarbital sódico, y el nervio ciático mayor se expuso a la altura de la mitad del muslo mediante disección roma a través del bíceps femoral. Una sección del nervio (alrededor de 7 mm), próxima a la trifurcación ciática, se libera del tejido y se liga en cuatro posiciones con sutura de cátgut crómica. La sutura se ata con un espaciado de 1 mm entre ligaduras. La incisión se cierra en capas, y se deja que los animales se recuperen. La hiperalgesia térmica se mide usando un ensayo de retirada de la pata (K. Hargreaves et al., Pain 32, 77-88 (1988)). Para realizar el ensayo, los animales se alojan en un suelo de vidrio elevado. Se dirige una fuente de calor radiante a la mitad de la planta de la pata trasera (territorio del nervio ciático), a través del suelo de vidrio, con una interrupción de 20 segundos para evitar la lesión a la piel. Se registran las latencias para el reflejo de retirada en ambas patas traseras.

Las patas lesionadas con los nervios ligados muestran unas latencias de retirada de la pata más cortas en comparación con las patas no lesionadas o las simuladamente operadas. Se evalúa la respuesta a los compuestos de ensayo a diferentes tiempos después de la administración oral, para determinar el inicio y la duración del efecto del compuesto. Se realizan estudios de respuesta a la dosis, con múltiples grupos de ratas de la CCI a las que se les ha dosificado oralmente vehículo o el compuesto de ensayo, tres veces al día, o vehículo o el compuesto de ensayo durante 5 días. Las latencias de retirada de la pata se miden cada día 10 minutos antes y 2 ó 3 h después de la primera dosis diaria. La eficacia se calcula como un porcentaje medio de disminución de la hiperalgesia durante 5 días de dosificación, comparado con el grupo tratado con el vehículo. Las potencias de los compuestos se expresan como la dosis eficaz mínima (MED), en mg/kg/día, que produce un % de disminución en la hiperalgesia que es estadísticamente significativo, determinándose el efecto antihiperalgésico según lo siguiente:

% de antihiperalgesia = \frac{\text{(media del grupo de vehículo - media del grupo del compuesto)}}{\text{(media del grupo de vehículo)}} x 100

El análisis de los datos se realizó mediante comparación de múltiples medias (test de Dunnett).

La Tabla 1 muestra los resultados de los ensayos A, B y C para el compuesto de la invención.

TABLA 1

Ensayo:	Resultado:
A: Afinidad por el sitio de glicina de NMDA (Inhibición de la	56 nM (cerebro de rata); 50 nM (cerebro humano)
unión de ^{3}H-MDL105519
B: Eficacia en el modelo de dolor por formalina	ED_{50} \sim 100 mg/Kg
C: modelo de CCI del dolor neuropático, hiperalgesia térmica	65% de antihiperalgesia a MED < 2 mg/Kg/d

En el modelo de dolor por formalina, la dosis eficaz del compuesto de la invención que provocó una disminución del 50% en la sensibilidad a un estímulo doloroso fue alrededor de 100 mg/kg, dosis la cual fue comparable a la dosis de gabapentina requerida para lograr un resultado similar. En el modelo de CCI de dolor neuropático, sin embargo, la dosis eficaz mínima del compuesto de la invención fue menor que 2 mg/kg/día para lograr un 65% de antihiperalgesia. En comparación, se requieren alrededor de 90 mg/kg/día de gabapentina para lograr alrededor de 46% de antihiperalgesia.

Cuando se administra mediante inyección intratecal, el compuesto de la invención inhibió el desarrollo de un comportamiento/ataque inducido por NMDA, con una ED_{50} de 110 nmoles.

El compuesto de la invención también se ensayó para determinar su unión a un panel de más de 80 receptores no NMDA. El compuesto no mostró interacción significativa con ningún receptor ensayado distinto del receptor de NMDA.

Claims

1. 7-Cloro-4-hidroxi-2-(2-cloro-4-metilfenil)-1,2,5,10-tetrahidropiridazino[4,5-b]quinolin-1,10-diona o sales farmacéuticamente aceptables de la misma.

2. El compuesto de la reivindicación 1, en el que dicha sal farmacéuticamente aceptable es una sal de colina.

3. El compuesto según una cualquiera de las reivindicaciones 1 ó 2, para uso en terapia.

4. Uso de un compuesto según una cualquiera de las reivindicaciones 1 ó 2, para la preparación de un medicamento para el tratamiento de dolor.

5. El uso según la reivindicación 4, para la preparación de un medicamento para el tratamiento de dolor neuropático.

6. Una composición farmacéutica que comprende un compuesto según una cualquiera de las reivindicaciones 1 ó 2 como ingrediente activo, junto con uno o más aditivos farmacéuticamente aceptables.