ES2240524T3

ES2240524T3 - Lamina de politetrafluoroetileno expandido (e-ptfe) impregnada con una substancia bioactiva encapsulada.

Info

Publication number: ES2240524T3
Application number: ES01974313T
Authority: ES
Inventors: Doris Klee; Christoph Hilgers
Original assignee: Angiomed GmbH and Co Medizentechnik KG; Angiomed AG
Current assignee: Angiomed GmbH and Co Medizentechnik KG
Priority date: 2000-09-28
Filing date: 2001-09-28
Publication date: 2005-10-16
Anticipated expiration: 2021-09-28
Also published as: DE60109793D1; DE60109793T2; US20070098757A1; EP1322350A1; GB0023807D0; JP2004509704A; ATE291937T1; US20040029993A1; WO2002026279A1; EP1322350B1

Abstract

Lámina de e-PTFE impregnada con una sustancia biológicamente activa encapsulada, caracterizada porque la sustancia biológicamente activa se encapsula en nanopartículas, y porque las nanopartículas se aglomeran en los intersticios de la lámina de e-PTFE.

Description

Lámina de politetrafluoetileno expandido (e-PTFE) impregnada con una substancia bioactiva encapsulada.

Esta invención se refiere a una lámina de e-PTFE (politetrafluoroetileno expandido) impregnada con una sustancia biológicamente activa, a un método de impregnar así una lámina y a una prótesis incluyendo una lámina de e-PTFE impregnada, que transporta por lo tanto una sustancia biológicamente activa liberable.

Campo de la invención

Las prótesis, tales como injertos de stent, pueden incluir de forma útil una membrana de e-PTFE, que es inerte en el cuerpo y capaz de proporcionar una función barrera útil. En los últimos años los fabricantes de prótesis han tenido el reto de inventar formas de incorporar sustancias biológicamente activas en stents, injertos y otras prótesis. Los factores de crecimiento son dicha sustancia biológicamente activa que sería ventajoso incorporar. Otros pueden incluir agentes de control de migración o control de proliferación celular, y agentes para inhibir la trombosis. Los innumerables intersticios en una lámina de e-PTFE (también llamada aquí "membrana" o "película") proporcionan una posición atractiva para la colocación de sustancias biológicamente activas, pero hay que hallar un método de cargar la sustancia activa en los intersticios.

La presente invención tiene la finalidad de proporcionar una ruta para lograr dicha carga.

Antecedentes técnicos

US-A-5480711 describe PTFE nanoporoso y su uso como un biomaterial.

UA-A-5716660 describe prótesis de e-PTFE impregnadas con un material biocompatible insoluble sólido, específicamente una proteína de matriz extracelular, tal como colágeno o gelatina.

US-A-5972027 propone cargar un stent poroso con un biomaterial, tal como un medicamento. El medicamento se puede soportar en solución y cargar en los poros imponiendo un gradiente de presión en la solución. El stent se hará de un metal en polvo, pero también se indica la posibilidad de un stent hecho de polvo de PTFE.

EP-A-0706376 describe el uso de taxol en la fabricación de un stent. El taxol se describe como un factor antiangiogénico.

US 5 197 882 describe una barrera periodontal de PTFE expandido conteniendo agentes quimioterapéuticos encapsulados en micropartículas.

Resumen de la invención

Un objeto de la presente invención es proporcionar lámina de e-PTFE impregnada con una sustancia biológicamente activa.

Este objeto se alcanza por la materia de la reivindicación independiente 1. Otras realizaciones se describen en las reivindicaciones dependientes 2 a 10.

Otro objeto de la presente invención es proporcionar un método de impregnar una lámina de e-PTFE con una sustancia biológicamente activa.

Este objeto se alcanza por la reivindicación independiente 11. Otras realizaciones se describen en las reivindicaciones dependientes 13 a 18.

Otro objeto de la presente invención es proporcionar una prótesis, tal como un stent, incluyendo una lámina de e-PTFE impregnada que transporta una sustancia biológicamente activa liberable.

Este objeto se alcanza por la reivindicación independiente 17. Otra realización se describe en la reivindicación dependiente 18.

Según un aspecto de la presente invención, se ha previsto un método de impregnar una lámina de e-PTFE con una sustancia biológicamente activa que implica imponer a través de la lámina una presión diferencial suficiente para empujar a los intersticios de la lámina una suspensión de nanopartículas en un medio fluido, conteniendo las nanopartículas una sustancia biológicamente activa deseada. En otro aspecto, la presente invención proporciona una lámina de e-PTFE así impregnada. En otro aspecto, la presente invención proporciona una prótesis incluyendo una lámina de e-PTFE así impregnada.

Teniendo en cuenta las dimensiones típicas de los intersticios en láminas de e-PTFE, el rango de tamaños de nanopartículas que se prestan a tal impregnación estará en general en un rango de de 10-1000 nm para diámetros medios de nanopartículas típicamente esféricas (nanoesferas). Una banda preferida de diámetros es de 100 a 800 nm.

Convenientemente, las nanopartículas tienen una capa superficial que encapsula la sustancia activa de interés, y la capa superficial es convenientemente bioabsorbible y puede ser de un polímero conteniendo lactida, tal como poli(D,L-ácido-láctico), poli(D,L-ácido-láctico-co-glicóli-do) y poli(D,L-ácido-láctico-co-trimetilencarbonato), éste último se abrevia a continuación a poli(D,L-lactida-co-TMC).

Una vez que las nanopartículas han sido empujadas a los intersticios de la lámina, la sustancia biológicamente activa distribuida por las nanopartículas se deberá fijar allí. Una forma que los autores de la presente invención han hallado de fijar la carga de nanopartículas es efectuar un tratamiento térmico de la lámina impregnada para aglomerar las nanopartículas. Otra es efectuar un procedimiento de CO_{2} según el proceso CESP descrito en Advanced Engineering Materials 1999, Vol 1, Nº 3-4, páginas 206 a 208 en el documento titulado "Microporous, resorbable implants produced by the CESP process" por Walter Michaeli y Oliver Pfannschmidt del "Institut fur Kunststoffverarbeitung, Rheinisch-Westfalische Technische Hochschule, D-52062 Aachen, Alemania".

Para una explicación de técnicas de preparación y mecanismos de formación de nanopartículas biodegradables de polímeros preformados, el lector puede consultar el documento de Quintanar-Guerrero, Alleman, Fessi y Doelker que aparece en "Drug Development and industrial Pharmacy, 24(12), 1113-1128 (1998)".

En síntesis, el método aquí preferido implica un paso de producción de nanopartículas seguido de una paso de carga para impregnar una lámina de e-PTFE en una célula de presión con una suspensión de nanopartículas, seguido de un paso de fijación para fijar en la lámina la sustancia biológicamente activa llevada a la lámina por las nanopartículas.

Convenientemente, las nanopartículas poliméricas se fabrican por una técnica de evaporación de solvente o desplazamiento de solvente. La carga de las nanopartículas con un medicamento u otra sustancia biológicamente activa se realiza durante el paso de fabricación de nanopartículas.

Con más especificidad, se disuelve un polímero base que puede ser una poli(D,L-lactida), poli(D,L-lactida-co-glicólido) o un poli(D,L-lactida-co-trimetilencarbonato) en un solvente. El solvente puede ser un solvente miscible en agua, tal como acetona, cuando el método es un método de desplazamiento de solvente. Alternativamente, el solvente puede ser un solvente no miscible en agua, tal como CH_{2}Cl_{2}, cuando la técnica es una técnica de evaporación de solvente.

En un segundo paso, la sustancia biológicamente activa, tal como una droga o medicamento, se disuelve o libera en la solución polimérica y después la solución se vierte a una fase acuosa con agitación continua. La fase acuosa contendrá probablemente un surfactante o un estabilizante. Después, el solvente se evapora de la fase acuosa al vacío.

La suspensión resultante de nanopartículas es transferida a una cámara de presión con agitación continua. Continuando la agitación, se impone una presión diferencial convenientemente en el rango de hasta 10 bar dentro de la célula de presión a través de una pieza de lámina para que la presión diferencial lleve la suspensión a los intersticios del e-PTFE que forma la lámina. Se repite el procedimiento tantas veces como sea necesario para cargar la pieza de lámina con la cantidad especificada de material de nanopartículas.

Para anclar el material de nanopartículas dentro de los intersticios de la lámina, la lámina impregnada se puede tratar a una temperatura elevada para producir aglomeración o fusión de las nanopartículas dentro de los intersticios. Alternativamente, se puede utilizar un tratamiento con CO_{2} supercrítico. El CO_{2} supercrítico disuelve las nanopartículas, haciendo por ello que fluya de manera que las nanopartículas pierdan su forma discreta para formar una estructura fundida dentro de la lámina de e-PTFE. Una forma de obtener esta estructura fundida es seguir los procedimientos invocados por RWTH-Aachen en su proceso CESP, mencionado anteriormente.

Se apreciará que la carga de la lámina de e-PTFE con nanopartículas se puede realizar con material de lámina que se incorporará más tarde en un dispositivo médico, o se puede incorporar a lámina que ya se ha incorporado en un dispositivo médico. El dispositivo médico puede ser una prótesis, tal como una prótesis vascular. Una prótesis vascular de especial interés para los inventores es un stent vascular. La invención hallará probablemente aplicaciones para stents que no son stents vasculares, tal como stents biliares, uretrales, ureterales, esofágicos, traqueobronquiales, colorrectales, prostáticos, hepáticos.

La presión diferencial impuesta a la lámina en la célula de presión se puede lograr por presionización positiva de la suspensión de nanopartículas en el lado situado hacia arriba de la lámina, o imponiendo un vacío suficientemente bajo en el lado situado hacia abajo de la pieza de lámina.

El medio fluido dentro del que se suspenden las nanopartículas para el paso de carga en la célula de presión no tiene que ser el mismo medio fluido en el que se crean las nanopartículas.

La encapsulación de la sustancia biológicamente activa, tal como un medicamento o medicación, dentro de las nanopartículas no tiene que ser con materiales biodegradables sintéticos poliméricos, tal como poli-lactida y sus copolímeros, poliéster, poliéter, policianoacrilato, ácido polihidroxicarboxílico, polianhídrico, poliaminoácidos, polihydroxialcanoato, pero podría serlo en cambio con materiales no biodegradables biocompatibles mediante los que, por ejemplo, el medicamento se difunde al cuerpo del paciente. Para esta tarea se han de considerar, por ejemplo, sustancias poliméricas sintéticas biológicamente compatibles. Éstas incluyen silicona, polialcano, politetrafluoroetileno (PTFE, e-PTFE), polietileno, tal como polietileno ultrapuro (HOSTALON^{TM} (GUR), LUPULEN^{TM} (UHM)), polipropileno, poliéster (tal como tereftalato de polietileno o DACRON^{TM}, TERYLENE^{TM}), poliuretano, así como poliamidas, tal como NYLON^{TM}, poliamidas alifáticas y aromáticas (NOMEX, KEVLAR).

Breve descripción de las figuras

La presente invención se describirá, a modo de ejemplo, con referencia a las figuras acompañantes, de las que

Las figuras 1A y 1B muestran imágenes REM de una muestra de e-PTFE no tratada y no cargada a dos ampliaciones (1A: 2500 aumentos; 1B: 5000 aumentos).

Las figuras 2A y 2B muestran imágenes REM de una capa de e-PTFE cargada con nanoesferas a dos ampliaciones (2A: 2500 aumentos; 2B: 5000 aumentos).

Las figuras 3A y 3B muestran imágenes REM de una capa de e-PTFE después de tratamiento con CO_{2} (3A: 2500 aumentos; 3B: 5000 aumentos).

Las figuras 4A y 4B muestran imágenes REM de una capa de e-PTFE cargada con nanoesferas después de tratamiento con CO_{2} (4A: 2500 aumentos; 4B: 5000 aumentos).

La figura 5 muestra un diagrama que ilustra una configuración de liberación de nanoesferas cargadas con dexametasona de poli-(D, L-lactida-co-TMC) (90:10).

La figura 6 muestra espectros UV de solución de PVA conteniendo dexametasona.

La figura 7 muestra una línea de calibración para dexametasona en una solución de PVA a 4% (M=61000).

La figura 8 muestra espectros UV de solución de lavado contaminada con dexametasona.

La figura 9 muestra una línea de calibración para dexametasona en agua.

Modo breve/realizaciones preferidas

A continuación se describe la producción de nanopartículas esféricas biodegradables por una técnica de evaporación de solvente de emulsión (a/a).

Producción de partículas

Se prepararon nanopartículas esféricas hechas de poli(D,L-ácido-láctico-co-trimetilencarbonato) (90:10) por una técnica de evaporación de solvente de emulsión (a/a). Se mezclaron 200 mg del polímero, 40 mg del modelo de sustancia dexametasona en 5 ml de cloruro de metileno, y enfriaron a 0ºC. Se añadió 50 ml de una solución acuosa de alcohol polivinílico a 4% (p/v) (M=61.000). Esta mezcla se dispersó durante 30 s por vortex (Ika Ultra Turrax 25 T basic, Staufen im Breisgau, Alemania) a 150.000 rpm a 0ºC y después sonicó usando un generador de ultrasonidos (Branson Sonifier 450, Danbury, CT, EE.UU.) durante 120 s para producir la emulsión de aceite en agua. La solución se vertió a un matraz de 500 ml y se extrajo la fase orgánica durante 30 min bajo reducción gradual de la presión (presión ambiente a >60 mbar).

Carga de partículas

A continuación, la suspensión de nanoesferas se usó directamente para incorporar las esferas a la capa de e-PTFE sometiendo la suspensión de nanoesferas a presión mediante un stent cubierto de e-PTFE para obtener una carga de la lámina con nanopartículas. El stent se liofilizó y analizó con REM. Las figuras 1A y 1B muestran imágenes REM de la lámina de e-PTFE no tratada y no cargada a ampliación de 2500 aumentos (figura 1A) y 5000 aumentos (figura 1B). Las figuras 2A y 2B muestran la capa de e-PTFE cargada con nanoesferas a niveles de ampliación de 2500 aumentos (figura 2A) y 5000 aumentos (figura 2B), respectivamente. La distribución de tamaño de partícula de la suspensión restante y el filtrado se midieron (consúltese la Tabla 1 siguiente) usando un clasificador de tamaños de partícula (Malvern Instruments, Mastersizer 2000 con unidad de dispersión Hydro 2000, Worcestershire, Gran Bretaña). La Tabla 1 muestra el diámetro calculado d de la partícula media (n=0,5) de la distribución de partículas.

TABLA 1 Valores d(n=0,5) de la suspensión restante y el filtrado comparados con el valor inicial d(n=0,5)

Suspensión inicial d (n=0,5) en nm	Suspensión restante d (n=0,5) en nm	Filtrado d (n=0,5) en nm
542	991	256

La suspensión restante muestra un valor más alto d(n =0,5) en comparación con la suspensión inicial recién producida. La cantidad de pequeñas esferas disminuye en la suspensión durante el proceso de carga. El filtrado muestra un valor medio más bajo d(n=0,5) de 256 nm debido al efecto filtro de la capa de e-PTFE que retiene esferas de más de aproximadamente 300 nm de diámetro.

Fijación

Para fijar la dexametasona soportada por las nanoesferas de poli(D,L-lactida-co-TMC) (90:10) en una matriz de e-PTFE, la lámina de e-PTFE cargada con nanoesferas se trató después con CO_{2} supercrítico durante 30 minutos bajo una presión de 305 bar. Se tomaron imágenes REM, y se presentan aquí a dos niveles de ampliación diferentes de 2500 aumentos (figuras 3A y 4A) y 5000 aumentos (figuras 3B y 4B), respectivamente, en las figuras 3A, 3B sin e-PTFE cargado con nanoesferas y 4A, 4B con e-PTFE cargado con nanoesferas. Las nanoesferas pierden su forma esférica debido a su solubilidad en CO_{2} supercrítico. La matriz de e-PTFE restante es insoluble en CO_{2} supercrítico y está rodeada por el poli(D,L-lactida-co-TMC) disuelto.

Además, se realizó un experimento de liberación de la sustancia dexametasona del modelo hidrófobo de poli(D,L-lactidaco-TMC) (90:10). Aquí, la relación (90:10) se refiere a la relación en peso de lactida a TMC. Se utilizaron nanoesferas cargadas con dexametasona para los experimentos de liberación. La media d(n=0,5) de las nanoesferas era 216 nm.

Las nanoesferas se hicieron por la técnica de evaporación de solvente a/a con un contenido de 20% (p/v) de dexametasona con respecto a la cantidad inicial de polímero. La figura 5 muestra la configuración de liberación. La línea recta continua indica una línea de mejor ajuste, el resultado de un análisis de cuadrados mínimos de los puntos de datos experimentales. También se muestra la varianza de R^{2}=0,9927. Al ser la varianza muy próxima a 1,0 y el muy buen acuerdo de los puntos de datos experimentales con la línea recta sugieren que la velocidad a la que se libera dexametasona de las nanoesferas no cambia con el tiempo. Por lo tanto, migra una cantidad constante de dexametasona mediante la encapsulación de las nanoesferas.

A continuación, se determinó la cantidad de dexametasona incorporada en las nanoesferas, de manera que se pudiese calcular la carga efectiva de medicamento. Se determinó que la carga era 11,39%.

Durante la incorporación de drogas a nanopartículas según el proceso de evaporación de solvente de emulsión, migra una gran cantidad del medicamento a la solución acuosa de PVA. También durante el lavado con solvente siguiente, se produce migración a la fase acuosa. El contenido de dexametasona en la solución de PVA y en el agua de lavado se determinó usando espectroscopia UV. La figura 6 ilustra el espectro UV de la solución de PVA (línea continua) usado para la producción de las nanoesferas conteniendo dexametasona.

Se midió una solución de PVA a 4% (p/v) (M=61.000) como un estándar. La medición de la solución de PVA pura produjo extinciones pronunciadas. Por esta razón, la solución se diluyó en una relación de 2 a 8 (2 partes de solución de PVA conteniendo dexametasona a 8 partes de una solución PVA a 4%). Se hace referencia a la figura 6 (curva PVA-2-10). Se determinó que el valor \lambda_{max} de dexametasona era 242,3 nm.

La figura 7 muestra la línea de calibración para dexametasona en una solución de PVA a 4% (M=61.000). Las respectivas extinciones a \lambda_{max} se midieron con diferentes concentraciones de dexametasona. La línea recta indica una línea de análisis de cuadrados mínimos de mejor ajuste de los puntos de datos experimentales. También se muestra la ecuación de la regresión lineal. Se obtuvo buen acuerdo de los valores experimentales con el ajuste de regresión lineal.

A continuación, se midió el contenido de dexametasona en la solución de agua de lavado.

La figura 8 muestra los espectros UV de dexametasona en la solución de agua de lavado. Las muestras se midieron con respecto a agua como un estándar. El contenido de dexametasona en la solución produjo de nuevo extinciones pronunciadas. La muestra se diluyó en una relación de 2 a 8 (2 partes de agua de lavado a 8 partes de agua destilada).

La figura 9 muestra la línea de calibración para dexametasona en agua destilada. Las respectivas extinciones a \lambda_{max} = 242 nm se midieron con diferentes concentraciones de dexametasona. La línea recta indica un ajuste de cuadrados mínimos de los puntos de datos experimentales. También se muestra la ecuación de la regresión lineal. De nuevo se obtuvo buen acuerdo de los valores experimentales con el ajuste de regresión lineal.

Se determinó la concentración de dexametasona en la muestra de PVA-2-10 (c=29,53*10^{-3} g/l). Por lo tanto, la cantidad de dexametasona en la muestra de PVA-2-10 diluida (=10 ml) asciende a 2,953*10^{-4} g. En consecuencia, existe la misma cantidad en los 2 ml de solución de PVA no diluida. Se utilizaron 50 ml de la solución PVA durante el proceso de producción y se puede calcular la cantidad de dexametasona (consúltese la Tabla 2). La cantidad de dexametasona en la solución de lavado se calculó de la misma manera.

TABLA 2 Cálculo de la cantidad de dexametasona en la solución de PVA y en la solución de lavado

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100

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101

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Se utilizaron 200 mg del polímero y 40 mg de dexametasona durante la producción. 12,66 mg migraron a las fases acuosas, así que se puede suponer que se incorporaron 27,34 mg de dexametasona a las esferas correspondientes a 11,39%. En lo que antecede, se han usado las abreviaturas siguientes:

a/a: aceite en agua

p/v: peso por volumen

REM: Microscopia electrónica de trama

El mejor modo de la invención se ha descrito anteriormente solamente para el modelo de sustancia dexametasona. Los ejemplos de sustancias biológicamente activas a fijar en una matriz de e-PTFE en lugar de dexametasona hidrófoba son: sustancias hidrófilas, tal como acriflavina-hidrocloruro; rapamicina (sirolimus); taxol (paclitaxel); donantes de NO u otros agentes que producen directa o indirectamente un aumento de la concentración local de NO; factores de crecimiento para mejorar la endotelialización (por ejemplo VEGF); inhibidores de crecimiento; antagonistas de receptores de crecimiento; agentes antitrombóticos (por ejemplo, heparina, antagonistas de receptores GPIIb/IIIa, hirudina); inhibidores de metaloproteinasa de matriz; agentes antiinflamatorios; agentes antiproliferativos (por ejemplo drogas antitumores, por ejemplo mitomicina C, 5-FU, cisplatina, gemcitabina, nucleidos radiactivos, adriamicina, mitoxantrona); agentes antisentido (oligonucleótidos o compuestos relacionados que bloquean el proceso de transcripción/traducción); medicamentos antimigratorios; antioxidantes; agentes que promueven o inhiben la apoptosis; genes para transferencia de genes (desnudos o encapsulados en vectores); hormonas, análogos de somatostatina; anticuerpos; inhibidores/promotores de angiogénesis.

Se ha usado un CO_{2} supercrítico para fijar la sustancia biológica activa en la lámina de e-PTFE. Sin embargo, es concebible utilizar otros agentes supercríticos, tales como nitrógeno supercrítico, que no dañan la sustancia biológicamente activa.

Claims

1. Lámina de e-PTFE impregnada con una sustancia biológicamente activa encapsulada, caracterizada porque la sustancia biológicamente activa se encapsula en nanopartículas, y porque las nanopartículas se aglomeran en los intersticios de la lámina de e-PTFE.

2. Lámina según se reivindica en la reivindicación 1, donde las nanopartículas son generalmente esféricas.

3. Lámina según se reivindica en la reivindicación 2, donde las nanopartículas generalmente esféricas tienen un diámetro que, como media, está en el rango de desde 10 nm a 1000 nm.

4. Lámina según se reivindica en la reivindicación 3, donde el rango de diámetros medios se extiende de 100 a 800 nm.

5. Lámina como se reivindica en cualquiera de las reivindicaciones anteriores, donde la sustancia biológicamente activa se encapsula en una sustancia biodegradable.

6. Lámina según se reivindica en la reivindicación 5, donde la sustancia biodegradable se compone de un polímero conteniendo lactida.

7. Lámina según se reivindica en la reivindicación 6, donde el polímero conteniendo lactida es poli(D,L-ácido-láctico-co-trimetilencarbonato).

8. Lámina como se reivindica en cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4, donde la sustancia biológicamente activa se encapsula en un material de sustancia no biodegradable, biológicamente compatible.

9. Lámina según se reivindica en la reivindicación 8, donde la sustancia no biodegradable biocompatible es una sustancia polimérica activa.

10. Método de impregnar una lámina de e-PTFE con una sustancia biológicamente activa, incluyendo los pasos de:

1.: proporcionar la sustancia encapsulada en nanopartículas por una capa superficial de sustancia biológicamente compatible de las nanopartículas;

2.: suspender las nanopartículas en un medio fluido;

3.: imponer una presión diferencial a través de la lámina para empujar a los intersticios de la lámina un flujo de dicho medio fluido que lleva las nanopartículas a los intersticios; y

4.: aglomerar las nanopartículas para fijar en la lámina el material de las nanopartículas que han sido empujadas por la presión diferencial a los intersticios de la lámina.

11. Método según la reivindicación 10, donde la presión diferencial está en un rango de hasta 10 bar.

12. Método según se reivindica en la reivindicación 10 o 11, donde el paso de aglomeración se logra calentando la lámina.

13. Método según se reivindica en la reivindicación 10 o 11, donde el paso de aglomeración se logra disolviendo la capa superficial de sustancia biocompatible para fijar en la lámina el material de las nanopartículas que ha sido empujado por la presión diferencial a los intersticios de la lámina seleccionando como el material biológicamente compatible una sustancia que es soluble en un agente líquido, contactando las nanopartículas con el agente líquido, y creando una estructura fundida de manera que se fije el material empujado a los intersticios de la lámina de e-PTFE.

14. Método según se reivindica en la reivindicación 13, donde el agente líquido es CO_{2} supercrítico.

15. Método según se reivindica en la reivindicación 14, e incluyendo además el paso de tratar la lámina de e-PTFE con CO_{2} supercrítico.

16. Método como se reivindica en cualquiera de las reivindicaciones 13 a 15, donde el paso de contactar las nanopartículas con el agente líquido se realiza durante 30 minutos a una presión de 305 bar.

17. Prótesis incluyendo una lámina de e-PTFE impregnada como se reivindica en cualquiera de las reivindicaciones 1 a 9 y soportando una sustancia biológicamente activa liberable.

18. Prótesis según se reivindica en la reivindicación 17, donde la prótesis es un stent incluyendo una capa de lámina de e-PTFE impregnada.